干扰素α载体前药的利记博彩app

专利名称：干扰素α载体前药的利记博彩app
干扰素Ct载体前药本发明涉及包含干扰素α的水溶性聚合载体连接的前药的药物组合物，以及它们用于治疗、控制、延缓或预防可受益于干扰素α治疗的病症的用途，所述病症诸如丙型肝炎。干扰素于50多年前的1957年由Isaacs和Lindenmarm首次描述，他们发现当将热失活的流感病毒接种于鸡胚细胞时，释放出一种因子，诱导对同种或异种病毒感染的抵抗力。科学界对这一干扰因子保持怀疑，因为不能成功的纯化和分离它。直到1980年克隆干扰素分子成为可能，干扰素的多效特性才完全得到承认。现在认为干扰素是免疫反应的中心介质，并且其对三种主要生物活性作出贡献 抗病毒活性、抗增殖活性和免疫调节活性。干扰素的分类基于序列、染色体定位和受体特异性。干扰素α和干扰素β是最主要的I型干扰素，并且通过由两个亚单位IFNAR-I和IFNAR-2构成的受体复合物传导信号。I型干扰素组还包括复合干扰素、复合α干扰素(interferon alfacon-1) 020世纪80年代初期，利用放射性标记的干扰素的实验导致了这样的结论，即存在特异性的高亲和细胞表面受体，对于I型和II型干扰素而言其是不同的。干扰素α与前述二聚体受体结合。干扰素α的产生受到暴露于来自病毒的双链 RNA(dsRNA)的诱导。在它们复制的一些点，大多数病毒产生dsRNA，其是干扰素α的有效诱导剂，所述的干扰素α又介导免疫反应。免疫反应的性质尚未完全理解，但已知干扰素 α在细胞水平诱导抗病毒状态，由此通过诱导许多抗病毒蛋白而损坏病毒复制。可通过施用干扰素α给志愿者再现与病毒感染相关的症状。因此，认为与干扰素 α治疗相关的流感状副作用和病毒感染相关的流感样症状性质类似，因为后者也是由内源干扰素α的产生所引起的。干扰素α广泛地用于治疗丙型肝炎。一个主要目标是减少与慢性丙型肝炎感染相关的并发症。这主要通过消灭病毒而实现。因此，丙型肝炎RNA测试的结果可测量治疗反应。目标是实现持续的病毒响应(SVR)，其定义为在治疗结束后6个月的血清中检测不到丙型肝炎RNA。目前干扰素α单一疗法仍然是治疗慢性丙型肝炎的唯一选择。在丙型肝炎治疗中使用三种干扰素α化合物，即干扰素-α加、干扰素-c^b以及作为hfergen 商购的重组非天然存在的I型干扰素，其由166个氨基酸序列组成、与干扰素-α 2b具有88 %的同源性。当作为单一疗法使用时，干扰素α在50-60%的患者中最初降低丙型肝炎RNA水平，但是仅在10-20%的患者中实现持续的病毒响应。其余的患者复发并再次发展活动性丙型肝炎的症状。由于这一低水平的治疗成功率，将干扰素α治疗与利巴韦林联合。利巴韦林是核苷类似物样化合物，其展示出针对大量病毒的抗病毒活性。观察到的与干扰素α的协同作用未被清楚地理解，但是多个临床试验已显示干扰素α和利巴韦林联合治疗与干扰素α单一疗法相比较具有优越性。干扰素α在患者中被快速清除，这降低了其抗病毒效力。数种机制参与干扰素α的清除，包括通过蛋白水解的降解、肾清除和受体介导的清除。由于这一原因，需要频繁地施用干扰素α至患者，以便于实现持续的抗病毒响应。未缀合的干扰素α每周施用三次， 其仍然不能确保治疗期间的完全干扰素覆盖。恒定的抗病毒压力对于阻止复制和抗性变种的出现是重要的。此外，短的血浆半衰期导致大的峰谷比，这转化为增加的副作用，诸如通常与干扰素α治疗相关的流感样症状在高血浆浓度时突出。为开发施加恒定抗病毒压力的更有效的干扰素α疗法，已经开发了干扰素α的 PEG化版本，并批准用于丙型肝炎治疗，即Pegasys (派罗欣)和PEGIntron (佩乐能)。聚乙二醇(PEG)部分与干扰素α蛋白的永久缀合显著地升高了血浆半衰期，使得可以每周施用一次。干扰素α的PEG化通过降低肾小球滤过、蛋白水解和受体介导的清除而增加血浆半衰期。此外，聚乙二醇化还可减少由大的峰谷比变化引起的副作用(P. Caliceti,Digestive and Liver Disease 36Suppl. 3(2004), S334-S339) 这一聚乙二醇化技术的主要缺点是降低了 PEG缀合蛋白质的生物活性。在干扰素-α加与支链的40kDa PEG缀合的情况下，仅保持了未缀合蛋白质的7 %的生物活性。这需要施用更高剂量的PEG-干扰素-C^a缀合物(P. Bailon et al.，Bioconjugate Chem. 2001，12，195-202)。此外，大的PEG分子的连接使得缀合物首先受到血容量的限制， 并且因此阻止缀合物渗透过所有的靶组织，导致分布容积降低。因此，血浆之外的病毒储库没有被靶向，其似乎在丙型肝炎感染的持续和再活化中起着作用。已知丙型肝炎感染不同的肝外部位，诸如周围血单核细胞(PBMC)、肾细胞、甲状腺细胞以及胃细胞，并且证据提示这些可能代表病毒的复制隔室。因此，在这些肝外病毒库中达到治疗相关浓度对于预防病毒复发和肝细胞的再感染可能是重要的。当前，永久PEG化干扰素α缀合物的低分布容积强烈地表明这些化合物没有到达这些隔室，这极可能导致用这些化合物治疗后观察到的相对高的病毒复发率。已尝试了不同的方法来解决这些问题。市售Peg-干扰素之一的PEGIntron比 Pegasys具有更大的分布容积，这部分地是由于更小的PEG部分(12kDa对40kDa)以及 HIS34处的部分聚乙二醇化，其在体内是不稳定的并且释放游离的干扰素-a 2b。PEGIntron 的分布容积比未缀合的干扰素-α沘小约30%。(P. Caliceti，Digestive and Liver Disease 36 Suppl. 3 (2004), S334-S339)。来自 IDEAL 临床实验的最初结果表明，PEGhtron 与Pegasys相比的更大的分布容积确实转化为更低的复发率(公司网站http //www. schering-plough. com)。PE GIntron 的约40-58小时的半衰期显著地比Pegasys (半衰期160小时)更短，导致大的峰谷比以及当每周施用一次时的次优的抗病毒压力。将例如PEG分子的聚合载体加至干扰素引入了注射位点反应的问题。在施用标准剂量的聚乙二醇化干扰素α和利巴韦林后，对于Pegasys，高达58%的患者经历了注射位点反应。对于 PEGhtron，发生率为 36% (Russo 和 Fried，Gastroenterology 2003 ；124 1711-1719)。当施用未缀合的干扰素- a 2b时，仅有5 %的丙型肝炎患者经历了注射位点反应(Intron A处方信息)。基于此，似乎注射位点反应的发生率受到聚乙二醇化干扰素 α的残余活性和停留时间两者的影响。未缀合的干扰素α具有完全的干扰素活性，但易于从皮下组织吸收，因此极少发生组织反应。对于聚乙二醇化的干扰素α，Pegasys具有比PEGhtron更低的活性(未缀合干扰素α活性的7%对37% )，然而Pegasys的吸收显著更慢。Pegasys和PEGhtron的吸收半衰期分别是50小时和4. 6小时(Foster，Aliment Pharmacol Ther 2004 ;20 :825-830)，导致了更高的对干扰素α活性的组织暴露，因此导致更高的注射部位反应风险。作为载体连接的前药施用干扰素α可降低注射部位反应的发生率。如上所述， 聚乙二醇化显著地降低了干扰素的活性。此外，干扰素缀合物的活性还受到PEG分子连接位点的控制。如 Foser 等，(Foser 等人· Protein Expression and Purification 30(2003)78-87)所述，在干扰素- α加的9个不同赖氨酸处的聚乙二醇化产生了 9种具有不同活性的位置异构体。分离的所述异构体是在Lys (31)、Lys (134)、Lys (70)、Lys (83)、 Lys (121) ,Lys (131) ,Lys (49) ,Lys (112)和 Lys (164)处被聚乙二醇化的。没有在 Lys (23)、 Lys (133)以及N端PEG观察到聚乙二醇化，可能是因为在这些位置处的立体位阻。与永久PEG化相关的一些问题可通过将PEG分子或另一聚合载体经由暂时连接体 (linker)与蛋白质药物连接产生载体连接的前药来解决。通过这一可逆方法，完全活性的游离药物可从前药释放至血液循环中。用于此类可逆方法的载体连接的前药和暂时连接体系统在WO-A 2004/089280, WO-A 2005/099768 或 US-B 6504005 (也参见 H. Tsubery 等人，J. Biol. Chem. 2004，279 (37)， 38118-38124)中进行一般性描述。一般地，载体连接的前药需要存在连接药物和载体的可裂解官能团。包含药物供给的氨基基团的官能团诸如脂族酰胺或氨基甲酸酯键通常对水解非常稳定，并且酰胺键的裂解速率对于前药系统的治疗应用而言将是太慢的。如果将此类稳定的连接用于载体连接的前药当中，则在治疗有价值的时间范围内在无生物转化的情况下官能团的裂解是不可能的。在这些情况下，连接体可能具有被相应的内源酶识别为底物的结构部分。在这种情况下，功能键的裂解涉及包含该酶的复合物。此类生物转化依赖的载体连接的前药的实例应用肽连接体，其被内源性蛋白酶识别并且酶解。酶的水平在个体间可能显著不同，这导致通过酶裂解引起的前药活化的生物学差异。酶的水平还可能取决于施用部位而不同。例如已知在皮下注射的情况中，身体的某些区域产生比其它区域更可预料的治疗作用。这种高水平的患者间差异性是不希望的。另外， 对于这种酶依赖的载体连接的前药，难以建立体内-体外药物动力学性质的对应关系。在缺乏可靠的体内-体外对应关系时，优化释放曲线变成一项麻烦的工作。为了避免患者间和注射部位的差异性，需要应用这样的载体连接的前药，其在治疗有价值的时间范围内表现出裂解动力学而无需额外的酶帮助裂解。特别是对于高分子量载体(聚合载体)，特别是对于分支的聚合载体，由于空间位阻，酶接近连接官能团可能受到限制。生物转化依赖的连接体在注射部位(皮下或肌内组织)和血流中可能表现出不同的裂解速率。这是不期望的特性，因为其要在体外和体内关系中进行妥协，并且可能涉及延长释放、作用的缓慢开始以及不好的体外-体内关系。因此需要设计能够自动裂解的载体连接的前药。为了将不稳定性引入到诸如酰胺或氨基甲酸酯的可自动裂解基团中，需要将结构化学组分设计到载体中，以例如作为接近自动裂解官能团的邻近基团发挥作用。此类诱导自动裂解的化学结构(其对前药酰胺键的可裂解性进行控制)称为自动裂解诱导基团。自
9动裂解诱导基团可能对连接载体和生物活性部分的给定官能团的裂解速率具有很强的作用。EP-B 1 337 270中描述了具有至少一个2_磺基_9_芴基甲氧羰基(FMS)基团和干扰素α的无载体系统(还参见Shechter等，PNAS 2001 98 (3)，1212-1217)。为递送干扰素-α2，Peleg-Shulman 等(J. Med. Chem. 2004，47，4897-4904)通过在 40kDa PEG和干扰素-α 2之间掺入可逆的2-磺基-9-芴基甲氧羰基连接体，从而应用可逆的PEG化。他们证实延长了干扰素-α 2的释放，在ρΗ 8. 5和37°C半衰期为约3天。从静脉内注射产生的数据估测该可逆PEG化干扰素的终末半衰期为约30小时。由该组描述的可逆连接体的水解是强生物转化依赖性的，因为其不仅受到PH和温度的控制，还强烈地受到血浆亲核性的影响，这意味着干扰素释放速率在血浆和皮下组织之间将有差别。由于聚乙二醇化干扰素缀合物从皮下组织的缓慢吸收，这一缀合物的特征在于作用缓慢开始，因为活性干扰素的释放主要在血浆中发生。通过干扰素的聚合物制剂给出了持续释放的一种不同方法。这一方法已被Biolex 和OctoPlus公司利用，用于配制在聚(醚-酯)微球体中的干扰素α的持续释放，干扰素从该微球持续释放，如WO-A 2006/085747所述。然而，利用此类颗粒作为聚合载体导致极低的药物对载体的重量比，即该制剂含有比药物物质高得多的量的载体材料(例如，聚合物)。然而，如对这些类型的药物通常观察到的那样，此类制剂的特征是爆发释放，如从L. De Leede 等 Journal of Interferon & Cytokine Research 2008，28，113-122 中提供的药物代谢动力学数据证实的那样，其中该药物代谢动力学曲线显示两个峰，第一个峰是由于最初爆发得到的，第二个峰由于从该制剂的释放得到的。这一最初爆发最可能增加干扰素治疗通常遇到的流感状副作用。此外，由于这些类型的药物以延长的时间段从注射部位释放具有完全活性的活性药物，导致组织持续暴露于干扰素-α，因此患者可能罹患与现有治疗中所观察到的那些类似的注射部位反应。为克服与当前技术相关的问题，持续需要新的药物组合物和前药。因此，本发明的一个目的是提供此类药物组合物和前药，其具有与释放动力学相关的有利性质，但优选还具有就药物载量、降低的副作用和注射部位反应、身体分布、病毒复发率等而言的有利性质。因此，本发明提供了包含干扰素α的水溶性聚合载体连接的前药的组合物，其中该前药能够释放游离的干扰素α，其中生理条件下的释放半衰期是至少 4天。本发明的另一方面是如上定义的干扰素α的水溶性聚合载体连接的前药。“药物组合物”意指一种或多种活性成分，以及一种或多种惰性成分，以及直接或间接产生自任何两种或多种成分的组合、复合或聚集，或产生自一种或多种成分的分离，或产生自一种或多种成分的其他类型的反应或相互作用的任何产品。因此，本发明的药物组合物包括任何通过混合本发明的前药和一种或多种可药用惰性成分的组合物。术语“惰性成分”是指与治疗剂一起施用的稀释剂、辅助剂、赋形剂或溶媒 (vehicle)。此类可药用惰性成分可以是无菌液体，诸如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，包括但不限于花生油、大豆油、矿物油和芝麻油等。水是组合物的优选组成部分。当静脉内施用药物组合物时，盐水和葡萄糖水溶液是优选的成分。盐水溶液和葡萄糖水溶液以及甘油溶液优选作为可注射溶液组合物的液体部分。合适的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、 氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。如需要的话，组合物还可含有小量的湿润剂或乳化剂、或PH缓冲剂。这些组合物可以为溶液、混悬液、乳剂、散剂、持续释放制剂等的形式。该组合物可与传统的粘合剂诸如甘油三酯一起配制为栓剂。合适的药物组合物的实例描述于 E.W.Martin 的《雷明登药物科学》(“Remington' s Pharmaceutical Sciences”) 中。此类组合物将含有治疗有效量的治疗剂，优选纯化形式的，以及合适量的其他成分，以便于提供适当施用至患者的形式。该制剂应当适合于施用模式。本发明的药物组合物可包含一种或多种作为活性成分的另外的化合物。所述活性成分可包含在一种或多种不同的药物组合物中(药物组合物的组合)。因此，本发明的药物组合物可用于应用一种或多种药物组合物的单一疗法或联合治疗。“干燥组合物”的意思是聚合载体连接的干扰素α前药组合物以干燥的形式提供在容器中。用于干燥的合适方法是喷雾干燥和冷冻干燥(冻干)。此类聚合载体连接的干扰素α前药的干燥组合物具有最高10%、优选低于5%以及更优选低于2%的残余水含量 (根据Karl Fischer测定)。优选的干燥方法是冷冻干燥。“冻干组合物”意指聚合载体连接的干扰素α前药组合物首先被冷冻，并且随后通过减压的方式减少水分。这一术语不排除在生产过程中将组合物填充进最终容器之前发生的其他干燥步骤。在“液体组合物”中，聚合载体连接的干扰素α前药以此种形式提供，即该前药分散在合适的溶剂中，所述溶剂诸如水，任选地含有缓冲剂。“冷冻干燥”(冻干)是脱水方法，其特征在于冷冻组合物，然后降低周围压力，并且任选地加热，从而使得组合物中的冷冻水直接从固相升华为气体。一般地，通过凝华收集升华的水。“重构”意指在将组合物施用至有需要的患者之前通过添加液体，从而使组合物恢复至干燥之前的状况，诸如溶液或混悬液。该液体可含有一种或多种赋形剂。“重构溶液”是指用于在施用至有需要的患者之前重构聚合载体连接的干扰素α 前药的干燥组合物的液体。“容器”意指聚合载体连接的干扰素α前药组合物可包含并贮存于其中的任何容
ο“缓冲物质”或“缓冲剂”是指将ρΗ维持在期望范围内的化合物。生理上可容忍的缓冲剂例如是磷酸钠、琥珀酸盐、组氨酸、碳酸氢盐、柠檬酸盐和醋酸盐、硫酸盐、硝酸盐、氯化物、丙酮酸盐。也可使用抗酸剂，诸如Mg(OH)2或加0)3。可将缓冲能力调节至匹配对ρΗ 稳定性最敏感的条件。“赋形剂”是指与治疗剂一起施用的化合物，例如，缓冲剂、等渗调节剂、防腐剂、稳定剂、抗吸附剂、氧化保护剂或其他助剂。然而，在一些情况下，一种赋形剂可能具有两种或三种功能。“冻干保护剂”是这样的分子，当与目的蛋白质联合时，其显著地预防或降低该蛋白质在通常干燥且尤其是在冷冻干燥和随后的贮存期间的化学和/或物理不稳定性。示例性的冻干保护剂包括糖，诸如蔗糖和海藻糖；氨基酸，诸如谷氨酸单钠或组氨酸；甲胺类， 诸如甜菜碱；感胶离子(lyotropic)盐，诸如硫酸镁；多元醇，诸如三羟的或更高的糖醇， 例如丙三醇、赤藓醇、甘油、阿糖醇、木糖醇、山梨糖醇以及甘露醇；乙二醇；丙二醇；聚乙二醇；普朗尼克(pluronics)；羟烷基淀粉，例如羟乙基淀粉(HES)，及其组合。“表面活性剂”是指降低液体表面张力的湿润剂。“等渗调节剂”是指可最小化产生自细胞损伤的疼痛的化合物，所述细胞损伤是由于注射场所处渗透压的不同引起的。术语“稳定剂”是指用于稳定水凝胶前药的化合物。稳定通过强化蛋白稳定力、通过使变性状态不稳定或通过将赋形剂与蛋白质直接结合而实现。“抗吸附剂”是指用于包被或竞争性吸附至组合物的容器的内表面的主要是离子或非离子表面活性剂或其他蛋白质或可溶聚合物。所选择的赋形剂浓度和类型取决于待避免的影响，但通常仅在CMC值以上在界面处形成表面活性剂单层。“氧化保护剂”指抗氧化剂，诸如抗坏血酸、四氢甲基嘧啶羧酸(ectoine)、谷胱甘肽、甲硫氨酸、硫代甘油、桑色素、聚乙烯亚胺(PEI)、没食子酸丙酯、维生素E、螯合剂诸如柠檬酸、EDTA、六磷酸盐/酯、巯基乙酸。“抗微生物剂”是指杀死或抑制微生物诸如细菌、真菌、酵母、原生动物生长和/或破坏病毒的化学物质。“密封容器”意指以这样的方式封闭容器，使得其不透气，不允许外部和内部间的空气交换，并且保持内容物无菌。在优选的实施方案中，药物组合物是用于皮下施用、肌内施用或静脉内注射的组合物。这些是用于治疗如本文所述的相关病症/疾病的优选施用途径的实例。本发明的药物组合物包含作为活性成分的干扰素α的水溶性聚合载体连接的前药。根据由IUPAC给出的定义，术语“前药”意指在显示其药理学作用前在体内经历转化的任何化合物。因此，前药可以被认为是包含在体内以暂时的方式使用的特别的无毒保护基的药物，所述保护基用于改变或消除母体分子中不希望的性质。术语“载体连接的前药”意指含有给定的活性物质与暂时载体基团的临时连接的前药，所述的暂时载体基团产生改善的物理化学或药物动力学性质，并且其可以在体内被除去，通常是通过水解来裂解。术语“药物”、“生物活性分子”、“生物活性部分”、“生物活性剂”、“活性剂”等意指可影响生物体的任何机体或生物化学性质的任何物质，所述生物体包括但不限于病毒、细菌、真菌、植物、动物和人。具体地，如本文所使用的那样，生物活性分子包括任何试图用于诊断、治愈、减轻、治疗或预防人类或其他动物疾病，或以其他方式改善人或动物机体或精神健康的任何物质。如本文所使用的干扰素α的“治疗有效量”意思是足以治愈、减轻或部分抑制给定疾病及其并发症的临床表现的量。足以完成其的量被定义为“治疗有效量”。用于每一目的的有效量将取决于疾病或损伤的严重性，以及个体的重量和一般状态。应当理解，确定合适的剂量可应用常规实验来完成，通过构建值的矩阵，并且测试该矩阵中的不同点，这均是在专门医生的普通技术之内。在这一发明的范围之内，治疗有效量涉及旨在在延长的时间段(诸如一周或更长，优选一至四周)实现治疗效果的剂量。根据本发明的术语“聚合载体”意指优选选自以下的聚合物聚烷氧基聚合物(这是优选的，尤其是聚乙二醇类)、透明质酸及其衍生物、羟烷基淀粉及其衍生物、聚乙烯醇
12类、聚^恶唑啉类、聚酐类、聚(原)酯类、聚碳酸酯类、聚氨基甲酸酯类、聚丙烯酸类、聚丙烯酰胺类、聚丙烯酸酯类、聚甲基丙烯酸酯类、聚有机磷腈类(polyorganophosphazenes)、 聚硅氧烷类、聚乙烯吡咯烷酮、聚氰基丙烯酸酯类、聚酰胺类和聚酯类以及相应的嵌段共聚物。根据本发明的术语“干扰素阿尔法”或“干扰素α ”意指属于α干扰素(IFN_ α )类的化合物。α干扰素包含许多具有类似分子量和功能性的天然和经修饰的蛋白质。白细胞是人类中这些蛋白质的主要来源之一。至少23种不同的天然亚类及多种经修饰的IFN-α 版本是已知的，有些可以以药物产品获得。IFN-α组中当前最重要的成员是IFN-a-加和 IFN- α -2b的重组变体。治疗中使用的另一重组IFN-α是IFNalfacon-I。术语“游离的干扰素α ”意指裂解本发明前药中的与载体的连接之后释放的如上定义的干扰素α。术语“生理条件下的释放半衰期”意指在含有至少80%的人血浆的缓冲水溶液中、 在约7.4的ρΗ下(ρΗ 6.8至？!1 7.8)、以及约37°〇C35°C至40°C)的温度下，优选pH = 7. 4及37 °C下，50 %的载体连接的前药被水解的时间。术语“水溶性聚合载体连接的前药”意指在ρΗ 7. 4和37°C可溶于缓冲液中的聚合载体连接的前药。一般地，水溶性前药将透射相同溶液在过滤后透射的人眼可见波长的光的至少75%、更优选至少95%。按重量计，用于人类给药的浓度的水溶性前药优选至少约 35% (重量)溶于水，仍然更优选至少约50% (重量)，仍然更优选至少约70% (重量)， 仍然更优选至少约85% (重量)，仍然更优选至少约95% (重量)或完全溶于水。本发明药物组合物的释放半衰期是至少4天，优选至少5天，例如至少4天、5天、 6天、一周、8天、9天、10天、11天、12天、13天、两周、三周、1个月或更高至100天。优选地，本发明药物组合物释放半衰期是至少96小时、120小时、更优选至少180小时、更优选至少240小时、更优选至少300小时。还更优选地，本发明药物组合物的释放半衰期是120 至520、更优选180小时至460小时、更优选240小时至400小时、更优选300小时至360小时。优选地，聚合载体的分子量是40kDa至200kDa ；更优选地，40kDa至120kDa ；甚至更优选地，60kDa至120kDa ；甚至更优选地，60kDa至lOOkDa。优选地，聚合载体是支链的。优选地，干扰素α与聚合载体暂时连接，使得通过可自动裂解的官能团或连接体的自动裂解实现游离干扰素α的释放。优选地，该可自动裂解的官能团与干扰素α的伯氨基基团一起形成氨基甲酸酯或酰胺基团。在此类水溶性聚合载体连接的前药系统中，测量的活性将由两种贡献，一种来自释放的游离药物实体，并且另一种来自仍未裂解的前药。为了区分载体连接的前药和释放的游离药物的活性，本文的术语“残余活性”应当被理解为可归于前药分子的测量的载体连接的前药活性的部分。为评估残余活性的程度，永久连接体缀合物可用于研究载体连接的前药的治疗应用，因为如果在前药和永久连接体缀合物中应用相同的载体时，则他们可用于评估残余活性。在本发明的药物组合物中，干扰素α与聚合载体共价连接。更优选地，利用了干扰素α的伯氨基的功能。甚至更优选的，通过赖氨酸侧链或N端缀合干扰素。聚合载体可经由一个或多个键，例如2个、3个或4个键共价连接。优选地，仅存在1个或2个键，甚至
13更优选的，存在一个键。聚合载体可通过两个或多个与干扰素α连接的聚合物形成，所述聚合物不互相连接。在这种情况下，聚合载体的分子质量由两个或多个聚合物的分子质量之和表示。优选地，在聚合载体由两个或多个聚合物形成的情况下，优选仅有两个聚合物形成聚合载体。本文的术语“自动裂解”应当被理解为暂时连接体和药物分子干扰素α之间的键在PH 7. 4的缓冲水溶液中和37°C下限速裂解。自动裂解不需要存在酶。该自动裂解由自动裂解诱导基团控制，所述的自动裂解诱导基团是载体连接的前药的一部分。该自动裂解诱导基团可以以本身存在，或者以掩蔽形式存在，因而在自动裂解机制启动前需要进行暴露。本文的术语“暂时连接”或“暂时连接体”应当被理解为描述前药中聚合载体和干扰素 α之间的连接的不稳定性。在这种暂时连接中，干扰素α从相应的前药中自动裂解，释放半衰期为最多100天。相反，术语“永久连接体”是指水解半衰期为至少100天的载体连接的缀合物。术语“永久连接体”涉及优选通过形成脂肪族酰胺或脂肪族氨基甲酸酯而与干扰素α提供的伯氨基相连的聚合载体连接的缀合物。如果应用此类永久连接体，产生的聚合载体连接的缀合物通常对于水解是非常稳定的，并且酰胺或氨基甲酸酯键的裂解速率不能允许它的作为前药的治疗应用。本发明的自动裂解聚合载体连接的前药的优选特征在于展示出强的体外-体内关系。可通过测量载体连接的前药在PH 7. 4的无蛋白缓冲溶液中的样本中、在37°C随时间推移游离药物的浓度，从而获得载体连接的前药的体外裂解速率。例如，可将载体连接的前药溶解于PH 7. 4的水性缓冲液中(例如，20mM磷酸钠、135mM NaCl和3mM EDTA)，并在 37°C温育。可以以时间间隔取样，并在Superdex 200柱上应用UV检测在215nm处通过尺寸排阻色谱法进行分析。可积分对应于释放的药物的峰，并针对温育时间进行作图。可应用曲线拟合软件以确定一级裂解速率，和相应的体外释放半衰期。因此，“体外释放半衰期” 是指这样的时间，在该时间之后50%的载体连接的前药在pH 7.4、37°C的无蛋白质缓冲液中被裂解。为获得体外和体内的前药裂解速率的关系，原本需要测量在施用人体后从干扰素前药释放50%的初始比例的干扰素α的时间。不幸的是，此类测量不易于进行，还因为载体连接的前药从血液循环中的清除率也必须考虑在内。因此优选在生理条件下确定载体连接的前药的裂解。“生理条件”意指体外或体内条件，其与人体内注射部位和血流中的PH和温度条件相同，或与其类似。更具体的，“生理条件”指的是在约7. 4的ρΗ(ρΗ 6. 8至ρΗ7. 8)和约37°C的温度(35°C至40°C )、优选pH = 7. 4和37 °C下含有至少80%人血浆的溶液。例如，可将载体连接的前药溶解于4/1 (ν/ν)人血浆/pH 7. 4的50mM磷酸钠缓冲液中，并过滤通过0.22 μ m滤器，在37 °C温育。可以以时间间隔取样，并通过ELISA 分析(例如，在α干扰素的情况下，可应用VeriKine 人IFN-α血清样本ELISA，PBL Interferonsource, USA)。根据本发明的IFN的聚合载体连接的前药在ELISA中将显示出与相同浓度的游离IFN相比更低的信号，这是因为缀合的载体聚合物遮蔽了 IFN与ELISA 中使用的抗体的接触。可基于ELISA信号随时间的升高以及应用未缀合IFN的校准曲线确定释放的游离IFN，并且可相对温育时间对释放的游离IFN的量作图。可应用曲线拟合软件确定一级裂解速率和相应的释放半衰期。相应地，可应用生理条件下的自动裂解速率来估计聚合载体连接的前药的体内裂解速率，以及获得体外-体内关系。如上文所述的那样，期望获得尽可能接近的体外-体内关系，即，在体外和在生理条件下观察到相同或几乎相同的水解速率。为了使聚合载体连接的前药展现出自裂解特性，生理条件下的释放半衰期不能少于体外释放半衰期的50%。还优选从相应聚合载体连接的前药释放的游离干扰素α以未修饰的、无痕迹形式释放，即，在裂解后，没有载体、或连接体部分、或其片断或残基仍与干扰素连接。在优选的实施方案中，本发明药物组合物中的本发明的前药可由式(AA)表示IFN-NH-La-S0 (AA)其中IFN-NH表示干扰素α残基；La表示官能团，其是通过自动裂解诱导基团Ga而可自动裂解的；S°是分支的聚合物链，其包含自动裂解诱导基团Ga，且其中不含IFN-NH的前药分子量为至少40kDa并且最大200kDa、更优选至少 40kDa并且最大120kDa、更优选至少60kDa并且最大120kDa、甚至更优选至少60kDa并且最大 IOOkDa0优选地，S0是聚合物链，其分子量为至少5kDa并且包含至少第一个分支结构BS1， 至少第一个分支结构BS1包含分子量为至少4kDa的至少第二条聚合物链S1，其中不含 IFN-NH的前药分子量为至少40kDa并且最大200kDa、更优选至少40kDa并且最大120kDa、 更优选至少60kDa并且最大120kDa、甚至更优选至少60kDa并且最大IOOkDa,且其中S°、 BS1^S1中至少一个进一步包含自动裂解诱导基团Ga。优选地，分支结构BS1进一步包含分子量为至少4kDa的至少第三条聚合物链S2，或者Sc^S1中至少一个包含至少第二个分支结构BS2，所述的BS2包含分子量为至少4kDa的至少第三条聚合物链S2，其中不含IFN-NH的前药分子量为至少40kDa并且最大200kDa、更优选至少40kDa并且最大120kDa、更优选至少60kDa并且最大120kDa、甚至更优选至少60kDa 并且最大IOOkDa,且其中S°、BSkBS2J^S2中至少一个进一步包含自动裂解诱导基团Ga。优选地，分支结构BS1、BS2中至少一个进一步包含分子量为至少4kDa的第四条聚合物链S3，或者S°、S1、S2之一包含第三个分支结构BS3，所述的BS3包含分子量为至少 4kDa的至少第四条聚合物链S3，并且其中不含IFN-NH的前药分子量为至少40kDa并且最大 200kDa、更优选至少40kDa并且最大120kDa、更优选至少60kDa并且最大120kDa、甚至更优选至少60kDa并且最大IOOkDa,且其中S^BS1、BS2、BS3、S1、S2、S3中至少一个进一步包含自动裂解诱导基团Ga。聚合载体中分支位置的位置(在优选的实施方案中是第一或仅有的分支结构BS1) 定义了临界距离。临界距离是S°与La的连接点和分支位置(BS1)之间的最短距离，其以连接的原子来测量。临界距离的长度对残余活性有影响。临界距离优选为小于50，更优选小于20，以及最优选小于10。对于本发明的具有至少两个连接和载体的前药，其优选由式(AB)表示IFN- (NH-L-S0)n (AB)其中
η 是 2、3 或 4(优选 η = 2)；IFN(_NH)n表示干扰素α残基；L各自独立地是永久官能团Lp或官能团L% La是通过自动裂解诱导基团Ga而可自动裂解的；并且S°各自独立地是分子量为至少5kDa的聚合物链，其中S°任选通过包含至少第一个分支结构BS1从而分支，所述至少第一个分支结构BS1包含分子量为至少4kDa的至少第二条聚合物链S1，其中S°、BS1、S1中至少一个进一步包含自动裂解诱导基团G%并且其中不含 IFN (_NH)n的前药分子量为至少20kDa并且最大400kDa、优选至少40kDa并且最大200kDa、 更优选至少60kDa并且最大120kDa。任选地，两个、三个或更多个聚合物链存在于本发明的前药当中，例如，2、3、4、5、 6、7或8个。然而，每一个其他的聚合物链具有至少4kDa的分子量。聚合物链的总数受到最大为400kDa(不包括IFN(-NH)n)的前药的总重量限制，其中不含IFN-NH的前药分子量为至少20kDa并且最大400kDa、优选至少40kDa并且最大200kDa、更优选至少60kDa并且最大 120kDa。因此，本发明优选的实施方案涉及组合物，其中分支结构BS^BS2中至少一个进一步包含分子量为至少4kDa的第四条聚合物链S3，或者S°、S\S2中之一包含第三个分支结构 BS3，所述的BS3包含分子量为至少4kDa的至少第四条聚合物链S3，其中不含IFN(_NH)n的前药分子量为至少20kDa并且最大400kDa、优选至少40kDa并且最大200kDa、更优选至少 60kDa并且最大120kDa。分支结构或聚合物链之一包含自动裂解诱导基团Ga，其是La的自动裂解所必需的。任选的，所述分支结构之一用作基团Ga，从而分支结构由Ga组成(而不是包括所述的基团)，其也包括在术语“包含”中。前药(AA)的制备通常产生前药的混合物，其中IFN的数个伯氨基基团与载体连接，产生不同的单连接的、不同的双连接的、不同的三连接的等前药。相应的单连接、双连接或三连接的前药可以通过本领域已知的标准方法来分离，例如柱色谱法等。在单连接的载体前药中，两条或更多条聚合物链S°、S1、S2、S3含有“聚合物部分”， 其特征在于一个或多个重复单元，这些重复单元可以是随机的、嵌段的(block wise)或交替分布的。另外，两条或更多条聚合物链S°、S1、S2、S3显示末端基团，其一般是氢原子或具有1至6个碳原子的烷基，其可以是分支的或不分支的，例如甲基，特别是对于基于聚乙二醇(PEG)的聚合物链，产生所谓的mPEG。需要指出的是，在两条或更多条聚合物链Sc^S1A2A3中的聚合物部分可以进一步含有链样取代基，其源于重复单元并且产生具有小于4kDa分子量的链，并且不认为其是聚合物链S°、S1、S2、S3等。优选的是，所述两条或更多条聚合物链S°、S1、S2、S3带有小于4kDa 分子量的取代基。所述两条或更多条聚合物链S°、S1和S2、S3通常各含有互连部分。在至少一个互连部分中存在Ga。对于除S°之外的聚合物链，互连部分是连接例如S1的聚合物部分与BS1 以及S2的聚合物部分与BS2的结构元件。对于S°，互连部分是连接La和BS1的结构元件。互连部分可以由C1J烷基链组成，其是分支的或不分支的并且其任选被杂原子或官能团间隔或终止，所述的杂原子或官能团选自-0-、-S-、N(R)、C(0)、C(0)N(R)、N(R)C(0)、
16一个或多个碳环或杂环，其中R是氢或C1J烷基链，其任选被一个或多个上述原子或基团间隔或终止，其进一步含有氢作为末端原子；并且其中碳环是苯基、萘基、茚基、茚满基、四氢化萘基、C3_10环烷基；并且其中杂环是4至7元杂环基或9至11元杂二环基。"C3_10环烷基”或“C3_1(l环烷基环”表示含有3至10个碳原子的环烷基链，其可以含有碳-碳双键，并至少是部分饱和的，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基。环烷基碳上的每个氢可以被取代基代替。术语“c3_1(l环烷基”或 "C3,环烷基环”还包括桥连的二环，例如降冰片烷(norbonane)或降冰片烯(norbonene)。“4至7元杂环基”或“4至7元杂环”表示含有4、5、6或7个环原子的环， 其可以含有至多最大数量的双键(完全饱和的、部分饱和的或不饱和的芳族或非芳族环)，其中至少一个环原子至最多4个环原子被杂原子代替，所述的杂原子选自硫(包括-S(O)-、-S(O)2-)、氧和氮(包括=N(0)-)，并且其中环是通过碳或氮原子与分子的其它部分连接的。4至7元杂环的实例是氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、硫杂环丁烷、呋喃、噻吩、吡咯、批咯啉、咪唑、咪唑啉、批唑、批唑啉、巧恶唑、巧恶唑啉、异唑、异巧恶唑琳、噻唑、噻唑啉、 异噻唑、异噻唑啉、噻二唑、噻二唑啉、四氢呋喃、四氢噻吩、吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、巧i唑烷、异巧恶唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、噻二唑烷、环丁砜、吡喃、二氢吡喃、四氢吡喃、咪唑烷、吡啶、哒嗪、吡嗪、嘧啶、哌嗪、哌啶、吗啉、四唑、三唑、三唑烷、四唑烷、二氮杂环庚烷、氮杂革, 或高哌嗪。“9至11元杂二环基”或“9至11元杂二环”表示含有9至11个环原子的两个环的杂环系统，其中至少一个环原子被两个环共享并且其可以包含至多最大数量的双键(完全饱和的、部分饱和的或不饱和的芳族或非芳族环)，其中至少一个环原子至最多6个环原子被杂原子代替，所述的杂原子选自硫(包括-S(0)-、-S(0)2-)、氧和氮(包括=N(O)-)， 并且其中环通过碳或氮原子与分子的其它部分连接。9至11元杂二环的实例是吲哚、二氢吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并唑、苯并异唑、苯并噻唑、苯并异噻唑、苯并咪唑、苯并咪唑啉、喹啉、喹唑啉、二氢喹唑啉、喹啉、二氢喹啉、四氢喹啉、十氢喹啉、异喹啉、十氢异喹啉、四氢异喹啉、二氢异喹啉、苯并氮杂革、嘌呤或蝶啶。术语9至11元杂二环还包括两个
环的螺环结构，例如1，4_ 二氧杂-8-氮杂螺[4. 5]癸烷，或者桥连的杂环，例如8-氮杂-二环[3. 2. 1]辛烷。碳环、杂环和杂二环可以被CV2tl烷基取代，任选被杂原子或官能团间隔或终止，所述的杂原子或官能团选自-0-、-S-、N(R)、C(0)、C(O)N(R)、N(R) C(0)，其中R是氢或C1,烷基链，其任选被一个或多个上述原子或基团间隔或终止，其进一步含有作为末端原子的氢。两条、三条或更多条链Sc^SkS2的聚合物部分构成链的主要部分，优选构成每条链的分子量的至少90%、更优选至少95%、甚至更优选至少97. 5%。因此，链的主要部分是由聚合物部分来代表的。优选的，两条或更多条链S°、S1、S2独立地基于聚合物，所述的聚合物选自聚烷氧基聚合物(其尤其优选为聚乙二醇)、透明质酸及其衍生物、羟烷基淀粉及其衍生物、聚乙烯醇类、聚唑啉类、聚酐类、聚(原酸酯)、聚碳酸酯类、聚氨基甲酸酯类、聚丙烯酸类、聚丙烯酰胺类、聚丙烯酸酯类、聚甲基丙烯酸酯类、聚有机磷腈类、聚硅氧烷类、聚乙烯吡咯烷酮、聚氰基丙烯酸酯类、聚酰胺类和聚酯类，以及相应的嵌段共聚物。
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优选的，两条或更多条链S°、S1、S2基于相同的聚合物。优选的，两条或更多条链 s°、S1、S2基于聚烷氧基聚合物。甚至更优选的，两条或更多条链s°、S1、S2基于聚乙二醇。相应地，这也适用于其它的链S3、S4、S5等(若存在的话)。链S°包含分支结构BS1，从而S1连接至S°。对于S2的连接，可以应用分支结构BS1 或存在进一步的分支结构BS2，其可以是S°或S1的一部分。因此，当存在进一步的链时，可以存在进一步的分支结构。例如，在存在链S3的情况中，其可以与BS1、BS2或分支结构BS3 连接。分支结构BS3，如果存在，可以是S°、S1或S2的一部分。通常，可以使用允许链分支的任何化学实体。优选的，分支结构独立地选自至少被 3-次取代的碳环、至少被3-次取代的杂环、叔碳原子、季碳原子和叔氮原子，其中术语碳环和杂环如上面所定义的。在本领域的出版物中，自动裂解诱导基团有时被称为连接体，以将它们结构与载体区分。但是，通常难以清楚地分开这些结构特征。因此，在本发明的含义中，裂解诱导基团Ga被认为是载体S的部分，所述的载体S包括至少S^S^BS1。Ga化学性质的变化使得能够在很大程度上设计相应前药的自动裂解性质。展现出感兴趣的释放特征的合适的暂时连接体结构描述在W0-A2005/099768中。 其他的暂时连接体结构一般/广泛地描述于例如W0-A2005/034909、WO-A 2005/099768、 WO-A 2006/003014 和 WO-A 2006/136586。在例如WO-A 99/30727中广泛描述了更多的暂时连接体结构。特别是，可以选择适合的可自动裂解的暂时连接体结构用于掺入至S°。下面详细描述本文所选的连接体结构。理想的是，本发明的前药将具有一种或多种以下特征和/或优于目前干扰素α缀合物或制剂的优点该前药可以易于以高产率合成、可以纯化以提供均一的组合物、在自动裂解后表现出活性(诸如在体外和体内)，并且具有优于未修饰的干扰素α和先前描述的缀合物的药效学作用。对前药键的可裂解性施加控制的自动裂解诱导化学结构称为自动裂解诱导基团 (根据式(AA)中La定义的Ga)。自动裂解诱导基团可以对给定的官能团La的水解速率具有很强的作用。优选的La选自以0)-0-和C(O) _，其与干扰素α的伯氨基一起形成氨基甲酸酯或
酰胺基团。因此，优选本发明的组合物，其中La选自C (0) -0-和C (0) _，其与IFN的伯氨基一起形成氨基甲酸酯或酰胺基团，得到式(AAl)或(ΑΑ2)IFN-NH-C (0) O-S0 (AAl)，IFN-NH-C (0) -S0 (ΑΑ2)。下面部分将列出可以用作裂解诱导基团Ga的多种结构组件。基团Ga表示自动裂解诱导基团。『可以以本身存在或者作为级联自动裂解诱导基团存在，通过另外的水解或酶裂解步骤使其暴露从而变得有效。如果Ga以本身存在，其控制La的限速裂解。优选的，Ga的转化可以诱导S°内的分子重排，诸如1，4或1，6_消除。该重排使得 La非常不稳定以至于被诱导裂解。Ga的转化是级联机制中的限速步骤。理想的是，暂时连接的裂解速率等于给定的治疗方案中药物分子的期望释放速率。在这种基于消除的级联系统中，需要La的裂解在其不稳定性被Ga的转化诱导后基本上是同时发生的。另外，需要限速裂解动力学是在治疗有用的期限内进行，而无需另外的酶帮助，从而避免以上讨论的与大部分酶裂解相关的缺点。R. B. Greenwald, A. Pendri, C. D. Conover, H. Zhao, Y. H. Choe, A. Martinez, K. Shum, S. Guan，J. Med. Chem.，1999，42，3657-3667 和 PCT 专利申请 WO-A 99/30727 描述了合成含氨基小分子化合物(基于1，4_或1，6_苄基消除)的聚乙二醇前药的方法。在该方法中，药物分子的氨基是通过氨基甲酸酯基团与PEG化的苄基部分连接的。聚乙二醇通过酯、碳酸酯、 氨基甲酸酯或酰胺键与苄基连接。药物分子从PEG的释放是通过自动水解和酶裂解的组合来发生的。在该方法中，释放触发掩蔽基团的裂解之后是经典的且快速的1，4_或1，6_苄基消除。该连接体系统还用于蛋白质的可释放的聚乙二醇缀合物(S.Lee，R. B. Greenwald 等人· Bioconj. Chem. 2001，12(2)，163-169)。将溶菌酶用作模型蛋白，因为当PEG化发生在赖氨酸残基的ε-氨基时其失去其活性。各种量的PEG连接体与蛋白质缀合。游离蛋白质从PEG缀合物中的再生发生在大鼠血浆中或发生在非生理的高pH缓冲液中。还参见 F. M. H. DeGroot 等人(W0-A 2002/083180 和 W0-A 2004/043493)和 D. Shabat 等人(W0-A 2004/019993)。因此，La是氨基甲酸酯官能团，所述基团的裂解是通过Ga的羟基或氨基经S°的1， 4-或1，6_苄基消除来诱导的，其中Ga含有酯、碳酸酯、氨基甲酸酯或酰胺键，其经历限速转化。实际上，Ga可以通过水解裂解。因此，优选本发明的组合物，其中La与干扰素α的氨基一起形成氨基甲酸酯官能团，所述基团的裂解是通过Ga的羟基或氨基经S°的1，4_或1，6_苄基消除来诱导的，其中 Ga含有经历限速转化的酯、碳酸酯、氨基甲酸酯或酰胺键。Ga可以包含由Ga组件激活的级联裂解系统，其由代表上述前体的结构组合组成。 Ga的前体可以含有另外的暂时连接，例如酰胺、酯或氨基甲酸酯。前体的暂时连接(例如氨基甲酸酯)对水解的稳定性或敏感性可以由自动水解性质控制或可能需要酶活性。更特别的是，对于S°，以下描述了具有特别间隔体部分(spacer moiety)的优选的基团La和Ga。根据WO-A 2005/099768，优选的结构选自通式(I)和(II)
其中T表示IFN-NH ;X表示间隔体部分；Y1和t各自独立地表示0、S或NR6 ;Y3表示 0或S ;Υ4表示0、冊6或-(0 7) (R8)成表示选自下列的基团氧；取代的或未取代的线性、分支或环状烷基或杂烷基；芳基；取代的芳基；取代的或未取代的杂芳基；氰基；硝基；卤素； 羧基；羧基烷基；烷基羰基或酰氨基烷基；R4表示选自下列的基团氢；取代的或未取代的线性、分支或环状烷基或杂烷基；芳基；取代的芳基；取代的或未取代的杂芳基；取代的或未取代的线性、分支或环状烷氧基；取代的或未取代的线性、分支或环状杂烷基氧基；芳基氧基或杂芳基氧基、氰基和卤素；R7和&各自独立地选自氢；取代的或未取代的线性、分支或环状烷基或杂烷基；芳基、取代的芳基；取代的或未取代的杂芳基；羧基烷基；烷基羰基；酰氨基烷基；氰基和卤素出6表示选自下列的基团氢；取代的或未取代的线性、分支或环状烷基或杂烷基；芳基；取代的芳基和取代的或未取代的杂芳基A1表示S°的剩余部分； W表示选自下列的基团取代的或未取代的线性、分支或环状烷基；芳基；取代的芳基；取代的或未取代的线性、分支或环状杂烷基；取代的或未取代的杂芳基；Nu表示亲核基团；η表示0或正整数(positive imager)；并且Ar表示多取代的芳族烃或多取代的芳族杂环。在本发明的含义中，基团La由Y3-C(Y5)NH-(与IFN的氨基一起)表示，Ga由 Nu-W-Y4-C(Y1)Y2表示，并且Ar (R4)n-C (R3UR1表示S°，其优选进一步包含至少BS1和S1。在备选的实施方案中，S1通过Ar连接或者表示R3。然后，邻近Y3的被XR1取代的碳原子表示分支结构BS1，S1被包含Ga的Ar终止。在该实施方案中很显然术语S°和S1是可互换的。优选的，在式(AA)或(AAl)中，S°是式(AAAl)
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权利要求
1.包含干扰素α的水溶性聚合载体连接的前药的药物组合物，其中所述前药能够释放游离干扰素α，其中生理条件下的释放半衰期至少是4天。
2.权利要求1的组合物，其中所述释放半衰期至少是5天。
3.权利要求1或2的组合物，其中所述聚合载体的分子量为40kDa至200kDa。
4.权利要求1至3任一项的组合物，其中所述聚合载体在40kDa至120kDa的范围内。
5.权利要求1至4任一项的组合物，其中所述干扰素α与聚合载体暂时连接，使得干扰素α的释放通过可自动裂解的官能团或连接体的自动裂解实现。
6.权利要求1至5任一项的组合物，其中可自动裂解的官能团与干扰素α的伯氨基基团一起形成氨基甲酸酯或酰胺基团。
7.权利要求1至6任一项的组合物，其中所述前药由式(AA)表示IFN-NH-La-S0 (AA)其中IFN-NH表示干扰素α残基；La表示官能团，其是通过自动裂解诱导基团Ga而可自动裂解的；S0是分支的聚合物链，其包含自动裂解诱导基团Ga，且其中不含IFN-NH的前药分子量为至少40kDa并且最大200kDa。
8.权利要求7的组合物，其中S°是聚合物链，其分子量为至少5kDa并且包含至少第一个分支结构BS1，所述至少第一个分支结构BS1包含分子量为至少4kDa的至少第二条聚合物链S1，并且其中不含IFN-NH的前药分子量为至少40kDa并且最大200kDa，且其中S^BS1、 S1中至少一个进一步包含自动裂解诱导基团Ga。
9.权利要求8的组合物，其中分支结构BS1进一步包含分子量为至少4kDa的至少第三条聚合物链S2，或者Sc^S1中至少一个包含至少第二个分支结构BS2，所述的BS2包含分子量为至少4kDa的至少第三条聚合物链S2，且其中不含IFN-NH的前药分子量为至少40kDa并且最大200kDa，并且其中S°、BS1、BS2、S1、S2中至少一个进一步包含自动裂解诱导基团Ga。
10.权利要求7至9任一项的组合物，其中不含IFN-NH残基的前药分子量为至少40kDa 并且最大120kDa。
11.权利要求7至10任一项的组合物，其中La选自C(O)-O-和C(O)-，其与IFN的伯氨基一起形成氨基甲酸酯或酰胺基团，产生式(AAl)或(AA2)IFN-NH-C(0)O-S0 (AAl)，IFN-NH-C(0)-S0 (AA2)。
12.权利要求7至11任一项的组合物，其中La与干扰素α的氨基一起形成氨基甲酸酯官能团，所述基团的裂解是通过Ga的羟基或氨基经< 的1，4_或1，6_苄基消除来诱导的，其中Ga含有经历限速转化的酯、碳酸酯、氨基甲酸酯或酰胺键。
13.权利要求9至12任一项的组合物，其中分支结构BS1、BS2中至少一个进一步包含分子量为至少4kDa的第四条聚合物链S3，或者Sc^S1A2中之一包含第三个分支结构BS3，所述的BS3包含分子量为至少4kDa的至少第四条聚合物链S3，并且其中S°、BS1、BS2、BS3、S1、 S2、S3中至少一个进一步包含自动裂解诱导基团Ga。
14.权利要求9至13任一项的组合物，其中两条或更多条链S°、S\S2、S3独立地基于聚合物，所述的聚合物选自聚烷氧基聚合物、透明质酸及其衍生物、羟烷基淀粉及其衍生物、聚乙烯醇类、聚唑啉类、聚酐类、聚(原酸)酯类、聚碳酸酯类、聚氨基甲酸酯类、聚丙烯酸类、聚丙烯酰胺类、聚丙烯酸酯类、聚甲基丙烯酸酯类、聚有机磷腈类、聚硅氧烷类、聚乙烯吡咯烷酮、聚氰基丙烯酸酯类、聚酰胺类和聚酯类，以及相应的嵌段共聚物。
15.权利要求14的组合物，其中所述至少两条或更多条链S°、S1、S2、S3基于聚烷氧基聚合物。
16.权利要求7至15任一项的组合物，其中S°与La的连接点和第一分支结构BS1之间的以连接原子测量的最短距离为少于50个原子。
17.权利要求16的组合物，其中所述最短距离少于20个原子。
18.权利要求7至17任一项的组合物，其中S°是式(AAAl)其中，Ga具有如权利要求7所示的含义； S°° 是 012或((0)；S°A是具有少于40个碳原子的亚烷基链，其任选被一个或多个选自下列的基团、环或杂原子间隔或终止任选取代的杂环、0、S、C(O)和NH ； BS1、BS2、BS3独立地选自N禾口 CH ；S°B、S1A独立地是具有1至25个碳原子的亚烷基链，其任选被一个或多个选自下列的基团、环或杂原子间隔或终止任选取代的杂环、0、S、C(O)和NH ；S°G、S1B 是(C(O)) (CH2)nl (OCH2CH2)nOCH3，其中每一个 η 独立地是 90 至 2500 的整数，每一个nl独立地是1至25的整数，并且n2是0或1 ；S2、S3独立地是氢或(C(O))n2 (CH2)nl (OCH2CH2)nOCH3，其中每一个η独立地是90至2500 的整数，每一个nl独立地是1至25的整数，并且n2是0或1 ；R2> R3独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基和叔丁基。
19.权利要求18的组合物，其中Ga是OC(O)-R,并且R是式⑴的部分结构R1(I)其中Rl、R4、R5独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基以及叔丁基，并且其中η是1或2。
20.权利要求7至17任一项的组合物，其中La-S°由式(AAA2)表示
21.权利要求1-6任一项的组合物，其中所述前药由式(AB)表示IFN- (NH-L-S0)n (AB)其中η是2、3或4 ；IFN(_NH)n表示干扰素α残基；每个L独立地是永久官能团Lp ；或官能团L%其是通过自动裂解诱导基团Ga而可自动裂解的；并且每个S°独立地是分子量为至少5kDa的聚合物链，其中S°任选通过包含至少第一个分支结构BS1从而是分支的，所述至少第一个分支结构BS1包含分子量为至少4kDa的至少第二条聚合物链S1，其中S°、BS1、S1中至少一个进一步包含自动裂解诱导基团G%并且其中不含IFN-NH的前药分子量为至少20kDa并且最大400kDa。
22.权利要求21的组合物，其中η是2。
23.权利要求1至22任一项的组合物，其中所述前药在体外抗病毒测试中具有少于 5%的残余活性。
24.如权利要求1-23任一项定义的干扰素α的水溶性聚合载体连接的前药。
25.权利要求1-23任一项的药物组合物，或权利要求M的干扰素α的水溶性聚合载体连接的前药，其用于治疗、控制、延缓或预防可受益于干扰素α治疗的疾病的方法中。
26.在有需要治疗的哺乳动物患者中治疗、控制、延缓或预防可受益于干扰素α治疗的疾病的方法，其中所述方法包括给所述患者施用治疗有效量的权利要求1-23任一项的药物组合物，或权利要求M的干扰素α的水溶性聚合载体连接的前药。
27.权利要求M的方法，其中所述患者被病毒感染，并且与永久连接的PEG化干扰素 α缀合物相比，所述病毒感染患者的治疗导致降低的病毒复发率。
28.权利要求沈或27的方法，其中所述施用导致与永久连接的PEG化干扰素α缀合物相比的增加的分布容积。
29.权利要求1至23或25任一项的药物组合物，其中所述药物组合物是干燥的。
30.权利要求四的药物组合物，其中所述药物组合物是通过冷冻干燥来干燥的。
31.权利要求1至23或25任一项的药物组合物，其中所述药物组合物是液体的。
32.权利要求1至23、25、四至31任一项的药物组合物，其中所述聚合载体连接的干扰素α前药在组合物中的剂量足以在一次施用中提供一周或更长的治疗有效量的干扰素 α ο
33.权利要求1至23、25、四至32任一项的药物组合物，其中该药物组合物为单剂量组合物。
34.权利要求1至23、25、四至32任一项的药物组合物，其中该药物组合物为多剂量组合物。
35.包含权利要求1至23、25、四至34任一项的药物组合物的容器。
36.包含权利要求四或30的药物组合物的容器，其中所述容器是双室注射器。
37.从权利要求四或30的干燥组合物制备重构组合物的方法，该方法包括通过添加重构溶液重构所述干燥药物组合物的步骤。
38.制备权利要求31至34任一项的液体组合物的方法，包括以下步骤(i)将聚合载体连接的干扰素α前药与一种或多种赋形剂混合；(ii)将等于单剂量或多剂量的量转移至合适的容器中，和(iii)密封容器。
39.制备权利要求四或30的干燥组合物的方法，包括以下步骤 (i)将聚合载体连接的干扰素α前药与一种或多种赋形剂混合； ( )将等于单剂量或多剂量的量转移至合适的容器中，(iii)在所述容器中干燥组合物，和(iv)密封容器。
40.成套药盒，其包含针头，以及与所述针头一起使用的容器，并且其中所述容器包含权利要求31的液体组合物。
41.成套药盒，其包含注射器、针头和用于与注射器一起使用的包含权利要求四或30 的干燥的聚合载体连接的干扰素α前药组合物的第一容器，以及包含重构溶液的第二容ο
42.权利要去41的成套药盒，其中所述第一和第二容器形成双室注射器，并且其中所述双室注射器的两个室之一含有所述干燥药物组合物，并且所述双室注射器的第二室含有重构溶液。
全文摘要
本发明涉及包含干扰素α的水溶性聚合载体连接的前药的药物组合物，其中所述前药能够释放游离干扰素α，其中生理条件下的释放半衰期为至少4天。本发明还涉及用于药物组合物的前药，以及它们用于治疗、控制、延缓或预防可受益于干扰素α治疗的疾病的用途，所述疾病诸如丙型肝炎。
文档编号A61K47/48GK102413843SQ201080019230
公开日2012年4月11日 申请日期2010年3月4日 优先权日2009年3月5日
发明者H·拉乌, S·卡登-瓦格特 申请人:阿森迪斯药物股份有限公司