专利名称：具有显著化学性肝损伤保护功能的复合生物制剂的利记博彩app
技术领域：
本发明是涉及一种对化学性肝损伤有显著保护功能的复合生物制剂。
背景技术：
中国是肝病高发大国，每年因各种肝脏疾病所支出的医疗费用高达500亿元人民币。化学性肝损伤及各种原因造成的脂肪肝成为我国越来越高发的常见疾病，流行病学研究表明中国人脂肪肝发病率约为22 25%，其发病率随着人们生活水平的提高而逐渐上升。例如临床流行病学研究表明山东省人口化学性肝损伤及各种原因造成的脂肪肝发病率约为33 35%，北京市人口化学性肝损伤及各种原因造成的脂肪肝发病率约为25%，上海市人口化学性肝损伤及各种原因造成的脂肪肝发病率约为20%，深圳市人口化学性肝损伤及各种原因造成的脂肪肝发病率约为17%。肝细胞变性中度或重度脂肪肝如果不及时治疗，十年内发展成肝纤维化及肝硬化的比例高达70%，约20% -30%的肝硬化病人最终将发展成肝癌病人。利用化学合成药物保肝解毒尽管是一条潜在的途径，但由于须对该药物进行代谢转化，这将对本已受损脆弱的肝脏造成更大的负荷。从目前已经采用的化学药物(如硫普罗宁等)及其它保健品(如水飞蓟等)的临床疗效及辅助保护化学性肝损伤的功效看，普遍都不理想。从天然存在的生化产物中寻找保护肝脏预防酒精或其它化学物质中毒，促进其代谢、排泄的新型内源性生物大分子复合抗氧化剂成为预防及治疗脂肪肝及代谢紊乱综合征的最佳选择。国际学术界公认，阻止或预防活性氧自由基(Reactive Oxygen Species, R0S)和活性氮自由基(RNS)攻击，阻断核转录因子NF-κ B (Nuclear transcipton factor, NF-κ B)、月中瘤坏死因子(Tumor necrosis factor- α , TNF-α )、转移生长因子 β (Transforming Growth Factor β , TGF-β )及白介素等细胞因子的诱发释放是预防及治疗脂肪肝及代谢紊乱综合征的关键，调整肝细胞氧化还原代谢，给予强效抗氧化剂清除 ROS及毒性细胞因子成为国际学术界公认的未来治疗纠正化学性肝损伤及各种原因造成的脂肪肝及代谢紊乱综合征的主要研发方向。到目前为止，国内外对不同原因引起的肝损伤尚无良好的治疗办法，一系列的检索结果表明，国内外包括西方主要发达国家美国、英国、德国、意大利、法国、日本、澳大利亚、加拿大等尚无注册的有关高效治疗肝损伤的技术、知识产权及通过FDA认可的药物。目前，国内外有一些使用氨基酸辅助治疗肝损伤或具有其他保健作用的报道，大多采用一种或几种氨基酸组成的配方，如由赖氨酸、色氨酸、蛋氨酸、精氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、天门冬氨酸等组成的瑞年牌营养食品片，主要声称保健功能为保持旺盛精力、改善睡眠、提高免疫力等，未提及对化学性肝损伤有疗效，而且每100份仅含氨基酸43. 6g份。目前市面上销售的海王金樽片主要以牡蛎精粉、维生素C、L-半胱氨酸、牛黄酸、淀粉、蔗糖等为主要成分，功效成分为粗粉糖及牛黄酸，其中牛磺酸为每百份仅0. 846份含量，经近年来市场检验，有一定的解酒功效，这种营养食品片主要对肝脏有一定的辅助保护作用，但是对化学性肝损伤治疗效果不明显；专利申请号为200610102355.7的中国专利申请中公开了以自然界所存在的所有20种氨基酸中任意几种氨基酸混合，再配合自然界存在的所有维生素中任意几种维生素混合、再加几种微量元素为配方的治疗脂肪肝、酒精肝、降血脂、降转氨酶的药物，其特征在于按重量比例氨基酸30-60份，维生素10-30份，微量元素2-5份为配方，经过我们多年的试验研究发现，各种氨基酸以任意几种、任意比例配合后对肝病治疗没有实际效果，更达不到该申请所宣称的显效率为83%。国内外对不同原因引起的肝损伤尚无良好的治疗办法，治愈率和有效率较低。例如，在2006年6月中旬在美国华盛顿召开的世界内分泌及糖尿病学术大会最新报道，目前， 在美国，脂肪肝治疗6个月的有效率仅为43. 6 % (脂肪肝是糖尿病常见的并发症之一)，在这次世界内分泌及糖尿病学术大会上，明确把脂肪肝归类为代谢紊乱综合症之一。寻找预防与治疗脂肪肝及代谢紊乱综合征的有效药物是全世界生物医学科学家聚焦的热点研究领域之一。
发明内容
本发明的目的主要针对现有技术的缺点，提供一种通过对脂肪肝的分子病理学、 预防及治疗化学性肝损伤、脂肪肝的分子生物学机制及潜在途径研究、对多种高效天然活性抗氧化有效成份进行药理学、毒理学、分子生物学研究实验的最佳配方。本发明的技术方案为一种具有显著化学性肝损伤保护功能的复合生物制剂，由如下重量比例的原料组成
甘氨酸15-18份；
精氨酸12-15份；
半胱氨酸15-18份；
谷氨酰胺16-18份；
S-腺苷甲硫氨酸 7-10份；
α -硫辛酸7-12份。本发明的有益效果为本发明对天然抗氧化有效成分进行了药理学、毒理学、分子生物学的研究，几经筛选、优化与有效成分的组合，具有极其显著的保护肝脏、抗氧化、调节代谢、抑制炎症和逆转脂肪肝的病理过程等作用，尤其对酒精性脂肪肝治疗效果更为显著。 本发明通过改变和多重调整肝细胞的代谢途径、多位点阻止活性氧化自由基(ROS)攻击， 使细胞内抗氧化能力增加，明显升高细胞内抗氧化GSH含量，抑制肝脏星形细胞、巨噬细胞诱导α-肿瘤坏死因子(TNF-α)等炎性因子释放，抑制炎症反应和细胞凋亡过程，抵抗体内外化学毒素导致的肝损伤，能够显著改善肝脏功能。本发明具有极强的抗氧化和抑制炎症作用，S-腺苷甲硫氨酸及抗氧化剂半胱氨酸对脂多糖(LPS)诱导TNF-α、白介素IL-6、 IL-10有直接调节作用，有助于促进有害物(如酒精等化学物质)的排泄、稳定和调节肝细胞代谢，降低酒精损伤诱导的肝脏转氨酶(AST、ALT)升高，逆转和修复肝脏结构与功能。本发明对各种原因导致的肝损害均具有良好的治疗和预防作用，有效率(显效率)为98.6%，治愈率为76.8%。
图1为甲硫 氨酸代谢途径
图2为实验一、SAMe，L-半胱氨酸对LPS诱导的血清肿瘤转移因子(TNF-α )及转氨酶 ALT的影响的对比图表
图3为实验二、SAMe、半胱氨酸与α-硫辛酸对鼠RAW细胞白介素6 (IL-6)、白介素 IO(IL-IO)的影响的对比图表
图4为实验三、SAMe与半胱氨酸对LPS刺激的RAW细胞肿瘤坏死因子(TNF- α )释放的影响的对比图表
图5为谷氨酰胺、精氨酸对小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT，U/L)的影响图表图6为在532nm吸收波测定TBARS在肝组织中的含量图表
图7为实验五、甘氨酸对脂多糖(LPS)诱导的大鼠体内转氨酶及肿瘤坏死因子TNF-α 生成与释放的影响的对比图表
图8为本发明配方对线粒体GSH、TBARS、ALT的影响对比图表图9为对大鼠血清ALT及TNF- α含量的影响对比图表图10为本发明对脂肪肝患者代谢的影响图表图11为本发明对脂肪肝患者肝功能的影响图表图12为本发明对肾功能的影响图表图13为本发明对中度脂肪肝代谢的影响图表图14为本发明对中度脂肪肝患者肝功能的影响图表图15为本发明对重度脂肪肝患者肝功能的影响图表图16为本发明对重度脂肪肝患者特殊炎性因子的影响图表图17为本发明对酒精性脂肪肝患者肝功能的影响图表图18为本发明对非酒精性脂肪肝患者肝功能的影响图表图19本发明对不同类型及不同程度脂肪肝的临床综合疗效图表
具体实施例方式具体实施例1 一种具有显著化学性肝损伤保护功能的复合生物制剂，由如下重量比例的原料组成甘氨酸15份；精氨酸12份；半胱氨酸15份；谷氨酰胺16份；S-腺苷甲硫氨酸7份； α-硫辛酸7份。具体实施例2:一种具有显著化学性肝损伤保护功能的复合生物制剂，由如下重量比例的原料组成甘氨酸18份；精氨酸15份；半胱氨酸18份；谷氨酰胺18份；S-腺苷甲硫氨酸10份； α-硫辛酸12份。具体实施例2:一种具有显著化学性肝损伤保护功能的复合生物制剂，由如下重量比例的原料组成甘氨酸16份；精氨酸13份；半胱氨酸16份；谷氨酰胺17份；S-腺苷甲硫氨酸9份；α-硫辛酸10份。谷胱甘肽 (GSH)是一种三肽，作为机体主要的抗氧化攻击屏障，以极高浓度(m mol/L水平)存在于细胞内。约85% GSH存在于细胞质中，仅10 15% GSH存在于细胞的氧化场所线粒体内。由于线粒体本身没有Y-谷氨酸半胱氨酸合成酶，线粒体内的GSH主动转运取之于细胞质中的GSH。众所周知，线粒体是产生活性氧自由基(ROS)的场所，并且对氧化攻击敏感，所以GSH是线粒体最主要的抵抗ROS攻击的屏障。细胞因子的诱导释放是外源化合物肝损伤及酒精性肝损伤的重要特征之一。多年来的临床研究发现，脂肪变性肝炎、肝硬化及酒精性肝炎病人血清中TNF-α，白细胞介素 l(IL-l)、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)明显升高。在大量实验性肝损伤模型中，也发现 TNF-α、IL-l、IL-6、IL-8、TGF-i3等在肝细胞损伤及坏死过程中发挥中心作用。在正常情况下，肝脏细胞能够抵抗TNF-α的细胞毒作用。然而当TNF-α大量产生释放或肝内抗氧化物质大量减少不足以抵抗TNF-α时，肝细胞即被大量杀伤。TGF-β在发挥杀伤肝细胞作用同时，尚可大量诱导合成胶原，加速肝纤维化过程。TNF-α大量产生与释放是酒精性肝炎病理发生发展过程的中心环节之一。因为酒精氧化代谢产生的ROS攻击不但大量激活肝脏星形细胞(Kupffer cell)释放核转录因子NF-κ B，肿瘤坏死因子TNF-α，而且酒精的氧化代谢严重消耗了肝内抗氧化物质，改变了肝细胞正常的氧化还原平衡，使肝细胞对TNF-α 造成的肝毒害更加敏感。肝脏内肝细胞正常的甲硫氨酸(Methionine，)代谢途径是肝内维持抗氧化剂平衡的重要途径。甲硫氨酸是一种肝脏疾病辅助治疗用药，也是人体的一种必需氨基酸之一。 甲硫氨酸代谢途径在正常人体生理代谢，特别是维持人体抗氧化平衡过程中发挥重要作用。甲硫氨酸通过甲硫氨酸腺苷转移酶(Methionine Adenosyltransferase,MAT)催化，可代谢成多种人体必需的重要氨基酸，作为前体合成人体必需的人体重要生理物质，如多胺、 胆碱、谷胱甘肽、半胱氨酸等，其中谷胱甘肽、半胱氨酸是人体及肝脏细胞内最重要的抗氧化物质。甲硫氨酸代谢的另一重要作用是为体内各种重要的生化生理甲基化反应提供甲基 (通过转甲基酶)。甲硫氨酸代谢途径见图1。脂肪肝状况下，通常甲硫氨酸转移酶(MAT)活性下降，导致甲硫氨酸堆积，同时下游代谢产物大大减少。从图1可以看出，通过甲硫氨酸代谢转化，人体可以获得许多重要生理物质，特别是谷胱甘肽(Glutathione，GSH)，半胱氨酸(Cysteine)等，在保持细胞的正常氧化还原状态过程中发挥着极重要的功能，S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine，SAMe)，是转硫反应是必须中间产物，通过这一途径，甲硫氨酸才能转化为半胱氨酸，提供其他重要蛋白质合成原料及维持细胞内及细胞间正常氧化还原状态。S-腺半胱氨酸转甲基后，被代谢为S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine，SAH)。SAH被S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosylhomocysteine Hydrolase, SAHH)代谢为同型半胱氨酸和腺苷。同型半胱氨酸一方面可被转化为半胱氨酸，另一方面又可被维生素B12依赖的甲硫氨酸合成酶 (Methionine Synthase, MS)利用5_甲基四氢叶酸(CH3THF)重新合成甲硫氨酸。产生的四氢叶酸(THF)又继而被甲基四氢叶酸还原酶(Methylenetetrahydrofolate Reductase, MTHFR)重新还原生成甲基四氢叶酸(CH3THF)，同型半胱氨酸也可被甜菜碱(Betaine)同型半胱氨酸转移酶(Bataine Homocysteine S-methyltransferase，BHMT)催化形成甲硫氨酸，同时释放出二甲基甘氨酸(Dimethyl-glycine，DMG)由此可见，体内甲硫氨酸代谢途径是一个精细的代谢循环途径。一旦这一途径的某一环节被阻断，就会产生系列的代谢紊乱，打破肝脏内原有的良好的氧化还原状态。正常情况下，成年人每日可产生6 8克SAMe，大量研究表明，多数脂肪肝状态下存在甲硫氨酸代谢循环紊乱。例如，长期饮用酒精可导致甲硫氨酸腺苷转移酶(MAT)活性下降，导致甲硫氨酸过剩，而下游代谢产物大大减少，使机体无法获得维持正常功能所需的氨基酸及抗氧化物质。研究证实，人体缺乏SAMe可导致血中TNF-α水平大大升高，并可引起内毒素血症，TNF-α又可诱导一系列细胞因子释放及激活炎症过程。1、S-腺苷甲硫氨酸、半胱氨酸(Cysteine)抗氧化与肝损伤保护肝内S-腺苷甲硫氨酸(SAMe)缺乏是脂肪肝形成与进展过程中极其重要的环节。 正如前述甲硫氨酸代谢途径，SAMe是代谢途径的中心环节之一。因为SAMe是谷胱甘肽 (GSH)、半胱氨酸等体内重要抗氧化物质的合成前体。GSH是一种三肽，作为机体主要的抗氧化攻击屏障，以极高浓度(mmol/L水平)存在于细胞内。约85% GSH存在于细胞质中，仅 10 15% GSH存在于细胞内氧化场所线粒体内。由于线粒体本身没有Y-谷氨酰半胱氨酸合成酶，线粒体内的GSH主要通过主动转运取之于细胞质中的GSH。众所周知，线粒体是产生ROS的场所，并且对氧化攻击敏感，所以GSH是线粒体最主要的抵抗ROS攻击的屏障。SAMe及半胱氨酸是GSH的合成前体，补充SAMe及半胱氨酸能够纠正肝细胞内及线粒体内由于GSH浓度下降，ROS造成的攻击损伤。细胞因子的诱导释放是外源化合物肝损伤及酒精肝损伤的重要特征之一。多年来的临床研究发现，脂肪变性肝炎、肝硬化及酒精性肝炎病人血清中TNF-α，白细胞介素 l(IL-l)，白介素6(IL-6)，自介素8(IL-8)明显升高。在大量实验性肝损伤模型中，也发现 TNF- α , IL-l、IL-6、IL-8、TGF-i3等在肝细胞损伤及坏死过程中发挥中心作用。在正常情况下，肝脏细胞能够抵抗TNF-α的细胞毒作用。然而当TNF-α大量产生释放或肝内抗氧化物质大量减少不足以抵抗TNF-α时，肝细胞即被大量杀伤。TGF-β在发挥杀伤肝细胞作用同时，尚可大量诱导合成胶原，加速肝纤维化过程。TNF-α大量产生与释放是酒精性肝炎病理发生发展过程的中心环节之一。因为酒精氧化代谢产生的ROS攻击不但大量激活Kupffer细胞释放TNF- α，而且酒精的氧化代谢严重消耗了肝内抗氧化物质，改变了肝细胞正常的氧化还原平衡，使肝细胞对TNF- α造成的肝毒害更加敏感。研究表明，抗TNF-α抗体疗法能够有效地阻止酒精及其他化学物质造成的肝损伤。临床研究发现，抗TNF-α抗体疗法可有效地改善关节炎、炎症性小肠疾病等也侧面证实了 TNF-α在许多疾病中的作用。研究表明，SAMe及半胱氨酸均可通过调节肝损伤过程中细胞因子的产生与释放及增加肝脏内GSH发挥抗肝细胞损伤作用。半胱氨酸是含巯基氨基酸，一方面它是GSH合成前体，另一方面，作为抗氧化剂，它可直接清除体内自由基。2、SAMe及半胱氨酸的抗氧化作用及对细胞因子的影响ROS氧化攻击可直接刺激机体产生分泌内毒素，血中内毒素升高[如脂质过氧化物、脂多糖(LPS)]可诱导激活肝脏星形细胞(Kupffer cell)，使其分泌并释放大量肿瘤坏死因子(TNF-α)及白细胞介素IL-6、IL-8、IL_10等。TNF-α可直接引起肝细胞脂肪变性，炎症及坏死。TNF- α还可促进体外周脂肪分解，使游离脂肪酸通过血液进入肝脏并蓄积。TNF-α也可减少肝脏细胞对低密度脂蛋白的清除。因此TNF-α在脂肪肝、肝硬化的发生、发展过程中起重要作用。白介素IO(IL-IO)，最初被称为细胞因子合成抑制因子。它是一种机体内重要的炎症反应及免疫亢进反应抑制因子。不同细胞包括单核细胞、巨噬细胞、淋巴B细胞、T细胞以及自然杀伤细胞等都可产生释放IL-10，IL-10有较强的抗纤维化作用，IL-10主要通过抑制胶原基因转录及增加胶原分解酶表达发挥其抗纤维化作用。临床研究表明，肝硬化病人白介素IO(IL-IO)生成量及血中浓度均明显降低，IL-10基因敲除小鼠对醋氨酚及酒精诱导的肝脏损害更敏感。白介素_6是一种多功能细胞因子，它既有促炎症作用又可发挥抗炎症作用，到目前为止，较多证据表明，IL-6具有抗炎症及抗细胞凋亡作用。白介素-6预处理大鼠能显著保护缺血再灌注引起的肝损伤。白介素_6还可保护内皮细胞功能及保护肝细胞损伤。另外白介素_6尚与肝脏再生功能密切相关。IL-6基因敲除小鼠显示肝再生功能障碍，因此IL-6处理可完成翻转这种肝再生障碍。硫辛酸(alpha lipoic acid)是一种能消除加速老化与致病的自由基、属于B族维他命物质，硫辛酸是一种存在于线粒体的酵素，硫辛酸在体内经肠道吸收后进入细胞， 兼具脂溶性与水溶性的特性，因此可以在全身通行无阻，到达任何一个细胞部位，提供人体全面效能，是唯一兼具脂溶性与水溶性的万能生物抗氧化剂。美国加州大学柏克莱分校的派克博士(Dr. Lester Packer)是世界顶尖的硫辛酸和抗氧化剂权威。他发现硫辛酸不像别的抗氧化剂在体内只有一项特定的任务，它具「自由体」的身份，能在其它抗氧化剂短缺时为之「代打」；也就是说，如果人体内缺乏维他命E或C，硫辛酸将暂时接手它们的工作。而且硫辛酸还能大大增强维他命C和E的作用，於是，如果将Alpha-Lipoic Acid和一些其它的抗氧化成份一起制成复 方，可能就会提高这些抗氧化成份的效果，少数的研究报告显示硫辛酸用来预防甚至治疗某些疾病如AIDS、糖尿病及其并发症、神经系统退化及肝机能失调等症状。但由於硫辛酸只少量存在於马铃薯、菠菜及肉类中，因此若要补充足够的硫辛酸来预防疾病，最好还是选择已萃取好的营养补充品市面上业者常常将硫辛酸与葡萄子，绿茶，维他命C等成份制成复方产品。硫辛酸是一种超强型的抗氧化剂，被称为“万能抗氧化剂”，更是自由基捕手，是机体细胞利用糖类等能源物质产生能量所需的一种限制性必需营养物质，广泛用于治疗和预防心脏病、糖尿病等多种疾病。一般认为它能保存和再生其它抗氧化剂，如维生素C和E等，并能平衡血糖浓度。有效增强体内免疫系统，免受于自由基的破坏。它对多种病症具有治疗功效肝病、糖尿病、人类后天免疫不全带原者、艾滋病、牛皮藓、湿疹、烧伤、皮肤癌、多发性硬化症、帕金森氏症、神经科方面的疾病、风湿病、风湿性关节炎、红斑性狼疮、硬皮症、自体免疫方面的疾病、白内障、其它眼科疾病、心脏病、中风、动脉硬化、用于急性及慢性肝炎、肝硬变、肝性昏迷、脂肪肝等疾病。为研究SAMe及抗氧化剂半胱氨酸对细胞因子的调节作用，我们观察了 SAMe及半胱氨酸对脂多糖(LPS)诱导的TNF-α的影响及对白介素IL_6、IL-10的影响。实验一、SAMe, L-半胱氨酸对LPS诱导的血清肿瘤转移因子(TNF-α )及转氨酶 ALT的影响正常雄性SD大鼠体重200_220g，分为三组，每组12只，正常对照组，SAMe给药组， 及半胱氨酸给药组。正常对照组每天肌肉注射一次等体积生理盐水，SAMe组每天肌肉注射一次SAMe (50mg/kg体重)，半胱氨酸组每天肌肉注射一次半胱氨酸，剂量为60mg/kg体重。 连续给药14天，14天后大鼠尾静脉注射脂多糖(LPS)2mg/kg体重，120分钟后，取血，分离血清，测定大鼠血清中TN F-α水平及丙氨酸转氨酶(ALT)水平。结果如下。
权利要求
1. 一种具有显著化学性肝损伤保护功能的复合生物制剂，其特征在于由如下重量比例的原料组成甘氨酸15-18份；精氨酸12-15份；半胱氨酸15-18份；谷氨酰胺16-18份；S-腺苷甲硫氨酸7-10份；α -硫辛酸7-12份。
全文摘要
本发明涉及一种具有显著化学性肝损伤保护功能的复合生物制剂，由如下重量比例的原料组成甘氨酸15-18份；精氨酸12-15份；半胱氨酸15-18份；谷氨酰胺16-18份；S-腺苷甲硫氨酸7-10份；α-硫辛酸7-12份。本发明对各种原因导致的肝损害均具有良好的治疗和预防作用，有效率(显效率)为98.6％，治愈率为76.8％。
文档编号A61K31/198GK102327259SQ201110078790
公开日2012年1月25日 申请日期2011年3月31日 优先权日2011年3月31日
发明者姜国辉 申请人:姜国辉