一种塞北紫堇总生物碱提取物及其提取方法
【专利摘要】本发明公开了一种塞北紫堇总生物碱的提取物，由如下步骤提取包括，将塞北紫堇药材粉碎，并利用饱和的碱性乙醇或饱和的碱性甲醇回流提取，再浓缩、干燥得到塞北紫堇提取物；然后利用酸溶液溶解过滤，其滤液加碱溶液，调节溶液pH值至9-10，得到酸碱处理液；所述酸碱处理液中加入有机溶剂萃取，得到塞北紫堇总生物碱粗提物，然后再进行纯化得到塞北紫堇总生物碱提取物。采用本发明所述方法得到的所述的塞北紫堇总生物碱提取物中总生物碱的含量不低于50wt%，包括10-12wt%的原阿片碱，8-10wt%的α-比枯枯灵和10-15wt%的黄紫堇明碱，研究表明该生物碱提取物具用抗乳腺癌、卵巢癌、胃癌和肺癌的作用。
【专利说明】一种塞北紫堇总生物碱提取物及其提取方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种中草药的提取物及其提取方法，具体地说，涉及一种藏药材塞北紫堇的总生物碱提取物及其提取方法。
【背景技术】
[0002]藏药塞北紫堇为罂科紫堇属植物塞北紫堇(别名赛北紫堇)的干燥全草，分布在青海、西藏、甘肃、四川等地，为藏成药中的常用药，数据显示有25%的藏成药中含有该药材，其药材中所含成分主要是各种生物碱。藏医中多用紫堇属植物的全草入药，有些也用该植物的根、茎、叶等不同部位单独入药，主要用于治疗各种出血症状，发烧、流感、胃肠及肝胆的炎症性疾病，也可用于治疗跌打损伤或其它外伤等。目前，从该植物中分离得到的各类生物碱成分已经有许多，这些生物碱具有广泛的生物学活性，如抗氧化、消炎、抗心律失常和保护肝伤等等。此外，该植物中的生物碱能够抑制乙酰胆碱酯酶活性，可以改善记忆，所以还用来治疗老年痴呆症。李吉昌、王俊等发表的《云南紫堇属植物的研究进展》中对紫堇属植物目前的功效进行了概括，其中明确表明赛北紫堇全草入药，具有治疗疥癣疮毒、胃炎、胃溃疡、跌打损伤的功效。宋晓楠、吴训等发表的《赛北紫堇总生物碱抗炎作用研究》(湖北农业科学，2013，52 (6))对赛北紫堇总生物碱的抗炎性能进行了系统研究。
[0003]生物碱是存在于自然界中的一类含氮的碱性有机化合物，有似碱的性质，又称为赝碱，大多数有复杂的环状结构，氮素多包含在环内，有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。具有光学活性，有些不含碱性而来源于植物的含氮有机化合物，有明显的生物活性，也包括在生物碱的范围内。目前，已知的生物碱种类很多，约在一万种左右，有一些结构式还没有完全确定 ，它们的结构比较复杂，可分为59种类型。随着新的生物碱的发现，分类也将随之而更新，由于生物碱的种类很多，各具有不同的结构式，因此，彼此间的性质会有所差异。
[0004]现有技术中，提取植物中总生物碱的方法为有机溶剂萃取法和色谱法两种，色谱法中常用的为硅胶柱色谱、氧化铝柱色谱和离子交换树脂三种，上述方法虽然都可以制备总生物碱，但存在产物得率低，杂质含量高的问题，并且通过该方法直接得到的总生物碱的药用性能稍差，不能满足临床的研究及应用。
【发明内容】
[0005]本申请解决的技术问题是，现有技术中对于藏药塞北紫堇的研究仅集中于抗氧化、消炎、抗心律失常和保护肝伤，进而扩大其应用领域，提供一种具有抗癌作用的塞北紫堇总生物碱，并进一步提供了所述塞北紫堇总生物碱的提取方法。
[0006]为此，本发明采服的技术方案为:
[0007]一种塞北紫堇总生物碱的提取物，由如下步骤提取，
[0008]( I)将塞北紫堇药材粉碎，并利用50-95%体积浓度的饱和的碱性乙醇或饱和的碱性甲醇，在40-80°C下回流提取，得到塞北紫堇提取液，其中所述饱和的碱性乙醇或所述饱和的碱性甲醇的用量所述塞北紫堇药材质量的7-10倍；
[0009](2)将所述塞北紫堇提取液浓缩、干燥得到塞北紫堇提取物；
[0010](3)向所述塞北紫堇提取物中加入体积浓度为0.5-4%的酸溶液溶解，其中，酸溶液的加入量与所述塞北紫堇提取物的质量比为(1-6):1，过滤得到酸水液，向所述酸水液中加入体积浓度为4-15%的碱溶液，调节溶液pH值至9-10，得到酸碱处理液；
[0011](4)向所述酸碱处理液中加入有机溶剂萃取，回收所述有机溶剂并得到塞北紫堇总生物碱粗提物，其中有机溶剂每次的加入量为所述酸碱处理液体积的2-4倍体积量。
[0012](5)取硅胶乙酸乙酯湿法装柱，并将得到的所述塞北紫堇总生物碱粗提物加乙酸乙酯溶解后上样，并采用乙酸乙脂洗脱，干燥，得到所需的塞北紫堇总生物碱，其中用于溶解总生物碱粗提物的乙酸乙酯的用量为其质量的1-3倍量，硅胶用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的5-10倍，用于洗脱的乙酸乙酯的用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的50-100倍。
[0013]优选地，上述塞北紫堇总生物碱提取物，其提取步骤如下，
[0014](1)将塞北紫堇药材粉碎至5-50目，并利用50-95%体积浓度的饱和的碱性乙醇或饱和的碱性甲醇，在40-80°C下回流提取3-8次，得到塞北紫堇提取液，其中所述饱和的碱性乙醇或所述饱和的碱性甲醇的用量所述塞北紫堇药材质量的7-10倍；
[0015](2)将所述塞北紫堇提取液浓缩至清膏、干燥得到塞北紫堇提取物；
[0016](3)向所述塞北紫堇提取物中加入体积浓度为0.5-4%的酸溶液溶解过滤若干次，每次的溶解过滤步骤中，酸溶液的加入量与所述塞北紫堇提取物的质量比为(1-6):1，收集过滤得到所有滤液形成酸水液，向所述酸水液中加入体积浓度为4-15%的碱溶液，调节溶液PH值至9-10，得到酸碱处理液；
[0017](4)向所述酸碱处理液中加入有机溶剂萃取3-6次，回收所述有机溶剂并得到塞北紫堇总生物碱粗提物，其中有机溶剂每次的加入量为所述酸碱处理液体积的2-4倍体积量。
[0018](5)取硅胶乙酸乙酯湿法装柱，并将得到的所述塞北紫堇总生物碱粗提物加乙酸乙酯溶解后上样，并采用乙酸乙脂以每小时1-2个柱体积的洗脱流速进行洗脱，干燥，得到所需的塞北紫堇总生物碱，其中用于溶解总生物碱粗提物的乙酸乙酯的用量为其质量的1-3倍量，硅胶用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的5-10倍，用于洗脱的乙酸乙酯的用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的50-100倍，所述干燥步骤为洗脱液先减压回收乙酸乙酯，然后在60-70°C减压干燥。
[0019]优选地，上述塞北紫堇总生物碱提取物，其提取步骤中，所述酸溶液为盐酸、硫酸、磷酸或醋酸的水溶液；所述碱溶液为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠的水溶液；所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯。
[0020]优选地，上述塞北紫堇总生物碱提取物，其提取步骤如下，
[0021](1)将塞北紫堇药材粉碎至5-50目，并利用80%体积浓度的饱和的碱性乙醇在40-80°C下回流提取4次，每次提到3小时，得到塞北紫堇提取液，其中饱和的碱性乙醇的加入量为塞北紫堇药材质量的10倍；
[0022](2)将所述塞北紫堇提取液在60°C减压回收乙醇，再浓缩至清膏状、喷雾干燥得到塞北紫堇提取物；[0023](3)向所述塞北紫堇提取物中加入体积浓度为0.5%的盐酸溶液溶解过滤3次，其中，每次酸溶液的加入量与固体的质量比为5:1，合并3次过滤的滤液得到酸水液，向所述酸水液中加入体积浓度为10%的氢氧化钠水溶液,调节溶液pH值至10，得到酸碱处理液；
[0024](4)向所述酸碱处理液中加入有机溶剂萃取3-6次，回收所述有机溶剂并得到塞北紫堇总生物碱粗提物，其中有机溶剂每次的加入量为酸碱处理液体积的3倍体积量。
[0025](5)取硅胶乙酸乙酯湿法装柱，并将得到的所述塞北紫堇总生物碱粗提物加乙酸乙酯溶解后上样，并采用乙酸乙脂以每小时1-2个柱体积的洗脱流速进行洗脱，干燥，得到所需的塞北紫堇总生物碱，其中用于溶解总生物碱粗提物的乙酸乙酯的用量为其质量的1-3倍量，硅胶用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的10倍，乙酸乙酯洗脱剂的用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的80倍，所述干燥步骤为洗脱液先减压回收乙酸乙酯，然后在60-70°C减压干燥。
[0026]优选地，上述塞北紫堇总生物碱提取物中，所述塞北紫堇总生物碱提取物中总生物碱的含量不低于50wt%,包括(6-比枯枯灵、P-hydrystine、10_12wt%的原阿片碱，8-10wt%的a -比枯枯灵和10_15wt%的黄紫堇明碱。
[0027]优选地,上述塞北紫堇总生物碱中总生物碱包括(6-比枯枯灵、P-hydrystine、Ilwt%原阿片碱，9wt%a -比枯枯灵和13wt%黄紫堇明碱。
[0028]本发明还提供了一种塞北紫堇总生物碱的提取物的提取方法，包括，
[0029]( I)将塞北紫堇药材粉碎，并利用50-95%体积浓度的饱和的碱性乙醇或饱和的碱性甲醇，在40-80°C下回流 提取，得到塞北紫堇提取液，其中所述饱和的碱性乙醇或所述饱和的碱性甲醇的用量所述塞北紫堇药材质量的7-10倍；
[0030](2)将所述塞北紫堇提取液浓缩、干燥得到塞北紫堇提取物；
[0031](3)向所述塞北紫堇提取物中加入体积浓度为0.5-4%的酸溶液溶解，其中，酸溶液的加入量与所述塞北紫堇提取物的质量比为(1-6):1，过滤得到酸水液，向所述酸水液中加入体积浓度为4-15%的碱溶液，调节溶液pH值至9-10，得到酸碱处理液；
[0032](4)向所述酸碱处理液中加入有机溶剂萃取，回收所述有机溶剂并得到塞北紫堇总生物碱粗提物，其中有机溶剂每次的加入量为所述酸碱处理液体积的2-4倍体积量。
[0033](5)取硅胶乙酸乙酯湿法装柱，并将得到的所述塞北紫堇总生物碱粗提物加乙酸乙酯溶解后上样，并采用乙酸乙脂洗脱，干燥，得到所需的塞北紫堇总生物碱，其中用于溶解总生物碱粗提物的乙酸乙酯的用量为其质量的1-3倍量，硅胶用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的5-10倍，用于洗脱的乙酸乙酯的用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的50-100倍。
[0034]优选地，上述塞北紫堇总生物碱提取物的提取方法为，
[0035](I)将塞北紫堇药材粉碎至5-50目，并利用50-95%体积浓度的饱和的碱性乙醇或饱和的碱性甲醇，在40-80°C下回流提取3-8次，得到塞北紫堇提取液，其中所述饱和的碱性乙醇或所述饱和的碱性甲醇的用量所述塞北紫堇药材质量的7-10倍；
[0036](2)将所述塞北紫堇提取液浓缩至清膏、干燥得到塞北紫堇提取物；
[0037](3)向所述塞北紫堇提取物中加入体积浓度为0.5-4%的酸溶液溶解过滤若干次，每次的溶解过滤步骤中，酸溶液的加入量与所述塞北紫堇提取物的质量比为(1-6):1，收集过滤得到所有滤液形成酸水液，向所述酸水液中加入体积浓度为4-15%的碱溶液，调节溶液pH值至9-10，得到酸碱处理液；
[0038](4)向所述酸碱处理液中加入有机溶剂萃取3-6次，回收所述有机溶剂并得到塞北紫堇总生物碱粗提物，其中有机溶剂每次的加入量为所述酸碱处理液体积的2-4倍体积量。
[0039](5)取硅胶乙酸乙酯湿法装柱，并将得到的所述塞北紫堇总生物碱粗提物加乙酸乙酯溶解后上样，并采用乙酸乙脂以每小时1-2个柱体积的洗脱流速进行洗脱，干燥，得到所需的塞北紫堇总生物碱，其中用于溶解总生物碱粗提物的乙酸乙酯的用量为其质量的1-3倍量，硅胶用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的5-10倍，用于洗脱的乙酸乙酯的用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的50-100倍，所述干燥步骤为洗脱液先减压回收乙酸乙酯，然后在60-70°C减压干燥。
[0040]优选地，上述塞北紫堇总生物碱提取物的提取方法中，
[0041]所述酸溶液为盐酸、硫酸、磷酸或醋酸的水溶液；
[0042]所述碱溶液为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠的水溶液；
[0043]所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯。
[0044]优选地，上述塞北紫堇总生物碱提取物的提取方法中，
[0045](1)将塞北紫堇药材粉碎至5-50目，并利用80%体积浓度的饱和的碱性乙醇在40-80°C下回流提取4次，每次提到3小时，得到塞北紫堇提取液，其中饱和的碱性乙醇的加入量为塞北紫堇药材质量的10倍；
[0046](2)将所述塞北紫堇提取液在60°C减压回收乙醇，再浓缩至清膏状、喷雾干燥得到塞北紫堇提取物；
[0047](3)向所述塞北紫堇提取物中加入体积浓度为0.5%的盐酸溶液溶解过滤3次，其中，每次酸溶液的加入量与固体的质量比为5:1，合并3次过滤的滤液得到酸水液，向所述酸水液中加入体积浓度为10%的氢氧化钠水溶液,调节溶液pH值至10，得到酸碱处理液；
[0048](4)向所述酸碱处理液中加入有机溶剂萃取3-6次，回收所述有机溶剂并得到塞北紫堇总生物碱粗提物，其中有机溶剂每次的加入量为酸碱处理液体积的3倍体积量。
[0049](5)取硅胶乙酸乙酯湿法装柱，并将得到的所述塞北紫堇总生物碱粗提物加乙酸乙酯溶解后上样，并采用乙酸乙脂以每小时1-2个柱体积的洗脱流速进行洗脱，干燥，得到所需的塞北紫堇总生物碱，其中用于溶解总生物碱粗提物的乙酸乙酯的用量为其质量的1-3倍量，硅胶用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的10倍，乙酸乙酯洗脱剂的用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的80倍，所述干燥步骤为洗脱液先减压回收乙酸乙酯，然后在60-70°C减压干燥。
[0050]本发明中采用的50-95%体积浓度的饱和的碱性乙醇或饱和的碱性甲醇的制备方法为，先制备50-95%体积浓度的乙醇或甲醇水溶液，然后向该水溶液中加入氢氧化钠或氢氧化钾至饱和，得到所需的50-95%体积浓度的饱和的饱和的碱性乙醇或饱和的碱性甲醇。[0051 ] 与现有技术相比，本发明具有如下优点，
[0052](1)本发明提供的提取塞北紫堇总生物碱的方法中，采用50-95%的饱和的碱性乙醇和饱和的碱性甲醇，药材中的生物碱，尤其是原阿片碱，a-比枯枯灵和黄紫堇明碱在碱性条件下由生物碱盐转变为游离生物碱继而溶于乙醇或甲醇中被提取出来，再加酸水，使得游离生物碱成 盐溶于酸水中，从而与脂溶性成分分离，进一步控制酸碱处理液的pH为9-10，使得生物碱盐再游离出来，以有机溶剂萃取，从而得到本发明的总生物碱提取物，采用本发明所述方法得到的所述的塞北紫堇总生物碱提取物中总生物碱的含量不低于50wt%,包括10_12wt%的原阿片碱,8_10wt%的a -比枯枯灵和10_15wt%的黄紫堇明碱,研究表明该生物碱提取物具用抗乳腺癌、卵巢癌、胃癌和肺癌的作用。
[0053](2)本发明提供的提取塞北紫堇总生物碱的方法中，总生物碱粗提物最后以硅胶柱层析技术进行纯化，所用洗脱剂仅有乙酸乙酯，在得到目标产物的同时，溶剂可回收重复利用，操作简便，节约资源。
[0054](3)本发明提供的提取塞北紫堇总生物碱的方法中，有机溶剂的萃取次数为3-6次，不仅能够有效提取残留于母液中的总生物碱，还能尽量减少萃取次数增多带来的能源浪费。
[0055](4)本发明提供的提取塞北紫堇总生物碱的方法，总生物碱的产率高，总生物碱含量高，杂质少，可直接药用。同时操作简单，有机溶剂可以重复使用，有利于在生产上推广。
[0056]实验例
[0057]下述实验例用于证明本发明的技术效果。
[0058]以本发明实施例1中得到的塞北紫堇总生物碱提取物为例，详述如下，
[0059]塞北紫堇总生物碱提取物收率及含量的测定
[0060]取实施例1中的塞北紫堇总生物碱细粉约50mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入体积份数比100:1的氯仿-氨水混合溶液50ml,称定重量,超声30min,放置过夜,滤过，残渣加入体积份数比100:1的氯仿-氨水混合溶液50ml，振摇I小时，滤过，残渣使用体积份数比100:1的氯仿-氨水混`合溶液洗涤3次，每次15m，滤过；合并上述滤液及洗液，低温减压(40°C以下)蒸干，残渣加入饱和的碱性乙醇IOml使溶解，加入活性炭lg，振摇脱色lOmin，滤过，精密量取续滤液5ml至250ml锥形瓶中，精密加入硫酸滴定液(0.01mol/1)15ml、水15ml与甲基红指示液3滴，使用氢氧化钠滴定液(0.02mol/l)滴定至黄色。每Iml硫酸滴定液(0.01mol/1)相当于7.07mg的原阿片碱(C20H19N05)
[0061]
(V1- V2)- C- 7.07/0.01
总生物碱含量(mg/g)=--
[0062]Vl一加入的硫酸总体积，单位:ml
[0063]V2—中和氢氧化钠溶液消耗的硫酸体积，单位:ml
[0064]C一滴定用硫酸的浓度，单位:mol/L
[0065]7.07/0.01一Iml0.01mol/L的硫酸溶液相当于7.07mg的原阿片碱
[0066]
样品重量％祥品+总生物减含量
总生物碱收率{ %) = --—— X 100%
药材重量x药材中总生物碱含量
[0067]实施例1塞北紫堇总生物碱提取物中单体成分含量的测定
[0068]照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；
[0069]色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以含体积份数比0.2%冰醋酸和体积份数比0.5%三乙胺的水溶液(PH值为6.0)为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为285nm ;理论板数按原阿片碱峰计算应不低于3000 ；
[0070]
【权利要求】
1.一种塞北紫堇总生物碱的提取物，其特征在于，由如下步骤提取， (1)将塞北紫堇药材粉碎，并利用50-95%体积浓度的饱和的碱性乙醇或饱和的碱性甲醇，在40-80°C下回流提取，得到塞北紫堇提取液，其中所述饱和的碱性乙醇或所述饱和的碱性甲醇的用量所述塞北紫堇药材质量的7-10倍； (2)将所述塞北紫堇提取液浓缩、干燥得到塞北紫堇提取物； (3)向所述塞北紫堇提取物中加入体积浓度为0.5-4%的酸溶液溶解，其中，酸溶液的加入量与所述塞北紫堇提取物的质量比为(1-6):1，过滤得到酸水液，向所述酸水液中加入体积浓度为4-15%的碱溶液，调节溶液pH值至9-10，得到酸碱处理液； (4)向所述酸碱处理液中加入有机溶剂萃取，回收所述有机溶剂并得到塞北紫堇总生物碱粗提物，其中有机溶剂每次的加入量为所述酸碱处理液体积的2-4倍体积量。 (5)取硅胶乙酸乙酯湿法装柱，并将得到的所述塞北紫堇总生物碱粗提物加乙酸乙酯溶解后上样，并采用乙酸乙脂洗脱，干燥，得到所需的塞北紫堇总生物碱，其中用于溶解总生物碱粗提物的乙酸乙酯的用量为其质量的1-3倍量，硅胶用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的5-10倍，用于洗脱的乙酸乙酯的用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的 50-100 倍。
2.根据权利要求1所述的塞北紫堇总生物碱提取物，其特征在于，其提取步骤如下， (1)将塞北紫堇药材粉碎至5-50目，并利用50-95%体积浓度的饱和的碱性乙醇或饱和的碱性甲醇，在40-80°C下回流提取3-8次，得到塞北紫堇提取液，其中所述饱和的碱性乙醇或所述饱和的碱性甲醇的用量所述塞北紫堇药材质量的7-10倍； (2)将所述塞北紫堇提取液浓缩至清膏、干燥得到塞北紫堇提取物； (3)向所述塞北紫堇提取物中加入体积浓度为0.5-4%的酸溶液溶解过滤若干次，每次的溶解过滤步骤中，酸溶液的加入量与所述塞北紫堇提取物的质量比为(1-6):1，收集过滤得到所有滤液形成酸水液，向所述酸水液中加入体积浓度为4-15%的碱溶液，调节溶液pH值至9-10，得到酸碱处理液； (4)向所述酸碱处理液中加入有机溶剂萃取3-6次，回收所述有机溶剂并得到塞北紫堇总生物碱粗提物，其中有机溶剂每次的加入量为所述酸碱处理液体积的2-4倍体积量。 (5)取硅胶乙酸乙酯湿法装柱，并将得到的所述塞北紫堇总生物碱粗提物加乙酸乙酯溶解后上样，并采用乙酸乙脂以每小时1-2个柱体积的洗脱流速进行洗脱，干燥，得到所需的塞北紫堇总生物碱，其中用于溶解总生物碱粗提物的乙酸乙酯的用量为其质量的1-3倍量，硅胶用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的5-10倍，用于洗脱的乙酸乙酯的用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的50-100倍，所述干燥步骤为洗脱液先减压回收乙酸乙酯，然后在60-70°C减压干燥。
3.根据权利要求1或2所述的塞北紫堇总生物碱提取物，其特征在于， 所述酸溶液为盐酸、硫酸、磷酸或醋酸的水溶液； 所述碱溶液为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠的水溶液； 所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯。
4.根据权利要求2所述的塞北紫堇总生物碱提取物，其特征在于， (1)将塞北紫堇药材粉碎至5-50目，并利用80%体积浓度的饱和的碱性乙醇在40-80°C下回流提取4次，每次提到3小时，得到塞北紫堇提取液，其中饱和的碱性乙醇的加入量为塞北紫堇药材质量的10倍； (2)将所述塞北紫堇提取液在60°C减压回收乙醇，再浓缩至清膏状、喷雾干燥得到塞北紫堇提取物； (3)向所述塞北紫堇提取物中加入体积浓度为0.5%的盐酸溶液溶解过滤3次，其中，每次酸溶液的加入量与固体的质量比为5:1，合并3次过滤的滤液得到酸水液，向所述酸水液中加入体积浓度为10%的氢氧化钠水溶液，调节溶液pH值至10，得到酸碱处理液； (4)向所述酸碱处理液中加入有机溶剂萃取3-6次，回收所述有机溶剂并得到塞北紫堇总生物碱粗提物，其中有机溶剂每次的加入量为酸碱处理液体积的3倍体积量。 (5)取硅胶乙酸乙酯湿法装柱，并将得到的所述塞北紫堇总生物碱粗提物加乙酸乙酯溶解后上样，并采用乙酸乙脂以每小时1-2个柱体积的洗脱流速进行洗脱，干燥，得到所需的塞北紫堇总生物碱，其中用于溶解总生物碱粗提物的乙酸乙酯的用量为其质量的1-3倍量，硅胶用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的10倍，乙酸乙酯洗脱剂的用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的80倍，所述干燥步骤为洗脱液先减压回收乙酸乙酯，然后在60-70°C减压干燥。
5.根据权利要求1-4任一所述的塞北紫堇总生物碱提取物，其特征在于，所述塞北紫堇总生物碱提取物中总生物碱的含量不低于50wt%,包括0 -比枯枯灵、P -hydrystine、10-12wt%的原阿片碱，8_10wt%的a -比枯枯灵和10_15wt%的黄紫堇明碱。
6.一种塞北紫堇总生物碱的提取物的提取方法，其特征在于，包括， (1)将塞北紫堇药材粉碎，并利用50-95%体积浓度的饱和的碱性乙醇或饱和的碱性甲醇，在40-80°C下回流提取，得到塞北紫堇提取液，其中所述饱和的碱性乙醇或所述饱和的碱性甲醇的用量所述塞北紫堇药材质量的7-10倍； (2)将所述塞北紫堇提取液浓缩、干燥得到塞北紫堇提取物； (3)向所述塞北紫堇提取物中加入体积浓度为0.5-4%的酸溶液溶解，其中，酸溶液的加入量与所述塞北紫堇提取物的质量比为(1-6):1，过滤得到酸水液，向所述酸水液中加入体积浓度为4-15%的碱溶液，调节溶液pH值至9-10，得到酸碱处理液； (4)向所述酸碱处理液中加入有机溶剂萃取，回收所述有机溶剂并得到塞北紫堇总生物碱粗提物，其中有机溶剂每次的加入量为所述酸碱处理液体积的2-4倍体积量。 (5)取硅胶乙酸乙酯湿法装柱，并将得到的所述塞北紫堇总生物碱粗提物加乙酸乙酯溶解后上样，并采用乙酸乙脂洗脱，干燥，得到所需的塞北紫堇总生物碱，其中用于溶解总生物碱粗提物的乙酸乙酯的用量为其质量的1-3倍量，硅胶用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的5-10倍，用于洗脱的乙酸乙酯的用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的 50-100 倍。
7.根据权利要求6所述的塞北紫堇总生物碱提取物的提取方法，其特征在于， (1)将塞北紫堇药材粉碎至5-50目，并利用50-95%体积浓度的饱和的碱性乙醇或饱和的碱性甲醇，在40-80°C下回流提取3-8次，得到塞北紫堇提取液，其中所述饱和的碱性乙醇或所述饱和的碱性甲醇的用量所述塞北紫堇药材质量的7-10倍； (2)将所述 塞北紫堇提取液浓缩至清膏、干燥得到塞北紫堇提取物； (3)向所述塞北紫堇提取物中加入体积浓度为0.5-4%的酸溶液溶解过滤若干次，每次的溶解过滤步骤中，酸溶液的加入量与所述塞北紫堇提取物的质量比为(1-6):1，收集过滤得到所有滤液形成酸水液，向所述酸水液中加入体积浓度为4-15%的碱溶液，调节溶液pH值至9-10，得到酸碱处理液； (4)向所述酸碱处理液中加入有机溶剂萃取3-6次，回收所述有机溶剂并得到塞北紫堇总生物碱粗提物，其中有机溶剂每次的加入量为所述酸碱处理液体积的2-4倍体积量。 (5)取硅胶乙酸乙酯湿法装柱，并将得到的所述塞北紫堇总生物碱粗提物加乙酸乙酯溶解后上样，并采用乙酸乙脂以每小时1-2个柱体积的洗脱流速进行洗脱，干燥，得到所需的塞北紫堇总生物碱，其中用于溶解总生物碱粗提物的乙酸乙酯的用量为其质量的1-3倍量，硅胶用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的5-10倍，用于洗脱的乙酸乙酯的用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的50-100倍，所述干燥步骤为洗脱液先减压回收乙酸乙酯，然后在60-70°C减压干燥。
8.根据权利要求6或7所述的塞北紫堇总生物碱提取物的提取方法，其特征在于， 所述酸溶液为盐酸、硫酸、磷酸或醋酸的水溶液； 所述碱溶液为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠的水溶液； 所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯。
9.根据权利要求6所述的塞北紫堇总生物碱提取物的提取方法，其特征在于， (1)将塞北紫堇药材粉碎至5-50目，并利用80%体积浓度的饱和的碱性乙醇在40-80°C下回流提取4次，每次提到3小时，得到塞北紫堇提取液，其中饱和的碱性乙醇的加入量为塞北紫堇药材质量的10倍； (2)将所述塞北紫堇提取液在60°C减压回收乙醇，再浓缩至清膏状、喷雾干燥得到塞北紫堇提取物； (3)向所述塞北紫堇提取物中加入体积浓度为0.5%的盐酸溶液溶解过滤3次，其中，每次酸溶液的加入量与固体的质量比为5:1，合并3次过滤的滤液得到酸水液，向所述酸水液中加入体积浓度为10%的氢氧化钠水溶液，调节溶液pH值至10，得到酸碱处理液； (4)向所述酸碱处理液中加入有机溶剂萃取3-6次，回收所述有机溶剂并得到塞北紫堇总生物碱粗提物，其中有机溶剂每次的加入量为酸碱处理液体积的3倍体积量。 (5)取硅胶乙酸乙酯湿法装柱，并将得到的所述塞北紫堇总生物碱粗提物加乙酸乙酯溶解后上样，并采用乙酸乙脂以每小时1-2个柱体积的洗脱流速进行洗脱，干燥，得到所需的塞北紫堇总生物碱，其中用于溶解总生物碱粗提物的乙酸乙酯的用量为其质量的1-3倍量，硅胶用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的10倍，乙酸乙酯洗脱剂的用量为所述塞北紫堇总生物碱粗提物质量的80倍，所述干燥步骤为洗脱液先减压回收乙酸乙酯，然后在60-70°C减压干燥。
【文档编号】A61P35/00GK103610762SQ201310680353
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年12月12日 优先权日:2013年12月12日
【发明者】李怀平, 姬涛, 魏永义, 王朔 申请人:山东阿如拉药物研究开发有限公司