专利名称：一种醋氯芬酸-plga微球水凝胶的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种药物的制备方法，具体涉及一种醋氯芬酸-PLGA微球冻干粉及醋氯芬酸-PLGA微球水凝胶的制备方法。背景技术：
醋氯芬酸(Aceclofenac, ACF)是一种新型的强效非留体类抗炎药(NSAIDs),具有消炎、镇痛、解热等作用，用于缓解类风湿关节炎、骨性关节炎和强直性脊柱炎等引起的炎症和疼痛，对于扭伤、拉伤及其他软组织损伤、手术后疼痛及肿胀也非常有效，还可用于其他疾病引起的疼痛。ACF是C0X-2中度选择性抑制作用，与其他的NSAIDs相比较，具有治疗作用强、不良反应少的优点。与双氯芬酸、酮基布洛芬、吲哚美辛等比较更安全有效，但它仍有胃肠道刺激作用。为了使其药物浓度平稳，减少对胃的刺激性，延长药物的治疗作用和时间，降低不良反应的发生率 ，方便患者服药，人们从改变剂型及复方制剂等方面进行了研究，如常用的剂型有普通片剂，但由于其半衰期短约仅为四小时，使血浆浓度短暂上升，很快又从血浆中消除，每天需要服用数次，且血药浓度波动大疗效不稳定，长期服用的主要不良反应为胃肠道刺激性较大，罕见消化道溃疡和出血。为了克服所述缺陷将其制成一日一次的缓释制剂，结果表明醋氯芬酸缓释片能显著改善RA患者的症状，降低血沉，有明显的治疗作用，其疗效及安全性与醋氯芬酸片相近，但一天只需要服药一次。另外还有胶囊剂，采用醋氯芬酸缓释颗粒作为丸芯，然后再将其它药物或者提取物进行混合进行二次包衣制成颗粒装入胶囊内，结果表明可缓慢释放24h。另处还有微丸剂，使用粉沫包衣工艺制备的微丸，具有明示结肠定位释药的作用。虽然以上缓控释制剂对减少不良反应和血药浓度波动大的情况有所缓解，但一天一次的给药方式已经不能满足不断提高的临床需求，有待开发更安全、有效、方便的剂型和给药方式。聚乳酸-羟基乙酸共聚物(简称PLGA)是生物可降解的功能高分子有机化合物，具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能，被广泛应用于制药领域。其降解速率随着两种化合物组成比例的不同而变化，因此可以根据药物的性质和用途选择不同比例组合成的聚乳酸-羟基乙酸，制备成具有特定功效的微球制剂，所制得的PLGA微球的粒径，从几微米到几百微米不等，可以用于注射和口服。PLGA-PEG-PLGA三嵌段共聚物同样具有良好的生物可降解性、生物相容性，表现出安全、无毒的特点，是可注射温敏型水凝胶材料，其一定浓度的水溶液可表现出接近于人体生理温度的相转变特性，可在体温条件下自发形成柔软的凝胶，使药物长期缓慢释放，同时具有在体内原位形成，可避免外科手术给患者带来的痛苦，降低医疗费用支出的优点，广泛应用于可注射生物缓控释药物传递系统。
发明内容
针对现有技术所存在的缺陷，本发明目的之一是集醋氯芬酸和PLGA的优点于一体，提供了一种醋氯芬酸-PLGA微球冻干粉的制备方法；
本发明的另一个目的是提供一种醋氯芬酸-PLGA微球水凝胶的制备方法。醋氯芬酸-PLGA微球冻干粉的制备方法如下所述:(1)取PLGA溶于二氯甲烷中，制得浓度为3 5%(m/v)的PLGA溶液，再按醋氯芬酸与PLGA重量之比为I 3:2 10的比例，将醋氯芬酸加入到PLGA溶液中，超声至完全溶解，得油相，放于冰箱4°C中待用；
(2)将上述所得油相与浓度为I 2%(m/v)的预先降温至4°C的PVA水溶液，按0.5 1.5:9 11的体积比加入到PVA水溶液，并以5000 1500rpm/min速度剪切5min，制得O/W乳液；
(3)如(2)所制得的乳液缓慢加入到重蒸馏水中，低速搅拌3h，使微球固化；
(4)离心收集步骤(3)中微球后，重蒸馏水洗涤3次，冷冻干燥48h即得白色粉末状醋氯芬酸-微球冻干粉。醋氯芬酸-PLGA微球水凝胶的制备方法如下所述:
(1)取PLGA-PEG-PLGA三嵌段共聚物并溶于重蒸馏水中，在4°C时放置48 72h，待共聚物充分溶胀、溶解，形成浓度为15 20% (m/v)的PLGA-PEG-PLGA溶液，4°C保存待用；
(2)使用前称取醋氯芬酸-微球冻干粉，控温在4-20°C、涡旋条件下将醋氯芬酸-微球冻干粉分次加入到的PLGA-PEG-PLGA水凝胶溶液中，待分散均匀即可。其中PLGA-PEG-PLGA 分子量 4000，PLGA 型号 75/25，PEG 分子量 1000。本发明的优越之处在于:
1、所形成种醋氯芬酸-PLGA微球的粒径3.95±0.97 μ m，粒径较小且分布较均匀，符合混悬液注射要求(10版药典)。2、体外释放结果显示，醋氯芬酸微球7天可缓慢释放80%左右，与醋氯芬酸传统制剂相比较，明显延长了释放时间，由此可克服醋氯芬酸由于连续、反复给药所造成的胃肠道不良反应、为更好的应用于临床提供一定的理论依据。3、微球所用载体PLGA具有生物相容性好、生物可降解的优点，在体内参与三羧酸循环，最终降解成二氧化碳和水，没有任何毒副作用，生物安全性高。4、所制备的水凝胶的Tgel (溶胶-凝胶转变温度)为30±2°C，表现出室温溶胶、体温凝胶的可注射水凝胶理想特性。5、制备成水凝胶的优势:克服醋了氯芬酸-微球体外突释较严重(Id内释放37%)的缺点，微球与水凝胶复合，体外释放结果显示:ld释放小于10%，可缓慢释放达10d，缓释效果明显。3、醋氯芬酸-PLGA微球水凝胶所用材料PLGA-PEG-PLGA具有生物可降解、生物相容性好的优点，没有任何毒副作用，生物安全性高。
附图1为光学显微镜下观察到的实施例1的微球冻干粉。附图2为体外累积释放曲线。附图3A为各制剂对大鼠左后足原发性肿胀结果曲线图(n=10)。附图3B为各制剂对大鼠左后足继发性肿胀结果曲线图。
具体实施方式
本发明所涉及到的试剂均可以在市场上买到。实施例1:①精密称取PLGA溶于定量二氯甲烷中，制得浓度为3% (m/v)的PLGA溶液，再按醋氯芬酸与PLGA的重量比为3:10的比例，将醋氯芬酸加入到PLGA溶液中，超声至完全溶解，制得油相；②将所得的油相与浓度为1.5% (m/v)的PVA水溶液，按1:10的体积比加入到PVA水溶液，并以5000rpm/min速度剪切初乳液5min，制得Ο/W乳液将上述所形成的乳液缓慢加入到重蒸馏水中，低速搅拌3h，使微球固化最后离心收集步骤③中的微球，重蒸馏水洗涤3次，冷冻干燥48h即得白色粉末状微球。使用前⑤精密称取步骤④中的微球冻干粉20mg，于4 20°C时不断搅拌的情况下，少量多次加入到15% (m/v)的PLGA-PEG-PLGA水溶液中，分散均匀即得种醋氯芬酸-PLGA微球水凝胶。水凝胶相变温度:27°C，载药量3.37mg/ml，包封率73.01% (m/m)。实施例2:①精密称取PLGA溶于定量二氯甲烷中，制得浓度为4% (m/v)的PLGA溶液，再按醋氯芬酸与PLGA的重量比为2:5的比例，将醋氯芬酸加入到PLGA溶液中，超声至完全溶解，制得油相；②将所制得的油相与浓度为1.5% (m/v)的PVA水溶液，按1:10的体积比加入到PVA水溶液，并以5000rpm/min速度剪切初乳液5min，制得0/W乳液；③将上述所形成乳液缓慢加入到重蒸馏水中，低速搅拌3h，使微球固化；④最后离心收集步骤③中的微球，重蒸馏水洗涤3次，冷冻干燥48h即得白色粉末状微球。⑤精密称取步骤④中的微球冻干粉25mg，于保温4 20°C不断搅拌的情况下，少量多次加入到20%的(m/v)PLGA-PEG-PLGA水溶液中，分散均匀即得醋氯芬酸-PLGA微球水凝胶。水凝胶相变温度:30°C，载药量5.88mg/ml，包封率82.36% (m/m)。实施例3:①精密称取PLGA溶于定量二氯甲烷中，制得浓度为5% (m/v)的PLGA溶液，再按醋氯芬酸与PLGA的重量比为3:10的比例，将醋氯芬酸加入到PLGA溶液中，超声至完全溶解，制得油相；②将所得的油相与浓度为2% (m/v)的PVA水溶液，按1:10的体积比加入到PVA水溶液，并以10000rpm/min速度剪切初乳液5min，制得0/W乳液；③将上述所形成的乳液缓慢加入到重蒸馏水中`，低速搅拌3h，使微球固化；④最后离心收集步骤③中的微球，重蒸馏水洗涤3次，冷冻干燥48h即得白色粉末状微球。⑤精密称取步骤④中的微球冻干粉25mg，于保温4 20°C不断搅拌的情况下，少量多次加入到15%的(m/v)PLGA-PEG-PLGA水溶液中，分散均匀即得醋氯芬酸-PLGA微球水凝胶。水凝胶相变温度:30°C，载药量4.06mg/ml,包封率70.44% (m/m)。微球水凝胶制备工艺的研究:微球水凝胶制备主要分微球制备和水凝胶制备两部分，其中微球制备过程较复杂其影响因素较多，并且微球的制备对水凝胶的制备基本没有影响，因此本申请进行了分别考察。(—)微球制备工艺考察:微球的制备受到多种因素的影响，这些因素共同制约着所制得的微球的质量，因此通过选择非常具有代表性的考察指标——包封率和载药量，作为微球质量评价的参考指标，对所制得的PLGA微球进行影响因素的考察，具有非常重大的意义。本发明选取PLGA种类、PLGA浓度、PVA浓度、初乳与PVA比例、药物与PLGA重量之比以及制备初乳的条件作为考察因素。1、PLGA种类对微球包封率和载药量的影响:由于聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)由两种单体一乳酸和羟基乙酸随机聚合而成，不同的单体比例可以制备出不同类型的PLGA，其物理状态、化学性质以及降解程度皆随着组成单体比例不同而不同。本申请选用了以下的组成:
LA:GA = 50:50 ；LA:GA = 75:25 ；LA:GA = 85:15在PLGA浓度、PVA浓度、初乳与PVA水溶液比例、醋氯芬酸与PLGA的重量之比及反应条件一定的情况下，PLGA种类对微球质量影响考察结果见表醋氯芬酸-PLGAl。表格I考察PLGA种类的各因素及水平
权利要求
1.一种醋氯芬酸-PLGA微球的制备方法，其特征在于如下所述: 步骤一，取PLGA溶于二氯甲烷中，制得质量体积浓度为3 5 %的PLGA溶液，再按醋氯芬酸与PLGA质量比为I 3:4 6的比例，将醋氯芬酸加入到PLGA溶液中，超声至完全溶解，制得油相，放于冰箱4°C中待用； 步骤二，将上述所得油相与预先降温至4°C且质量体积浓度为I 2%的PVA水溶液，按0.5 1.5:9 11的体积比加入到PVA水溶液，并以5000 1500rpm/min速度剪切乳液5min，制得Ο/W乳液； 步骤三，上述所制得的乳液缓慢加入到重蒸馏水中，继续低速搅拌一段时间使微球固化； 步骤四，离心收集步骤(3)中微球后，重蒸馏水洗涤3次，冷冻干燥48h即得白色粉醋氯芬酸-微球冻干粉。
2.根据权利要求1所述的一种醋氯芬酸-PLGA微球水凝胶的制备方法，其特征在于: 步骤一:取PLGA-PEG-PLGA三嵌段共聚物溶于重蒸馏水，于4°C时放置48 72h，待其充分溶胀溶解，形成质量体积浓度为15 20%的PLGA-PEG-PLGA溶液，4°C保存待用；步骤二:取醋氯芬酸-微球冻干粉，在4-20°C、涡旋搅拌条件下将醋氯芬酸-微球冻干粉分次加入到的PLGA-PEG-PLGA 水凝胶溶液中，待分散均匀即可。
全文摘要
本发明公开了一种醋氯芬酸-PLGA微球水凝胶的制备方法，首先制备醋氯芬酸-PLGA微球，然后取PLGA-PEG-PLGA三嵌段共聚物制备醋氯芬酸-PLGA微球水凝胶。本发明的优越之处在于微球粒径较小且分布较均匀，符合注射要求。与醋氯芬酸传统制剂相比较，明显延长了释放时间。微球所用载体PLGA具有生物相容性好、生物可降解的优点，没有任何毒副作用。制备成水凝胶的优势克服醋了氯芬酸-微球体外突释较严重(1d内释放37%)的缺点，微球与水凝胶复合，体外释放结果显示1d释放小于10%，可缓慢释放达10d，缓释效果明显。
文档编号A61K47/34GK103110593SQ20131004620
公开日2013年5月22日 申请日期2013年2月6日 优先权日2013年2月6日
发明者胡玉荣, 赵宏巧, 刘洋, 郭新红, 耿鑫, 王静, 李春明, 黄佳妮 申请人:郑州大学