专利名称：一氧化氮供体型法尼基硫代水杨酸衍生物、其制备方法及其医药用途的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及药物领域，具体涉及一类一氧化氮供体型法尼基硫代水杨酸衍生物及其药学上可接受的盐，它们的制备方法，含有这些衍生物的药用组合物以及它们的医药用途，特别是在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
全反式法尼基硫代水杨酸(简称FTA，商品名Salirasib)作为新的基于法尼基转移酶的Ras蛋白抑制剂，能够竞争性取代F-Ras和F-Ras突变蛋白与半乳凝素结合，抑制由Ras引发下游信号通路(包括Raf和P13K信号通路)和mTOR(肿瘤发生的刺激器，它能够依靠或者独立地打开P13K信号通路)，从而抑制肿瘤细胞的生长。研究表明，FTA可以抑制多种肿瘤(脑胶质瘤、肝癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、结肠癌等)细胞增殖及迁移(Haklai，R.；Elad-Sfadia，G.；Egozi，Y.et al.Cancer Chemother Pharmacol，2008，61(1)89-96；Tsimberidou，A.M.；Rudek，M.A.；Hong，D.et al.Cancer Chemother Pharmacol，2009，65(2)235-241；Zundelevich，A.；Elad-Sfadia，G.；Haklai，R.et al.Mol Cancer Ther，2007，6(6)1765-1773)。目前FTA治疗肺癌和胰腺癌的II期临床研究正在进行中。
法尼基硫代水杨酸(FTA，Salirasib) 一氧化氮(NO)是哺乳动物体内重要的信使物质及效应分子。近年来，NO在肿瘤的发生、发展和死亡中的作用已成为肿瘤研究与治疗的热点之一(Mocellin S.Curr Cancer DrugTargets，2009，9(2)214-236；Coulter JA，McCarthy HO，Xiang J，et al.Nitric Oxide，2008，19(2)192-198)。大量研究表明，体内持续低浓度的NO可以促进细胞的生长，抑制细胞凋亡；而高浓度的NO则产生细胞毒性，诱导肿瘤细胞凋亡，阻止肿瘤细胞的扩散和转移(Huerta S，Chilka S，Bonavida B.Int J Oncol，2008，33(5)909-927)。
NO供体是指一类在体内经酶或非酶作用释放一定量NO的化合物。呋咱氮氧化物(Furoxan)是一类重要的NO供体，由其产生的高浓度NO具有抗肿瘤活性(Chen L，Zhang Y，Kong X，et al.J Med Chem，2008，51(15)4834-4838)。
为获得比FTA抗肿瘤活性更优的化合物，我们开展了FTA的结构修饰研究。本发明公开了一类具有药用价值的呋咱氮氧化物类NO供体型FTA衍生物及其药学上可接受的盐，目前尚未见对此类化合物的任何报道。
发明内容
本发明首次公开了一类具有抗肿瘤活性的呋咱氮氧化物类NO供体型FTA衍生物及其药学上可接受的盐、其制备方法及其医药用途。药理实验结果表明，本发明的FTA衍生物能保留FTA的Ras蛋白抑制活性，同时释放高浓度NO，诱导细胞凋亡，增强对癌细胞增殖的抑制作用，较FTA具有更优良的抗肿瘤活性，因此，该类化合物可能适用于治疗临床上多种恶性肿瘤。
本发明公开的新化合物是通式I、II所示的FTA衍生物及其药学上可接受的盐
通式I中X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)CH2-，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-PhCH2-，-(CH2CH2OH)CH2CH2-，-(CH2)2NH(CH2)2-，-(CH2)2NBoc(CH2)2-，-(CH3)CH2CH2-，-(CH2CH2)2NCH2CH2-，-(CH2CH2)2CH(CH2)n-，n＝0～2，-(CH2CH2CH2)CHCH2-，-CH2CH＝CHCH2-或-CH2C≡CCH2-；
通式II中-NH-A-CO-代表甘氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、L-或D-型丙氨酸、L-或D-型缬氨酸、L-或D-型亮氨酸、L-或D-型异亮氨酸、L-或D-型甲硫氨酸、L-或D-型半胱氨酸、L-或D-型苯丙氨酸、L-或D-型酪氨酸、L-或D-型色氨酸、L-或D-型精氨酸、L-或D-型脯氨酸、L-或D-型组氨酸残基；X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)CH2-，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-PhCH2-，-(CH2CH2OH)CH2CH2-，-(CH2)2NH(CH2)2-，-(CH2)2NBoc(CH2)2-，-(CH3)CH2CH2-，-(CH2CH2)2NCH2CH2-，-(CH2CH2)2CH(CH2)n-，n＝0～2，-(CH2CH2CH2)CHCH2-，-CH2CH＝CHCH2-或-CH2C≡CCH2-。
本发明优选的化合物为通式I中所示的FTA衍生物及其医学上可接受的盐X代表-O-，-N-或-NH-；R 代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-(CH2CH2OH)CH2CH2-，-(CH2)2NH(CH2)2-，-(CH2)2NBoc(CH2)2-，-(CH3)CH2CH2-，-(CH2CH2)2CH-，-(CH2CH2)2NCH2CH2-，-(CH2CH2CH2)CHCH2-，-CH2CH＝CHCH2-或-CH2C≡CCH2-。
本发明优选的化合物为通式II中所示的FTA衍生物及其医学上可接受的盐-NH-A-CO-代表甘氨酸、β-丙氨酸、L-或D-型丙氨酸、L-或D-型苯丙氨酸、L-或D-型脯氨酸、L-或D-型亮氨酸残基；X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-CH2CH＝CHCH2-或-CH2C≡CCH2-。
本发明进一步优选的化合物为通式I中所示的FTA衍生物及其医学上可接受的盐X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-(CH2CH2OH)CH2CH2-，-(CH2)2NH(CH2)2-，-(CH2)2NBoc(CH2)2-，-(CH3)CH2CH2-，-(CH2CH2)2NCH2CH2-，-(CH2CH2)2CH-，-(CH2CH2CH2)CHCH2-或-CH2C≡CCH2-； 本发明进一步优选的化合物为通式II中所示的FTA衍生物及其医学上可接受的盐 -NH-A-CO-代表甘氨酸、β-丙氨酸、L-丙氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸或L-亮氨酸残基；X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-或-CH2C≡CCH2-。
具体的讲，通式I、II中所示的FTA衍生物优选自下列化合物 N-{2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙基}法尼基硫代水杨酸酰胺 (化合物编号I1，下同) N-{[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}哌嗪基法尼基硫代水杨酸亚酰胺(I2) {4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔基}法尼基硫代水杨酸丁酯(I3) N-{4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]哌啶基}法尼基硫代水杨酸亚酰胺(I4) N-{3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙基}法尼基硫代水杨酸酰胺(I5) N-{N-甲基-2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙基}法尼基硫代水杨酸亚酰胺(I6) {1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]}法尼基硫代水杨酸丙酯(I7) N-{2-{[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]甲氧基}吡咯烷基}法尼基硫代水杨酸亚酰胺(I8) 2-{N-叔丁氧羰基-2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙胺基}法尼基硫代水杨酸乙酯(I9) 2-{[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙胺基}法尼基硫代水杨酸乙酯(I10) N-{N-[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]羟乙基}法尼基硫代水杨酸乙酰胺(I11) N-{乙酸-1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II1) N-{乙酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II2) N-{乙酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II3) N-{乙酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙酰胺}法尼基硫代水杨酸酰胺(II4) N-{2-丙酸-1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II5) N-{2-丙酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II6) N-{2-四氢吡咯甲酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯}法尼基硫代水杨酸亚酰胺(II7) N-{2-丙酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II8) N-{2-丙酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II9) N-{2-苯丙酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II10) N-{2-四氢吡咯甲酸-1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水杨酸亚酰胺(II11) N-{2-四氢吡咯甲酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯}法尼基硫代水杨酸亚酰胺(II12) N-{2-四氢吡咯甲酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水杨酸亚酰胺(II13) N-{乙酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II14) N-{N′-[2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙基]-2-丙酰胺}法尼基硫代水杨酸酰胺(II15) N-{2-异己酸-1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II16) N-{丙酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II17) 本发明的另一目的在于提供本发明通式I、II所述化合物的制备方法。
通式I中所示的FTA衍生物通过下列方式制备2-氧-3，4-二苯磺酰基-1，2，5-噁二唑在氢氧化钠作用下与烃基二醇或烃基醇胺反应生成呋咱氮氧化物(1)，FTA在N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)和DMAP作用下与呋咱氮氧化物(1)反应制得通式I化合物，其合成路线如下
其中，X和R的定义如前所述。
呋咱氮氧化物(1)参考文献(药学学报，2001，36(11)821-826)制备。反应所采用的有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、1，2-二氯乙烷、苯、甲苯、二氧六环、DMF或上述溶剂的混合物，优先采用无水二氯甲烷或无水四氢呋喃。
通式II中所示的FTA衍生物通过下列方式制备在DCC和DMAP作用下，呋咱氮氧化物(1)与Boc保护的氨基酸(2)反应生成中间体(3)，经三氟乙酸(TFA)脱Boc得到化合物(4)，在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)和DMAP作用下，与FTA反应制得，其合成路线如下
其中，X和R的定义如前所述。
反应所采用的有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、1，2-二氯乙烷、苯、甲苯、二氧六环、DMF或上述溶剂的混合物，优先采用无水二氯甲烷、无水四氢呋喃或DMF。
本发明的再一目的是提供本发明通式I、II化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
本发明的进一步目的在于提供一种含有效剂量的本发明通式I、II化合物和药学上可接受的载体或辅料的药物组合物。
本发明化合物可以单独或与一种或一种以上的药学上可接受的载体组合制成制剂以供给药。例如，溶剂、稀释剂等，可以用口服剂型给药，如片剂、胶囊、可分散粉末、颗粒剂等。本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域中熟知的方法进行制备。这些药用制剂中可以含有与载体组合的例如0.05％～90％重量的活性成分，更常见约15％～60％之间重量的活性成分。本发明化合物剂量可以是0.005～5000mg/kg/天，也可根据疾病严重程度或剂型的不同使用剂量超出此剂量范围。
本发明化合物可以与其他抗肿瘤药物例如烷化剂(如环磷酰胺或顺铂)、抗代谢药(如5-氟尿嘧啶或羟基脲)、拓扑异构酶抑制剂(如喜树碱)、有丝分裂抑制剂(如紫杉醇或长春碱)、DNA插入剂(如阿霉素)联合应用，另外还可以与放射治疗联合应用。这些其他抗肿瘤药物或放射治疗可以与本发明化合物同时或在不同时间给予。这些联合治疗可以产生协同作用从而有助于改善治疗效果。
下面是本发明化合物的部分药理试验及结果 药理试验部分的化合物代号对应的结构见表1和表2。
表1式I部分化合物代号及其对应的结构
表2式II部分化合物代号及其对应的结构
1、体外抗肿瘤活性研究 1.1四甲基氮唑蓝比色法体外抗肿瘤试验 按常规采用四甲基氮唑蓝比色法(MTT)评价了本发明化合物对13种人癌细胞株的抗增殖活性。MTT法已广泛用于大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感测定等。索拉菲尼(Sorafenib)是目前临床上广泛使用的抗肿瘤药物，其作用靶标就是Ras信号途径，因此选择它作为阳性对照药。
人癌细胞株乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、肝癌细胞Hep G2、Hep 3B、BEL-7402、肾癌细胞786-O、OS-RC-2、肺癌细胞A549、H460、H520、脑癌细胞U251、U87、胃癌细胞SGC-7901。
实验方法如下取处于指数生长期状态良好的细胞一瓶，加入0.25％胰蛋白酶消化，使贴壁细胞脱落，制成每毫升含2×104～4×104个细胞的悬液。取细胞悬液接种于96孔板上，每孔180μL，置恒温CO2培养箱中培养24小时。换液，加入受试化合物(化合物用DMSO溶解后用PBS稀释，受试化合物浓度分别为1×10-7，1×10-6，1×10-5 mol/L)，每孔20μL，培养48小时。将MTT加入96孔板中，每孔20μL，培养箱中反应4小时。吸去上清液，加入DMSO，每孔150μL，平板摇床上振摇5分钟。用酶联免疫检测仪在波长为570nm处测定每孔的吸收度，计算细胞抑制率。实验结果如表3-4所示。
细胞抑制率＝(阴性对照组OD值-受试物组OD值)/阴性对照组OD值×100％。
表3本发明化合物对部分肿瘤细胞增殖的抑制活性(IC50，μmol/L)
Sorafenib索拉菲尼；NA无活性. 表4本发明化合物对部分肿瘤细胞增殖的抑制活性(IC50，μmol/L)
Sorafenib索拉菲尼；NA无活性. 经过一系列肿瘤细胞测试，发现这些化合物对肾癌细胞作用较强，特别是OS-RC-2人肾癌细胞，大部分目标化合物细胞活性比先导化合物FTA强，很多化合物IC50值均小于1μmol/L，其中化合物I1、I2、I4、II1、II3、II6、II12、II13、II14活性比阳性对照药索拉菲尼强，其IC50值均小于0.25μmol/L；从786-O人肾癌细胞测试情况看，I1、I4、II12、II13、II14细胞活性均比母体化合物FTA活性强，并且与阳性对照药索拉菲尼活性相当，而且大部分化合物活性均超过先导物FTA； 在人脑胶质瘤细胞U87和U251中，化合物I2、II12、II13、II14的IC50值和索拉菲尼在一个数量级，大部分化合物活性均超过母体化合物FTA； 对于人乳腺癌细胞MCF7，化合物I4、II3、II6、II12活性与阳性对照药索拉菲尼活性相当，而人乳腺癌细胞MDA-MB-231，化合物I2、II6、II12、II13活性比阳性对照药索拉菲尼稍强或者相当，大部分化合物活性均超过母体化合物FTA； 对于人肺癌细胞A549、H460和H520，整体化合物活性趋势比较一致，化合物在人肺癌细胞A549活性比H460和H520较弱些，其中化合物I2、II12和II13比阳性对照药索拉菲尼稍强或者相当，大部分化合物活性均超过母体化合物FTA； 对于人肝癌细胞Hep3B，化合物I2、II3、II6、II12和II13的IC50值和索拉菲尼在一个数量级，而人胃癌细胞SGC-7901，I2、II12和II13比阳性对照药索拉菲尼稍强或者相当，大部分化合物活性均超过母体化合物FTA。
从化合物整体抗瘤谱来看，在呋咱氮氧化物修饰的FTA衍生物系列化合物中，中间连接氨基酸的呋咱氮氧化物整体活性要比没有连接氨基酸活性要好，而且连接基团氨基酸的种类对活性有影响，其对细胞毒活性的影响顺序为脯氨酸＞甘氨酸、丙氨酸＞苯丙氨酸。而对于含相同氨基酸的化合物，呋咱氮氧化物供体连接基团碳链长度同样影响活性，以4个碳原子较好。如均含有丙氨酸但所连碳链不同的化合物活性顺序为II6＞II9＞II5＞II8。
药理实验结果表明，本发明化合物对人类肿瘤细胞的增殖具有不同程度的抑制作用，多数化合物抗肿瘤活性与阳性对照药索拉菲尼相当或优于索拉菲尼，且显著强于FTA。
1.2对正常肝细胞生长的影响 受试药物 呋咱氮氧化物修饰的FTA衍生物系列一活性较好目标化合物I1、I2、I4、II1、II3、II6、II12、II13、II14，全反式法尼基硫代水杨酸(FTA)作为对照药物，共10个化合物。
材料、试剂及方法 方法同前，人正常肝细胞为LO2，培养液为含10％热灭活胎牛血清，青霉素100u/mL和链霉素100u/mL的RPMI1640细胞培养基，药物处理时间为48小时，浓度选取见图7。
结果 部分呋咱氮氧化物修饰的FTA衍生物I2，II12，II6，I4在小于12.5μmol/L(对Hep3B细胞生长有效抑制浓度范围内，见图7)浓度下，无明显的LO2细胞毒性，25-100μmol/L浓度范围内可见显著的细胞毒性。由此可见，I2，I4，II6，II12对肝癌Hep3B细胞具有一定的选择性，而且选择性顺序为I2＞II12＞II6＞I4，其中I2和II12对人正常肝细胞LO2的IC50值比它们对人肝肿瘤细胞Hep3B的IC50值约大两个数量级(见图1)。
1.3体外NO释放检测 选择目标化合物I1，I3，II3，II6和II12～II14在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、胃癌细胞SGC-7901、肺癌细胞A549和脑癌细胞U251、U87内进行NO释放量的测定取处于指数生长期状态良好的细胞一瓶，加入0.25％胰蛋白酶消化，使贴壁细胞脱落，制成每毫升含2×104～4×104个细胞的悬液。取细胞悬液接种于96孔板上，每孔180μL，置恒温CO2培养箱中培养24h。换液，加入受试化合物(化合物用DMSO溶解后用PBS稀释，受试物浓度为10-4mol/L。于300min时间点离心沉淀取上清液2mL与500μLGriess试剂混合，室温放置10分钟，在540nm处测吸收值，根据标准曲线计算NO浓度。NO的释放量以其相当于硝酸盐(NO3-)/亚硝酸盐(NO2-)的量表示(见图2)。
体外NO释放研究结果表明，化合物II3，II6和II12～II14之间的NO释放量相差不大，但比I1，I3大得多，NO最大释放量达到1.6μmol/L。结果提示，具有细胞毒活性的化合物释放NO的量相对较大，而活性较弱或无活性的化合物释放NO的量较低，此结果与文献(Megson IL，WebbDJ.Expert Opin Investig Drugs，2002，11(5)587-601)报道的高浓度NO对肿瘤细胞具有较强细胞毒作用的结论是一致的。
1.4Ras抑制活性测试 采用Western印迹法检测目标化合物II6对肿瘤细胞MDA-MB-231的Ras抑制活性。取处于指数生长期状态良好的细胞制成每毫升含1.5×105个细胞的悬液，接种于96孔板上，置恒温CO2培养箱中培养24h。换液，加入1μM，5μM受试化合物II6，阴性对照加等量PBS，继续培养8h。胰酶消化，PBS清洗两遍。样品重悬于PBS中，弃上清，细胞置于2mL EP管中加入蛋白质裂解液，200μL/管，反复吹打后于冰浴反应30min，离心取上清液2mL EP管中，采用SDS-PAGE(胶浓度为12％)分离并且转移到硝化纤维膜上。将膜放于现配的5％的脱脂奶粉封闭液中，封闭结束用少量Blot wash将残余奶粉漂洗干净，一抗用TBST稀释至工作浓度，500μL/条，室温摇床反应1h，其后可置4℃过夜。反应结束后剪开自封袋，废弃抗体，将各条膜置于皿中用TBST清洗4遍。用TBST稀释过氧化酶标记的二抗至工作液浓度，500μL/条。按前法封袋和摇床反应，反应结束后弃二抗，用TBST清洗4遍。PIERCE发光液A液+B液等体积混匀灌入制好的自封袋中，反应5min后将膜转移至在BIO-RAD凝胶成像仪暗盒中曝光成像(见图3)。
我们考察了目标物II6是否保留FTA原有Ras抑制活性，采用空白组和不同浓度的II6对MDA-MB-231细胞相关的Ras下游信号通路的影响进行免疫印迹分析(见图3)，发现II6在1μM和5μM浓度下可以显著抑制Akt，ERK，Raf分子的磷酸化，提示NO供体与FTA杂合后仍保留了对Ras蛋白抑制活性。
2、体内活性研究 2.2I2急性毒性实验 目的 本实验采用小鼠单次腹腔注射供试品方法，观察供试品造成的小鼠急性毒性反应和死亡情况。
实验材料 供试品名称I2(中国药科大学新药研究中心提供)。
对照品即溶媒，为无水乙醇和葡萄糖注射液。
动物 清洁级小鼠，5-6周龄，体重18-22g，性别雌雄各半。
实验方法 剂量设计与药物配置根据预试结果，正式试验剂量设为585.9、468.8、375.0、300.0和240.0mgg/kg，剂量间距为1∶0.8。同时设溶媒对照组。药物先加20％的无水乙醇溶解，再加葡萄糖注射液稀释，得终浓度分别为195.3mg/ml、156.2mg/ml、125.0mg/ml、100mg/ml、80mg/ml的溶液。
给药方法与途径采用腹腔注射给药途径。小鼠一次腹腔注射给药，给药体积0.6ml/20g体重，腹腔注射速度0.6ml/60Sec。
检测方法与数据记录给药前动物禁食2-4小时。详细记录动物给药时间，毒性反应时间以及毒性反应症状。根据动物死亡数据采用Bliss法计算半数致死量LD50值及95％可信限(见表5)。
实验结果 585.9mg/kg剂量组给药后8只小鼠出现痉挛、抽搐，其中2只即刻死亡；468.8mg/kg剂量组给药后4只小鼠出现痉挛、抽搐；375.0/kg剂量组给药后2只小鼠活动减少；300.0mg/kg剂量组给药后1只小鼠活动减少；240.0mg/kg剂量组给药后小鼠活动减少，10分钟后行为活动逐渐恢复正常。
表5、小鼠腹腔注射I2溶液的LD50试验结果
2.2I2腹腔给药对人肝细胞性肝癌SMMC-7721裸小鼠移植瘤的实验治疗作用目的 根据SFDA新药临床前研究指导原则的要求，测试I2对人肝癌SMMC-7721裸鼠异种移植瘤有无生长抑制作用及作用强度。
受试物 I2注射液由中国药科大学药研究中心提供，批号100117。阳性对照药为索拉菲尼(Sorafenib)，上海北卡医药技术有限公司生产，批号091105。
移植瘤 选用人肝细胞性肝癌SMMC-7721裸小鼠移植瘤，由人肝细胞性肝癌SMMC-7721细胞株接种于裸小鼠皮下而建立。细胞接种量为2×107，接种形成移植瘤后再在裸小鼠体内传3代后使用。
动物 雌性BALB/cA裸小鼠，日龄35-40天，体重18-22g，由中国医学科学院实验动物研究所提供(实验动物生产许可证SCXK(军)2007-004)。动物分组如下 空白对照组(溶剂对照) 12只 阳性对照组(FTA 16mg/kg i.p.) 6只 阳性对照组(Sorafenib 20mg/kg i.p.)6只 药物治疗组(I260mg/kg i.p.)6只 药物治疗组(I230mg/kg i.p.)6只 药物治疗组(I215mg/kg i.p.)6只 试验方法 取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm3左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100～300mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每周3次，每次测量同时还需称鼠重。给药组每周静脉给药3次，给药体积0.4mL/只。阳性对照组每周静脉给药3次，阴性对照组同时给等量生理盐水。
检测指标及计算方法 (1)肿瘤体积(tumor volume，TV)，计算公式为 TV＝1/2×a×b2 其中a、b分别表示长宽。
(2)相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为 RTV＝TVt/TV0。
其中TV0为分笼给药时(即d0)肿瘤体积，TVt为每一次测量时的肿瘤体积。
(3)相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式为 T/C(％)＝(TRTV/CRTV)×100 TRTV治疗组RTV；CRTV阴性对照组RTV。
试验结果以相对肿瘤增殖率T/C(％)作为抗肿瘤活性的评价指标。
实验结果和讨论 I2对人肝癌SMMC-7721裸小鼠移植瘤的实验性治疗结果见表6和图4。实验结果如下，待测药物I2(60mg/kg)，I2(30mg/kg)，I2(15mg/kg)，阳性药物FTA(16mg/kg)，Sorafenib(20mg/kg)均以腹腔注射给药，每天1次，共给药21次；给药21天后，给药21天后，空白对照组平均瘤体积为1378mm3，FTA对照组平均瘤体积为664mm3，Sorafenib组为397mm3，I2高剂量组为479mm3，I2中剂量组为732mm3，I2低剂量组为793mm3，对人肝癌SMMC-7721裸小鼠移植瘤的T/C(％)分别为59.56％，28.46％，43.38％，52.56％，58.95％。同时未发现I2对实验动物的体重有明显抑制作用。
表6.I2对裸鼠移植瘤SMMC-7721生长体积变化的影响(X±SD，肿瘤体积单位mm3)
图1.I2，I4，II6，II12对肝癌Hep3B细胞和人正常肝细胞LO2的选择性 图2部分化合物在肿瘤细胞中NO释放 图3II6对肿瘤细胞MDA-MB-231的Ras抑制活性 图4.I2对人肝癌SMMC-7721裸鼠异种移植肿瘤肿瘤体积的影响
具体实施例方式 为了进一步阐明本发明，下面给出一系列实施例，这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明具体描述，不应当理解为对本发明的限制。本发明所用FTA为实验室制备，含量＞98％。
实施例1 2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙胺(1a)的制备 将3mL(50mmol)乙醇胺和1.85g(5mmol)2-氧-3，4-二苯磺酰基-1，2，5-噁二唑溶于20mLTHF中，冰浴冷却，滴入2.5mol/LNaOH溶液2mL，室温反应0.5h，补加2.5mol/LNaOH溶液1mL，继续搅拌直至原料反应完全，倒入80mL水，二氯甲烷(3×20mL)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，甲醇/水重结晶，得白色固体(1a)0.93g，收率66％，mp102～104℃。
N-{2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙基}法尼基硫代水杨酸酰胺(I1)的制备 将18.0g(0.50mmol)FTA和14.0mg(0.65mmol)DCC溶解于15mL无水CH2Cl2中，室温搅拌30分钟，加入0.18g(0.60mmol)1a和催化量的DMAP，室温反应24小时，过滤，浓缩，柱层析[乙酸乙酯∶石油醚(60～90℃)＝1∶3(V∶V)]分离得无色透明油状物0.21g，收率67％，IR(KBr，cm-1)v2922，1713，1654，1618，1551，1454，1374，1164；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.02(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.70(m，2H，Ar-H)，7.55(t，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.36(m，2H，Ar-H)，7.18(m，1H，Ar-H)，7.20(m，1H，Ar-H)，5.25(m，1H，SCH2CH)，5.08(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.64(t，2H，J＝4.8Hz，CH2O)，3.96(m，2H，NCH2CH2)，3.53(d，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，3.35(m，1H，NCH2)，1.89-2.02(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)626[M+H]+. 实施例2 N-{[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}哌嗪(1b)的制备 参照1a的制备方法，由羟乙基哌嗪制得淡黄色固体，收率55％，mp90～92℃。
3-{4-[3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙氧基]-1，4-二氧代丁氧基}法尼基硫代水杨酸甲酯(I2)的制备 N-{[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}哌嗪基法尼基硫代水杨酸亚酰胺(I2)的制备 参照I1的制备方法，由FTA与1b反应制得，无色透明油状物，收率61％。IR(KBr，cm-1)v2926，1731，1648，1551，1454，1371，1167；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.05(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.75(m，1H，Ar-H)，7.61(m，2H，Ar-H)，7.38(m，H，Ar-H)，7.28(m，3H，Ar-H)，5.28(m，1H，SCH2CH)，5.08(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.58(t，2H，J＝5.1Hz，CH2O)，3.84(d，2H，J＝4.5Hz，NCH2)，3.56(m，2H，SCH2)，2.91(m，4H，CONCH2CH2)，2.63(m，4H，2×CH2NCH2)，1.89-2.04(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.67(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)695[M+H]+； 实施例3 4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-丁炔-1-醇(1c)的制备 参照1a的制备方法，由2-丁炔二醇制得白色固体，收率63％，mp110～112℃。
{4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔基}法尼基硫代水杨酸丁酯(I3)的制备 参照I1的制备方法，由FTA与1c反应制得，无色透明油状物，收率65％，IR(KBr，cm-1)v2934，1724，1618，1548，1453，1357，1167；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.06(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，8.01(d，1H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.74(t，1H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.62(m，2H，Ar-H)，7.47(t，1H，Ar-H)，7.33(m，1H，Ar-H)，7.20(m，1H，Ar-H)，5.33(m，1H，SCH2CH)，5.12(m，4H，2×CH2CH＝CCH3，COOCH2)，5.00(s，2H，OCH2)，3.60(d，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，1.88-2.04(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.48-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)651[M+H]+. 实施例4 4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]哌啶(1d)的制备 参照1a的制备方法，由4-羟基哌啶制得白色固体，收率79％，mp70～72℃。
N-{4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]哌啶基}法尼基硫代水杨酸亚酰胺(I4)的制备 参照I1的制备方法，由FTA与1d反应制得，无色透明油状物，收率68％，IR(KBr，cm-1)v2932，1721，1616，1553，1453，1371，1165；H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.05(m，2H，Ar-H)，7.77(t，1H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.63(m，2H，Ar-H)，7.40(m，H，Ar-H)，7.26(m，3H，Ar-H)，5.27(m，1H，SCH2CH)，5.18(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，5.08(m，1H，OCH)，3.88(m，2H，SCH2)，3.47(m，4H，N(CH2)2)，1.89-2.02(m，12H，2×CHCH2CH2CH，CH(CH2)2)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)666[M+H]+. 实施例5 3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙胺(1e)的制备 参照1a的制备方法，由丙醇胺制得白色固体，收率70％，mp57～59℃。
N-{3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙基}法尼基硫代水杨酸酰胺(I5)的制备 参照I1的制备方法，由FTA与1e反应制得，无色透明油状物，收率67％，IR(KBr，cm-1)v2952，1733，1656，1616，1552，1434，1386，1164；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.00(d，2H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.74(t，1H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.61(m，3H，Ar-H)，7.40(m，2H，Ar-H)，7.30(m，1H，Ar-H)，5.26(m，1H，SCH2CH)，5.07(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.59(t，2H，J＝6.0Hz，OCH2)，3.71(d，2H，J＝7.8Hz，SCH2)，3.55(d，2H，J＝7.5Hz，NCH2)，2.26(m，2H，NCH2CH2)，1.89-2.02(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)630[M+H]+； 实施例6 N-甲基-2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙胺(2f)的制备 参照1a的制备方法，由N甲基乙醇胺制得白色固体，收率50％，直接投入下一步反应。N-{N-甲基-2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙基}法尼基硫代水杨酸亚酰胺(I6)的制备 参照I1的制备方法，由FTA与2c反应制得，无色透明油状物，收率65％，IR(KBr，cm-1)v2956，1733，1618，1454，1359，1157；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.07(d，J＝7.5Hz，2H，Ar-H)，7.94(m，1H，Ar-H)，7.76(m，1H，Ar-H)，7.59(m，3H，Ar-H)，7.31(m，2H，Ar-H)，5.30(m，1H，SCH2CH)，5.07(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.77(m，2H，OCH2)，4.06(d，2H，J＝7.8Hz，SCH2)，3.53(m，2H，NCH2)，3.02(m，3H，NCH3)，1.89-2.02(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)630[M+H]+； 实施例7 1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙醇(1g)的制备 参照1a的制备方法，由1，3-丁二醇制得白色固体，收率88％，mp101～103℃。
{1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]}法尼基硫代水杨酸丙酯(I7)的制备 参照I1的制备方法，由FTA与1g反应制得，无色透明油状物，收率65％，IR(KBr，cm-1)v2947，1730，1616，1552，1454，1380，1164；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.08(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.93(d，1H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.73(m，1H，Ar-H)，7.64(m，2H，Ar-H)，7.43(t，1H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.30(m，1H，Ar-H)，7.16(m，1H，Ar-H)，5.40(m，1H，SCH2CH)，5.31(m，2H，OCH)，5.08(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.56(t，2H，J＝6.0Hz，OCH2)，3.56(d，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，2.28(m，2H，CHCH2)，1.89-2.02(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)，1.47(d，3H，J＝6.3Hz，CHCH3)；ESI-MS(m/z)655[M+H]+； 实施例8 2-{[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]甲氧基}吡咯烷(1h)的制备 参照1a的制备方法，由L-脯氨醇制得淡黄色固体，收率88％，直接进行下一步反应。
N-{2-{[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]甲氧基}吡咯烷基}法尼基硫代水杨酸亚酰胺(I8)的制备 参照I1的制备方法，由FTA与1h反应制得，无色透明油状物，收率65％。IR(KBr，cm-1)v2933，1730，1616，1552，1454，1380，1164；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.05(m，2H，Ar-H)，7.93(m，1H，Ar-H)，7.76(m，1H，Ar-H)，7.61(m，2H，Ar-H)，7.43(t，1H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.39(m，1H，Ar-H)，7.29(m，1H，Ar-H)，5.19(m，1H，SCH2CH)，5.07(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.90(m，1H，NCH)，4.65(m，2H，OCH2)，3.51(d，2H，J＝7.8Hz，SCH2)，3.30(m，2H，NCH2)，1.89-2.02(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)，1.50-1.67(m，4H，CHCH2CH2)；ESI-MS(m/z)666[M+H]+； 实施例9 2-{[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙胺基}乙醇(1i)的制备 参照1a的制备方法，由二乙醇胺制得淡黄色固体，收率65％，直接投入下一步反应。
N-羟乙基{N-[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙基}碳酸叔丁酯(1i-1)的制备 在0.33g(1.00mmol)1i和0.2mL三乙胺的10mL无水CH2Cl2中，缓慢加入0.26g(1.20mmol)二碳酸二叔丁酯，室温搅拌过夜，将反应液分别用10mL水和饱和NaCl萃取，CH2Cl2层用无水硫酸钠干燥，旋干得到0.39g产品1i-1直接投下一步反应，收率91％。
2-{N-叔丁氧羰基-2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙胺基}法尼基硫代水杨酸乙酯(I9)的制备 参照I1的制备方法，由FTA与1i-1反应制得，无色透明油状物，收率70％，mp82～84℃。IR(KBr，cm-1)v2952，1728，1618，1550，1452，1352，1164；1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.05(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.70(m，1H，Ar-H)，7.58(m，2H，Ar-H)，7.40(m，2H，Ar-H)，7.23(m，2H，Ar-H)，5.24(t，1H，J＝7.5Hz，SCH2CH)，5.06(t，2H，J＝6.9Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.35(m，2H，OCH2)，3.84(m，2H，OCH2)，3.73(m，4H，CH2NCH2)，3.58(d，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，1.89-2.02(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)；1.38(s，9H，3CH3)；ESI-MS(m/z)870[M+H]+. 实施例10 2-{[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙胺基}法尼基硫代水杨酸乙酯(I10)的制备 将上一步产品0.38g(0.50mmol)I9溶于4mL CH2Cl2中，冰浴冷却，缓慢滴加2mL三氟乙酸，升至室温，反应2h，减压蒸除溶剂和未反应的三氟乙酸，再加入10mL CH2Cl2，缓慢滴加1.5mL三乙胺，滴完搅拌30min，将反应液分别用10mL水和饱和NaCl洗涤，CH2Cl2层用无水硫酸钠干燥，旋干得到0.39g产品I10无色透明油状物0.42g，收率62.8％。IR(KBr，cm-1)v2958，1731，1652，1622，1552，1454，1377；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.96(d，1H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.91(d，2H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.62(t，1H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.49(m，2H，Ar-H)，7.30(m，2H，Ar-H)，7.16(m，1H，Ar-H)，6.22(brs，1H，NH)，5.33(m，3H，SCH2CH，2×CH2CH＝CCH3)，4.37(m，4H，CH2O)，3.73(m，4H，CH2NHCH2)，3.58(d，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，1.89-2.02-(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)770[M+H]+. 实施例11 N-{N-[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]羟乙基}法尼基硫代水杨酸乙酰胺(I11)的制备 将0.36g(1.00mmol)FTA溶于10mL无水CH2Cl2中，滴加0.5mL草酰氯，室温反应4h，减压蒸除溶剂和未反应得草酰氯，再用制的法尼基硫代水杨酰氯用10mL无水CH2Cl2溶解，在冰浴下缓慢滴入到含有0.33g(1.00mmol)1i和0.2mL三乙胺的10mL无水CH2Cl2中，在室温搅拌12h，过滤，浓缩，柱层析[乙酸乙酯∶石油醚(60～90℃)＝1∶5(V∶V)]分离得无色透明油状物0.42g，收率62.8％。IR(KBr，cm-1)v2958，1731，1652，1622，1552，1454，1377；1H NMR(CDCl3，300MHz)8.05(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.70(m，1H，Ar-H)，7.58(m，2H，Ar-H)，7.40(m，2H，Ar-H)，7.23(m，2H，Ar-H)，5.25(t，1H，J＝6.6Hz，SCH2CH)，5.06(m，4H，2×CH2CH＝CCH3，NCH2)，4.55(m，2H，OCH2)，4.12(m，1H，OH)3.84(m，2H，HOCH2)，3.15(m，2H，NCH2)，3.54(d，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，2.92(t，2H，J＝5.1Hz，HOCH2CH2)，1.89-2.00(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.51-1.65(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)770[M+H]+. 实施例12 N-Boc-甘氨酸-1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯(3-1g)的制备 将0.37g(1.1mmol)1g溶于15mL无水CH2Cl2中，加入0.18g(1.0mmol)N-叔丁氧羰基甘氨酸，0.26g(1.25mmol)DCC和催化量的DMAP，室温反应24h，过滤，浓缩，柱层析[乙酸乙酯∶石油醚(60～90℃)＝1∶3(V∶V)]分离得白色固体0.29g，收率60％，mp84～86℃。ESI-MS(m/z)471.6[M+H]+；IR(KBr，cm-1)v3436，2977，2937，1747，1714，1616，1552，1514，1452，1367，1166；1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.35～1.37(m，3H，CH3，)，1.43(s，9H，3CH3)，3.89～3.90(d，2H，NCH2)，4.46～4.50(t，2H，OCH2，J＝6.0Hz)，5.01(brs，1H，NH)，5.19～5.25(m，1H，OCH)，7.60～7.66(m，2H，ArH)，7.74～7.76(m，1H，ArH)，8.05～8.08(m，2H，ArH). 甘氨酸-1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯三氟乙酸盐(4-1g)的制备 将0.25g(0.52mmol)3-1g溶于10mL CH2Cl2中，冰浴冷却，缓慢滴加2mL三氟乙酸，升至室温，反应2h，减压蒸除溶剂和未反应的三氟乙酸，得到4-1g，ESI-MS(m/z)372.1[M+H]+。
N-{乙酸-1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II1)的制备 将上述制备的4-1g溶于15mL DMF中，加入0.20g(1.60mmol)DMAP，搅拌30分钟，加入0.20g(0.43mmol)FTA，0.25g(1.30mmol)EDC，室温反应24h，倾入200mL水，乙酸乙酯(3×50mL)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析[乙酸乙酯∶石油醚(60～90℃)＝1∶2(V∶V)]分离，得无色透明油状物0.15g，收率45％。IR(KBr，cm-1)3424，2927，1753，1629，1552，1450，1371，1168；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.05(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.70(m，1H，Ar-H)，7.58(m，2H，Ar-H)，7.40(m，2H，Ar-H)，7.29(m，2H，Ar-H)，5.25(t，1H，J＝6.6Hz，SCH2CH)，5.06(m，4H，2×CH2CH＝CCH3，NCH2)，4.48(t，2H，J＝6.0Hz，CH2O)，4.25(m，1H，OCH)，3.54(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，2.20(m，2H，OCHCH2)，1.98-2.05(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.51-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)，1.39(d，3H，J＝6.3Hz，CHCH3)；MS(ESI)m/z＝712[M+1]+. 实施例13 4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁醇(1j)的制备 参照1a的制备方法，由1，4-丁二醇制得白色固体，收率89％，mp70～72℃。
N-Boc-甘氨酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯(3-1j)的制备 参照3-1g的制备方法，由1j制得白色固体，收率78％，mp60～62℃。ESI-MS(m/z)471.8[M+H]+；IR(KBr，cm-1)v3357，2977，2933，1726，1685，1623，1558，1525，1454，1371，1163；1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.45(s，9H，3CH3)，1.85～1.87(m，2H，CH2)，1.95～1.99(m，2H，CH2)，3.92～3.94(d，2H，NCH2)，4.23～4.27(t，2H，OCH2，J＝6.0Hz)，4.44～4.48(t，2H，OCH2，J＝6.0Hz)，5.06(brs，1H，NH)，7.61～7.66(m，2H，ArH)，7.77～7.79(m，1H，ArH)，8.04～8.07(m，2H，ArH). 甘氨酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯三氟乙酸盐(4-1j)的制备 参照4-1g的制备方法，由3-1j制得，ESI-MS(m/z)372.4[M+H]+。
N-{乙酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II2)的制备 参照II1的制备方法，由FTA与4-1j反应制得，无色透明油状物，收率50％，IR(KBr，cm-1)3259，2928，1727，1621，1559，1450，1163；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.04(d，2H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.73(m，2H，Ar-H)，7.58(m，2H，Ar-H)，7.36(m，2H，Ar-H)，7.27(m，1H，Ar-H)，5.24(t，1H，J＝7.5Hz，SCH2CH)，5.06(t，2H，J＝6.9Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.79(m，2H，NCH2)，4.45(t，2H，J＝6.0Hz，COOCH2CH2CH2CH2O)，4.28(m，4H，NCH2COOCH2CH2)，3.55(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，1.99(m，10H，2×CHCH2CH2CH，COOCH2CH2CH2)，1.51-1.69(m，14H，4×CH＝CCH3，COOCH2CH2)；MS(ESI)m/z＝712[M+1]+. 实施例14 N-Boc-甘氨酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯(3-1c)的制备 参照3-1g的制备方法，由1c制得白色固体，收率68％，mp88～90℃。IR(KBr，cm-1)v3434，2979，1758，1704，1620，1548，1450，1359，1163；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.38(s，9H，3CH3)，3.70～3.75(m，2H，NCH2)，4.88(s，2H，OCH2)，5.22(s，2H，OCH2)，7.28(brs，1H，-NH-)，7.73～7.75(m，2H，ArH)，7.88～7.93(m，1H，ArH)，8.00～8.03(m，2H，ArH)；ESI-MS(m/z)467.9[M+H]+. 甘氨酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯三氟乙酸盐(4-1c)的制备 参照4-1g的制备方法，由3-1c制得，ESI-MS(m/z)368.3[M+H]+. N-{乙酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II3)的制备 参照II1的制备方法，由FTA与4-1c反应制得，无色透明油状物，收率55％，IR(KBr，cm-1)3418，2928，1758，1617，1548，1451，1361，1169；1H NMR(CDCl3-d6)δ8.06(d，2H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.74(m，2H，Ar-H)，7.61(t，2H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.30(m，3H，Ar-H)，5.24(m，H，SCH2CH)，5.06(m，4H，2×CH2CH2CH＝CCH3，CH2O)，4.86(s，2H，COOCH2)，4.31(d，2H，J＝5.4Hz，NCH2)，3.55(d，H，J＝7.8Hz，SCH2)，1.98-2.12(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.42-1.67(m，12H，4×CH3)；MS(ESI)m/z＝708[M+1]+. 实施例15 N-Boc-甘氨酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙酰胺(3-1a)的制备 参照3-1g的制备方法，由1a反应制得，白色固体，收率50.2％，mp107～111℃。
N-{乙酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙酰胺}法尼基硫代水杨酸酰胺(II4)的制备 参照II1的制备方法，3-1a脱保护基后与FTA反应制得，无色透明油状物，收率49.4％，IR(KBr，cm-1)v3406，2927，1724，1654，1550，1452，1388，1186；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.04(d，2H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.73(m，2H，Ar-H)，7.58(m，2H，Ar-H)，7.36(m，2H，Ar-H)，7.27(m，1H，Ar-H)，6.64(m，1H，CONH)，5.24(t，1H，J＝7.5Hz，SCH2CH)，5.06(t，2H，J＝6.9Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.52(m，2H，OCH2)，4.28(m，4H，NCH2，COOCH2CH2)，3.55(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，1.99(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.51-1.69(m，12H，4×CH＝CCH3)；ESI-MS(m/z)683[M+H]+； 实施例16 N-Boc-L-丙氨酸-1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯(3-2g)的制备 参照3-1g的制备方法，由N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸与1g反应制得，白色固体，收率72.3％，mp98～101℃。
N-{2-丙酸-1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II5)的制备 参照II1的制备方法，3-2g脱保护基后与FTA反应制得，无色透明油状物，收率41％，[α]25D-8.1；IR(KBr，cm-1)3297，2924，1737，1633，1555，1450，1356，1168；1H NMR(CDCl3-d6)δ8.06(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.71(m，2H，Ar-H)，7.59(m，2H，Ar-H)，7.51(m，1H，Ar-H)，7.38(m，2H，Ar-H)，5.18(m，2H，SCH2CH，NCH)，5.08(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.74(m，1H，OCH)，4.46(t，2H，J＝6.0Hz，OCH2CH2)，3.54(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，2.17(m，2H，OCH2CH2)，1.98(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.59-1.67(m，12H，4×CH＝CCH3)，1.51(d，2H，J＝7.2Hz，NCHCH3)，1.38(d，2H，J＝6.0Hz，OCHCH3)；MS(ESI)m/z＝726[M+1]+. 实施例17 2-{[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}乙醇(1k)的制备 参照1a的制备方法，由一缩乙二醇制得白色固体，收率70％，mp57～59℃。
N-Boc-L-丙氨酸-2-{[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}乙酯(3-2k)的制备 参照3-1g的制备方法，由N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸与1k反应制得，淡黄色固体，收率53.3％，mp127～129℃。
N-{2-丙酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II6)的制备 参照II1的制备方法，3-2k脱保护基后与FTA反应制得，无色透明油状物，收率52.8％，[α]15D-19.2；IR(KBr，cm-1)3421，2928，1739，1640，1614，1554，1452，1356，1168；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.04(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.70(m，2H，Ar-H)，7.59(m，3H，Ar-H)，7.34(m，2H，Ar-H)，5.27(t，1H，J＝7.2Hz，SCH2CH)，5.05(m，2H，2×CH2CH＝CCH3)，4.84(m，1H，NCH)，4.54(m，2H，COOCH2CH2OCH2CH2O)，4.38(m，2H，COOCH2CH2)，3.93(m，2H，COOCH2CH2OCH2)，3.83(t，2H，J＝4.2Hz，COOCH2CH2)，3.54(d，2H，J＝7.8Hz，SCH2)，2.01(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.52-1.67(m，12H，4×CH＝CCH3)，1.38(d，3H，J＝7.5Hz，NCHCH3)；MS(ESI)m/z＝742[M+1]+. 实施例18 N-Boc-L-脯氨酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯(3-3j)的制备 参照3-1g的制备方法，由Boc-L-脯氨酸与1j反应制得，淡黄色油状物，收率60.2％。
N-{2-四氢吡咯甲酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯}法尼基硫代水杨酸亚酰胺(II7)的制备 参照II1的制备方法，3-3j脱保护基后与FTA反应制得，无色透明油状物，收率34.8％，[α]24D-14.5；IR(KBr，cm-1)3437，2926，1743，1619，1552，1449，1365，1169；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.04(d，2H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.75(m，1H，Ar-H)，7.60(m，2H，Ar-H)，7.34(m，1H，Ar-H)，7.32(m，2H，Ar-H)，7.20(m，1H，Ar-H)，5.27(t，1H，J＝7.5Hz，SCH2CH)，5.05(t，2H，J＝5.1Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.67(m，1H，NCH)，4.47(t，2H，J＝6.0Hz，COOCH2CH2CH2CH2O)，4.29(m，2H，COOCH2CH2)，3.57(d，2H，J＝7.8Hz，SCH2)，3.35(m，1H，NCH2)，2.02(m，10H，CH2CHCOO，2×CHCH2CH2CH)，1.90(m，2H，COOCH2CH2CH2)，1.53-1.67(m，16H，4×CH＝CCH3，COOCH2CH2，NCH2CH2)；MS(ESI)m/z＝752[M+1]+. 实施例19 N-Boc-L-丙氨酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯(3-2j)的制备 参照3-1g的制备方法，由N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸与1j反应制得，白色固体，收率61.9％，mp107～109℃。
N-{2-丙酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丁酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II8)的制备 参照II1的制备方法，3-2j脱保护基后与FTA反应制得，无色透明油状物，收率51.7％，[α]24D-3.9；IR(KBr，cm-1)3262，2927，1730，1625，1555，1450，1372，1167；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.04(d，2H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.69(m，2H，Ar-H)，7.60(m，2H，Ar-H)，7.54(d，1H，J＝6.6Hz，Ar-H)，7.41(d，1H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.29(m，1H，Ar-H)，5.24(t，1H，J＝7.5Hz，SCH2CH)，5.05(t，2H，J＝6.9Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.79(m，1H，NCH)，4.44(t，2H，J＝6.0Hz，COOCH2CH2CH2CH2O)，4.26(t，2H，J＝6.0Hz，COOCH2CH2)，3.54(d，2H，J＝7.8Hz，SCH2)，1.99(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.88(m，2H，COOCH2CH2CH2)，1.51-1.69(m，17H，4×CH＝CCH3，COOCH2CH2，NCHCH3)；MS(ESI)m/z＝726[M+1]+. 实施例20 N-Boc-L-丙氨酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯(3-2c)的制备 参照3-1g的制备方法，由N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸与1c反应制得，黄色固体，收率53.7％，mp113～115℃。
N-[2-丙酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯]法尼基硫代水杨酸酰胺(II9)的制备 参照II1的制备方法，3-2c脱保护基后与FTA反应制得，无色透明油状物，收44.1％，[α]15D-15.8；IR(KBr，cm-1)3421，2926，1749，1622，1548，1451，1362，1169；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.06(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.72(m，2H，Ar-H)，7.61(m，3H，Ar-H，NH)，7.44(m，1H，Ar-H)，7.33(m，1H，Ar-H)，7.29(m，1H，Ar-H)，5.24(t，1H，J＝7.5Hz，SCH2CH)，5.05-5.13(m，4H，2×CH2CH＝CCH3，COOCH2)，4.90(m，3H，NCH，CH2O)，3.54(d，2H，J＝7.8Hz，SCH2)，1.98(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.50-1.69(m，15H，4×CH＝CCH3，NCHCH3)；MS(ESI)m/z＝722[M+1]+. 实施例21 N-Boc-苯丙氨酸-2-{[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}乙酯(3-4k)的制备 参照3-1g的制备方法，由Boc-L-苯丙氨酸与1k反应制得，白色固体，收率58％，mp108～109℃。
N-{2-苯丙酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II10)的制备 参照II1的制备方法，3-4k脱保护基后与FTA反应制得无色透明油状物，收率60％，[α]26D-2.5；IR(KBr，cm-1)3286，2923，1737，1642，1612，1552，1453，1355，1157；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.03(d，2H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.71(m，2H，Ar-H)，7.57(m，3H，Ar-H)，7.48(m，1H，Ar-H)，7.26-7.41(m，6H，Ar-H)，5.16-5.22(m，3H，3×CH2CH＝CCH3)，4.52(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2)，4.27(m，3H，NCH，OCH2)，3.89-3.96(m，4H，OCH2CH2OCH2)，3.21-3.36(m，4H，SCH2，CHCH2)，2.01(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.47-1.67(m，12H，4×CH＝CCH3)；MS(ESI)m/z＝818[M+1]+. 实施例22 N-Boc-L-脯氨酸-1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯(3-3g)的制备 参照3-1g的制备方法，由Boc-L-脯氨酸与1g反应制得，淡黄色油状物，收率58.7％。
N-{2-四氢吡咯甲酸-1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水杨酸亚酰胺(II11)的制备 参照II1的制备方法，3-3g脱保护基后与FTA反应制得，淡黄色固体，收率37.2％，[α]25D-18.6；IR(KBr，cm-1)3326，2927，1743，1626，1552，1449，1368，1169；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.07(d，2H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.71(m，1H，Ar-H)，7.61(m，2H，Ar-H)，7.34(m，2H，Ar-H)，7.22(m，2H，Ar-H)，5.22(t，1H，J＝6.3Hz，SCH2CH)，5.08(t，2H，J＝5.1Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.67(m，1H，NCH)，4.65-4.50(m，2H，NCH，OCH)，3.80(m，2H，OCH2)，3.52(d，2H，J＝7.2Hz，SCH2)，3.30(m，2H，NCH2)，2.29(m，2H，OCHCH2)，1.98(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.52-1.67(m，16H，NCHCH2，4×CH＝CCH3，NCH2CH2)，1.24(d，3H，J＝6.3Hz，CHCH3)；MS(ESI)m/z＝752[M+1]+. 实施例23 N-Boc-L-脯氨酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯(3-3c)的制备 参照3-1g的制备方法，由Boc-L-脯氨酸与1c反应制得，淡黄色油状物，收率60.0％。
N-{2-四氢吡咯甲酸-4-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]-2-炔-丁酯}法尼基硫代水杨酸亚酰胺(II12)的制备 参照II1的制备方法，3-3c脱保护基后与FTA反应制得，无色透明油状物，收率46.1％，[α]25D-30.3；IR(KBr，cm-1)3439，2926，1752，1618，1548，1450，1362，1169；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.07(d，2H，J＝7.2Hz，Ar-H)，7.74(m，1H，Ar-H)，7.61(m，2H，Ar-H)，7.37(m，2H，Ar-H)，7.28(m，2H，Ar-H)，5.24(t，1H，J＝7.5Hz，SCH2CH)，5.08(m，4H，2×CH2CH＝CCH3，COOCH2)，4.82(m，2H，CH2O)，4.71(t，1H，J＝3.9Hz，NCH)，3.57(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，3.30(m，2H，NCH2)，2.29(m，2H，OCHCH2)，1.98(m，10H，2×CHCH2CH2CH，NCHCH2)，1.58-1.75(m，14H，4×CH＝CCH3，NCH2CH2)；MS(ESI)m/z＝748[M+1]+. 实施例24 N-Boc-L-脯氨酸-2-{[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}乙酯(3-3k)的制备 参照3-1g的制备方法，由Boc-L-脯氨酸与1k反应制得，无色油状物，收率81.8％。
N-{2-四氢吡咯甲酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水杨酸亚酰胺(II13)的制备 参照II1的制备方法，3-3k脱保护基后与FTA反应制得，无色透明油状物，收率48.3％，[α]25D-19.1；IR(KBr，cm-1)3434，2917，1744，1628，1552，1448，1360，1170；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.04(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.73(m，2H，Ar-H)，7.61(m，2H，Ar-H)，7.23-7.39(m，3H，Ar-H)，5.27(t，1H，J＝6.3Hz，SCH2CH)，5.08(t，2H，J＝5.1Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.57(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2)，4.39(t，3H，J＝4.5Hz，CH2OCN)，4.11(m，1H，NCH)，3.93(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2CH2O)，3.83(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2OCH2)，3.55(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，3.33(m，2H，NCH2)，1.96-2.04(m，10H，NCHCH2，2×CHCH2CH2CH)，1.52-1.67(m，14H，4×CH3，NCH2CH2)；MS(ESI)m/z＝768[M+1]+. 实施例25 N-Boc-甘氨酸-2-{[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}乙酯(3-1k)的制备 参照3-1g的制备方法，由1k制得白色固体，收率80％，mp89～91℃。IR(KBr，cm-1)v3359，2979，2941，1755，1681，1625，1562，1529，1456，1363，1164；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.37(s，9H，3CH3)，3.63～3.71(m，4H，OCH2，NCH2)，3.79～3.82(m，2H，OCH2)，4.18～4.21(m，2H，OCH2)，4.50～4.53(m，2H，OCH2)，7.19(brs，1H，NH)，7.72～7.77(m，2H，ArH)，7.88～7.93(m，1H，ArH)，8.01～8.03(m，2H，ArH)；ESI-MS(m/z)487.7[M+H]+. 甘氨酸-2-{[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}乙酯三氟乙酸盐(4-1k)的制备 参照4-1g的制备方法，由3-1k制得，ESI-MS(m/z)388.1[M+H]+. N-{乙酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II14)的制备 参照II1的制备方法，由FTA与4-1k反应制得，无色透明油状物0.22g，收率53％，IR(KBr，cm-1)3422，2927，1749，1628，1553，1449，1362，1168；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.05(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.73(m，2H，Ar-H)，7.62(m，2H，Ar-H)，7.39-7.42(m，4H，Ar-H)，5.27(t，1H，J＝6.3Hz，SCH2CH)，5.08(t，2H，J＝5.4Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.56(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2)，4.40(t，3H，J＝4.5Hz，CH2OCN)，4.31(s，1H，NCH2)，3.93(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2CH2O)，3.84(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2OCH2)，3.54(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，2.01(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.47-1.67(m，12H，4×CH3)；MS(ESI)m/z＝728[M+1]+. 实施例26 N-Boc-{N′-2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙基}-L-丙氨酰胺(3-3e)的制备 参照3-1g的制备方法，由N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸与1e反应制得，白色固体，收率50.2％，mp127～131℃。
N-{N′-[2-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙基]-2-丙酰胺}法尼基硫代水杨酸酰胺(II15)的制备 参照II1的制备方法，3-3e脱保护基后与FTA反应制得，无色透明油状物，收率39.4％，IR(KBr，cm-1)v3402，2907，1714，1624，1550，1452，1388；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.03(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.72(m，2H，Ar-H)，7.60(m，2H，Ar-H)，7.21-7.35(m，3H，Ar-H)，6.64(m，1H，CONH)，6.29(d，1H，J＝9.0Hz，NH)，5.27(t，1H，J＝6.3Hz，SCH2CH)，5.08(t，2H，J＝5.1Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.56(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2)，4.31(m，2H，NCH2)，3.73(m，2H，COOCH2CH2)，3.54(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，2.01(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.45-1.64(m，12H，4×CH3)，1.50(d，2H，J＝7.2Hz，NCHCH3)；ESI-MS(m/z)711[M+H]+. 实施例27 N-Boc-L-亮氨酸-1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯(3-5g)的制备 参照3-1g的制备方法，由Boc-L-亮氨酸与1g反应制得，无色油状物，收率90.1％。
N-{2-异己酸-1-甲基-3-[(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]丙酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II16)的制备 参照II1的制备方法，3-5g脱保护基后与FTA反应制得，无色透明油状物，收率51.2％，IR(KBr，cm-1)v3413，2846，1717，1616，1551，1515，1454，1380，1169；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.05(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.70(m，1H，Ar-H)，7.58(m，2H，Ar-H)，7.40(m，2H，Ar-H)，7.29(m，2H，Ar-H)，5.25(t，1H，J＝6.6Hz，SCH2CH)，5.06(m，3H，2×CH2CH＝CCH3，NCH)，5.13～5.21(m，1H，OCH)，4.45～4.50(t，2H，J＝6.0Hz，OCH2)，3.54(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，2.20(m，2H，OCHCH2)，1.91-2.05(m，10H，CHCH2CH，2×CHCH2CH2CH)，1.56-1.68(m，12H，4×CH＝CCH3)，1.37-1.51(m，4H，OCHCH3，CH3CHCH3)，0.80～1.08(m，6H，2CH3)；.ESI-MS(m/z)768[M+H]+. 实施例28 N-Boc-β-丙氨酸-2-{[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基}乙酯(3-6k)的制备 参照3-1g的制备方法，由Boc-β-丙氨酸与1k反应制得，无色油状物，收率29.9％。
N-{丙酸-2-[[2-(4-苯磺酰基-5-氧-1，2，5-噁二唑-3-)氧]乙氧基]乙酯}法尼基硫代水杨酸酰胺(II17)的制备 参照II1的制备方法，3-6k脱保护基后与FTA反应制得，无色透明油状物，收率35.7％，IR(KBr，cm-1)v3415，2935，1731，1650，1550，1454，1388，1186；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.04(d，2H，J＝8.1Hz，Ar-H)，7.72(m，2H，Ar-H)，7.61(m，2H，Ar-H)，7.39-7.41(m，4H，Ar-H)，6.22(brs，1H，NH)，5.25(t，1H，J＝6.3Hz，SCH2CH)，5.07(t，2H，J＝5.4Hz，2×CH2CH＝CCH3)，4.56(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2)，4.40(t，3H，J＝4.5Hz，CH2OCN)，4.30(s，1H，NCH2)，3.93(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2CH2O)，3.82(t，2H，J＝4.5Hz，COOCH2OCH2)，3.54(d，2H，J＝7.5Hz，SCH2)，1.96-2.01(m，8H，2×CHCH2CH2CH)，1.47-1.66(m，12H，4×CH3)；ESI-MS(m/z)742[M+H]+.
权利要求
1.通式I、II所示的法尼基硫代水杨酸衍生物及其医学上可接受的盐
通式I中X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)CH2-，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-PhCH2-，-(CH2CH2OH)CH2CH2-，-(CH2)2NH(CH2)2-，-(CH2)2NBoc(CH2)2-，-(CH3)CH2CH2-，-(CH2CH2)2NCH2CH2-，-(CH2CH2)2CH(CH2)n-，n＝0～2，-(CH2CH2CH2)CHCH2-，-CH2CH＝CHCH2-或-CH2C≡CCH2-；
通式II中-NH-A-CO-代表甘氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、L-或D-型丙氨酸、L-或D-型缬氨酸、L-或D-型亮氨酸、L-或D-型异亮氨酸、L-或D-型甲硫氨酸、L-或D-型半胱氨酸、L-或D-型苯丙氨酸、L-或D-型酪氨酸、L-或D-型色氨酸、L-或D-型精氨酸、L-或D-型脯氨酸、L-或D-型组氨酸残基；X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)CH2-，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-PhCH2-，-(CH2CH2OH)CH2CH2-，-(CH2)2NH(CH2)2-，-(CH2)2NBoc(CH2)2-，-(CH3)CH2CH2-，-(CH2CH2)2NCH2CH2-，-(CH2CH2)2CH(CH2)n-，n＝0～2，-(CH2CH2CH2)CHCH2-，-CH2CH＝CHCH2-或-CH2C≡CCH2-。
2.根据权利要求1所述的法尼基硫代水杨酸衍生物及其医学上可接受的盐，其特征在于通式I中X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-，-(CH2CH2OH)CH2CH2-，-(CH2)2NH(CH2)2-，-(CH2)2NBoc(CH2)2-，-(CH3)CH2CH2-，-(CH2CH2)2CH-，-(CH2CH2)2NCH2CH2-，-(CH2CH2CH2)CHCH2-或-CH2C≡CCH2-。
3.根据权利要求1所述的法尼基硫代水杨酸(FTA)衍生物及其医学上可接受的盐，其特征在于，通式II中-NH-A-CO-代表甘氨酸、β-丙氨酸、L-型丙氨酸、L-型苯丙氨酸、L-型脯氨酸、或L-型亮氨酸残基；X代表-O-，-N-或-NH-；R代表-(CH2)n-，n＝2～6，-CH(CH3)(CH2)2-，-(CH2)2O(CH2)2-或-CH2C≡CCH2-。
4.权利要求1所述的法尼基硫代水杨酸衍生物的制备方法，其特征在于
通式I中所示的法尼基硫代水杨酸(FTA)衍生物通过下列方式制备2-氧-3，4-二苯磺酰基-1，2，5-噁二唑在氢氧化钠作用下与烃基二醇或烃基醇胺反应生成呋咱氮氧化物(1)，法尼基硫代水杨酸(FTA)在N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)和DMAP作用下与呋咱氮氧化物(1)反应制得通式I化合物，其合成路线如下
其中，X和R的定义如权利要求1所述。
通式II中所示的法尼基硫代水杨酸(FTA)衍生物通过下列方式制备在DCC和DMAP作用下，呋咱氮氧化物(1)与Boc保护的氨基酸(2)反应生成中间体(3)，经三氟乙酸(TFA)脱Boc得到化合物(4)，在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)和DMAP作用下，与法尼基硫代水杨酸(FTA)反应制得，其合成路线如下
其中，-NH-A-CO-、X和R的定义如权利要求1所述。
5.一种药物组合物，由治疗上有效剂量的权利要求1所述的通式I、II化合物和药学上可接受的载体或辅料组成。
6.权利要求1所述的通式I、II化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
7.权利要求6的用途，其中肿瘤疾病是肝癌、肾癌、肺癌、乳腺癌、脑癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌、子宫癌、膀胱癌、前列腺癌、胰腺癌、口腔癌、喉癌、食管癌、皮肤癌或白血病。
全文摘要
本发明公开了一氧化氮(NO)供体型的法尼基硫代水杨酸(FTA)衍生物及其药学上可接受的盐、其制备方法及其医药用途。该类FTA衍生物是由NO供体呋咱氮氧化物与Ras蛋白抑制剂FTA通过酯键或酰胺键进行杂合得到的化合物。药理实验结果表明，本发明的FTA衍生物能保留FTA的Ras蛋白抑制活性，同时释放高浓度NO，诱导肿瘤细胞凋亡，增强对癌细胞增殖的抑制作用，较FTA具有更优良的抗肿瘤活性，因此，该类化合物可能适用于治疗临床上多种恶性肿瘤。
文档编号A61P35/00GK101812059SQ201010146029
公开日2010年8月25日 申请日期2010年4月14日 优先权日2010年4月14日
发明者张奕华, 凌勇, 赖宜生, 叶小磊, 季晖, 彭司勋 申请人:中国药科大学