花豆种子萃取物及其制备方法与用途
【专利摘要】一种花豆(Phaseolus?vulgaris?L.)种子萃取物，以包含以下步骤的方法制得：a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末；b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液；以及c)离心该均质花豆萃取液并收集一上清花豆萃取液，其中，该步骤b)是约以该花豆粉末1公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行。
【专利说明】花豆种子萃取物及其制备方法与用途【技术领域】
[0001]本发明与花豆种子萃取物有关，更详细地是指一种可调控哺乳动物血糖的花豆种子萃取物及其制备方法与用途。
【背景技术】
[0002]花豆种子营养价值极高，富含多种矿物元素(韩、铜、铁、猛、镁、锌)、蛋白质、维生素和多酚类化合物。其鲜荚除可作蔬菜食用外，尚可制成盐溃品、罐头，种子亦可加工为豆馅、糕点、酱油和味精等。此外全株皆可为饲料。由于花豆富含各种机能性成分，因此也被认为是于有益人体健康的保健食品。
[0003]历史文献显示多酚类化合物会于消化系统中作用，并调整人体内碳水化合物的分解及吸收，因此存在庞大市场需求，并且相关的机能性食品或保健食品纷纷问市，从而如何提升既有花豆有效萃取出高含量多酚类化合物与其他活性成分的技术存在改善空间。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种花豆种子萃取物及其制备方法与用途。
[0005]为实现上述目的，本发明提供的花豆(Phaseolus vulgaris L.)种子萃取物,是以包含以下步骤的方法制得:
[0006]a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末；
[0007]b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液；以及
[0008]c)离心该均质花豆萃取液并收集一上清花豆萃取液；
[0009]其中，该步骤b)是以该花豆粉末I公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行。
[0010]其中，该第一溶剂是选自以下群组:水、C1-C4醇类及其组合任一种。
[0011]其中，该第一溶剂为乙醇水溶液，该乙醇水溶液为40体积％至60体积％。
[0012]其中，该第一溶剂为50%乙醇水溶液(v/v)。
[0013]其中，该第一溶剂为甲醇水溶液，该甲醇水溶液为70体积％至90体积％。
[0014]其中，该第一溶剂为80%甲醇水溶液(v/v)。
[0015]其中，该步骤b)的溶解过程是在避光以及150rpm震荡I小时的条件下进行，该步骤c)的离心条件为10，OOOXg离心30分钟。
[0016]其中，该步骤c)之后，包括一过滤步骤d)以获得一纯化花豆萃取物。
[0017]其中，该花豆是选自花荚种(Hwachia)或该花荚种经迭氮化钠诱变获得的诱变系O
[0018]其中，该花豆是选自该花荚种。
[0019]其中，该花豆是选自该诱变系。
[0020]其中，该诱变为SA-05品系。
[0021]其中，该上清花豆萃取液包含有多酚类化合物，该多酚类化合物总含量重量百分比浓度为1.25毫克/每公克花豆种子至3.13毫克/每公克花豆种子。[0022]其中，该多酚类化合物包含有类黄酮类化合物以及花青素类化合物。
[0023]其中，该上清花豆萃取液包含有多酚类化合物，该多酚类化合物总含量重量百分比浓度为1.62毫克/每公克花豆种子至3.69毫克/每公克花豆种子。
[0024]其中，该多酚类化合物包含有类黄酮类化合物以及花青素类化合物。
[0025]其中，该步骤d)之后，包括一冷冻真空干燥步骤e)以获得一冻干花豆萃取物，其中该冻干花豆萃取物包含有至少一蛋白质。
[0026]其中，该萃取物所含总蛋白质重量百分比浓度介于52至95毫克/每公克花豆种子。
[0027]其中，该萃取物所含总蛋白质重量百分比浓度介于0.29至1.9毫克/每公克花豆种子。
[0028]其中，该萃取物具有抑制醒糖还原酶的活性，其IC5tl为0.36mg/ml至0.40mg/ml。
[0029]其中，该萃取物具有抑制醒糖还原酶的活性，其IC5tl为0.39mg/ml至0.46mg/ml。
[0030]其中，该萃取物具有抑制α -葡萄糖苷酶的活性，其IC5tl为1.46mg/ml至1.92mg/ml ο
[0031]其中，该萃取物具有抑制α -葡萄糖苷酶的活性，其IC5。为1.32mg/ml至1.94mg/ml ο
[0032]本发明提供的一种调节哺乳动物血糖的饮食品，包含一有效量的根据上述任一种的萃取物与至少一食品添加剂。
[0033]本发明提供的一种调节哺乳动物血糖的医药组合物，包含一有效量的根据上述任一种的萃取物与至少一药学上可接受的赋型剂。
[0034]本发明提供的一种使用上述任一种的花豆种子萃取物在制造药剂的用途，其中该药剂是用于调节哺乳动物血糖。
[0035]本发明提供的一种调节哺乳动物血糖的医药组合物，包含一有效量的根据上述任一种的萃取物、一代谢抑制剂以及至少一药学上可接受的赋型剂。
[0036]其中，该代谢抑制剂是选自以下群组:醛糖还原酶抑制剂、α -葡萄糖苷酶抑制齐U、α -淀粉分解酶抑制剂及其组合任一种。
[0037]本发明提供的一种花豆种子(Phaseolus vulgaris L.)萃取物制备方法,包含有:
[0038]a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末；
[0039]b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液；以及
[0040]c)离心该均质花豆萃取液并收集一上清花豆萃取液；
[0041]其中，该花豆是选自花荚种(Hwachia)或该花荚种经迭氮化钠诱变获得的诱变系SA-05品系，该步骤b)是以该花豆粉末I公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行，并且该第一溶剂是选自C1-C4醇类水溶液。
[0042]其中，该第一溶剂为甲醇水溶液，该甲醇水溶液为70体积％至90体积％。
[0043]其中，该第一溶剂为乙醇水溶液，该乙醇水溶液为40体积％至60体积％。
[0044]其中，该步骤b)的溶解过程是在避光以及150rpm震荡I小时的条件下进行，该步骤c)的离心条件为10，OOOXg离心30分钟。
[0045]其中，该步骤c)之后，包括一过滤步骤d)以获得一纯化花豆萃取物。[0046]其中，该上清花豆萃取液包含有多酚类化合物，该多酚类化合物总含量重量百分比浓度为1.25毫克/每公克花豆种子至3.13毫克/每公克花豆种子。
[0047]本发明提供的一种花豆(Phaseolus vulgaris L.)种子萃取物制备方法,是以包含以下步骤的方法制得:
[0048]a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末；
[0049]b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液；
[0050]c)离心该均质花豆萃取液并收集一沉淀物；
[0051]d)添加一第二溶剂溶解该沉淀物以获得一第一粗萃液；
[0052]e)离心该第一粗萃液并取其上清部分以获得一第二粗萃液；
[0053]f)加热该第二粗萃液；
[0054]g)冷却该第二粗萃液；以及
[0055]h)离心该第二粗萃液并取其上清部分以获得一最终花豆萃取物；
[0056]其中，该花豆是选自花荚种(Hwachia)或该花荚种经迭氮化钠诱变获得的诱变系SA-05品系，并且该步骤b)是以该花豆粉末I公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行。
[0057]其中，该第一溶剂为甲醇水溶液，该甲醇水溶液为70体积％至90体积％。
[0058]其中，该第一溶剂为乙醇水溶液，该乙醇水溶液为40体积％至60体积％。
[0059]其中，该第二溶剂为蒸馏水。
[0060]其中，该第二溶剂为0.5%氯化钠(w/v)水溶液。
[0061]其中，该步骤b)的溶解过程是在避光以及150rpm震荡I小时的条件下进行，该步骤d)的溶解过程是在室温120rpm震荡40分钟的条件下进行，该步骤f)的加热过程是在温度70°C处理15分钟条件下进行，该步骤g)的冷却过程是在温度4°C条件下进行，该步骤
h)的离心过程是在离心力10，OOOXg处理30分钟条件下进行。
【专利附图】
【附图说明】
[0062]图1所示为本发明花豆种子萃取物制备方法的一具体实施例流程图；
[0063]图2所示为本发明花豆种子萃取物制备方法的另一具体实施例流程图。
【具体实施方式】
[0064]本发明提供了一种花豆(Phaseolus vulgaris L.)种子萃取物,其是以包含以下步骤的方法制得:a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末；b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液；以及c)离心该均质花豆萃取液并收集一上清花豆萃取液，其中，该步骤b)是约以该花豆粉末I公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行，该第一溶剂选自以下群组:水、C1-C4醇类及其组合任一种。
[0065]本发明提供了 一种制备上述萃取物的方法。
[0066]本发明提供了一种用于调节哺乳动物血糖之饮食品，其包含有效量的上述萃取物。
[0067]本发明提供了一种使用上述萃取物在制造药剂的用途，该药剂是用于调节哺乳动物血糖。
[0068]本发明提供了一种用于调节哺乳动物血糖胞的医药组合物，其包含有效量的上述萃取物。
[0069]本发明提供了一种用于调节哺乳动物血糖胞的医药组合物，其包含有效量的上述萃取物以及至少一种醣类代谢相关抑制剂。
[0070]在本发明中，萃取物可单独或以含有萃取物及医药上可接受的载体、稀释剂及/或赋形剂的组合物投予。投予剂量可根据个体的健康状况或所欲预防或治疗的疾病而调
難
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[0071]除非另有定义，否则本说明书中所使用的本发明有所相关的科学或技术术语应为本领域技术人员所理解的意义。这些术语的意义及范围应为明确，然而，一旦有任何不明确的地方，本说明书中的定义优先于任何字典或外部定义。
[0072]本发明的技术及较佳实施态样，将描述于以下内容中，以供本领域技术人员据以明了本发明的特征，其中该些实施态样仅提供作为说明，而非用以限制本发明的范畴。
[0073]本发明各具体实施例所涉及田间产量试验、成分分析和酵素抑制活性分析样品测定均为三重复，并以统计软件SAS(statistics analysis syatem)进行统计分析,使用变方分析(ANOVA)比较品系、处理和期作间差异，再以最小显著差异性测验法(Fisher’s leastsiginificant difference method,LSD)进行品系间或各处理组合间显著差异性比较，已P< 0.05为标准。
[0074]实施例1:含高总多酚量的花豆种子萃取物的制备方法
[0075]1、花豆材料来源
[0076]本发明植物材料为中国台湾花豆栽培种花荚(Hwachia)与其迭氮化钠诱变品系SA-05品系。前述材料种植于中国台湾农业试验所，依惯行的花豆栽培管理方法栽培，分别于2011年春作、2011年秋作和2012年春作进行种植。收获干荚进行产量构成要素调查，并将种子保存于4°C备用。
[0077]I1、花豆种子萃取物制备流程
[0078]请参阅图1，首先于步骤S11，研磨前述花豆种子以获得一花豆粉末，该花豆较佳地是选自花荚种(Hwachia)，最佳地是选用该花荚种经迭氮化钠诱变获得的诱变系。于本实施例中，该诱变是选用SA-05品系。
[0079]随后于步骤S12，使用第一溶剂溶解花豆粉末，其处理过程是在避光以及150rpm震荡I小时的条件下进行。该第一溶剂是选自以下群组:水、C1-C4醇类及其组合任一种。于本实施例中较佳地该第一溶剂为甲醇水溶液，使用体积百分比浓度该甲醇水溶液为约70体积％至约90体积％。最佳地则选用80%甲醇水溶液。在另一具体实施例中，较佳地该第一溶剂为乙醇水溶液，使用体积百分比浓度该乙醇水溶液为约40体积％至约60体积％。最佳地则选用50%乙醇水溶液。
[0080]接着于步骤S13，离心该均质花豆萃取液30分钟后收集一上清花豆萃取液，离心条件为10，000 X g。
[0081]在步骤S14，过滤该上清花豆萃取液以获得一纯化花豆萃取物，过滤所使用针筒过滤器(syringe filter)购自瑞柏生物科技股份有限公司(PallCorporation),所使用膜孔径为0.2 μ m。
[0082]最后于步骤S15，保存该纯化花豆萃取物于零下20度即获得含高总多酚量的纯化花豆种子萃取物。[0083]使用者可视后续需要，将前述纯化花豆种子萃取物进行冷冻真空干燥处理以获得一冻干花豆萃取物，其中该冻干花豆萃取物将可保存数种蛋白质。
[0084]II1、花豆种子萃取物所含总酚、总类黄酮化合物以及总花青素含量测定
[0085]针对总酚化合物含量测定，是将公知技术(Taga et al.，1984)略加修改，取花豆材料10 μ I与200 μ I 2% Na2CO3在血清盘中混合，室温下反应2分钟后加入10 μ I 50%Folin&Ciocalteau/ s酹类试剂震荡混合,于室温下避光反应30分钟。以全波长微量分析仪(Molecular Devices, Spectra Max 250)测定 750nm下吸光值,标准曲线以 gallic acid测试绘制。
[0086]针对总类黄酮化合物测定，是将公知技术(Jeng et al.，2011)略加修改，取花豆材料20 μ I依序与112ml 二次蒸懼水(ddH20)、60ml乙醇(95: 5, v/v)、4ml氯化招(1: 10,w/v)和4ml IM醋酸钾混合均匀于血清盘中。将血清盘置于室温下避光反应40分钟，以全波长微量分析仪(Molecular Devices, Spectra Max 250)检测415nm时吸光值,标准曲线以quercetin测试绘制。
[0087]针对总花青素化合物测定，是将公知技术(Jeng et al.，2010)略加修改，配置缓冲溶液0.025M氯化钾(pH 1.0)和0.4M醋酸钠(pH 4.5)，Iml花豆材料分别以缓冲溶液调整至pH 1.0和pH 4.5，混合均匀后测定53011111和70011111下吸光值。总花青素含量计算公式:
【权利要求】
1.一种花豆种子萃取物，是以包含以下步骤的方法制得: a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末； b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液；以及 c)离心该均质花豆萃取液并收集一上清花豆萃取液； 其中，该步骤b)是以该花豆粉末I公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行。
2.根据权利要求1的萃取物，其中，该第一溶剂是选自以下群组..水、C「C4醇类及其组合任一种。
3.根据权利要求1的萃取物,其中，该第一溶剂为乙醇水溶液,该乙醇水溶液为40体积％至60体积％。
4.根据权利要求1的萃取物，其中，该第一溶剂为50%乙醇水溶液(v/v)。
5.根据权利要求1的萃取物，其中，该第一溶剂为甲醇水溶液，该甲醇水溶液为70体积％至90体积％。
6.根据权利要求1的萃取物，其中，该第一溶剂为80%甲醇水溶液(v/v)。
7.根据权利要求1的萃取物，其中，该步骤b)的溶解过程是在避光以及150rpm震荡I小时的条件下进行，该步骤c)的离心条件为10，OOOXg离心30分钟。
8.根据权利要求1的萃取物，其中，该步骤c)之后，包括一过滤步骤d)以获得一纯化花豆萃取物。
9.根据权利要求1的萃取物，其中，该花豆是选自花荚种(Hwachia)或该花荚种经迭氮化钠诱变获得的诱变系。
10.根据权利要求9的萃取物，其中，该花豆是选自该花荚种。
11.根据权利要求9的萃取物，其中，该花豆是选自该诱变系。
12.根据权利要求11的萃取物，其中，该诱变为SA-05品系。
13.根据权利要求10的萃取物，其中，该上清花豆萃取液包含有多酚类化合物，该多酚类化合物总含量重量百分比浓度为1.25毫克/每公克花豆种子至3.13毫克/每公克花豆种子。
14.根据权利要求13的萃取物，其中，该多酚类化合物包含有类黄酮类化合物以及花青素类化合物。
15.根据权利要求11的萃取物，其中，该上清花豆萃取液包含有多酚类化合物，该多酚类化合物总含量重量百分比浓度为1.62毫克/每公克花豆种子至3.69毫克/每公克花豆种子。
16.根据权利要求15的萃取物，其中，该多酚类化合物包含有类黄酮类化合物以及花青素类化合物。
17.根据权利要求3的萃取物，其中，该步骤d)之后，包括一冷冻真空干燥步骤e)以获得一冻干花豆萃取物，其中该冻干花豆萃取物包含有至少一蛋白质。
18.根据权利要求17的萃取物，其中，该萃取物所含总蛋白质重量百分比浓度介于52至95毫克/每公克花豆种子。
19.根据权利要求17的萃取物，其中，该萃取物所含总蛋白质重量百分比浓度介于0.29至1.9毫克/每公克花豆种子。
20.根据权利要求10的萃取物，其中，该萃取物具有抑制醛糖还原酶的活性，其IC5tl为.0.36mg/ml 至 0.40mg/ml。
21.根据权利要求12的萃取物，其中，该萃取物具有抑制醛糖还原酶的活性，其IC5tl为.0.39mg/ml 至 0.46mg/ml。
22.根据权利要求10的萃取物，其中，该萃取物具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性，其IC50 为 1.46mg/ml 至 1.92mg/ml。
23.根据权利要求12的萃取物，其中，该萃取物具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性，其IC50 为 1.32mg/ml 至 1.94mg/ml。
24.一种调节哺乳动物血糖的饮食品，包含一有效量的根据权利要求1至23中任一种的萃取物与至少一食品添加剂。
25.—种调节哺乳动物血糖的医药组合物，包含一有效量的根据权利要求1至23中任一种的萃取物与至少一药学上可接受的赋型剂。
26.一种使用根据权利要求1至23中任一种的花豆种子萃取物在制造药剂的用途，其中该药剂是用于调节哺乳动物血糖。
27.一种调节哺乳动物血糖的医药组合物，包含一有效量的根据权利要求1至23中任一种的萃取物、一代谢抑制剂以及至少一药学上可接受的赋型剂。
28.根据权利要求27的医药组合物，其中，该代谢抑制剂是选自以下群组:醛糖还原酶抑制剂、α -葡萄糖苷 酶抑制剂、α -淀粉分解酶抑制剂及其组合任一种。
29.—种花豆种子萃取物制备方法,包含有: a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末； b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液；以及 c)离心该均质花豆萃取液并收集一上清花豆萃取液； 其中，该花豆是选自花荚种或该花荚种经迭氮化钠诱变获得的诱变系SA-05品系，该步骤b)是以该花豆粉末I公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行，并且该第一溶剂是选自C1-C4醇类水溶液。
30.根据权利要求29的制备方法，其中，该第一溶剂为甲醇水溶液，该甲醇水溶液为70体积％至90体积％。
31.根据权利要求29的制备方法，其中，该第一溶剂为乙醇水溶液，该乙醇水溶液为40体积％至60体积％。
32.根据权利要求29的萃取物，其中，该步骤b)的溶解过程是在避光以及150rpm震荡1小时的条件下进行，该步骤c)的离心条件为10，OOOXg离心30分钟。
33.根据权利要求29的制备方法，其中，该步骤c)之后，包括一过滤步骤d)以获得一纯化花豆萃取物。
34.根据权利要求29的制备方法，其中，该上清花豆萃取液包含有多酚类化合物，该多酚类化合物总含量重量百分比浓度为1.25毫克/每公克花豆种子至3.13毫克/每公克花豆种子。
35.一种花豆种子萃取物制备方法，是以包含以下步骤的方法制得: a)研磨该花豆种子以获得一花豆粉末； b)使用一第一溶剂溶解该花豆粉末以获得一均质花豆萃取液； c)离心该均质花豆萃取液并收集一沉淀物；d)添加一第二溶剂溶解该沉淀物以获得一第一粗萃液； e)离心该第一粗萃液并取其上清部分以获得一第二粗萃液； f)加热该第二粗萃液； g)冷却该第二粗萃液；以及 h)离心该第二粗萃液并取其上清部分以获得一最终花豆萃取物； 其中，该花豆是选自花荚种或该花荚种经迭氮化钠诱变获得的诱变系SA-05品系，并且该步骤b)是以该花豆粉末I公克溶解于该第一溶剂10毫升的比例进行。
36.根据权利要求35的制备方法，其中，该第一溶剂为甲醇水溶液，该甲醇水溶液为70体积％至90体积％。
37.根据权利要求35的制备方法，其中，该第一溶剂为乙醇水溶液，该乙醇水溶液为40体积％至60体积％。
38.根据权利要求35的制备方法，其中，该第二溶剂为蒸馏水。
39.根据权利要求35的制备方法，其中，该第二溶剂为0.5%氯化钠(w/v)水溶液。
40.根据权利要求35的萃取物，其中，该步骤b)的溶解过程是在避光以及150rpm震荡I小时的条件下进行，该步骤d)的溶解过程是在室温120rpm震荡40分钟的条件下进行，该步骤f)的加热过程是在温度70°C处理15分钟条件下进行，该步骤g)的冷却过程是在温度4°C条件下进行，该步骤h)的离心过程是在离心力10，000 Xg处理30分钟条件下进行。
【文档编号】A61P3/10GK103919141SQ201310019454
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2013年1月18日 优先权日:2013年1月15日
【发明者】宋济民, 江怡晨, 郑统隆, 江诚财 申请人:宋济民