用于Wnt途径相关疾病的抗体和方法
【专利摘要】跨膜E3泛素连接酶ZNRF3和RNF43是真核细胞中β-联蛋白和Wnt信号转导途径的负调节物。与ZNRF3的胞外域结合的抗体可以调节ZNRF3的活性，从而导致Wnt信号转导的增强。ZNRF3拮抗抗体可以用来治疗具有弱Wnt信号转导的疾病，如短肠综合征、骨质疏松、糖尿病、神经变性疾病和黏膜炎。此外，本发明的拮抗抗体可以用来增强Wnt信号转导以用于组织修复和伤口愈合。
【专利说明】用于Wnt途径相关疾病的抗体和方法
【技术领域】
[0001]本发明广泛涉及结合受体的单克隆抗体，尤其涉及结合ZNRF3蛋白或RNF43蛋白的抗体。
【背景技术】
[0002]Wnt信号转导途径是真核细胞中对调节细胞生长和分化重要的蛋白质网络。LoganCY 和 Nusse R, “The Wnt signaling pathway in development and disease.”Annu.Rev.Cell.Dev.B1l.20:781-810(2004) ；Nusse R., “Wnt signaling in disease and indevelopment.”Cell Res.15 (I):28-32(2005 年 I 月)；Clevers H, “Wnt/beta-cateninsignaling in development and disease.，，Celll27 (3):469-80 (3Nov.2006)。fct 信号转导对在胚胎发育过程中调节细胞生长和分化至关重要。在成体中，fct信号转导促进组织稳态。
[0003]已将Wnt信号转导的调节异常与许多人类疾病相联系。Wnt途径异常的过度激活可以涉及引起结直肠癌的肿瘤发生。相反，已将fct信号转导的病理性低水平与骨质疏松、骨关节炎、多囊肾病和神经变性疾病相联系。已显示Wnt途径的受控激活促进诸如组织修复和伤口愈合的再生过程。Zhao J, Kim KA 和 Abo A, “Tipping the balance !modulatingthe Wnt pathway for tissue repair.^Trends B1technol.27(3):131-6(2009 年 3 月)。
[0004]Wnt蛋白是结合细胞表面受体(“Wnt受体复合体”)来激活细胞中的fct途径的蛋白质配体。已鉴定了典型和非典型的几种fct途径。
[0005]通过典型Wnt/β-联蛋白途径的Wnt信号转导调节转录辅因子蛋白β_联蛋白的细胞周转。MacDonald BT, Tamai K 和 He X，“Wnt/beta-catenin signaling: components, mechanisms, and diseases.，T)ev.Celll7 (I):9_26 (2009年7 月)及标题为“Evaluating andtreating scleroderma”的美国专利申请2009/0220488。在缺乏Wnt配体的情况下，β-联蛋白通过多蛋白“破坏复合体”保持磷酸化，其引起联蛋白的多遍在蛋白化及联蛋白在细胞蛋白体中的降解。在fct结合Wnt受体复合体时，β-联蛋白通过抑制“破坏复合体”而得以稳定。然后联蛋白易位至细胞核。在细胞核中，联蛋白激活fct靶基因的转录，从而激活用于细胞生长和分化的基因表达程序。
[0006]在典型Wnt/β-联蛋白途径中，Frizzled(FZD)蛋白和低密度脂蛋白受体相关蛋白5/6(LRP5/6)形成受体复合体。Frizzled蛋白和LRP5/6对典型Wnt/β-联蛋白途径都很重要。
[0007] 在非典型、独立于β -联蛋白的途径中，Wnt信号转导调节控制细胞和组织移动的平面细胞极性(PCP)或组织极性信号转导。Zallen JA,“Planar polarity and tissue morphogenesis.”Celll29(6):1051-63(2007 年 6 月 15 日)；Simons M和 Mlodzik M, iiPlanarcell polarity signaling:from fly development to human disease.^Annu.Rev.Genet ；42:517-40(2008);美国专利申请2009/0220488。Frizzled蛋白是非典型Wnt信号转导中的受体，但LRP5/6并非必需的。
[0008]虽然许多蛋白质涉及Wnt信号转导途径，但在该途径中鉴定的可作为药物靶点的蛋白质很少，尤其是在fct途径中的β_联蛋白途径中处于上游的靶点。存在用于增强Wnt信号以开发用于fct信号转导相关病症的治疗的试剂的需要。
[0009]发明概述
[0010]本发明产生于本发明人将两种同源的跨膜E3泛素连接酶鉴定为细胞表面Wnt受体复合体的量的活性负调节物。该连接酶是锌/环指蛋白(Zinc/RING fingerprotein) 3 (ZNRF3)和环指蛋白43 (RNF43)。本发明人还显示，ZNRF3和RNF43是R-反应蛋白(RSPO)的分子靶标，R-反应蛋白是强烈使细胞对fct信号转导敏感的一组分泌性蛋白质。本发明人进一步显示，R-反应蛋白诱导ZNRF3和含有富含亮氨酸重复单位的G蛋白偶联受体4(LGR4)之间的相互作用，LGR4导致ZNRF3的抑制和Wnt信号转导的激活。
[0011]本发明通过与真核细胞表面上的ZNRF3或RNF43蛋白的胞外域结合的抗体提供了ZNRF3或RNF43活性的调节来增加该真核细胞中的Wnt信号转导。在一个实施方案中，本发明是增加fct信号转导的抗-ZNRF3拮抗抗体。在另一实施方案中，本发明是增加fct信号转导的抗-RNF43拮抗抗体。
[0012]本发明还提供本发明的拮抗抗体在治疗低Wnt信号转导相关的疾病和病症中的医学用途。与低fct信号转导相关的一些疾病和病症包括但不限于黏膜炎短肠综合症、胃肠黏膜中的细菌移位、肠毒性或肠病性感染性腹泻、乳糜泻、非热带性口炎性腹泻、乳糖不耐症和其中膳食摄入量(dietary exposure)导致黏膜绒毛钝化的其他病症、吸收障碍、萎缩性胃炎和II型糖尿病。还包括骨质疏松、骨折、代谢疾病(metabolic disease)如糖尿病、神经变性疾病和黑素瘤。此外，本发明的拮抗抗体可以用来增强fct信号转导以用于组织再生，如组织修复和伤口愈合。
[0013]本发明还提供具有多种结合特异性的抗体，如双特异性抗体。该抗体的一部分与ZNRF3或RNF43的胞外域结合。该抗体的另一部分与R-反应蛋白的共同受体(例如LGR4、LGR5 (也称为GPR49)或LGR6)的胞外域结合。例如，在某些实施方案中，本公开涉及:
[0014](i)抗体，其中该抗体的一部分与ZNRF3的胞外域结合，并且该抗体的另一部分与R-反应蛋白的共同受体的胞外域结合；或
[0015](ii)抗体，其中该抗体的一部分与RNF43的胞外域结合，并且该抗体的另一部分与R-反应蛋白的共同受体的胞外域结合。
[0016]本发明提供本发明的抗体在治疗II型糖尿病中的用途，其中所述抗体与DPP-4抑制剂联合治疗。施用本发明的抗体来提高肠降血糖素的水平。由于DPP-4抑制剂的功效需要肠降血糖素的内源产生，本发明的抗体可以与DPP-4抑制剂(如维格列汀(Galvus?)或另一 DPP-4抑制剂)联合治疗来施用。该联合治疗可以是在施用DPP-4抑制剂之前或与施用DPP-4抑制剂同时施用本发明的抗体。
[0017]本发明提供分别与ZNRF3或RNF43的外部区域结合的抗-ZNRF3或抗-RNF43抗体在不需要调节ZNRF3或RNF43活性来增强Wnt信号转导的功用中的用途。抗ZNRF3或RNF43外部区域的抗体可以用来诊断疾病，其中ZNRF3或RNF43由于Wnt途径超活化而高表达，如在某些类型的肿瘤，例如结肠腺癌中。抗ZNRF3或RNF43外部区域的抗体还可以用于抗体药物缀合物(ADC)、依赖抗体的细胞毒性(ADCC)或用于癌细胞特异性递送和杀伤的其他类似方法。
[0018]本发明提供抗ZNRF3外部区域的抗体，其可以用来干扰R-反应蛋白与ZNRF3的结合和抑制R-反应蛋白诱导的fct信号转导。这类抗体可以用来治疗与强fct信号转导相关的病症，其包括但不限于癌症、骨关节炎、硬化性骨化病(sclerosteosis)、特发性肺纤维化和心肌肥厚(cardiac hypertrophy)。
[0019]本发明还提供可药用载体中的跨膜E3泛素连接酶(ZNRF3或RNF43)的可溶性胞外域，其在受益于fct信号转导减弱的疾病或其他适应症的治疗中用作药物。ZNRF3或RNF43的可溶性胞外域特异地结合R-反应蛋白来阻断R-反应蛋白刺激的fct信号转导。这类抗体可以用来治疗与强fct信号转导相关的病症，其包括但不限于癌症、骨关节炎、硬化性骨化病、特发性肺纤维化和心肌肥厚。
[0020]附图简述
[0021]图1是一组条形图，显示ZNRF3和RNF43是Wnt靶基因。用或不用Wnt3A条件培养基(CM)处理小鼠L细胞24小时。提取总RNA来进行反转录，并用ZNRF3、RNF43和
GUSB Taqman?:探针进行qPCR分析。用Λ Λ Ct法来获得mRNA水平，条形图中所示的水平对⑶SB (人的β -葡糖醛酸糖苷酶基因)，且相对于无fct3A条件培养基归一化。
[0022]图2是一组条形图，显示ZNRF3和RNF43在结肠癌中上调。ZNRF3mRNA水平(图2A)和RNF43mRNA水平(2B)是来自四名患者的结肠腺癌和邻近正常组织中的水平。按图1中所述测量和分析mRNA水平。
[0023]图3是一组条形图，显示SW480结肠癌细胞中siRNA介导的β-联蛋白基因缺失及所述缺失对该细胞系中ZNRF3和RNF43的相对mRNA水平的影响。以⑶SB (人的β -葡糖醛酸糖苷酶基因)作为内部对照，通过基于TaqMan?:探针的定量RT-pcr，用λ Act法测量所有mRNA水平。误差棒表示标准差(η = 4)。
[0024]图4是一组条形图，显示ZNRF3负调节Wnt信号转导。用对照siRNA(PGL2)或
ZNRF3siRNA转染具有克隆的SuperTopFlash'? (STF)报道基因的HEK293细胞，其稳定表达绿色萦光蛋白(GFP)或用SiRNA抗性(SiR)和带有C端血凝素(HA)标记的野生型(WT)ZNRF3或缺乏RING结构域(Λ RING)的ZNRF3。转染后2天，按所示加入30% Wnt3A条件培养基(CM)。转染后3天，用来自Promega的BrightG丨O?.试剂测定萤光素酶活性。
[0025]图5是一组条形图，显示RNF43是ZNRF3的功能同系物。条形图表示用对照siRNA (PGL2)或 ZNRF3siRNA 转染具有克隆的 SuperTopFlash'? (STF)报道基因的HEK293细胞的结果，所述HEK293细胞稳定表达GFP或野生型(WT) RNF43或缺乏RING结构域(ARING)的RNF43。转染后3天，用来自P1mega的BrightG丨O?.试剂测定萤光素酶活性，并对GFP+pGL2si组归一化。
[0026]图6是一组聚丙烯酰胺凝胶图片，针对以下细胞系和处理显示所示蛋白质的免疫印迹:转染对照pGL2siRNA或ZNRF3siRNA后，稳定表达空载体(EV)、siRNA抗性ZNRF3或缺乏RING结构域(Λ RING)的ZNRF3的HEK293-STF细胞的Wnt报道基因测定。误差棒表示标准差(η = 4)。所示蛋白质是磷酸化Dvl2(上部条带)；pLRP6,磷酸化的LRP6。LRP6印迹中的下部条带是ER形式的蛋白质,其不受ZNRF3影响。Dvl2是体节极性蛋白Dishevelled同系物。
[0027]图7是一组聚丙烯酰胺凝胶图片，显示生物素化稳定表达Myc_FZD8的HEK293细胞后，通过neutravidin小珠结合的总Myc_FZD8和细胞表面Myc_FZD8 (Frizzled8)的免疫印迹。用对照pGL2siRNA或ZNRF3siRNA转染细胞。TCL，总细胞裂解物。
[0028]图8是一组条形图，鉴定调节Wnt信号转导的两种ZNRF3hFab。具体而言，该条形图显示ZNRF3抗体提高STF活性。在缺乏和存在5% Wnt3a条件培养基的情况下用50 μ g/ml ZNRF3抗体或对照抗体过夜处理HEK293-STF细胞，并进行STF萤光素酶报道基因测定。
[0029]图9是一组聚丙烯酰胺凝胶图片，显示R-反应蛋白(RSPO)、LGR4和ZNRF3的共免疫沉淀。用RSP01-GFP条件培养基(CM)处理共表达LGR4-HA和Myc_ZNRF3 Δ RING的HEK293细胞I小时，用抗-Myc抗体免疫沉淀细胞裂解物，溶解免疫沉淀，并用抗-HA、抗-Myc和抗-GFP抗体印迹。此图显示RSPOl增强ZNRF3和LGR4之间的相互作用。
[0030]图10是一组条形图，显示过表达ZNRF3E⑶-TM(大部分胞内域截短的ZNRF3突变体)特异地抑制RSPOl而不是Wnt3a诱导的STF活性。用Wnt3a或RSPOl Δ C过夜处理稳定表达空载体(EV)或ZNRF3ECD-TM的HEK293-STF细胞，并进行STF萤光素酶报道基因测定。
[0031]图11 是显示 IgG-AbI 和 igG-Ab2 在SuperTopFlash? (stf)报道基因测定中的刺激效应的条形图。
[0032]发明详述
[0033]本发明提供以下:第一，ZNRF3和RNF43是细胞表面蛋白，因此有可能在抗体结合ZNRF3或RNF43后作为药物靶点。第二，ZNRF3和RNF43是β -联蛋白和Wnt信号转导途径的负调节物。通过使用siRNA或通过表达显性失活突变体ZNRF3蛋白质来抑制ZNRF3导致Wnt信号转导的增加。第三，RNF43是ZNRF3的功能同系物。第四，与蛋白质的胞外域结合的抗ZNRF3抗体模拟通过使用siRNA或通过表达显性失活突变体ZNRF3蛋白来抑制ZNRF3，从而导致fct信号转导的增强。第五，与蛋白质的胞外域结合的多种类型的抗ZNRF3或RNF43抗体可以通过产生具有特异性结合的抗体的已知方法来产生。第六，在体内，ZNRF3的抑制增强Wnt/ β -联蛋白信号转导，并破坏Wnt/PCP信号转导。第七，可以用施用治疗性抗体的已知方法来实现与蛋白质的胞外域结合的抗ZNRF3和RNF43抗体的用途，用于增强Wnt信号转导，从而治疗fct信号转导的不足。第八，由于本发明人已显示R-反应蛋白通过增加ZNRF3和LGR4之间的结合来抑制ZNRF3，一方面与ZNRF3或RNF43结合，另一方面与LGR4、LGR5或LGR6结合的双特异性抗体可以用来模拟R-反应蛋白并增强真核细胞中的fct信号转导。第九，由于本发明人已显示膜E3泛素连接酶ZNRF3是R-反应蛋白的分子靶标，与ZNRF3结合的抗体可以用来抑制真核细胞的R-反应蛋白活性。
[0034]ZNRF3 和 RNF43 是细胞表面蛋白。锌 / 环指蛋白 3 (ZNRF3, Swiss-ProtQ9ULT6, SEQID NO:1)和环指蛋白 43(RNF43, Swiss-Prot Q68DV7, SEQ ID NO:2)是结构上相关的环指蛋白。每种蛋白质包含信号肽、胞外域、跨膜结构域和胞内环结构域(非典型锌指结构域)。
[0035]
【权利要求】
1.与跨膜E3泛素连接酶的胞外域特异地结合的分离的抗体或其抗原结合片段，其中: (a)所述跨膜E3泛素连接酶选自ZNRF3和RNF43;和 (b)所述抗体与所述跨膜E3泛素连接酶的胞外域的结合增强真核细胞中的Wnt信号转导，其中所述跨膜E3泛素连接酶在所述真核细胞的表面上。
2.权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述增强的fct信号转导可以在体外测定中检测。
3.权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含至少一条经遗传改造的多肽。
4.权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段从所述抗体或抗原结合片段的氨基端至羧基端包含三个区域: (a)第一区域，其具有选自SEQ ID N0:31、SEQ ID N0:37SEQ ID NO:43,SEQ ID N0:49、SEQ ID NO:55, SEQ ID N0:6U SEQ ID N0:9U SEQ ID NO:97、SEQ ID NO: 103, SEQ IDNO:109,SEQ ID NO:115,SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:127,SEQ ID NO:133,SEQ ID NO:139、SEQ ID NO: 145、SEQ ID NO: 151 和 SEQ ID NO: 157 的肽序列； (b)第二区域，其具有选自SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:50,SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO: 104, SEQ IDNO:110,SEQ ID NO:116,SEQ ID NO:122,SEQ ID NO:128,SEQ ID NO:134,SEQ ID NO:140、SEQ ID NO: 146、SEQ ID NO: 152 和 SEQ ID NO: 158 的肽序列；和 (c)第三区域，其具有选自SEQ ID NO:33,SEQ ID NO:39,SEQ ID NO:45,SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO: 105, SEQ IDNO:1lUSEQ ID NO: 117,SEQ ID NO: 123,SEQ ID NO: 129,SEQ ID NO: 135,SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 147、SEQ ID NO: 153 和 SEQ ID NO: 159 的肽序列。
5.权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段从所述抗体或抗原结合片段的氨基端至羧基端包含三个区域: (a)第一区域，其具有选自SEQ ID NO:34,SEQ ID NO:40,SEQ ID NO:46,SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 106, SEQ IDNO:112,SEQ ID NO:118,SEQ ID NO:124,SEQ ID NO:130,SEQ ID NO:136,SEQ ID NO:142、SEQ ID NO: 148、SEQ ID NO: 154 和 SEQ ID NO: 160 的肽序列； (b)第二区域，其具有选自SEQ ID NO:35,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 107, SEQ IDNO:113,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:125,SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:137,SEQ ID NO:143、SEQ ID NO: 149、SEQ ID NO: 155 和 SEQ ID NO: 161 的肽序列；和 (c)第三区域，其具有选自SEQ ID NO:36,SEQ ID NO:42,SEQ ID NO:48,SEQ ID NO:54,SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 108, SEQ IDNO:114,SEQ ID NO:120,SEQ ID NO:126,SEQ ID NO:132,SEQ ID NO:138,SEQ ID NO:144、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 156 和 SEQ ID NO: 162 的肽序列。
6.权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其中: (a)所述抗体或抗原结合片段包含一条或多条多肽； (b)所述多肽中的至少一条从所述抗体或抗原结合片段的氨基端至羧基端包含三个区域: (1)第一区域，其具有选自SEQ ID N0:31、SEQ ID N0:37SEQ ID NO:43,SEQ ID N0:49、SEQ ID NO:55, SEQ ID N0:6U SEQ ID N0:9U SEQ ID NO:97、SEQ ID NO: 103, SEQ IDNO:109,SEQ ID NO:115,SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:127,SEQ ID NO:133,SEQ ID NO:139、SEQ ID NO: 145、SEQ ID NO: 151 和 SEQ ID NO: 157 的肽序列； (2)第二区域，其具有选自SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:50,SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO: 104, SEQ IDNO:110,SEQ ID NO:116,SE Q ID NO:122,SEQ ID NO:128,SEQ ID NO:134,SEQ ID NO:140、SEQ ID NO: 146、SEQ ID NO: 152 和 SEQ ID NO: 158 的肽序列；和 (3)第三区域，其具有选自SEQ ID NO:33,SEQ ID NO:39,SEQ ID NO:45,SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO: 105, SEQ IDNO:1lUSEQ ID NO: 117,SEQ ID NO: 123,SEQ ID NO: 129,SEQ ID NO: 135,SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 147、SEQ ID NO: 153 和 SEQ ID NO: 159 的肽序列；和 (c)所述多肽中的至少一条从所述抗体或抗原结合片段的氨基端至羧基端包含三个区域: (1)第一区域，其具有选自SEQ ID NO:34,SEQ ID NO:40,SEQ ID NO:46,SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 106, SEQ IDNO:112,SEQ ID NO:118,SEQ ID NO:124,SEQ ID NO:130,SEQ ID NO:136,SEQ ID NO:142、SEQ ID NO: 148、SEQ ID NO: 154 和 SEQ ID NO: 160 的肽序列； (2)第二区域，其具有选自SEQ ID NO:35,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:65、 SEQ ID NO:95、 SEQ ID N0:10U SEQ ID NO:107, SEQ IDNO:113,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:125,SEQ ID N0:131、SEQ ID NO:137,SEQ ID NO:143、SEQ ID NO: 149、SEQ ID NO: 155 和 SEQ ID NO: 161 的肽序列；和 (3)第三区域，其具有选自SEQ ID NO:36,SEQ ID NO:42,SEQ ID NO:48,SEQ ID NO:54,SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 108, SEQ IDNO:114,SEQ ID NO:120,SEQ ID NO:126,SEQ ID NO:132,SEQ ID NO:138,SEQ ID NO:144、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 156 和 SEQ ID NO: 162 的肽序列。
7.权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段的肽序列与这样的序列具有至少95%的序列同一性，所述序列选自:SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:5,SEQID NO:67,SEQ ID NO:69,SEQ ID N0:7USEQ ID NO:73,SEQ ID NO:75,SEQ ID NO:77,SEQID NO:79,SEQ ID N0:81、SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:85,SEQ ID N0:87 和 SEQ ID N0:89。
8.权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段的肽序列与这样的序列具有至少95%的序列同一性，所述序列选自:SEQ ID NO:4,SEQ ID N0:6、SEQID NO:68、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:78、SEQID NO:80、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:88 和 SEQ ID NO:90。
9.权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其中: (a)所述抗体或抗原结合片段包含一条或多条多肽； (b)所述多肽中的至少一条与这样的序列具有至少95%的序列同一性，所述序列选自:SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:67,SEQ ID NO:69,SEQ ID N0:71、SEQ ID N0:73、SEQ ID NO:75,SEQ ID NO:77,SEQ ID NO:79,SEQ ID N0:8USEQ ID NO:83,SEQ ID N0:85、SEQ ID N0:87 和 SEQ ID NO:89 ;和 (c)所述多肽中的至少一条与这样的序列具有至少95%的序列同一性，所述序列选自:SEQ ID NO:4,SEQ ID N0:6、SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:70,SEQ ID NO:72,SEQ ID NO:74,SEQ ID NO:76,SEQ ID NO:78,SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:82,SEQ ID NO:84,SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:88 和 SEQ ID NO:90。
10.权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其在受益于fct信号转导增强的疾病或其他适应症的治疗中用作药物。
11.权利要求10的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述受益于fct信号转导增强的疾病或其他适应症选自黏膜炎短肠综合征、胃肠黏膜中的细菌移位、肠毒性或肠病性感染性腹泻、乳糜泻、非热带性口炎性腹泻、乳糖不耐症和其中膳食摄入量导致黏膜绒毛钝化的其他病症、吸收障碍、萎缩性胃炎、骨质疏松、骨折、代谢疾病、糖尿病、神经变性疾病、黑素瘤和需要组织再生、组织修复或伤口愈合的病症。
12.权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段进一步特异地结合另一细胞表面蛋白来增强真核细胞中的fct信号转导，其中所述另一细胞表面蛋白选自LGR4、LGR5和LGR6。
13.权利要求1的抗体或抗原结合片段，其在可药用载体中。
14.与跨膜E3泛素连接酶的胞外域特异地结合的分离的抗体或其抗原结合片段，其在受试者中在受益于fc t信号转导减弱的疾病或其他适应症的治疗中用作药物，其中: (a)所述跨膜E3泛素连接酶选自ZNRF3和RNF43;和 (b)所述抗体或抗原结合片段与所述跨膜E3泛素连接酶的结合在所述受试者中阻断R-反应蛋白刺激的fct信号转导。
15.权利要求14的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述疾病或其他适应症选自癌症、硬化性骨化病、特发性肺纤维化和心肌肥厚。
16.可药用载体中的跨膜E3泛素连接酶的可溶性胞外域，其在受试者中在受益于Wnt信号转导减弱的疾病或其他适应症的治疗中用作药物，其中: (a)所述跨膜E3泛素连接酶选自ZNRF3和RNF43;和 (b)所述跨膜E3泛素连接酶的可溶性胞外域特异地结合R-反应蛋白以在所述受试者中阻断R-反应蛋白刺激的fct信号转导。
17.权利要求16的可溶性胞外域，其中所述疾病或其他适应症选自癌症、硬化性骨化病、特发性肺纤维化和心肌肥厚。
18.权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段，其在II型糖尿病的治疗中用作药物，其中以以下方式对患有II型糖尿病的受试者施用所述抗体或抗原结合片段； (a)在对所述受试者施用二肽肽酶-4ΦΡΡ-4)抑制剂之前施用所述抗体或抗原结合片段，或 (b)将DPP-4抑制剂与所述抗体或抗原结合片段同时施用于所述受试者，或 (c)在对所述受试者施用DPP-4抑制剂之前施用所述抗体或抗原结合片段，然后将DPP-4抑制剂与所述抗体或抗原结合片段同时施用于所述受试者。
19.权利要求18的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述DPP-4抑制剂是维格列汀(Galvus?)
【文档编号】A61K38/17GK104080471SQ201280060847
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2012年10月12日 优先权日:2011年10月14日
【发明者】F·从, H·郝, L·B·科立克斯泰恩, R-F·孔, A·泰勒, Y·谢 申请人:诺华股份有限公司