含有肽的医药组合物的利记博彩app

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【专利摘要】本发明的课题在于，提供一种不根据肽的溶解特性选择溶剂、而是使用相同的溶剂将1种或多种肽简便地进行制剂化的手段。本发明提供一种医药组合物及其制造方法，所述医药组合物含有1种或2种以上的肽作为有效成分，且含有碱性氨基酸和/或碱。
【专利说明】含有肽的医药组合物

【技术领域】
[0001]本发明涉及一种含有肽的医药组合物及其制造方法。

【背景技术】
[0002]在含有肽的注射制剂中，由于肽对热不稳定，因此，不能进行依靠高压蒸汽灭菌的最终灭菌。所以，为了谋求无菌化，无菌过滤工序必不可少。无菌过滤工序作为惯例是通过经由绝对孔径得到保证的0.22 μ m以下的膜滤器通过而进行的。因此，在过滤前的阶段，需要制备完全溶解肽的肽溶液。但是，肽的溶解特性因其氨基酸序列而不同，因此，需要根据肽的溶解特性选择适当的溶剂。特别是将疏水性高的肽完全溶解于极性溶剂很困难，在溶剂的选择上极为费力。也可以通过使PH变化来提高溶解性，但作为注射制剂，偏离适当的pH的范围、或肽变得不稳定的情况也很多。
[0003]另外，近年来，含有不只一种肽、而是多种肽作为有效成分的肽疫苗制剂备受关注。认为这种肽疫苗制剂特别是作为癌症治疗用是有利的。
[0004]在癌症治疗用肽疫苗制剂中，为了对癌症细胞诱导特异的免疫反应，含有肿瘤特异抗原的T细胞表位肽作为有效成分(例如专利文献I)。这些来自T细胞表位肽的肿瘤特异抗原通过使用癌症患者的临床样品的广泛表达分析被鉴定为对于每种癌症类型在癌症细胞中特异性地进行高表达，在正常细胞中几乎没有看到表达的抗原(例如专利文献2)。但是，由于癌症细胞具有的多样性，即使为这样被鉴定的肿瘤特异抗原也不一定可以说在全部的患者及全部的癌症细胞中以相同的方式高表达。即，即使在某种患者的癌症中为高表达的抗原，也在其它患者的癌症中可以表达没有那么高。另外，已知有在相同患者中，在细胞水平方面，癌症细胞为不均匀的细胞集团(非专利文献I)，即使为在某种癌症细胞中表达的抗原，也可以有时在其它癌症细胞中不表达。因此，对于仅含有一种T细胞表位肽的疫苗制剂，有可能存在不能得到充分的抗肿瘤效果的患者。另外，在可得到抗肿瘤效果的患者中，也可以存在不能杀伤的癌症细胞。另一方面，如果是含有多种T细胞表位肽的疫苗制齐U，则癌症细胞表达任一种抗原的可能性高。因此，可以在更宽广的患者中得到抗肿瘤效果，不能杀伤的癌症细胞存在的可能性也变低。
[0005]组合的T细胞表位肽的种类越多，含有如上所述的多种T细胞表位肽的疫苗制剂的效果越高。但是，如果要含有有效量的多种T细胞肽，则每单位量的肽含量增加，因此，完全溶解全部肽更为困难。另外，由于性质不同的多种肽共存，所以稳定地维持全部的肽也更为困难。
[0006]例如，在欧洲公开专利公报第2111867号(专利文献3)中公开有含有多种T细胞表位肽的癌症治疗用疫苗制剂的冷冻干燥制剂。记载有:该冷冻干燥制剂在冷冻干燥前的肽溶液的制备中，根据其溶解特性，每肽在适当的溶剂中溶解有各肽。而且，在将制备的各肽溶液混合时，为了防止肽的析出，按照决定的顺序将各肽溶液混合。这样，每肽选择适当的溶剂，研究将各肽溶液混合的顺序，肽的种类越多越费力。
[0007]为了避免如上所述的制剂制造上的困难，也考虑对相同患者给药多种含有一种T细胞表位肽的疫苗制剂的方法。但是，在给药多种疫苗制剂的情况下，需要向身体多处接种疫苗，对患者的负担增大。另外，肽疫苗制剂大多在接种后产生被称为DTH(Delayed TypeHypersensitivity:迟发型超敏反应)反应的皮肤反应。身体的多处的皮肤反应的发生使患者的不适感增大。因此，为了减轻疫苗接种中的患者的负担，优选为含有多种T细胞表位肽的疫苗制剂。另外，即使在给药多种含有一种表位肽的疫苗制剂的情况下，也需要在制造各肽制剂时，对每种肽选择适当的溶剂的作业。
[0008]现有技术文献
[0009]专利文献
[0010]专利文献1:国际公开公报第2008/102557号
[0011]专利文献2:国际公开公报第2004/031413号
[0012]专利文献3:欧洲公开专利公报第2111867号
[0013]非专利文献
[0014]非专利文献l:Kai Wang 等人，BMC B1informatics2009, 10:12.


【发明内容】

[0015]本发明的课题在于，提供一种不根据肽的溶解特性选择溶剂、而是使用相同的溶剂将I种或多种肽简便地进行制剂化的手段。
[0016]本发明人等为了解决上述课题，重复进行了潜心研究，结果发现:含有碳酸钠和/或精氨酸的水溶液可以溶解对水的溶解特性不同的各种肽。另外发现:该水溶液也适于含有多种肽的注射制剂的制备。进而确认:利用该水溶液制备的注射制剂在对于注射制剂为适当的PH的范围内。本发明是根据这些见解而完成的发明。
[0017]S卩，本发明包含以下的发明。
[0018][I] 一种医药组合物，其含有I种或2种以上的肽作为有效成分，且含有碱性氨基酸和/或碱。
[0019][2]如[I]所述的医药组合物，其中，碱性氨基酸为选自由精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、组氨酸、羟基赖氨酸及它们的盐构成的组中的I种或2种以上的组合。
[0020][3]如[I]或[2]所述的医药组合物，其中，碱为选自由碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、三乙醇胺、氨基丁三醇及葡甲胺构成的组中的I种或2种以上的组合。
[0021][4]如[I]?[3]任一项所述的医药组合物，其中，肽为T细胞表位肽。
[0022][5]如[I]?[3]任一项所述的医药组合物，其中，肽为2种以上的T细胞表位肽直接或经由连接体连接而成的肽。
[0023][6]如[4]或[5]所述的医药组合物，其中，T细胞表位肽为由序列号1、2、3、4或5所示的氨基酸序列构成的肽的任一种或2种以上的肽。
[0024][7]如[4]或[5]所述的医药组合物，其中，T细胞表位肽为由序列号1、2、3或4所示的氨基酸序列构成的肽的全部种类的肽。
[0025][8]如[4]?[7]任一项所述的医药组合物，其为用于诱导对肿瘤的免疫应答的医药组合物。
[0026][9]如[8]所述的医药组合物，其为用于预防或治疗癌症的医药组合物。
[0027][10]如[I]?[9]任一项所述的医药组合物，其特征在于，以非经口制剂的形态进行制剂。
[0028][11]如[10]所述的医药组合物，其特征在于，非经口制剂为注射剂。
[0029][12] 一种冷冻干燥制剂，其是对[I]?[11]任一项所述的医药组合物进行冷冻干燥而成的。
[0030][13] 一种制造医药组合物的方法，所述医药组合物为[11]所述的注射剂，所述方法包含:将I种或2种以上的肽溶解于含有碱性氨基酸和/或碱的水溶液的工序。
[0031][14]制造如[12]所述的冷冻干燥制剂的方法，其包含以下的工序:
[0032](I)将I种或2种以上的肽溶解于含有碱性氨基酸和/或碱的水溶液的工序；及
[0033](2)将(I)中制备的肽溶液进行冷冻干燥的工序。
[0034][15]如[14]所述的制造冷冻干燥制剂的方法，其中，肽为由序列号1、2、3或4所示的氨基酸序列构成的肽的全部种类的肽。
[0035][16] 一种试剂盒，其包含以下的(a)及(b):
[0036](a) [12]所述的冷冻干燥制剂；及
[0037](b) (a)的冷冻干燥制剂的重构溶液。
[0038][17] 一种试剂盒，其包含以下的(a)及(b):
[0039](a)对[6]或[7]所述的医药组合物进行冷冻干燥而成的冷冻干燥制剂；及
[0040](b)含有由序列号5所示的氨基酸序列构成的肽的(a)的冷冻干燥制剂的重构溶液。
[0041][18]如[16]或[17]所述的试剂盒，其还含有以下的(C):
[0042](C) I种或2种以上的佐剂。
[0043][19] 一种试剂盒，其含有以下的(a)及(b):
[0044](a) [I]?[11]任一项所述的医药组合物；
[0045](b) I种或2种以上的佐剂。
[0046]本申请主张2012年3月9日所申请的日本国专利申请2012-072352号的优先权，包含该专利申请的说明书中所记载的内容。
[0047]根据本发明，提供一种医药组合物，其不根据肽的溶解特性选择溶剂，可以使用相同的溶剂将I种或多种肽简便地进行制剂化。本发明的医药组合物可以增多能够组合的肽的种类，因此，如果作为例如组合有多种T细胞表位肽的疫苗制剂提供，则可得到充分的抗肿瘤效果，在癌症的治疗上是非常有效的。

【专利附图】

【附图说明】
[0048]图1表示本发明的一个实施方式中所述的肽组合冷冻干燥制剂的稳定性。
[0049]图2是通过回归分析预测本发明的一个实施方式中所述的肽组合冷冻干燥制剂24个月后的稳定性的图。

【具体实施方式】
[0050]下面，对本发明具体地进行说明。
[0051]本说明书中使用的“I个(a)”、“l个(an)”及“其(the) ”这样的单词，只要没有特殊说明，是指“至少I个”。
[0052]本说明书中使用的“肽”这样的用语是指氨基酸残基的聚合物。本用语适用于由天然氨基酸残基构成的氨基酸聚合物、由天然氨基酸残基和I个或多个氨基酸类似物或氨基酸模拟物等非天然氨基酸残基构成的氨基酸聚合物、由非天然氨基酸残基构成的氨基酸聚合物。
[0053]本说明书中使用的“氨基酸”这样的用语是指天然氨基酸及合成氨基酸、以及与天然氨基酸同样地起作用的氨基酸类似物及氨基酸模拟物。氨基酸可以为L-氨基酸或D-氨基酸的任一种。“天然氨基酸”这样的用语是指:由遗传密码编码的氨基酸及在细胞内翻译后被修饰的氨基酸(例如羟基脯氨酸、Y -羧基谷氨酸及O-磷酸丝氨酸)。“氨基酸类似物”这样的用语是指:具有与天然氨基酸相同的基本化学结构(氢、羧基、氨基及结合于R基的α碳)、具有被修饰的R基或被修饰的骨架的化合物(例如高丝氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸、亚砜、蛋氨酸甲基鱗)。“氨基酸模拟物”这样的用语是指:具有与一般的氨基酸不同的结构，但具有同样的功能的化合物。氨基酸通过在本说明书中IUPAC-1UB生物化学命名法委员会(B1chemical Nomenclature Commiss1n)推荐的、一般公知的3字符或I字符而记载。
[0054]本说明书中使用的“T细胞表位肽”这样的用语是指:与MHC(主要组织适合相容性复合体:major histocompatibility complex) I类或II类分子结合而在细胞表面上递呈、经由T细胞受体而被T细胞识别的肽。与MHC I类分子结合的T细胞表位肽通常由8?14个氨基酸构成，典型而言，由9或10个氨基酸构成。由MHC I类分子在细胞表面上所递呈的肽由⑶8阳性T细胞识别，将⑶8阳性T细胞活化而诱导细胞毒性T细胞(Cytotoxic Tlymphocyte:CTL)。与MHC II类分子结合的T细胞表位肽通常由12?30个氨基酸构成，典型而言，由15?24个氨基酸构成。由MHC II类分子在细胞表面上递呈的肽由CD4阳性T细胞识别，将⑶4阳性T细胞进行活化。
[0055]本说明书中使用的“肿瘤特异抗原”这样的用语是指:在肿瘤细胞中表达而在正常细胞中完全或几乎不表达的抗原。肿瘤特异抗原可以在某种特定的肿瘤细胞(例如胃癌细胞)中被表达，也可以在广范围的肿瘤细胞中通用并被表达。另外，在“肿瘤特异抗原”中，也包含在肿瘤细胞和睾丸中特异性地表达的癌症睾丸抗原。
[0056]1.本发明的医药组合物
[0057]本发明的医药组合物为含有I种或2种以上的肽作为有效成分、且含有碱性氨基酸和/或碱的医药组合物。
[0058]本发明的医药组合物中所含的肽没有特别限定，只要是具有生理活性的任意的肽即可。作为本发明的医药组合物中所含的肽的实例，可列举例如:T细胞表位及抗体表位等免疫原性肽、显性负效应肽(dominant negative peptide)、适配体、酶、抗体、scFv、Fab、F(ab’)2及Fv等抗体片段、激素、神经传递物质、阿片肽、自身活性物质以及细胞因子等，但并不限定于这些。
[0059]在优选的实施方式中，本发明的医药组合物含有I种或2种以上的T细胞表位肽作为有效成分。迄今为止，就T细胞表位肽而言，MHC I类结合性表位及MHC II类结合性表位的任一种均鉴定多个。因此，可以单独或适当组合2种以上，将这些公知的T细胞表位肽用作本发明的医药组合物的肽。需要说明的是，在组合使用2种以上的T细胞表位肽的情况下，这些T细胞表位肽可以直接或经由连接体而连接。作为可以使用的连接体，可列举例如AAY (P.M.Daftarian 等人，J Trans Med2007, 5:26)、AAA 及 NKRK (R.P.M.Sutmuller 等人，JImmunol.2000，165:7308-7315)、以及聚赖氨酸(S.0ta 等人，Can Res.62，1471-1476，K.S.Kawamura 等人，JImmuno1.2002，168:5709-5715)等，但并不限定于这些。
[0060]作为可以用于本发明的医药组合物的T细胞表位肽，可列举例如:来自肿瘤特异抗原的肽、来自HIV等病毒抗原的肽以及来自变应原的肽等，并不限定于此，优选为来自肿瘤特异抗原的T细胞表位肽。就来自肿瘤特异抗原的T细胞表位肽而言，与作为人的MHC分子的人白细胞抗原(HLA)结合的表位鉴定多个，在人类中，MHC I类分子存在HLA-A, HLA-B、HLA-C, MHC II 类分子存在 HLA-DR、HLA-DQ, HLA-DP。本发明的医药组合物中所含的T细胞表位肽可以为与任一种HLA抗原结合的T细胞表位肽，但优选为与HLA-A抗原结合的T细胞表位肽。迄今为止，与HLA-A抗原结合的分子较多地鉴定。例如，作为与HLA-A抗原等位基因HLA-A2或HLA-A24结合的来自肿瘤特异抗原的T细胞表位肽，可列举:W02003/104275、W02004/018667、W02004/024766、W02006/090810, W02006/093030、W02007/013576, W02007/018199, W02008/047473, W02008/102557, W02009/025117,W02009/025196, W02009/150822, W02009/153992, W02010/013485, W02010/047062,W02010/064430, W02010/070877, W02010/073551, W02010/095428, W02010/100878,W02010/106770、W02011/067920、W02011/089921中所记载的肽等，但可以用于本发明的医药组合物的T细胞表位肽并不限定于这些。
[0061]本发明的医药组合物中所使用的肽可以为由来自天然蛋白质的氨基酸序列构成的肽，也可以为这种肽的修饰肽。一般而言，某种肽中的I个、2个或数个氨基酸残基的改变对该肽的功能不产生影响，甚至根据情况而增强原来的肽的所期望的功能。实际上，已知有修饰肽(即，与原来的序列相比，由I个、2个或数个氨基酸残基被改变的(即，进行了置换、缺失、附加、和/或插入)氨基酸序列构成的肽)保持原来的肽的生物学的活性(Mark 等人，Proc Natl Acad Sci USA1984, 81:5662-6 ；Zoller and Smith, NucleicAcids Resl982, 10:6487-500 ;Dalbadie_McFarland 等人，Proc Natl Acad SciUSA1982, 79:6409-13)。因此，与作为来自天然的肿瘤特异抗原的T细胞表位肽被鉴定的肽同样，其修饰肽还可以在本发明的医药组合物中优选使用。需要说明的是，在本说明书中，“数个”这样的用语是指优选10个以下，更优选5个、4个或3个。
[0062]如果是本领域技术人员，则可以理解招致保存原来的肽的特性的结果的氨基酸残基的置换。这种氨基酸残基的置换被称为“保守置换”。表示功能上类似的氨基酸的保守置换在本【技术领域】中众所周知。保守氨基酸置换是指例如结构的、电的、极性或疏水性等性质类似的氨基酸间的置换。这样的性质也可以用例如氨基酸侧链的类似性进行分类。具有碱性侧链的氨基酸由赖氨酸、精氨酸、组氨酸构成，具有酸性侧链的氨基酸由天冬氨酸、谷氨酸构成；具有非荷电极性侧链的氨基酸含有甘氨酸、天冬酰胺、谷酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸等；具有疏水性侧链的氨基酸含有丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸等；具有分支侧链的氨基酸由苏氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸构成，以及具有芳香族侧链的氨基酸由酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、组氨酸构成。另夕卜，以下的8组分别含有作为相互保守的置换在本【技术领域】中所看到的氨基酸(例如参照Creighton, Proteinsl984)。
[0063]I)丙氨酸(A)、甘氨酸(G)
[0064]2)天门冬氨酸⑶、谷氨酸(E)
[0065]3)天冬酰胺(N)、谷酰胺(Q)
[0066]4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)
[0067]5)异亮氨酸⑴、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、缬氨酸(V)；
[0068]6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸⑴、色氨酸(W)；
[0069]7)丝氨酸(S)、苏氨酸⑴；及
[0070]8)半胱氨酸(C)、蛋氨酸(M)
[0071]因此，本发明的医药组合物可以含有通过保守置换而改变有原来的肽的肽作为有效成分。但是，可以用于本发明的医药组合物的修饰肽并不限定于这些，修饰肽只要保持原来的肽的特性，就可以含有非保守改变。在此，肽的“特性”是指在医药组合物中所期待的肽的生理活性。例如，在肽为T细胞表位肽的情况下，修饰肽只要保持原来的肽的CTL诱导活性，其改变的种类及被改变的氨基酸残基的数量没有限定。
[0072]另外，在通过氨基酸残基的置换、附加和/或插入而进行肽的改变的情况下，除L-氨基酸之外，可以利用D-氨基酸、或氨基酸类似物或氨基酸模拟物等非天然氨基酸等而进行改变。例如，为了提高肽的人体内稳定性，在本【技术领域】中已知有导入D-氨基酸、或氨基酸类似物或氨基酸模拟物等非天然氨基酸。因此，只要修饰肽保持原来的肽的特性，肽可以为含有D-氨基酸、和/或氨基酸类似物或氨基酸模拟物等非天然氨基酸的修饰肽。
[0073]除如上所述的改变之外，只要保持原来的肽的特性，可以在肽上连接其它物质。作为可以与肽连接的其它物质，可列举例如:其它肽、脂质、糖或糖链、乙酰基、天然或合成的聚合物等。另外，只要保持原来的肽的特性，可以在肽上进行糖链附加、侧链氧化及磷氧化等修饰。
[0074]本发明的医药组合物也可以含有即使为难溶于水等极性溶剂的肽作为有效成分。例如，使用以注射用被制备的灭菌水(例如日本药典中所规定的注射用水)作为溶剂的情况下，相对于25°C、1气压中的水的溶解度低于lmg/mL(例如低于0.9mg/mL、低于0.8mg/mL、低于0.7mg/mL、低于0.6mg/mL、或低于0.5mg/mL)的肽难以溶解有效量。但是,本发明的医药组合物即使为对于水的溶解度低的肽，也可以以水溶液的状态含有有效量。因此，在本发明的医药组合物中，肽对于水的溶解度没有特别限定。
[0075]另外，本发明的医药组合物也可以含有对于水的溶解度不同的多种肽。例如，为用于诱导免疫应答的医药组合物的情况下，与含有I种肽的情况相比，含有多种肽的情况，有时可得到优选的效果。例如，在诱导对肿瘤的免疫应答的情况下，因为肿瘤细胞具有的多样性，大多优选使用多种抗原肽。由于肿瘤为不均匀的细胞集团，因此，即使为在某种肿瘤细胞中表达的抗原，也有时在其它肿瘤细胞中不表达。如果使用多种抗原肽，则肿瘤细胞表达任一种抗原的可能性升高，因此，可以期待对于肿瘤的免疫诱导效果升高。在将注射用水用作溶剂的情况下，要含有多种抗原肽时，肽的总量变多，因此，大多难以使全部肽溶解。但是，即使对于水的溶解度为不同的多种肽，本发明的医药组合物也可以以水溶液的状态含有各肽的有效量。例如，含有多种来自肿瘤特异抗原的T细胞表位肽的医药组合物为用于诱导对肿瘤的免疫应答的本发明的医药组合物的优选的实施方式。
[0076]在优选的实施方式中，用于诱导对特定的肿瘤的免疫应答的医药组合物含有多种已知在该肿瘤中进行高表达的来自肿瘤特异抗原的T细胞表位肽。例如，诱导对胃癌的免疫应答的医药组合物可以含有多种来自已知在胃癌中进行高表达的肿瘤特异抗原的T细胞表位肽。关于其它癌症种类也同样。在此，“进行高表达”是指:与对应的正常脏器的细胞相比，肿瘤细胞中的表达量多。例如，与正常脏器的细胞相比，表达量增加1.5倍以上时，基因被看作在肿瘤细胞中进行高表达。与正常脏器的细胞相比，肿瘤细胞中的表达量优选为2倍以上，更优选为3倍以上。
[0077]例如，作为已知在胃癌中进行高表达的肿瘤特异抗原，并不限定于这些，可列举:CDH3、URLC10、CXDRL1、GCUD1、VEGR1、VEGFR2、MPH0SPH1、DEPDC1、KIF20A、及 FOXMl 等。含有选自这些来自肿瘤特异抗原的T细胞表位肽中的多种T细胞表位肽的本发明的医药组合物适于诱导对胃癌的免疫应答。例如，本发明的医药组合物诱导对胃癌的免疫应答的情况下，作为本发明的医药组合物中所含的来自肿瘤特异抗原的T细胞表位肽的优选的实例，可列举由序列号1、2、3、4或5所示的氨基酸序列构成的肽的任一种或2种以上的肽。另外，由序列号1、2、3、4或5所示的氨基酸序列构成的肽只要具有细胞毒性T细胞诱导能力，就可以为其修饰肽，作为修饰肽，可列举例如由在序列号1、2、3、4或5的氨基酸序列中I?数个氨基酸被缺失、置换、插入或附加的氨基酸序列构成的肽。在此，“I?数个”的范围是指I?5个、优选I?3个、更优选I或2个。氨基酸的缺失是指从序列号1、2、3、4或5所示的氨基酸序列中选择任意的氨基酸而缺失。另外，氨基酸的附加是指在序列号1、2、3、4或5所示的氨基酸序列的N末端或C末端侧附加I?数个氨基酸。作为氨基酸的置换，可列举例如上述的保守氨基酸置换。
[0078]本发明的医药组合物中所含的肽可以为药学上允许的盐的形态。作为药学上允许的盐的实例，可列举:与碱金属(锂、钾、钠等)的盐、与碱土金属(钙、镁等)的盐、与有机碱(甲胺、乙胺、乙醇胺等)的盐、与有机酸(甲酸、丙酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、草酸、苯甲酸、甲烷磺酸、苯磺酸等)的盐及与无机酸(盐酸、磷酸、醋酸、硫酸、溴化氢酸等)的盐。作为优选的实例，可列举例如与醋酸的盐及与盐酸的盐。
[0079]本发明的医药组合物含有有效量的肽。“有效量”是指为了使医药组合物产生所期望的效果而充分的肽的量。本领域技术人员可以根据肽的种类而选择适当的有效量。例如，肽为T细胞表位肽的情况下,在给药医药组合物的受试者的体内，与没有给药的受试者或给药前相比，可以将显著地增加与递呈该T细胞表位肽的细胞特异性地反应的T细胞的量确定为有效量。肽为T细胞表位肽的情况下，肽的有效量为0.1mg?lOOmg、优选0.25mg?50mg、更优选0.5mg?20mg、进一步优选0.5mg?10mg、最优选Img?5mg之间的任意的量。在本发明的医药组合物作为注射剂被制备的情况下，本发明的医药组合物中的肽的浓度为
0.lmg/mL ?100mg/mL、优选 0.25mg/mL ?50mg/mL、更优选 0.5mg/mL ?20mg/mL、进一步优选0.5mg/mL?10mg/mL、最优选lmg/mL?5mg/mL之间的任意的浓度。
[0080]或者，肽的有效量可以作为摩尔量被选择。例如，肽为T细胞表位肽的情况下，妝的有效量为0.1 μ moL?100 μ moL、优选0.25 μ moL?50 μ moL、更优选0.5 μ moL?20 μ moL、进一步优选I μ moL?10 μ moL、最优选I μ moL?5 μ moL之间的任意的量。在本发明的医药组合物作为注射剂被制备的情况下，本发明的医药组合物中的肽的浓度为
0.1 μ moL/mL ?100 μ moL/mL、优选 0.25 μ moL/mL ?50 μ moL/mL、更优选 0.5 μ moL/mL ?20 μ moL/mL>3?一步/[尤 0.5 μ moL/mL ~ 10 μ moL/mL、最/[尤 I μ moL/mL ~ 5 μ moL/mL 之|1]的任意的浓度。
[0081]在本发明的医药组合物含有多种肽的情况下，本发明的医药组合物含有分别为有效量的各肽。该情况下，本领域技术人员可以根据肽的种类而选择适当的有效量。在肽为T细胞表位肽的情况下，各肽的有效量及本医药组合物中的浓度与上述相同。
[0082]本发明的医药组合物除肽之外，含有碱性氨基酸和/或碱。通过本发明的医药组合物含有碱性氨基酸和/或碱，即使为对于水的溶解度低的肽，也可以以水溶液的状态含有有效量。另外，即使为多种肽，也可以含有各肽的有效量。
[0083]“碱性氨基酸”是指显示碱性的氨基酸。具体而言，可列举:赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸及组氨酸等。本发明的医药组合物可以含有I种或2种以上的这些碱性氨基酸。碱性氨基酸可以为L型、D型的任一种，也可以为外消旋体。另外，碱性氨基酸可以为盐的形态。作为本发明的医药组合物中使用的碱性氨基酸的优选的实例，可列举赖氨酸及精氨酸。在优选的实施方式中，碱性氨基酸为精氨酸。在更优选的实施方式中，碱性氨基酸为L-精氨酸。本发明的医药组合物中的碱性氨基酸的含量没有特别限定，在为注射剂的情况下，为2mg/mL以上,优选5mg/mL以上，更优选7.5mg/mL以上,进一步优选10mg/mL以上,最优选15mg/mL以上。含量的上限没有特别限定，可以根据使用的碱性氨基酸的种类及给药路径，参照例如《医药品添加物词典2007》(医药品添加剂协会编集、药事日报社)中记载的最大使用量。例如，皮下注射剂的情况，L-精氨酸的I天的最大使用量为20mg。因此，在本发明的医药组合物为皮下注射剂、且含有L-精氨酸作为碱性氨基酸的情况下，作为本发明的医药组合物中的L-精氨酸的浓度，可以选择至20mg/mL的浓度(给药本发明的医药组合物ImL的情况)。
[0084]本发明的医药组合物可以取代碱性氨基酸、或与碱性氨基酸组合而含有碱。在本说明书中，“碱”是指:根据阿伦尼乌斯的定义、在溶解于水时产生氢氧化物离子的物质。另夕卜，根据劳里-布朗斯特的定义，碱是指接受质子的物质，根据路易斯的定义，碱是指供给电子对而可以形成双键的物质。具体而言，可列举:氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、三乙醇胺、氨基丁三醇及葡甲胺等。作为本发明的医药组合物中所使用的碱的优选的实例，可列举碳酸钠及碳酸氢钠。碳酸钠及碳酸氢钠可以为水合物的形态。在优选的实施方式中，碱为碳酸钠或其水合物(例如Na2CO3* 1H2O)。本发明的医药组合物中的碱的含量没有特别限定，在为注射剂的情况下，为0.5mg/mL以上,优选lmg/mL以上,更优选2mg/mL以上,进一步优选3mg/mL以上，最优选5mg/mL以上。含量的上限没有特别限定，可以根据使用的碱的种类及给药路径，参照例如《医药品添加物词典2007》(医药品添加剂协会编集、药事日报社)中记载的最大使用量。例如，皮下注射剂的情况下，十水合碳酸钠(十水合碳酸钠:Na2CO3.1H2O)的I天的最大使用量为20.8mg(换算为碳酸钠(Na2CO3)时，为7.7mg)。因此，在本发明的医药组合物为皮下注射剂、且含有碳酸钠作为碱的情况下，作为本发明的医药组合物中的十水合碳酸钠的浓度，可以选择至20.8mg的浓度，作为碳酸钠的浓度，可以选择至7.7mg/mL的浓度(给药本发明的医药组合物ImL的情况)。
[0085]在优选的实施方式中，本发明的医药组合物含有I种或2种以上的肽作为有效成分，且含有碱性氨基酸及碱。在更优选的实施方式中，本发明的医药组合物含有I种或2种以上的肽作为有效成分，且含有精氨酸及碳酸钠。进一步优选的实施方式为本发明的医药组合物含有I种或2种以上的T细胞表位肽作为有效成分，且含有精氨酸及碳酸钠。
[0086]本发明的医药组合物可以根据需要组合医药品添加物词典2007 (药事日报社)中记载的添加剂。作为添加剂，可列举例如:悬浮剂(氯化苯甲烃铵、月桂基硫酸钠、月桂基氨基丙酸、单硬脂酸甘油、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素等)、分散剂(柠檬酸钠、轻质氧化铝、聚山梨醇酯、聚乙二醇、糊精、低取代度羟丙基纤维素、羟丙基纤维素等)、乳化剂(甘油、丙二醇、鲸蜡醇、卵磷脂、羊毛脂、月桂基硫酸钠等)、表面活性剂(鲸蜡醇、聚氧乙烯十六烷基醚、聚桂醇等)、等渗剂(葡萄糖、D-山梨糖醇、D-甘露醇、甘油、氯化钠等)、pH调整剂(磷酸盐、醋酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐等缓冲剂、盐酸、磷酸等无机酸及其盐、醋酸、柠檬酸、乳酸等有机酸及其盐、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙等氢氧化物等)、无痛化剂(肌酸酐、苄醇等)、稳定剂(牛磺酸、氨基酸、对羟基苯甲酸酯类、苄醇、结晶纤维素、聚乙二醇等)。这些添加剂可以单独使用或适当组合而使用。
[0087]本发明的医药组合物可以在溶解有碱性氨基酸和/或碱的药学上允许的水性溶剂中溶解肽后，按照在本【技术领域】中公知的方法进行制剂化。在制剂化时，可以添加如上所述的添加剂。本发明的医药组合物可以根据给药路径为例如胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、糖浆制剂、乳剂、栓剂、注射剂等形态。
[0088]在优选的实施方式中，本发明的医药组合物作为注射剂被提供。注射剂可以使用药学上允许的水性溶剂而制备。例如，作为溶剂，可以使用水、生理盐水及磷酸缓冲液等，但并不限定于这些。在优选的实施方式中，可以将以注射用被制备的灭菌水(注射用水)用作溶剂。注射剂可以适当含有如上所述的缓冲剂、等渗剂、稳定剂、防腐剂、无痛化剂及PH调整剂等。注射剂的PH可以根据需要，利用pH调整剂进行调整。本发明的医药组合物为注射剂的情况下，pH优选为6.0?11.0的范围，更优选为7.0?10.0的范围。另外，pH调整剂没有特别限定，优选使用氢氧化钠及盐酸。作为注射剂被制备的本发明的医药组合物可以通过皮下注射、皮内注射、静脉内注射、或肌肉内注射等给药于受试者。
[0089]本发明的医药组合物可以作为冷冻干燥制剂被提供。冷冻干燥制剂可以通过将如上述的注射剂那样制备的组合物填充于玻璃瓶等、进行冷冻干燥来制备。在冷冻干燥时，以良好的冷冻干燥饼的生成或肽的稳定化为目的，可以添加作为添加剂的单糖类(葡萄糖、赤藓糖、木酮糖、核酮糖、景天庚酮糖、核糖、甘露糖等)、二糖类(麦芽糖、纤维二糖、龙胆二糖、密二糖、乳糖、松二糖、槐糖(V π * — 7 )、海藻糖、异海藻糖、蔗糖、异蔗糖等)、糖醇(山梨糖醇、核糖醇、甘露醇等)及聚乙烯基吡咯烷酮糖。但是，在本发明的医药组合物中，即使在没有添加如上所述的添加剂的情况下，也生成良好的冷冻干燥饼，且也维持肽的稳定性，因此，通常不需要添加如上所述的添加剂。
[0090]冷冻干燥制剂可以通过使用适当的重构溶液进行重构而经口或非经口地使用。在优选的实施方式中，冷冻干燥制剂在重构后用作注射剂。在重构后用作注射剂的情况下，作为重构溶液，可以使用以注射用被制备的灭菌水(注射用水)、生理盐水等。
[0091]本发明的医药组合物可以对包括人在内的哺乳类(例如小鼠、大鼠、天竺鼠、兔、猫、狗、绵羊、山羊、猪、牛、马、猴子、狒狒及黑猩猩等)使用。优选对人使用。
[0092]本发明的医药组合物可以根据作为有效成分含有的肽的种类适当选择适用的疾病。例如，在肽为T细胞表位肽的情况下，可以以诱导对该T细胞表位肽所来自的抗原的免疫应答为目的给药于受试者。例如，在本发明的医药组合物含有来自肿瘤特异抗原的T细胞表位肽的情况下，本发明的医药组合物可以在给药受试者的体内为了诱导对肿瘤的免疫应答而使用。该情况下，本发明的医药组合物可以以治疗或预防癌症为目的给药于受试者。
[0093]因此，在其它实施方式中，本发明提供一种医药组合物，其含有I种或2种以上的来自肿瘤特异抗原的T细胞表位肽作为有效成分，且含有碱性氨基酸和/或碱，用于诱导对肿瘤的免疫应答。另外，在其它实施方式中，本发明的医药组合物为一种对肿瘤的免疫应答诱导剂，其含有I种或2种以上的来自肿瘤特异抗原的T细胞表位肽作为有效成分，且含有碱性氨基酸和/或碱。另外，在其它实施方式中，本发明提供一种医药组合物，其含有I种或2种以上的来自肿瘤特异抗原的T细胞表位肽作为有效成分，且含有碱性氨基酸和/或碱，用于预防或治疗癌症。
[0094]另外，本发明的医药组合物含有I种或2种以上的来自肿瘤特异抗原的T细胞表位肽的情况下，本发明的医药组合物可以作为癌症疫苗被提供。因此，在其它实施方式中，本发明的医药组合物为一种癌症疫苗，其含有I种或2种以上的来自肿瘤特异抗原的T细胞表位肽作为有效成分，且含有碱性氨基酸和/或碱。
[0095]在上述的情况下，本发明的医药组合物所适用的肿瘤或癌症没有特别限定，根据该医药组合物中所含的T细胞表位肽的种类适当选择。作为本发明的医药组合物可以适用的肿瘤或癌症的实例，可列举例如:膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、子宫体癌、胆管癌、大肠癌、食道癌、胃癌、肝癌、肺癌、骨肉瘤、滑膜肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、软组织肿瘤、睾丸肿瘤、间皮瘤、头颈部癌、皮肤癌、淋巴瘤、慢性骨髓性白血病及急性骨髓性白血病等，但并不限定于这些。
[0096]本发明的医药组合物含有T细胞表位肽作为有效成分的情况下，除上述的成分之夕卜，本发明的医药组合物可以含有用于增强免疫应答的佐剂。本说明书中使用的“佐剂”这样的用语是指:在与具有免疫原性的蛋白质一起(或连续)给药的情况下，增强对该蛋白质的免疫应答的物质。作为可以使用的佐剂的实例，可以列举例如:弗氏不完全佐剂、弗氏完全佐剂、GM-CSF其它免疫刺激性细胞因子、皂角苷、皂角苷衍生物、脂多糖、脂肽、乳铁蛋白、CpG低聚核苷酸、细菌DNA、咪唑并喹啉等，但并不限定于这些。另外，文献(例如Clin.Microb1l.Rev.，7:277-289，1994)中记载的佐剂等也可以使用。这些佐剂可以单独使用，也可以组合使用2种以上的佐剂。
[0097]在佐剂为亲水性的物质的情况下，该佐剂可以在含有碱性氨基酸和/或碱的水溶液中溶解肽之前或溶解之后添加于本发明的医药组合物中。另一方面，在佐剂为油性佐剂的情况下，该佐剂优选在溶解肽之后添加于本发明的医药组合物。该情况下，优选通过在佐剂添加后进行搅拌而制成乳剂的形态。例如，在含有碱性氨基酸和/或碱的水溶液中溶解肽而进行过滤灭菌后，与油性佐剂进行混合并搅拌，由此可以将本发明的医药组合物作为乳化制剂制备。或者，在本发明的医药组合物为冷冻干燥制剂的情况下，进行该冷冻干燥制剂的重构之后，与油性佐剂进行混合并搅拌，由此可以制成乳剂的形态。与油性佐剂的乳化制剂或乳剂可以通过皮下注射、皮内注射、静脉内注射、或肌肉内注射等给药于受试者。在优选的实施方式中，乳化制剂或乳剂通过皮下注射给药于受试者。另外，作为可以用于本发明的医药组合物的油性佐剂的典型的实例，可以列举弗氏不完全佐剂，但并不限定于此。
[0098]2.本发明的医药组合物的制造方法
[0099]另外，本发明提供一种本发明的医药组合物的制造方法。本发明的医药组合物可以通过如下方法来制造，即，在药学上允许的水性溶剂中溶解碱性氨基酸和/或碱，制作含有碱性氨基酸和/或碱的水溶液之后，在该水溶液中溶解肽，按照在本【技术领域】中公知的方法进行制剂化。因此，本发明的医药组合物的制造方法包含在含有碱性氨基酸和/或碱的水溶液中溶解I种或2种以上的肽的工序。
[0100]例如，在以注射用被制备的灭菌水(例如日本药典中所规定的注射用水)等药学上允许的水性溶剂中溶解碱性氨基酸(例如L-精氨酸)及碱(例如碳酸钠或其水合物)，制作水溶液。此时，水溶液中的碱性氨基酸及碱的浓度可以根据碱性氨基酸及碱的种类、肽对于水的溶解度、以及最终的剂型等适当选择。
[0101]例如,在使用L-精氨酸作为碱性氨基酸的情况下,可以选择Omg/mL?100mg/mL的浓度。浓度的下限可以优选设为2mg/mL、5mg/mL、7.5mg/mL、10mg/mL或15mg/mL。另外,浓度的上限可以参照例如《医药品添加物词典2007》(医药品添加剂协会编集、药事日报社)中记载的最大使用量、根据设想的最终的给药量选择该水溶液中的浓度。例如，为含有T细胞表位肽的医药组合物的情况下，通常与等量的油性佐剂进行混合、搅拌并做成乳剂后，将ImL的乳剂通过皮下注射给药于受试者。另外，使用作为碱性氨基酸的L-精氨酸的情况下，根据《医药品添加物词典2007》，利用皮下注射的I天的最大使用量为20mg。因此，在使用作为碱性氨基酸的L-精氨酸的情况下，作为上述水溶液中的L-精氨酸的浓度，可以选择40mg/mL、或低于其的浓度。
[0102]另外，例如，在使用作为碱的碳酸钠或其水合物的情况下，作为换算为碳酸钠的浓度，可以选择Omg/mL?20mg/mL的浓度。浓度的下限可以设为优选0.5mg/mL、lmg/mL、2mg/mL、3mg/mL或5mg/mL。另外,浓度的上限可以参照例如《医药品添加物词典2007》(医药品添加剂协会编集、药事日报社)中记载的最大使用量、根据设想的最终的给药量选择上述水溶液中的浓度。例如，为含有T细胞表位肽的医药组合物的情况下，通常与等量的油性佐剂进行混合、搅拌并做成乳剂之后，将ImL的乳剂通过皮下注射给药于受试者。另外，使用十水合碳酸钠(十水合碳酸钠=Na2CO3.1H2O)作为碱的情况下，根据《医药品添加物词典2007》，利用皮下注射的I天的最大使用量为20.8mg(换算为碳酸钠(Na2CO3)时，为7.7mg)。因此，在使用十水合碳酸钠作为碱的情况下，作为上述水溶液中的十水合碳酸钠的浓度，可以选择41.6mg/mL(以碳酸钠换算计为15.4mg/mL)或低于其的浓度。
[0103]制作含有碱性氨基酸和/或碱的水溶液之后，在该水溶液中溶解I种或2种以上的肽。在溶解2种以上的肽的情况下，也可以同时溶解全部种类或一部分的肽，但优选使每I种逐个溶解。关于溶解肽的顺序，通常不需要考虑。在溶解肽时，可以根据需要利用pH调整剂调整pH。作为优选的pH的范围，可以列举pH8.0?11.0的范围，但并不限定于此。需要说明的是，肽溶解后的水溶液的PH通常为上述的范围内，因此，通常不需要调整pH。
[0104]上述水溶液中的各肽的浓度可以以最终的给药量成为有效量的方式根据剂型适当选择。例如，肽为T细胞表位肽的情况下，各肽的有效量通常为0.1mg?lOOmg。另外，为含有T细胞表位肽的医药组合物的情况下，大多与等量的油性佐剂进行混合、搅拌并做成乳剂之后，将ImL的乳剂通过皮下注射给药于受试者。因此，上述水溶液中的各肽的浓度可以从0.2mg/mL?200mg/mL的范围中选择。典型而言，肽为T细胞表位肽的情况下，上述水溶液中的各肽的浓度可以从lmg/mL?20mg/mL的范围中选择。
[0105]或者，各肽的有效量可以作为摩尔量算出。例如，肽为T细胞表位肽的情况下，各肽的有效量通常为0.1 μ moL?100 μ moL。另外，为含有T细胞表位肽的医药组合物的情况下，大多与等量的油性佐剂进行混合、搅拌并做成乳剂之后，将ImL的乳剂通过皮下注射给药于受试者。因此，上述水溶液中的各肽的浓度可以从0.2 μ moL/mL?200 μ moL/mL的范围中选择。典型而言，肽为T细胞表位肽的情况下，上述水溶液中的各肽的浓度可以从
Iμ moL/mL?20 μ moL/mL的范围中选择。
[0106]在溶解2种以上的肽的情况下，上述水溶液中的各肽的浓度可以相同，也可以不同。将各肽的浓度设为相同的情况下，各肽的浓度可以以重量浓度设为相同，也可以以摩尔浓度设为相同。在本发明的医药组合物中，只要含有有效量的各肽即可，因此，各肽的组合比没有特别限定。
[0107]在上述水溶液中溶解肽之后，可以按照在本【技术领域】中公知的方法进行制剂化。另外，也可以在肽的溶解前或溶解后、根据需要添加如上所述的添加剂和/或佐剂。
[0108]在注射剂的情况下，可以通过例如将如上述那样制备的肽溶解液进行过滤灭菌、填充于安瓿、玻璃瓶、塑料容器等适当的容器中并进行密封来制备。在过滤灭菌中，可以使用例如0.22 μ m孔径的无菌过滤用过滤器等。
[0109]另外，在冷冻干燥制剂的情况下，可以通过例如将如上述那样制备的肽溶解液进行过滤灭菌、填充于安瓿、玻璃瓶、塑料容器等适当的容器中后、进行冷冻干燥来制备。冷冻干燥结束后，进行复压并密封容器。就冷冻干燥的条件而言，只要是本领域技术人员，就可以适当选择。
[0110]在肽为T细胞表位肽的情况下，也可以做成与油性佐剂的乳剂制剂。例如，将如上述那样制备的肽溶解液进行过滤灭菌，在无菌条件下与进行了过滤灭菌的油性佐剂进行混合、搅拌，由此可以制备乳剂制剂。肽溶解液和油性佐剂的混合比通常为1:1，但并不限定于此。就乳剂的制备而言，在制药工厂等中进行的情况下，可以使用通过蒸汽灭菌等进行了灭菌的乳化机而进行。另外，乳剂的制备可以在成为本发明的医药组合物的给药受试者的患者存在的医院等设施中进行。在医院等设施中，在给药之前?24小时前，使用注射器等，将如上述那样制备的注射剂及油性佐剂进行混合、搅拌，由此可以进行乳剂的制备。或者，可以将如上述那样制备的冷冻干燥制剂进行重构后，与注射剂同样地，使用注射器等制备乳剂。
[0111]3.本发明的试剂盒
[0112]本发明还提供一种含有(a)本发明的医药组合物的冷冻干燥制剂、及(b)该本发明的医药组合物的冷冻干燥制剂的重构溶液的试剂盒。
[0113]在本发明的试剂盒中作为冷冻干燥制剂含有的本发明的医药组合物可以为上述的任一种医药组合物。优选本发明的试剂盒中所含的医药组合物为含有T细胞表位肽作为肽的医药组合物，更优选为含有来自肿瘤特异抗原的T细胞表位肽的医药组合物。冷冻干燥制剂中所含的T细胞表位肽可以为I种，也可以为多种。
[0114]本发明的试剂盒中所含的重构溶液没有特别限定，可以使用以注射用被制备的灭菌水(注射用水)、生理盐水等。另外，可以在重构溶液中溶解与冷冻干燥制剂中所含的肽种类不同的肽。
[0115]本发明的试剂盒的优选的实施方式为含有由序列号1、2、3或4所示的氨基酸序列构成的肽的I种或2种以上的冷冻干燥制剂，和由重构溶液构成的试剂盒。另外，本发明的试剂盒的其它优选的实施方式为含有由序列号1、2、3或4所示的氨基酸序列构成的肽的I种或2种以上的冷冻干燥制剂，和由含有包含序列号5所示的氨基酸序列构成的肽的重构溶液的试剂盒。作为这种试剂盒的实例，可列举含有由序列号1、2、3或4所示的氨基酸序列构成的肽的全部种类的冷冻干燥制剂，和由含有包含序列号5所示的氨基酸序列构成的肽的重构溶液的试剂盒。
[0116]本发明的试剂盒除上述(a)及(b)之外，可以含有(C) I种或2种以上的佐剂。佐剂没有特别限定，可以使用弗氏不完全佐剂、弗氏完全佐剂等油性佐剂等。
[0117]在上述本发明的试剂盒中，在向受试者给药前，由重构溶液重构冷冻干燥制剂。重构后的重构组合物中的各肽的最终浓度优选为0.2mg/mL以上。在优选的实施方式中，以各肽的最终浓度成为lmg/mL?20mg/mL的方式进行重构。或者，在以冷冻干燥制剂中的各肽量成为等摩尔的方式添加的情况下，可以以各肽的最终浓度成为I μ moL/mL?20 μ moL/mL的方式进行重构。
[0118]重构组合物例如可以作为注射剂给药于受试者。在本发明的试剂盒含有佐剂的情况下，可以使用注射器等与佐剂进行混合、搅拌之后，给药于受试者。在佐剂为油性佐剂的情况下，可以通过使用注射器等进行混合、搅拌并做成乳剂。做成乳剂的情况下，与重构组合物混合的佐剂的量优选设为与重构组合物等量，但并不限定于此。制备的乳剂可以作为注射剂给药于受试者。在含有T细胞表位肽的医药组合物的情况下，例如可以将乳剂ImL通过皮下注射等给药于受试者。
[0119]本发明还提供一种含有(a)本发明的医药组合物、及(b) I种或2种以上的佐剂的试剂盒。该情况下，试剂盒中所含的本发明的医药组合物优选为水性的医药组合物。优选医药组合物含有I种或2种以上的T细胞表位肽，更优选含有来自肿瘤特异抗原的T细胞表位肽作为肽。佐剂没有特别限定，可以优选使用弗氏不完全佐剂、弗氏完全佐剂等油性佐齐U。医药组合物和佐剂可以通过使用注射器等进行混合、搅拌而做成乳剂。制备的乳剂可以作为注射剂给药于受试者。在含有T细胞表位肽的医药组合物的情况下，例如可以将乳剂ImL通过皮下注射等给药于受试者。
[0120]本发明的医药组合物或其冷冻干燥制剂、重构溶液和/或佐剂优选以封入适当的容器中的形态在本发明的试剂盒中含有。作为适当的容器的实例，可列举例如:瓶、玻璃瓶、注射器及试管等。容器可以为2室式容器。容器可以由诸如玻璃或塑料的多样的材料形成。优选在容器的表面添加标签。标签可以表示能够适用的疾病及用于给药的说明等。例如，标签可以表示冷冻干燥制剂的重构方法、乳剂的制备方法、乳剂的给药方法等。
[0121]本发明的试剂盒可以含有上述以外的其它组件。可以含有从商业上及使用者观点出发优选的其它组件，例如，缓冲剂、稀释剂、赋形剂、过滤器、针、注射器及与使用方法有关的附加文件等。
[0122]下面，列举实施例及试验例，对本发明进行说明，但本发明不应该限定于这些实施例。
[0123]实施例
[0124]注射剂用肽:
[0125]合成表I中记载的肽作为注射剂用的肽。如表I所示，这些肽的预测pi为5.2?10.4的范围，预料溶解特性分别不同。这些肽为来自确认具有细胞毒性T细胞诱导能力的肿瘤特异抗原的肽。
[0126]注射用水:注射用水使用日本药典中所规定的制造用水。
[0127][表I]
[0128]
肽名称I氨基酸序列I序列号I预测Pl (平均pKa)
肽 -1SYGVLLWEI~?6.75(6.48)
肽 -2EYYELFVNI~ 27.90(6.80)
肽 -3KVYLRVRPLL 310.4(9.72)
肽 -4IYTWIEDHF~ 45.20(6.05)
肽 -5RYCNLEGPPI 59.60(8.08)
肽 -6RFVPDGNRI~ 69.09(8.02)
肽 -7SYRNEIAYL~ 79.45(8.10)
肽 -8EYCPGGNLP~89.67(7.38)
肽 -9VYGIRLEHF~97.60(7.53)
肽-?οDylnewgsrf-To6.95(7.13)
[0129]比较例I使用有注射用水的单一肽注射剂的制备
[0130]为了制备表I中记载的单一肽制剂，在注射用水ImL中分别投入表I中记载的肽。通过在室温下进行搅拌而溶解投入的肽的总量，制备无色透明的肽单一溶液。其后，将得到的肽溶液进行过滤灭菌(0.22 μ m过滤器)，得到注射剂。
[0131]肽的投入量在2?20mg的范围内发生变化，在各浓度阶段制备注射剂。关于肽_3、
5、6、8、9，在试验的任一投入量中，均可得到注射剂。另一方面，关于肽-1、2、4、7、10，在试验的任一投入量中，均不能得到注射剂。对这些肽确认可以制备注射剂的浓度，结果，就肽-7而言，只要为0.5mg/mL的浓度，就可以得到注射剂，但其它肽即使为0.08mg/mL的浓度，也不能得到注射剂。
[0132]实施例1使用有碳酸钠溶液的单一肽注射剂的制备
[0133]将十水合碳酸钠(Na2CO3.1H2O) 4Img溶解于注射用水lmL，得到含碳酸钠注射用水。关于比较例I中不溶解于注射用水的肽，为了制备各肽的单一制剂，在含碳酸钠注射用水ImL中分别投入肽_1、2、4、7、10。通过在室温下进行搅拌而溶解投入的肽的总量，制备无色透明的肽溶液。其后，将得到的肽溶液进行过滤灭菌(0.22 μ m过滤器)，得到注射剂。
[0134]肽投入量在5?20mg的范围内发生变化，在各浓度阶段制备注射剂。就肽_2、4、
7、10而言，在试验的任一投入量中，均可得到注射剂。关于肽-1，确认至9mg的投入量可得到注射剂。需要说明的是，得到的注射剂的PH均在作为注射剂适合的pH的范围内(表2)。
[0135]实施例2使用有精氨酸溶液的单一肽注射剂的制备
[0136]将L-精氨酸40mg溶解于注射用水lmL，得到含精氨酸的注射用水。关于比较例I中不溶解于注射用水的肽，为了制备各肽的单一制剂，在含精氨酸的注射用水ImL中分别投入肽_1、2、4、7、10。通过在室温下进行搅拌而溶解投入的肽的总量，制备无色透明的肽单一溶液。其后，将得到的肽溶液进行过滤灭菌(0.22 μ m过滤器)，得到注射剂。
[0137]肽的投入量在5~20mg的范围内发生变化，在各浓度阶段制备注射剂。就肽_2、
4、7、10而言，在试验的任一投入量中，均可得到注射剂。关于肽-1，确认至6mg的投入量可得到注射剂。得到的注射剂的PH均在作为注射剂适合的pH的范围内(表2)。
[0138]实施例3使用有碳酸钠/精氨酸溶液的注射剂的制备
[0139]将十水合碳酸钠41mg及L-精氨酸40mg溶解于注射用水lmL，得到含碳酸钠/精氨酸的注射用水。为了制备表1中记载的肽的单一制剂，在含碳酸钠/精氨酸的注射用水ImL中分别投入表1中记载的肽。通过在室温下进行搅拌而溶解投入的肽的总量，制备无色透明的肽单一溶液。其后，将得到的肽溶液进行过滤灭菌(0.22 μ m过滤器)，得到注射剂。
[0140]肽的投入量在5~20mg的范围内发生变化，在各浓度阶段制备注射剂。关于肽_2、4~10，在试验的任一投入量中均可得到注射剂。关于肽-1，确认至1mg的投入量可得到注射剂。另外，关于肽_3，确认至15mg的投入量可得到注射剂。得到的注射剂的pH均在作为注射剂适合的PH的范围内(表2)。
[0141]将实施例1~3及比较例I的结果归纳于表2。关于在使用有注射用水的情况下不能制备注射剂的肽，也可以通过使用含碳酸钠的注射用水、含精氨酸的注射用水、或含碳酸钠/精氨酸的注射用水来制备注射剂。可以认为，在上述3种注射用水中，在试验的任一种肽中均可以以10mg/mL以上的浓度制备注射剂的含碳酸钠/精氨酸的注射用水作为注射剂用溶剂最优异。
[0142][表2]
[0143]

【权利要求】
1.一种医药组合物，其含有I种或2种以上的肽作为有效成分，且含有碱性氨基酸和/或碱。
2.如权利要求1所述的医药组合物，其中，碱性氨基酸为选自由精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、组氨酸、羟基赖氨酸及它们的盐构成的组中的I种或2种以上的组合。
3.如权利要求1或2所述的医药组合物，其中，碱为选自由碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、三乙醇胺、氨基丁三醇及葡甲胺构成的组中的I种或2种以上的组合。
4.如权利要求1?3中任一项所述的医药组合物，其中，肽为T细胞表位肽。
5.如权利要求1?3中任一项所述的医药组合物，其中，肽为2种以上的T细胞表位肽直接或经由连接体连接而成的肽。
6.如权利要求4或5所述的医药组合物，其中，T细胞表位肽为由序列号1、2、3、4或5所示的氨基酸序列构成的肽的任一种或2种以上的肽。
7.如权利要求4或5所述的医药组合物，其中，T细胞表位肽为由序列号1、2、3或4所示的氨基酸序列构成的肽的全部种类的肽。
8.如权利要求4?7中任一项所述的医药组合物，其为用于诱导对肿瘤的免疫应答的医药组合物。
9.如权利要求8所述的医药组合物，其为用于预防或治疗癌症的医药组合物。
10.如权利要求1?9中任一项所述的医药组合物，其特征在于，以非经口制剂的形态进行制剂。
11.如权利要求10所述的医药组合物，其特征在于，非经口制剂为注射剂。
12.—种冷冻干燥制剂，其是对权利要求1?11中任一项所述的医药组合物进行冷冻干燥而成的。
13.—种制造医药组合物的方法，所述医药组合物为权利要求11所述的注射剂，所述方法包含将I种或2种以上的肽溶解于含有碱性氨基酸和/或碱的水溶液的工序。
14.制造如权利要求12所述的冷冻干燥制剂的方法，其包含以下的工序: (1)将I种或2种以上的肽溶解于含有碱性氨基酸和/或碱的水溶液的工序；及 (2)将(I)中制备的肽溶液进行冷冻干燥的工序。
15.如权利要求14所述的制造冷冻干燥制剂的方法，其中，肽为各自由序列号1、2、3或4所示的氨基酸序列构成的肽的全部种类的肽。
16.一种试剂盒，其含有以下的(a)及(b): (a)权利要求12所述的冷冻干燥制剂'及 (b)(a)的冷冻干燥制剂的重构溶液。
17.—种试剂盒，其含有以下的(a)及(b): (a)对权利要求6或7所述的医药组合物进行冷冻干燥而成的冷冻干燥制剂；及 (b)含有由序列号5所示的氨基酸序列构成的肽的(a)的冷冻干燥制剂的重构溶液。
18.如权利要求16或17所述的试剂盒，其还含有以下的(c): (c)I种或2种以上的佐剂。
19.一种试剂盒，其含有以下的(a)及(b): (a)权利要求1?11中任一项所述的医药组合物；
(b) I种或2种以上的佐剂。
【文档编号】A61P35/00GK104168917SQ201380013184
【公开日】2014年11月26日 申请日期:2013年3月8日 优先权日:2012年3月9日
【发明者】冰见长夫, 渡边刚, 野上俊宏, 坂井雅美, 渡边雪乃 申请人:肿瘤疗法科学股份有限公司