包含白细胞凝集素的美容组合物的生产方法及其用途

包含白细胞凝集素的美容组合物的生产方法及其用途
【专利摘要】本发明涉及包含从鲑科（Salmonidae）孵化液获得或可以从其获得的多肽的美容品组合物、生产所述组合物的方法以及它们在皮肤的各种美容应用中的用途，尤其是用于改善哺乳动物皮肤的美容外观。
【专利说明】包含白细胞凝集素的美容组合物的生产方法及其用途
[0001]本发明涉及可源自于鲑科(Salmonidae)孵化液的多肽在用于皮肤的各种应用中的用途。具体来说，本文中所定义的多肽和包含所述多肽的组合物可用于改变、优选地改善皮肤的美容外观。
[0002]皮肤是更易受攻击的人体器官之一。皮肤总是与外界刺激直接或间接地相互作用，并且常常暴露于环境因子并受其影响。事实上，皮肤可以被看做与外部世界接触的前线。这种持续的暴露能够引起皮肤、特别是皮肤美容外观的令人不快和/或不想要的物理和可见变化。尽管这样的变化可能不危及个体的健康，但这样的变化可能令人身体不适或看起来不舒服。事实上，由于皮肤清晰可见，因此皮肤外观的变化能够引起心理压力。因此，对维持、恢复或改善皮肤状况、特别是恢复皮肤的青春外观的有效治疗，存在着持续不断的需求。
[0003]皮肤形成人体的最大器官，占个人重量的约12-16%。它作为外部世界和我们体内受控环境之间的屏障和调节势力两者，执行许多至关重要的作用。
[0004]皮肤由3层构成，即表皮、真皮和皮下组织。表皮是皮肤最外部的上皮层。它充当物理屏障，防止从身体失水，并防止物质和有机体进入体内。它的厚度随身体部位而变。
[0005]表皮由分层的鳞状上皮构成，即它由扁平细胞层构成。皮肤、毛发和指甲是角质化的，意味着它们具有由被称为角蛋白的蛋白质构成的死亡的、硬化的疏水表面。由于表皮的与角化细胞相关的细胞外脂类的含量，使表皮不具有渗透性，尤其是在表皮的中间层(透明层)中。粘膜(例如食道、口咽腔、生殖器官等的粘膜)主要是非角质化且潮湿的。表皮具有三种主要细胞类型，即角化细胞(皮肤细胞)、黑素细胞(产色素细胞)和朗氏细胞(免疫细胞)。梅克尔细胞是第四种不占优势的表皮细胞。
[0006]角化细胞随着向外移动而成熟和分化，并伴有角蛋白的累积。它们最终脱落或擦落。它们形成四个或五个明显不同的层，从最浅表到最深处为:(i)具有无细胞核的死亡干透的坚硬细胞的角质层；(ii)具有含有嗜碱性颗粒的细胞并通过薄的透明层而与角质层向外隔开的颗粒层；(iii)刺状层(多刺、刺状或棘细胞层)，其中细胞随着向上移动变得越来越扁平，以及(iv)具有柱状(长)再生细胞的基底层。
[0007]紧靠表皮下方的是基膜，其是位于表皮与真皮之间的特化结构。
[0008]真皮是皮肤的纤维结缔组织或支持层。主要纤维是交织的胶原蛋白纤维和弹性蛋白。
[0009]皮下组织是紧靠真皮和表皮下方的脂肪层。它也被称为下皮或膜。皮下组织主要由脂肪细胞、神经和血管构成。
[0010]在皮肤的下层颗粒层中产生新的上皮皮肤细胞。细胞随时间向皮肤表面迁移并变得更加酸性。在其30天的迁移期间，它们死亡并被角蛋白饱和。角蛋白和相关的脂类是重要的，因为它们保护皮肤抵御外部因素。
[0011]许多因素可能造成皮肤美容外观劣化，这些因素包括疾病、受伤、环境因素、年龄、激素水平、药物、外部施加或摄入的材料、遗传状况或这些与其他因素的组合。与衰老相关的皮肤美容外观劣化是普遍的因素，特别是光老化即皮肤日射病。这种劣化可以在皮肤中的不规则或异常处看到，其可能表现为例如皮肤干燥、皱纹、细纹、松弛加重(松垂)或色素
沉着改变。
[0012]光老化是用于由长期UVA和UVB暴露引起的特征性变化的术语。生物功能和管控代谢应激的能力的降低，是所述老化过程的主要结果之一。老化是复杂的渐进性过程，其也引起皮肤的功能和美观变化。
[0013]光老化是归因于皮肤连续长期暴露于约245_290nm的紫外(UV)辐射的皮肤老化过程，所述紫外辐射可以来自于自然光或合成光。因此，光老化也被称为由UVA和UVB射线引起的皮肤老化，特别是面部、耳、颈部和手的皮肤老化。
[0014]皮肤干燥和/或脱落是老化皮肤的最常见征兆之一。尽管某些个体更易于发生皮肤干燥和/或脱落，但皮肤干燥和/或脱落现象能够影响任何人，而与年龄、性别或皮肤类型无关。 [0015]当皮肤外层(具有透明层的角质层)的水通过例如经表皮水分丢失(TEWL)而耗尽时，发生皮肤干燥。当这一层被良好保湿时，它通过皮肤的失水最小并有助于抵御刺激物、过敏原和病菌。然而，当角质层干透时，其保护功能下降。这使得失水更多，导致皮肤易于受到环境因素的影响。
[0016]理想情况下，角质层具有10%至30%的水含量。这种水使得皮肤柔软、平滑并具有柔性质地，即与皮肤的青春外观相关的特征。所述水来自大气、皮肤的下层和汗。由皮肤腺产生的油和由皮肤细胞产生的脂肪物质充当天然保湿剂，将角质层密封在水中。
[0017]身体通过蒸发从皮肤表面连续损失水(TEWL)。在正常条件下，损失速率缓慢，且水可充分更替。当失水超过水的更替且角质层的水含量降低至低于10%时，出现皮肤干燥的特征性迹象和症状。
[0018]改善或消除皮肤干燥和/或脱落，从而改善皮肤的美容外观的保湿剂，是非常合乎需要的。尽管在本领域内已知许多保湿剂，但对有效且温和的天然产品仍存在需求。
[0019]表现出不想要或过量色素沉着、即色素沉着过度的表皮细胞，例如黄褐斑，是老化皮肤的另一种常见征兆。传统上，可以使用去角质处理来除去对皮肤的美容外观不利的表皮细胞。
[0020]去角质处理移除表皮的外层以露出下面更新的皮肤细胞。去角质可以通过物理手段(例如磨皮)或通过化学手段来实现。化学去角质剂包括含有水杨酸、乙醇酸、水果酶、柠檬酸或苹果酸的磨砂剂，并且可由皮肤科医生以高浓度使用，或在非处方产品中以较低浓度应用。化学去角质可涉及使用含有α-羟基酸(AHA)或羟基酸(BHA)或起到使在细胞连接处将细胞保持在一起的胶状物质松散而使其渐渐松开的作用的酶的产品。这种类型的去角质被推荐用于人们治疗痤疮。
[0021]去角质处理的最大缺点是用于实现所述去角质处理的一些产品和方法的高价格。去角质在开始时将导致皮肤有些变红。在化学脱皮接近结束时，皮肤将磨砂，在皮肤表面上颜色从亮白色变为灰色。
[0022]因此，与去角质处理相比对皮肤更加温和的减少皮肤色素沉着过度的有效方法，是合乎需要的。
[0023]除了老化之外，身体损伤可能降低皮肤的美容/美学外观。例如，由例如少量刮、擦等对皮肤上部(表面)层、即表皮和/或真皮的浅表损伤，可能在皮肤上造成不想要的瑕疵。由例如创伤、切割、感染、痤疮等引起的皮肤的身体损伤可能造成疤痕。
[0024]创伤是尤其由机械、化学、热或病原性手段引起的外部或内部损伤，其造成结构性组织完整性的物理破坏。
[0025]疤痕是在损伤后代替正常皮肤的纤维组织(纤维化)区域。疤痕由皮肤和身体其他组织中创伤修复的生物过程造成。因此，疤痕形成是愈合过程的天然部分。除了非常少的病损之外，每个创伤(例如事故、疾病或手术后)产生一定程度的疤痕形成。
[0026]疤痕组织在功能和美观上次于正常的未受伤皮肤。这种次等性据信是在新组织形成期间产生的胶原蛋白束在真皮内的排列的结果。正常皮肤内的胶原蛋白束排列成复杂的三维交织排列方式(通常被称为“编篮”排列方式)，其为皮肤提供高水平弹性和从损伤的回弹能力。疤痕组织内的胶原蛋白束以更平面的方式排列，其中束平行于皮肤表面取向。三维编织方式的失去及其被胶原蛋白束的平行排列的替代，据信造成了组织疤痕形成位点处美观的丧失。
[0027]疤痕形成也可能由皮肤的单个层的破坏引起。例如，拉伸痕(也称为纹)由真皮撕裂引起。拉伸痕通常是皮肤快速拉伸的结果，所述拉伸与快速生长(通常在青春期)或体重增加(例如妊娠、增肌或脂肪快速增加)或在某些情况下与皮肤上超过真皮弹性的剧烈牵拉力相关。拉伸痕也可能受到与青春期、妊娠、增肌、用于变性的激素替代疗法等相伴的激素变化的影响。这些类型的痕迹被称为萎缩纹、妊辰纹(striae vergetures)、膨胀纹、表皮膨胀纹、妊娠纹(striae gravidarum)(在由妊娠引起的情形中)、萎缩性线纹、白线纹或简单称为纹。
[0028]因此，对适合于促进皮肤美观的治疗仍存在需求。换句话说，改善皮肤美容外观的方法是合乎需要的。具体来说，对于恢复老化皮肤的青春外观和/或对抗老化皮肤的征兆的方法，存在需求。对于改善、恢复或抵抗浅表受损皮肤例如有疤痕的皮肤外观或由表皮和/或真皮的少量损伤引起的瑕疵的方法，也存在着需求。
[0029]现在已令人吃惊地发现，在鲑科孵化液中发现的某些分子、即被称为白细胞凝集素的多肽，对于改善皮肤的美容外观、特别是减少与老化皮肤相关的身体征兆和恢复浅表受损皮肤的外观来说，特别有效。
[0030]所述蛋白最初在鱼中鉴定到并从其中纯化，并描述在W02010/049688中，其全部内容通过参考并入本文。鲑鱼蛋白具有255个氨基酸(SEQ ID NO:1)。这是所述多肽的前肽形式，其含有19个氨基酸的N-端肽，表明它定向到溶酶体进行随后的分泌(即进入卵黄周空间)。
[0031]所述多肽的氨基酸序列允许产生表位特异性抗体，其进而能够根据所分析的组织鉴定所述蛋白的许多(2-8个)可能的同种型。从鲑鱼已经分离到至少两个mRNA，其含有很少序列差异，在多肽水平上仅产生7个变化。也已从鲑鱼白细胞鉴定到所述蛋白的截短的形式(参见SEQ ID N0:2)。
[0032]所述蛋白与任何已知蛋白具有很少相似处，与任何已知蛋白显示出低于50%的相似性。在小结构域中观察到与tachylolectin的一定相似性。
[0033]已令人吃惊地发现，这些蛋白对皮肤的美容外观具有显著效果。尽管不希望受到理论限制，但实施例证实了白细胞凝集素能够抑制作为锌依赖性内切肽酶的基质金属蛋白酶(MMP)从真皮成纤维细胞的释放。这些酶能够降解皮肤的细胞外基质中存在的许多不同类型的蛋白质，例如胶原蛋白，并且据信对这些酶的释放的抑制至少部分造成了这些蛋白对皮肤的美容/酶学外观的效果。
[0034]因此，在最广泛意义上，本发明可以被视为提供了本文中所描述的多肽，其用于促进皮肤的美观或用于促进皮肤美观的方法中。换句话说，本文所描述的多肽可用于改善皮肤的美容外观或可用于改善皮肤美容外观的方法中。在特别优选情况下，本发明可以被视为提供了本文中描述的多肽，所述多肽用于恢复老化皮肤的青春外观和/或对抗老化皮肤的征兆，或用于获得这种效果的方法中。本发明的另一个优选方面可以被视为提供了本文所描述的多肽，所述多肽用于改善、恢复或抵抗浅表受损皮肤例如有疤痕的皮肤的外观或由表皮和/或真皮的少量损伤造成的瑕疵，或用于获得这种效果的方法中。
[0035]从下面的公开内容可以明显看出，本文中描述的多肽可以提供在美容组合物中，所述组合物包含一种或多种生理上可接受或可药用赋形剂和/或稀释剂。
[0036]因此，一方面，本发明提供了:
[0037](i)多肽，其包含在SEQ ID N0.1_4任一个中所示的氨基酸序列或与所述序列有至少90%同一性的序列或任何所述序列的一部分；或
[0038](ii)包含(i)和一种或多种生理上可接受或可药用赋形剂和/或稀释剂的美容组合物，
[0039]其用于改善哺乳动物皮肤的美容外观。
[0040]本发明还提供了用于改善哺乳动物皮肤的美容外观的方法，在所述方法中向所述动物施用如上定义的多肽 或美容组合物。
[0041]本发明的另一方面是如上定义的多肽或美容组合物的用途，用于制造药物以改善哺乳动物皮肤的美容外观。
[0042]当在本文中提到时，“多肽”是具有优选地超过50、100、150、200或250个残基和/或少于500、400、300、200或100个残基或选自其中的范围的分子。当在本文中提到时，“部分”优选地包含它所源自的序列的至少30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240个或更多氨基酸。所述部分可以从所述序列的中央或N-端或C-端部分获得。优选地，所述部分从多肽的N-端末端，例如从前50、100或150个残基获得。或者，部分优选地从多肽的C-端末端，例如从最后50、100或150个残基获得。特别优选的情况包括所述多肽的截短，以例如除去信号肽或在天然存在的变体中不存在的部分。优选的阶段出现在N-端末端，并且长度为I至50个，例如I至10、20、30或40个，或5至40个，例如10至35个残基。
[0043]优选地，所述序列与相比较的序列有至少95、96、97、98或99%的同一性。
[0044]序列同一性可以使用例如使用SWISS-PR0T蛋白质序列库，利用FASTA p印-cmp来确定，其中使用可变的pamfactor，并将间隙产生罚分设为12.0,间隙延伸罚分设为4.0,窗口为2个氨基酸。所述比较优选地在序列的全部长度上进行，但是也可以在较小的比较窗口，例如小于200、100或50个连续氨基酸内进行。
[0045]优选地，这样的序列同一性相关的多肽在功能上等同于在叙述的序列号中示出的多肽。这样的功能上等同的多肽可以采取如下所述的衍生物的形式。同样地，可以在不影响如下所述的多肽的序列的情况下对具有序列号中列出的序列的多肽进行修饰。
[0046]此外，如本文中所述的“部分”可以是功能等同物。优选地，这些部分满足本文中提到的同一性(相对于可比区域)条件。
[0047]正如本文中所提到的，为了实现“功能等同”，所述多肽相对于母体分子(即通过例如氨基酸取代衍生出所述多肽的分子)，在发挥美容功能方面可以显示出效能的一定下降，但优选地同样有效或更有效。由此，功能等同物涉及如后文中所述可有效改善皮肤的美容外观的多肽。这可以例如通过执行实施例中所指的体外分析，以定性或定量方式对衍生多肽与其起源多肽的效果进行比较来试验。在可能得到定量结果的情况中，衍生物的有效性为母体多肽的至少30、50、70或90%。或者，可以通过例如在体外细胞培养物中分析对MMP释放的抑制，来进行体外试验。
[0048]与天然存在的蛋白质有关的或其衍生的功能等同的蛋白质，可以在不破坏分子的功能条件下，通过单次或多次氨基酸替代、添加和/或删除对天然氨基酸序列进行修饰(前提是它们满足上面提到的序列同一性要求)而得到。优选地，天然序列具有少于20个替代、添加或删除，例如少于10、5、4、3、2或个这样的修饰。这样的蛋白质由“功能等同的核酸分子”编码，所述核酸分子通过一个或多个碱基的适当替代、添加和/或删除产生。
[0049]优选的功能等同物是“添加”变体，其中产生的氨基和/或羧基末端融合蛋白质或多肽包含融合到母体多肽上的另外的蛋白质或多肽。
[0050]特别优选的功能上等同的变体是天然生物变体，特别是物种内或来自于鲑(Salmonidae)科、尤其是鲑鱼(salmo)和大马哈鱼(Oncorhynchus)亚科的不同属中的等位基因变体或地理变体，以及使用已知技术制备的衍生物。鲑科的特别优选的物种包括大西洋鲑(Salmo salar)和太平洋鲑(Oncorhynchus masou)。
[0051]如上所述的多肽，包括通过例如化学修饰，包括通过去糖基化或糖基化进行修饰而不影响多肽序列的多肽。这样的多肽可以通过多肽的不影响功能性的分离后修饰，例如特定残基的某些糖基化、甲基化等来制备。
[0052]按照本发明使用或用于本发明的组合物中的多肽也可采取肽模拟物的形式，所述肽模拟物可被认为是其中多肽的功能特征得以保持，但存在于不同、例如非肽结构的背景中的衍生物。这样的肽模拟物已被成功开发并用于其他、特别是医疗应用中。
[0053]肽模拟物、尤其是非肽分子，可以通过各种过程产生，所述过程包括基于构象的药物设计、筛选、集中的文库设计和经典药物化学。不仅可以使用非天然氨基酸或其他有机结构单元的低聚物，而且可以通过本领域中已知的方法，使用糖类、杂环或大环化合物或任何有机分子，所述有机分子包含可以提供模拟所述肽的三维构象的相同性质的分子静电表面的结构元素和构象。
[0054]由此，肽模拟物与肽主链的类似性可能很低或不类似。肽模拟物可以包含完全合成的非肽形式(例如基于具有合适取代基的糖类主链)，或者可以保留其所基于的肽的一种或多种要素，例如通过衍生一个或多个氨基酸或利用可替选的非肽组分代替一个或多个氨基酸。肽状模板包括假肽和环肽。对于肽功能来说被认为是冗余的结构要素可以被最少化以便仅保持支架功能 ，或在适当时除去。
[0055]当肽模拟物保留一个或多个肽要素、即超过一个氨基酸时，这样的氨基酸可以被其非标准的或结构类似物代替。保留在序列中的氨基酸还可以被衍生或修饰(例如标记、糖基化或甲基化)，只要本发明的多肽的功能性质得以保留即可。肽模拟物被称为“衍生自”特定的多肽序列。这意味着肽模拟物参考限定的多肽序列进行设计，使其保留所述肽的功能必需的结构特征。所述结构特征可以是多肽的特殊侧链或所述结构的氢键势能。这样的特征可以由非肽组分或一个或多个氨基酸残基提供，或者可以对连接多肽的所述氨基酸残基的键进行修饰以提高多肽的某些功能如稳定性或蛋白酶抗性，同时保留多肽的功能必需的结构特征。
[0056]可使用的非标准的或结构类似的氨基酸的实例是D-氨基酸、酰胺同电子排列体(例如N-甲基酰胺、反向-翻转酰胺、硫代酰胺、硫酯、磷酸酯、酮亚甲基、羟基亚甲基、氟代乙烯基、(E)-乙烯基、亚甲基氛基、亚甲基硫基或链烧)、L-N-甲基氛基酸、D-α-甲基氛基酸、D-N-甲基氨基酸。非常规的氨基酸的实例列于表1中。
[0057]表1
[0058]
【权利要求】
1.一种用于改善哺乳动物皮肤的美容外观的方法，在所述方法中，向所述动物给药: (i)多肽，其包含在SEQID N0.1-4任一个中所示的氨基酸序列或与所述序列有至少90%同一性的序列或任何所述序列的一部分；或 (ii)包含(i)和一种或多种可药用赋形剂和/或稀释剂的美容组合物。
2.权利要求1的方法，其中所述多肽或组合物通过或可以通过至少包含下列步骤的方法来获得: a)将鱼卵、优选地鲑鱼卵悬浮在极小体积的水中； b)诱导所述卵的同步快速孵化，优选地使对于超过95%的胚胎来说，孵化在不到2小时内完成； c)对所述孵化的卵进行过滤以获得孵化液；以及 d)对所述孵化液进行过滤以获得所述多肽和/或组合物，其中过滤所述孵化液的步骤至少包括下列步骤: (i)使用孔眼尺寸为至少5 μ m的滤器过滤所述孵化液，并收集滤液； (?)使用孔眼尺寸为0.30-0.60 μ m的滤器过滤来自于步骤(i)的滤液，并收集滤液； (iii)用可药用缓冲液交换来自于步骤(ii)的滤液中的水； (iv)使用排除尺寸为至少SOkDa的滤器过滤从步骤(iii)获得的溶液，并收集滤液；以及 (v)使用孔眼尺寸为0.15-0.30 μ m的滤器过滤来自于步骤(iv)的滤液，并收集滤液，其中所述滤液提供包含所述多肽的组合物。
3.权利要求1的方法，其中所述多肽或组合物通过或可以通过至少包含下述步骤的方法来获得: a')将鱼卵、优选地鲑鱼卵悬浮在极小体积的水中； b')诱导所述卵的同步快速孵化，优选地使对于超过95%的胚胎来说，孵化在不到2小时内完成； c')对所述孵化的卵进行过滤以获得孵化液；以及 d')对所述孵化液进行过滤以获得所述多肽和/或组合物，其中过滤所述孵化液的步骤至少包括下列步骤: (ii )使用孔眼尺寸为至少5 μ m的滤器过滤所述孵化液，并收集滤液； (ii')对来自于步骤(i')的滤液进行离子交换层析并收集洗脱液； (iii/ )用可药用缓冲液交换来自于步骤(iP )的洗脱液中的水；以及Civi )使用孔眼尺寸为0.15-0.30μπι的滤器过滤从步骤(iii')获得的溶液并收集滤液，其中所述滤液提供包含所述多肽或其部分的组合物。
4.权利要求3的方法，其包括使用孔眼尺寸为0.30-0.60 μ m的滤器过滤来自于步骤(i' )的滤液并收集滤液的其他步骤。
5.权利要求3或4的方法，其中所述步骤(ii')包括: (a)将所述滤液装载到离子交换柱、优选地DEAE(二乙基氨基乙基)柱上；(b)用适合的缓冲液，优选地包含pH8.5的20mM Tris-HCl的清洗液清洗所述柱子； (c)使用洗脱缓冲液或溶剂从所述柱子洗脱所述多肽，优选其中所述洗脱缓冲液包含另外含有50mM NaCl的所述清洗液；以及(d)收集来自于步骤(c)的洗脱液。
6.权利要求2的方法，其中: a)步骤(i)中的滤器的孔眼尺寸为5-15 μ m，其中所述孔眼尺寸优选地为7 μ m ; b)步骤(ii)中的滤器的孔眼尺寸为0.35-0.55 μ m，其中所述孔眼尺寸优选地为0.45 μ m ； c)步骤(iv)中的滤器的排除尺寸为80-120kDa，其中所述排除尺寸优选地为IOOkDa；和/或 d)步骤(V)中的滤器的孔眼尺寸为0.22 μ m。
7.权利要求3至5任一项的方法，其中: a)步骤(i')中的滤器的孔眼尺寸为5-15 μ m，其中所述孔眼尺寸优选地为7 μ m ; b)权利要求4中滤器的孔眼尺寸为0.35-0.55 μ m，其中所述孔眼尺寸优选地为0.45 μ m ;和 / 或 c)步骤(iV)中的滤器的孔眼尺寸为0.22 μ m。
8.权利要求2至7任 一项的方法，其中步骤(iii)或(iii')包含渗滤。
9.权利要求1至8任一项的方法，其中所述皮肤是老化的皮肤或有疤痕的皮肤。
10.权利要求1至9任一项的方法，其中在所述动物中改善皮肤的美容外观包含皮肤日射病的治疗。
11.权利要求1至10任一项的方法，其中所述改善包含减少或防止皱纹、细纹、色素沉着过度、松弛、皮肤干燥、脱落和/或经表皮水分丢失的美容外观或普遍程度。
12.权利要求1至11任一项的方法，其中所述动物的皮肤被保湿。
13.权利要求1至9任一项的方法，其中在所述动物中改善皮肤的美容外观包括减少疤痕组织或使疤痕组织最小化或改善疤痕的美容外观。
14.权利要求13的方法，其中所述疤痕是受伤或纹的结果。
15.权利要求14的方法，其中所述疤痕是痤疮疤痕。
16.权利要求14的方法，其中所述纹是萎缩纹、妊娠纹、膨胀纹、表皮膨胀纹、妊娠纹、萎缩性线纹或白线纹。
17.权利要求13至16任一项的方法，其中所述疤痕处于皮肤愈合的增殖或成熟阶段，优选成熟阶段。
18.权利要求1至17任一项的方法，其中所述多肽或美容组合物用于表面施用到所述皮肤。
19.权利要求1至11任一项的方法，其中在所述动物中改善皮肤的美容外观包括减少对表皮和/或真皮的浅层皮肤损伤或使对表皮和/或真皮的浅层皮肤损伤最小化。
20.权利要求1至8任一项中所限定的多肽或美容组合物，其用于改善哺乳动物皮肤的美容外观，优选地其中所述皮肤如权利要求9中所限定，所述美容外观的改善如权利要求10至17或19任一项中所限定，和/或所述施用如权利要求18中所限定。
21.权利要求1至8任一项中所限定的多肽或美容组合物在制造药物中的应用，所述药物用于改善哺乳动物皮肤的美容外观，优选地其中所述皮肤如权利要求9中所限定，所述美容外观的改善如权利要求10至17或19任一项中所限定，和/或所述施用如权利要求18中所限定。
22.—种美容组合物，其可从权利要求2至8任一项中所限定的方法获得，所述方法还包括从来自于步骤(V)或(iV )的滤液制备所述美容组合物的步骤。
23.权利要求1至22任一项的方法、应用、多肽或美容组合物，其中所述多肽或美容组合物被涂布、浸溃或化学键合在产品、材料或装置上。
24.一种按照权利要求2至8任一项中限定的方法来分离多肽的方法。
【文档编号】A61K38/17GK103841954SQ201280031230
【公开日】2014年6月4日 申请日期:2012年6月25日 优先权日:2011年6月24日
【发明者】贝恩特·斯·沃瑟尔, 汉斯·克里斯蒂安·莱伦, 法妮·法戈 申请人:阿克生物科技公司