专利名称：薰衣草总黄酮的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种总黄酮的制备方法，更具体地说是涉及薰衣草总黄酮制备方法的技术领域，属于中药制备技术领域。
背景技术：
芳香植物薰衣草为唇形科薰衣草属多年生亚灌木,主要有狭叶薰衣草Lavandulaangustifola、宽叶薰衣草L. spica、杂薰衣草L. intermedia三个来源植物,原产于阿尔卑斯山脉南麓的地中海沿岸地区，现广泛栽培种植于世界各地。作为维吾尔医常用药材，薰衣草具有消散寒气、补胃理脑、燥湿止痛之功效，用于胸腹胀满、感冒咳喘、头晕头痛、心悸气短、关节骨痛等病症的治疗，临床应用已有数千年的历史，被收载于《中华人民共和国卫生部药品标准-维吾尔药分册》中。目前，国内外对薰衣草的研究多集中于其精油上，而对其非精油部分的研究较少。薰衣草非精油部分主要包含三萜、黄酮及酚酸类化学成分。其中，黄 酮类成分具抗氧化、抗炎、抗肿瘤和抗病毒等多种生物活性，广泛应用于医疗食品化妆品领域之中。2009年Torras-Claveria L等采用高效液相色谱质谱联用对提纯薰衣草精油后的药渣进行了抗氧化活性成分的研究，从中获得了 23个黄酮和酚酸类成分，并通过高效液相色谱测定了这些成分的含量(J Agric Food Chem. 2007,55(21) :8436-43);国内吴霞等从新疆薰衣草中分离得到了 7个黄酮类化合物(中国中药杂志，2007，32 (9) =821-823.);杨洁等通过用50%乙醇提取、减压浓缩和冷冻干燥获得薰衣草总黄酮粗提物研究了该植物的抗氧化能力，发现其具有明显清除超氧阴离子和羟自由基的能力(中国食品添加剂，2010，2 :162-165.)。然而在本发明以前，国内外各种文献对薰衣草黄酮的研究仅局限于实验室中对各单体化合物的提取分离纯化，文献报道的薰衣草总黄酮仅仅是粗提物，即熏衣草50%乙醇提取物。薰衣草总黄酮及其制备方法却没有被研究，更没有在工业化生产中应用。为了解决这一问题，本发明提供了如下的方案。
发明内容
本发明的目的是提供一种薰衣草总黄酮的制备方法，即大孔吸附树脂吸附富集薰衣草总黄酮的方法。本发明所陈述的制备工艺具有自动化程度高、成本低、无污染的优点，能够有效富集薰衣草中的黄酮类成分，这是以往文献所没有报道的。为实现上述目的，本发明提供的一种薰衣草总黄酮提取物是通过如下的技术方案制备的(I)原料准备采集薰衣草全草后，洗净，晾干或晒干，再将其粉碎成茎长小于I厘米的粉末。(2)提取将处理好的薰衣草药材，置于提取罐中，加入8到12倍重量的去离子水加热回流提取1-3次，过滤，合并提取液，减压浓缩至溶液比重为I. 1-1. 2，在不断搅拌下加入4-5倍重量的95%乙醇(v/v)，放置12小时，过滤，滤液减压浓缩，得浸膏A，放置，备用。 进一步将上述步骤提取后剩下的药渣，晾干后，置于提取罐中，加入6到12倍重量的95%乙醇(v/v)加热回流提取1-3次，过滤，合并提取液，减压浓缩至浸膏；浸膏用去离子水混悬后，以乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩至浸膏后，以95%乙醇(v/v)加热溶解，静置24小时，过滤，滤液合并入萃取后溶液，减压浓缩，得浸膏B，放置，备用。⑶纯化①将浸膏A以去离子水混悬溶解后，上大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%乙醇(v/v)洗脱除杂，再以50-70%乙醇(v/v)洗脱，收集50-70%乙醇洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即为薰衣草总黄酮。②将浸膏A和浸膏B合并，以去离子水混悬溶解后，上大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%乙醇(v/v)洗脱除杂，再以50-70%乙醇(v/v)洗脱，收集50-70%乙醇洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即为薰衣草总黄酮。 按上述步骤制备的薰衣草总黄酮提取物，其总黄酮含量的重量百分比在50% -70%之间。为了更好的理解本发明，下面用本发明的发明原理以及产品性能检测结果来说明本发明比现有技术优异之处。本发明的原理基于大孔吸附树脂是一种由苯乙烯、二苯乙烯或a -甲基丙烯酸酯等聚合而成的高分子网状孔穴结构，是以吸附性和分子筛原理相结合的新型分离材料。该材料在水溶液中吸附力较强且具有良好的吸附选择性。其柱层析以固相萃取的方法，在保证原料药材标示性成分含量的前提下，在吸附有效部位的同时将该植物中无效成分糖类和鞣质等杂质选择性地去除。大孔树脂的常用型号有D-101、AB-8和HPD-600等，其特点是吸附容量大、工艺流程短、得率高、纯度高、树脂再生容易、效果可靠等。在本发明中，大孔树脂在吸附黄酮的同时将植物中的无效成分糖类、鞣质等杂质分离除去，并在保证黄酮类成分含量的前提下，有效地富集薰衣草总黄酮。本发明提供的一种薰衣草总黄酮提取物的制备方法，分别通过去离子水提取或去离子水和95%乙醇(v/v)联合提取，进一步采用国产大孔吸附树脂AB-8型或DlOl型或HPD-100或HPD-400或HPD-450或HPD-500或HPD-600或HPD-750富集纯化获得薰衣草总黄酮，以芦丁为对照品，按《中国药典》总黄酮测定方法测定总黄酮含量的重量百分比为50% -70%。具体步骤如下(I)原料准备采集薰衣草全草后，洗净，晾干或晒干，再将其粉碎成茎长小于I厘米的粉末。(2)提取将处理好的薰衣草药材，置于提取罐中，加入8到12倍重量的去离子水加热回流提取1-3次，过滤，合并提取液，减压浓缩至溶液比重为I. 1-1. 2，在不断搅拌下加入4-5倍重量的95%乙醇(v/v)，放置12小时，过滤，滤液减压浓缩，得浸膏A，放置，备用。进一步将上述步骤提取后剩下的药渣，晾干后，置于提取罐中，加入6到12倍重量的95%乙醇(v/v)加热回流提取1-3次，过滤，合并提取液，减压浓缩至浸膏；浸膏用去离子水混悬后，以乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩至浸膏后，以95%乙醇(v/v)加热溶解，静置24小时，过滤，滤液合并入萃取后溶液，减压浓缩，得浸膏B，放置，备用。(3)纯化①将浸膏A以去离子水混悬溶解后，上大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%乙醇(v/v)洗脱除杂，再以50-70%乙醇(v/v)洗脱，收集50-70%乙醇洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即为薰衣草总黄酮。②将浸膏A和浸膏B合并，以去离子水混悬溶解后，上大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%乙醇(v/v)洗脱除杂，再以50-70%乙醇(v/v)洗脱，收集50-70%乙醇洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即为薰衣草总黄酮。为了更好地理解本发明，下面结合本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但本发明的内容并不局限于此。
具体实施方式
实施例I(I)称取狭叶薰衣草10kg，粉碎成小于Icm的粉末，置于提取罐中，加入8倍重量的去离子水加热回流提取3次，过滤，合并提取液，减压浓缩至溶液比重为I. 1，在不断搅拌下加入4倍重量的95% (v/v)乙醇，放置12小时，过滤，滤液减压浓缩，得浸膏A，放置，备用。(2)将上述步骤提取后剩下的药渣，晾干后，置于提取罐中，加入10倍重量的95%(v/v)乙醇加热回流提取2次，过滤，合并提取液，减压浓缩至浸膏；浸膏用水混悬后，以乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩至浸膏后，以95%乙醇(v/v)加热溶解，静置24小时，过滤，滤液合并入萃取后溶液中，减压浓缩，得浸膏B，放置，备用。实施例2将实例I中的浸膏A以去离子水混悬溶解，上AB-8大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%乙醇(v/v)洗脱除杂，再以70% (v/v)乙醇洗脱，收集70% (v/v)的乙醇洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即为薰衣草总黄酮，黄酮含量的重量百分比为62. 35%，得率为4. 54%。实施例3将实例I中的浸膏A以去离子水混悬溶解，上DlOl大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%乙醇(v/v)洗脱除杂，再以70% (v/v)乙醇洗脱，收集70% (v/v)的乙醇洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即为薰衣草总黄酮，黄酮含量的重量百分比为56. 12%，得率为4. 27%。实施例4将实例I中的浸膏A以去离子水混悬溶解后，HPD600大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%乙醇(v/v)洗脱除杂，再以50% (v/v)乙醇洗脱，收集50% (v/v)的乙醇洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即为薰衣草总黄酮，黄酮含量的百分比为50. 21%，得率为3.01%。实施例5将实例I中的浸膏A以去离子水混悬溶解后，上HPD500大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%乙醇(v/v)洗脱除杂，再以70% (v/v)乙醇洗脱，收集70% (v/v)的乙醇洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即为薰衣草总黄酮，含量为53. 81%，得率为 3. 57%。实施例6将实例I中的浸膏A以去离子水混悬溶解后，上HPD100大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%乙醇(v/v)洗脱除杂，再以70% (v/v)乙醇洗脱，收集70% (v/v)的乙醇洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即为薰衣草总黄酮，含量为56. 68%，得率为 3. 73%。 实施例7将实例I中的浸膏A以去离子水混悬溶解后，上HPD400大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%乙醇(v/v)洗脱除杂，再以70% (v/v)乙醇洗脱，收集70% (v/v)的乙醇洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即为薰衣草总黄酮，含量为59. 70%，得率为 3. 92%。实施例8将实例I中的浸膏A以去离子水混悬溶解后，上HPD450大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%乙醇(v/v)洗脱除杂，再以70% (v/v)乙醇洗脱，收集70% (v/v)的乙醇洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即为薰衣草总黄酮，含量为58. 60%，得率为 3. 59%。实施例9将实例I中的浸膏A以去离子水混悬溶解后，上HPD750大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%乙醇(v/v)洗脱除杂，再以70% (v/v)乙醇洗脱，收集70% (v/v)的乙醇洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即为薰衣草总黄酮，含量为56. 38%，得率为 3. 52%。实施例10将实例I中的浸膏A和浸膏B合并后以去离子水混悬溶解，上AB-8大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%乙醇(v/v)洗脱除杂，再以70%(v/v)乙醇洗脱，收集70% (v/v)的乙醇洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即得薰衣草总黄酮，含量为69. 31 %，得率为4. 49%。实施例11(I)称取宽叶薰衣草0. 5kg，粉碎成小于Icm的粉末，置于提取罐中，加入12倍重量的去离子水加热回流提取2次，过滤，合并提取液，减压浓缩至溶液比重为I. 2，在不断搅拌下加入4倍重量的95% (v/v)乙醇，放置12小时，过滤，滤液减压浓缩，得浸膏A，备用；
(2)将步骤⑴提取后剩下的药渣，晾干后，置于提取罐中，加入6倍重量的95% (v/v)乙醇加热回流提取3次，过滤，合并提取液，减压浓缩至浸膏；浸膏用水混悬后，以乙酸乙酯萃取；萃取液浓缩至浸膏后，以95%乙醇(v/v)加热溶解，静置24小时，过滤，滤液合并入萃取后溶液中，减压浓缩，得浸膏B，备用；(3)将浸膏A和浸膏B合并，以去离子水混悬溶解，上AB-8型大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%乙醇(v/v)洗脱除杂，再以70% (v/v)乙醇洗脱，收集70% (v/v)的乙醇洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即为薰衣草总黄酮，含量为62. 62%，得率为4. 41%。实施例12
(I)称取杂薰衣草0. 5kg，粉碎成小于Icm的粉末，置于提取罐中，加入12倍重量的去离子水加热回流提取I次，过滤，合并提取液，减压浓缩至溶液比重为I. 2，在不断搅拌下加入5倍重量的95% (v/v)乙醇，放置12小时，过滤，滤液减压浓缩，得浸膏A，备用；
(2)将步骤(I)提取后剩下的药渣，晾干后，置于提取罐中，加入12倍重量的95% (v/v)乙醇加热回流提取I次，过滤，合并提取液，减压浓缩至浸膏；浸膏用水混悬后，以乙酸乙酯萃取；萃取液浓缩至浸膏后，以95%乙醇(v/v)加热溶解，静置12小时，过滤，滤液合并入萃取后溶液中，减压浓缩，得浸膏B，备用；(3)将浸膏A和浸膏B合并，以去离子水混悬溶解，上DlOl型大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%乙醇(v/v)洗脱除杂，再以60% (v/v)乙醇洗脱，收集60% (v/v)的乙醇洗脱液，浓缩干燥得棕黄色 粉末，即得薰衣草总黄酮，含量为56. 33%，得率为4. 08%。
权利要求
1.一种薰衣草总黄酮的制备方法，其特征在于采用如下步骤进行 (1)将薰衣草全草粉碎成小于Icm的粉末，置于提取罐中，加入8到12倍重量的去离子水加热回流提取1-3次，过滤，合并提取液，减压浓缩至溶液比重为I. 1-1. 2，在不断搅拌下加入4-5倍重量的95%こ醇(v/v)，放置12小时，过滤，滤液减压浓缩，得浸膏A，放置，备用。
(2)将步骤(I)提取后剩下的药渣，晾干后，置于提取罐中，加入6到12倍重量的95%こ醇(v/v)加热回流提取1-3次，过滤，合并提取液，减压浓缩至无醇味，以こ酸こ酯萃取；萃取液浓缩至浸膏后，以95%こ醇(v/v)加热溶解，静置24小时，过滤，滤液合并入萃取后溶液中，减压浓缩，得浸膏B，放置，备用。
(3)将浸膏A以去离子水混悬溶解后，上大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%こ醇(v/v)洗脱除杂，再以50-70%こ醇(v/v)洗脱，收集50-70%こ醇(v/v)洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即为薰衣草总黄酮。
或将浸膏A和浸膏B合井，以去离子水混悬溶解后，上大孔树脂柱吸附，先分别以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10%こ醇(v/v)洗脱，再以50-70%こ醇(v/v)洗脱，收集50-70%こ醇(v/v)洗脱液，浓缩干燥得棕黄色粉末，即为薰衣草总黄酮。
2.根据权利要求I所述的薰衣草总黄酮的制备方法，其特征在于所得到的薰衣草总黄酮为棕黄色粉末，总黄酮含量的重量百分比在50%至70%之间。
3.根据权利要求I所述的薰衣草总黄酮的制备方法，其特征在于其来源植物分别为狭叶薰衣草 Lavandula angustifolia、宽叶薰衣草 Lavandula spica、杂薰衣草 Lavandulaintermedia 的全草。
4.根据权利要求2所述的薰衣草总黄酮的制备方法，其特征在于所使用的大孔吸附树脂为国产大孔吸附树脂AB-8型或DlOl型或HPD-100或HPD-400或HPD-450或HPD-500或HPD-600 或 HPD-750。
全文摘要
本发明涉及薰衣草总黄酮的制备方法，其特征包含以下步骤①将薰衣草置于提取罐中，以去离子水加热回流提取，提取液浓缩至溶液比重为1.1-1.2，在不断搅拌下加入4-5倍重量的95％乙醇，放置12h，过滤，减压浓缩得浸膏A；②以95％乙醇将步骤①产生的药渣加热回流提取，提取液减压浓缩后，以乙酸乙酯萃取；萃取液浓缩至浸膏后，用95％乙醇加热溶解，静置24h，过滤，滤液合并入萃取后溶液中，减压浓缩，得浸膏B；③将浸膏A或浸膏A和B合并后以去离子水溶解，上大孔树脂柱，以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10％乙醇洗脱除杂后，再以50-70％醇洗脱，收集50-70％乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得。
文档编号A61K36/53GK102688284SQ20111006760
公开日2012年9月26日 申请日期2011年3月21日 优先权日2011年3月21日
发明者徐芳, 李晨阳, 谭为, 赵军, 陈燕 申请人:新疆维吾尔自治区药物研究所