专利名称：免疫增强化合物的均匀悬液及其用途的利记博彩app
免疫增强化合物的均匀悬液及其用途相关申请的交叉引用本申请要求2009年12月15日提交的美国临时申请号61/286，754的优先权，其通过引用全文纳入本文。
背景技术：
近期开发的减毒病原或亚基蛋白疫苗尽管比传统全病原疫苗在产品安全和生产成本方面提供更大优势，相较全病原一般免疫原性有限。所以，这些疫苗一般需要有显著免 疫刺激能力的佐剂以在预防疾病上达到其全部潜能。已经努力确定新免疫调节物用作疫苗和免疫治疗的佐剂。特定地，很需要引起人和家畜中对多种抗原的强效细胞介导和体液免疫应答，但没有传统佐剂和其他免疫调节物副作用的佐剂。小分子免疫增强剂(“SMIP”)可满足这种需求，因为小分子平台提供选择性操作免疫反应的不同化合物，其为增加治疗指数免疫调节剂所必需。Toll样受体(TLR)是一组模式识别受体，其结合来自细菌、真菌、原生动物和病毒的病原体相关分子模式(PAMP)，并作为抵抗病原体入侵的第一道防线。TLR对诱导参与炎症应答的基因表达很关键，且TLR和所述先天免疫系统在抗原特异性获得性免疫发展中是关键步骤。获得性(体液或细胞介导的)免疫与先天免疫的TLR信号机制有关。先天免疫是保护性免疫细胞应答，其快速起作用以对抗环境损伤，包括但不限于细菌或病毒剂。获得性免疫是较慢的应答，其涉及原初T淋巴细胞分化和激活成T辅助I (Thl)或T辅助2 (Th2)细胞类型。Thl细胞主要促进细胞免疫，而Th2细胞主要促进体液免疫。在识别病原生物上存在的特异或一组特异分子决定簇中所有TLR似乎作为同二聚体或异二聚体发挥作用，所述病原生物包括细菌细胞表面脂多糖、脂蛋白、细菌鞭毛蛋白、细菌和病毒的DNA和病毒RNA。对TLR激活的细胞应答涉及一种或多种转录因子的激活，引起生成和分泌有助于杀伤及清除所述病原入侵的细胞因子和共刺激分子如干扰素、TNF-、白介素、MIP-I 和 MCP-I。十三种TLR (命名为TLR1-TLR13)在人和小鼠中已经确定，并且其中很多的等同形式在其他哺乳动物种类中也已发现。特定地，TLR7和TLR8的作用是检测细胞中是否存在“外源”单链RNA，作为响应病毒入侵的手段。TLR7和TLR8都是结构上高度保守的蛋白，其识别来自病毒的富含鸟苷或尿苷的单链RNA (ssRNA)，所述病毒如人免疫缺陷病毒、水泡性口炎病毒和流感病毒。WO 2009/111337公开结合Toll样受体(TLR)的一系列化合物，包括TLR7和TLR8。发现化合物用作免疫增强剂，但是包括疏水核心且溶解度低。因此本发明的目标是提供能刺激或调节需要对象中免疫应答的SMIP的均匀悬液。发明概述本方面一般涉及能刺激或调节需要对象中免疫应答的小分子免疫增强剂(SMIP;即式I或式II的化合物)的均匀悬液。均匀悬液可以与多种免疫治疗抗原或佐剂联用。
一个示例性方法是用高压匀化与表面活性剂和黏性增强剂一起产生包括U m大小颗粒的SMIP稳定均匀悬液。所得悬浮特别适用于共递送SMIP与明矾和基于水包油乳剂的疫苗。一方面，发明提供均匀悬浮剂，包括(a)式I或式II的苯并萘啶化合物，药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N-氧化物衍生物，受保护衍生物，单独异构体或其异构体混合物；(b)表面活性剂，和(c)悬浮剂，其中悬液在4° C稳定至少约四周。在某些实施方式中，均勻悬液包括约0. 5mg/mL-约50mg/mL苯并萘唳化合物。在某些实施方式中，苯并萘啶化合物是2_(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f] [1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙-2-醇；2-(4_甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f] [1,7]萘啶-5-胺；4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f] [1,7]萘啶_2_基)乙基)_3_甲基苯甲酸乙酯；2-(4-( 二甲基氨基)苯乙基)-8-甲基苯并[f] [1,7]萘啶-5-胺；2-(4_甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][l，7]萘啶-5-胺；或2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f] [1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇。 在一个优选实施方式中，均匀悬液包括(a)2_(2，4-二甲基苯乙基)苯并[f] [I, 7]萘啶-5-胺，或其药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，(b)表面活性剂，和(c)悬浮剂，其中悬液在4° C稳定至少约四周。在另一个优选实施方式中，均匀悬液包括(a)2-(4_甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f] [I, 7]萘啶-5-胺，或其药学上可接受盐或药学上可接受溶剂合物，
(b)表面活性剂，和(c)悬浮剂，其中悬液在4° C稳定至少约四周。在另一个优选实施方式中,均勻悬液包括(a) 2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][l,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇，或其药学上可接受盐或药学上可接受溶剂合物，(b)表面活性剂，和(c)悬浮剂，其中悬液在4° C稳定至少约四周。示例性表面活性剂包括，例如，吐温(TWeen)-80。在某些实施方式中，均匀悬液包含约0. 1%-约10%表面活性剂。示例性悬浮剂包括，例如，黏性增强剂如羧甲基纤维素。在某些实施方式中，均匀悬液包含约0. 1%-约10%悬浮剂。在某些实施方式中，均匀悬液的至少约50%悬浮颗粒直径是约10 ii m或更小。在某些实施方式中，均匀悬液的至少约50%悬浮颗粒直径是约2 或更小。发明的均匀悬液能用于强化免疫应答并能与抗原、免疫原性组合物或疫苗共递送以增强诱导免疫应答的效果。佐剂(例如，明矾或水包油佐剂)可以与发明的均匀悬液联用。本文也提供免疫原性组合物，包括(I)抗原和(2)发明的均匀悬液。在某些实施方式中，免疫原性组合物还包含佐剂。示例性佐剂包括，例如，含铝佐剂(如氢氧化铝，羟基氧化铝或羟基磷酸铝)，水包油乳剂(如MF59)，脂质体(如外膜囊泡)，寡核苷酸(如包括未甲基化CpG基序的寡核苷酸)。在某些实施方式中，免疫原性组合物包括抗原，其为细菌抗原(如脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitides)抗原),病毒抗原(如呼吸道合胞病毒(RSV)或埃博拉病毒(Ebola virus)抗原)。在某些实施方式中，免疫原性组合物包括(I)病毒抗原(如埃博拉病毒抗原)和(2) 2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f] [1,7]萘啶-5-胺或
2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][l，7]萘啶_2_基)乙基)-3_甲基苯氧基)乙氧基)乙醇。
本文还提供使用发明的均匀悬液来增强需要对象中免疫应答的方法和生产本发明均匀悬液的方法。发明也涉及生产均匀悬液的方法，所述均匀悬液包括式I和式II的化合物，表面活性剂和悬浮剂。所述方法包括混合式I和式II的化合物、表面活性剂和悬浮剂，并且在高压例如15，000-20, OOOpsi匀质化混合物以生产均匀悬液，所述均匀悬液优选有约10 ii m或更小的D50，更优选约2iim或更小，并可选约IOiim或更小的D90。本文也提供使用发明的免疫原性组合物在需要对象中产生免疫应答的方法。发明也涉及本文所述用于治疗的均匀悬液，和均匀悬液在生产增强或诱导免疫应答的药物中的应用。
图IA显示单独或加入不同剂量实施例47悬浮剂到Alum/3MenB制剂后，三个MenB 抗原的电泳概况(用SDS-PAGE)。注解SN=未吸附抗原(代表20%的10 y g剂量)；T=未吸附抗原(代表200%的20 ii g剂量)；P=已吸附抗原修复(代表10%的10 ii g剂量)。图IB是显示明矾上抗原吸附百分比的表。图2显示实施例47的均匀悬液对肠外致病性大肠杆菌(E. coli) (ExPEC)抗原PK1-3526吸附没有影响。注解1.海蓝色加分子量标记；2. pKl-3526对照2ug (100%)；
3.pKl-3526 对照 lug (50%) ；4. pKl-3526 对照 0. 4ug (20%) ；5.明矾 /pKl_3526SN (20%)；
6.明矾 /pKl-3526+ 实施例 47SN (20%) ；7.明矾 /pKl_3526SN TCA (240%) ；8.明矾 /pKl-3526+ 实施例 47SN TCA (240%) ；9. 10. pKl_3526TCA 对照 2. 4ug (240%) ；11.明矾 /pKl-3526颗粒解吸(50%) ；12.明矾/pKl-3526+实施例47颗粒解吸(50%)。％值表明单独剂量制剂的比例。图3A显示小鼠肌肉内注射4mpk (毫克/千克)标明3MenB/明矾的载剂后实施例47的血清水平(不均匀/DMSO悬液相比均匀悬液)。图3B显示小鼠肌肉内注射4mpk标明3MenB/明矾的载剂24小时后实施例47的注射位点肌肉水平(不均匀/DMSO悬液相比均匀悬液)。图3C显示小鼠肌肉内注射4mpk标明3MenB/明矾的载剂24小时后实施例47的腹股沟淋巴结水平(不均匀/DMSO悬液相比均匀悬液)。图4显示不均匀/DMSO悬液加3MenB/明矾和实施例47的均匀悬液加3MenB/明矾的细胞因子释放概况相似。相较佐剂R848，接触均匀悬液或实施例47所配置DMSO后细胞因子释放最小。图5A显示用每小鼠2-100微克范围的特定剂量实施例47均匀悬液配制的明矾/3MenB的血清杀菌抗体(SBA)效价。图5B显示每小鼠2-100微克范围的特定剂量实施例47均匀悬液配制的MF59/3MenB的SBA效价。图6显示实施例47悬液(当用Alum/3MenB疫苗配制时)引起对16株脑膜炎奈瑟球菌组汇集血清的SBA效价的能力(所有株通常用明矾/3MenB制剂有低效价)。图显示这16株的覆盖百分比。截留指考虑到显示杀菌活性的最低效价。图7A-7C显示体内MenB小鼠模型的IgGl/IgG2a比率评价的结果。图7A显示GNA2132-GNA1030 的 IgGl，IgG2a, IgG2b 和 IgG3 效价。图 7B 显示 GNA2091-GNA1870 的IgGl, IgG2a, IgG2b 和 IgG3 效价。图 7C 显示 NadA 的 IgGl, IgG2a, IgG2b 和 IgG3 效价。
图8显示使用实施例47不均匀悬液(DMS0中制备)的SBA分析结果。小鼠用MF59/3MenB+以实施例47所示量i. m.免疫两次。图基于三个独立SBA研究并且显示第二次注射后两周的平均效价土标准偏差。SBA分析用标准CFU方法和NZ98MenB菌株完成。图9A概括了显示实施例47悬液引起对RSV F抗原免疫反应能力的研究结果。读数代表总抗F抗体(K )和中和抗体(PRNT60)。图9B显示另一研究中实施例47悬液增强类型转换成IgG2a的F特异性抗体以及中和抗体。发明详述I.概述一方面，本发明涉及小分子免疫增强剂(SMIP)的均匀悬液。所述均匀悬液能用于增强免疫应答。如本文所述，发明人已评价示例性SMIP即2-(2，4-二甲基苯乙基)苯并[f] [1,7] 萘啶-5-胺的均匀悬液功效。这些研究显示SMIP均匀悬液比非均匀悬液(在DMSO中)更有效增强免疫应答。一个生成均匀悬液的示例性方法是用高压匀化与表面活性剂和黏性增强剂一起产生包括IOOnm-IO u m大小范围颗粒的SMIP稳定均匀悬液。所得悬浮特别适用于共递送SMIP与明矾和基于水包油乳剂的疫苗。均匀悬液有确定的尺寸分布，使剂量更加均匀。另夕卜，所得颗粒尺寸增加给药后SMIP对免疫细胞的生物可利用性。如用尺寸分布所测量，悬液也能随着时间而稳定。最终，与同一剂量的非均匀悬液相比，SMIP均匀悬液在更低剂量(例如每剂量10 U g或更少)提供免疫刺激效果。在一个优选实施方式中，均匀悬液包括(a)2_(2，4-二甲基苯乙基)苯并[f] [1，7]萘啶-5-胺，或其药学上可接受盐或药学上可接受溶剂合物，(b)表面活性剂，和(c)悬浮齐U，其中悬浮在4° C稳定至少约四周。在另一个优选实施方式中，均匀悬液包括(a)2-(4_甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][l，7]萘啶-5-胺，或其药学上可接受盐或药学上可接受溶剂合物，
(b)表面活性剂，和(c)悬浮剂，其中悬液在4° C稳定至少约四周。在另一个优选实施方式中,均勻悬液包括(a) 2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][l,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙醇，或其药学上可接受盐或药学上可接受溶剂合物，(b)表面活性剂，和(c)悬浮剂，其中悬液在4° C稳定至少约四周。发明的均匀悬液能用于强化免疫反应并能与抗原，免疫原性组合物或疫苗共递送以增强诱导免疫反应的效果。本文还提供使用发明的均匀悬液来增强需要对象中免疫反应的方法和生产本发明均匀悬液的方法。2.定义如本文所用，单数形式的“一个”、“一种”和“该”包括复数指代物，除非内容中另
有明确规定。本文所用的术语“约”指某数值的+/_10%。本文所用的术语“烯基”指部分不饱和的具有至少一个碳-碳双键的支链或直链烃类。绕所述双键的原子方向为顺式(Z)或反式(E)构象。烯基可以任选被取代。本文所用的术语"C2-C3烯基"、"C2-C4烯基"、"C2-C5烯基"、"C2-C6烯基"、"C2-C7烯基〃和"C2-C8烯基〃指分别含至少2个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的烯基基团。除非另有说明，烯基基团通常是C2-C6烯基。如本文所用，烯基基团的非限制性示例包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等。本文所用的术语“亚烯基”指衍生自烯基的部分不饱和支链或直链二价烃基。亚烯基可以任选被取代。本文所用的术语"C2-C3亚烯基〃、"C2-C4亚烯基〃、"C2-C5亚烯基〃、〃c2-c6亚烯基〃、"C2-C7亚烯基〃和"C2-C8亚烯基〃指分别含至少2个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的亚烯基基团。除非另有说明，亚烯基基团通常是Cl-C6亚烯基。如本文所用，亚烯基基团的非限制性示例包括亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基、亚戊烯基、亚己烯基、亚庚烯基、亚辛烯基、亚壬烯基、亚癸烯基等。本文所用的术语“烷基”指饱和的支链或直链烃。烷基可以任选被取代。本文所用的术语"C1-C3烷基〃、"C1-C4烷基〃、"C1-C5烷基〃、"C1-C6烷基〃、"C1-C7烷基〃和"C1-C8烷基〃指分别含至少I个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的烷基基团。除非另有说明，烷基基团通常是C1-C6烷基。如本文所用，烷基基团的非限制性示例包括甲基、乙基、正丙基、 异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。本文所用的术语“亚烷基”指衍生自烷基的饱和支链或直链二价烃基。亚烷基可以任选被取代。本文所用的术语"C1-C3亚烷基〃、"C1-C4亚烷基〃、"C1-C5亚烷基〃、"C1-C6亚烷基'"C1-C7亚烷基〃和"C1-C8亚烷基〃指分别含至少I个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的亚烷基基团。除非另有说明，亚烷基基团通常是C1-C6亚烷基。如本文所用，亚烷基基团的非限制性示例包括亚甲基、亚乙基、正亚丙基、异亚丙基、正亚丁基、异亚丁基、仲亚丁基、叔亚丁基、正亚戊基、异亚戊基、亚己基等。本文所用的术语“炔基”指部分不饱和的具有至少一个碳-碳三键的支链或直链烃类。炔基可以任选被取代。本文所用的术语"C2-C3炔基〃、"C2-C4炔基〃、"C2-C5炔基"、〃c2-c6炔基〃、"C2-C7炔基〃和"C2-C8炔基〃指分别含至少2个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的炔基基团。除非另有说明，炔基基团通常是C2-C6炔基。如本文所用，炔基基团的非限制性示例包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、癸炔基等。本文所用的术语“亚炔基”指衍生自炔基的部分不饱和支链或直链二价烃基。亚炔基可以任选被取代。本文所用的术语"C2-C3亚炔基〃、"C2-C4亚炔基〃、"C2-C5亚炔基〃、"C2-C6亚炔基〃、"C2-C7亚炔基〃和"C2-C8亚炔基〃指分别含至少2个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的亚炔基基团。除非另有说明，亚炔基基团通常是(2-(6亚炔基。如本文所用，亚炔基基团的非限制性示例包括亚乙炔基、亚丙炔基、亚丁炔基、亚戊炔基、亚己炔基、亚庚炔基、亚辛炔基、亚壬炔基、亚癸炔基等。本文所用的术语“烷氧基”指-ORa基团，其中Ra为本文所定义的烷基。烷氧基可以任选被取代。本文所用的术语"C1-C3烷氧基"、"C1-C4烷氧基"、"C1-C5烷氧基"、"C1-C6烷氧基'"C1-C7烷氧基〃和"C1-C8烷氧基〃指其中烷基部分含至少I个且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的烷氧基。如本文所用，烷氧基的非限制性示例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、戍氧基、己氧基、庚氧基、羊氧基、壬氧基、癸氧基等。本文所用的术语“芳基”指具有总共5-14个环原子的单环、双环和三环的环系统，其中所述系统中至少一个环为芳族且其中系统内各环含3-7个环原子。芳基可以任选被取代。如本文所用，芳基的非限制性示例包括苯基、萘基、芴基、茚基、奥基和蒽基等。所用的术语“亚芳基”指衍生自芳基的二价基团。亚芳基可以任选被取代。 本文所用的术语“氰基”指-CN基团。本文所用的术语“环烷基”指饱和或部分不饱和的，单环、稠合双环或稠合三环或桥接多环的环组装物。本文所用的术语"C3-C5环烷基〃、"C3-C6环烷基〃、"C3-C7环烷基〃、"C3-C8环烷基、"C3-C9环烷基和"C3-Cltl环烷基所指环烷基中饱和或部分不饱和的，单环、稠合双环或桥接多环的环组装物含有至少3个，且最多5、6、7、8、9或10个碳原子。环烷基基团可以任选被取代。如本文所用，环烷基基团的非限制性示例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环戊烯基、环己烯基、十氢萘基、2，3，4，5，6，7-六氢-IH-茚基等。
本文所用的术语“卤素”指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘⑴。本文所用的术语〃卤代”指卤素基团氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)和碘(-I)。本文所用的术语“卤代烷基”或“卤素取代的烷基”指如本文所定义取代有一个或多个卤素基团的烷基，其中所述卤素基团相同或不同。卤代烷基可以任选被取代。如本文所用，此类支链或直链卤代烷基的非限制性示例包括取代有一个或多个卤素基团的甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基和正丁基，其中所述卤素基团相同或不同，包括但不限于三氟甲基、五氟乙基等。本文所用的术语“卤代烯基”或“卤素取代的烯基”指如本文所定义取代有一个或多个卤素基团的烯基，其中所述卤素基团相同或不同。卤代烯基可以任选被取代。如本文所用，此类支链或直链卤代烯基的非限制性示例包括取代有一个或多个卤素基团的乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等，其中所述卤素基团相同或不同。如本文所用，术语“卤代炔基”或“卤素取代的炔基”指如本文所定义取代有一个或多个卤素基团的炔基，其中所述卤素基团相同或不同。卤代炔基基团可以任选被取代。如本文所用，此类支链或直链卤代炔基基团的非限制性示例包括取代有一个或多个卤素基团的乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、癸炔基等，其中所述卤素基团相同或不同。本文所用的术语“卤代烷氧基”或“卤素取代的烷氧基”指如本文所定义取代有一个或多个卤素基团的烷氧基，其中所述卤素基团相同或不同。卤代烷氧基基团可以任选被取代。如本文所用，此类支链或直链卤代烷氧基基团的非限制性示例包括取代有一个或多个齒素基团的甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、戍氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、壬氧基、癸氧基等，其中所述卤素基团相同或不同。本文所用的术语“杂烷基”指如本文所定义的烷基，其中一个或多个碳原子独立地被一个或多个氧、硫、氮或其组合置换。本文所用的术语“杂芳基”指具有总共5-14个环原子的单环、双环和三环的环系统，其中所述系统内至少一个环为芳族，系统内至少一个环含一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子，且其中系统内各环含3-7个环原子。杂芳基可含有一个或多个取代基。杂芳基基团可以任选被取代。如本文所用，杂芳基的非限制性示例包括苯并呋喃基、苯并呋咱基(benzofurazanyl)、苯并|1恶唑基、苯并批喃基,苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并氮杂萆基(benzazepinyl)、苯并咪唑基、苯并噻喃基、苯并[1,3]间二氧杂环戍烯基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、噌啉基、呋咱基(furazanyl)、呋喃基、呋喃并吡啶基、咪唑基J引哚基、中氮茚基、二氢吲哚-2-酮、吲唑基、异吲哚基、异喹啉基、异Wg唑基、异噻唑基、1，8-萘啶基、囉唑基、曝吲哚基(oxaindolyl)、Ilg 二唑基、吡唑基、吡咯基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、喹喔啉基、喹啉基、喹唑啉基、4H-喹嗪基、噻唑基、噻二唑基、噻吩基、三嗪基、三唑基和四唑基。本文所用的术语“杂环烷基”指如本文所定义的环烷基，其中一个或多个环碳被选自 _0_、-N=、NR-> -C (0) -、-S-、-S (0)-或-S (0) 2-的部分置换，其中 R 为氢、C1-C4 烧基或氮保护基团，前提是所述基团的环不含两个相邻的0或S原子。杂环烷基基团可以任选被取代。如本文所用，杂环烷基的非限制性示例包括吗啉基、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮、1，4- 二氧杂-8-氮杂-螺[4. 5]癸-8-基、2H-吡咯基、2-吡咯啉基、 3-吡咯啉基、1，3- 二氧戊环基、2-咪唑啉基、咪唑烷基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、1，4- 二嗯烷基、1，4- 二噻烷基、硫代吗啉基、氮杂环庚烷基、二氮杂:f基(diazepinyl)、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、噻喃基、吖丁啶基、氧杂环丁基、硫杂环丁基(thietanyl )、氧杂环庚烧基(oxepanyl )、硫杂环庚烧基(thiepanyl )、1，2，3，6-四氢吡啶基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二_烧基、1，3-二氧戊环基、二噻烷基、二硫戊环基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂双环[3. 1.0]己基和3-氮杂双环[4. I. 0]庚基。本文所用的术语“杂原子”指一个或多个氧、硫、氮、磷或硅。本文所用的术语“羟基”指-OH基团。本文所用的术语“羟烷基”指如本文所定义取代有一个或多个羟基的烷基。如本文所用，支链或直链UC1-C6-烷基基团的非限制性示例包括取代有一个或多个羟基的甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基和正丁基基团。本文所用的术语“异氰酸基”指-N = C = 0基团。本文所用的术语“异硫氰酸基”指-N = C = S基团。本文所用的术语“巯基”指(烷基)S-基团。本文所用的术语“可任选取代”指所述参考基团可被一个或多个额外基团取代或未被取代，所述额外基团单独且独立选自烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环烧基、轻基、烧氧基、疏基、氰1基、齒素、擬基、硫代擬基、异氰1酸基、硫氰1酸基、异硫氰1酸基、硝基、全齒代烷基、全氟代烷基和包括单取代及双取代氨基基团的氨基，及其受保护的衍生物。任选取代基的非限制性示例包括卤素、-CN、=0、=N-OH, = N-OR、=N-R, OR、-C(O)R、-C (0) OR、-OC (0) R、-OC (0) OR、-C (0) NHR、-C (0) NR2、-OC (0) NHR、-OC (0) NR2、-SR-、-S (0)R、-S (0) 2R、-NHR、-N (R) 2、-NHC (0) R、-NRC (0) R、-NHC (0) OR、-NRC (0) OR、S (0) 2NHR、-S (0) 2N (R)2、-NHS (0) 2NR2、-NRS (0) 2NR2、-NHS (0) 2R、-NRS (0) 2R、C「C8 烷基、C1-C8 烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C8烷基、和卤素取代的C1-C8烷氧基，其中各R独立选自H、卤素、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C8烷基、和卤素取代的C1-C8烷氧基。此类取代基团的位置和数量按各基团熟知的价态限制确定，例如=0是烷基的合适取代基但不适于芳基。本文所用的术语“前药”指在体内转化成母体药物的药剂。本文所述化合物的前药的非限制性示例是本文所述化合物作为酯给予，一旦进入细胞，该酯即代谢水解成活性实体一羧酸。前药的另一示例是连接于酸性基团的短肽，其中所述肽经代谢显现活性部分。本文所用的术语“溶剂合物”指由溶质(例如，本文所述的式(I)化合物或其盐)和溶剂形成的可变化学计量的复合物。溶剂的非限制性示例为水、丙酮、甲醇、乙醇和乙酸。“脊椎动物对象”指脊索动物亚门的任何成员，包括但不限于人和其他灵长类动物，包括非人灵长类动物如黑猩猩和其他猿和猴种；家畜如牛、绵羊、猪、山羊和马；家养哺乳动物如狗和猫；实验室动物，包括啮齿动物如小鼠、大鼠和豚鼠；包括家养、野生和狩猎鸟类在内的禽类如鸡、火鸡和其他鹑鸡类禽、鸭、鹅等。该术语不表示特定年龄。因此，旨在涵盖成年和新生个体。本文所用的术语"治疗"指以下任意(i)所研究(例如癌症或病原性感染，如在传统疫苗中)病症(例如，疾病或失调)的预防，(ii)所研究病症相关症状的减轻或消除， 以及(iii)所研究病症的基本或完全消除。治疗可以是有效预防(在所研究病症发生前)或有效治疗(在所研究病症发生后)。本发明均匀悬液的术语“有效量”或“药物有效量”指本文所述足以增强免疫反应的量，例如至少约10%。本发明免疫原性组合物的术语〃有效量〃或〃药物有效量〃在本文中指足以治疗或诊断感兴趣病症的所述免疫原性组合物量。所需的确切量将视对象而变化，取决于例如，所述对象的物种、年龄、总体状况；所治疗病症的严重程度；感兴趣的特定抗原；在免疫应答的情况中，取决于对象的免疫系统合成抗体的能力，和所需的保护程度；以及给予方式，和其他因素。个案中的适当“有效”量可由本领域普通技术人员确定。因此，“治疗有效量”通常会落入可通过常规试验确定的较宽范围内。“药学上可接受的”或“药理学上可接受的”指在生物学或其它方面没有不良影响的材料，例如，可将该材料给予个体而不引起任何不当的不良生物学作用且不与含所述材料的组合物中任何成分发生不当的有害相互作用。“生理pH”或“生理范围内的pH”指pH大致在6. 5-8. 0 (含端值)范围内，更典型在约7. 2-7. 6 (含端值)范围内。本文所用的术语“可注射组合物”或其变体指适于注射入脊椎动物对象的药学上可接受的组合物，所述组合物通常无菌、无热原并具有特定PH和适于注射的等渗值。本文所用的术语〃颗粒〃指直径为约IOnm或更小-约150 U m的颗粒，例如范围为 10nm-25nm-50nm-100nm-250nm-500nm-lu m-2. 5u m_5 u m_10 u m_25 u m_50 u m-100u m。因此，本文所用的术语〃颗粒〃包括在本文中定义为颗粒直径小于IOOOnm的〃纳米颗粒"，以及在本文中定义为颗粒直径在Iym-IOOOiim范围内的〃微米颗粒"。在一些实施方式中，本文所述聚合颗粒通常可为球形。术语〃多肽〃指氨基酸残基的聚合物，且不限于产物的最小长度。因此，该定义中包括全长蛋白质、肽、寡肽、二聚体、多聚体等。“含多肽的物质”是某分子，其至少部分为多肽。示例包括多肽，包括糖蛋白、金属蛋白和脂蛋白在内的蛋白，与载体蛋白偶联的多糖抗原等。本文所用蛋白包括全长蛋白及其片段。在某些实施方式中，采用天然序列的修饰，例如缺失、添加和取代(通常为保守性)。
本文所用术语的“片段”指生物分子一级结构的某个物理毗连部分。对于蛋白质，片段可由该蛋白氨基酸序列的毗连部分限定，可以为至少3-5个氨基酸、至少6-10个氨基酸、至少11-15个氨基酸、至少16-24个氨基酸、至少25-30个氨基酸和至少30-45个氨基酸。对于多核苷酸，片段可由该多核苷酸的核酸序列的毗连部分限定，可以为至少9-15个核苷酸、至少15-30个核苷酸、至少31-45个核苷酸、至少46-74个核苷酸、至少75-90个核苷酸和至少90-130个核苷酸。在一些实施方式中，生物分子的片段为免疫原性片段。〃多核苷酸〃是核酸聚合物。多核苷酸可包含少至5、6、7或8个核苷酸。此外,〃多核苷酸〃可包含双链和单链序列，并指且不限于病毒的cDNA、原核或真核mRNA、病毒的基因组RNA与DNA序列(例如，病毒和逆转录病毒的RNA与DNA)、原核或真核生物以及合成的DNA序列。该术语也涵盖包含任何DNA与RNA的已知碱基类似物。该术语还包含修饰，例如天然序列的缺失、添加和取代(通常为保守性的)，其中核酸分子编码抗原性蛋白。这些修 饰可以是有意的，例如通过定点诱变，或者可以是意外的，例如通过产抗原宿主的突变。“含多核苷酸的物质”是某分子，其至少部分为多核苷酸。示例包括RNA载体构建物、DNA载体构建物等。本文所用的术语“糖”包括单糖、寡糖和多糖。“含糖物质”是某分子，其至少部分为糖。示例包括糖抗原、含偶联于载体肽的糖的抗原等。本文所用的术语"分离"指化学物质如多核苷酸、多肽和抗体等所处环境与天然产生该化学物质的环境不同。分离的化学物质通常基本纯化。分离细胞的方法是本领域技术人员熟知的。“纯化的”蛋白是从其天然宿主产生(例如，重组或合成)或分离的蛋白质，从而组合物中蛋白质含量显著高于粗制品中的含量。通常，纯化的蛋白质的均一性至少约50%，更优选均一性至少约80%、约85%、约90%、约95%、约97%、约98%、约99%或更高。本文所用的“免疫学应答”或“免疫应答”是对象中发生对免疫原性物质的体液和/或细胞免疫应答。免疫应答包括先天和适应性免疫应答。先天免疫应答是为免疫系统提供一线防御的快速作用应答。相反，适应性免疫采用选择和克隆扩增含体细胞重排受体基因的免疫细胞(例如T-和B-细胞受体)来提供特异性和免疫记忆，所述受体基因识别给定病原或疾病(例如肿瘤)的抗原。在其很多效应中，先天免疫应答引起炎性细胞因子的快速突释并活化抗原呈递细胞(APC)如巨噬细胞和树突细胞。为区分病原体和自身组分，先天免疫系统利用多种相对不变的受体检测病原体的特征物，这些特征物称为病原体相关分子模式或PAMP。已知实验性疫苗中添加微生物组分导致发生强烈且持续的适应性免疫应答。据报道，这种免疫应答增强的机理涉及模式识别受体(PRR)，其在包括嗜中性粒细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、B细胞和一些非免疫细胞如上皮和内皮细胞在内的多种免疫细胞上差异表达。PRR的参与导致这类细胞中一些被活化并分泌细胞因子和趋化因子，以及其他细胞成熟并迁移。这以串联方式产生炎性环境导致适应性免疫应答的确立。PRR包括非吞噬细胞受体，如Toll样受体(TLR)和核苷酸结合寡聚结构域(NOD)蛋白，和诱发吞噬作用的受体如清除受体、甘露糖受体和￠-葡聚糖受体。已报道的TLR(与一些已报道配体的示例一起，可在本发明的不同实施方式中用作免疫原性物质)包括如下TLR1(来自分枝杆菌(Mycobacteria)、奈瑟菌(Neisseria)的细菌脂蛋白)，TLR2 (酵母聚糖酵母颗粒、肽聚糖、脂蛋白、糖脂、脂多糖)，TLR3 (病毒双链RNAj IC)，TLR4 (细菌脂多糖、植物产物紫杉醇)，TLR5 (细菌鞭毛)，TLR6 (酵母聚糖颗粒、脂磷壁质酸、支原体的脂肽)，TLR7 (单链RNA、咪喹莫特、雷索咪喹莫特(resimiquimod)和其他合成化合物如洛索立宾和溴匹立明)，TLR8 (单链RNA、雷索咪喹莫特)和TLR9 (CpG寡核苷酸)等。树突细胞被视为在启动初免初始CD4+辅助T (Th)细胞和诱导CD8+T细胞分化成杀伤细胞中最重要的细胞类型。据报道，TLR信号传递在确定这些辅助T细胞应答特性中起重要作用，例如TLR信号的特性决定所观察到ThS答的具体类型(例如，THl与TH2应答)。产生抗体(体液)与细胞免疫的组合作为ThI型应答的部分，而TH2型应答主要是抗体应答。已记载不同TLR配体如CpG DNA(TLR9)和咪唑喹啉(TLR7，TLR8)在体外刺激免疫细胞产生细胞因子。咪唑喹啉是显示为TLR激动剂的第一种类似药物的小化合物。进一步的信息参见例如A. Pashine, N. M. Valiante和J. B. Ulmer,Nature Medicine, 11, S63-S68 (2005), K. S. Rosenthal 和 D. H. Zimmerman, Clinical andVaccine Immunology, 13 (8), 821-829 (2006)及其所引文献。出于本发明的目的，体液免疫应答指由抗体分子介导的免疫应答，而细胞免疫应答是T-淋巴细胞和/或其他白细胞介导的免疫应答。细胞免疫的一个重要方面涉及细胞溶解T细胞(CTL)的抗原特异性应答。CTL特异性针对肽抗原，肽抗原与主要组织相容性复合体(MHC)编码并在细胞表面表达的蛋白关联呈递。CTL帮助诱导并促进胞内微生物的胞内破坏，或感染此类微生物的细胞的裂解。细胞免疫的另一方面涉及辅助T细胞的抗原特异性应答。辅助T细胞协助刺激非特异性效应细胞的功能并集中其活性，所述细胞针对在表面展示MHC分子相关肽抗原的细胞。〃细胞免疫应答〃也指由活化的T细胞和/或包括CD4+和CD8+T细胞衍生细胞在内的其他白细胞产生细胞因子、趋化因子和其他此类分子。因此，引起细胞免疫应答的组合物如免疫原性组合物或疫苗可通过在细胞表面呈递MHC分子相关抗原而使脊椎动物对象致敏。细胞介导的免疫应答指向在表面呈递抗原的细胞或其附近。此外，可产生抗原特异性T淋巴细胞用于今后保护免疫宿主。特定抗原或组合物刺激细胞介导免疫应答的能力可通过本领域已知的多种试验确定，例如通过淋巴增殖(淋巴细胞活化)试验、CTL细胞毒性细胞试验，通过测试敏化对象中的抗原特异性T淋巴细胞,或通过测量T细胞响应抗原再刺激的细胞因子生成来确定。这些试验为本领域熟知。参见例如 Erickson 等,(1993) J. Immunol. 151:4189-4199 ;Doe 等,(1994)Eur.J. Immunol. 24:2369-2376。因此，本文所用的免疫应答可刺激CTL生成和/或辅助T细胞产生或激活。感兴趣的抗原还可引发抗体介导的免疫应答。因此，免疫应答可包括例如以下一种或多种效果由例如B细胞生产抗体；和/或特异性针对感兴趣组合物或疫苗中一种或多种抗原的抑制T细胞和/或Y ST细胞的激活。例如，这些应答可用以中和感染性和/或介导抗体-补体或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)来为经免疫宿主提供保护。这些应答可采用本领域熟知的标准免疫试验和中和试验确定。 “抗原”指含能引起免疫学应答的一个或多个表位(线性、构象或兼有)的分子。该术语可与术语“免疫原”互换使用。“表位”是给定物质(例如，抗原性分子或抗原性复合物)中确定其免疫学特异性的部分。表位包含在所述抗原的定义范围内。通常，表位是天然产生抗原中的多肽或多糖。在人工抗原中，其可为低分子量物质如对氨苯基胂酸衍生物。B细胞表位一般包括至少约5个氨基酸，但可以小到3-4个氨基酸。T细胞表位如CTL表位通常包含至少约7-9个氨基酸，而辅助T细胞表位通常包括至少约12-20个氨基酸。术语“抗原”表示2种亚基抗原，即与该抗原天然关联的全生物体或细胞，以及杀死、减毒或灭活的细菌、病毒、真菌、寄生虫或其他微生物或肿瘤细胞分离且单独的抗原。抗体如抗独特型抗体，或其片段以及能模拟抗原或抗原决定簇的合成肽模拟表位也涵盖在本文所用的抗原定义下。类似地，在体内如在基因治疗和DNA免疫应用中，表达抗原或抗原决定簇的寡核苷酸或多核苷酸也包含在本文的抗原定义中。因此，出于本发明的目的，抗原可衍生自任何不同的病毒、细菌、寄生虫、真菌和其他微生物以及任何不同的肿瘤抗原。抗原还包括在体内表达抗原或抗原决定簇的核酸。稍作举例，抗原可以是来自或衍生自疱疹病毒家族的蛋白质，包括I和2型单纯疱疹病毒(HSV)的衍生蛋白如HSV-I和HSV-2糖蛋白gB、gD和gH ;巨细胞病毒(CMV)衍生蛋白包括CMV gB和gH ;肝炎病毒家族包括甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV)、丁型肝炎病毒(HDV)、戊型肝炎病毒(HEV)和庚型肝炎病毒(HGV)的衍生蛋白；衍生自HIV的蛋白，包括gpl20、gpl60、gp41、p24gag和p55gag包膜蛋白，所述HIV包括HIV分离物的不同遗传亚型 HIVmb、HIVSF2、HIVuv、HIVUI、HIVm、HIV-lCM235、HIV-lus4、HIV-2 的成员；猿免疫缺陷病毒(SIV)的衍生蛋白；和衍生自脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitides)(A, B，C，Y)、B 型流感嗜血杆菌(Hemophilus influenza) (HIB)、幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)的蛋白；人血清白蛋白和卵清蛋白等。与用不同递送系统给予等量抗原如将抗原作为可溶蛋白给予所引起的免疫应答相比，含本发明所述抗原的免疫原性组合物具有的引发免疫应答的能力更强时，该组合物显示“增强的免疫原性”。因此，免疫原性或疫苗组合物可因为抗原更具免疫原性或因为在给予抗原的对象中实现免疫应答所需抗原剂量更低或剂量数更少而显示“增强的免疫原性”。此类增强的免疫原性可通过将所述抗原组合物和抗原对照给予动物并采用本文所述的标准试验比较两者的抗体效价和/或细胞介导的免疫加以确定。术语“佐剂”或“免疫学佐剂”指辅助或调节抗原在免疫系统中作用的任何物质。佐剂可增强体液和/或细胞免疫。术语“赋形剂”指可能存在于成品剂型中的任何基本辅助物质。例如，术语“赋形齐IJ”包括载剂、粘合剂、崩解剂、填料(稀释剂)、悬浮/分散剂等。本文所用的术语"载体构建物"通常指能引导感兴趣核酸序列或基因表达的任何组件。〃DNA载体构建物〃指能引导感兴趣核酸序列或基因表达的DNA分子。DNA载体构建物的一种具体类型是质粒，其为能在宿主细胞内自主复制的环形附加体DNA分子。通常，质粒是环形双链DNA环，其中可接入额外的DNA片段。pCMV是本领域熟知的一种具体质粒。已知其他基于RNA病毒的DNA质粒构建物。这些DNA载体构建物通常含能在真核细胞中起作用的启动子，其转录产物是RNA载体构建物(例如a病毒RNA载体复制子)的5’ cDNA序列，和3’终止区。载体构建物的其他示例包括RNA载体构建物(例如，a病毒载体构建物)等。如本文所用，"RNA载体构建物"、"RNA载体复制子〃和〃复制子〃指能在体内，通常在靶细胞内指导其自身扩增或自体复制的RNA分子。所述RNA载体构建物直接使用，无需将DNA引入细胞并转运到可发生转录的核中。通过使用RNA载体直接递送入宿主细胞的胞质，可有效发生异源核酸序列的自主复制和翻译。术语“均匀”指成分的混合物或掺混物，其结构和组成普遍均一且整个混合物中几乎没有变化。在整个混合物的每一个部分，均匀混合物的不同部分基本充分地显示相同的物理和化学性质。均匀混合物的化学计量学也在整个混合物中基本恒定。术语“悬浮液”涉及液体中分散的颗粒。术语“水性悬浮液”指悬浮在含水的水(连续)相液体中的颗粒。“稳定”均匀悬液是悬浮颗粒的大小不随时间而实质改变(S卩，改变不超过约10%)的悬浮液。3.免疫增强化合物的均匀悬液一方面，发明是包括下列的均匀悬液(a)式I或式II的苯并萘啶化合物，药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N氧化物衍生物，受保护的衍生物，单独异构体或其异构体混合物；(b)表面活性剂,和(C)悬浮剂。均匀悬液包括水相,可以是水或任何其他合适的水相，例如缓冲水溶液。 均匀悬液优选在4° C稳定至少约2周，至少约4周，至少约2月，至少约3月，至少约4月，至少约5月，至少约6月，至少约7月，至少约8月，至少约9月，至少约10月，至少约11月，至少约I年或更长。均匀悬液优选具有大小分布，其中50%颗粒(D50)小于约10M，小于约9iiM，小于约8 ii M，小于约7 ii M，小于约6 ii M，小于约5 ii M，小于约4 y M，小于约3 y M，小于约2 y M，小于约I U M，或小于约0. 9 ii M。或者或另外，均匀悬液能具有大小分布，其中90 %颗粒(D90 )小于约10 u M,小于约9 ii M，小于约8 ii M，小于约7 ii M，小于约6 y M，小于约5 y M，小于约4 u M,小于约3 u M,或小于约2 u M。均匀悬液能包括任何合适的表面活性剂，例如阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂，两性离子(两性)表面活性剂或非离子表面活性剂。示例性阴离子表面活性剂包括例如，全氟辛酸盐(PF0A或PF0)、全氟辛烷磺酸盐(PF0S)，烷基硫酸盐如十二烷基硫酸钠(SDS)或月桂基硫酸铵，月桂醇聚醚硫酸钠(也称月桂基醚硫酸钠，SLES)，烷基苯磺酸盐和脂肪酸盐。示例性阳离子表面活性剂包括例如，烷基三甲基铵盐如鲸蜡基三甲基溴化铵(CTAB,或十六烷基溴化三甲基铵)，氯化鲸蜡基吡啶(CPC)，聚乙氧基化牛油胺(POEA)，苯扎氯铵(BAC)和苄索氯铵(BZT)。示例性两性离子(两性)表面活性剂包括例如，十二烷基甜菜碱，椰油酰胺丙基甜菜碱和椰油两性甘氨酸盐。示例性非离子型表面活性剂包括例如，烷基聚(氧化乙烯)、烷基苯酚聚(氧化乙烯)、聚(氧化乙烯)和聚(氧化丙烯)的共聚物[商品名为泊洛沙姆(Poloxamer)或泊洛沙胺(Poloxamine)]、烷基聚葡萄糖苷(如辛基葡萄糖苷和癸基麦芽糖苷)、脂肪醇(例如鲸蜡醇和油醇)、椰油酰胺MEA、椰油酰胺DEA，普流罗尼克F68和聚山梨醇酯，如吐温(Tween)-20 (聚山梨醇酯20)、吐温-80 (聚山梨醇酯80)，和十二烷基二甲基氧化胺。如果需要，均匀悬液能包括任何组合的两个或多个表面活性剂。均匀悬液能包括约0. 1%-约10%表面活性剂(v/v或w/v)，约0. 1%_约5%表面活性剂，0. 1%-约4%表面活性剂，0. 1%-约3%表面活性剂，0. 1%-约2%表面活性剂，0. 1%-约1%表面活性剂，0. 1%-约0. 5%表面活性剂，约0. 1%表面活性剂，约0. 2%表面活性剂，约0. 3%表面活性剂，约0. 4%表面活性剂，约0. 5%表面活性剂，约0. 6%表面活性剂，约0. 7%表面活性剂，约0. 8%表面活性剂,约0. 9%表面活性剂,或约1%表面活性剂。本文所述均匀悬液中使用的优选表面活性剂是吐温-80 (聚山梨醇酯80)。均匀悬液优选包括约 0. 1%-约 5%, 0. 1%-约 4%, 0. 1%-约 3%, 0. 1%-约 2%, 0. 1%-约 1%，0. 1%-约0. 5%,约 0. 1%，约 0. 2%,约 0. 3%,约 0. 4%,约 0. 5%,约 0. 6%,约 0. 7%,约 0. 8%,约 0. 9%,或约1%吐温80。均匀悬液能包括任何合适悬浮剂，例如增加黏性的悬浮剂。本领域熟知的多种这类试剂包括，例如，纤维素衍生物(羧甲基纤维素，羟丙基纤维素，羟丙基甲基纤维素)，黄原胶，藻酸钠，角叉菜胶，黄蓍胶，熟化淀粉(如马铃薯淀粉)，瓜耳胶，熔凝二氧化硅，香茅醇，香叶醇，二氢mercinol，芳樟醇，橙花醇，罗丁醛，a萜品醇，P -香茅醇，玫瑰醇，香茅油腈，香芹酮，小茴香酮，薄荷醇和异龙脑。如果需要，均匀悬液能包括任何组合的两个或多个悬浮剂。均匀悬液能包括约0. 1%-约10%悬浮剂(v/v或w/v )，约0. 1%-约5%悬浮剂，0. 1%-约4%悬浮剂，0. 1%-约3%悬浮剂，0. 1%-约2%悬浮剂，0. 1%-约1%悬浮剂，0. 1%-约0. 5%悬浮剂，约0. 1%悬浮剂，约0. 2%悬浮剂，约0. 3%悬浮剂，约0. 4%悬浮剂，约0. 5%悬浮齐[J，约0. 6%悬浮剂，约0. 7%悬浮剂，约0. 8%悬浮剂，约0. 9%悬浮剂，或约1%悬浮剂。本文所述均匀悬液使用的优选悬浮剂是羧甲基纤维素(CMC)。均匀悬液优选包括约 0. 1%-约 5%, 0. 1%-约 4%, 0. 1%-约 3%, 0. 1%-约 2%, 0. 1%-约 1%，0. 1%-约 0. 5%,约 0. 1%， 约0. 2%,约0. 3%,约0. 4%,约0. 5%,约0. 6%,约0. 7%,约0. 8%,约0. 9%,或约1%羧甲基纤维素(CMC)。均匀悬液也包括式I或式II的苯并萘啶化合物，药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N氧化物衍生物，受保护的衍生物，单独异构体或其异构体混合物。均匀悬液也包括苯并萘唳化合物，浓度为约0. lmg/mL-约50mg/ml,约0. lmg/mL-约40mg/ml,约0. Img/ml约 30mg/ml,约 0. lmg/mL-约 20mg/ml,约 0. lmg/mL-约 10mg/ml,约 0. lmg/mL-约 5mg/ml,约 0. 5mg/mL,约 I. Omg/mL,约 I. 5mg/mL,约 2mg/mL,约 2. 5mg/mL,约 3mg/mL,约 3. 5mg/mL,约 4mg/mL,约 4. 5mg/mL,约 5mg/mL,约 5. 5mg/mL,约 6mg/mL,约 6. 5mg/mL,约 7mg/mL,约
7.5mg/mL,约 8mg/mL,约 8. 5mg/mL,约 9mg/mL,约 9. 5mg/mL,约 10mg/mL,约 15mg/mL,或约20mg/mLo在优选实施方式中，均匀悬液包括苯并萘啶化合物，选自2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f] [1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙-2-醇；2-(4_甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][l，7]萘啶-5-胺；2-(2，4_ 二甲基苯乙基)苯并[f][l，7]萘啶-5-胺；4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][l，7]萘啶-2-基)乙基)_3_甲基苯甲酸乙酯；2-(4-( 二甲基氨基)苯乙基)-8-甲基苯并[f] [1,7]萘啶-5-胺，和2-(4-甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f] [1,7]萘啶-5-胺。在另一个优选实施方式中，均匀悬液包括苯并萘啶化合物，选自2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f] [1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)丙-2-醇；2_ (4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f] [1,7]萘啶-5-胺;2-(2，4_ 二甲基苯乙基)苯并[f] [1,7]萘啶-5-胺；4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][l，7]萘啶-2-基)乙基)_3_甲基苯甲酸乙酯；2-(4-( 二甲基氨基)苯乙基)-8-甲基苯并[f][l，7]萘啶-5-胺，2-(4-甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f][l，7]萘啶-5-胺，和2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f] [1，7]萘唳-2-基)乙基)-3_甲基苯氧基)乙氧基)乙醇。在一个特定优选实施方式中，均匀制剂包括2-(2，4_ 二甲基苯乙基)苯并[f]萘啶-5-胺。在另一个特定优选实施方式中，均匀制剂包括2-(2，4_ 二甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺，2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][l，7]萘啶_5_胺，或2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][l，7]萘啶_2_基)乙基)-3_甲基苯氧基)乙氧
基)乙醇。在某些实施方式中，均匀制剂包括(a)式I或式II的苯并萘啶化合物，药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N氧化物衍生物，受保护的衍生物，单独异构体或其异构体混合物；(b ) 0. 1%-约5%吐温80， 和(c ) 0. 1%-约10%羧甲基纤维素，并且稳定。在这些实施方式的某些示例中，均匀制剂的D50约为1，并且任选D90约为2。均匀制剂优选稳定至少约一个月。例如，一些实施方式中均匀制剂能稳定至少约一个月，至少约两个月，至少约三个月，至少约四个月，至少约五个月，至少约六个月，至少约七个月，至少约八个月，至少约九个月，至少约十个月，至少约十一个月，或至少约十二个月。苯并萘啶化合物适用于本发明的苯并萘啶化合物包括含有式(I)或式(II)化合物，药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂合物(如水合物)，N-氧化物衍生物，前药衍生物，受保护衍生物，个体异构体及其异构体混合物。在本文所提供免疫原性组合物的某些实施方式中，所述苯并萘啶化合物是结构式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐
(RB)o-3
I ,1RA) -3
R人 M
NH2式(I)其中R4 选自 H、卤素、-C(O) OR7、_C(0)R7、-C(O) N (R11R12)、-N (R11R12)、-N(R9)2' -NHN (R9)2、-SR7、-(CH2)nOR' -(CH2)nR' -LR8、-LR10, -OLR8, -OLR10, C1-C6 烷基、C1-C6 杂烷基、C1-C6 卤代烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基和C3-C8杂环烷基，其中R4的C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基和C3-C8杂环烷基各自任选由1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、-CN、-NO2, -R7、-OR8、-C(O)R8, -OC(O)R8、-C(O) OR8、-N(R9)2' -P(O) (OR8)2, -OP(O) (OR8)2, -P(O) (OR10)2, -OP(O) (OR10)2, -C(O)N (R9)2, -S (0) 2R8、-S (0) R8、-S (0) 2N (R9) 2 和-NR9S (0) 2R8 ；各L独立地选自键、-(0 (CH2) m) t_、C1-C6烷基、C2-C6亚烯基和C2-C6亚炔基，其中L的C1-C6烷基、C2-C6亚烯基和C2-C6亚炔基各自可选取代有1-4个取代基，所述取代基独立地选自卤素、-R8、-OR8、-N (R9)2' -P (0) (OR8)2, -OP (0) (OR8)2, -P (0) (OR10) 2 和-OP (0) (OR10) 2 ；R7选自H、C1-C6烷基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C3-C8杂环烷基，其中R7的C1-C6烷基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C3-C8杂环烷基各自可任选由1-3个R13基团取代；
各R8独立地选自H、-CH (Riq) 2、C1-C8烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6杂烷基、C3-C8环烷基、C2-C8杂环烷基、C1-C6羟基烷基和C1-C6卤代烷氧基，其中R8的C1-C8烷基、C2-C8烯烃、C2-C8炔烃、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C2-C8杂环烷基、C1-C6羟基烷基和C1-C6卤代烷氧基各自可任选由1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自-CN、R11、-0R11、-SR11、-C(O)R11' -OC(O) R11、-C(O)N(R9)2' -C(O)OR11' -NR9C(O)R11' -NR9R10, -NR11R12, -N(R9)2, -OR9、-OR1。、-C(0)NR11R12, -C(O)NRn0H、-S(O)2R'-S(O) Ri-S(O)2NRiiR1^-NR11S(O)2R'-P(O) (OR11)2 和-OP(O) (OR11)2 ；各R9 独立地选自 H、-C (0) R8、-C (0) OR8、-C (0) R10、-C (0) OR10、-S (0) 2R10、-C1-C6 烷基、C1-C6杂烷基和C3-C6环烷基，或各R9独立为与所连N —起形成C3-C8杂环烷基的C1-C6烷基，其中所述C3-C8杂环烷基环可任选含有选自N、0和S的额外杂原子，且其中R9的C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C3-C6环烷基或C3-C8杂环烷基可任选由1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自-CN、R11、-0R11、-SR11、-C (0) R11、-OC (0) R11、-C (0) OR11、_NRnR12、-C (0) NR1 1R12、-C (0)NRn0H、-S(O)2R'-S(O) Ri-S(O)2NRiiR1^-NR11S(O)2R'-P(O) (OR11)2 和-OP(O) (OR11)2 ；各Rltl独立地选自芳基、C3-C8环烷基、C3-C8杂环烷基和杂芳基，其中所述芳基、C3-C8环烷基、c3-c8杂环烷基和杂芳基可任选由1-3个取代基取代，所述取代基选自卤素、_R8、-OR8、-LR9、-LOR9、-N (R9)2' -NR9C (0) R8、-NR9CO2R8' -CO2R8、-C (0) R8 和-C (0) N (R9) 2 ；R11和R12独立地选自H、C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6卤代烷基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基和C3-C8杂环烷基，其中R11和R12的C1-C6烷基、C1-C6杂烷基、C1-C6齒代烷基、芳基、杂芳基、C3-C8环烷基和C3-C8杂环烷基各自可任选由1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、-CN、R8、-OR8、-C (0) R8、-OC (0) R8、-C (0) OR8、-N(R9)2, -NR8C (0) R8、-NR8C (0)OR8、-C(O)N(R9)2, C3-C8 杂环烷基、-S(O)2R8' -S(O)2N(R9)2' -NR9S(O)2R8' C「C6 卤代烷基和C1-C6卤代烷氧基；或者R11和R12各自独立为C1-C6烷基，并与所连接的N原子一起形成可任选取代的C3-C8杂环烷基环，该环可任选含有选自N、0和S的额外杂原子；各R13 独立地选自卤素、-CN、-LR9、-LOR9, -OLR9, -LR10, -LOR10, -OLR10, -LR8、-LOR8、-OLR8、-LSR8、-LSR10, _LC(0)R8、-OLC(O) R8、-LC(O) OR8、_LC(0)R10、-LOC(O) OR8、-LC(O)NR9R11、-LC (0) NR9R8、-LN (R9) 2、-LNR9R8、-LNR9R10、-LC (0) N (R9) 2、- LS (0) 2R8、-LS (0) R8、-LC (0)NR8OH, -LNR9C(O) R8、-LNR9C(O) OR8, -LS(O)2N(R9)2' -OLS(O) 2N (R9)2, -LNR9S(O)2R8, -LC(O)NR9LN (R9)2, -LP (0) (OR8)2, -LOP (0) (OR8)2, -LP (0) (OR10) 2 和-OLP (0) (OR10) 2 ；各Ra 独立地选自-R8、- R7、-0R7、-0R8、- R10、-OR10、-SR8、-NO2、-CN、-N(R9)2'-NR9C (0)R8、-NR9C (S) R8、-NR9C (O)N(R9)2, -NR9C(S)N(R9)2, -NR9CO2R8、-NR9NR9C (0) R8、-NR9NR9C (0)N(R9)2, -NR9NR9CO2R8, -C (O)C(O) R8, -C (0) CH2C (0) R8、-CO2R8, -(CH2)nCO2R8, -C (O)R8, -C(S)R8、-C (0) N (R9)2, -C ⑶ N (R9)2, -OC (0) N (R9)2, -OC (0) R8、-C (0) N (OR8) R8、-C (NOR8) R8、-S (0) 2R8、-S (0) 3R8、-SO2N (R9) 2、-S (0) R8、-NR9SO2N (R9) 2、-NR9SO2R8、-P (0) (OR8) 2、-OP (0) (OR8) 2、-P (0)(OR10)2, -OP (0) (OR10) 2、-N (OR8) R8、-CH=CHCO2R8、-C (=NH) -N (R9) 2 和-(CH2) nNHC (0) R8 ;或结合环上两个相邻Ra取代基形成含最多两个杂原子作为环成员的5-6元环；各n 独立地为 0、1、2、3、4、5、6、7 或 8 ；各m独立地选自1、2、3、4、5和6，以及t 为 1、2、3、4、5、6、7 或 8。
在其他实施方式中，所述苯并萘啶化合物是结构式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐
权利要求
1.一种均匀悬液，所述悬液包括(a)式I或式II的苯并萘啶化合物，其药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N氧化物衍生物，受保护的衍生物，单独异构体或异构体混合物；(b)表面活性剂，和(c)悬浮剂，其中悬液在4° C至少稳定约四周。
2.如权利要求I所述的均勻悬液，其特征在于，所述均勻悬液包括约0.1%-约10%表面活性剂。
3.如权利要求I或2所述的均匀悬液，其特征在于，所述均匀悬液包括约0.1%-约10%悬浮剂。
4.如前述权利要求中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述均匀悬液包括约0. 5mg/mL-约50mg/mL苯并萘唳化合物。
5.如前述权利要求中任一项所述的均匀悬浮物，其特征在于，所述表面活性剂是吐温80 (聚山梨酯80)。
6.如前述权利要求中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述悬浮剂是黏性增强悬浮剂。
7.如权利要求6所述的均匀悬液，其特征在于，所述黏性增强剂是羧甲基纤维素钠。
8.如前述权利要求中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述至少约50%的悬浮颗粒的直径是约10 ii m或更小。
9.如前述权利要求中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述至少约50%的悬浮颗粒的直径是约2 ii m或更小。
10.如前述权利要求中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述苯并萘啶化合物是2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][l，7]萘啶-2-基)乙基)_3_甲基苯基)丙-2-醇；2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][l，7]萘啶-5-胺；4-(2-(5_氨基-8-甲基苯并[f][l，7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸乙酯；2-(4-( 二甲基氨基)苯乙基)-8-甲基苯并[f] [1,7]萘啶-5-胺;2-(4-甲氧基苯乙基)-8-甲基苯并[f] [1,7]萘啶-5-胺；或2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f] [1，7]萘啶_2_基)乙基)_3_甲基苯氧基)乙氧基)乙醇。
11.一种免疫原性组合物,所述组合物包括抗原和权利要求1-10中任一项所述的均匀悬液。
12.如权利要求11所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述组合物还包含佐剂。
13.如权利要求12所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是含铝佐剂。
14.如权利要求13所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述含铝佐剂是氢氧化铝，羟基氧化铝或羟基磷酸铝。
15.如权利要求12所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是水包油乳液。
16.如权利要求12所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是MF59。
17.如权利要求12所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是脂质体。
18.如权利要求17所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述脂质体是外膜囊泡。
19.如权利要求12所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是寡核苷酸。
20.如权利要求19所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述寡核苷酸包括未甲基化的CpG基序。
21.如权利要求11-21中任一项所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述抗原是细菌抗原。
22.如权利要求21所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述细菌抗原是来自脑膜炎奈瑟球菌的抗原。
23.如权利要求11-21中任一项所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述抗原是病毒抗原。
24.如权利要求23所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述病毒抗原是来自呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原。
25.如权利要求23所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述病毒抗原是来自埃博拉病毒的抗原。
26.—种在对象中引起免疫应答的方法，所述方法包括将权利要求11-25中任一项所述的免疫原性组合物给予所述对象。
27.—种产生权利要求I所述均勻悬液的方法，所述方法包括 (a)将式(I)或式(II)的苯并萘啶化合物、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂合物、N氧化物衍生物、受保护衍生物、个体异构体或其异构体混合物，与表面活性剂和悬浮剂混合。
(b)在压力下匀质化步骤(a)的混合物，其中，压力为约15，OOOpsi-约20，OOOpsi。
28.—种均匀悬液，所述均匀悬液包含 (a)2-(2，4-二甲基苯乙基)苯并[f][l，7]萘啶-5-胺，其药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N氧化物衍生物，受保护衍生物，单独异构体或其异构体混合物，(b)表面活性剂，和(c )悬浮剂，其中悬液在4 ° C稳定至少约四周。
29.如权利要求28所述的均匀悬液，其特征在于，所述均匀悬液包括约0.1%-约10%表面活性剂。
30.如权利要求28或29所述的均匀悬液，其特征在于，所述均匀悬液包括约0.1%-约10%悬浮剂。
31.如权利要求28-30中任一项所述的均勻悬液,其特征在于,所述均勻悬液包括约0. 5mg/mL-约 10mg/mL 2-(2, 4- 二甲基苯乙基)苯并[f] [I, 7]萘啶-5-胺。
32.如权利要求28-31中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述表面活性剂是吐温80。
33.如前述权利要求28-32中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述悬浮剂是黏性增强悬浮剂。
34.如权利要求33所述的均匀悬浮物，其特征在于，所述黏性增强试剂是羧甲基纤维素钠。
35.如权利要求28-34中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述至少约50%悬浮颗粒的直径是约10 ii m或更小。
36.如权利要求28-35中任一项所述的均匀悬液，其特征在于，所述至少约50%悬浮颗粒的直径是约2 ii m或更小。
37.一种免疫原性组合物，所述组合物包括抗原和权利要求28-36中任一项所述的均勻悬液。
38.如权利要求37所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述组合物还包含佐剂。
39.如权利要求38所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是含铝佐剂。
40.如权利要求39所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述含铝佐剂是氢氧化铝，羟基氧化铝或羟基磷酸铝。
41.如权利要求38所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是水包油乳液。
42.如权利要求41所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是MF59。
43.如权利要求38所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是脂质体。
44.如权利要求43所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述脂质体是外膜囊泡。
45.如权利要求38所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述佐剂是寡核苷酸。
46.如权利要求45所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述寡核苷酸包括未甲基化的CpG基序。
47.如权利要求37-46中任一项所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述抗原是细菌抗原。
48.如权利要求47所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述细菌抗原是来自脑膜炎奈瑟球菌的抗原。
49.如权利要求37-46中任一项所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述抗原是病毒抗原。
50.如权利要求49所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述病毒抗原是来自呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原。
51.如权利要求49所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述病毒抗原是来自埃博拉病毒的抗原。
52.—种在对象中产生免疫应答的方法，所述方法包括将权利要求37-51中任一项所述的免疫原性组合物给予所述对象。
53.—种产生权利要求28所述均勻悬液的方法,所述方法包括 Ca)混合2-(2，4- 二甲基苯乙基)苯并[f] [I, 7]萘啶-5-胺与表面活性剂和悬浮剂。
(b)在约15，OOOpsi-约20，OOOpsi的高压下勻质化步骤(a)的混合物。
54.—种均匀悬液,所述均匀悬液包含 (a)2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][l，7]萘啶_5_胺，其药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N氧化物衍生物，受保护衍生物，单独异构体或异构体混合物，(b)表面活性剂，和(c)悬浮剂，其中悬液在4° C稳定至少约四周。
55.一种均匀悬液，所述均匀悬液包含 (a)2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f] [1，7]萘啶_2_基)乙基)_3_甲基苯氧基)乙氧基)乙醇，其药学上可接受盐，药学上可接受溶剂合物，N氧化物衍生物，受保护衍生物，单独异构体或异构体混合物，(b)表面活性剂，和(c)悬浮剂，其中悬液在4° C稳定至少约四周。
全文摘要
本发明一般涉及能刺激或调节需要对象中免疫反应的小分子免疫增强剂(SMIP)的均匀悬液。所述均匀悬液可以与多种抗原或佐剂联用于疫苗治疗。
文档编号A61K31/4745GK102762206SQ201080063748
公开日2012年10月31日 申请日期2010年12月15日 优先权日2009年12月15日
发明者D·斯基宾斯基, D·欧哈根, M·辛格, S·简恩 申请人:诺华有限公司