专利名称：一种二色补血草提取物及其应用的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及一种二色补血草提取物，具体涉及一种具有a -葡萄糖苷酶抑制活性的二色补血草提取物。
背景技术：
二色补血草是白花丹科补血草属的多年生草本植物，别名血见愁、苍蝇花、蝇子草、燎眉蒿。分布于河北、河南、山西、甘肃、陕西等地。生于海拔500 2 000 m的海滨碱滩、草地沙丘。全草入药，性味甘微涩苦，无毒。主要功能补血益气，止血散瘀。主治功能性子宫出血、宫颈癌、月经不调、肾盂肾炎、胃溃疡等症。二色补血草以其确切的药用价值和极高的生态学价值而备受人们的关注，近几年来对此药材的开发利用也逐渐深入。
a 一葡萄糖苷酶(EC 3. 2. I. 20)又称a 一葡萄糖苷水解酶、麦芽糖酶，它能从低聚糖类底物的非还原端切开〃一 1，4糖苷键，释放出葡萄糖，在机体多种代谢功能中起关键作用。它与许多因代谢紊乱失调引起的疾病如糖尿病、癌症、病毒感染等密切相关。长期以来，人们试图寻找合适的抑制剂，以期对有关疾病进行防治。发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺陷，提供一种具有葡萄糖苷酶抑制活性的二色补血草提取物。
为了达到上述目的，本发明提供了一种二色补血草提取物，以二色补血草为原料， 以水或乙醇为溶剂提取，过滤，得到水提取液或乙醇提取液经干燥制得；其中乙醇浓度为 70-95%。
当提取溶剂为水时，二色补血草在用水提取前，先经70-95%的乙醇提取，过滤，取过滤后的二色补血草再用上述提取溶剂水进行提取。
优选方案为水提取液在干燥前先经大孔树脂柱层析，依次采用水和乙醇洗脱，取乙醇洗脱液，干燥即得二色补血草提取物。其中乙醇作为洗脱剂，优选浓度为30-50%。
最佳方案为上述乙醇洗脱液在干燥前先经聚酰胺柱层析，依次采用水和乙醇洗脱，取乙醇部分干燥即得所述二色补血草提取物。其中聚酰胺柱的洗脱方式优选为梯度洗脱，依次采用水、30%、50%、70%和95%乙醇洗脱，分别取各段乙醇洗脱液，干燥。
当提取溶剂为乙醇时；得到的乙醇提取液在干燥前先经过石油醚萃取，经萃取后的提取液经干燥制得二色补血草提取物。
优选方案为乙醇提取液干燥后，用水混悬，经石油醚萃取，萃取后的水相经干燥制得所述二色补血草提取物。
最佳方案为上述经石油醚萃取后的乙醇提取液或水相在干燥前还需经过乙酸乙酯萃取，然后干燥制得上述二色补血草提取物。
其中原料采用二色补血草的地下部分或地上部分。
本发明还提供了上述二色补血草提取物在制备a _葡萄糖苷酶抑制剂方面的应用。
本发明相比现有技术具有以下优点本发明制备的二色补血草提取物相比阳性对照阿卡波糖均具有较高的〃-葡萄糖苷酶抑制活性。同时利用不同极性的溶剂萃取不同的部位，以及通过大孔树脂和聚酰胺柱层析，进行筛选，去除无活性部分，得到更高葡萄糖苷酶抑制活性的提取物。本发明制备的二色补血草提取物能够有效替代现有的〃-葡萄糖苷酶抑制剂，并可作为糖尿病的治疗药物对II型糖尿病治疗进行深入研究。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
二色补血草bicolor Kuntze)采于陕西眉县太白山，葡萄糖苷酶(E. C. 232-604-7)购于 Sigma 公司，(NO. G-5003, Lot. 081K4715)，PNPG 底物购于 Amresco,酶标仪型号为 Tecan Infinite F50.a -葡萄糖苷酶抑制活性在96孔板中测定，IQuLa-葡萄糖苷酶溶液(用O. 067mol/ L PH6. 8 的 PBS 配制成 lU/mL)+20// L0. 067mol/L PH6. 8 的 PBS+2// L 待测样品溶液(IOmg/ ml), 37°C温育 IOmin 后+30//L PNPG (用 0.067mol/L PH6. 8 的 PBS 配制成 10mmol/L)，37 °C温育15 min后在405nm测定吸光度，以阿卡波糖作为阳性对照。抑制率=[(A酶-A酶空)-(A样-A样空)]/ ( A酶-A酶空)*100%产品实施例一取二色补血草地下部分洗干净后干燥、粉碎后用95%的乙醇(10倍量)回流提取2小时，过滤得滤液和滤渣；取滤液减压干燥得提取物Fr. I。
产品实施例二将产品实施例一中得到的滤渣挥干乙醇后，经10倍水煮2小时，水提液干燥后得提取物 Fr. 2。
产品实施例三将产品实施例一中得到的提取物Fr. I用水混悬后用石油醚萃取，萃取得到水相和石油醚相；取石油醚相减压干燥，得石油醚部位的提取物Fr. I. I。
产品实施例四将产品实施例三中萃取后得到的水相经乙酸乙酯萃取，萃取后得到水相和乙酸乙酯相；取乙酸乙酯相减压干燥，得乙酸乙酯部位的提取物Fr. I. 2。
产品实施例五将产品实施例四中经乙酸乙酯萃取后得到的水相，再经正丁醇萃取，得到水相和正丁醇相，减压干燥，得正丁醇部位的提取物Fr. I. 3。
产品实施例六将产品实施例五中经正丁醇萃取后得到的水相减压干燥，得水部位的提取物Fr. I. 4。
产品实施例七取二色补血草地下部分洗干净后干燥、粉碎后用70%的乙醇(10倍量)回流提取2小时，过滤得滤液和滤渣；取滤液减压干燥得提取物Fr. 3。
产品实施例八将产品实施例七中得到的滤渣挥干乙醇后，经10倍水煮2小时，水提液干燥后得提取4物 Fr. 4。
产品实施例九将产品实施例七中得到的提取物Fr. 3用水混悬后用石油醚萃取，萃取得到水相和石油醚相；取石油醚相减压干燥，得石油醚部位的提取物Fr. 3. I。
产品实施例十将产品实施例九中萃取后得到的水相经乙酸乙酯萃取，萃取后得到水相和乙酸乙酯相；取乙酸乙酯相减压干燥，得乙酸乙酯部位的提取物Fr. 3. 2。
产品实施例i^一将产品实施例十中经乙酸乙酯萃取后得到的水相，再经正丁醇萃取，得到水相和正丁醇相，减压干燥，得正丁醇部位的提取物Fr. 3. 3。
产品实施例十二将产品实施例十一中经正丁醇萃取后得到的水相减压干燥，得水部位的提取物 Fr. 3. 4。
产品实施例十三取二色补血草地下部分洗干净后干燥、粉碎后用80%的乙醇(10倍量)回流提取2小时，过滤得滤液和滤渣；取滤液减压干燥得提取物Fr. 5。
产品实施例十四将产品实施例十三中得到的滤渣挥干乙醇后，经10倍水煮2小时，水提液干燥后得提取物Fr. 6。
产品实施例十五将产品实施例十三中得到的提取物Fr. 5用水混悬后用石油醚萃取，萃取得到水相和石油醚相；取石油醚相减压干燥，得石油醚部位的提取物Fr. 5. I。
产品实施例十六将产品实施例十五中萃取后得到的水相经乙酸乙酯萃取，萃取后得到水相和乙酸乙酯相；取乙酸乙酯相减压干燥，得乙酸乙酯部位的提取物Fr. 5. 2。
产品实施例十七将产品实施例十六中经乙酸乙酯萃取后得到的水相，再经正丁醇萃取，得到水相和正丁醇相，减压干燥，得正丁醇部位的提取物Fr. 5. 3。
产品实施例十八将产品实施例十七中经正丁醇萃取后得到的水相减压干燥，得水部位的提取物 Fr. 5. 4。
产品实施例十九取二色补血草的地上部分阴干后粉碎(21kg)，用75L80%的乙醇冷浸一个月，滤液浓缩，滤渣继续用75L80%的乙醇冷浸一个月，滤液合并浓缩得提取物Fr. 7。
产品实施例二十取产品实施例十九中的提取物Fr. 7上DlOl大孔树脂进行柱层析，分别用水、30%、 50%、70%、95%乙醇洗脱，分段减压干燥后，分别得水洗脱部位a、30%乙醇洗脱部位的提取物 Fr. 7. I、50%乙醇洗脱部位的提取物Fr. 7. 2、70%乙醇洗脱部位b、95%乙醇洗脱部位的提取物 Fr. 7. 3。
产品实施例二 i^一取产品实施例二十中大孔树脂30%乙醇洗脱部位的提取物Fr. 7. I继续上聚酰胺柱， 分别用水、30%、50%、70%、95%乙醇洗脱，分段减压干燥后依次得C、Fr. 7. I. I、Fr. 7. I. 2、 Fr. 7. I. 3、Fr. 7. I. 4。
产品实施例二十二取产品实施例二十中大孔树脂50%乙醇洗脱部位的提取物Fr. 7. 2继续上聚酰胺柱， 分别用水、30%、50%、70%、95%乙醇洗脱，分段减压干燥后依次得d、Fr. 7. 2. I、Fr. 7. 2. 2、 Fr. 7. 2. 3、Fr. 7. 2. 4。
应用实施例取本发明产品实施例制备的提取物Fr. UFr. 2,Fr. I. UFr. I. 2,Fr. I. 3,Fr. I. 4,Fr. 3、 Fr. 4、Fr. 3. l>Fr. 3. 2、Fr. 3. 3、Fr. 3. 4>Fr. 5、Fr. 6、Fr. 5. l、Fr. 5. 2、Fr. 5. 3>Fr. 5. 4、Fr. 7、 Fr. 7. UFr. 7. 3,Fr. 7. 2、Fr. 7. I. UFr. 7. I. 2,Fr. 7. I. 3、Fr. 7. I. 4,Fr. 7. 2. I、Fr. 7. 2. 2 、Fr. 7. 2. 3和Fr. 7. 2. 4进行a -葡萄糖苷酶抑制活性测定，结果如下表所示。
表I各提取物的a ~葡萄糖苷酶抑制活性测定结果
权利要求
1.一种二色补血草提取物，其特征在于所述二色补血草提取物以二色补血草为原料，以水或乙醇为溶剂提取，过滤，得到水提取液或乙醇提取液经干燥制得；所述乙醇浓度为 70-95%。
2.根据权利要求I所述的二色补血草提取物，其特征在于所述提取溶剂为水；所述二色补血草在用水提取前，先经70-95%的乙醇提取，过滤，取过滤后的二色补血草用所述提取溶剂水进行提取。
3.根据权利要求I所述的二色补血草提取物，其特征在于所述水提取液在干燥前先经大孔树脂柱层析，依次经水和乙醇洗脱，取乙醇洗脱液，干燥即得所述二色补血草提取物；所述洗脱液乙醇的浓度为30-50%。
4.根据权利要求3所述的二色补血草提取物，其特征在于所述乙醇洗脱液在干燥前先经聚酰胺柱层析，依次采用水和乙醇洗脱，取乙醇部分干燥即得所述二色补血草提取物。
5.根据权利要求I所述的二色补血草提取物，其特征在于所述提取溶剂为乙醇；所述乙醇提取液在干燥前先经过石油醚萃取，经萃取后的提取液经干燥制得所述二色补血草提取物。
6.根据权利要求5所述的二色补血草提取物，其特征在于所述乙醇提取液干燥后，用水混悬，经石油醚萃取，萃取后的水相经干燥制得所述二色补血草提取物。
7.根据权利要求5所述的二色补血草提取物，其特征在于所述经石油醚萃取后的乙醇提取液在干燥前还需经过乙酸乙酯萃取，然后干燥制得所述二色补血草提取物。
8.根据权利要求6所述的二色补血草提取物，其特征在于所述经石油醚萃取后的水相在干燥前还需经过乙酸乙酯萃取，然后干燥制得所述二色补血草提取物。
9.根据权利要求I所述的二色补血草提取物，其特征在于所述原料采用二色补血草的地下部分或地上部分。
10.权利要求I至9任一所述二色补血草提取物在制备葡萄糖苷酶抑制剂方面的应用。
全文摘要
本发明公开了一种二色补血草提取物及其应用，该提取物以二色补血草为原料，以水或乙醇为溶剂提取，过滤，得到水提取液或乙醇提取液经干燥制得；其中乙醇浓度为70-95%。本发明制备的二色补血草提取物具有较高的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
文档编号A61P3/10GK102920753SQ20121043404
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月5日 优先权日2012年11月5日
发明者马丽, 滕杰晖, 李维林 申请人:江苏省中国科学院植物研究所