专利名称：牛角瓜叶提取物的制备及抗肿瘤药物的应用的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及中医药技术领域，尤其是一种牛角瓜叶提取物的制备及抗肿瘤药物的应用。
背景技术：
牛角瓜叶为萝蘑科(Ascl印iadaceae)，属(Calotropis)植物牛角瓜(Calotropis gigantea L.)的叶。牛角瓜属约有6种，广泛分布于亚洲和非洲的热带亚热带地区。我国盛 产其中的两种，一种为牛角瓜(Calotropis giganteal.)，分布于海南、广东、四川和云南， 另一种为白花牛角瓜(CalotropisproceraL.)，在广东、广西、云南有零星分布。牛角瓜属植物，在民间具有广泛的药用价值，其根、茎、叶、果及各部位的白色汁液 均可药用，具有抗菌、消炎、驱虫、化痰、解毒等作用，用于哮喘、咳嗽、麻疯病、溃疡、痔疮、肿 瘤等疾病的治疗。国外学者对牛角瓜的化学成分进行了深入系统的研究，从其根和叶中已 经分离鉴定了 10多种强心苷，强心苷大多显示强抗肿瘤活性(《Chemical Pharmaceutical Bulletin)), 1998. 46B 528 ； ((Journal of Natural Products)), 2006,69 (18) :1249)。国内， 仅中国热带农业科学院热带生物技术研究所报道了从牛角瓜中分离得到的3个强心苷及 其体外抗肿瘤活性(《Modern Pharmaceutical Research)), 2008,1 (2) :49·)。中国专利公 开号CN1414010A公开了 “一种治疗癌症的强心苷类化合物及其制备方法”涉及牛角瓜根 中强心苷类化合物提取工艺等；专利“牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物中的新应用”涉 及牛角瓜根乙醇提取物经大孔树脂纯化的强心苷提取物的抗肿瘤用途；专利“牛角瓜中的 强心苷化合物的抗肿瘤新用途”涉及牛角瓜根中分离得到的强心苷化合物的抗肿瘤用途。 这些专利均是以牛角瓜根为研究对象的，而未涉及对牛角瓜叶的研究和应用，有关牛角瓜 叶的提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，至今未见文献报道和专利公开。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足而提供的一种牛角瓜叶提取物的制备及抗 肿瘤药物的应用，它采用低极性有机溶剂从牛角瓜叶中回流提取具有抗肿瘤的活性物质， 应用于抗肿瘤的治疗作用显著，为肿瘤治疗提供了一种新的药物。本发明的目的是这样实现的一种牛角瓜叶提取物的制备，其特点是以牛角瓜叶 为原料，经提取、浓缩得具有强心苷活性组分的牛角瓜叶提取物，具体制备包括下述步骤a、一次提取以甲醇或低极性有机溶剂为提取溶剂、干燥的牛角瓜叶为原料，经粉碎后置于提 取罐，用提取溶剂回流提取2 3次，提取液经减压回收溶剂后，将提取物分散在水中成悬 浊液，然后经低极性有机溶剂进行萃取，剩下的水液经浓缩后得具有强心苷活性组分的牛 角瓜叶提取物A，提取溶剂与原料按重量比为8 10 1，回流提取时间为2小时/次；b、二次提取将上述提取后的药渣，用甲醇提取2 3次，提取液经减压回收甲醇后得具有强心苷活性组分的牛角瓜叶提取物B，甲醇与药渣按重量比为8 10 1，提取时间为2小时/次。所述低极性有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷或正己烷。一种牛角瓜叶提取物制备抗肿瘤药物的应用，其特点是将具有强心苷活性组分的 牛角瓜叶提取物按常规的制剂工艺添加适量的药用辅料应用在抗肿瘤药物中，制成片剂、 胶囊、颗粒剂、滴丸剂、口服液或注射剂对肿瘤具有一定的抑制。本发明与现有技术相比具有抗肿瘤的活性物质提取方便，操作简单，成本低，对于 抗肿瘤的治疗作用显著，为肿瘤治疗提供了一种新的药物。
图1为提取物A对K562和293细胞生长影响曲线2为提取物A对K562和293细胞生长影响曲线3为提取物B对K562和293细胞生长影响曲线4为提取物B对KB和PC-3细胞生长影响曲线图
具体实施例方式下面以具体制备和应用的实施例对本发明作进一步的详细说明。实施例1a、一次提取取牛角瓜叶干燥品5. OKg为原料，40. OKg的正己烷为提取溶剂，牛角瓜叶经粉碎 后置于提取罐，用提取溶剂回流提取3次，2小时/次，提取液经减压回收正己烷后，将提取 物分散在水中成悬浊液，然后经二氯甲烷有机溶剂萃取，剩下的水液经浓缩后得具有强心 苷活性组分的牛角瓜叶提取物A。b、二次提取将上述提取后的药渣，用30. OKg的甲醇提取2次，2小时/次，提取液经减压回收 甲醇后得具有强心苷活性组分的牛角瓜叶提取物B。c、制剂将上述具有强心苷活性组分的牛角瓜叶提取物A或B加入适量淀粉和微晶纤维素 混勻，然后制成1000片后干燥即可。实施例2a、一次提取取牛角瓜叶干燥品2. 5Kg为原料，20. OKg的甲醇为提取溶剂，牛角瓜叶经粉碎后 置于提取罐，用提取溶剂回流提取2次，2小时/次，提取液经减压回收甲醇后，将提取物分 散在水中成悬浊液，然后经正己烷萃取，剩下的水液经浓缩后得具有强心苷活性组分的牛 角瓜叶提取物A。b、制剂将上述具有强心苷活性组分的牛角瓜叶提取物A加入适量乳糖和羧甲基淀粉钠 混勻，用聚维酮K30制成1000粒，干燥、整粒后装入胶囊即可。采用MTT法测试了本发明的牛角瓜叶提取物A和提取物B进行慢性骨髓性白血病细胞K562、人口腔表皮癌细胞KB、前列腺癌细胞PC-3及人肾上皮细胞癌293细胞株的体外 抑瘤活性筛选试验，活性测试方法如下(1)将牛角瓜叶提取物A 95mg溶于0.2ml DMSO (475mg/ml)中，牛角瓜叶提取物 B144mg溶于0.2ml DMSO (720mg/ml)中，依次配成8个5倍稀释的浓度，为书写方便，最高浓 度定为1，其它7个深度按照浓度的减低依次定为2、3、4、5、6、7、8。(2)PC_3细胞需要用F12DMEM加10 % FBS培养，各细胞用台盼蓝排染法计数，以 5000/孔或10000/孔的细胞密度接种于96孔板中，每孔加细胞悬液99ul，接种于96孔板 &B2-B11、C2-C11、D2-D11、E2-E11、F2-F11、G2-G11，A2-A11 只加培养液不加细胞，作为调 零孔；其余孔加入等体积PBS，以避免培养基蒸发致结果误差增大。(3)细胞培养24小时后加药，每孔加Iul药液，每个浓度6个复孔。(4)细胞在37°C，100%相对湿度，5% CO2的培养箱中连续培养24小时，然后每孔 加入IOul MTT (PBS配制)，继续培养4小时。(5)离心，吸去上清。每孔加入150ul DMSO,轻轻震荡，15分钟后在570nm波长处 测OD值，按下列公式计算生长抑制率生长抑制率(％ )=(用药组平均OD值/阴性对照组平均OD值)X %(6)以样品浓度为横坐标，以抑制率为纵坐标，作图求出抑制率为50%时样品的 浓度IC5tl，样品活性结果即以半数抑制浓度(IC50)表示。牛角瓜叶提取物A和提取物B对K562、KB、PC-3,293肿瘤细胞株的毒性作用见下 表1，表1
细胞系 来源IC50 (ug/ml)
A B
~HB人上皮性口腔癌 3. 330. 401
293人肾上皮细胞系 0. 3153.45
PC-3 人前列腺癌细胞 2. 047. 28 K-562 人白血病0. 0880.044以 IC50 < 20ug/ml 为有效参阅附图1 附图4，牛角瓜叶提取物A和提取物B对不同肿瘤细胞生长曲线的影 响，本发明的提取物A和提取物B经体外抗肿瘤活性筛选，统计处理结果显示具有较好的抗 肿瘤活性。以上只是对本发明作进一步的说明，并非用以限制本专利，凡为本发明等效实施， 均应包含于本专利的权利要求范围之内。
权利要求
一种牛角瓜叶提取物的制备，其特征在于以牛角瓜叶为原料，经提取、浓缩得具有强心苷活性组分的牛角瓜叶提取物，具体制备包括下述步骤a、一次提取以甲醇或低极性有机溶剂为提取溶剂、干燥的牛角瓜叶为原料，经粉碎后置于提取罐，用提取溶剂回流提取2～3次，提取液经减压回收溶剂后，将提取物分散在水中成悬浊液，然后经低极性有机溶剂进行萃取，剩下的水液经浓缩后得具有强心苷活性组分的牛角瓜叶提取物A，提取溶剂与原料按重量比为8～10∶1，回流提取时间为2小时/次；b、二次提取将上述提取后的药渣，用甲醇提取2～3次，提取液经减压回收甲醇后得具有强心苷活性组分的牛角瓜叶提取物B，甲醇与药渣按重量比为8～10∶1，提取时间为2小时/次。
2.根据权利要求1所述牛角瓜叶提取物的制备，其特征在于所述低极性有机溶剂为二 氯甲烷、氯仿或正己烷。
3.一种牛角瓜叶提取物制备抗肿瘤药物的应用，其特征在于将具有强心苷活性组分的 牛角瓜叶提取物按常规的制剂工艺添加适量的药用辅料应用在抗肿瘤药物中，制成片剂、 胶囊、颗粒剂、滴丸剂、口服液或注射剂对肿瘤具有一定的抑制。
全文摘要
本发明公开了一种牛角瓜叶提取物的制备及抗肿瘤药物的应用，其特点是以牛角瓜叶为原料，经提取、浓缩得具有强心苷活性组分的牛角瓜叶提取物，将提取物按常规的制剂工艺，制成片剂、胶囊、颗粒剂、滴丸剂、口服液或注射剂在抗肿瘤药物的应用。本发明与现有技术相比具有抗肿瘤的活性物质提取方便，操作简单，成本低，对于抗肿瘤的治疗作用显著，为肿瘤治疗提供了一种新的药物。
文档编号A61K36/27GK101829173SQ20101019050
公开日2010年9月15日 申请日期2010年6月1日 优先权日2010年6月1日
发明者王玉芹, 肖繁花, 黄惠民 申请人:黄惠民;王玉芹;肖繁花