专利名称：脂肪酰甘氨酰甘氨酰组氨酸-铜(Ⅱ)配合物的制备及应用的利记博彩app
技术领域：
本发明属于生物医药领域，涉及SOD模拟物一铜(II)配合物及其制备方法，尤其 涉及铜配合物构建以及鉴定方法。本发明还涉及到铜配合物在SOD样活性中的应用。
背景技术：
自由基的定义是指任何包含一个未成对电子的原子或原子团。生物体系中自由基 广泛存在，主要是氧自由基，例如超氧阴离子自由基(02__)、羟自由基(0H)、脂氧自由基、二 氧化氮和一氧化氮自由基。在正常生命过程中自由基为生命所必需，大量实验表明，自由基 参与了许多重要的生命过程。自由基的特点可以总结为三点，一是反应性强，二是具有顺磁 性，三是寿命短。在正常情况下，人体内存在大量的抗氧化剂，如维生素C、维生素E、胡萝卜素，超 氧化物歧化酶、过氧化氢酶等。它们能清除自由基，使体内的自由基处于不断产生与清除 的动态平衡中，但当自由基过多或清除过慢时，动态平衡被打乱，就会对生物体产生一系列 损害。自由基对体内生物大分子的损伤主要是对维持生命活动具有重要作用的蛋白质和 DNA的损伤。科学家认为自由基与衰老、癌症、胃炎、消化性溃疡、高血压、动脉粥样硬化、缺 血_灌注再损伤、帕金森、休克、糖尿病等疾病都息息相关。超氧化物歧化酶(SOD)是一类广泛存在于动物、植物和微生物多种生物体内的金 属酶，该酶是生物体内一种重要的氧自由基清除剂，其作用在于催化体内超氧阴离子自由 基02-_的歧化反应。SOD结构如式1所示，为每个铜原子除分别与4个组氨酸残基(His44， 46,61,118)的咪唑氮配位外，还与一轴向水分子形成远距离的第5配位，Zn则与3个组氨 酸残基(His61，69，78)和1个天冬氨酸(D81)配位。Cu、Zn共同连接组氨酸61组成“咪唑 桥”结构。研究证明，Cu和Zn与酶蛋白分子中的组氨酸残基咪唑环上的N原子之间的配位关 系以及Cu和Zn之间的“咪唑桥”连接部位对酶活性的发挥是至关重要的。而锌离子在催 化过程中不起作用，只起到稳定酶的作用，Cu2+则与酶的活性有直接关系。Cu，Zn-SOD的三 维结构由衍射晶体结构分析得到每个酶分子由两个亚基通过非共价健的疏水相互作用缔 合成二聚体，肽链内部由半胱氨酸的巯基(-SH)构成的二硫桥对业基缔合起重要作用。每 个亚基活性中心金属的配位结构如式2所示，由两个亚基组成的S0D活性部位正好是以Cu 为中心的一个“疏水口袋”。这一疏水微环境有利于反应的进行，口袋边有一带正电的精氨 酸残基Argl41，它可以在催化过程中提供质子，使酶催化反应得以进行并使催化速度大为 加快，同时Argl41带正电荷，可以引导02__进入活性中心。其他氨基酸对S0D活性的影响
应该从整个酶结构来考虑。 式1.、SOD活性中心金属配位结构 式2、Cu，Zn_S0D酶活性中心结构目前，对SOD模拟物的研究主要是对合成SOD的微环境进行改造。SOD活性是由 于其活性中心处于酶的疏水微环境之中，此环境对SOD催化活性的影响主要体现在以下几 方面1)存在静电导引、定位作用。酶表面带负电荷，而在活性中心附近带正电荷，引导02__ 顺利进入活性中心，定位到中心原子铜原子上。2)由于微环境具有疏水性和介电常数低的 特点，02__可比较容易地去溶剂化而参与反应。3)能够提供质子，质子是催化反应中必需的 反应物。因此给中心模拟物提供一个疏水微环境将会大大提高其S0D样的活性。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种具有两亲性的配体化合物及其制备方法。本发明的目的之二是提供一种与Cu，Zn-S0D具有相似结构的铜(II)配合物及其 制备方法。本发明的目的之三是提供铜(II)配合物在S0D样活性中的应用。本发明所述的具有两亲性的系列配体化合物，其分子式为CnH2n+1C0-Gly-Gly-His-0H,其中，n代表不同长链烷基脂肪酸的碳数，优选为7、9、11、13或15。本发明所述的具有两亲性的系列配体化合物，其制备方法为将不同长链烷基脂肪酸分别与Gly-Gly-His进行缀合，即得。本发明所述的具有两亲性的系列配体化合物，其具体的制备方法为将不同长链烷基脂肪酸CH3(CH2)6C00H、CH3(CH2)8COOH、CH3(CH2)10COOH、CH3 (CH2) 12C00H、CH3 (CH2) 14C00H分别与保护基保护的Gly-Gly-His偶联，脱去保护基，即得配 体化合物。本发明还提供一种与Cu，Zn-SOD具有相似结构的铜(II)配合物，即 Cu-(CnH2n+1CO-Gly-Gly-His)4, (n = 7,9,11,13，15)。本发明所述的铜(II)配合物粒径为290 450nm，Zeta电位为-23 _37mV。本发明所述铜(II)配合物，其制备方法为将本发明所述具有两亲性的系列配体化合物分别与Cu2+进行配合，合成了以铜 (II)为配位中心离子，不同长链烷基脂肪酸和Gly-Gly-His肽缀合物为配体的配合物，即 Cu-(CnH2n+1CO-Gly-Gly-His)4, (n = 7,9,11,13，15)。本发明所述铜(II)配合物，具体的制备方法为将本发明所述具有两亲性的系列配体化合物，即CnH2n+1C0-Gly-Gly-His-0H， (n = 7,9,11,13,15),分别与Cu2+进行配合，合成了以铜(II)为配位中心离子， 不同长链脂肪酸和Gly-Gly-His肽缀合物为配体的配合物，即铜(II)配合物 Cu-(CnH2n+1CO-Gly-Gly-His)4, (n = 7,9,11,13，15)。本发明所述铜(II)配合物，更加具体的制备方法为(1)按照常规技术合成保护基保护的Gly-Gly-His ；(2)将保护基保护的 Gly-Gly-His 与 CH3(CH2)6C00H、CH3(CH2)8C00H、 CH3 (CH2) 1(1COOH、CH3 (CH2) 12COOH或CH3 (CH2) 14COOH偶联，脱去保护基，即得具有两亲性的系列 配体化合物:CnH2n+1C0-Gly-Gly-His-0H, (n = 7,9,11,13，15)；(3)将上述具有两亲性的系列化合物作为配体与Cu2+进行配合，合成了以铜(II) 为配位中心离子，不同链长的烷基脂肪酸和Gly-Gly-His肽缀合物为配体的配合物，即铜 (II)配合物Cu-(CnH2n+1CO-Gly-Gly-His)4，(n = 7,9,11,13，15)。以上所述的Cu2+是指含有Cu2+的物质如CuS04溶解或熔融后得到的Cu2+。因此本 发明所述的配合反应，加入的反应物为含有Cu2+的物质。所述保护基是指常规的羟基或羧基保护基，如苯甲酰基等。许多SOD的模拟物即铜与肽的配合物具有消除超氧阴离子自由基的活性，但是 SOD样活性是由于其活性中心处于酶的疏水微环境之中，因此给SOD模拟物提供一个疏水 微环境将会大大提高其SOD样的活性。所以本发明将不同长链烷基脂肪酸与Gly-Gly-His 肽段相缀合，对其进行疏水性修饰，合成了具备两亲性的配体化合物，之后，将不同长链烷 基脂肪酸和Gly-Gly-His肽的缀合物分别与Cu2+进行络合，合成了以铜(II)为配位中心 离子，不同长链烷基脂肪酸和Gly-Gly-His肽缀合物为配体的配合物。这样配体上缀合的 不同长链烷基脂肪酸为铜配合物提供类似酶作用的疏水微环境，使得具S0D样活性大大提 尚o本发明以NBT还原法评价了制备的铜配合物清除超氧阴离子自由基(02__)的活 性，结果显示制备的本发明的铜(II)配合物比对照组具有更优异的清除超氧阴离子自由 基的活性。本发明还包括，所述的铜(II)配合物在制备具有清除超氧自由基作用的药物中的应用。所述的铜(II)配合物所制备成的纳米级粒子具有清除超氧自由基的用途。
所述的具有两亲性的配体化合物在制备具有清除超氧自由基作用的药物中的应用。所述的具有两亲性的配体化合物所制备成的纳米级粒子具有清除超氧自由基的 用途。在应用的过程中还将包括将本发明的铜(II)配合物制备成适合服用的药物组合 物，如适合口服的片剂，胶囊，口服液等，也可制备成非口服剂型如注射剂，外用制剂等，最 好制备成纳米粒制剂。通过本发明所述的铜(II)配合物所制备成的纳米级粒子在清除超氧自由基中有 很好的效果。
具体实施例方式为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它 们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。实施例1、Boc-Gly-Gly-OH 的制备l)Boc-Gly_0Su 的制备将0. 875g (5. Ommol) Boc-Gly-OH溶于15ml无水THF，往得到的溶液中加入 0. 819g(5. 5mmol)N-甲基琥珀酰亚胺(HOSu)，并使完全溶解。冰浴下，加入1. 34g(6. 5mmol) 用无水THF溶解的二环己基羰二亚胺(DCC)。冰浴下搅拌lh，再室温搅拌4h，TLC (氯仿/ 甲醇，10 1)显示Boc-Gly-OH消失。滤除二环己基脲(D⑶)，旋干THF，残留物用50ml乙 酸乙酯溶解，再次过滤DOT。得到的溶液依次用饱和NaHC03水溶液洗三次、饱和NaCl水溶 液洗三次。乙酸乙酯层用无水Na2S04干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得到1. 24g(81% )标 题化合物，为白色固体。2)Boc-Gly-Gly-0H 的制备将白色固体1. 53g(5. Ommol) Boc-Gly-OSu用15ml无水THF溶解得到反应液(I)， 将0. 375g(5. Ommol)Gly溶于15ml蒸馏水中得到反应液(II)。把反应液(II)加入反应液 ⑴中，冰浴下用N-甲基吗啉(NMM)调pH至8-9。过夜反应后，TLC(氯仿/甲醇，10 1) 显示Boc-Gly-OSu消失。反应混合物用饱和KHS04调pH至7，旋干THF。残留物用饱和KHS04 调pH至2，用乙酸乙酯萃取三次。合并的乙酸乙酯层用饱和NaCl水溶液洗至中性，然后 用无水Na2S04干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得0. 882g(76% )标题化合物，为白色固体。 (ESI-MS(m/z) :231. 2[M-Hr，232. 3[Mr，463. 3[2M-HD实施例2、Tos His-OBzl 的制备将5g(32mmol)H-His-0H，6. 8g(36mmol)对甲苯磺酸及 7. 3g(38mmol)对甲苯磺 酰氯用90ml苯甲醇溶解，再加入32ml环己烷，油浴80°C下回流48h。反应溶液加入大量 乙醚有固体析出，经乙醚磨洗得到14g(100% )标题化合物，为白色固体。(ESI-MS(m/z) 246. 4[M+H]+，247. 5[M+2H]+)实施例3、Boc-Gly-Gly-His-OBzl 的制备将1. 16g(5. Ommol) Boc-Gly-Gly-OH 溶于 15ml 无水 THF，往得到的溶液 中加入0. 742g(5. 5mmol)N-羟基苯并三氮唑(HOBt)，并使完全溶解。冰浴下加入 1.34g(6. 5mmol)用无水THF溶解的二环己基羰二亚胺(DCC)得到反应液，待用。20分钟后把2. 17g(5. 0mmol)Tos "His-OBzl加入到反应液中，然后用N-甲基吗啉(NMM)调pH至8_9。 冰浴下搅拌lh，再室温搅拌12h，TLC (氯仿/甲醇，10 1)显示Boc-Gly-Gly-OH消失。滤 除二环己基脲(D⑶)，旋干THF，残留物用50ml乙酸乙酯溶解，再次过滤DOT，得到的溶液依 次用饱和NaHC03水溶液洗三次、饱和NaCl水溶液洗三次。乙酸乙酯层用无水Na2S04干燥、 过滤、滤液减压浓缩至干，得到2.30g(100%)粗产物，为黄色油状物。硅胶柱(氯仿/甲 醇，45 1)纯化后得0. 872g(38% )纯标题化合物，为白色固体。(Mp. 131. 7 132. 4°C ； [a ]25d = -0. 963 (cl, MeOH) ；ESI-MS (m/z) 460. 5 [M+H]482. 5 [M+Na]483. 5 [M+Na+H]+)实施例4、HC1 Gly-Gly-His-OBzl 的制备将0. 92g(2. 0mmol)Boc-Gly-Gly-His-0Bzl 溶解在 20ml 4mol/L 氯化氢-乙酸乙 酯溶液中，室温搅拌4小时，TLC(氯仿/甲醇，10 1)显示原料点消失，减压浓缩除去乙酸 乙酯，残留物反复加少量乙醚进行减压浓缩以除去氯化氢气。最后加少量乙醚将残留物研 磨成0. 767g(97% )标题化合物，为固体粉末，直接用于下一步反应。实施例5、C7H15C0-Gly-Gly-His-0H 的制备1) C7H15C0-Gly-Gly-His-0Bzl 的制备将0. 288g(2. Ommol) C7H15C00H溶于15ml无水THF，往得到的溶液中加入 0. 297g(2. 2mmol)N-羟基苯并三氮唑(HOBt)，并使完全溶解。冰浴下加入0. 536g(2. 6mmol) 用无水THF溶解的二环己基羰二亚胺(DCC)得到反应液，待用。20分钟后把 0. 791g(2. Ommol)HC1 Gly-Gly-His-OBzl加入到反应液中，然后用N-甲基吗啉(NMM)调 pH至8-9。冰浴下搅拌lh，再室温搅拌12h，TLC(氯仿/甲醇，10 1)显示C7H15C00H消 失。滤除二环己基脲(DCU)，旋干THF，残留物用50ml氯仿溶解，再次过滤DCU，得到的溶液 依次用饱和NaHC03水溶液洗三次、饱和NaCl水溶液洗三次。氯仿层用无水Na2S04干燥、 过滤、滤液减压浓缩至干，得到0.97g(100% )粗产物，为黄色油状物。硅胶柱(氯仿/甲 醇，35 1)纯化后得0. 368g(38% )纯标题化合物，为黄色固体。(Mp. 164. 1 165. 9°C ； [a ]25d = -3. 40 (cl, MeOH) ；ESI-MS (m/z) 486. 5 [M+H]508. 4 [M+Na]509. 5 [M+Na+H]+)2) C7H15C0-Gly-Gly-His-0H 的制备将3. 8mg(7. 8iimol)C7H15C0-Gly-Gly-His-0Bzl 置于 25ml 茄形瓶中，用适量乙醇 溶解，加入lmg Pd/C(5% )，通H2(0. 02Mba)，室温搅拌，(氯仿/甲醇，10 1)显示原料点 消失。滤除Pd/C，滤液减压浓缩至干，残留物反复用乙醚研磨，得3. Omg (99% )标题化合物， 为黄色固体。(Mp. 99. 3 100. l°C;[a ]25D =-3. 67(cl，Me0H) ；ESI-MS (m/z) 394. 4[M-H]_, 395. 2 [MD实施例6、C9H19C0-Gly-Gly-His-0H 的制备1) C9H19C0-Gly-Gly-His-0Bzl 的制备按照C7H15C0-Gly-Gly-His-0Bzl 的制备方法由 0. 344g(2. Ommol) C9H19C00H 和0. 791g(2. Ommol)HC1 Gly-Gly-His-OBzl制得标题化合物。硅胶柱纯化后得 0. 164mg(16% )纯标题化合物，为黄色固体。(Mp. 166. 2 168. 2°C ；[a ]25D = -0. 54(cl， MeOH) ；ESI-MS (m/z) 514. 2 [M+H]536. 4 [M+Na]537. 6 [M+Na+H]+)2) C9H19C0-Gly-Gly-His-0H 的制备按照C7H15C0-Gly-Gly-His-0H 的制备方法由 4. Omg (7. 8 i mol) C9H19C0-Gly-Gly-His-0Bzl 的制得 3. 2mg(99% )标题化合物，为黄色固体。(Mp. 108. 8
7111. 4°C ；[a]25D = -3. 80(cl,Me0H) ；ESI-MS(m/z) :422. 3[M-H]、423. 2[MD实施例7、CnH23C0-Gly-Gly-His-0H 的制备1) CnH23C0-Gly-Gly-His-0Bzl 的制备按照C7H15C0-Gly-Gly-His-0Bzl 的制备方法由 0. 400g (2. Ommol) CnH23C00H 和 0. 791g(2. Ommol)HC1 .Gly-Gly-His-OBzl 制得标题化合物。硅胶柱纯化后得0. 216g(20%) 纯标题化合物，为黄色固体。(Mp. 166. 6 167. 6°C;[a ]25d = -1. 73(cl，MeOH) ； ESI-MS (m/ z) :542. 6[M+H]+，543. 6[M+H]+，564. 6[M+Na]+，565. 6[M+Na+H]+)2) CnH23CO-Gly-Gly-His-OH 的制备按照C7H15CO-Gly-Gly-His_OH 的制备方法由 4. 2mg (7. 8 i mol) CnH23CO-Gly-Gly-His-OBzl 的制得 3. 4mg(98% )标题化合物，为黄色固体。(Mp. 113. 5 115. 5°C ；[a ]25D =-1. 20(cl，Me0H) ；ESI-MS (m/z) :450. 6 [M-H]、451. 5 [MD实施例8、C13H27CO-Gly-Gly-His-OH 的制备1) C13H27CO-Gly-Gly-His-OBzl 的制备按照C7H15CO-Gly-Gly-His-OBzl 的制备方法由 0. 456g(2. Ommol) C13H27C00H 和 0. 791g(2. Ommol)HC1 Gly-Gly-His-OBzl 制得标题化合物。硅胶柱纯化后得0. 228g(20%) 纯标题化合物,为黄色固体。(Mp. 159. 0 160. l°C;[a ]25d = -0. 30(cl，Me0H) ； ESI-MS (m/ z) :570. 4[M+H]+，571. 3[M+2H]+)2) C13H27CO-Gly-Gly-His-OH 的制备按照C7H15CO-Gly-Gly-His_OH 的制备方法由 4. 4mg (7. 8 i mol) C13H27CO-Gly-Gly-His-OBzl 的制得 3. 7mg (99 % )标题化合物，黄色固体。(Mp. 109 111. 8°C ；[a]25D = -1. 96(cl, MeOH) ；ESI-MS (m/z) :478. 5 [M-H]、479. 4 [MD实施例9、C15H31CO-Gly-Gly-His-OH 的制备1) C15H31CO-Gly-Gly-His-OBzl 的制备按照C7H15CO-Gly-Gly-His_OBzl 的制备方法由 0. 512g(2. Ommol)C15H31C00H 和 0. 791g(2. Ommol)HC1 'Gly-Gly-His-OBzl 制得标题化合物。硅胶柱纯化后得 0. 107g(9% ) 纯标题化合物，为黄色固体。(Mp. 142. 4 143. 7°C;[a ]25d = -4. 07 (cl，MeOH) ； ESI-MS (m/ z) :598. 6[M+H]+，599. 6[M+2H]+)2) C15H31CO-Gly-Gly-His-OH 的制备按照C7H15CO-Gly-Gly-His_OH 的制备方法由 4. 6mg (7. 8 i mol) C15H31CO-Gly-Gly-His-OBzl 的制得 4. 0mg(100% )标题化合物，为黄色固体。(Mp. 112. 2 ~ 111. 4°C ；[a]25D = -6. 07 (cl, MeOH) ；ESI-MS (m/z) :506. 6 [M-H]、507. 5 [MD实施例10、HC1 Gly-Gly-His-OHl)Boc-Gly-Gly-His_OH 的制备将3. 6mg(7. 8iimol)Boc-Gly-Gly-His-0Bzl 置于 50ml 茄形瓶中，用适量乙醇溶 解，加入lmg (1/((5%)，通112(0.021&￡1)，室温搅拌至原料点消失。滤除Pd/C、滤液减压浓 缩至干，残留物反复用乙醚研磨，得2. 9mg(100% )标题化合物，为无色油状物。2)HC1 Gly-Gly-His-OH 的制备将2.911^(7.81111101)80(；-617-617-见8-011溶解在511114mol/l 氯化氢-乙酸乙酯 溶液中，室温搅拌4小时至原料点消失，减压浓缩除去乙酸乙酯，残留物反复加少量乙醚进行减压浓缩以除去氯化氢气。最后加少量乙醚将残留物研磨成2. 4mg(99%)标题化合物， 白色固体。(Mp. 118. 6 120. 4°C;[a ]25D =-1. 48(cl，MeOH) ；ESI-MS(m/z) 268. 3[M-H]_, 269. 3 [MD实施例11、Cu-(C7H15C0-Gly-Gly-His-0H)4 的制备(a)将3. lmg(7.8iimol)C7H15C0-Gly-Gly-His-0H 溶于碳酸盐缓冲液(PH = 9. 16)中， 加入0.48ml CuS04储备液(4X10_3mol/L) (MCu2+ M配体=1 4)，用碳酸盐缓冲液(PH = 9. 16)定容至10ml，得到淡紫色透明溶液。Umax = 513nm ； e =86. YM^cnT1)实施例12、Cu- (C9H19C0-Gly-Gly-His-0H) 4 的制备(b)按照Cu-(C7H15C0-Gly-Gly-His-0H)4 的制备方法由 3. 3mg (7. 8 ii mol) C9H19C0-Gly_Gly-His-0H 和 0.48ml CuS04 储备液(4X 10_3mol/L)得到淡紫色透明溶液。 (入 max = 507nm ； e = 116. 7M_1cm_1)实施例13、Cu-(CnH23C0-Gly-Gly-His-0H)4 的制备(c)按照Cu-(C7H15C0-Gly-Gly-His-0H)4 的制备方法由 3. 5mg (7. 8 ii mol) CnH23C0-Gly-Gly-His-0H 和 0.48ml CuS04 储备液(4X l(T3mol/L)得到淡紫色透明溶液。 (入 max = 510nm ； e = 93. 3M_1cm_1)实施例14、Cu- (C13H27C0-Gly-Gly-His-0H) 4 的制备(d)按照Cu-(C7H15C0-Gly-Gly-His-0H)4 的制备方法由 3. 7mg (7. 8 y mol) C13H27C0-Gly-Gly-His-0H 和 0.48ml CuS04 储备液(4X 10_3mol/L)得到淡紫色透明溶液。 (入 max = 514nm ； e = 110. OifW1)实施例15、Cu- (C15H31CO-Gly-Gly-His-OH) 4 的制备(e)按照Cu-(C7H15CO-Gly-Gly-His_OH)4 的制备方法由 4. Omg (7. 8 ii mol) C15H31CO-Gly-Gly-His-OH 和 0.48ml CuS04 储备液(4X l(T3mol/L)得到淡紫色透明溶液。 (入 max = 520nm ； e = 106. 7M_1cm_1)实施例16、Cu-(Gly-Gly-His-OH)4 的制备(f)按照Cu-(C7H15CO-Gly-Gly-His_OH)4 的制备方法由 2. 4mg (7. 8 ii mol) HC1 .Gly-Gly-His-OH和 0. 48ml CuS04储备液(4X l(T3mol/L)得到淡紫色透明溶液。(A max =525nm ； e = 113. 3M_1cm_1)实施例17、铜配合物的粒度测定样品配制配置铜配合物a f (3. 8X l(T4m0l/L)实验方法样品置于样品池中，用电位粒度仪测定其粒度，重复三次，取均值。实验结果见表1表1.铜配合物a f的粒径数据_Compound Particle size(nm)_a292.4b360.6c370. 1d307. 1
9 铜配合物a f为带有乳光的均一溶液，粒径分布集中在290nm 450nm之间。实施例18、铜配合物的Zeta电位测定样品配制配置铜配合物a f (3. 8X 10_4mOl/L)实验方法样品置于样品池中，用电位粒度仪在25°C下测定Zeta电位，重复三次， 取均值。实验结果见表2表2.铜配合物a f 的Zeta电位数据 铜配合物a f的Zeta电位在_23mV _37mV之间，粒子成负电性，具有一定的
稳定性。实施例19、铜配合物清除02__的活性评价实验方法黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系可以产生超氧阴离子自由基，其与NBT发生 反应生成紫色化合物，在560nm处可测得吸光度。在紫外循环恒温水浴(37士0.2) °C的条 件下，在样品池中加入500ul 1. 5mM的黄嘌呤溶液、500ul 1. 5mM的NBT溶液及适量的PBS， 之后加入不同浓度的配合物(上述实施例11-16)，在样品池中混勻，最后加入4ul 20mg/ml 的黄嘌呤氧化酶，使反应物总体积为3ml。混勻，20s后开始测定，在560nm条件下，利用UV 动力学模块，记录吸光度随时间的变化值，每30s读取一次吸光度，共读取300s。吸光度A 对时间 t 作图，由公式 inhibitions [(AA/At)Q-(AA/At)m]/(AA/At)QX100%得到 配合物不同浓度对02__的抑制率。用抑制率对浓度作图，得到半数抑制浓度IC5(I。实验结果 见表3表3.铜配合物1(5。值 e0. 785 士 0. 042**’##f4. 062 士 0. 309**_*对比于c组有显著意义(P < 0. 05)，**对比于c组有极显著意义(P < 0. 01)，## 对比于对照组f有极显著意义(P<0.01).结果显示铜配合物a f对黄嘌呤_黄嘌呤氧化酶体系产生超氧阴离子自由基都具有明显 的消除作用。通过结果分析可以看出其中a e比对照组f (实施例16)的IC5(I小很多，说明 a e消除超氧阴离子自由基的活性均明显高于对照组f，有极显著性差异(P < 0. 01)，说 明配体上缀合的不同长链烷基脂肪酸为铜配合物的中心提供了类似酶作用的疏水微环境， 使得其消除超氧阴离子自由基的活性大为提高；另外，IC50值的大小为a > b > c < d < e， 形成一个类似于波谷似的形式，在c组即Cu-(CnH23C0-Gly-Gly-HiS-0H)4处出现了 IC5(1值 的最小值，c组的IC5(I值明显低于a，b，e组，有极显著性差异(P < 0. 01)，c组的IC5(I值低 于d组，有显著性差异(P < 0. 05)，这说明以十二烷基脂肪酸修饰Gly-Gly-His肽为配体的 铜配合物消除超氧阴离子自由基的活性是最好的，其配体上缀合的十二烷基脂肪酸为铜配 合物的中心提供的疏水环境与天然SOD最为相近。
1权利要求
一种铜(II)配位化合物，其分子式为Cu-(CnH2n+1CO-Gly-Gly-His)4，其中n＝7、9、11、13或15。
2.权利要求1所述的铜(II)配合物的制备方法，其特征在于，由具有两亲性的系列配 体化合物CnH2n+1C0-Gly-Gly-His-0H与Cu2+进行配合制成，其中，n为7、9、11、13或15。
3.权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述CnH2n+1C0-Gly-Gly-His-0H化合物由 CnH2n+1C00H 与 Gly-Gly-His 进行缀合得到，其中 n = 7、9、11、13 或 15。
4.权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述CnH2n+1C00H化合物，选自 ch3 (ch2) 6cooh、ch3 (ch2) 8cooh、ch3 (ch2) 10cooh、ch3 (ch2) 12cooh 或 ch3 (ch2) 14cooh。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(1)按照常规技术合成保护基保护的Gly-Gly-His；(2)将保护基保护的Gly-Gly-His与CnH2n+1C00H偶联，脱去保护基，即得具有两亲性的 系列配体化合物；其中n = 7、9、11、13或15 ；(3)将上述具有两亲性的系列化合物作为配体与Cu2+进行配合。
6.具有两亲性的系列配体化合物，分子式为CnH2n+1C0-Gly-Gly-His-0H，其中，n为7、 9、11、13 或 15。
7.权利要求1所述的铜(II)配合物在制备具有清除超氧自由基作用的药物中的应用。
8.权利要求1所述的铜(II)配合物所制备成的纳米级粒子具有清除超氧自由基的用途。
9.权利要求6所述的具有两亲性的配体化合物在制备具有清除超氧自由基作用的药 物中的应用。
10.权利要求6所述的具有两亲性的配体化合物所制备成的纳米级粒子具有清除超氧自由基的用途。
全文摘要
本发明属于生物医药领域，涉及脂肪酰甘氨酰甘氨酰组氨酸-铜(Ⅱ)配合物的制备及应用。本发明将正八，十，十二，十四，十六烷基脂肪酸分别与Gly-Gly-His肽段相缀合，对其进行疏水性修饰，合成了具备两亲性的不同长链脂肪酸和Gly-Gly-His肽缀合物，即配体化合物CnH2n+1CO-Gly-Gly-His-OH，(n＝7，9，11，13，15)。之后，将不同长链脂肪酸和Gly-Gly-His肽的缀合物分别与Cu2+进行配合，合成了以铜(Ⅱ)为配位中心离子，不同长链脂肪酸和Gly-Gly-His肽缀合物为配体的配合物，即铜配合物Cu-(CnH2n+1CO-Gly-Gly-His)4，(n＝7，9，11，13，15)。
文档编号A61K38/06GK101857632SQ20101016895
公开日2010年10月13日 申请日期2010年5月12日 优先权日2010年5月12日
发明者崔国辉, 崔纯莹, 王欣 申请人:首都医科大学