专利名称：艾叶挥发油及其在制备抗乙肝病毒药物中的应用的利记博彩app
技术领域：
本发明属于天然植物提取及应用技术领域，具体涉及一种艾叶挥发油及其在制备抗乙肝病毒药物中的应用。
背景技术：
乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBv)引起的一种世界性疾病。据统计，目前全世界大约有20亿人感染过HBV，其中约有3. 5亿人是HBV携带者， 我国约有I. 2亿HBV携带者。乙型肝炎病毒是导致急性、慢性肝炎、肝硬化、肝癌的主要病因，每年有30 50万人死于HBV引起的肝硬化或肝癌。目前临床上抗HBV药物主要为干扰素和核苷类药物。这两类药物虽然在HBV感染的治疗上取得了比较好的疗效，但是有报道称干扰素适应症范围窄，不良反应多。核苷类药物停药后易复发，长期使用会产生耐药性， 易出现肾毒性、骨髓抑制等不良反应，因此，寻找新型安全有效的抗乙肝病毒药物是临床急需解决的问题。中药具有多成分、多靶点、多途径发挥药效等特点。传统中药在长期治疗乙型肝炎过程中体现了它独有的优势，开发具有抗乙肝病毒作用的中药和天然药物是当前的研究热点。艾叶(Folium Artemisiae Argyi)是一味使用历史悠久的传统中药,在我国的很多地区均有分布。传统药学理论认为艾叶有理气血、逐寒湿等功效。近代医学研究证明艾叶还具有抗菌、平喘镇咳祛痰、止血与抗凝血等作用。目前，尚未见到有关于艾叶提取物被用于抗乙肝病毒的相关报道。
发明内容
本发明目的在于提供一种艾叶挥发油，以及该艾叶挥发油在制备抗乙肝病毒药物方面的应用。为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下
一种艾叶挥发油，该挥发油经下述方法制得将用水浸泡过的艾叶进行水蒸气蒸馏，收集蒸馏液；蒸馏液静置冷却分层后，取上层的油层即得。具体的，可将艾叶粉碎后，用其重量8 15倍的水浸泡8 15h (用以使艾叶充分浸润)，然后将艾叶及浸泡液进行水蒸气蒸馏，蒸馏时间6 10h。所述艾叶挥发油在制备抗乙肝病毒药物中的应用。艾叶挥发油可直接或者包合后制成多种剂型溶液剂(如芳香水剂、醑剂、乳剂等)、注射剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、滴丸、缓释制剂及纳米制剂等剂型。可以以艾叶挥发油为活性物质，与医学上可接受的药用辅料、赋形剂等混配、组合，制成上述各种剂型；还可以与其他抗乙肝病毒药物共同作为活性物质，与医学上可接受的药用辅料、赋形剂等混配、组合，制成上述各种剂型。芳香水剂将艾叶挥发油加蒸馏水(I: 199)，用力振摇15min使成饱和溶液后放置，用蒸馏水润湿的滤纸滤过，自滤纸上添加适量蒸馏水至全量，灭菌，分装即得。规格 25μ l/5mL·临床拟用量50 μ I/日，2次/日。醑剂将艾叶挥发油溶解于90%乙醇，再加蒸馏水(4:55:21)，灭菌，分装即得。规格50μ Ι/ml。临床拟用量50μ I/日，I次/日。乳剂将艾叶挥发油用吐温-80进行乳化，超声一定时间，加蒸馏水1:39配制成挥发油乳浊液，灭菌，分装即得。规格25μ1/πι1。临床拟用量50μ1/日，2次/日。注射剂将艾叶挥发油加羟丙基-环糊精与注射用水用胶体磨研磨，加入氯化钠调节等渗，调ΡΗ，灌封，灭菌即得。规格12μ1/2πι1。临床拟用量12μ1/日，I次/日。普通胶囊将艾叶挥发油溶于少量无水乙醇，搅拌下缓缓滴入环糊精50°C饱和水溶液中，滴完继续搅拌O. 5h，放冷，置冰箱冷藏24h，抽滤，蒸馏水洗涤，40°C干燥，所得粉末与硬脂酸镁等混合均匀，或将艾叶挥发油用可生物降解的明胶和阿拉伯胶或其它药用囊材，用复凝聚法或喷雾干燥法包裹成微囊，与硬脂酸镁等混合均匀，填入空胶囊中，即得。 规格0. Ig/粒(含量25 μ I/粒)。临床拟用量50μ I/日，2次/日。软胶囊将艾叶挥发油与经加热灭菌、澄清的食用植物油混合，充分搅拌，与明胶、 甘油、蒸馏水制成的明胶液，用滴制机滴制软胶囊，即得。规格10mg/粒(含量25μ I/粒)。 临床拟用量50 μ I/日，2次/日。片剂将艾叶挥发油用β_环糊精包裹，或者微囊化，与微晶纤维素、乳糖、硬脂酸镁等辅料混配，按本领域公知的制片技术和装备，经过标准的凹冲压成片，制成片剂。规格 O. Ig/片(含量25 μ I/片)。临床拟用量50μ I/日，2次/日。颗粒剂将艾叶挥发油用β_环糊精包裹，或者微囊化，与蔗糖、糊精、乳糖等辅料混配制粒，整粒，灭菌分装即得。规格0. Ig/袋(含量25 μ I/袋)。临床拟用量50μ I/日，
2次/日。滴丸将艾叶挥发油用吐温-80作界面活性剂，在热的明胶液中制成乳剂后滴制成丸。或者将艾叶挥发油用环糊精包裹，加入熔融的PEG6000，滴制成丸。规格10mg/ 粒(含量25 μ I/粒)。临床拟用量50μ I/日，2次/日。缓释制剂将艾叶挥发油与明胶、阿拉伯胶、乙基纤维素等囊材进行微囊化，加入稀释剂制成缓释胶囊，或者加入乳糖、乙醇、乙基纤维素、硬脂酸镁等压制成缓释片。规格
O.3g/片(含量150 μ I/片)。临床拟用量:150 μ 1/3日。纳米制剂将艾叶挥发油与磷脂、助乳化剂和水以纳米乳化法制成纳米乳或亚微乳，再倒入冰水中冷却即得到纳米粒或亚微乳。或以生理相容的高熔点脂质-单硬脂酸甘油酯为骨架材料作为药物载体，以豆磷脂和泊洛沙姆F-68等为表面活性剂，用熔融-超声法和高压匀质法制成固体脂质纳米粒。规格12μ1/2πι1。临床拟用量12μ I/日。本发明艾叶挥发油的提取方法简单，所得艾叶挥发油经体外细胞试验证明具有较强的抗乙肝病毒活性，可用于制备抗乙肝病毒药物。
具体实施例方式以下通过优选实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围并不局限于此。实施例I一种艾叶挥发油，该挥发油经下述方法制得取500g粉碎过的艾叶置于烧瓶中(烧瓶中放入数粒沸石)，加入6000g水振摇混合后浸泡12h左右，然后将艾叶及浸泡液进行水蒸气蒸馏(具体的，可以将烧瓶与挥发油测定器、及回流冷凝管连接，将烧瓶置于电热套中缓慢加热至沸，并保持微沸8h)，收集蒸馏液。蒸馏液静置冷却分层后，取上层的绿色油层 (3. Oml)即得。实施例2
一种艾叶挥发油，该挥发油经下述方法制得取500g粉碎过的艾叶置于烧瓶中(烧瓶中放入数粒沸石)，加入4500g水振摇混合后浸泡IOh左右，然后将艾叶及浸泡液进行水蒸气蒸馏(具体的，可以将烧瓶与挥发油测定器、及回流冷凝管连接，将烧瓶置于电热套中缓慢加热至沸，并保持微沸6h)，收集蒸馏液。蒸馏液静置冷却分层后，取上层的绿色油层 (2. 7ml)即得。实施例3
一种艾叶挥发油，该挥发油经下述方法制得取500g粉碎过的艾叶置于烧瓶中(烧瓶中放入数粒沸石)，加入7000g水振摇混合后浸泡15h左右,然后将艾叶及浸泡液进行水蒸气蒸馏(具体的，可以将烧瓶与挥发油测定器、及回流冷凝管连接，将烧瓶置于电热套中缓慢加热至沸，并保持微沸10h)，收集蒸馏液。蒸馏液静置冷却分层后，取上层的绿色油层 (3. Iml)即得。艾叶挥发油的体外试验
I.I主要试验材料
I.I. I HepG2. 2. 15细胞株由广州暨南大学生物医药研究开发基地赠予，本研究室自行传代培养供实验使用。I. 1.2主要试剂拉米夫定(3TC，贺普丁片)购自葛兰素-史克制药(苏州)有限公司产品；1640培养基购自北京索莱宝生物医药科技有限公司；胰蛋白酶购自美国Amersco 公司；MTT购自美国Sigma公司；G418,购自美国invitrogen公司；HBV核酸扩增突光定量检测试剂盒，深圳匹基生物工程股份有限公司；乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg) ELISA诊断试剂盒(酶联免疫法)，上海科华生物技术有限公司；乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg) ELISA诊断试剂盒(酶联免疫法)，上海科华生物技术有限公司；DNA提取试剂盒，美国Omega公司。1.1.3主要仪器生物安全柜Hfsafe_1200TE Class II Type B2，香港力康发展有限公司；水套式二氧化碳培养箱HF160W，香港力康发展有限公司；酶标仪168-1000XC， 美国BIO RAD ;荧光PCR检测仪，美国Roche LightCyclerl. 5 ;全自动灭菌器HVE-50，日本HIRAYAMA ；96孔培养板，24孔培养板，50ml细胞培养瓶，美国corning公司；超纯水仪为 Millipore公司产品。实施例I所得艾叶挥发油对细胞的毒性试验
依据Mosmann建立的MTT比色法检测实施例I所得艾叶挥发油对H印G2. 2. 15细胞的毒性。具体为细胞长满培养瓶后，加入O. 25%胰蛋白酶，消化后加入培养液吹打成单细胞， 加入细胞计数板计数，浓度为2 X IO4个/mL后接种于96孔细胞培养板(每孔ΙΟΟμΙ),每个浓度设四个孔，置CO2培养箱(37°C，5. 0%C02)中培养24h。细胞长成单层后加入含有不同体积浓度艾叶挥发油的1640培养基，并设不含艾叶挥发油的正常细胞为空白对照组。连续培养72h，每孔加入20μ1含结晶紫的MTT，于CO2培养箱(37°C，5. 0% CO2)中继续培养。4h后，弃去上清液,每孔加入200μ1 DMS0，用微量振荡器充分震荡，使结晶紫充分溶解。用酶标仪 (检测波长490nm，参考波长630nm)读取各孔OD值，记录结果。计算不同体积浓度艾叶挥发油对!fepG2. 2. 15细胞的抑制百分率，结果见表I。
权利要求
1.一种艾叶挥发油，其特征在于，该挥发油经下述方法制得将用水浸泡过的艾叶进行水蒸气蒸馏，收集蒸馏液；蒸馏液静置冷却分层后，取上层的油层即得。
2.如权利要求I所述的艾叶挥发油，其特征在于，将艾叶粉碎后，用其重量8 15倍的水浸泡8 15h,然后将艾叶及浸泡液进行水蒸气蒸懼,蒸懼时间6 10h。
3.权利要求I或2所述的艾叶挥发油在制备抗乙肝病毒药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种艾叶挥发油，该挥发油经下述方法制得将用水浸泡过的艾叶进行水蒸气蒸馏，收集蒸馏液；蒸馏液静置冷却分层后，取上层的油层即得。该艾叶挥发油的提取方法简单，所得艾叶挥发油经体外细胞试验证明具有较强的抗乙肝病毒活性，可用于制备抗乙肝病毒药物。
文档编号A61P31/20GK102600224SQ20121011760
公开日2012年7月25日 申请日期2012年4月20日 优先权日2012年4月20日
发明者侯迎迎, 张壮丽, 张小俊, 张艳, 张长征, 江金花, 王东阳, 王宁, 王桂芳, 赵志鸿, 郑立运, 陈慧平, 马方, 黄勇勇 申请人:河南省医药科学研究院