专利名称：用于核磁共振研究的金黄地鼠胰腺癌动物模型构建方法
技术领域：
本发明属于胰腺癌动物模型构建领域，特别涉及一种以化学物质为致癌诱导物 质，构建金黄地鼠胰腺癌动物模型的方法。
背景技术：
目前，用于核磁共振成像研究的胰腺癌动物模型主要有种植性胰腺癌动物模型和 基因工程胰腺癌动物模型。种植性胰腺癌动物模型又分为异位种植性和原位种植性胰腺癌 动物模型。异位种植性胰腺癌动物模型是将胰腺癌细胞株或者胰腺癌瘤块接种于动物皮下， 在接种部位产生胰腺癌的一种模型，该模型优点是可重复性，技术相对简单，成本较低，肿 瘤可以量化，可以根据肿瘤生长情况调整实验计划。适合于评估抗癌新药给予方法和疗效。 局限性是(1)由于受到位置特异性影响，可能会产生药物疗效的假阳性结果。(2)移植于 皮下的胰腺癌很少发生转移，这与人的胰腺癌自然病程不一致，且转移灶的肿瘤生物学特 性可以同原发灶不同。原位种植性胰腺癌动物模型是将体外培养的肿瘤细胞或者是外科手术中采集的 肿瘤组织移植到裸鼠胰腺。它成瘤时间短，成瘤率高，维持了原有瘤组织的结构，保持了人 体肿瘤的绝大部分生物学特性。这种方法的缺点是技术要求较高，因为采用的实验动物为 裸鼠，其本身没有免疫力，耐受力差。无论是异位还是原位种植瘤模型，其肿瘤皆不是由胰 腺自身产生的，是“舶来品”，不能真正模拟人胰腺癌的发病机制及肿瘤发生、发展过程。基因工程胰腺癌动物模型包括转基因动物模型和基因突变模型，从本质上获得与 人胰腺癌极为相似的模型，可对肿瘤形成早期阶段进行研究。其局限性在于那些组织学上 与人类相似的胰腺病变在遗传学及生物学方面可能与人类明显不同；建模时间难掌握、花 费较高，数量上难以满足实验要求；同时要保证转基因的相应产物(如异体抗原)不会对药 物治疗效果产生影响。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种通过化学物质诱导致癌的金黄 地鼠胰腺癌动物模型构建方法，此种构建方法不仅能获得组织病理学与人胰腺癌相似、可 模拟人胰腺癌的发生发展过程、用于核磁共振成像研究的胰腺癌动物模型，而且操作简单， 费用低。本发明所述金黄地鼠胰腺癌动物模型的构建方法，所用动物为金黄地鼠，所用致 癌诱导物质为N-亚硝基双(2-氧丙基)胺〔N-Nitrosobis (2-oxopropyl) amine,简称BOP， 在说明书的下述内容中，所述BOP即为N-亚硝基双(2-氧丙基)胺〕，构建操作将所述致 癌诱导物质BOP用生理盐水配制成浓度为lmg/ml的致癌诱导液，按1公斤金黄地鼠体重1 次使用IOmg BOP计算每次注射致癌诱导液的剂量，将所述致癌诱导液按计算的剂量于金黄 地鼠背部行皮下注射，每周一次，连续注射至少7周，停止注射致癌诱导液后正常饲养至少
323周，即形成金黄地鼠胰腺癌动物模型。上述方法中，所述金黄地鼠选用叙利亚金黄地鼠，8周龄，雌性，饲养环境SPF级 动物实验室。上述方法中，配制致癌诱导液所用生理盐水中的NaCl浓度无严格要求，本发明选 用市售的0. 9%生理盐水，其NaCl的质量浓度为0. 9%。本发明具有以下有益效果1、本发明为胰腺癌动物模型的构建提供了一种与现有技术不同构思的新方法。2、实验表明(见实施例2、实施例3)，所构建的金黄地鼠胰腺癌动物模型在胰腺原 位产生胰腺癌，组织病理学与人胰腺癌相似，为胰腺导管腺癌；具有典型人胰腺癌临床特征 如黄疸、营养不良、淋巴结转移；在胰腺癌早期，12、13密码子的K-ras基因就有很高的突变率。3、由于本发明所述方法构建的金黄地鼠胰腺癌动物模型很好的模拟了人胰腺癌 的发生、发展过程，因而可用于研究人胰腺癌的发病机制。4、将本发明所述方法构建的金黄地鼠胰腺癌动物模型采用核磁共振成像，可观察 胰腺癌发生、发展过程，胰腺癌不同发展阶段的磁共振成像特点；评估药物及其他冶疗措施 对胰腺癌及其转移瘤的预防作用和疗效。5、由于仅用BOP和生理盐水配制的致癌诱导液每周注射一次，连续注射至少7周， 因而本发明所述方法操作简单，费用低，便于推广。
图1是本发明所述方法构建的金黄地鼠胰腺癌动物模型的核磁共振扫描图像，其 中，图1A、图1B、图1C、图ID分别是MR平扫(A)横断面SE TlffI ； (B)横断面FRFSET2WI ； (C)冠状面SE TlffI ； (D)冠状面FRFSE T2WI。A-D显示，金黄地鼠胃、脾、左肾间有巨大肿 块，信号不均，TlffI呈等、低混杂信号，T2WI呈等、高混杂信号，其内见多个类圆形更长Tl、 长T2信号影；胰腺脾叶显示不清，病灶边缘与邻近组织分界不清，胃、脾、左肾受压移位；MR 诊断金黄地鼠胰腺脾叶肿瘤，胰腺癌。图2是本发明所述方法构建的金黄地鼠胰腺癌动物模型经腹部纵行正中切口剖 腹后，所暴露出的胰腺肿瘤的光学照片。图3是将本发明所述方法构建的金黄地鼠胰腺癌动物模型的胰腺及肿瘤完整取 下，波恩式液(Bouin液)固定，石蜡包埋，切片，HE染色后的显微光学照片(HE，10x物镜， 放大倍数=442)。
具体实施例方式以下通过实施例对本发明所述金黄地鼠胰腺癌动物模型的构建方法及所形成的 胰腺肿瘤作进一步说明。实施例11、实验动物与材料实验动物叙利亚金黄地鼠(购于四川省实验动物专委会养殖场)，雌性，8周龄， 饲养环境SPF级动物实验室(川北医学院自建)。
4
致癌诱导物质Β0Ρ，购自深圳市荣发意达贸易有限公司。生理盐水NaCl质量浓度为0.9%的生理盐水(简称0.9%生理盐水)，购自湖南 科伦药业股份有限公司2、实验方法叙利亚金黄地鼠130只，每只原始体重IOOg左右(用电子秤称量)，将其分为实验 组和对照组，实验组为100只叙利亚金黄地鼠，对照组为30只叙利亚金黄地鼠。第一次注射时，将IOOmg BOP溶于80ml 0. 9 %生理盐水，待完全溶解后定容至 100ml，配制成浓度为BOPlmg/ml的致癌诱导液，按1公斤金黄地鼠体重1次使用IOmg BOP 计算，实验组每只金黄地鼠第一次BOP的用量为lmg，第一次注射致癌诱导液的剂量为1ml。对照组中的叙利亚金黄地鼠用0. 9%生理盐水注射，每只金黄地鼠第一次注射生 理盐水的剂量为1ml。将实验组的叙利亚金黄地鼠背部中线部位皮肤用质量浓度75%的酒精消毒，用 2. 5ml无菌注射器吸取配制好的致癌诱导液1ml，以30°角进针，于背部行皮下注射(术者 戴无菌手套)。将对照组的叙利亚金黄地鼠背部中线部位皮肤用质量浓度75%的酒精消毒，用 2.5ml无菌注射器吸取0.9%生理盐水lml，以30°角进针，于背部行皮下注射(术者戴无 菌手套)。实验组和对照组的上述注射操作每周一次(注射操作后正常饲养)，连续注射7 周。每次注射操作均要用电子秤称量实验组和对照组中每只金黄地鼠的体重，按实验组金 黄地鼠的总体重配制所需的致癌诱导液，按1公斤金黄地鼠体重1次使用IOmg BOP计算实 验组中各金黄地鼠该次注射致癌诱导液的剂量。按照对照组金黄地鼠的总体重准备所需的 0. 9%生理盐水，按IOOg金黄地鼠体重使用Iml 0. 9%生理盐水计算对照组中各金黄地鼠 该次注射0. 9%生理盐水的剂量。注射停止后正常饲养23周，实验组中的叙利亚金黄地鼠即成为胰腺癌动物模型。实施例21、实验动物与材料、设备实验动物实施例1构建的金黄地鼠胰腺癌动物模型。水合氯醛购自湖南科伦药业股份有限公司超导MR成像仪型号1.5T，美国GM公司生产。2、实验方法对实施例1构建的金黄地鼠胰腺癌动物模型进行常规横断面、冠状面核磁共振扫 描，操作如下(1)术者带无菌手套，用Iml无菌注射器吸取麻醉用药物水合氯醛0.45ml (—只模 型鼠的剂量)，对实验组的模型鼠行腹腔注射。(2)将麻醉效果良好的模型鼠放入小鼠专用动物实验线圈，取仰卧位，头先进。(3)用超导MR成像仪对模型鼠进行核磁共振扫描，扫描序列及参数横断面 SET Iff I, FRFSE T2WI ；冠状面:SE T Iff I, FRFSE T2WL· 层厚:2mm ；层距0. 5mm ； FOV :6X6mm ； 矩阵256 X 192。(4)扫描结束后，将核磁 振扫描(MRI)图像传至工作站进行测量。
核磁共振扫描(MRI)显示，肿瘤位于胰腺脾叶，胃、脾、左肾之间，大小约 12mmX18mmX20mm，部分边界欠清晰，信号不均勻，TlWI呈等、低混杂信号，T2WI呈等、高混杂 信号(见图IA-图1D)。实施例3实例2结束后，取出模型鼠10只，脱白法处死。术者带无菌手套，持手术剪，镊子， 经模型鼠腹部纵行正中切口剖腹，暴露出的胰腺肿瘤见图2。完整取下胰腺及肿瘤，波恩式液(Bouin液，购于上海杰美基因医药科技有限公 司)固定，石蜡包埋，切片，HE染色，IOx物镜观察(放大倍数=442)，如图3所示癌性导 管不完整，细胞部分极性消失，核异型、浓染，核浆比例增大，见核分裂，杯状细胞化生，间质 内纤维组织增生。病理诊断为胰腺高分化导管腺癌。对照组金黄地鼠按照实例2和实例3的方法进行操作，MR图像和解剖后组织学观 察均未发现胰腺肿瘤形成。
权利要求
一种用于核磁共振研究的金黄地鼠胰腺癌动物模型构建方法，其特征在于所用动物为金黄地鼠，所用致癌诱导物质为N 亚硝基双(2 氧丙基)胺，构建操作将所述致癌诱导物质N 亚硝基双(2 氧丙基)胺用生理盐水配制成浓度为1mg/ml的致癌诱导液，按1公斤金黄地鼠体重1次使用10mg N 亚硝基双(2 氧丙基)胺计算每次注射致癌诱导液的剂量，将所述致癌诱导液按计算的剂量于金黄地鼠背部行皮下注射，每周一次，连续注射至少7周，停止注射致癌诱导液后正常饲养至少23周，即形成金黄地鼠胰腺癌动物模型。
2.根据权利要求1所述的金黄地鼠胰腺癌动物模型构建方法，其特征在于所述金黄地 鼠为叙利亚金黄地鼠，8周龄，雌性，饲养环境SPF级动物实验室。
3.根据权利要求1或2所述的金黄地鼠胰腺癌动物模型构建方法，其特征在于配制致 癌诱导液所用生理盐水中，NaCl的质量浓度为0. 9%。
全文摘要
一种用于核磁共振研究的金黄地鼠胰腺癌动物模型构建方法，所用动物为金黄地鼠，所用致癌诱导物质为N-亚硝基双(2-氧丙基)胺，构建操作将所述致癌诱导物质N-亚硝基双(2-氧丙基)胺用生理盐水配制成浓度为1mg/ml的致癌诱导液，按1公斤金黄地鼠体重1次使用10mg N-亚硝基双(2-氧丙基)胺计算每次注射致癌诱导液的剂量，将所述致癌诱导液按计算的剂量于金黄地鼠背部行皮下注射，每周一次，连续注射至少7周，停止注射致癌诱导液后正常饲养至少23周，即形成金黄地鼠胰腺癌动物模型。
文档编号A61K31/655GK101919867SQ20101908702
公开日2010年12月22日 申请日期2010年2月11日 优先权日2010年2月11日
发明者张小明, 杨正伟, 沈成义, 蒲宇, 马青松 申请人:川北医学院附属医院