制备具有强抗氧化作用的燕窝提取液的方法
【专利摘要】本发明涉及一种制备燕窝提取液的方法，包括向燕窝原料加入蛋白酶水解燕窝水溶性蛋白质，其中所述蛋白酶以约4500U-40,000U/100g燕窝水溶性蛋白质的量添加。本发明还涉及根据本发明的方法获得的燕窝提取液在制备化妆品或保健品中的用途。
【专利说明】制备具有强抗氧化作用的燕窝提取液的方法
【技术领域】
[0001]本发明一般地涉及一种制备具有强抗氧化作用的燕窝提取液的方法，以及所获得的燕窝提取液在制备化妆品和/或保健品中的用途。
【背景技术】
[0002]燕窝是由雨燕科(Apodidae)金丝燕属(Collocalia)的多种鸟类分泌出的唾液或唾液与其绒羽混合凝结于悬崖峭壁上而筑成的巢窝。主产地为印度尼西亚、马来西亚、越南等，据《本草拾遗》记载:"燕窝甘淡平，大养肺阴，化痰止咳，补而能清，为调理虚劳之圣药，一切病之由于肺虚，而不能肃清下行者，用此皆可治之。"中医认为燕窝具有养阴润燥、益气补中的功效。用于治疗虚损、咳痰喘、咯血和久痢等疾病，尤其适宜于体质虚弱，营养不良，久痢久疟，痰多咳嗽，老年慢性支气管炎、支气管扩张、肺气肿、肺结核、咯血、吐血和胃痛的病人食用。现代医学发现，燕窝可促进免疫功能，有延缓人体衰老，延年益寿的功效。
[0003]传统上评价燕窝的贵贱与好坏之分在于五大指标:产地、涨发程度、完整程度、清洁品质以及口感。传统以为，燕窝以越南会安所产质优，商品名为“会安燕”。在山洞和峭壁上采摘到的燕窝称为“洞燕”，采摘燕洞不仅人身极其危险，也是对自然资源的掠夺。因此，利用燕屋培育燕窝应运而生。燕屋利用人工建筑房屋内的木板及墙壁，以实物或其他方法吸引燕子聚居，然后采收到的燕窝叫“屋燕”。现在商品多为“屋燕”，因清洁爽滑、洁白细腻，在商品上多称为“白燕”。另有采收周期较长，燕窝带金黄色的称为“黄燕”，主产地为印度尼西亚、马来西亚。“红燕”分为“洞红燕”和“屋红燕”两种。洞红燕可能因外界环境影响，外观犹如岩石壁渗出红色液体渗润，而导致巢色从粘贴于岩石壁的一边渐变成血红色。屋红燕为一位赴德留学的印度尼西亚医生于九十年代所发明，具体生成原因不明。因与燕洞环境极为相似，故可能同受外界环境影响。色泽较洞红燕均匀，颜色也比洞红燕为深。由于红燕产量少，商品价格也比较贵，洞红燕主产于泰国，而屋红燕则主产于印度尼西亚。
.[0004]近年来，燕窝因为被认为对皮肤具有抗衰老功效而备受女士们青睐。燕窝对改善皮肤的功效主要源于中医的理论。清代著名医家张璐在《本经逢源》中描述燕窝「能使金、水相生，肾气上滋于肺，而胃气亦得以安」。基于《黄帝内经》中「肺主皮毛」的记载，可以想见燕窝对改善皮肤有一定的功效。从成分看，燕窝中含有大量水溶性蛋白质，可以占整个燕窝的40-60%。此为,燕窝包含了所有的必需氨基酸,而氨基酸中又以有抗氧化作用的酪氨酸(例如10.1%)和苯丙氨酸(例如6.8%)为主。现代医学认为，人体内自由基具有强氧化性，可损害组织和细胞，是引致慢性疾病及衰老效应的重要因素。自由基或游离基是指化合物的分子在光热等外界条件下共价键发生均裂成的不成对电子的原子或基团。自由基极易发生反应，具有强氧化性，可损害组织和细胞，进而引起慢性疾病及衰老效应。所以长期以来，身体内自由基过量，一直被认为是导致退化性疾病和癌症的原因。故此，凡带有驱除自由基、具有抗氧化功能的食品或药物均具有抗衰老功能。
[0005]目前，燕窝酶解提取技术均采用基于高浓度酶的方法。CN1085046A公开了一种高浓度蛋白酶的水解加工燕窝制品的方法，其采用高达湿燕窝的0.02-5.0%的蛋白水解酶。CN101084873A公开了一种化妆品用燕窝提取物的制备工艺，其利用超声波粉碎和利用高达燕窝干重的0.25-2%的碱性蛋白酶进行水解。CN10284017A公开了一种利用酶解与膜滤耦合技术连续制备窄分子量分布的燕窝提取物的方法，其中蛋白酶与燕窝质量浓度比为1:100-1:50 (按重量计约1_2%)。CN102102119A公开了一种采用酶解与酸水解从燕窝中水解提取得到纳米寡肽的方法，其中所采用的酶含量高达例如燕窝干重的1-3重量％的木瓜蛋白酶。
[0006]高浓度酶的使用增加了成本。此外，当将最终提取物进一步用作化妆品或保健品的原料时，存在于提取物中的高含量的经灭活的酶也将不利地影响最终化妆品或保健品的性质。
[0007]本申请的发明人意想不到地发现，采用低浓度的蛋白酶进行燕窝酶解更加有效地水解燕窝水溶性蛋白质。
【发明内容】
[0008]本发明的一个目的在于提供一种制备具有强抗氧化活性的燕窝提取液的新方法。
[0009]在一个实施方案中，本发明涉及一种制备燕窝提取液的方法，包括采用低浓度的蛋白酶水解燕窝中的水溶性蛋白质以获得具有增强的抗氧化性的燕窝提取物的方法。
[0010]在一方面，本发明涉及一种制备燕窝提取液的方法，包括向燕窝原料加入蛋白酶水解燕窝水溶性蛋白质，其中所述蛋白酶以约4500U-40，000U/100g燕窝水溶性蛋白质的量添加。在进一步的方面，所述蛋白酶具有约5万-10万U/g的酶活，并且所述蛋白酶与所述燕窝水溶性蛋白质的重量比为1:450 - 1:1100。在更进一步的方面，所述蛋白酶与所述燕窝水溶性蛋白质的重量比为约1:500 -约1:1000。在仍更进一步的方面，所述蛋白酶与所述燕窝水溶性蛋白质的重量比为约1:600 -约1:900、约1:700 -约1:800、或约1:750。
[0011]在一方面，本发明.的方法包括水解燕窝水溶性蛋白质约1-4小时。在进一步的方面，本发明的方法包括水解燕窝水溶性蛋白质约2-3小时。
[0012]在一方面，可用于本发明的方法的蛋白酶选自胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或其任何组合。在进一步的一方面，所述蛋白酶为胰蛋白酶。在仍进一步的一方面，所述蛋白酶为食用胰蛋白酶。
[0013]在一方面，本发明的方法包括在进行水解水溶性蛋白质之前，水热预处理燕窝原料。
[0014]在一方面，本发明的方法在进行水解水溶性蛋白质之后，高温加热(例如煮沸)水解液一段时间以灭活酶。在进一步的方面，本发明的方法包括高温加热水解液10分钟。
[0015]在一方面，本发明的方法包括在灭活酶的步骤后任选地向水解液加入稳定剂，例
如丙二醇。
[0016]在一方面，本发明的方法还包括过滤水解液。
[0017]在一方面，在本发明的方法中，燕窝中的水溶性蛋白质被分解为分子量小于26kDa的小分子蛋白质。
[0018]在一个实施方案中,本发明提供一种根据本发明的方法获得的燕窝提取液。
[0019]在一个实施方案中，本发明涉及本发明的燕窝提取液在制备皮肤美白化妆品中的用途。[0020]在一个实施方案中，本发明涉及本发明的燕窝提取液在制备延缓衰老的保健品中的用途。
【专利附图】
【附图说明】
[0021]以下将结合附图，对本发明进行进一步的详细说明。本领域技术人员将理解，附图以及以下详细描述旨在仅为示例性的，不应以任何方式解释为对本发明范围的限制。
[0022]图1显示了采用不同浓度的食用胰蛋白酶水解燕窝水溶性蛋白质在酶解前后的蛋白质分子量分布。
[0023]图2显示了采用不同浓度的食用胰蛋白酶水解燕窝水溶性蛋白质获得的蛋白质提取率。
[0024]图3显示了采用不同浓度的食用胰蛋白酶水解燕窝水溶性蛋白质获得的燕窝提取液中游离唾液酸的含量。
[0025]图4显示了采用不同浓度的食用胰蛋白酶水解燕窝水溶性蛋白质获得的燕窝提取液的抗氧化能力。
[0026]图5显示了以1:1000的食用胰蛋白酶与燕 窝水溶性蛋白质的重量比的5万U/g的食用胰蛋白酶水解各种燕窝的结果。
[0027]图6显示了以不同蛋白酶水解印尼白燕条的结果。
[0028]图7显示了采用不同浓度的TROLOX建立的TROLOX标准曲线。
[0029]图8显示了燕窝提取液在移除小分子蛋白质前后的抗氧化能力的比较。
【具体实施方式】
[0030]除非本文中另外定义，本文所使用的所有技术和科学术语具有本领域普通技术人员通常所理解的含义。尽管与本文所描述的方法和材料相似或等价的那些方法和材料也可用于本发明的实践中，但是优选的方法和材料还是在本文中加以描述。此外，如本文所使用，数值范围包括定义该范围的数字。本发明的小标题仅仅为了阐述的目的，而不旨在限制本发明的范围。
[0031]如本文所使用，除非上下文明确指出，所有百分比都按重量计算。
[0032]在一个实施方案中，本发明涉及一种制备燕窝提取液的方法，包括采用低浓度的蛋白酶水解燕窝中的水溶性蛋白质以获得具有增强的抗氧化性的燕窝提取物的方法。更具体而言，本发明的方法包括下列步骤:水热预处理燕窝原料；向经水热预处理的燕窝原料添加蛋白酶以水解燕窝原料中的水溶性蛋白质，所述蛋白酶以约4500U-40，000U/100g燕窝水溶性蛋白质的量添加；高温加热所得到的水解液以灭活蛋白酶；以及任选地，向经酶灭活的水解液添加稳定剂；和过滤水解液以得到具有增强的抗氧化性的燕窝提取物。
[0033]燕窝原料
[0034]可用于本发明的燕窝原料可以是市售及天然采收的各类燕窝，例如但不限于印尼白燕盖、印尼白燕条和泰国白燕条等。
[0035]燕窝原料的水热预处理
[0036]燕窝原料可以采用本领域常规的预处理方法进行预处理。对于毛燕，可以先经反复漂洗除去表面污物以及表面附着的绒羽。对于经处理过的半净燕窝，则可直接加入水进行浸泡膨胀。在一方面，本发明的方法包括在进行水解水溶性蛋白质之前，水热预处理燕窝原料以释放燕窝水溶性蛋白质。在进一步的方面，水热预处理包括向燕窝原料加入水浸泡足以使燕窝原料膨胀的一段时间，例如至少3小时，然后过滤除去水，并在85摄氏度或以上的温度水煮经膨胀的燕窝一段时间，例如至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时并可达10小时。在一个示例性实施方式中，每千克燕窝原料以约80-200升的水浸泡膨胀至少三个小时，之后过滤除去水，并将经膨胀的燕窝洗净，加入约20-40升的水，然后加热至约85摄氏度或以上，炖煮至少约6个小时。冷却至室温后，以考马斯亮蓝法测量所获得的水煮液中的水溶性蛋白质含量。
[0037]燕窝水解
[0038]燕窝中含有大量水溶性蛋白质，可以占整个燕窝的约40-60重量％。本申请的发明人意想不到地发现，采用低浓度的蛋白酶进行燕窝酶解更加有效地水解燕窝水溶性蛋白质。在一个实施方式中，所述蛋白酶以约4500U-40，000U/100g燕窝水溶性蛋白质的量添加，例如约5000U-35，000U/100g燕窝水溶性蛋白质、约6000U-32，500U/100g燕窝水溶性蛋白质、例如约7500U-30，000U/100g燕窝水溶性蛋白质、约10，000U-25, 000U/100g燕窝水溶性蛋白质、约15，000U-20，000U/100g燕窝水溶性蛋白质或约17，500U/100g燕窝水溶性蛋白质。
[0039]在一个实施方式中，所述蛋白酶具有5万-10万U/g的酶活，所添加的蛋白酶与燕窝水溶性蛋白质的重量比为约1:450 -约1:1100，例如约1:500 -约1:1000、约1:550 -约 1:950、约 1:600 -约 1:900、约 1:650 -约 1:850、约 1:700 -约 1:800、或约 1:750。
[0040]可用于本发明的蛋白酶包括但不限于胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或其任何组合。在一个实施方式中，蛋白酶可以是胰蛋白酶，更具体地，可以是食用胰蛋白酶。在一个实施方式中，所采用的蛋白酶具有酶活范围在约5万-10万U/g的范围，例如约5万U/g、约6万U/g、约7万U/g、约8万U/g、约9万U/g、和约10万U/g。
.[0041]在一个实施方式中，所添加的蛋白酶(例如胰蛋白酶，诸如食用胰蛋白酶)与燕窝水溶性蛋白质的重量比为约1:450 -约1:1100，例如约1:500 -约1:1000、约1:550 -约1:950、约 1:600 -约 1:900、约 1:650 -约 1:850、约 1:700 -约 1:800、或约 1:750，其中所述蛋白酶具有约5万-10万U/g的酶活。在一个实施方式中，所添加的蛋白酶(例如胰蛋白酶，诸如食用胰蛋白酶)与燕窝水溶性蛋白质的重量比为约1:450 -约1:1100，例如约 1:500 -约 1:1000、约 1:550 -约 1:950、约 1:600 -约 1:900、约 1:650 -约 1:850、约1:700 -约1:800、或约1:750，其中所述蛋白酶具有约6万的酶活。在一个实施方式中，所添加的蛋白酶(例如胰蛋白酶，诸如食用胰蛋白酶)与燕窝水溶性蛋白质的重量比为约1:450 -约 1:1100，例如约 1:500 -约 1:1000、约 1:550 -约 1:950、约 1:600 -约 1:900、约1:650 -约1:850、约1:700 -约1:800、或约1:750，其中所述蛋白酶具有约7万U/g的酶活。在一个实施方式中，所添加的蛋白酶(例如胰蛋白酶，诸如食用胰蛋白酶)与燕窝水溶性蛋白质的重量比为约1:450 -约1:1100，例如约1:500 -约1:1000、约1:550 -约1:950、约1:600 -约1:900、约1:650 -约1:850、约1:700 -约1:800、或约1:750，其中所述蛋白酶具有约8万U/g的酶活。在一个实施方式中，所添加的蛋白酶(例如胰蛋白酶，诸如食用胰蛋白酶)与燕窝水溶性蛋白质的重量比为约1:450 -约1:1100，例如约1:500 -约1:1000、约 1:550 -约 1:950、约 1:600 -约 1:900、约 1:650 -约 1:850、约 1:700 -约 1:800、或约1:750，其中所述蛋白酶具有约9万U/g的酶活。
[0042]在一个实施方式中，水解步骤可以在所使用的蛋白酶具有活性的温度范围(例如约25 - 37°C)内进行一段时间，例如1-4小时。例如，水解可以在37°C采用胰蛋白酶(例如食用胰蛋白酶)进行2小时。
[0043]在水解结束后，高温加热水解液以灭活蛋白酶的活性一段时间，例如煮沸(即在约100°C)约5-20分钟，诸如约10-15分钟，诸如约10分钟。在可选的实施方式中，蛋白酶的活性也可以采取加酸终止。例如添加约IM的磷酸。
[0044]水解液处理
[0045]在一个实施方式中，可以任选地向水解液加入稳定剂来稳定所获得的水解液。可用于本发明的稳定剂包括但不限于丙二醇。
[0046]在一个实施方式中，本发明的方法进一步包括过滤水解液，以除去不溶性残渣等杂质。可用于本发明的过滤方式包括但不限于滤纸过滤或离心过滤法。
[0047]在一个实施方案中，根据本发明的方法获得的燕窝提取液可以作为原料用于制备皮肤美白化妆品。化妆品可以配制为霜剂、乳剂、喷雾剂、洗剂、粉剂、膏剂等形式。
[0048]在一个实施方案中，根据本发明的方法获得的燕窝提取液可以作为原料用于制备延缓衰老的保健品。保健品可以配制为粉剂、口服液、丸剂等形式。
[0049]令人意想不到的，相比于常规方法获得的燕窝提取液，根据本发明的采用低浓度的蛋白酶对燕窝中的水溶性蛋白进行酶解的方法获得的燕窝水解液包含显著增加量的分子量在26KD以下的小分子蛋白，从而具有增强的抗氧化活性。更具体而言，与采用高浓度酶的常规方法获得的燕窝提取液 相比，本发明的燕窝提取液中所述小分子蛋白质的含量增加可增加数倍，可达20倍或以上，而抗氧化能力提高可达4倍或以上。更加令人意想不到的是，与采用高浓度酶的常规方法获得的燕窝提取液相比，本发明的燕窝提取液中游离唾液酸含量的含量增加可达3倍或以上。
[0050]实施例
[0051]下面通过实施例进一步说明本发明。然而，本发明的范围不局限于这些实施例。除非特别说明，所有试剂和设备均可商购获得。
[0052]一般性方法
[0053]将从香港中药联商会辖下专业燕窝供应商购入印度尼西亚白燕条作为燕窝原料，按每千克燕窝原料以100升的水浸泡膨胀3小时，过滤除去水，并将经膨胀的燕窝洗净，加入30升的水，加热至85°C，炖煮6小时。冷却至室温后，以考马斯亮蓝法测量所获得的水煮液中的水溶性蛋白质含量。根据水溶性蛋白质的含量，加入各种含量的蛋白酶，并于37°C酶解1-4。然后，将温度升高至100°C持续10分钟，冷却后添加0.24%丙二醇。最后，采用150微米滤纸过滤水解液，以获得具有增强的抗氧化性的燕窝提取液。
[0054]实施例1.不同浓度的胰蛋白酶的水解效果
[0055]根据上述一般性方法，使用由香港海运有限公司提供的酶活为5万U/g的食用蛋白酶，以食用胰蛋白酶与燕窝水溶性蛋白质的重量比为I: 1000、1:750、1:500、1:200和1:1的食用蛋白酶水解印度尼西亚白燕条制备燕窝提取液。
[0056]采用常规SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定在酶解前后的蛋白质分子量分布。结果显示于图1中。[0057]采用考马斯亮蓝法测量蛋白质含量，并根据下式计算蛋白质提取率:
[0058]蛋白质提取率(％)=(测量的燕窝提取液中的蛋白质含量/燕窝水溶性蛋白的总量)*100。结果显示于图2中(“***，，表示ρ〈0.05)。
[0059]采用唾液酸(NANA)检测分析试剂盒(Biovision，产品货号Κ566-100)，按照供应商的说明，以高效液相色谱三重串联四级杆质谱测定燕窝中游离唾液酸的含量。结果显示于图 3 中(“***，，表示 ρ〈0.05)。
[0060]采用OxiSelect?测定试剂盒，根据供应商的说明，以不同浓度的TR0L0X( —种维生素E的替代物)的抗铁离子氧化能力来建立标准曲线，并根据该标准曲线测量所获得的燕窝提取液的抗氧化能力，结果表示为0RAC(0xygen Radical Absorbance Capacity)单位(即，每100克食物的抗氧化能力相当于若干μ mol的Trolox)。标准曲线显示于图7中。结果显示于图4中(“***”表示p〈0.05)。
[0061]表I列出了按1:1000的胰蛋白酶比例获得的燕窝提取液与其余保健品的抗氧化能力的比较。
[0062]表1:燕窝提取液与其余保健品抗氧化能力的比较
[0063]
【权利要求】
1.一种制备燕窝提取液的方法，包括向燕窝原料加入蛋白酶水解燕窝水溶性蛋白质，其中所述蛋白酶以4500U-40，000U/100g燕窝水溶性蛋白质的量添加。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白酶具有5万-10万U/g的酶活，并且所述蛋白酶与所述燕窝水溶性蛋白质的重量比为1:450 - 1:1100。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述蛋白酶与所述燕窝水溶性蛋白质的重量比为1:500 - 1:1000。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述蛋白酶与所述燕窝水溶性蛋白质的重量比为1:700 - 1:800。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中水解燕窝水溶性蛋白质的时间为1-4小时。
6.根据权利要求所述I至5任一项所述的方法，其中所述蛋白酶选自胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或其任何组合。
7.根据权利要求所述6所述的方法，其中所述蛋白酶为胰蛋白酶。
8.根据权利要求所述7所述的方法，其中所述蛋白酶为食用胰蛋白酶。
9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其中在水解前，水热预处理所述燕窝原料。
10.根据权利要求1-9任 一项所述的方法，其中在水解后，煮沸水解液10分钟灭活酶。
11.根据权利要求10所述的方法，其中任选地，在灭活酶后向水解液加入稳定剂。
12.根据权利要求11所述的方法，其进一步包括过滤水解液。
13.根据权利要求1-12任一项所述的方法，其中所述燕窝水溶性蛋白质被分解为分子量小于26kDa的小分子蛋白质。
14.根据权利要求
15.根据权利要求
16.根据权利要求1-12任一项的方法获得的燕窝提取液。14所述的燕窝提取液在制备皮肤美白化妆品中的用途。14所述的燕窝提取液在制备延缓衰老的保健品中的用途。
【文档编号】A61K8/64GK103436579SQ201310331828
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年8月1日 优先权日:2013年8月1日
【发明者】陈嘉伦, 詹华强, 温志昌, 张艳芳, 温川蓉 申请人:香港科技大学, 海运贸易有限公司