作为弹性蛋白酶活性抑制剂的植物甾醇新用途及含有它的组合物的利记博彩app
【专利摘要】本发明针对植物甾醇的弹性蛋白酶减活性进行探究后得以完成，本发明涉及一种作为弹性蛋白酶活性抑制剂的植物甾醇的新用途及以有效成分含有而改善皮肤弹力乃至治疗皮肤伤口的外用剂组合物；本发明的含有植物甾醇的组合物不仅能够在不引起皮肤副作用的情形下安全地使用，还通过弹性蛋白酶减活性改善皮肤弹力而得以大幅增强皮肤防老化效果及皮肤伤口治愈效果。
【专利说明】作为弹性蛋白酶活性抑制剂的植物留醇新用途及含有它的组合物
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种发挥弹性蛋白酶活性抑制剂功能的植物留醇及以其为有效成分的组合物，该组合物通过弹性蛋白酶减活性而改善皮肤弹力并且得以大幅增强皮肤防老化效果及皮肤伤口治愈效果。
【背景技术】[0002]在皮肤中，弹性蛋白纤维和胶原纤维一起在真皮(epiderm)内侧形成交联键而提供皮肤弹力。随着年龄增加，皮肤在组织学上呈现出弹性蛋白纤维缺乏与凝集、胶原纤维减少、炎细胞浸润增加的现象，在生物化学上则出现作为弹性蛋白分解酶的弹性蛋白酶的活性度显着增加的现象。因此，弹性蛋白酶的作用使得皮肤弹力急剧减弱而出现凹陷(sagging)现象。弹性蛋白酶是目前为止发现的唯一能够分解弹性蛋白的酶,抑制它就能从根本上减少皮肤老化。
[0003]为了延迟皮肤老化而把保湿剂、抗炎症剂、弹性蛋白及针对胶原交联键被破坏的组织的营养剂及添加剂等加入化妆料内，但从根本上延迟老化是有限的。因此需要一种抑制剂，其能够从根本上把维持皮肤弹力的弹性蛋白及胶原的分解加以抑制。
[0004]虽然为了该目的而使用其结构与动物性提取物或胶原及弹性蛋白相似的合成肽(peptide)衍生物等物质，但其具有安全性及稳定性问题并且也没有达到本领域所要求的预期效果，因此迫切需要开发出一种比现有技术对人体安全而且效果良好的新功能性物质，日本国专利公开第2004-018793号公报公开了细毛火烧兰、红山无叶兰、金兰花、羽蝶兰等具有弹性蛋白酶减活性效果的成分。
[0005]但这样的事实目前还没有被广泛地认知，亦即，植物留醇可以通过弹性蛋白酶减活性而改善皮肤弹力并且得以大幅增强皮肤防老化效果及皮肤伤口治愈效果。
【发明内容】
[0006]发明需要解决的技术课题
[0007]本发明人们以植物性天然物为对象探索了能够改善弹性蛋白降低及破坏所导致的皮肤弹力减弱现象并且解决皮肤安全性及化妆料配合时的稳定性问题的抗老化物质，结果发现植物留醇显示出良好的弹性蛋白酶抑制效果，涂敷在人的皮肤上时也能明显地改善皮肤弹力而显著提升防老化效果及皮肤伤口治愈效果，从而完成了本发明。
[0008]因此，本发明的目的是提供一种含有植物留醇的外用剂组合物，该植物留醇不引起皮肤副作用并且有效地抑制弹性蛋白酶的活性而发挥皮肤弹力改善效果及皮肤伤口治愈效果。
[0009]解决课题的技术方案
[0010]为了解决上述课题，本发明提供一种作为弹性蛋白酶活性抑制剂的植物留醇新用途。[0011]较佳地，上述植物甾醇是(6 -谷甾醇(Beta sitosterol)或豆甾醇(stigmasterol)。
[0012]为了解决另一个课题，本发明提供一种以抑制弹性蛋白酶活性的植物留醇为有效成分的皮肤外用剂组合物。
[0013]较佳地，本发明皮肤外用剂组合物的上述植物留醇是P -谷留醇或豆甾醇。
[0014]较佳地，本发明皮肤外用剂组合物的上述植物留醇的含量为相比于整体组合物总重量的0.001到10重量％。
[0015]本发明皮肤外用剂组合物可以是皮肤弹力改善用化妆料组合物(Cosmeticcomposition)或皮肤伤口治愈用药学组合物。
[0016]有益效果 [0017]如前所述，本发明的植物留醇通过弹性蛋白酶减活性改善改善皮肤弹力而得以大幅增强皮肤防老化效果及皮肤伤口治愈效果。
【具体实施方式】
[0018]本发明提供一种作为弹性蛋白酶抑制剂的植物留醇的新用途及以其为有效成分而有效地抑制弹性蛋白酶活性的外用剂组合物。
[0019]一般来说，植物留醇由于稳定乳化状态的能力较强而在制造化妆品或油墨时作为乳化剂使用，包括人类在内的动物摄取豆留醇与(6-谷留醇时可以降低血中的总胆固醇水平及LDL胆固醇水平，因此其作为医药品原料而发挥重要作用。而且，植物留醇还被认为能减少心绞痛、心肌梗塞症之类的冠心病(coronary heart disease)的危险性。
[0020]本发明的植物留醇虽然可以从水果、蔬菜、坚果类、谷类、豆类及植物性油脂，例如油菜籽油、玉米油、葵花油、裸麦、麦、大麦、雀麦等含有高浓度植物留醇的植物资源中萃取，但不限于上述上述植物资源。该植物留醇可以通过各种方法获得，考虑到经济效益时，较佳地，从制作大豆油时获取的脱臭馏出物分离而获得。
[0021]上述植物留醇利用非极性萃取用溶剂对油菜籽油、玉米油、葵花油、裸麦、麦、大麦、雀麦等含有高浓度植物留醇的植物资源进行萃取、过滤并制成，萃取用溶剂可以使用己烧(hexane)、乙醚(ether)、苯(benzene)、氯仿(chloroform)、环己烧(cyclohexane)、甲苯(toluene)，可以利用超临界萃取之类的方法萃取。可以通过单独进行或并行进行充填有C18或硅胶凝体(silica gel)等各种合成树脂的柱色谱分离(column chromatography)及高性能液体色谱分析法(HPLC)等而从上述植物提取物分离及精炼植物留醇。然而，有效成分的萃取及分离精炼方法不必一定要限定于上述方法。
[0022]以相对于组合物总重量的0.001~10重量％含有上述植物甾醇。本发明为了得到所期望的效果而以相对于组合物总重量的0.001~10重量％含有上述植物留醇。低于
0.001重量％时难以得到适当效能，超过10重量％时会影响到产品的安全性与稳定性。
[0023]作为直接涂敷在皮肤上发挥作用的组合物，本发明的外用剂组合物不会对药学组合物乃至化妆料组合物的剂型加以特别限制，例如，可以制成柔润化妆水、紧致化妆水、营养化妆水、营养霜、按摩霜、精化露(essence)、眼霜、眼部修护霜(eye essence)、清洁霜、清洁乳霜、洁面霜、卸妆水、面膜膏、化妆粉、护肤乳(body lotion)、身体乳(cream)、身体护理油、身体精化乳(body essence)、身体清洁剂、染发剂、生发水(hair tonic)、头发护理液(scalp treatment)、乳霜(lotion)、软膏、化妆胶水(gel)、乳液(cream)、模料(patch)或
喷雾剂等。
[0024]下面结合实施例及试验例具体说明本发明的构成及作用效果，但本发明不限于这些例子。
[0025][实施例1]用大豆油脱臭馏出物制造植物甾醇
[0026]把大豆油脱臭馏出物(植物留醇含量:27% )200g与甲苯200g倒入3L的三口烧瓶后用300rpm搅拌并且升温到90°C，然后添加25% (w/w)NaOH溶液200g。之后，在80°C下以300rpm搅拌上述反应生成物并且缓慢地添加50% (w/w)硫酸溶液150g,再搅拌15分钟后静置，清除水层而得到油层。反复清洗油层直到硫酸被完全清除为止，在110°C下进行减压压缩清除甲苯后加以过滤。在上述过滤物上混合甲醇300g后倒入3L的三口烧瓶，然后在65°C下反应30分钟后冷却到室温，再搅拌24小时，把搅拌过程中生成的固定生成物加以过滤后利用甲醇200g清洗，把固体生成物加以减压蒸馏完全清除甲醇后制成植物甾醇。所制成的植物甾醇的良率与纯度分别为75%与98%。
[0027][实施例2]植物甾醇的分离及确认
[0028]针对上述植物留醇1.5g进行了 C18柱色谱分离。此时，所使用的柱溶出液以甲醇与水各自按照80: 20(v/v)的体积比混合的溶剂起始而在40分钟内逐渐增加甲醇比率以使得甲醇成为100%，溶剂的溶出速度与检测波长各为60ml/分与UV 210nm。进行上述C18柱色谱分离后从亚组份48~52与55~60得到了 P -谷甾醇0.75g与豆甾醇0.38g。
[0029]所分离的植物甾醇的仪器分析结果如下。
[0030]化合物I ( @ -谷甾`醇)
[0031]1H-NMR(CDClyeOOMHz) S 3.53 (tdd，1H，J = 4.5，4.2，3.8Hz，H-3)，8 5.36 (t, 1H, J=6.4Hz,H-5), 8 0.93(d,3H,J = 6.5Hz，H_19)，8 0.84(t,3H,J = 7.2Hz，H_24)，8 0.83 (d,3H, J = 6.4Hz，H-26)，8 0.81 (d, 3H, J = 6.4Hz，H-27)，8 0.68 (s, 3H, H_28), 8 1.01 (s, 3H,H-29)
[0032]13C-NMR (CDCl3,150MHz) 8 37.5 (C-1)，8 31.9 (C_2)，8 72.0 (C_3)，8 42.5 (C_4)，S 140.9(C-5)，S 121.9(C-6)，8 32.1 (C-7), 8 32.1 (C-8), 8 50.3 (C-9), 8 36.7 (C-1O),8 21.3 (C-1l) , S 39.9(C-12)，S42.6(C_13)，S56.9(C_14)，S26.3(C_15)，8 28.5 (C-16) , 8 56.3 (C-17) , 8 36.3 (C-18) , 8 19.2 (C-19) , 8 34.2 (C-20),8 26.3 (C-21) , 8 46.1 (C-22) , S 23.3(C_23), S 12.2(C_24), S29.4(C_25)，8 20.1(C-26)，8 19.6(C—27)，8 19.0(C—28)，8 12.0(C—29)
[0033]EIMS(C29H48O m/z (re1.1nt.)):412[M+] (39.7 % ) ,351 (13.5 % ) ,314(7.0 % ),300(25.5% ),271(38.4% ),229(8.6% ) ,213(10.6% ) ,55(100% )
[0034]化合物2(豆甾醇)
[0035]1H-NMR(CDClyeOOMHz) S 3.51 (tdd，1H，J = 4.5，4.3，3.8Hz，H_3)，8 5.31(t,lH, J=6.lHz，H-5)，8 0.91(d,3H,J = 6.2Hz，H_19)，8 4.98 (m, lH,H-20), 8 5.14 (m，1H，H—21)，8 0.83(t，3H，J = 7.lHz，H-24)，8 0.82(d，3H，J = 6.6Hz，H_26)，8 0.80(d，3H，J = 6.6Hz,H-27), S0.71(s，3H，H-28)，8 1.03(s,3H, H-29)
[0036]13C-NMR (CDCl3,150MHz) 8 37.6 (C-1)，8 32.1 (C_2)，8 72.1 (C_3)，8 42.4 (C_4)，S 141.1(C-5)，S 121.8(C-6)，8 31.8 (C-7), 8 31.8 (C-8), 8 50.2 (C-9), 8 36.6 (C-1O),8 21.5 (C-1l) , 8 39.9 (C-12) , “2.4(C-13)，S56.8(C_14)，S24.4(C_15)，8 29.3 (C-16), 8 56.2 (C-17), 8 40.6 (C-18), 8 21.7(C-19), 8 138.7 (C-20),8 129.6 (C-21) , 8 46.1 (C-22) , S 25.4(C_23), 8 12.1 (C-24) , S29.6(C_25)，
820.2 (C-26), S 19.8(C-27)，S 18.9(C_28)，S 12.2 (C-29)
[0037]EIMS (C29H50O m/z (rel.1nt.)):414[M+] (100 % ), 396 (30.8 % ),381(14.0 % )，329(13.7 % ) ,303(22.1 % ) ,255(11.8 % ) ,213(12.2 % ), 145(18.5 % ) ,95(21.6 % ),81(21.3% ) ,55(25.8% ) ,43(45.0% )?
[0038][试验例I]植物甾醇的弹性蛋白酶抑制效果
[0039]弹性蛋白酶萃取自猪胰脏，使用了 Sigma公司产品。利用基于凭借胰脏弹性蛋白酶的合成肽(peptide)基质(Sigma)的水解的试验法进行了试验，把光波长410nm处的每单位时间的4-硝基苯胺(4-nitroanilide)排放量的增加作为弹性蛋白酶的催化剂活性值。把各试验溶液调剂到lmg/ml的一定浓度后各自提取40iU，在此添加溶于50mMTris-HCl buffer (pH8.6)的 proporcine pancreas elastase(2.5U/ml)溶液 40iil 后，把作为基质而溶于 50mM Tris-HCl buffer (pH8.6)的 N-succinyl-(L-Ala) 3-p-nitroanilide(0.5mg/ml)添加80 u 1，然后在37°C进行了 30分钟反应。对于从基质生成的4-硝基苯胺的生成量，在410nm测量了吸收度，利用下列数学式I计算了弹性蛋白酶抑制程度。
[0040][数学式I]`
[0041]弹性蛋白酶抑制率) = 1_(试料添加组的吸收度/试料非添加组的吸收度)XlOO
[0042]【表1】
[0043]
【权利要求】
1.作为弹性蛋白酶活性抑制剂的植物留醇新用途。
2.根据权利要求1所述的作为弹性蛋白酶活性抑制剂的植物留醇新用途，其特征在于，上述植物留醇是(6-谷留醇或豆甾醇。
3.以抑制弹性蛋白酶活性的植物留醇为有效成分的皮肤外用剂组合物。
4.根据权利要求3所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，上述植物留醇是3-谷甾醇或豆甾醇。
5.根据权利要求3或4所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，上述植物留醇的含量为相比于整体组合物总重量的0.001到10重量％。
6.根据权利要求3或4所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，上述外用剂组合物是皮肤弹力改善用化妆料组合物。
7.根据权利要求3或4所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，上述外用剂组合物是皮肤伤口治愈用药学组 合物。
【文档编号】A61P17/02GK103655221SQ201210391238
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2012年10月16日 优先权日:2012年9月13日
【发明者】具昌燮, 金珉珍, 郑伦朱, 张东逸 申请人:柯得股份有限公司