龙血竭在制药中的用途

龙血竭在制药中的用途
【专利摘要】本发明涉及龙血竭在制药中的新用途，属于中药领域。所述用途为龙血竭在制备促进神经干细胞增殖、分化和促进成体海马神经细胞分化的药物中的用途；以及龙血竭在制备预防或治疗抑郁症的药物中的用途。为了实现所述用途，龙血竭可经胃肠道或不经胃肠道途径施用，采用口服、皮下、肌肉内、静脉内、透皮、鼻内或直肠内给药。龙血竭与医学上可接受的药用辅料制成药物组合物，可制成各种类型的片剂、胶囊剂、滴丸、软胶囊、口服溶液、丸剂、散剂、颗粒剂、锭剂、煎膏剂、糖浆剂、流浸膏剂与浸膏剂、注射剂以及临床上适宜的其它剂型，制剂中含有必要的附加剂，附加剂为填充剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂或pH调节剂。
【专利说明】龙血竭在制药中的用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及龙血竭在制药中的新用途，尤其涉及龙血竭在制备促进神经干细胞增殖、分化和成体海马神经细胞分化的药物中的用途，以及在制备预防或治疗抑郁症的药物中的用途，属于中药领域。
【背景技术】
[0002]抑郁症是指一种强烈的悲伤、忧郁或绝望的状态，伴随着兴趣缺乏、睡眠紊乱、食欲和性欲减退、自我评价过低、内疚和认知障碍，严重者可出现自杀念头和行为。多数病例有反复发作的倾向，每次发作大多数可以缓解，部分可有残留症状或转为慢性。随着人们生活节奏加快，竞争压力加大，其发病率日益增加，据世界卫生组织推测截止到2020年抑郁症将成为导致劳动能力丧失和新生儿死亡的主要原因之一。抑郁症轻则影响工作和学习，重则使病人丧失劳动能力，直至发生自杀等恶性事件。目前，抑郁症的发病机理尚未完全阐明，主要观点认为是脑内单胺类神经递质代谢失常。
[0003]目前抑郁症的治疗主要 依靠药物，主要有单胺氧化酶抑制剂、三环类抗抑郁药、选择性去甲肾上腺素(NE)再摄取抑制剂、选择性五羟色胺(5-HT)再摄取抑制剂、NE能和5-HT能抗抑郁剂等，使用抗抑郁药并不能改善抑郁症患者的所有症状，且只对70%?80%的患者有效，抑郁症的治疗往往需要给药2?6周后才能显示临床疗效。一般认为抗抑郁药物是通过调节中枢神经递质来治疗抑郁症的，但是经典的中枢神经递质假说却不能解释抗抑郁药物的治疗延迟现象。许多研究证明，抑郁症可能由于成熟海马神经元再生下降从而引起海马结构可塑性改变导致，抗抑郁药可以是通过保护海马细胞神经元细胞受损、促进海马前体细胞的增殖以达到抗抑郁效应，这从细胞水平诠释了抑郁症的发病机制。因此，各种应激因素引起海马神经元再生降低可能是抑郁症的一个重要特征。
[0004]神经发生包括神经干细胞的增殖、迁移和分化等过程。研究发现，神经发生不仅存在于胚胎期，也持续存在于成年哺乳动物成长期，成年哺乳动物的神经发生主要在前脑的两个高密度的细胞分化区，即海马结构齿状回的颗粒下层(SGZ)和侧脑室的室管膜下区(SVZ)o神经元分为主神经元和非主神经元,主神经元在海马是锥体细胞,在齿状回是颗粒细胞。当海马发生神经发生时，祖细胞在海马齿状回的颗粒细胞下层生成，新生的细胞移行一段距离至颗粒细胞层，分化成颗粒细胞，成熟的神经元在分子层及多形层产生树突、轴突，形成突触联系，成为新的神经元，最终整合至海马功能的神经环路中，参与海马的各种功能活动，但是海马齿状回神经干细胞的增殖随年龄增长而减少。另外，体育锻炼以及丰富的学习环境等因素可以增加新生神经元的数量，但压力和抑郁等情况就会抑制新生神经元的生长。海马是大脑中的重要脑区，不仅与陈述性记忆有关，而且还涉及认知功能和位置导航，特别CA3区被认为与空间辨别性学习记忆活动的关系尤为密切。正因为成年海马齿状回存在神经发生，新生的神经元成熟后可以参与海马结构的学习和记忆，使得促神经发生的研究对治疗抑郁症具有十分重要的意义。
[0005]龙血竭为剑叶龙血树(Dracaena cochinchinensis S.C.Chen)的红色树脂,是一味名贵药材，至今已有1500多年的药用历史。龙血竭的主要化学成分为挥发油、黄酮、酚类、强心苷以及多糖等。大量的药理研究表明，龙血竭具有抗菌、抗氧化、抗病毒和抗血小板聚集等多种生物活性。目前有关于龙血竭的功能主治主要包括活血化瘀、消炎止痛、生肌敛疮以及降血糖等，在治疗缺血性心脏病、血瘀证、出血性疾病、外伤出血、妇科出血和糖尿病等方面有很好的疗效。但目前尚无龙血竭在促进神经系统发育方面及其作为促进神经干细胞增殖、分化以及成体海马神经细胞分化的药物用途，以及作为预防和治疗抑郁症方面的药物的相关报道。

【发明内容】

[0006]针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种龙血竭在制药中的新用途。
[0007]实际上，本发明目的之一在于提供一种龙血竭在制备促进神经干细胞增殖、促进神经干细胞分化和促进成体海马神经细胞分化的药物中的用途；本发明目的之二在于提供一种龙血竭在制备预防或治疗抑郁症的药物中的用途。
[0008]所述龙血竭为是指龙血竭原料药，可以从剑叶龙血树(Dracaenacochinchinensis
S.C.Chen)的红色树脂龙血竭中获得，使用任何本领域中熟知的技术生产，可由市售购得。
[0009]所述龙血竭可用于使其发挥作用的各种给药途径，包括经胃肠道或不经胃肠道途径施用。例如可用于口服、皮下、肌肉内、静脉内、透皮、鼻内、直肠内等方式施用。制药领域的普通技术人员可以根据针对疾病状况所选的龙血竭的特性、疾病的状态和其他相关情况，选择施用的适当形式和方式。
[0010]所述龙血竭可以单独或与可药用载体或赋形剂组合的药物组合形式施用，它们的比例和特性由其溶解性和化学 特性、所选的给药途径和标准的制药实际来决定。
[0011]所述的药物组合物包含所述龙血竭和药学上可接受的辅料，所述药学上可接受的辅料含有必要的附加剂，选自填充剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂或pH调节剂其中的一种或几种的组合。所述的药物组合物可制成片剂、胶囊剂、滴丸、软胶囊和口服溶液等。(一)片剂中含有必要的填充剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂，填充剂可选自淀粉、糊精、糖粉、乳糖、氧化镁、碳酸镁或甘露醇等其中的一种或几种的组合，粘合剂为水、乙醇、淀粉浆、糖浆或纤维素衍生物等，崩解剂常用的有干燥淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素等，润滑剂常用的有硬脂酸镁、滑石粉、硬脂酸、硼酸和苯甲酸钠等；片剂中龙血竭和辅料(即填充剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂)的质量比为2:8?8:2 ;片剂制备首先选用处方量的龙血竭和附加剂，混合均匀后制软材，过筛制粒，压片。(二)胶囊剂制备是将所述龙血竭粉碎成为细粉，干燥混匀后直接填充或加入一定填充辅料制成颗粒后填充。填充辅料包括稀释剂、润滑剂和崩解剂等，一般可选蔗糖、乳糖、微晶纤维素、改性淀粉、二氧化硅、硬脂酸镁、滑石粉等。(三)滴丸的制备采用滴制法，将所述龙血竭与基质混匀加热溶化后，或者将龙血竭加入溶剂溶解后与基质混匀加热溶化后，滴入不相混溶的冷却液中，收缩冷凝成丸。其中龙血竭与基质的质量比为1:9?4:6。其中常用基质选自聚乙二醇4000(或6000)、硬脂酸钠、甘油明胶、蜂蜡、硬脂酸、单硬脂酸甘油脂、淀粉、木糖醇及植物油等。(四)软胶囊剂是将所述龙血竭溶解、混悬或乳化在溶剂中，使其成为均匀一致的溶液后作为内容物填充在胶囊中，或者采用压制法制备；软胶囊的囊材组成主要是:胶料(一般为明胶、阿拉伯胶)、增塑剂(常用甘油、山梨醇)、附加剂(对羟基苯甲酸甲酯、色素等)及水；软胶囊中龙血竭所占的质量百分数为20 %?60 %。(五)口服溶液是将所述龙血竭的水溶液浓缩成适量浓度后，加入矫味剂、防腐剂等附加剂，搅匀后，经过过滤、灭菌、灌装即得。制成的制剂每日服用剂量为0.1g?10g，每日服用次数为I?5次。
[0012]目前，尚未见本发明所述龙血竭的毒性相关报道，所述龙血竭可以长期服用用于预防或治疗给药。
【专利附图】

【附图说明】
[0013]图1为实施例1中实验组和对照组中神经干细胞球平均直径比较数据曲线。
[0014]图2为实施例1中实验组和对照组中神经干细胞球分化比较图。
[0015]图3为实施例1中实验组和对照组中神经干细胞中NGF和BDNF的表达量变化比较。
[0016]图4为实施例2中短期实验组和短期对照组中大鼠海马齿状回区新生神经元生长迁移情况比较图。
[0017]图5为实施例2中长期实验组和长期对照组中大鼠海马齿状回区新生神经元生长迁移情况比较图。
[0018]图6为实施例3中短期实验组和短期对照组中大鼠海马齿状回区神经细胞增殖情况比较。
.[0019]图7为实施例3中长期实验组和长期对照组中大鼠海马齿状回区神经细胞增殖情况比较图。
[0020]图8为实施例4中正常对照组、模型组和实验组中大鼠海马齿状回区神经细胞再生情况比较图。
【具体实施方式】
[0021]为了充分说明本发明的特性以及实施本发明的方式，下面给出实施例。
[0022]以下所有实施例中龙血竭均为云南西双版纳雨林制药有限责任公司生产，批准文号:国药准字Z53021662。
[0023]实施例1龙血竭具有诱导神经干细胞增殖、分化的作用
[0024]神经干细胞是神经系统形成和发育的源泉，它可以分化成神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞，因此，本实施例研究龙血竭对神经干细胞增殖、分化的影响。
[0025]实验材料
[0026]DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)购自美国Gibco公司；EGF(上皮生长因子)、bFGF(成纤维细胞生长因子)、B27(无血清培养基添加因子)购自美国invitrogen公司；青霉素钠和硫酸链霉素购自北京拜尔迪公司；胰蛋白酶购自美国Promega公司；神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)抗体购自美国Cell signaling公司；其他常规试剂购自北京化学试剂公司。
[0027]实验方法
[0028]选取SD (Sprague-Dawley)大鼠的神经干细胞(neural stem cell, NSCs)为实验对象，考察低浓度龙血竭对NSCs增殖、分化的影响。[0029]NSCs的获取方法如下:将新生I天的SD大鼠的乳鼠埋入冰中冷冻至身体僵硬后进行解剖，分离海马组织，剥离血管后放入预冷(4°C)的D-Hank’ s溶液中，所述D-Hank’ s溶液配方如下:每升三蒸水中含有氯化钠Sg、磷酸二氢钠0.102g、氯化钾0.4g、磷酸二氢钾
0.06g和碳酸氢钠0.35g ;所述海马组织用D-Hank’s溶液洗2次，用弯头眼科手术剪将所述海马组织剪成直径约Imm的小块，用胰蛋白酶在37°C消化5分钟，用含有质量浓度10%FBS的DMEM/F12培养基终止消化并使用移液枪轻吹，制成细胞悬液；所述细胞悬液经400目筛网过滤后，在3000转离心3分钟，去除含胰蛋白酶的上清液，加入NSCs培养基重悬细胞，所述NSCs培养基配方如下:每500ml的DMEM/F12培养基中含有10 μ g的EGF、10 μ g的bFGF、质量浓度2%的B27、500U的青霉素钠和500U的硫酸链霉素，然后将重悬后的细胞种入直径90mm培养皿中(细胞密度为2.5 X IO5个/mL，2mL),置于细胞培养箱(37°C，体积浓度5%C02)中培养，每3?4天半量换液一次，7天传代一次，获得到实验用NSCs。
[0030]使用少量40%乙醇(体积浓度)溶解龙血竭制成龙血竭溶液,将所述龙血竭溶液加入NSCs培养液中，使龙血竭在培养液中的终浓度为20ng/mL。用所述含有龙血竭的培养液处理NSCs作为实验组，检测龙血竭对NSCs增殖、分化的影响、以及对神经生长因子(NGF )和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。并以相同试验条件下，将与所述龙血竭溶液相同体积量的40%乙醇(体积浓度)加入NSCs培养液中，用所述含有乙醇的培养液处理NSCs作为对照组。
[0031]实验结果与分析
[0032](I)龙血竭促进NSCs的增殖:在20ng/mL龙血竭条件下，实验组细胞NSCs的存活率为98.2±7.1%，对照组细胞NSCs的存活率为100±4.3%，相比无显著差别，因此可用20ng/mL的龙血竭对NSCs进行长期诱导培养。NSCs在诱导培养过程中会不断分裂增殖，聚集形成悬浮的神经干细胞球，随着细胞增殖，神经干细胞球的直径会不断的变大，通过测量神经干细胞球的直径研究NSCs的增殖情况。在加入龙血竭诱导培养的第0、24、48、72、96、120和144小时，分别使用倒置荧光显微镜对神经干细胞球进行观察和拍照，测量神经干细胞球平均直径的变化，结果显示，自48h后，在相同的培养时间点，实验组的神经干细胞球的平均直径显著大于对照组的神经干细胞球的平均直径，如图1所示，说明龙血竭能
对NSCs的增殖发挥一定的增强作用。(±SD为平均值土标准差，P值是显著性分析，经
单因素方差分析得到，下同)。
[0033](2)龙血竭促进NSCs的分化:NSCs分化的特征是不再悬浮生长，而是固定在培养皿表面，贴壁呈放射状广泛生长，神经干细胞球中伸出了一些类似“触角”状的细胞丝，即神经干细胞分化后的突触。如图2所示，实验组的神经干细胞球发生分化的细胞数量，以及神经干细胞分化的程度都要远远高于对照组。图2中A、B、C和D依次为在24、48、72和96小时，实验组中神经干细胞在倒置荧光显微镜(Olympus 1X71)下100倍的图片；E、F、G和H依次为在24、48、72和96小时，对照组中神经干细胞在倒置荧光显微镜下100倍的图片。
[0034](3)龙血竭增加NGF和BDNF的表达:NGF具有支持多种神经元发育、存活、调节神经表型、促进其生长、分化及维持其功能的作用，在神经元发育、轴突生长、递质合成以及细胞凋亡中均起着重要作用。NGF可以促进发育中的交感/感觉神经元的分化和成熟，维持成熟的交感神经元的正常功能。同时它还可以调节神经元之间的连接，稳定突触接触，防止突触可塑性变化。NGF对中枢和周围神经的损伤也具有保护和恢复的作用，能促进神经细胞的再生。BNDF能促进感觉神经元的存活和突起生长，刺激神经元轴突分支生长并进入中枢靶位，增强突触间递质的释放，加强突触联系。BNDF能诱导NSCs、神经元胚胎细胞分化，分化为多巴胺能神经元等，同时还可以促进神经元生长、发育，促进神经元修复和再生。实验组处理96h后的NSCs内NGF和BDNF的表达量都极显著高于对照组，龙血竭增加神经干细胞中NGF和BDNF的表达量(图3)。
[0035]上述实验结果显示，龙血竭能够促进体外神经干细胞增殖，促进神经干细胞分化为神经元和神经胶质细胞，提高神经生长因子和脑源性神经营养因子表达量。
[0036]实施例2龙血竭促进大鼠海马神经细胞的生长迁移
[0037]海马齿状回(DG)是大脑中一个在动物成年后仍存在神经发生的特殊区域，其神经发生包括神经增殖、存活和分化三方面，所述神经发生过程受到脑内信号的调控和神经发生环境的各种细胞因子的影响。DG的神经干细胞位于颗粒细胞层(GCL)内侧靠近门区的一个狭长板层，又称为亚颗粒细胞层(SGL)。DG神经发生时，新生的祖细胞在海马齿状回的颗粒细胞下层生成，生长迁移至颗粒细胞层，分化成颗粒细胞，成熟的神经元在分子层及多形层产生树突、轴突，形成突触联系，成为新的神经元，最终整合至海马功能的神经环路中，参与海马的各种功能活动。本实施例在大鼠脑中观察龙血竭对海马神经细胞的生长迁移的影响。
[0038]实验材料
[0039]神经前体细胞标志物Doublecortin (DCX)抗体购自美国Santa公司；其他常规试剂购自北京化学试剂公司。
[0040]实验方法
[0041]本实验选用SD大鼠24只，随机分为短期实验组、短期对照组、长期实验组和长期对照组4组。短期(14天)/长期(28天)实验组分别在SD大鼠饲料里添加龙血竭，龙血竭给药量为2g/kg体重/日，短期(14天)/长期(28天)对照组SD大鼠给予未添加龙血竭的SD大鼠饲料，短期/长期实验组给药完成后，与对应对照组别的SD大鼠同时给以戊巴比妥钠(50mg/kg)麻醉，取脑，冰冻切片机切片，脑切片收集于0.0lM磷酸钾盐缓冲生理盐水中备用。用免疫组织化学方法通过观察脑切片中海马齿状回区神经前体细胞标志物Doublecortin (DCX)阳性细胞的表达了解新生神经元迁移情况。
[0042]实验结果与分析
[0043](I)与短期对照组相比，短期实验组大鼠海马齿状回区DCX阳性细胞树突分叉多，伸展较长、排列整齐，绝大多数伸向海马齿状回颗粒细胞层(GCL);而短期对照组大鼠海马齿状回区DCX阳性细胞树突分叉明显少，伸展较短，伸展部位较少，且较凌乱，海马齿状回颗粒细胞层DCX阳性细胞数目较少，如图4所示，其中，A为在倒置荧光显微镜下放大10倍的短期对照组大鼠海马齿状回区新生神经元生长迁移情况，B为在倒置荧光显微镜下放大10倍的短期实验组大鼠海马齿状回区新生神经元生长迁移情况。
[0044](2)与长期对照组相比，长期实验组大鼠海马齿状回区DCX阳性细胞树突分叉较多，伸展的较长、排列整齐，绝大多数伸向GCL;而长期对照组大鼠海马齿状回区DCX阳性细胞树突分叉明显少，伸展较短，伸展部位较少，且较凌乱，海马齿状回颗粒细胞层DCX阳性细胞数目较少，伸向门区的突起数目较多、如图5所示，其中，A为在倒置荧光显微镜下放大10倍的长期对照组大鼠海马齿状回区新生神经元生长迁移情况，B为在倒置荧光显微镜下放大10倍的长期实验组大鼠海马齿状回区新生神经元生长迁移情况。
[0045]与短期实验组相比，长期实验组大鼠海马齿状回区DCX阳性细胞树突分叉更为明显，海马齿状回颗粒细胞层DCX阳性细胞数目更多，如图4和5所示。
[0046]上述实验结果显示，龙血竭可促进大部分新生神经细胞分化为成熟神经元，且新生神经元发生了异位迁移，说明短期、长期施用龙血竭对大鼠海马齿状回区神经元有促进生长迁移的作用。
[0047]实施例3龙血竭促进大鼠海马神经细胞增殖
[0048]本实施例用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记大鼠海马神经细胞的增殖情况，观察龙血竭对海马神经细胞增殖的影响。
[0049]实验材料
[0050]BrdU抗体购自美国Santa公司。其他常规试剂购自北京化学试剂公司。
[0051]实验方法
[0052]本实验选用SD大鼠24只，随机分为短期对照组、短期实验组、长期对照组和长期实验组4组。短期(14天)/长期(28天)实验组分别在SD大鼠饲料里添加龙血竭，龙血竭给药量为2g/kg体重/日，所述短期实验组给药13天时和长期实验组给药27天时，给大鼠腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)，用于标记大鼠海马神经细胞增殖情况，短期(14天)/长期(28天)对照组SD大鼠给予未添加龙血竭的SD大鼠饲料。短期/长期实验组给药完成后，与对应对照组别的SD大鼠同时给以戊巴比妥钠(50mg/kg)麻醉，取脑，冰冻切片机切片，脑切片收集于0.0lM磷酸钾盐缓冲生理盐水中备用。用免疫组织化学方法通过观察脑切片中大鼠海马齿状回区BrdU阳性细胞的表达了解新生大鼠海马神经细胞的增殖及存活情况。
[0053]实验结果与分析
[0054](I)与短期对照组相比，短期实验组大鼠海马齿状回区BrdU阳性细胞数量显著增力口，如图6所示，其中，A为在倒置荧光显微镜下放大10倍的短期对照组大鼠海马齿状回区神经细胞增殖情况，B为在倒置荧光显微镜下放大10倍的短期实验组大鼠海马齿状回区神经细胞增殖情况，白色箭头表示新生神经细胞。
[0055](2)与长期对照组相比，长期实验组大鼠海马齿状回区BrdU阳性细胞数量也显著增加，如图7所示，其中，A为在倒置荧光显微镜下放大10倍的长期对照组大鼠海马齿状回区神经细胞增殖情况，B为在倒置荧光显微镜下放大10倍的长期实验组大鼠海马齿状回区神经细胞增殖情况，白色箭头表示神经细胞。
[0056]上述实验结果显示，短期、长期施用龙血竭对大鼠海马齿状回区神经细胞具有促增殖、促分化为神经元的作用。
[0057]实施例4龙血竭对抑郁症大鼠模型的治疗作用
[0058]目前研究认为海马成年神经再生障碍及神经可塑性改变被认为是抑郁症发病的关键环节。鉴于龙血竭具有对 神经干细胞促增殖、分化以及对成体海马神经细胞的促分化作用，本实施例观察龙血竭对抑郁模型大鼠的治疗效果。
[0059]实验材料
[0060]同实施例4。其他,NeuN(神经元特异性核蛋白)抗体购自美国Millipore Chemicon公司，DA(多巴胺)、5_HT(五轻色胺)购自美国Sigma公司；色谱柱为Resolve TM C18, 5 u m,
3.9mm X150mm购自美国GRACE公司；高效液相色谱库伦电化学检测仪(美国ESA公司)。
[0061]实验方法
[0062]建立模型:本实验选用成年SD雄性大鼠30只，先适应性饲养(温度20_26°C，湿度40-70，正常鼠粮喂养)I周。实验前用旷场(Open-field)分析实验对每只大鼠进行行为学评分，选择各项行为学指标得分相近的大鼠，以消除系统误差。将实验动物随机分为3组:1)正常对照组一不进行应激实验，正常喂养(同适应性饲养);2)慢性应激抑郁模型组(简称模型组)一给予应激刺激实验，正常喂养，从实验第I天至结束连续28天；3)实验组一给予应激刺激实验，食物给予龙血竭，给药量为2g/kg体重/日，将龙血竭混在食物中给药，从实验第I天至结束连续28天。模型组和实验组大鼠进行27d慢性不可预见性应激处理，具体处理为:禁水24h，倾斜笼子45度，强迫冰水(4°C )游泳5min，潮湿24h，昼夜颠倒24h。实验过程中每种刺激至少给予2次，每天随机给予I种刺激，每次应激处理均在远离饲养间的另一实验室进行。
[0063]行为学检测:实 验期间，在第7、14、21和28天进行糖水消耗实验。糖水消耗实验指在实验中使大鼠接近清水或含有不同浓度蔗糖的糖水，测量其对每一种水的饮用情况。这个测试经常被用来衡量抑郁样行为，因为在啮齿动物中对糖水饮用的降低与其抑郁症的迹象密切相关。第28天行大鼠旷场分析实验，该行为学所用敞箱为立方形，高40cm，长、宽80cm，周壁、底面为黑色，底面由面积相等的25块方形区域组成，用白线划分。以大鼠穿越底面块数为水平运动得分，以直立次数为垂直运动得分。第28天进行观察，每只大鼠测定I次，每次测定时间为3min，计数水平活动和垂直活动得分。旷场分析实验是评价实验动物在新异环境中自主行为、探究行为与紧张度的一种常用方法。糖水消耗实验和旷场分析实验可综合评价药物对抑郁模型大鼠行为的治疗效果。
[0064]神经生物学指标检测:在神经细胞的增殖、分化和迁移方面，在所述给药期的27天时，给大鼠腹腔注射5-溴脱氧尿喃唳核苷(BrdU)50mg/kg,间隔2h,连续两次。实验结束后，对相应组别大鼠给以戊巴比妥钠(50mg/kg)麻醉后，取半脑，冰冻切片机切片，脑切片收集于0.0lM磷酸钾盐缓冲生理盐水中备用。用免疫组织化学方法观察大鼠脑切片中脑海马齿状回区BrdU/NeuN阳性细胞的表达，了解新生神经细胞的增殖、分化及存活情况。另外的半脑在冰上分离大脑皮质，所述大脑皮质称重后加入500 ii L 0.lmol/L的HCIO4，所述HCIO4中含预冷(4°C)的0.3mmoI/L的Na2EDTA和0.05mmoI/L的无水亚硫酸钠，超声匀浆，加入60ii L的DHBA (二羟基苯甲酸)0.5mg/L, 12000r/min高速离心20min，取上清，过膜(孔径
0.22 ii m)，取10 ii L进样高效液相色谱库伦电化学检测仪检测单胺类神经递质DA和5-HT含量，观察大鼠脑皮层单胺类神经递质的变化。
[0065]实验结果与分析
[0066](I)龙血竭可以显著的促进抑郁模型大鼠的蔗糖消耗水平
[0067]在整个实验期间的第7、14、21和28d，大鼠的糖水消耗水平情况如表I所示，结果显示:模型组的糖水消耗水平均显著低于正常对照组(P〈0.05);实验组在第14d与正常对照组相当，并在之后各时间点稳步增加；与模型组相比，实验组在第14d呈显著性增加(P〈0.05)，在第21和28d呈极显著性增加(P〈0.01)。实验结果说明龙血竭可以显著促进抑郁大鼠的糖水消耗水平。[0068]表I各组大鼠糖水消耗量的变化d±SD，n=10)
[0069]
【权利要求】
1.一种龙血竭在制药中的用途，其特征在于:所述龙血竭在制备促进神经干细胞增殖、促进神经干细胞分化和促进成体海马神经细胞分化的药物中的用途。
2.—种龙血竭在制药中的用途，其特征在于:所述龙血竭在制备预防或治疗抑郁症的药物中的用途。
3.根据权利要求1或2所述的一种龙血竭在制药中的用途，其特征在于:龙血竭经胃肠道或不经胃肠道途径施用，通过口服、皮下、肌肉内、静脉内、透皮、鼻内或直肠内给药。
4.根据权利要求1或2所述的一种龙血竭在制药中的用途，其特征在于:所述龙血竭与医学上可接受的药用辅料制成的药物组合物:片剂、胶囊剂、滴丸、软胶囊、口服溶液、丸齐U、散剂、颗粒剂、锭剂、煎膏剂、糖浆剂、流浸膏剂与浸膏剂、注射剂以及临床上适宜的其它剂型。
5.根据权利要求1或2所述的一种龙血竭在制药中的用途，其特征在于:所述龙血竭与医学上可接受的药用辅料制成的制剂中含有必要的附加剂，所述附加剂为填充剂、润湿剂、粘合剂、崩.解剂、润滑剂或PH调节剂。
【文档编号】A61K36/896GK103432359SQ201310379602
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年8月27日 优先权日:2013年8月27日
【发明者】冉媛媛, 庆宏, 王冉, 贾秋添, 唐博, 李渃敏, 孙珍珍, 徐妍, 郑达, 刘可夫, 邓玉林 申请人:北京理工大学