专利名称：一种治疗或辅助治疗肿瘤疾病的中药制剂的鉴别方法
技术领域：
本发明涉及一种中药制剂的鉴别方法，特别是涉及一种治疗或辅助治疗肿瘤疾病 的中药制剂的鉴别方法，属于中药制剂质量控制技术领域。
背景技术：
本发明一种治疗或辅助治疗肿瘤疾病的中药制剂是我们新研制的中药复方制剂， 主要用于气血两虚型肿瘤疾病的治疗或辅助治疗，或者是用于肿瘤放、化疗以及术后体虚 引起的气血两虚证。为了控制该中药制剂质量，我们对该中药制剂进行了鉴别研究。中药制剂的鉴别历来就是难点，素有“丸散膏丹、神仙难辨”的说法。目前，中药制 剂的鉴别方法主要有显微鉴别法、一般的理化鉴别法(如中国药典2010年版一部附录IV 一般鉴别试验)、紫外-可见分光光度法、纸色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱 法等；此外，还有指纹图谱鉴别等。这些鉴别方法各有千秋，对一个中药制剂究竟应该选择 什么样的鉴别方法，需要反复试验研究和方法学验证来选择。如果选用了其中一种鉴别方 法，如薄层色谱法，需要研究其所用的固定相、对照物质等，需要研究展开剂、显色剂，还需 要研究供试品溶液和对照物质溶液的制备方法等等，包含了供试品溶液的制备工艺、对照 物质及其制备工艺、固定相、展开剂、点样量、展开温度、显色方法、检视方法等。正因为这 样，这些鉴别方法的科学性逐步得到了国际社会的认可，中药制剂质量标准的现代化开始 逐步实现。薄层色谱法，简称TLC法，系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂 展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物质按同法所得的色谱图对比，用 于鉴别。薄层色谱法主要由固定相、展开剂、显色剂等部分构成，由薄层板、点样器、展开容 器、显色装置、检视装置等仪器与材料构成。薄层板最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅 胶H、硅胶HF254、微晶纤维素等。鉴别方法的专属性直接决定了该鉴别方法的价值，如果专属性不强，容易发生假 阳性。目前，许多中药制剂的鉴别方法专属性不强，我国曾经发生的奶粉中掺入三聚氰胺事 件，未能及时检验出来，就是由于当时的鉴别方法专属性不强，产生了假阳性。紫河车、熟地 黄、女贞子、天花粉为本发明制剂所含的药味，本发明提供的鉴别方法，具有很强的专属性。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗或辅助治疗肿瘤疾病的中药制剂的鉴别方法，采用 薄层色谱法鉴别该中药制剂中是否含有紫河车、熟地黄、女贞子、天花粉中的任一种、或者 任两种、或者任三种、或者全部，该方法专属性强，重现性、耐用性好，可用于该中药制剂中 的相应药味鉴别。本发明采用的技术方案如下
一种治疗或辅助治疗肿瘤疾病的中药制剂的鉴别方法，其特征在于所述中药制剂中 包括紫河车、熟地黄、女贞子、天花粉四种，所述鉴别方法包括如下鉴别方法的任一种、或者任两种、或者任三种、或者全部
(1)所述中药制剂中紫河车的鉴别方法，是以紫河车对照药材为对照的薄层色谱鉴别 方法，包括以下步骤
①供试品溶液的制备取所述中药制剂，加三氯甲烷或二氯甲烷，超声处理，滤过，滤液 浓缩，制成每1 mL含生药量相当于紫河车0. 2 5g的溶液，作为供试品溶液；
②对照药材溶液的制备取紫河车对照药材，加三氯甲烷或二氯甲烷，超声处理，滤过， 滤液浓缩，制成每1 mL含生药量相当于紫河车0. 2 5g的溶液，作为对照药材溶液；
③测定法照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液 和供试品溶液各2 20yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯9 广9 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5% 50%高氯酸溶液，在60 120°C加热至斑点显色清 晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
(2)所述中药制剂中熟地黄的鉴别方法，是以熟地黄对照药材为对照的薄层色谱鉴别 方法，包括以下步骤
①供试品溶液的制备取所述中药制剂，加水，温热使充分溶散，加热至沸，放冷，离心， 取上清液，浓缩，用乙酸乙酯振摇提取1 3次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解， 制成每1 mL含生药量相当于熟地黄2 20g的溶液，作为供试品溶液；
②对照药材溶液的制备取熟地黄对照药材，加水煎煮1 2次，用脱脂棉滤过，合并滤 液，浓缩，用乙酸乙酯振摇提取1 3次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，制成每 1 mL含生药量相当于熟地黄2 20g的溶液，作为对照药材溶液；
③测定法照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液 和供试品溶液各2 20 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以邻二甲苯-乙酸乙酯1:1为 展开剂，其中邻二甲苯可替换为苯，或甲苯，或间二甲苯，或对二甲苯，或邻二甲苯、间二甲 苯、对二甲苯三种按任意比例的混合物，展开，取出，晾干，喷以0. 1%的2，4-二硝基苯胼乙 醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
其中0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液是取2，4- 二硝基苯胼lg，加无水乙醇1000 mL使溶解，再缓缓加入浓度为36% 38%的盐酸10mL，摇勻，即得；
(3)所述中药制剂中女贞子的鉴别方法，是以女贞子对照药材和齐墩果酸对照品为对 照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤
①供试品溶液的制备取所述中药制剂，加三氯甲烷或二氯甲烷，提取1 3次，合并三 氯甲烷液或二氯甲烷液，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇，或者残渣加无水乙醇-三氯甲烷3 2 混合溶液，在5 50°C，制成每1 mL含生药量相当于女贞子0. 2 5g的溶液，作为供试品 溶液；
②对照药材溶液的制备取女贞子对照药材，加三氯甲烷或二氯甲烷，超声处理，滤 过，滤液蒸干，残渣加甲醇，或者残渣加无水乙醇-三氯甲烷3 2混合溶液，在5 50°C，制 成每1 mL含生药量相当于女贞子0. 2 5g的溶液，作为对照药材溶液；
③对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品，加甲醇或95%乙醇，在5 50°C，配制成每 ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；
④测定法照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，在5 50°C，吸取供 试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各2 20μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸7 15 2 7 1 5 :0 0.5、或者以三氯甲烷-甲 醇-甲酸20 40 :1 :0. 3 1. 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以m 20%硫酸乙醇溶 液，或者喷以1% 10%磷钼酸乙醇溶液，在60 120°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱 中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
如果制剂中女贞子的含量较低，制备供试品溶液前，可以对该制剂进行预处理，以达到 更好的鉴别效果，具体操作为取所述中药制剂，加0.洲 0. 5%的氢氧化钠溶液，温热使充 分溶散，加热至沸，放冷，滤过或离心，取滤液或上清液，用盐酸或硫酸调节PH值至1 2 ； 如果制剂中女贞子含量高，一般不需要进行预处理；
(4)所述中药制剂中天花粉的鉴别方法，是以天花粉对照药材和胍氨酸对照品为对照 的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤
①供试品溶液的制备取所述中药制剂，加30% 100%乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸 干，加50%乙醇使溶解，滤过，得滤液，制成每1 mL含生药量相当于天花粉0. 01 Ig的溶 液，作为供试品溶液；
②对照药材溶液的制备取天花粉对照药材，加50%乙醇，超声处理，滤过，得滤液， 制成每1 mL含生药量相当于天花粉0. 01 Ig的溶液，作为对照药材溶液；
③对照品溶液的制备取胍氨酸对照品，加50%乙醇配制成每ImL含Img的溶液，作为 对照品溶液；
④测定法照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对 照药材溶液和对照品溶液各1 20 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-无水 乙醇-冰醋酸-水7 15 0 2 :2 6 :1 5、正丁醇-甲酸-水15 25 3 :2、正丁 醇-丙酮-水2 5 2 :1中的任一种为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1% 10%茚三 酮乙醇溶液，在60 120°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。所述中药制剂是由紫河车、黄芪、熟地黄、党参、白术、当归、甘草、女贞子、黄精、甜 地丁或紫花地丁、天花粉十一味中药组成，紫河车粉碎成粉末，其余十味药材溶媒提取，制 成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂各种适宜的剂型。进一步地，所述中药制剂的处方按重量配比计为紫河车4 7、黄芪20 50、熟 地黄10 30、党参5 20、白术5 20、当归5 15、甘草5 15、女贞子5 20、黄精 5 15、甜地丁或紫花地丁 5 20、天花粉5 20。所述中药制剂的制备方法按照上述重量份数，(1)紫河车粉碎成8(Γ100目的粉 末，备用；(2)黄芪、熟地黄、党参、白术、当归、甘草、女贞子、黄精、甜地丁或紫花地丁、天花 粉十味药材加水煎煮1 3次，每次1 3小时，制成稠膏或干膏；(3)向稠膏或干膏中加 入紫河车粉末，制成适宜的剂型。更进一步地，所述中药制剂中每克含生药量相当于紫河车0. 15 0. 18g、熟地黄 0. 45 0. 55g、女负子 0. 25 0. 35g、天花粉 0. 25 0. 35g。优选的技术方案为所述鉴别方法包括如下鉴别方法的任一种、或者任两种、或者 任三种、或者全部
(1)所述中药制剂中紫河车的鉴别方法，是以紫河车对照药材为对照的薄层色谱鉴别 方法，包括以下步骤
9①供试品溶液的制备取所述中药制剂3 10g，加三氯甲烷或二氯甲烷20 30mL，超声 处理5 45分钟，滤过，浓缩滤液，制成每1 mL含生药量相当于紫河车0. 2 5g的溶液， 作为供试品溶液；
②对照药材溶液的制备取紫河车对照药材0.5 2g，加三氯甲烷或二氯甲烷20 30mL,超声处理5 45分钟，滤过，浓缩滤液，制成每1 mL含生药量相当于紫河车0. 2 5g 的溶液，作为对照药材溶液；
③测定法照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液 和供试品溶液各5 15yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯9 广9 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5 50%的高氯酸溶液，在6(T12(TC加热至斑点显色清晰， 供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
(2)所述中药制剂中熟地黄的鉴别方法，是以熟地黄对照药材为对照的薄层色谱鉴别 方法，包括以下步骤
①供试品溶液的制备取所述中药制剂6 15g，加水100 200mL，温热使充分溶散， 加热至沸，放冷，离心，取上清液，浓缩至30 IOOmL,用乙酸乙酯振摇提取1 3次，每次 20 30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，制成每1 mL含生药量相当于熟地黄 2 20g的溶液，作为供试品溶液；
②对照药材溶液的制备取熟地黄对照药材2 10g，加水煎煮广2次，每次加水50 150mL,每次煎煮0. 5 2小时，用脱脂棉滤过，合并滤液，浓缩至30 IOOmL,用乙酸乙酯振 摇提取1 3次，每次20 30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，制成每1 mL 含生药量相当于熟地黄2 20g的溶液，作为对照药材溶液；
③测定法照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液 和供试品溶液各5 15 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以邻二甲苯-乙酸乙酯1:1为 展开剂，其中邻二甲苯可替换为苯，或甲苯，或间二甲苯，或对二甲苯，或邻二甲苯、间二甲 苯、对二甲苯三种按任意比例的混合物，展开，取出，晾干，喷以0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙 醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
(3)所述中药制剂中女贞子的鉴别方法，是以女贞子对照药材和齐墩果酸对照品为对 照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤
①供试品溶液的制备取所述中药制剂1.5 12g，加三氯甲烷或二氯甲烷20 IOOmL,超声处理5 45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或者加无水乙醇-三氯甲烷按3 2混合的溶液，在10 50°C使溶解，制成每1 mL含生药量相当于女贞子0. 2 5g的溶液， 作为供试品溶液；
②对照药材溶液的制备取女贞子对照药材0.5g,加三氯甲烷或二氯甲烷20mL，超声 处理5 45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或者加无水乙醇-三氯甲烷按3 :2混合的溶 液，在10 50°C使溶解，制成1 mL含生药量相当于女贞子0. 2 5g的溶液，作为对照药材 溶液；
③对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品，在10 50°C，加甲醇或95%乙醇配制成每 ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；
④测定法照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，在10 50°C，吸取 供试品溶液5 15 μ L、对照药材溶液和对照品溶液各2 5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸7 15 2 7 1 5:0 0.5、或者以三 氯甲烷-甲醇-甲酸20 40 1 :0. 3 1. 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2 20%硫酸 乙醇溶液，或者喷以广10%磷钼酸乙醇溶液，在60 120°C加热至斑点显色清晰，供试品色 谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
(4)所述中药制剂中天花粉的鉴别方法，是以天花粉对照药材和胍氨酸对照品为对照 的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤
①供试品溶液的制备取所述中药制剂6 12g，加30% 100%乙醇20 50mL，超声 处理5 45分钟，滤过，滤液蒸干，加50%乙醇使溶解，滤过，制成每1 mL含生药量相当于 天花粉0. 01 Ig的溶液，作为供试品溶液；
②对照药材溶液的制备取天花粉对照药材2g，加50%乙醇，超声处理5 45分钟，滤 过，制成每1 mL含生药量相当于天花粉0. 01 Ig的溶液，作为对照药材溶液；
③对照品溶液的制备取胍氨酸对照品，加50%乙醇配制成每ImL含Img的溶液，作为 对照品溶液；
④测定法照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5 15 μ L，对照药材溶液和对照品溶液各1 5yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁 醇-无水乙醇-冰醋酸-水7 15 0 2 :2 6 :1 5、正丁醇-甲酸-水15 25 3 2、正丁醇-丙酮-水2 5 2 :1中的任一种为展开剂，展开，取出，晾干，喷以广10%的 茚三酮乙醇溶液，在6(T12(TC加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。 更优选的技术方案为所述鉴别方法包括如下鉴别方法的任一种、或者任两种、或 者任三种、或者全部
(1)所述中药制剂中紫河车的鉴别方法，包括以下步骤
取所述中药制剂6g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为 供试品溶液；另取紫河车对照药材1 g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2010年版一部 附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 正己烷-乙酸乙酯9 5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%高氯酸溶液，在105°C加热至 斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
(2)所述中药制剂中熟地黄的鉴别方法，包括以下步骤
取所述中药制剂10g，加水150mL，温热使充分溶散，加热至沸，放冷，离心，取上清液， 浓缩至IOOmL,用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇 0. 5mL使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材5g，加水煎煮2次，每次加水80mL，第 一次2小时，第二次1小时，用脱脂棉滤过，合并滤液，浓缩至IOOmL,用乙酸乙酯振摇提取 2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0. 5mL使溶解，作为对照药材溶液；照 中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10 μ L、对照药材溶液 5yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以邻二甲苯-乙酸乙酯1 1为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位 置上，显相同颜色的主斑点；
(3)所述中药制剂中女贞子的鉴别方法，包括以下步骤
取所述中药制剂6g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lmL，在35 40°C使溶解，作为供试品溶液；另取女贞子对照药材0. 5g，同法制成对照药材 溶液；再取齐墩果酸对照品，加甲醇在35 40°C配制成每ImL含Img的溶液，作为对照品 溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，在35 40°C，吸取供试品溶 液l(Tl5yL、对照药材溶液和对照品溶液各5yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己 烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸12. 5 5 3 :0. 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫 酸乙醇溶液，在110°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
(4)所述中药制剂中天花粉的鉴别方法，包括以下步骤
取所述中药制剂10g，加50%乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，加50%乙 醇IOmL使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取天花粉对照药材2g，加50%乙醇20mL， 超声处理30分钟，滤过，取滤液作为对照药材溶液；再取胍氨酸对照品，加50%乙醇制成每 ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试 验，吸取供试品溶液10 μ L、对照药材溶液和对照品溶液各2 μ L，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以正丁醇-无水乙醇-冰醋酸-水8 2 :4:3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以洲 茚三酮乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照 品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。上述涉及的技术方案中，关于女贞子的鉴别方法中，可采取单独以女贞子对照药 材为对照或者单独以齐墩果酸对照品为对照的薄层色谱鉴别方法；关于天花粉的鉴别方法 中，可采取单独以天花粉对照药材为对照或者单独以胍氨酸对照品为对照的薄层色谱鉴别 方法。本发明提供的中药制剂的鉴别方法，对照药材为主的薄层色谱鉴别法是一条切 实可行的、简便的、快速的、可控的、经济的、科学的、现代化的鉴别方法。本发明通过对紫 外-可见分光光度法、纸色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法等多种方法比较，筛选出了 以对照药材、化学对照品为对照的硅胶G薄层色谱法，来鉴别本发明中药制剂中的紫河车、 熟地黄、女贞子、天花粉的方法。紫河车、熟地黄、女贞子、天花粉是该中药制剂的主要药味， 本发明提供的鉴别方法专属性强，重现性、耐用性好，可以较好地控制本发明中药制剂的质 量。
具体实施例方式实施例1
处方紫河车50g、黄芪300g、熟地黄150g、党参100g、白术100g、当归75g、甘草 75g、女贞子100g、黄精75g、甜地丁 100g、天花粉IOOgo制法以上十一味，紫河车粉碎成8(Γ100目的粉末，其余黄芪等十味加水煎煮两 次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1. 32 1. 35 (50°C)的稠膏，加入紫河车粉末，混勻，制粒，装入胶囊，每粒装0. 3g，制成1000粒，即得。鉴别该胶囊剂的鉴别包括如下鉴别方法的任一种、或者任两种、或者任三种、或 者全部，但不仅限于以下鉴别方法
(1)取本品内容物6g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1 mL，作 为供试品溶液。另取紫河车对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以正己烷-乙酸乙酯(9 5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%高氯酸溶液，在 105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色 的主斑点。(2)取本品内容物10g，加水150mL，温热使充分溶散，加热至沸，放冷，离心，取上 清液，浓缩至IOOmL,用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲 醇0. 5mL使溶解，作为供试品溶液。另取熟地黄对照药材5g，加水煎煮2次，每次加水80mL， 第一次2小时，第二次1小时，用脱脂棉滤过，合并滤液，浓缩至lOOmL，用乙酸乙酯振摇提取 2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0. 5mL使溶解，作为对照药材溶液。照 薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B )试验，吸取供试品溶液10 μ L、对照药材溶 液5yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以邻二甲苯-乙酸乙酯(1 1)为展开剂，展开，取 出，晾干，喷以0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应 的位置上，显相同颜色的主斑点。其中0. 1%的2，4-二硝基苯胼乙醇溶液配制方法取2，4-二硝基苯胼lg，加无水 乙醇1000 mL使溶解，再缓缓加入浓度为36% 38%的盐酸10mL，摇勻，即得。(3)取上述(1)项下的供试品溶液，蒸干，残渣加甲醇lmL，在35 40°C使溶解，作 为供试品溶液。另取女贞子对照药材0. 5g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液 蒸干，残渣加甲醇lmL，在35 40°C使溶解，作为对照药材溶液。再取齐墩果酸对照品，加 甲醇，在35 40°C配制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药 典2010年版一部附录VI B )试验，在35 40°C，吸取供试品溶液10 μ L、对照药材溶液和 对照品溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸( 12.5 5 3 :0. 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110°C加热至 斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜 色的主斑点。(4)取本品内容物10g，加50%乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，加 50%乙醇IOmL使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取天花粉对照药材2g，加50%乙 醇20mL，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为对照药材溶液。再取胍氨酸对照品，加50%乙 醇，配制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部 附录VI B )试验，吸取供试品溶液10 μ L、对照药材溶液和对照品溶液各2 μ L，分别点于同 一硅胶G薄层板上，以正丁醇-无水乙醇-冰醋酸-水(8 243)为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以洲茚三酮乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照 药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。实施例2
处方紫河车50g、黄芪300g、熟地黄150g、党参100g、白术100g、当归80g、甘草 80g、女贞子80g、黄精100g、紫花地丁 100g、天花粉IOOgo制法以上十一味，紫河车粉碎成8(Γ100目的粉末，其余黄芪等十味加水煎煮两 次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，进一步干燥成干膏，再 粉碎成8(Γ100目的粉末，加入紫河车粉末，混勻，制粒，压片，每片重0. 3g，包薄膜衣，制成 1000片，即得。
鉴别该片剂的鉴别包括如下鉴别方法的任一种、或者任两种、或者任三种、或者 全部，但不仅限于以下鉴别方法
(1)取本品研碎的粉末6g，加三氯甲烷25mL，超声处理20分钟，滤过，残渣备用，滤液浓 缩至0. 5mL，作为供试品溶液。另取紫河车对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色 谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各15 μ L，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9 4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%高氯 酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显 相同颜色的主斑点。(2)取本品研碎的粉末6g，加水IOOmL,温热使充分溶散，加热至沸，放冷，离心，取 上清液，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0. 5mL使 溶解，作为供试品溶液。另取熟地黄对照药材4g，加水60mL，煎煮30分钟，用脱脂棉滤过， 滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0. 5mL使溶 解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供 试品溶液15 μ L、对照药材溶液5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二甲苯-乙酸乙酯 (1 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0. 1%的2，4-二硝基苯胼乙醇溶液。供试品色谱 中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。其中①0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液配制方法取2，4_ 二硝基苯胼lg，加 无水乙醇1000 mL使溶解，再缓缓加入浓度为36% 38%的盐酸10mL，摇勻，即得；②二甲 苯为邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯三种异构体的混合物。(3)取本品研碎的粉末1.5g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸 干，残渣加甲醇lmL，在30 35°C使溶解，作为供试品溶液。另取女贞子对照药材0. 5g，同 法制成对照药材溶液。再取齐墩果酸对照品，加甲醇，在30 35°C配制成每ImL含Img的 溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，在30 35°C，吸取供试品溶液15μ L、对照药材溶液和对照品溶液各4μ L，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸(12.5 5 3:0.1)为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照 药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。(4)取上述(1)项下备用的残渣，加60%乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液 蒸干，加50%乙醇IOmL使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取天花粉对照药材2g，加 50%乙醇20mL，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为对照药材溶液。再取胍氨酸对照品，加 50%乙醇，配制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年 版一部附录VI B )试验，吸取供试品溶液15 μ L、对照药材溶液和对照品溶液各2 μ L，分别 点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-无水乙醇-冰醋酸-水(8 253)为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以洲茚三酮乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。实施例3
处方紫河车50g、黄芪300g、熟地黄150g、党参100g、白术100g、当归75g、甘草 75g、女贞子100g、黄精75g、紫花地丁 100g、天花粉IOOgo制法以上十一味，紫河车粉碎成8(Γ100目的粉末，其余黄芪等十味加水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1. 32 1. 35 (50°C)的稠膏，加入紫河车粉末，混勻，制丸，干燥，打光，制成2000粒浓缩丸，每粒重 0. 15g，即得。鉴别该浓缩丸的鉴别包括如下鉴别方法的任一种、或者任两种、或者任三种、或 者全部，但不局限于以下鉴别方法
(1)取本品研碎的粉末6g，加二氯甲烷30mL，超声处理25分钟，滤过，滤液浓缩至lmL， 作为供试品溶液。另取紫河车对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国 药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以正己烷-乙酸乙酯(9 3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%高氯酸溶液，在 105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色 的主斑点。(2)取本品研碎的粉末6g，加水IOOmL,温热使充分溶散，加热至沸，放冷，离心，取 上清液，浓缩至40mL，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加 甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液。另取熟地黄对照药材4g，加水60mL，煎煮30分钟，用脱 脂棉滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20 mL,合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇 ImL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验， 吸取供试品溶液10 μ L、对照药材溶液5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸 乙酯(1 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1%的2，4-二硝基苯胼乙醇溶液。供试品 色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。其中0. 1%的2，4-二硝基苯胼乙醇溶液配制方法取2，4-二硝基苯胼lg，加无水 乙醇1000 mL使溶解，再缓缓加入浓度为36% 38%的盐酸10mL，摇勻，即得。(3)取本品研碎的粉末10g，加三氯甲烷30mL，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干， 残渣加甲醇lmL，在25 30°C使溶解，作为供试品溶液。另取女贞子对照药材0. 5g，同法制 成对照药材溶液。再取齐墩果酸对照品，加甲醇，在25 30°C配制成每ImL含Img的溶液， 作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B )试验，在25 30°C， 吸取供试品溶液15 μ L、对照药材溶液2 μ L、对照品溶液5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板 上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(25 1 :1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶 液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应 的位置上，显相同颜色的主斑点。(4)取本品研碎的粉末12g，加70%乙醇50mL，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干， 加50%乙醇5mL使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取天花粉对照药材2g，加50%乙 醇20mL，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为对照药材溶液。再取胍氨酸对照品，加50%乙 醇，配制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部 附录VI B)试验，吸取供试品溶液5 μ L、对照药材溶液和对照品溶液各2 μ L，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(13 3:4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以洲 茚三酮乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照 品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。实施例4
处方紫河车50g、黄芪300g、熟地黄150g、党参100g、白术100g、当归75g、甘草75g、女贞子100g、黄精75g、甜地丁 100g、天花粉IOOgo制法以上十一味，紫河车粉碎成8(Γ100目的粉末，其余黄芪等十味加水煎煮两 次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至一半量，加入相同容量的95% 乙醇，2 10°C放置12小时，过滤，滤液回收乙醇后浓缩至相对密度为1. 29 1. 31(50°C) 的稠膏，加入紫河车粉末，混勻，制粒，装入胶囊，每粒装0. 3g，制成1000粒，即得。鉴别该胶囊剂的鉴别包括如下鉴别方法的任一种、或者全部，但不仅限于以下鉴 别方法
(1)取本品内容物12g，加二氯甲烷IOOmL,超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至1 mL，蒸 干，残渣加无水乙醇-三氯甲烷按3 2混合的溶液lmL，在20 25°C使溶解，作为供试品溶 液。另取女贞子对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版 一部附录VI B )试验，在20 25°C，吸取供试品溶液10 μ L、对照药材溶液5 μ L，分别点于 同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯(10:4 2.5)为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以5%磷钼酸乙醇溶液，在105°C热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材 色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。(2)取本品内容物10g，加30%乙醇20mL，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，加50% 乙醇IOmL使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取胍氨酸对照品，加50%乙醇，配制成每 ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B )试 验，吸取供试品溶液10 μ L、对照品溶液2 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-丙 酮-水G 2 :1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以洲茚三酮乙醇溶液，在105°C加热至 斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。实施例5
按实施例1胶囊剂的处方和制法制备三批胶囊剂进行方法学验证 (1)紫河车鉴别的方法学验证
对照药材溶液的制备取紫河车对照药材ι g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟，滤 过，滤液浓缩至1 mL，作为对照药材溶液。供试品溶液的制备取胶囊内容物6g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟，滤过， 滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液。依此法制备三批胶囊剂的供试品溶液。阴性对照溶液的制备按胶囊处方比例及工艺制备缺紫河车的阴性对照样品，取 阴性对照样品6g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为阴性对 照溶液。测定法照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B )试验，吸取对照药材 溶液、阴性对照溶液和三批不同批次胶囊的供试品溶液各10μ L，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以正己烷-乙酸乙酯(9 5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%高氯酸溶液，在 105°C加热至斑点显色清晰。试验结果三批供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主 斑点；而阴性对照色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，不显示斑点。结论该方法专属性强、重复性好，可用于该胶囊中紫河车的鉴别。(2)熟地黄鉴别的方法学验证
对照药材溶液的制备取熟地黄对照药材5g，加水煎煮2次，每次加水80mL，第一次2小时，第二次1小时，用脱脂棉滤过，合并滤液浓缩至IOOmL,用乙酸乙酯振摇提取2次，每次 30mL,合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0. 5mL使溶解，作为对照药材溶液。供试品溶液的制备取胶囊内容物10g，加水150mL，温热使充分溶散，加热至沸， 放冷，离心(2000转)5分钟，取上清液，浓缩至IOOmL,用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30mL， 合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0. 5mL使溶解，作为供试品溶液。依此法制备三批胶囊 剂的供试品溶液。阴性对照溶液的制备按胶囊处方比例及工艺制备缺熟地黄的阴性对照样品，取 阴性对照样品10g，加水150mL，温热使充分溶散，加热至沸，放冷，离心(2000转)5分钟，取 上清液，浓缩至IOOmL,用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加 甲醇0. 5mL使溶解，作为阴性对照溶液。测定法照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取对照药 材溶液5 μ L、阴性对照溶液和三批不同批次胶囊的供试品溶液各10 μ L，分别点于同一硅 胶G薄层板上，以邻二甲苯-乙酸乙酯(1 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1%的 2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液。其中0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液配制方法取2，4- 二 硝基苯胼lg，加无水乙醇1000 mL使溶解，再缓缓加入浓度为36% 38%的盐酸10mL，摇勻， 即得。试验结果三批供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主 斑点；而阴性对照色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，不显示斑点。结论该方法专属性强、重复性好，可用于该胶囊中熟地黄的鉴别。(3)女贞子鉴别的方法学验证
对照药材溶液的制备取女贞子对照药材0. 5g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟，滤 过，滤液蒸干，残渣加甲醇lmL，35 40°C使溶解，作为对照药材溶液。对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品，加甲醇，在35 40°C配制成每ImL含Img 的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备取胶囊内容物6g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟，滤 过，滤液蒸干，残渣加甲醇lmL，35 40°C使溶解，作为供试品溶液。依此法制备三批胶囊剂 的供试品溶液。阴性对照溶液的制备按胶囊处方比例及工艺制备缺女贞子的阴性对照样品，取 阴性对照样品6g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lmL， 35 40°C使溶解，作为阴性对照溶液。测定法照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，在35 40°C， 吸取对照药材溶液和对照品溶液各5 μ L、阴性对照溶液和三批不同批次胶囊的供试品 溶液各10yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸( 12.5 5 3 :0. 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110°C加热至 斑点显色清晰。试验结果三批供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显 相同颜色的主斑点；而阴性对照色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，不 显示斑点。结论该方法专属性强、重复性好，可用于该胶囊中女贞子的鉴别。
(4)天花粉鉴别的方法学验证
对照药材溶液的制备取天花粉对照药材2g，加50%乙醇20mL，超声处理30分钟，滤 过，取滤液作为对照药材溶液。对照品溶液的制备取胍氨酸对照品，加50%乙醇，配制成每ImL含Img的溶液，作 为对照品溶液。供试品溶液的制备取胶囊内容物10g，加50%乙醇溶液20mL，超声处理30分钟， 滤过，滤液蒸干，加50%乙醇IOmL使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液。依此法制备三批 胶囊剂的供试品溶液。阴性对照溶液的制备按胶囊处方比例及工艺制备缺天花粉的阴性对照样品，取 阴性对照样品10g，加50%乙醇20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，加50%乙醇IOmL 使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液。测定法照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B )试验，吸取对照药材 溶液和对照品溶液各2 μ L、阴性对照溶液和三批不同批次胶囊的供试品溶液各10 μ L，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-无水乙醇-冰醋酸-水(8 2:4:3)为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以洲茚三酮乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。试验结果三批供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显 相同颜色的主斑点；而阴性对照色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，不 显示斑点。结论该方法专属性强、重复性好，可用于该胶囊中天花粉的鉴别。本发明中提到的其他情形的鉴别方法，也进行了上述的相应的方法学验证，证明 其他情形的鉴别方法同样专属性强、重复性好，可用于相应的鉴别。实施例6
按实施例2片剂的处方和制法制备三批片剂进行方法学验证 (1)紫河车鉴别的方法学验证
对照药材溶液的制备取紫河车对照药材1 g，加三氯甲烷25mL，超声处理20分钟，滤 过，滤液浓缩至0. 5mL，作为对照药材溶液。供试品溶液的制备取本品研碎的粉末6g，加三氯甲烷25mL，超声处理20分钟，滤 过，滤液浓缩至0. 5mL,作为供试品溶液。依此法制备三批片剂的供试品溶液。阴性对照溶液的制备按实施例2片剂处方比例及工艺制备缺紫河车的阴性对照 样品。取阴性对照样品6g，加三氯甲烷25mL，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至0. 5mL,作 为阴性对照溶液。测定法照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B )试验，吸取对照药材 溶液、阴性对照溶液和三批不同批次片剂的供试品溶液各15μ L，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以正己烷-乙酸乙酯(9 4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%高氯酸溶液，在 105°C加热至斑点显色清晰。试验结果三批供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主 斑点；而阴性对照色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，不显示斑点。结论该方法专属性强、重复性好，可用于该片剂中紫河车的鉴别。(2)熟地黄鉴别的方法学验证对照药材溶液的制备取熟地黄对照药材4g，加水60mL煎煮30分钟，用脱脂棉滤过， 用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0. 5mL使溶解，作 为对照药材溶液。供试品溶液的制备取本品研碎的粉末6g，加水IOOmL,温热使充分溶散，加热至 沸，放冷，离心，取上清液，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残 渣加甲醇0. 5mL使溶解，作为供试品溶液。依此法制备三批片剂的供试品溶液。阴性对照溶液的制备按实施例2片剂处方比例及工艺制备缺熟地黄的阴性对照 样品。取阴性对照样品研碎的粉末6g，加水IOOmL,温热使充分溶散，加热至沸，放冷，离心， 取上清液，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0. 5mL 使溶解，作为阴性对照溶液。测定法照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B )试验，吸取阴性对照 溶液和三批不同批次片剂的供试品溶液各15 μ L、对照药材溶液5 μ L，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以二甲苯-乙酸乙酯(1 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1%的2，4-二 硝基苯胼乙醇溶液。其中①0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液配制方法取2，4_ 二硝基苯胼lg，加 无水乙醇1000 mL使溶解，再缓缓加入浓度为36% 38%的盐酸10mL，摇勻，即得；②二甲 苯为邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯三种异构体的混合物。试验结果三批供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主 斑点；而阴性对照色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，不显示斑点。结论该方法专属性强、重复性好，可用于该片剂中熟地黄的鉴别。(3)女贞子鉴别的方法学验证
对照药材溶液的制备取女贞子对照药材0. 5g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟，滤 过，滤液蒸干，残渣加甲醇lmL，在30 35°C使溶解，作为对照药材溶液。对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品，加甲醇，在30 35°C配制成每ImL含Img 的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备取本品研碎的粉末1. 5g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟， 滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lmL，在30 35°C使溶解，作为供试品溶液。依此法制备三批 片剂的供试品溶液。阴性对照溶液的制备按实施例2片剂处方比例及工艺制备缺女贞子的阴性对照 样品。取阴性对照样品研碎的粉末1.5g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸 干，残渣加甲醇lmL，在30 35°C使溶解，作为阴性对照溶液。测定法照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，在30 35°C， 吸取阴性对照溶液和三批不同批次片剂的供试品溶液各15yL、对照药材溶液和对照 品溶液各4yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸( 12.5 5 3 :0. 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110°C加热至 斑点显色清晰。试验结果三批供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显 相同颜色的主斑点；而阴性对照色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，不 显示斑点。
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结论该方法专属性强、重复性好，可用于该片剂中女贞子的鉴别。(4)天花粉鉴别的方法学验证
对照药材溶液的制备取天花粉对照药材2g，加50%乙醇20mL，超声处理30分钟，滤 过，取续滤液作为对照药材溶液。对照品溶液的制备取胍氨酸对照品，加50%乙醇，配制成每ImL含Img的溶液，作 为对照品溶液。供试品溶液的制备取本品研碎的粉末6g，加60%乙醇30mL，超声处理30分钟，滤 过，滤液蒸干，加50%乙醇IOmL使溶解，滤过，取续滤液作为供试品溶液。依此法制备三批 片剂的供试品溶液。阴性对照溶液的制备按实施例2片剂处方比例及工艺制备缺天花粉的阴性对照 样品。取阴性对照样品研碎的粉末6g，加60%乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干， 加50%乙醇IOmL使溶解，滤过，取续滤液作为供试品溶液。测定法照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B )试验，吸取阴性对照 溶液和三批不同批次片剂的供试品溶液各15 μ L、对照药材溶液和对照品溶液各2 μ L，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-无水乙醇-冰醋酸-水(8 2:5:3)为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以洲茚三酮乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。试验结果三批供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显 相同颜色的主斑点；而阴性对照色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，不 显示斑点。结论该方法专属性强、重复性好，可用于该片剂中天花粉的鉴别。实施例7
按实施例3浓缩丸的处方和制法制备三批浓缩丸进行方法学验证 (1)紫河车鉴别的方法学验证
对照药材溶液的制备取紫河车对照药材1 g，加二氯甲烷30mL，超声处理25分钟，滤 过，滤液浓缩至lmL，作为对照药材溶液。供试品溶液的制备取本品研碎的粉末6g，加二氯甲烷30mL，超声处理25分钟，滤 过，滤液浓缩至lmL，作为供试品溶液。依此法制备三批浓缩丸的供试品溶液。阴性对照溶液的制备按实施例3浓缩丸处方比例及工艺制备缺紫河车的阴性对 照样品。取阴性对照样品研碎的粉末6g，加二氯甲烷30mL，超声处理25分钟，滤过，滤液浓 缩至lmL，作为阴性对照溶液。测定法照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B )试验，吸取对照药材 溶液、阴性对照溶液和三批不同批次浓缩丸的供试品溶液各5μ L，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9 3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%高氯酸溶液，在 105°C加热至斑点显色清晰。试验结果三批供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主 斑点；而阴性对照色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，不显示斑点。结论该方法专属性强、重复性好，可用于该浓缩丸中紫河车的鉴别。(2)熟地黄鉴别的方法学验证
对照药材溶液的制备取熟地黄对照药材4g，加水60mL，煎煮30分钟，用脱脂棉滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解， 作为对照药材溶液。供试品溶液的制备取本品研碎的粉末6g，加水IOOmL,温热使充分溶散，加热至 沸，放冷，离心，取上清液，浓缩至40mL，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯 液，蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液。依此法制备三批浓缩丸的供试品溶液。阴性对照溶液的制备按实施例3浓缩丸处方比例及工艺制备缺熟地黄的阴性对 照样品。取阴性对照样品研碎的粉末6g，加水IOOmL,温热使充分溶散，加热至沸，放冷，离 心，取上清液，浓缩至40mL，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残 渣加甲醇ImL使溶解，作为阴性对照溶液。测定法照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B )试验，吸取阴性对照 溶液和三批不同批次浓缩丸的供试品溶液各10 μ L、对照药材溶液5 μ L，分别点于同一硅 胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(1 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1%的2，4-二 硝基苯胼乙醇溶液。其中0. 1%的2，4-二硝基苯胼乙醇溶液配制方法取2，4-二硝基苯胼lg，加无水 乙醇1000 mL使溶解，再缓缓加入浓度为36% 38%的盐酸10mL，摇勻，即得。试验结果三批供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主 斑点；而阴性对照色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，不显示斑点。结论该方法专属性强、重复性好，可用于该浓缩丸中熟地黄的鉴别。(3)女贞子鉴别的方法学验证
对照药材溶液的制备取女贞子对照药材0. 5g，加三氯甲烷30mL，超声处理20分钟，滤 过，滤液蒸干，残渣加甲醇lmL，在25 30°C使溶解，作为对照药材溶液。对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品，加甲醇，在25 30°C配制成每ImL含Img 的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备取本品研碎的粉末10g，加三氯甲烷30mL，超声处理20分钟， 滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lmL，在25 30°C使溶解，作为供试品溶液。依此法制备三批 浓缩丸的供试品溶液。阴性对照溶液的制备按实施例3浓缩丸处方比例及工艺制备缺女贞子的阴性对 照样品。取阴性对照样品研碎的粉末10g，加三氯甲烷30mL，超声处理20分钟，滤过，滤液 蒸干，残渣加甲醇lmL，在25 30°C使溶解，作为阴性对照溶液。测定法照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，在25 30°C， 吸取阴性对照溶液和三批不同批次浓缩丸的供试品溶液各15 μ L、对照药材溶液2 μ L、对 照品溶液5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(25 1 :1)为展开 剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。试验结果三批供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显 相同颜色的主斑点；而阴性对照色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，不 显示斑点。结论该方法专属性强、重复性好，可用于该浓缩丸中女贞子的鉴别。(4)天花粉鉴别的方法学验证
对照药材溶液的制备取天花粉对照药材2g，加50%乙醇20mL，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为对照药材溶液。对照品溶液的制备取胍氨酸对照品，加50%乙醇，配制制成每ImL含Img的溶液， 作为对照品溶液。供试品溶液的制备取本品研碎的粉末12g，加70%乙醇50mL，超声处理20分钟， 滤过，滤液蒸干，加50%乙醇5mL使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液。依此法制备三批浓 缩丸的供试品溶液。阴性对照溶液的制备按实施例3浓缩丸处方比例及工艺制备缺天花粉的阴性对 照样品。取阴性对照样品研碎的粉末12g，加70%乙醇50mL，超声处理20分钟，滤过，滤液 蒸干，加50%乙醇5mL使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液。测定法照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取阴性对照 溶液和三批不同批次浓缩丸的供试品溶液各5 μ L、对照药材溶液和对照品溶液各2 μ L，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(13 34)为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以2%茚三酮乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。试验结果三批供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显 相同颜色的主斑点；而阴性对照色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，不 显示斑点。结论该方法专属性强、重复性好，可用于该浓缩丸中天花粉的鉴别。实施例8
按实施例4胶囊剂的处方和制法制备三批胶囊剂进行方法学验证 (1)女贞子鉴别的方法学验证
对照药材溶液的制备取女贞子对照药材lg，加二氯甲烷IOOmL,超声处理10分钟，滤 过，滤液浓缩至lmL，蒸干，残渣加无水乙醇-三氯甲烷按3 :2混合的溶液lmL，在20 25°C 使溶解，作为对照药材溶液。供试品溶液的制备取本品内容物12g，加二氯甲烷IOOmL,超声处理10分钟，滤 过，滤液浓缩至lmL，蒸干，残渣加无水乙醇-三氯甲烷按3 :2混合的溶液lmL，在20 25°C 使溶解，作为供试品溶液。依此法制备三批胶囊剂的供试品溶液。阴性对照溶液的制备按实施例4胶囊处方比例及工艺制备缺女贞子的阴性对照 样品。取阴性对照样品内容物12g，加二氯甲烷IOOmL,超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至 1 mL，蒸干，残渣加无水乙醇-三氯甲烷按3 2混合的溶液lmL，在20 25°C使溶解，作为 阴性对照溶液。测定法照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，在20 25°C， 吸取阴性对照溶液和三批不同批次胶囊的供试品溶液各10 μ L、对照药材溶液5 μ L，分别 点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯(10:4 2.5)为展开剂，展开，取 出，晾干，喷以5%磷钼酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。试验结果三批供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主 斑点；而阴性对照色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，不显示斑点。结论该方法专属性强、重复性好，可用于该胶囊中女贞子的鉴别。(2)天花粉鉴别的方法学验证
对照品溶液的制备取胍氨酸对照品，加50%乙醇，配制制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备取本品内容物10g，加30%乙醇20mL，超声处理5分钟，滤过， 滤液蒸干，加50%乙醇IOmL使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液。依此法制备三批胶囊剂 的供试品溶液。阴性对照溶液的制备按实施例4胶囊处方比例及工艺制备缺天花粉的阴性对照 样品。取阴性对照样品内容物10g，加30%乙醇20mL，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，加 50%乙醇IOmL使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液。测定法照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取阴性对照 溶液和三批不同批次胶囊的供试品溶液各10 μ L、对照品溶液2 μ L，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以正丁醇-丙酮-水G 2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以洲茚三酮乙 醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。试验结果三批供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑 点；而阴性对照色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不显示斑点。结论该方法专属性强、重复性好，可用于该胶囊中天花粉的鉴别。
2权利要求
1. 一种治疗或辅助治疗肿瘤疾病的中药制剂的鉴别方法，其特征在于所述中药制剂 中包括紫河车、熟地黄、女贞子、天花粉四种，所述鉴别方法包括如下鉴别方法的任一种、或 者任两种、或者任三种、或者全部(1)所述中药制剂中紫河车的鉴别方法，是以紫河车对照药材为对照的薄层色谱鉴别 方法，包括以下步骤①供试品溶液的制备取所述中药制剂，加三氯甲烷或二氯甲烷，超声处理，滤过，滤液 浓缩，制成每1 HiL含生药量相当于紫河车0. 2 5g的溶液，作为供试品溶液；②对照药材溶液的制备取紫河车对照药材，加三氯甲烷或二氯甲烷，超声处理，滤过， 滤液浓缩，制成每1 mL含生药量相当于紫河车0. 2 5g的溶液，作为对照药材溶液；③测定法照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液 和供试品溶液各2 20 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯9 Γ9 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5% 50%高氯酸溶液，在60 120°C加热至斑点显色清 晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；(2)所述中药制剂中熟地黄的鉴别方法，是以熟地黄对照药材为对照的薄层色谱鉴别 方法，包括以下步骤①供试品溶液的制备取所述中药制剂，加水，温热使充分溶散，加热至沸，放冷，离心， 取上清液，浓缩，用乙酸乙酯振摇提取1 3次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解， 制成每1 mL含生药量相当于熟地黄2 20g的溶液，作为供试品溶液；②对照药材溶液的制备取熟地黄对照药材，加水煎煮1 2次，用脱脂棉滤过，合并滤 液，浓缩，用乙酸乙酯振摇提取1 3次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，制成每 1 mL含生药量相当于熟地黄2 20g的溶液，作为对照药材溶液；③测定法照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液 和供试品溶液各2 20 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以邻二甲苯-乙酸乙酯1:1为 展开剂，其中邻二甲苯可替换为苯，或甲苯，或间二甲苯，或对二甲苯，或邻二甲苯、间二甲 苯、对二甲苯三种按任意比例的混合物，展开，取出，晾干，喷以0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙 醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；(3)所述中药制剂中女贞子的鉴别方法，是以女贞子对照药材和齐墩果酸对照品为对 照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤①供试品溶液的制备取所述中药制剂，加三氯甲烷或二氯甲烷，提取1 3次，合并三 氯甲烷液或二氯甲烷液，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇，或者残渣加无水乙醇-三氯甲烷3 :2 混合溶液，在5 50°C，制成每1 mL含生药量相当于女贞子0. 2 5g的溶液，作为供试品 溶液；②对照药材溶液的制备取女贞子对照药材，加三氯甲烷或二氯甲烷，超声处理，滤 过，滤液蒸干，残渣加甲醇，或者残渣加无水乙醇-三氯甲烷3 2混合溶液，在5 50°C，制 成每1 mL含生药量相当于女贞子0. 2 5g的溶液，作为对照药材溶液；③对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品，加甲醇或95%乙醇，在5 50°C，配制成每 ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；④测定法照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，在5 50°C，吸取供 试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各2 20μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸7 15 2 7 1 5 :0 0.5、或者以三氯甲烷-甲 醇-甲酸20 40 :1 :0. 3 1. 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以m 20%硫酸乙醇溶 液，或者喷以1% 10%磷钼酸乙醇溶液，在60 120°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱 中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；(4)所述中药制剂中天花粉的鉴别方法，是以天花粉对照药材和胍氨酸对照品为对照 的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤①供试品溶液的制备取所述中药制剂，加30% 100%乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸 干，加50%乙醇使溶解，滤过，得滤液，制成每1 mL含生药量相当于天花粉0. 01 Ig的溶 液，作为供试品溶液；②对照药材溶液的制备取天花粉对照药材，加50%乙醇，超声处理，滤过，得滤液， 制成每1 mL含生药量相当于天花粉0. 01 Ig的溶液，作为对照药材溶液；③对照品溶液的制备取胍氨酸对照品，加50%乙醇，配制成每ImL含Img的溶液，作为 对照品溶液；④测定法照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对 照药材溶液和对照品溶液各1 20 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-无水 乙醇-冰醋酸-水7 15 0 2 :2 6 :1 5、正丁醇-甲酸-水15 25 3 :2、正丁 醇-丙酮-水2 5 2 :1中的任一种为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1% 10%茚三 酮乙醇溶液，在60 120°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
2.根据权利要求1所述的治疗或辅助治疗肿瘤疾病的中药制剂的鉴别方法，其特征在 于所述中药制剂是由紫河车、黄芪、熟地黄、党参、白术、当归、甘草、女贞子、黄精、甜地丁 或紫花地丁、天花粉十一味中药组成，紫河车粉碎成粉末，其余十味药材溶媒提取，制成片 剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂各种适宜的剂型。
3.根据权利要求2所述的治疗或辅助治疗肿瘤疾病的中药制剂的鉴别方法，其特征在 于所述中药制剂的处方按重量配比计为紫河车4 7、黄芪20 50、熟地黄10 30、党 参5 20、白术5 20、当归5 15、甘草5 15、女贞子5 20、黄精5 15、甜地丁或 紫花地丁 5 20、天花粉5 20。
4.根据权利要求3所述的治疗或辅助治疗肿瘤疾病的中药制剂的鉴别方法，其特征在 于所述中药制剂中每克含生药量相当于紫河车0. 15 0. 18g、熟地黄0. 45 0. 55g、女贞 子 0. 25 0. 35g、天花粉 0. 25 0. 35g。
5.根据权利要求1所述的治疗或辅助治疗肿瘤疾病的中药制剂的鉴别方法，其特征在 于所述0. 1%的2，4-二硝基苯胼乙醇溶液是取2，4-二硝基苯胼lg，加无水乙醇1000 mL 使溶解，再缓缓加入浓度为36% 38%的盐酸10mL，摇勻，即得。
6.根据权利要求1所述的治疗或辅助治疗肿瘤疾病的中药制剂的鉴别方法，其特征在 于所述中药制剂中女贞子的鉴别方法，制备供试品溶液前，对中药制剂进行预处理，具体 操作为取所述中药制剂，加0. 2% 0. 5%的氢氧化钠溶液，温热使充分溶散，加热至沸，放 冷，滤过或离心，取滤液或上清液，用盐酸或硫酸调节PH值至1 2。
7.根据权利要求广6所述的治疗或辅助治疗肿瘤疾病的中药制剂的鉴别方法，其特征 在于所述鉴别方法包括如下鉴别方法的任一种、或者任两种、或者任三种、或者全部(1)所述中药制剂中紫河车的鉴别方法，是以紫河车对照药材为对照的薄层色谱鉴别 方法，包括以下步骤①供试品溶液的制备取所述中药制剂3 10g，加三氯甲烷或二氯甲烷20 30mL，超声 处理5 45分钟，滤过，浓缩滤液，制成每1 mL含生药量相当于紫河车0. 2 5g的溶液， 作为供试品溶液；②对照药材溶液的制备取紫河车对照药材0.5 2g，加三氯甲烷或二氯甲烷20 30mL,超声处理5 45分钟，滤过，浓缩滤液，制成每1 mL含生药量相当于紫河车0. 2 5g 的溶液，作为对照药材溶液；③测定法照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液 和供试品溶液各5 15yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯9 广9 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5 50%的高氯酸溶液，在6(T12(TC加热至斑点显色清晰， 供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；(2)所述中药制剂中熟地黄的鉴别方法，是以熟地黄对照药材为对照的薄层色谱鉴别 方法，包括以下步骤①供试品溶液的制备取所述中药制剂6 15g，加水100 200mL，温热使充分溶散， 加热至沸，放冷，离心，取上清液，浓缩至30 IOOmL,用乙酸乙酯振摇提取1 3次，每次 20 30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，制成每1 mL含生药量相当于熟地黄 2 20g的溶液，作为供试品溶液；②对照药材溶液的制备取熟地黄对照药材2 10g，加水煎煮广2次，每次加水50 150mL,每次煎煮0. 5 2小时，用脱脂棉滤过，合并滤液，浓缩至30 IOOmL,用乙酸乙酯振 摇提取1 3次，每次20 30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，制成每1 mL 含生药量相当于熟地黄2 20g的溶液，作为对照药材溶液；③测定法照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液 和供试品溶液各5 15 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以邻二甲苯-乙酸乙酯1:1为 展开剂，其中邻二甲苯可替换为苯，或甲苯，或间二甲苯，或对二甲苯，或邻二甲苯、间二甲 苯、对二甲苯三种按任意比例的混合物，展开，取出，晾干，喷以0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙 醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；(3)所述中药制剂中女贞子的鉴别方法，是以女贞子对照药材和齐墩果酸对照品为对 照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤①供试品溶液的制备取所述中药制剂1.5 12g，加三氯甲烷或二氯甲烷20 IOOmL,超声处理5 45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或者加无水乙醇-三氯甲烷按3 2混合的溶液，在10 50°C使溶解，制成每1 mL含生药量相当于女贞子0. 2 5g的溶液， 作为供试品溶液；②对照药材溶液的制备取女贞子对照药材0.5g,加三氯甲烷或二氯甲烷20mL，超声 处理5 45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或者加无水乙醇-三氯甲烷按3 :2混合的溶 液，在10 50°C使溶解，制成每1 mL含生药量相当于女贞子0. 2 5g的溶液，作为对照药 材溶液；③对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品，在10 50°C，加甲醇或95%乙醇配制成每 ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；④测定法照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，在10 50°C，吸取 供试品溶液5 15 μ L、对照药材溶液和对照品溶液各2 5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸7 15 2 7 1 5:0 0.5、或者以三 氯甲烷-甲醇-甲酸20 40 :1 :0. 3 1. 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2 20%硫酸 乙醇溶液，或者喷以广10%磷钼酸乙醇溶液，在60 120°C加热至斑点显色清晰，供试品色 谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；(4)所述中药制剂中天花粉的鉴别方法，是以天花粉对照药材和胍氨酸对照品为对照 的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤①供试品溶液的制备取所述中药制剂6 12g，加30% 100%乙醇，超声处理5 45 分钟，滤过，滤液蒸干，加50%乙醇使溶解，滤过，制成每1 mL含生药量相当于天花粉0. 01 Ig的溶液，作为供试品溶液；②对照药材溶液的制备取天花粉对照药材2g，加50%乙醇，超声处理5 45分钟，滤 过，制成每1 mL含生药量相当于天花粉0. 01 Ig的溶液，作为对照药材溶液；③对照品溶液的制备取胍氨酸对照品，加50%乙醇配制成每ImL含Img的溶液，作为 对照品溶液；④测定法照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5 15 μ L，对照药材溶液和对照品溶液各1 5yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁 醇-无水乙醇-冰醋酸-水7 15 0 2 :2 6 :1 5、正丁醇-甲酸-水15 25 3 2、正丁醇-丙酮-水2 5 2 :1中的任一种为展开剂，展开，取出，晾干，喷以广10%的 茚三酮乙醇溶液，在6(T12(TC加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
8.根据权利要求7所述的治疗或辅助治疗肿瘤疾病的中药制剂的鉴别方法，其特征在 于所述鉴别方法包括如下鉴别方法的任一种、或者任两种、或者任三种、或者全部(1)所述中药制剂中紫河车的鉴别方法，包括以下步骤取所述中药制剂6g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为 供试品溶液；另取紫河车对照药材1 g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2010年版一部 附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 正己烷-乙酸乙酯9 5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%高氯酸溶液，在105°C加热至 斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；(2)所述中药制剂中熟地黄的鉴别方法，包括以下步骤取所述中药制剂10g，加水150mL，温热使充分溶散，加热至沸，放冷，离心，取上清液， 浓缩至IOOmL,用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇 0. 5mL使溶解，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材5g，加水煎煮2次，每次加水80mL，第 一次2小时，第二次1小时，用脱脂棉滤过，合并滤液，浓缩至IOOmL,用乙酸乙酯振摇提取 2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0. 5mL使溶解，作为对照药材溶液；照 中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10 μ L、对照药材溶液 5yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以邻二甲苯-乙酸乙酯1 1为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以0. 1%的2，4- 二硝基苯胼乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位 置上，显相同颜色的主斑点；(3)所述中药制剂中女贞子的鉴别方法，包括以下步骤取所述中药制剂6g，加三氯甲烷20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 lmL，在35 40°C使溶解，作为供试品溶液；另取女贞子对照药材0. 5g，同法制成对照药材 溶液；再取齐墩果酸对照品，加甲醇在35 40°C配制成每ImL含Img的溶液，作为对照品 溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，在35 40°C，吸取供试品溶 液l(Tl5yL、对照药材溶液和对照品溶液各5yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己 烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸12. 5 5 3 :0. 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫 酸乙醇溶液，在110°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；(4)所述中药制剂中天花粉的鉴别方法，包括以下步骤取所述中药制剂10g，加50%乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，加50%乙 醇IOmL使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取天花粉对照药材2g，加50%乙醇20mL， 超声处理30分钟，滤过，取滤液作为对照药材溶液；再取胍氨酸对照品，加50%乙醇制成每 ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试 验，吸取供试品溶液10 μ L、对照药材溶液和对照品溶液各2 μ L，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以正丁醇-无水乙醇-冰醋酸-水8 2 :4:3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以洲 茚三酮乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照 品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
全文摘要
本发明涉及一种治疗或辅助治疗肿瘤疾病的中药制剂的鉴别方法，属于中药制剂质量控制技术领域。本发明提供的中药制剂为新研制的中药复方制剂，为控制该制剂的质量，本发明建立了采用薄层色谱法鉴别该中药制剂中紫河车、熟地黄、女贞子、天花粉的方法。该方法专属性强，重现性、耐用性好，可用于该中药制剂中相应药味的鉴别。
文档编号A61K36/804GK102091175SQ201110065319
公开日2011年6月15日 申请日期2011年3月18日 优先权日2011年3月18日
发明者原庆泓, 朱平, 王志敏, 陈庆 申请人:王志敏