一种以磷脂为基质的原位相变凝胶缓释系统及其制备方法

专利名称：一种以磷脂为基质的原位相变凝胶缓释系统及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种原位注射相变凝胶缓释系统，具体涉及以磷脂、不同浓度的乙醇溶液和/或注射用油制备成高浓度磷脂缓释制剂，为医药技术领域。
背景技术：
随着生物技术的兴起和发展，越来越多的蛋白多肽类药物被开发并用于疾病的诊断和治疗。与小分子化学药物相比，蛋白多肽类药物与体内正常的生理物质更为接近，具有药理活性高，毒副作用低，用药剂量小，疗效确切，特异性强等优点。但同时也存在着很多问题一方面，蛋白多肽类药物分子质量大，稳定性差，容易被胃肠道中的蛋白水解酶降解，因此，通常不能采用常见的胃肠道给药方式，只能通过注射给药；另一方面，这类药物的生物半衰期较短，很快就被机体降解棹，需要持续的注射或静脉滴注来保证药物的疗效，加重了患者的身体、心理和经济负担。因此，人们希望开发出ー种可注射的蛋白多肽类药物的缓释给药系统。目前，已经上市的注射用缓释给药系统主要包括PLGA(聚乳酸-羟基乙酸共聚物) 微球和多囊脂质体(MVL)。微球是指药物溶解或分散在高分子材料基质中形成的微小球状实体，属于基质型骨架微粒。PLGA是由乳酸和羟基乙酸按一定比例聚合而成的共聚物，是 FDA批准的可用于人体的生物可降解材料。在诸多多肽缓释注射剂中，LHRH (黄体生成素释放激素)类似物微球是研究最为成功的品种。曲普瑞林是LHRH类似物之一，其PLGA微球由法国Ipsen公司开发，1986年上市，可缓释1个月，是第一个多肽微球产品。丙氨瑞林是上海丽珠东风生物技术有限公司开发的国家ー类新药，疗效为LHRH的15倍，上海医药エ业研究院承担国家科委“九五”攻关项目，进行每月用药1次的长效微球的开发研究，动物体内试验证明其缓释效果可靠。尽管PLGA微球具有较好的缓控释作用和生物相容性，但由于其制备エ艺复杂，载药量较低，制备过程中使用的有机溶剂在制剂中有残留，以及降解过程中产生乳酸和羟基乙酸会引起注射部位PH值的下降，从而产生局部无菌性炎症。以上缺点和不足大大限制了 PLGA微球的应用。多囊脂质体(MVL)是ー种结构特殊的新型脂质体制剂，其不连续的非同心水性内腔通过类脂及磷脂膜的分割，形成很多小囊泡。在这种不连续的囊泡中，当某个囊泡破裂时，药物只从破裂的囊泡中释出，而完整的囊泡仍然保持原状，因而具有良好的缓释效果。 传统脂质体以现有技术一般难以达到水溶性药物的高包封和低渗漏，多囊脂质体与之相比具有包封率高、药物渗漏少等优点，尤其适用于包封水溶性小分子药物和生物活性大分子药物。目前，SkyePharma公司利用D印oi^ormTm技术(MVL技术的注册商标)开发的 DepoCytTm(阿糖胞苷MVL制剂)和D印oDurl^m(硫酸吗啡MVL制剂)两个产品已成功上市， 并有多个产品进入研发和临床研究阶段。
尽管多囊脂质体给药途径多祥，具有良好的缓释作用和储库效应，但其也有诸多不足之处首先，欲制备MVL，至少需含有双亲脂质(如磷脂)和中性脂质(如甘油三酷)。 若无中性脂质则形成传统的单室脂质体(ULV)或多室脂质体(MLV)。其次，由于MVL内外水相存在药物浓度差，小分子药物的渗漏问题仍然存在，且磷脂双分子层在贮存时也会出现部分破裂，而其在贮存过程出现的沉降和聚集问题尚未得到解決，可能影响制剂的稳定性。 第三，目前开发的MVL产品为混悬液，不便于保存和运输。第四，MVL的制备过程复杂，对生产条件要求非常苛刻，不易扩大生产。此外，MVL包载的药物量有限，这也使其发展受到一定的限制。另外，正在研究的还有囊泡型磷脂凝胶(vesicular phospholipid gels，VPG)。 VPG是ー种半固体的磷脂分散体系，具有独特的三维网状立体结构，不同于传统意义上的脂质体凝胶和普通脂质体室结构。VPG作为药物的储库，药物分布于囊泡和囊泡外的基质中。 在水作溶剂的情况下，封闭囊泡内和囊泡间均含有一定体积的水相，可装载水溶性、脂溶性以及两亲性药物。对于水溶性药物，囊泡内外近乎相等的水相体积不仅使其包封率提高，而且药物在囊泡内和囊泡外均存在，内外浓度趋于一致，一定程度上减弱了由于浓度梯度造成的药物渗漏等对稳定性的影响。现在已有较多文献披露了关于囊泡型磷脂凝胶作为肽类药物缓释给药系统的报道。例如，Brandl, Winter等人所在的研究小组分别采用小分子化学药物钙黄緑素和5-氟尿嘧啶、小分子多肽西曲瑞克以及以大分子蛋白红细胞生成素作为模型药物，在自制的释放流通池中研究以VPG作为药物贮库时的体外释放行为(C. Tardi, Journal of Controlled Release 55 (1998) 261 - 270 ；N. Kaiser, International Journal of Pharmaceutics 256 (2003) 123 - 131 ；H. Grohganz, European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 59 (2005) 439 _ 448 ；W. Tian, Journal of Controlled Release 142 (2010) 319 - 325)。其实验结果表明，VPG对大分子蛋白的缓释效果较好，可达数百小时；专利申请20110036587. 8通过动物的体内研究发现，浓度在 20-40%的磷脂凝胶对于小分子多肽类药物也有较长的缓释时间，但低浓度的磷脂凝胶皮下注射初期突释效应明显，有可能引起毒副作用。随着磷脂浓度的増加，突释减小。当磷脂浓度升高到40%时，虽然缓释效果较好，但其粘度达到14. (W. Tian, Journal of Controlled Release 142 (2010) 319 - 325)，相当粘稠，几乎不能注射。所以从现有的研究可以看出，囊泡型磷脂凝胶不太适宜于作为注射用多肽缓释载体。专利文献93119112. 2披露了ー种在体内形成卵磷脂凝胶以持续释放生物活性化合物的药用组合物，包含卵磷脂、药学上可接受的供肌内或皮下注射且基本上不溶于水的卵磷脂用溶剂和生物活性化合物。简单地说，该药用組合物就是含有生物活性化合物的卵磷脂有机溶液或悬浮液。通过肌内或皮下注射该溶液或悬浮液，可在体内形成卵磷脂凝胶， 即通过从注射部位含水隙间体液中吸收水分而在体内形成卵磷脂凝胶。根据专利说明，药物从组合物中释放时间的长短决定于该组合物的組成。此外，还可以通过添加赋形剂来控制。然而，由于该组合物的主要成分中缺少极性溶剤，水溶性药物或极性较强的药物应用于该组合物中存在一定的难度。尽管文献中说可以将活性成分先溶在少量水中或适合该具体活性成分的缓冲溶液中，然后再将水或缓冲液加到組合物中，但这样就在注射前増加了组合物的粘度，不利于注射给药。
专利文献200580025364. 4提供了ー种包含磷脂组分和药物可接受的流体载体的組合物，但该申请模糊不清，如用于持续的局部药物输送吋，该组合物限定磷脂组分在某些实施方案中的浓度为10-90%，在某些实施方案中最大数量至多是45%，但没有明确说明是哪些实施方案。实施例1中所制备的组合物由于磷脂在所选溶剂中的溶解度不高，为了能够在合适的粘度下顺利注射入肌体，磷脂浓度均较低，且丙ニ醇、甘油等溶剂的用量较大， 因此该组合物即使少量注入肌体，也会引起局部肿胀甚至溃烂。此外，其过程为称出并在洁净的容器中混合大豆卵磷脂(Phospholipon 90G，包含约90 %磷脂酰胆碱的可注射级大豆卵磷脂，Phospholipid GmbH)、中链甘油三酯(Miglyol812，Sasol Corp.)、蔗糖和丙ニ 醇，加无水乙醇，溶解全部固体以形成清澈的黄色溶液。抽真空以除去乙醇，直到剰余乙醇含量不到总重量的5%。加热该混合物到60°C以形成透明溶液，然后通过灭菌滤器过滤该溶液。将滤液冷却到室温，获得黄色透明并均勻的凝胶，由此可见溶解上述磷脂的并非乙醇而是丙ニ醇。更为关键地，该申请未进行体内实验，没有数据证明其可以达到预期的缓释效果， 本领域技术人员从其较低的磷脂浓度的构成，较少的注射体积，结合现有技术已知尝试，完全可以认定其缓释作用很差。因此，研制一种既能注射到体内达到优良的缓释效果，又粘度较低、能顺利注射给药的磷脂缓释制剂就成为本领域研究的难题和热点。

发明内容
本发明的目的之一，提供一种原位注射相变凝胶缓释系统。在研究中意外地发现，磷脂在乙醇中的溶解度特別高，甚至当磷脂在乙醇中的含量高达85% (g/g)，仍然澄清透明，可以流动。根据此性质，发明人设想，将药物溶解在此高浓度磷脂的乙醇溶液中，注入体内后，由于乙醇和水能够完全互溶，在乙醇迅速扩散到体液之后，则注射部位剩下的磷脂会固化，从而成为药物缓释的载体，有效控制药物的释放。本发明凝胶形成过程也是与现有技术中提及的普通磷脂凝胶完全不同。专利文献 93119112. 2披露了含有生物活性化合物的卵磷脂有机溶液或悬浮液，该有机溶液基本上不溶于水，在肌内或皮下注射之后，再通过从注射部位含水隙间体液中吸收水分而在体内形成卵磷脂凝胶。根据上述意外的发现，发明人由此以醋酸奥曲肽为模型药物，制备了含70%磷脂的乙醇溶液，给大鼠皮下注射Iml后，药物可以平稳释放几乎ー个月左右。但是采用単一乙醇作为溶剤，副作用也是极其明显的，大部分大鼠注射部位出现红肿及溃烂现象。这也是现有技术中尽量避免使用大量乙醇作为注射液溶剂的重要原因之一。为了克服乙醇的副作用，通过创造性的研究，我们惊奇地发现，如果在制剂中用大豆油替换了部分乙醇，大鼠注射部位不再出现红肿及溃烂现象，这是有利于该缓释制剂系统的产业化的有效解决办法。本发明的目的之一，是提供ー种包含磷脂、乙醇溶液和/或注射用油的組合物。通过更加深入的研究，发明人发现，在溶剂中加入注射用油，一方面是减少乙醇的用量；另ー方面，降低乙醇的扩散速度，从而不仅实现了磷脂凝胶缓释系统的有效利用，还大大地降低了乙醇的副作用。
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本发明的目的之一，是提供ー种以磷脂、乙醇溶液和/或注射用油制备成高浓度磷脂缓释制剂，即本发明所述的原位注射相变凝胶缓释系统或原位注射相变凝胶缓释制剂。根据本发明的具体实施方式
可知，一系列的液态脂肪酸甘油三酷，包括中链脂肪酸甘油酷、麻油、玉米油、棉子油、鱼油等，都能像大豆油一样替换部分乙醇，降低乙醇的副作用，由此最终实现了本发明。根据本发明的具体实施方式
，本发明所述的注射用油包括，但不限干，大豆油、玉米油、麻油、茶油、鱼油、中链脂肪酸甘油酷、棉子油、油酸乙酯及上述物质的组合。现有技术中虽然存在包含卵磷脂、注射用油、乙醇、活性成分的技术方案，但是这些组合物的具体制剂一般是乳剤，作用机理完全不同于本发明的原位相变凝胶制剂。本发明的目的之一，是提供ー种包含药物活性成分、磷脂、乙醇溶液和/或注射用油的組合物。该组合物注入体内后，乙醇迅速扩散，析出的磷脂形成凝胶，包裹药物活性成分，具有良好的缓释作用。本发明的目的之一，是提供一种缓释效果好、高浓度磷脂含量、易于注射给药的含有生物活性成分的磷脂缓释制剂。本发明的目的之一，是将蛋白多肽类药物或其他药物溶解在高浓度的磷脂-乙醇溶液中，成为流动性良好的液体，注入体内后，乙醇迅速扩散，析出的磷脂形成凝胶，包裹药物，具有良好的缓释作用。本文中的术语“原位注射相变凝胶缓释系統”，也包括高浓度磷脂缓释制剂。适用于本发明的高浓度磷脂缓释制剂的磷脂，包括但不限干天然磷脂、半合成磷脂、合成磷脂中一种或多种的组合。所述天然磷脂，包括但不限于蛋黄卵磷脂、大豆磷脂或其組合等。所述半合成磷脂，包括但不限于氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂或其組合等。所述合成磷脂，包括但不限于ニ棕榈酰磷脂酰乙醇胺、ニ棕榈酰磷脂酰胆碱、ニ硬脂酰磷脂酰胆碱、ニ肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、ニ油酰磷脂酰乙醇胺、ニ棕榈酰磷脂酰甘油、ニ 棕榈酰磷脂酸中的一种或多种的组合等。在具体的实施方案中，本发明优选蛋黄卵磷脂E80。在具体的实施方案中，本发明所述的高浓度磷脂缓释制剂，基于制剂的总重量计， 其中磷脂含量，为约50% 约85% (g/g)。适用于制备本发明所述的高浓度磷脂缓释制剂的生物活性成分，可以是水溶性分子、脂溶性分子或两亲性分子，包括但不限于抗癌药类、抗炎药类、抗感染药类、止痛药类、 激素类、抗糖尿病药类、抗高血压药类、抗艾滋病药类、免疫增强药类、抗病毒药类、强心药类、抗肥胖药类、骨代谢调节剂类、抗癫痫药类、抗惊厥药类、抗抑郁药类、抗精神病药类、抗帕金森病药类、尿路药类、避孕药类、抗骨质疏松药类、蛋白同化制剂类、戒烟助剂类以及细胞附着促进剂类。适用于本发明的药物包括但不限于如下
蛋白多肽类，包括但不限干，胰岛素、胰高血糖素、α-干扰素、β-干扰素、白細胞介素、促红细胞生成素(ΕΡ0)、促性腺激素、粒細胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-GSF)、组织型纤溶酶原激活剂、链激酶、細胞生长因子、凝血因子、前列腺素、抗凝血酶、水蛭素、组氨瑞林、生长激素释放肽-2、生长激素释放肽_6、西曲瑞克、比伐卢定、精氨酸加压素、赖氨酸加压素、去氨加压素、戈那瑞林、亮丙瑞林、德舍瑞林、布舍瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、阿拉瑞林、舍莫瑞林、那法瑞林、黄体瑞林、夫替瑞林、海沙瑞林、奥曲肽、艾塞那肽、人胰高血糖素样肽-1、生长激素、生长抑素、齐考诺肽、胸腺肽al、辛卡利特、胸腺五肽、阿巴瑞克、阿肽地尔、亮氨酸脑啡肽、甲硫脑啡肽、替可克肽、促性腺激素释放激素、促甲状腺激素释放激素、 生长激素释放激素(GHRH)、生长激素抑制素(GHIH)、促黑色素細胞抑制激素(MRIH)、促黑色素細胞释放激素(MRH)、促皮质素释放激素(CRH)、胰泌素、P物质、神经降压肽、人脑利钠肽、心房利钠肽、血管紧张肽I、血管紧张肽II、血管紧张肽III、睡眠肽、记忆增强肽、强啡肽、内啡肽、血管紧张素、恩夫韦地、CJC-U95、依降钙素、胸腺肽β 4、加压素、鞣酸加压素、 苯赖加压素、鸟氨酸加压素、美拉诺坦II、脾脏五肽、普兰林肽、伐普肽、促皮质素、丝赖促皮质18肽、甘精促皮质18肽、锌促皮质M肽、促皮质M肽、促皮质25肽、促皮质观肽、血管活性肠肽、脑钠尿肽、缓激肽、孤啡肽、门冬酰胺酶等；小分子化学药物类，包括但不限于，璜达肝癸钠，吗啡，曲马多，羟考酮，芬太尼，利多卡因，杜冷丁，硝酸异山梨酷，戊四硝酷，单硝酸异山梨酷，普萘诺尔，纳多诺尔，吲哚诺尔，阿替诺尔，美托诺尔，阿普诺尔，醋丁诺尔，硝苯地平，维拉帕米，地尔硫卓，谱尼拉明，哌可昔林，苄普地尔，尼可地尔，吗多明，地拉卓，曲美他嗪，硫酸奎尼丁，丙吡啶，盐酸美西律的药物，盐酸胺碘酮，洛伐他汀，辛伐他汀，普伐他汀，氟伐他汀，阿伐他汀，西立伐他汀，血脂康，考来烯胺，考来替泊，普罗布考，吉非贝齐，阿司匹林，奥扎格雷，噻氯匹定，氯吡格雷，利多格雷，替罗非班，华法林，双香豆素，醋硝香豆素，七叶内酷，当归内酷，黄芪甲苷，人參皂苷，葡萄内酷，呋喃香豆素，吡喃香豆素，北美芹素，红厚壳内酷，双七叶内酷，水飞蓟宾，葛根素，芦丁，橙皮苷，儿茶素，香叶苷，灯盏花素， 槲皮素，白藜芦醇，立可定，卡托普利，依那普利，赖诺普利，苯那普利，福辛普利，雷米普利， 喹那普利，培哚普利，西拉普利，群多普利，阿拉普利，地拉普利，氯沙坦，厄贝沙坦，坎地沙坦，硝苯地平，氨氯地平，非洛地平，尼群地平，拉西地平，尼莫地平，尼卡地平，尼索地平，伊拉地平，地尔硫卓，维拉帕米，普萘洛尔，美托诺尔，纳多诺尔，吲哚诺尔，阿替诺尔，美托诺尔，阿普诺尔，醋丁诺尔，比索诺尔，倍他诺尔，哌唑嗪，特拉唑嗪，多沙唑嗪，曲马唑嗪，拉贝诺尔，卡位诺尔，可乐定，甲基多巴，莫索尼定，利舍平，胍乙啶，胼屈嗪，硝普钠，盐酸多奈哌齐，卡巴拉汀，石杉碱甲，美曲膦酷，他克林，加兰他敏，吡拉西坦、阿米三嗪、甲磺酸双氢麦角汀、己酮可可碱、尼麦角林，维生素E退黑素、姜黄素、去铁敏、艾地苯醌、甲磺酸替拉扎持，雌ニ醇，乙炔雌ニ醇，雌酮，炔雌醚，尼尔雌醇，戊酸雌ニ醇，苯甲酸雌ニ醇，雄烯ニ醇、甲睾酮、睾酮、己烯雌酚，己烯雌酚丙酸酷，己烯雌酚磷酸酷，环戊丙酸雌ニ醇，大豆素，醋酸甲羟孕酮，醋酸甲地孕酮，醋酸氯地孕酮，孕ニ烯酮，炔诺酮，地索高诺酮，巳酸孕酮，左炔诺孕酮，醋酸炔诺酮，庚酸炔诺酮，双酯炔诺醇，醋炔醚，地诺孕酮，屈螺酮，烯诺孕酮，诺美孕酮， 曲美孕酮，苯海拉明，异丙嗪，曲吡那敏，氯苯那敏，布克立嗪，苯茚胺，赛庚啶，氯马斯汀，氮卓斯汀，阿司咪唑，氯雷他定，西替利嗪，咪哔斯汀，特非那丁，非索非那丁，乙氟利嗪，地氯雷他定，依巴斯汀，am，非尼拉敏，溴苯那敏，托普帕敏，吡咯他敏，曲谱利唆，阿伐斯汀， 西咪替丁，雷尼替丁，法莫替丁，尼扎替丁，罗莎替丁，酮替芬，色甘酸钠，环磷酰胺，异环磷酰胺，卡莫司汀，洛莫司汀，司莫司汀，达卡巴嗪，丙卡巴胼，替莫唑胺，苯丁酸氮芥，美法仑， 钼类配合物(如顺钼，卡钼，奥沙利钼等)，甲氨蝶呤，氟尿嘧啶，替加氟，巯嘌呤，喷司他丁， 阿糖胞苷，吉西他滨，长春碱，长春新碱，长春瑞滨，长春地辛，紫杉醇，多西他赛，高三尖杉酯碱，三尖杉酯碱，喜树碱，羟喜树碱，托普替康，伊立替康，依托泊苷，替尼泊苷，放线菌素 D，丝裂霉素，博来霉素，柔红霉素，多柔比星，伊达比星，阿柔比星，米托蒽醌，表柔比星，普卡霉素，肾上腺皮质激素，雄激素，氟他胺，雌激素，他莫西芬，依西美坦，维A酸，伊马替尼， 吉非替尼，埃罗替尼，沙利度胺，雷利度胺，阿司匹林，水杨酸镁，水杨酸胆碱，水杨酰胺，双水杨酷，ニ氟尼柳，吲哚美辛(消炎痛)，舒林酸，对乙酰氨基酚(扑热息痛)，氨基比林，羟布宗，保泰松，甲芬那酸，氯芬那酸，双氯芬酸，布洛芬，萘普生，氟比咯芬，非诺洛芬，酮洛芬， 吡罗昔康，美洛昔康，尼美舒利，罗非昔布，塞来昔布，秋水仙碱，丙磺舒，别嘌呤，磺吡酮，苯溴马隆等，或上述提及的药物的药学上可接受的盐形式。进ー步地，上述蛋白多肽类药物或化学药物药学上可接受的盐形式包括但不限于醋酸盐、盐酸盐、硫酸盐、枸櫞酸盐、磺酸盐、水杨酸盐等多种药学上可用盐形式。本发明所述的高浓度磷脂缓释制剂，其中生物活性成分含量，基于制剂的总重量计，为约0. 01% 约10% (g/g)。本发明所述的高浓度磷脂缓释制剂，其中注射用油含量，基于制剂的总重量计，为约 10% 约 40% (g/g)。本发明所述的高浓度磷脂缓释制剂，其中乙醇溶液包括无水乙醇、乙醇-水溶液、 乙醇-生理盐水溶液、乙醇-磷酸盐缓冲液溶液、乙醇-醋酸盐缓冲液溶液、乙醇-碳酸盐缓冲液溶液、乙醇-琥珀酸盐缓冲液溶液、乙醇-枸櫞酸盐缓冲液溶液、乙醇-乳酸盐缓冲液溶液等，其中乙醇浓度可以为80% 100%(v/v)，该乙醇溶液在高浓度磷脂缓释制剂中的含量为约30% 约5% (g/g)。本发明的目的之一，提供了ー种高浓度磷脂缓释制剂，包含磷脂、生物活性成分、 乙醇溶液和/或注射用油，基于制剂的总重量计，其中磷脂含量为约50% 约85%(g/g)，生物活性成分含量为约0. 01% 约10% (g/g)，注射用油含量为约10% 约40% (g/g),乙醇溶液含量为约30% 约5% (g/g)，且乙醇溶液的浓度范围为80% 100% (ν/ν)。本发明的以磷脂为基质的原位注射相变凝胶缓释系统是ー种新颖的剂型，是将蛋白多肽类药物或其他药物溶解在高浓度的磷脂-乙醇溶液中，成为流动性良好的液体，注入体内后，乙醇迅速扩散，析出的磷脂形成凝胶，包裹药物，具有良好的缓释作用。本发明的另ー个目的之一，提供了一种制备原位注射相变凝胶缓释系统，即高浓度磷脂缓释制剂的方法。在一具体实施方案中，本发明的制备方法，包括下述步骤
(1)取生物活性成分溶于适量乙醇溶液中，再与适量注射用油混和，形成药物溶液，微孔滤膜过滤灭菌；
(2)在无菌条件下取注射级磷脂与药物溶液混合，搅拌使磷脂完全溶解，静置片刻以除去制剂中的气泡，分装，密封，即得。由于部分多肽在液体环境中不太稳定，需干燥保存，故在另一具体实施方案中，本发明还提供了另ー种高浓度磷脂缓释制剂的制备方法，包括下述步骤
(1)取适量生物活性成分溶于适量的纯水或缓冲盐溶液中，形成药物溶液，微孔滤膜过滤灭菌，无菌条件下加入注射级磷脂，搅拌混勻；
(2)将上述半固体磷脂凝胶分装，按常规方式冷冻干燥，密封；
(3)将适量乙醇溶液和适量注射用油混和，微孔滤膜过滤灭菌，分装，密封，备用。
在具体的实施方案中，微孔滤膜优选0. 22Mffl。在具体的实施方案中，优选将步骤(2)和(3)的产品，以试剂盒的方式組合包装。本发明的产品使用吋，直接将组合包装中的注射用油-乙醇混和溶液注入冻干磷脂中，用力振摇或超声，溶解，即得。本发明所述的原位注射相变凝胶缓释系统可以用于注射给药，也可以用于外用给药等其他给药形式。本发明所述的原位注射相变凝胶缓释系统也可以用于修复和扩充软和/或硬组
幺ロ
-ハO本发明通过创造性的研究，以磷脂、乙醇溶液和/或注射用油等作为主要原料，采用蛋白多肽类药物或小分子化学药物如奥曲肽、促红细胞生成素、硫酸吗啡等为模型药物， 通过简单搅拌的方式制备成高浓度磷脂缓释制剂。所得制剂为真溶液，流动性良好，容易注射给药，动物体内实验证明其具有良好的缓释效果。考査了高浓度磷脂缓释制剂对注射部位的刺激性，结果显示该制剂具有非常好的生物相容性，不会对给药部位产生刺激。因此，本发明从而很好地解决了高磷脂浓度的囊泡型磷脂凝胶不易注射给药的问题，同时又取得了较好的缓释效果，具有良好的应用前景。本发明的优点
高浓度磷脂缓释制剂含有能够与水完全互溶的乙醇溶液，注射到体内后，乙醇能够迅速扩散到体液中，制剂中的磷脂析出固化，成为药物缓释的载体，控制药物的释放。动物体内实验证明该制剂确实具有良好的缓释效果。实质上高浓度磷脂缓释制剂是ー种真溶液， 与相同磷脂浓度的囊泡型磷脂凝胶相比具有流动性好、容易注射给药等优点。另外还可以根据所要包载药物的溶解性选择合适的液体或液体組合来溶解药物，以制得均勻透明的稳定制剂。此外，高浓度磷脂缓释制剂中不含水分或水分的含量很低，且制剂中含有乙醇，可以有效抑制微生物的生长，有利于制剂的稳定和贮藏，从而扩大了高浓度磷脂缓释制剂的应用范围。


以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中
图1为高效液相色谱-质谱法绘得的醋酸奥曲肽的线性回归曲线。图2为大鼠皮下注射醋酸奥曲肽的高浓度磷脂缓释制剂的药时曲线。图3为醋酸奥曲肽的体外标准曲线。
具体实施例方式以下实施例是对本发明的进ー步说明，但绝不是对本发明范围的限制。下面參照实施例进ー步详细阐述本发明，但是本领域技术人员应当理解，本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行等同替换、組合、改良或修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。实施例1取醋酸奥曲肽50mg，溶于1. 5g的85% (ν/ν)乙醇-pH4. 0乳酸缓冲液溶液中，得到药物溶液，0. 22ΜΠ1微孔滤膜过滤，加入蛋黄卵磷脂Ε80 7. Og,再加入经0. 22Mm微孔滤膜过滤后的大豆油1. 5g，无菌环境下磁力搅拌约0.证，至E80完全溶解，得到含有大量气泡的乳黄色不透明液体，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得。实施例2
取胸腺五肽20mg，溶于2. Og无水乙醇中，得到药物溶液，0. 22Mm微孔滤膜过滤，加入蛋黄卵磷脂E80 6. 0g，再加入0. 22ΜΠ1微孔滤膜过滤的中链脂肪酸甘油酯2. 0g，磁力搅拌约 0. 5h，至E80完全溶解，得到含有大量气泡的乳黄色不透明液体，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得胸腺五肽的高浓度磷脂缓释制剂。实施例3
取胰岛素lOOmg，溶于2. Og 90% (ν/ν)乙醇-生理盐水溶液中，得到药物溶液，0. 22Mm 微孔滤膜过滤，加入大豆磷脂5. 5g，再加入0. 22Mffl微孔滤膜过滤的大豆油2. 5g，磁力搅拌约0.证，至大豆磷脂完全溶解，得到含有大量气泡的乳黄色不透明液体，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得胰岛素的高浓度磷脂缓释制剂。实施例4
取促红细胞生成素(EPO) 30mg，溶于2. Og的80%乙醇-磷酸盐缓冲液(pH值6. 9)中， 得到药物溶液，0. 22Mm微孔滤膜过滤，加入蛋黄卵磷脂E80 5. 0g，再加入3. Og 0. 22Mm微孔滤膜过滤的麻油，磁力搅拌约0.紐，至E80完全溶解，得到含有大量气泡的乳黄色不透明液体，静置至气泡基本完全消失，分装，密封，即得促红细胞生成素的高浓度磷脂缓释制剂。实施例5
取亮氨酸脑啡肽lOOPg，溶于2. Og的85%(ν/ν)乙醇-水溶液中，得到药物溶液，0. 22Mm 微孔滤膜过滤，加入氢化大豆磷脂7. 0g，再加入l.Og 0.22Mm微孔滤膜过滤的大豆油，磁力搅拌约0.证，至氢化大豆磷脂完全溶解，得到含有大量气泡的乳黄色不透明液体，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得亮氨酸脑啡肽的高浓度磷脂缓释制剂。实施例6
取白細胞介素16mg，溶于1. Og的80% (ν/ν)乙醇-水溶液中，得到药物溶液，0. 22Mm 微孔滤膜过滤，加入蛋黄卵磷脂E80 7.58，再加入1.58 0.22Mm微孔滤膜过滤的中链脂肪酸甘油酷，磁力搅拌约0. 5h，至E80完全溶解，得到含有大量气泡的乳黄色不透明液体，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得白細胞介素的高浓度磷脂缓释制剂。实施例7
取干扰素30mg，溶于1. 5g的85% (ν/ν)乙醇-水溶液中，得到药物溶液，0. 22Mm微孔滤膜过滤，加入氢化蛋黄卵磷脂6. 5g，再加入2. Og经0. 22ΜΠ1微孔滤膜过滤的大豆油，磁力搅拌约0.紐，至氢化蛋黄卵磷脂完全溶解，得到含有大量气泡的乳黄色不透明粘稠液体，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得干扰素的高浓度磷脂缓释制剂。实施例8
取醋酸亮丙瑞林lOOmg，溶于1. 5g 80% (ν/ν)乙醇-水溶液中，得到药物溶液，0. 22Mm 微孔滤膜过滤，加入大豆磷脂7. 5g，再加入1. Og经0. 22Mffl微孔滤膜过滤的中链脂肪酸甘油酷，磁力搅拌约0.紐，至大豆磷脂完全溶解，得到含有大量气泡的乳黄色不透明液体，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得醋酸亮丙瑞林的高浓度磷脂缓释制剂。CN 102526753 A实施例9
取生长激素40mg，溶于1. 5g的95% (ν/ν)乙醇-水溶液中，得到药物溶液，0. 22Mm微孔滤膜过滤，加入ニ棕榈酰磷脂酰胆碱6. Og,再加入2. 5g经0. 22Mffl微孔滤膜过滤的油酸乙酷，磁力搅拌约0. 5h，至完全溶解，得到含有大量气泡的乳黄色不透明液体，静置至气泡完全消失，得到澄清透明液体，分装，密封，即得生长激素的高浓度磷脂缓释制剂。实施例10
取醋酸艾塞纳肽20mg溶于IOml注射用水中，形成药物溶液，0. 22Mm微孔滤膜过滤灭菌，无菌条件下加入注射级蛋黄卵磷脂E80 3. 0g，搅拌混勻，按aiil/瓶分装，-40°C冷冻4小时，冻干机上抽干M小吋，得酥松冻干磷脂，密封，备用。将5g的95%乙醇溶液和5g中链脂肪酸甘油酯混和，0. 22Mm微孔滤膜过滤灭菌， 分装成0. 4g/瓶，密封，备用。临用时将中链脂肪酸甘油酷-95%乙醇混和溶液注入冻干磷脂中，用力振摇，溶解，即得。实施例11
称取水溶性药物硫酸吗啡60mg，溶于2. Og 85% (ν/ν)乙醇-水溶液中，得到药物溶液， 0. 22ΜΠ1微孔滤膜过滤，加入大豆磷脂6. 0g，再加入2. Og经0. 22Mm微孔滤膜过滤的油酸乙酷，磁力搅拌至大豆磷脂完全溶解，得到含有大量气泡的乳黄色不透明液体，静置至气泡完全消失，得到澄清透明液体，分装，密封，即得。实施例12
称取脂溶性药物尼莫地平40mg，溶于2. Og无水乙醇中，得到药物溶液，0. 22ΜΠ1微孔滤膜过滤，加入蛋黄卵磷脂E80 7.0g，再加入l.Og经0.22Mm微孔滤膜过滤的中链脂肪酸甘油酷，磁力搅拌至E80完全溶解，得到含有大量气泡的乳黄色不透明液体，静置至气泡基本完全消失，得到澄清透明液体，分装，密封，即得。实施例13乙醇浓度的选择
称取4份蛋黄卵磷脂(E80)，每份7. Og,分別加入不同浓度的乙醇至10. Og,搅拌2小时，观察外观，并測定粘度，结果见表1。可见，乙醇浓度在80%以上都可以很好地溶解磷脂， 得到流动性良好的溶液。表1乙醇浓度的筛选
乙醇浓度1009590858075外观澄清透明澄清透明澄清透明澄清透明澄清透明浑浊不澄清粘度152. 7158. 1156. 8161. 2173. 6326. 3
实施例14不同种类的基质材料对制剂粘度的影响
按表2处方分別称取不同种类的磷脂7. 0g、油1. 5g和乙醇溶液1. 5g，搅拌2小时，测定粘度，结果见表2。可见添加不同种类的磷脂、油和乙醇溶液对制剂的粘度影响不大。
表2不同种类的基质材料对制剂粘度的影响
权利要求
1.ー种包含磷脂、乙醇溶液和/或注射用油的药物组合物。
2.根据权利要求1所述的药物組合物，其特征在于为原位注射相变凝胶缓释制剂。
3.权利要求2所述的ー种原位注射相变凝胶缓释制剂，其特征在于包含磷脂、生物活性成分、乙醇溶液和/或注射用油，基于制剂的总重量计，其中磷脂含量为约50% 约85% (g/g)，生物活性成分含量为约0. 01% 约10% (g/g)，注射用油含量为约10% 约40% (g/ g)，乙醇溶液含量为约30% 约5% (g/g)。
4.权利要求3所述的ー种原位注射相变凝胶缓释制剂，其特征在于乙醇溶液的浓度范围为约 80% 100% (ν/ν)。
5.根据权利要求2所述的药物組合物，其特征在于所述磷脂包括，天然磷脂、半合成磷脂、合成磷脂中一种或多种的组合。
6.根据权利要求2所述的药物組合物，其特征在于所述注射用油包括，大豆油、玉米油、麻油、茶油、鱼油、中链脂肪酸甘油酷、棉子油、油酸乙酯及上述物质的组合。
7.根据权利要求2所述的药物組合物，其特征在于所述乙醇溶液包括无水乙醇、乙醇-水溶液、乙醇-生理盐水溶液、乙醇-磷酸盐缓冲液溶液、乙醇-醋酸盐缓冲液溶液、乙醇-碳酸盐缓冲液溶液、乙醇-琥珀酸盐缓冲液溶液、乙醇-枸櫞酸盐缓冲液溶液、乙醇-乳酸盐缓冲液溶液等，其中乙醇浓度可以为约80% 100%(ν/ν)，该乙醇溶液在原位注射相变凝胶缓释制剂中的含量为约30% 约5% (g/g)。
8.ー种制备权利要求2所述的原位注射相变凝胶缓释制剂的方法，其特征在于包括以下步骤(1)取生物活性成分溶于适量乙醇溶液中，再与适量注射用油混和，形成药物溶液，微孔滤膜过滤灭菌；(2)在无菌条件下取注射级磷脂与药物溶液混合，搅拌使磷脂完全溶解，静置片刻以除去制剂中的气泡，分装，密封，即得。
9.ー种制备权利要求2所述的原位注射相变凝胶缓释制剂的试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤(1)取适量生物活性成分溶于适量的纯水或缓冲盐溶液中，形成药物溶液，微孔滤膜过滤灭菌，无菌条件下加入注射级磷脂，搅拌混勻；(2)将上述半固体磷脂凝胶分装，按常规方式冷冻干燥，密封；(3)将适量乙醇溶液和适量注射用油混和，微孔滤膜过滤灭菌，分装，密封，备用；(4)步骤(2)和(3)的产品，以试剂盒的方式組合包装。
10.权利要求1的組合物在制备降低乙醇副作用的原位注射相变凝胶缓释制剂中的应
全文摘要
本发明提供一种以磷脂为基质的原位注射相变凝胶缓释制剂，并提供了该制剂的制备方法。本发明采用简单的方法将较高浓度(50%～85%)的磷脂、生物活性成分、不同浓度的乙醇溶液和/或注射用油制备成高浓度磷脂缓释制剂，具有生物相容性好，不良反应小，缓释效果显著，适用于皮下注射、肌肉注射、外用给药等多种给药形式的特点，而且所包载药物的量可方便地根据药物临床用剂量进行调节，具有广阔的应用前景。
文档编号A61K47/44GK102526753SQ20111042010
公开日2012年7月4日 申请日期2011年12月15日 优先权日2011年12月15日
发明者孙逊, 张志荣, 龚涛 申请人:成都师创生物医药科技有限公司