牛樟芝组合物及其用途
【专利摘要】本发明公开一种牛樟芝组合物，包含：牛樟芝菌丝体、橄榄萃取物、以及辅酶(Co?Q10)。牛樟芝菌丝体占60％～90％，橄榄萃取物占9％～39％，辅酶占1％～6％。
【专利说明】牛樟芝组合物及其用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种牛樟芝组合物及其用途，特别是涉及一种包含牛樟菌丝体、橄榄萃取物以及辅酶的牛樟芝组合物及其用途。
【背景技术】
[0002]现代人的饮食趋于精致化，许多高油、高糖、高盐、重口味饮食加上无运动习惯的生活方式常导致脂肪肝的产生。根据卫生署于2011年所进行的统计指出，台湾地区脂肪肝的盛行率高达60%，这是非常需要正视的国民健康议题。
[0003]然而，脂肪肝的成因十分复杂，一般认为分为因肥胖、胰岛素抗性或代谢症候群所引发的非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)、以及由酒精所导致的酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver disease,AFLD)。在临床研究中发现，因肝脏长期慢性发炎受损及过多的三酸甘油酯累积于肝脏是造成酒精性脂肪肝的主要原因。然而，许多常见的肝脏疾病都有可能由脂肪肝病变而转化形成，例如肝硬化、肝癌等疾病，故若能在病患罹患脂肪肝时就给予治疗或改善，则可避免疾病的恶化。
[0004]另外，在肝脏的保健与肝脏疾病的治疗研究中，牛樟芝一直被认为具有抗肿瘤与保肝的功效。牛樟芝又称为樟芝或牛樟菇，是一种生长于台湾特有牛樟木上的真菌。目前市面上常见利用牛樟芝子实体或其萃取物、牛樟芝菌丝体发酵过滤液等材料制成保健产品，其在于抗肿瘤及保护肝脏方面皆具有良好的功效，且在各种其它肝脏相关疾病的治疗与保健上具有极佳的潜力。因此，本发明是使用预定比例的牛樟芝组合物进行实验研究，希望研发具有改善脂肪肝功效的 组合物配方。
【发明内容】
[0005]鉴于现有技术的上述问题，本发明的一个目的是提供一种牛樟芝组合物，其包含牛樟芝菌丝体、橄榄萃取物以及辅酶(Co Q10)，牛樟芝菌丝体占60%~90%，橄榄萃取物占9%~39%，辅酶占1%~6%。
[0006]其中，本发明的牛樟芝组合物可为粉末状、颗粒状、或液体状。
[0007]另外，本发明的牛樟芝组合物可呈现为锭剂、胶囊、颗粒、丸剂、片剂、或粉剂的形式。
[0008]本发明的牛樟芝组合物可包含医药或食品上可接受的赋形剂，该赋形剂选自由调味剂、增甜剂、防腐剂、抗氧化剂、螯合剂、等渗透剂、润滑剂、锭剂佐剂、着色剂、保湿剂、结合剂以及医药可兼容的载剂所组成的组。
[0009]本发明的另一目的是提供一种牛樟芝组合物的用途。该用途包含降低血清中麸胺酸草乙酸转胺酶(GOT)与麸氨酸丙酮酸转胺酶(GPT)含量。另外，该用途还包含降低血清中低密度脂蛋白含量、以及提升该血清中高密度脂蛋白含量。该用途还包含抑制肝脏肥大现象。
[0010]本发明的牛樟芝组合物的用途包含改善肝功能、降低肝损伤、以及降低血脂。[0011]如上所述，根据本发明的牛樟芝组合物及其用途可具有一个或多个下述优点:
[0012](I)本发明的牛樟芝组合物包含预定比例的牛樟芝菌丝体、橄榄萃取物、以及辅酶，可有效降低肝脏受损后的血清G0T/GPT数值、以及提升肝脏抗氧化酵素的活性，其具有护肝的功效。
[0013](2)本发明的牛樟芝组合物包含预定比例的牛樟芝菌丝体、橄榄萃取物、以及辅酶，可有效降低血中胆固醇浓度、以及组织脂质过氧化现象，其具有改善脂肪肝的功效。
【专利附图】
【附图说明】
[0014]图1A及图1B为本发明的牛樟芝组合物对于小鼠经化学性肝损伤后的肝功能指数的影响。
[0015]图2A及图2B为本发明的牛樟芝组合物对于小鼠经化学性肝损伤后的肝脏酵素活性的影响。
[0016]图3为本发明的牛樟芝组合物对于小鼠因酒精性脂肪肝所造成的肝脏肥大现象的影响。
[0017]图4A至图4D为本发明的牛樟芝组合物对于患有酒精性脂肪肝的小鼠血中胆固醇的影响。
[0018]图5A及图5B 为本发明的牛樟芝组合物对于患有酒精性脂肪肝的小鼠肝脏中酵素活性的影响。
[0019]图6A至图6D为本发明的牛樟芝组合物对于患有酒精性脂肪肝的小鼠的肝脏、肾脏、心血管脂质过氧化现象的影响。
[0020]图7为小鼠肝脏组织病理切片的示意图。
[0021]图8A至图SE为本发明的牛樟芝组合物对于患有酒精性脂肪肝的小鼠肝脏的抗氧化能力的影响。
【具体实施方式】
[0022]本发明将通过下列较佳实施例及其附图进行进一步的详细说明。需注意的是，以下各实施例所揭示的实验数据，是为了便于解释本发明的技术特征，并非用于限制其可实施的方式。
[0023]本发明所公开的牛樟芝组合物可包含牛樟芝菌丝体、橄榄果萃取物、以及辅酶(CoQlO)。其中，牛樟芝菌丝体是直接刮取牛樟木上的菌丝体而获得，在研究中指出其具有护肝以及调节免疫能力的功效。而橄榄果萃取物是取自于橄榄果仁，其主要的活性成份为橄榄多酹(hydroxytryosol),具有抗氧化及降血脂的功效。另外，辅酶QlO为一种强效的油溶性抗氧化剂，目前常用于防止或治疗心脏疾病。而本发明的牛樟芝组合物中所包含的樟芝菌丝体、橄榄果萃取物、以及辅酶QlO分别占该组合物的60%~90%、9%~39%以及1%~6%，优选地，分别占70%~80%、19%~28%以及2%~5%。
[0024]为了了解并证实本发明的牛樟芝组合物对于改善肝功能、降低肝损伤、及降低血脂的用途，下文中将通过不同实施例的动物试验来进行详述。
[0025]首先，为评估本发明的牛樟芝组合物对于因四氯化碳(CC14)造成的化学性肝脏损伤后的护肝功效，在本实施例中，将Balb/c小鼠作为实验对象分为五组，分别为:(I)对照组；(2)四氯化碳；(3)四氯化碳+水飞蓟素(silymarin) (200mg/kg) ； (4)四氯化碳+本发明的牛樟芝组合物(30mg/kg);以及(5)四氯化碳+本发明的牛樟芝组合物(300mg/kg)。其中，四氯化碳是在第1、3、6周时以皮下注射的方式对小鼠予以化学性肝损伤破坏(其中四氯化碳溶于玉米油中，其给予小鼠的浓度为0.4μ l/100g BW)。而水飞蓟素以及本发明的牛樟芝组合物是在四氯化碳诱导肝损伤前一星期开始给试验样品。在本实施例中，此试验共进行8周，每周均进行尾动脉采血方式以测量血清中肝功能指数(GPT/GOT)，且采血前禁食24小时，并于第9周牺牲取得小鼠肝脏以检测肝脏酵素活性。
[0026]其中，水飞蓟素是目前已知用于修护肝脏细胞及增强肝脏功能的中草药，其对于肝炎与脂肪肝都具有一定的功效，在此作为正对照组。
[0027]上述结果如图1A、图1B、图2A及图2B所示。图1A及图1B为本发明的牛樟芝组合物对于小鼠经化学性肝损伤后的肝功能指数的影响。图2A及图2B为本发明的牛樟芝组合物对于小鼠经化学性肝损伤后的肝脏酵素活性的影响。
[0028]参照图1A和图1B，可发现各组别的血清中GPT/G0T含量均于第2周开始上升。而于第5~6周时，第2组的血清中的GPT/G0T含量明显大于其它组别，显示本实施例中所使用的四氯化碳确实可诱发化学性肝损伤而造成肝功能指数提升。而由图1A与图1B所示，在第6周时，第3~5组的血清中的GPT/G0T含量均有下降的趋势。然而，第5组的血清中GPT/G0T含量的变化与第3组(正对照组)相似，且于第8周时下降至接近未诱发化学性肝损伤时的GPT/G0T含量。此结果显示使用本发明的牛樟芝组合物确实可有效地降低血清中GPT/G0T 值。
[0029]另参照图2A及图2B，第3组~第5组的过氧化氢酶(catalase)的活性相较于第2组有增加趋势，且均提升至与第I组(对照组)相似的活性，而第3组~第5组的抗氧化酵素超氧歧化酶(superoxi de dismutase, SOD)活性相较于第2组均有显著的提升。
[0030]接下来，将描述本发明的牛樟芝组合物对于改善脂肪肝的功效。
[0031]在本实施例中，将8~10周龄的C57BL/6J(B6)雄鼠分为以下六组:(1)喂食流质正常饮食的对照组、⑵高胆固醇饮食(HCD)、(3)高胆固醇饮食+橄榄多酚(Hydroxytyrosol) (2.5mg/kg)、(4)高胆固醇饮食+橄榄多酹(5mg/kg)、(5)高胆固醇饮食+本发明的牛樟芝组合物(250mg/kg)、(6)高胆固醇饮食+本发明的牛樟芝组合物(500mg/kg)。本实施例是以上述组别分配喂食四周，并每日采血以进行血清检测，并于第4周牺牲小鼠进行该肝脏重量检测、肝脏酵素活性检测、过氧化指标检测、以及血管组织切片。
[0032]其中，高胆固醇饮食是在饮食中添加Lieber-DeCarli流质酒精饲料饮食以诱发小鼠产生酒精性脂肪肝。而橄榄多酚是目前已知具有抗氧化及降血脂功效的物质，在此用于作为正对照组。
[0033]由于在患有酒精性脂肪肝的小鼠中会产生肝脏肥大的现象，因此首先将经由上述实验流程所取得的小鼠肝脏重量与其本身体重进行比较，其结果如图3所示。图3为本发明的牛樟芝组合物对于小鼠因酒精性脂肪肝所造成的肝脏肥大现象的影响。在图3中可发现，相较于第2组，第5组与第6组(即喂食不同剂量的本发明的牛樟芝组合物)均可有效地抑制因酒精性脂肪肝所造成的肝脏肥大的现象。
[0034]接着，检测各组别中小鼠血液中胆固醇含量。小鼠在投与牛樟芝组合物后两小时后，每周以尾静脉采血方式检测血液中总胆固醇(Total cholesterol)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein, LDL)、高密度月旨蛋白(high-density lipoprotein, HDL)以及动脉硬化指数(Atherogenic index, Al)。其结果如图4A至图4D所示。图4A至图4D为本发明的牛樟芝组合物对于患有酒精性脂肪肝的小鼠血中胆固醇的影响。
[0035]参照图4A，相较于第2组，第5组与第6组均可降低血液中总胆固醇含量。而参照图4B和图4C，相较于第2组，第5组与第6组均可降低血液中LDL的含量、以及升高HDL的含量，且又以较高剂量的组别效果为佳。其中，本发明的牛樟芝组合物对于降低血液中LDL的含量的效果优于单纯喂食橄榄多酚的组别。
[0036]另参照图4D，相较于第2组，第6组(即喂食剂量为500mg/kg的本发明的牛樟芝组合物)可显著地降低动脉硬化指数，且其下降的幅度相似于喂食橄榄多酚的组别，显示本发明的牛樟芝组合物确实可有效地降低血中胆固醇含量。
[0037]接着，检测各组别小鼠肝脏中过氧化氢酶与抗氧化酵素超氧歧化酶的活性，肝脏中过氧化氢酶与抗氧化酵素超氧歧化酶的活性测定将于下文中详细描述。
[0038]在过氧化氢酶(catalase，CAT)的活性分析中，首先将小鼠的肝脏组织以生理食盐水洗净后，在漏斗上滴生理食盐水，并加入适量的磷酸盐缓冲溶液，接着打碎成为10%的均质衆(homogenate)。接着，以700x g离心10分钟后，取上层液，并以9:1的比例将上层液加入I %的Triton X-100以获得储备均质液(stock homogenate, S.H.)。将上述
S.H.加入适量的磷酸缓冲溶液进行稀释，并调整酸碱度至pH7以获得稀释均质液(dilutehomogenate, D.H.)。接着取2ml的D.H.加入Iml的H202 (0.03M)剧烈摇荡混均，以分光光度计于温控25°C、波长240nm的条件下测量吸光值(A)，每隔15秒测量一次，总共测量2次，并以下列公式计算反应速率常数K。 [0039]K= (2.3 / At) log (Al / A2)
[0040]Λ T:时间间隔(15秒钟)
[0041]Al:T1时段，样品的吸光值一空白吸光值。
[0042]A2:T2时段，样品的吸光值一空白吸光值。
[0043]其中，肝组织CAT活性，以每单位蛋白质所含反应速率K表示的(K per milligramof protein)。
[0044]在超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, S0D)活性分析中，先将小鼠的肝脏组织以冰生理食盐水(ice-cold saline)洗净，并在漏斗上滴干生理食盐水，接着加入适量的缓冲液(0.32Msucrose、I mM EDTAUOmM Tris-HCl, pH7.4)，再打碎以获得 10% 的均质液。将上述均质液以13600x g离心30分钟后,取50ml的上清液加入100ml的Tris-cacodylicacid buffer(pH8.2，50mM)，并加入纯水以使体积为980ml。接着加入20ml的邻苯三酚(pyrogallol) (0.2mM)后剧烈摇荡混均，以分光光度计于420nm测量吸光值(A)，每隔20秒测量一次，总共测量5分钟，并计算Λ A / AT。其中，单位时间内抑制邻苯三酚自动氧化速率达50%时的酵素量，定为一单位(U)，而肝组织SOD活性，以每单位蛋白质所含SOD单位量表不(U per milligram of protein)。其结果如图5所不。
[0045]图5A和图5B为本发明的牛樟芝组合物对于患有酒精性脂肪肝的小鼠肝脏中酵素活性的影响。参照图5A和图5B，相较于第2组，第5组与第6组均可促进肝脏中过氧化氢酶与抗氧化酵素超氧歧化酶的活性，其中，又以较高剂量的组别效果为佳。由上述结果显示，本发明的牛樟芝组合物确实可有效提升肝脏中过氧化氢酶与抗氧化酵素超氧歧化酶的活性。
[0046]其次，为了检测本发明的牛樟芝组合物对于患有酒精性脂肪肝的小鼠的肝脏、肾脏、心血管脂质过氧化现象的影响，在本实施例中亦分别检测肝脏、心肌、肾脏、以及血管中脂质过氧化压力指标，其检测方法将于下文中详细描述。
[0047]首先将小鼠的肝脏、肾脏及心脏组织以生理食盐水洗净，在漏斗上滴干生理食盐水后加入适量磷酸盐缓冲溶液，并打碎以获得10%的均质液。接着进行脂质过氧化指标(TBARS)测定，于此，由于脂质过氧化时，会产生MDA(malondialdehyde),而I分子的MDA会与 2 分子 TBA (thiobarbituric acid)结合形成粉红色的 TBARS (thiobarbituric acidreactivesubstance),因此在此经由测定TBARS生成量来检测脂质过氧化程度。
[0048]将经由上述方法均质后的组织加入Iml的20mg/ml BHT、2ml的1%TBA、以及Iml的
2.8%TCA，并于100°C水浴加热20分钟，冷却后测532nm吸光值。当532nm的吸光值愈高即表示MDA产物愈多，因此若本发明的牛樟芝组合物可降低此系统的吸光值则表示其具有抗氧化效果，其可藉由下列公式计算:
[0049]抑制率(%)=[对照组的吸光值-受试组的吸光值/对照组的吸光值]X 100%
[0050]其中，可将1，1,3,3-四甲氧基丙烷以IN的H2S04水解成MDA，再以同样的检测方法，测其吸光值以制得标准曲线。由上述标准曲线换算成MDA的产生量(mM)，若MDA的产生
量愈高，其抗氧化效果愈差。
[0051]其结果如图6所 示。图6A至图6D为本发明的牛樟芝组合物对于患有酒精性脂肪肝的小鼠的肝脏、肾脏、心血管脂质过氧化现象的影响。参照图6A至图6D，结果皆显示本发明的牛樟芝组合物可降低肝脏组织、心肌组织、肾脏组织、血管中的过氧化压力指标。
[0052]由上述结果可得知，本发明的牛樟芝组合物确实可减少因酒精性脂肪肝所造成的肝脏肥大；有效降低血中胆固醇含量(包含降低总胆固醇、低密度脂蛋白含量、以及增加高密度脂蛋白含量)；以及降低肝脏组织、肾脏组织、心肌组织、与血管中脂质过氧化的现象。因此，本发明的牛樟芝组合物具有改善脂肪肝的功效。
[0053]为评估不同剂量的本发明牛樟芝组合物对于酒精性脂肪肝的改善效果，在本发明的另一实施例中，先给予50只体重约20克的7周龄雄性C57BL/6J(B6)小鼠逐步增加的饲料中的酒精含量，以使实验动物适应含酒精的液态饲料。适应一周后，将上述小鼠随机分为对照组(control group, C) (n=10，在实验期间给予不含酒精的液态饲料)、以及液态酒精饲料组(alcohol group, ALC) (n=40,在实验期间给予Lieber-DeCarli流质酒精饲料,此液态饲料成分是依照小鼠所需总热量的36%碳水化合物以酒精作取代，建立酒精性脂肪肝动物模式)，先以脸颊采血取其血液，测量肝功能指数。
[0054]接着在实验期间，除对照组外，将液态酒精饲料组随机分成4组，分别为:酒精组(ALC)、低剂量(0.2g/kg)牛樟芝组合物组(ALC-L)、中剂量(0.6g/kg)牛樟芝组合物组(ALC-M)、高剂量(lg/kg)牛樟芝组合物组(ALC-H),并在实验期间(6周)，每天记录各组小鼠摄食量，其结果如表一所示。
[0055]表一
【权利要求】
1.一种牛樟芝组合物,其包含: 牛樟芝菌丝体、橄榄萃取物以及辅酶(Co QlO)，其中，牛樟芝菌丝体占60%~90%，橄榄萃取物占9%~39%，辅酶占1%~6%。
2.如权利要求1所述的牛樟芝组合物，其为粉末状、颗粒状或液体状。
3.如权利要求1所述的牛樟芝组合物，其是呈现锭剂、胶囊、颗粒、丸剂、片剂或粉剂的形式。
4.如权利要求1所述的牛樟芝组合物，其还包括医药或食品上可接受的赋形剂。
5.如权利要求4所述的牛樟芝组合物，其中，赋形剂选自于由调味剂、增甜剂、防腐剂、抗氧化剂、螯合剂、等渗透剂、润滑剂、锭剂佐剂、着色剂、保湿剂、结合剂以及医药可兼容的载剂组成的组。
6.如权利要求1所述的牛樟芝组合物的用途。
7.如权利要求6项所述的用途，还包括:降低血清中麸胺酸草乙酸转胺酶(GOT)与麸氨酸丙酮酸转胺酶(GPT)含量。
8.如权利要求6项所述的用途，还包括:降低血清中低密度脂蛋白含量、以及提升该血清中高密度脂蛋白含量。
9.如权利要求6项所述的用途，还包括:抑制肝脏肥大现象。
10.如权利要求 6项所述的用途，还包括:改善肝功能、降低肝损伤、降低血脂以及降低血胆固醇。
【文档编号】A61K36/07GK103800417SQ201310566120
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2013年11月13日 优先权日:2012年11月13日
【发明者】谢明哲, 谢荣鸿, 张庆月, 李书豪 申请人:宝腾生医股份有限公司