专利名称：脂肪累积抑制剂的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及其特征在于苦味减少以及稳定性和安全性优异的包括乳清蛋白水解物作为活性成分的脂肪累积抑制剂(用于抑制脂肪累积的试剂)。本发明还涉及其特征在于苦味减少以及稳定性和安全性优异的包括乳清蛋白水解物作为活性成分的用于抑制脂肪累积的食品和饮品、用于抑制脂肪累积的营养组合物或用于抑制脂肪累积的动物饲料。本发明的脂肪累积抑制剂对于预防由老化或衰老相关的代谢减缓所引起的体脂肪累积是有效的，此外，其特征在于苦味减少以及稳定性和安全性优异。
背景技术：
已知在生物体内老化和衰老引起各种生理变化(如由于降低的基础代谢率、骨骼肌的萎縮以及骨的脱钙作用所引起的脂肪累积)。特別地，由脂肪累积引起的肥胖症是有问题的，因为其可导致心肌梗塞和死亡的可能性增加以及降低的生活质量OiOL)(非专利文献1和2)。因此，已积极地进行了针对改善肥胖症的方法的研究，以便降低心肌梗塞和死亡率(非专利文献3和4)。改善饮食以及规律和适度的运动为ー些改善肥胖症的方法，但它们通常需要特定的耐心和疼痛水平。已经研究了某些食品组分可能改善肥胖症的效果。例如，已报道大豆肽的摄取具有减脂的效果(专利文献1)。牛乳和乳制品通常被认为是食物过敏的原因。特別地，未在人类母乳中发现的乳清蛋白为疑似过敏原。因此，例如专利文献2中所公开的那样，已知通过用酶水解乳清蛋白来降低过敏原潜能的方法。特別地，已显示根据专利文献2的方法所生产的乳清蛋白水解物的抗原性为 β -乳球蛋白的抗原性的1/10，000以下以及乳清蛋白的抗原性的1/10，000以下，所述抗原性根据抑制ELI SA方法測定。当ロ服摄取时，所述乳清蛋白水解物还显示出具有強化肌肉的效果，因此由于其为特征在于低抗原性和功能性的材料而引起注意。现有技术文献专利文献专利文献1 JP 2002-20312Α专利文献2 :W0 2008/111562Α非专利文献1 :0besity in Old Age, I. Μ. Chapman, Obesity and Metabolism, Front.Horm. Res. Basel, Karger, 2008, Vol. 36, pp 97—106与巨^"不[|文2 :0besity as an independent risk factor for cardiovascular disease, Circulation 1983, Vol.67, pp 968—977非专利文献 3 :Primary prevention of cardiovascular disease, Acta MedCroatica 2009, Vol. 63,pp 71-74与巨^"禾[|又献4 :Prevention of excess gain, Int. J. Obes. (Lond) 2009，in press.非专利文献 5 !Proceedings of the Japanese Society of Pediatric Allergy and Clinical Immunology,1,36(1987)
发明内容
发明要解决的问题通过摄取大豆肽抑制肥胖症的已知方法确实显示出效果，但问题在干，大豆肽具有特征性的苦味，此外，当它们分散于水中时引起浑浊，这限制了它们在食品、饮品或其他产品，特別是在需要透明性的产品中的应用。另ー方面，通过牛乳的乳清蛋白的水解所获得的乳清蛋白水解物，具有低抗原性、 具有较少苦味，且不沉淀，因而适用于食品和饮品，尽管没有其是否具有任何抑制脂肪累积的效果的报道。因此，考虑到上述问题，本发明的目的为提供脂肪累积抑制剂，所述脂肪累积抑制剂提供了抑制脂肪累积的效果并且不承受味苦、引起浑浊或形成沉淀的缺点。用于解决问题的方案本发明人已进行了广泛研究，并发现通过牛乳的乳清蛋白的水解所获得的乳清蛋白水解物具有抑制脂肪累积的潜在效果。该发现导致完成了本发明。因此，本发明提供脂肪累积抑制剂、以及包括所述脂肪累积抑制剂的用于抑制脂肪累积的食品和饮品、用于抑制脂肪累积的营养组合物和用于抑制脂肪累积的动物饲料。本发明包括以下。(1) ー种脂肪累积抑制剂，其包括作为活性成分的具有以下特征的乳清蛋白水解物1.不高于IOkDa的分子量范围，在200Da至3kDa具有分子量主峰；2. 2至8的APL (平均肽链长度)；3. 20%以下的游离氨基酸含量；4. 20%以上的支链氨基酸含量；和5.抗原性为β -乳球蛋白抗原性的1/100，000以下。(2)根据(1)所述的脂肪累积抑制剂，其中所述乳清蛋白水解物可通过包括以下步骤的方法获得在50至70°C的温度和pH 6至10下热变性乳清蛋白的同吋，使用耐热性蛋白酶水解乳清蛋白的步骤；和通过加热使所述酶失活的步骤。(3)根据(1)所述的脂肪累积抑制剂，其中所述乳清蛋白水解物可通过包括以下步骤的方法获得在20至55°C的温度和pH 6至10下使用蛋白酶初步水解乳清蛋白的步骤；升高温度至50至70°C，并且在50至70°C的温度和pH 6至10下热变性未水解的乳清蛋白的同吋，用耐热性蛋白酶水解在所述初步水解步骤中保持未水解的乳清蛋白的步骤；和
通过加热使所述酶失活的步骤。(4)根据(1)所述的脂肪累积抑制剂，其中所述乳清蛋白水解物可通过包括以下步骤的方法获得在20至55°C的温度和pH 6至10下使用蛋白酶初步水解乳清蛋白的步骤；升高温度至50至70°C，并且在50至70°C的温度和pH 6至10下热变性未水解的乳清蛋白的同吋，用耐热性蛋白酶水解在所述初步水解步骤中保持未水解的乳清蛋白的步骤；通过加热使所述酶失活的步骤；用具有截留分子量1至20kDa的超滤膜使失活的反应混合物进行超滤处理的步骤；和用具有截留分子量100至500Da的微滤膜使来自所述超滤处理的透过液进行微滤处理，并收集来自所述微滤处理的未透过物的步骤。(5) 一种用于抑制脂肪累积的食品或饮品、用于抑制脂肪累积的营养组合物或用于抑制脂肪累积的动物饲料，其包括根据(1)至(4)任一项所述的脂肪累积抑制剂。(6) 一种生产脂肪累积抑制剂的方法，其包括在50至70°C的温度和pH 6至10下热变性所述乳清蛋白的同吋，使用耐热性蛋白酶水解所述乳清蛋白的步骤；和通过加热使所述酶失活的步骤。(7)根据(6)所述的方法，其进ー步包括，在所述两个步骤之前，在20至55°C的温度和pH 6至10下使用蛋白酶初步水解乳清蛋白的步骤。(8)根据(6)或(7)所述的方法，其进ー步包括，继所述使酶失活的步骤之后，用具有截留分子量1至20kDa的超滤膜使失活的反应混合物进行超滤处理的步骤；和用具有截留分子量100至500Da的微滤膜使来自所述超滤处理的透过液进行微滤处理，并收集来自所述微滤处理的未透过物的步骤。(9) ー种抑制受试者的脂肪累积的方法，其包括将具有以下特征的乳清蛋白水解物以IOg/天以上向受试者给药1.不高于IOkDa的分子量范围，在200Da至3kDa具有分子量主峰；2. 2至8的APL (平均肽链长度)；3. 20%以下的游离氨基酸含量；4. 20%以上的支链氨基酸含量；和5.抗原性为β -乳球蛋白抗原性的1/100，000以下。本发明还包括以下(A) ー种抑制受试者的脂肪累积的方法，其包括将具有以下特征的乳清蛋白水解物向受试者给药1.不高于IOkDa的分子量范围，在200Da至3kDa具有分子量主峰；2. 2至8的APL (平均肽链长度)；3. 20%以下的游离氨基酸含量；4. 20%以上的支链氨基酸含量；和
5.抗原性为β -乳球蛋白抗原性的1/100，000以下。(B)根据(A)所述的方法，其中所述乳清蛋白水解物可通过包括以下步骤的方法
获得在50至70°C的温度和pH 6至10下热变性乳清蛋白的同吋，使用耐热性蛋白酶水解乳清蛋白的步骤；和通过加热使所述酶失活的步骤。(C)根据(A)所述的方法，其中所述乳清蛋白水解物可通过包括以下步骤的方法
获得在20至55°C的温度和pH 6至10下使用蛋白酶初步水解乳清蛋白的步骤；升高温度至50至70°C，并且在50至70°C的温度和pH 6至10下热变性未水解的乳清蛋白的同吋，用耐热性蛋白酶水解在所述初步水解步骤中保持未水解的乳清蛋白的步骤；和通过加热使所述酶失活的步骤。(D)根据(A)所述的方法，其中所述乳清蛋白水解物可通过包括以下步骤的方法
获得在20至55°C的温度和pH 6至10下使用蛋白酶初步水解乳清蛋白的步骤；升高温度至50至70°C，并且在50至70°C的温度和pH 6至10下热变性未水解的乳清蛋白的同吋，用耐热性蛋白酶水解在所述初步水解步骤中保持未水解的乳清蛋白的步骤；通过加热使所述酶失活的步骤；用具有截留分子量1至20kDa的超滤膜使失活的反应混合物进行超滤处理的步骤；和用具有截留分子量100至500Da的微滤膜使来自所述超滤处理的透过液进行微滤处理，并收集来自所述微滤处理的未透过物的步骤。本发明还包括以下(E) ー种改善受试者的由体脂肪累积引起的肥胖症的方法，其包括向受试者给药具有以下特征的乳清蛋白水解物1.不高于IOkDa的分子量范围，在200Da至3kDa具有分子量主峰；2. 2至8的APL (平均肽链长度)；3. 20%以下的游离氨基酸含量；4. 20%以上的支链氨基酸含量；和5.抗原性为β -乳球蛋白抗原性的1/100，000以下。(F)根据￠)所述的方法，其中所述乳清蛋白水解物可通过包括以下步骤的方法
获得在50至70°C的温度和pH 6至10下热变性乳清蛋白的同吋，使用耐热性蛋白酶水解乳清蛋白的步骤；和通过加热使所述酶失活的步骤。(G)根据￠)所述的方法，其中所述乳清蛋白水解物可通过包括以下步骤的方法
获得
在20至55°C的温度和pH 6至10下使用蛋白酶初步水解乳清蛋白的步骤；升高温度至50至70°C，并且在50至70°C的温度和pH 6至10下热变性未水解的乳清蛋白的同吋，用耐热性蛋白酶水解在所述初步水解步骤中保持未水解的乳清蛋白的步骤；和通过加热使所述酶失活的步骤。(H)根据Φ)所述的方法，其中所述乳清蛋白水解物可通过包括以下步骤的方法
获得在20至55°C的温度和pH 6至10下使用蛋白酶初步水解乳清蛋白的步骤；升高温度至50至70°C，并且在50至70°C的温度和pH 6至10下热变性未水解的乳清蛋白的同吋，用耐热性蛋白酶水解在所述初步水解步骤中保持未水解的乳清蛋白的步骤；通过加热使所述酶失活的步骤；用具有截留分子量1至20kDa的超滤膜使失活的反应混合物进行超滤处理的步骤；和用具有截留分子量100至500Da的微滤膜使来自所述超滤处理的透过液进行微滤处理，并收集来自所述微滤处理的未透过物的步骤。发明的效果本发明的脂肪累积抑制剂提供显著的抑制脂肪累积的效果。
具体实施例方式以下，将详细解释本发明。[活性成分]本发明的脂肪累积抑制剂中用作活性成分的乳清蛋白水解物具有以下性质1.不高于IOkDa的分子量范围，在200Da至3kDa具有分子量主峰；2. 2至8的APL (平均肽链长度)；3. 20%以下的游离氨基酸含量；4. 20%以上的支链氨基酸含量；和5.抗原性为β -乳球蛋白抗原性的1/100，000以下。因此，作为本发明的活性成分的乳清蛋白水解物的抗原性与乳球蛋白相比为 1/100,000以下，与乳清蛋白相比为1/100,000以下，因此该水解物在抑制食物过敏方面极
其安全。此外，乳清蛋白水解物使溶液透明，并且其苦味评分仅为约2。因此，当乳清蛋白水解物用作脂肪累积抑制剂时，其不受与味道或外观有关的限制。特別地，可在需要透明外观的脂肪累积抑制剂中以高浓度添加乳清蛋白水解物。还可通过使乳清蛋白水解物进行超滤 (UF)和/或微滤(MF)处理来改善乳清蛋白水解物的水可溶性。还可提供用于抑制脂肪累积的食品或饮品、用于抑制脂肪累积的营养组合物或用于抑制脂肪累积的动物饲料，上述食品或饮品、营养组合物或动物饲料包括所述脂肪累积抑制剂作为活性成分，提供抑制脂肪累积的效果，且其特征在于优异的安全性。由于本发明的脂肪累积抑制剂由乳清蛋白制成，其生产容易、简单且经济。
[生产方法]待包含于本发明的脂肪累积抑制剂的乳清蛋白水解物可通过以下获得向在50 至70°C的温度和pH 6至10下的乳清蛋白添加耐热性蛋白酶以在热变性乳清蛋白的同时水解乳清蛋白，然后通过加热使酶失活。水解总效率可通过以下来进ー步改进首先在20至 55°C的温度和pH 6至10下使用蛋白酶水解乳清蛋白，然后，在不降低温度下，在前面句子中描述的条件下迅速进行水解。如果通过具有截留分子量IkDa至20kDa、更优选2kDa至IOkDa的超滤(UF)膜，和 /或具有截留分子量IOODa至500Da、更优选150Da至300Da的微滤(MF)膜浓缩如上制备的乳清蛋白水解物，则抑制脂肪累积的效果可进ー步增强。这些过滤处理还可有助于降低苦味和増加溶液的透明性。本发明的乳清可指哺乳动物如牛、水牛、山羊和人的乳清，或从所述乳清获得的浓縮物、粉或纯化的蛋白质。使乳清以水溶液的形式进行酶处理。将所述溶液调整为pH 6至10。通常，乳清溶液的pH自发在该pH范围内，并无需 PH的额外调整。然而，如果需要，可通过酸性溶液如盐酸溶液、柠檬酸溶液和乳酸溶液，或通过碱性溶液如氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液和磷酸钠溶液来进行将溶液向PH 6至10的调整。当通过加热使溶液温度升高到50至70°C吋，更优选在加热前而不是加热后添加耐热性蛋白酶，以便即使在升温期间也发生酶水解，这将增加水解的总效率。通常的蛋白水解酶(蛋白酶)具有40°C以下的最佳反应温度，但耐热性蛋白酶具有45°C以上的最佳反应温度。任何具有此最佳反应温度的耐热性蛋白酶可用于本发明。 此耐热性蛋白酶的实例包括木瓜蛋白酶、蛋白酶S(商标名称)、Proleather (商标名称)、 Thermoase (商标名称)、Alcalase (商标名称)和ftx)tin-A(商标名称)。优选的耐热性蛋白酶在80°C下加热30分钟后仍会保留10%以上的活性。如果组合使用两种或更多种的酶，水解可更有效地进行。水解反应优选进行30分钟至10小吋。通过加热反应溶液使酶最终失活。可通过在100°C以上加热反应溶液10秒以上来进行酶的失活。酶失活后，离心反应溶液，收集上清液并干燥成粉末形式。优选除去离心期间所形成的沉淀，因为其过敏潜カ已降低至比上清液更小的程度。然而，如果沉淀的抗原性不成问题，则可直接干燥并使用整个反应溶液。根据抑制ELI SA法測定，已证实通过所述方法获得的乳清蛋白水解物的抗原性为 β-乳球蛋白的抗原性的1/100,000以下，并为乳清蛋白的抗原性的1/100,000以下。因此，乳清蛋白水解物极其安全。此外，乳清蛋白水解物使溶液透明，其苦味评分仅为约2，当将其用于产品中时避免了颜色和ロ感相关的问题。透明性和苦味评价如下。透明性的评价方法制备乳清蛋白水解物溶液并测量650nm下的吸光度。苦味的评价方法制备10%乳清蛋白水解溶液，并与苦味物盐酸奎宁相比评价苦味。如表1所示，2以下的苦味评分在食品和饮品使用中是可接受的。所获得的乳清蛋白样品的APL可通过HPLC或其他适合的方法測量。[表1]
权利要求
1.ー种脂肪累积抑制剂，其包括作为活性成分的乳清蛋白水解物，其中所述水解物具有(1)不高于IOkDa的分子量范围，以及在200Da至3kDa的分子量主峰； 0)2至8的APL (平均肽链长度)；(3)20%以下的游离氨基酸含量；(4)20%以上的支链氨基酸含量；和(5)抗原性为β-乳球蛋白抗原性的1/100,000以下。
2.根据权利要求1所述的脂肪累积抑制剂，其中所述水解物可通过包括以下步骤的方法获得在50至70°C的温度和pH 6至10下热变性乳清蛋白的同吋，使用耐热性蛋白酶水解所述乳清蛋白的步骤；和通过加热使所述酶失活的步骤。
3.根据权利要求1所述的脂肪累积抑制剂，其中所述水解物可通过包括以下步骤的方法获得在20至55°C的温度和pH 6至10下使用蛋白酶初步水解乳清蛋白的步骤； 升高温度至50至70°C，并且在50至70°C的温度和pH 6至10下热变性所述乳清蛋白的同吋，使用耐热性蛋白酶水解所述乳清蛋白的步骤；和通过加热使所述酶失活的步骤。
4.根据权利要求1所述的脂肪累积抑制剂，其中所述水解物可通过包括以下步骤的方法获得在20至55°C的温度和pH 6至10下使用蛋白酶初步水解乳清蛋白的步骤； 升高温度至50至70°C，并且在50至70°C的温度和pH 6至10下热变性所述乳清蛋白的同吋，使用耐热性蛋白酶水解所述乳清蛋白的步骤； 通过加热使所述酶失活的步骤；用具有截留分子量1至20kDa的超滤膜使失活的反应混合物进行超滤处理的步骤；和用具有截留分子量100至500Da的微滤膜使来自所述超滤处理的透过液进行微滤处理，并收集来自所述微滤处理的未透过物的步骤。
5.一种用于抑制脂肪累积的食品和饮品、营养组合物和动物饲料，其包括根据权利要求l·至4任一项所述的脂肪累积抑制剂。
6.一种生产脂肪累积抑制剂的方法，其包括在50至70°C的温度和pH 6至10下热变性乳清蛋白的同吋，使用耐热性蛋白酶水解所述乳清蛋白的步骤；和通过加热使所述酶失活的步骤。
7.根据权利要求6所述的方法，其进ー步包括，在所述水解步骤之前，在20至55°C的温度和pH 6至10下使用蛋白酶初步水解乳清蛋白的步骤。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其进ー步包括，继所述热失活步骤之后，用具有截留分子量1至20kDa的超滤膜使失活的反应混合物进行超滤处理的步骤；和用具有截留分子量100至500Da的微滤膜使来自所述超滤处理的透过液进行微滤处理，并收集来自所述微滤处理的未透过物的步骤。
9. ー种抑制受试者的脂肪累积的方法，其包括将乳清蛋白水解物以IOg/天以上向受试者给药，其中所述水解物具有(1)不高于IOkDa的分子量范围，以及在200Da至3kDa的分子量主峰； O) 2至8的APL (平均肽链长度)；(3)20%以下的游离氨基酸含量；(4)20%以上的支链氨基酸含量；和(5)抗原性为β-乳球蛋白抗原性的1/100,000以下。
全文摘要
公开了一种脂肪累积抑制剂，其包括具有优异的脂肪累积抑制效果的乳清蛋白水解物作为活性成分。具体公开了一种包括乳清蛋白水解物的脂肪累积抑制剂，所述乳清蛋白水解物具有10kDa以下的分子量分布，其中主峰出现在200至3kDa的范围内，还具有2至8的APL(平均肽链长度)，均相对于全部组分总量的20％以下的游离氨基酸含量和20％以上的支链氨基酸含量，以及抗原性为β-乳球蛋白抗原性的1/100,000以下。
文档编号A61P3/06GK102573880SQ20108004626
公开日2012年7月11日 申请日期2010年10月12日 优先权日2009年10月13日
发明者三浦晋, 内藤久士 申请人:雪印惠乳业株式会社