专利名称：高山离子芥或其提取物在制备防治心脑血管疾病药物中的应用的利记博彩app
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体涉及高山离子芥提取物的制备，高山离子芥或其 提取物在制备防治心脑血管疾病药物中的应用。
背景技术：
心脑血管疾病是当今世界上对人类威胁最大的疾病之一，其发病率和死亡率已 超过癌症而跃居世界第一。2008年中国卫生部公布的资料显示，中国人口的总死亡率中 心脑血管疾病死亡率高居首位，城市居民心脏病死亡率为19. 65 %，脑血管疾病死亡率为 19.62%。其中，具有“发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高，并发症多”特点的脑血管 疾病，即使采用最先进、最完善的治疗手段，仍可有半数以上的脑血管疾病幸存者生活不能 完全自理。目前，脑血管疾病药物治疗包括抗氧化、抗炎、抗凝血、抗血小板聚集、和溶栓治 疗等。但已上市的大部分药物作用途径单一，疗效不佳，甚至导致病情的加剧，因此寻找能 有效作用于多个病理生理环节的药物成为当今发展的方向。高山离子芥(Chorispora bungeana Fisch. et Mey.)系十字花科多年生高山冰缘 植物，主要分布在新疆海拔2600 4000m处的亚高山草甸、草原、砾石质山坡上。恶劣的生 存环境造就了高山离子芥独特的功效，但未见文献报道其提取物的制备方法及抗脑缺血作 用研究(阿依吐尔汗，谭敦炎，李志军，等.高山离子芥营养器官的结构与环境的关系研究 [J].新疆农业大学学报，1998，21 (4) 273-277 ；韩艳，李争艳，岳修乐，等.高山离子芥铁转 运蛋白基因编码序列的克隆及其抗逆性表达的实时定量分析[J].中国生物化学与分子生 物学报，2008，24 (6) :549-555 ；张丽静.高山离子芥铁蛋白基因CbFer的克隆、表达及其抗 氧化功能分析[D].兰州兰州大学，2006)。
发明内容
本发明提供了高山离子芥或其提取物的新用途，即高山离子芥或其提取物用于制 备防治心脑血管疾病药物的应用，特别是用于制备防治脑血管疾病药物的应用，可用于脑 血栓、脑缺血、脑栓塞、血管性痴呆多种脑血管疾病的预防和治疗。本发明提供了一种包含 高山离子芥或其提取物及常规药用载体的药物组合物，其特征是所述药物组合物是采用常 规制剂工艺制备而成的口服或非口服途径方式给药的制剂。本发明提供了预防或治疗心脑血管疾病的方法，包括向心脑血管疾病患者给予高 山离子芥或其提取物或前面所述药物组合物。本发明提供的高山离子芥或其提取物可以长期应用，具有明显的预防或改善心脑 损伤的功效，无明显副作用，价格低廉。采用各种不同方法制备的高山离子芥提取物对本发明的用途没有影响。
具体实施例方式心脑血管疾病是心血管病和脑血管病的统称，泛指由高脂血症、血液粘稠、动脉粥 样硬化、血栓、高血压等所致的心脏、大脑及全身组织发生缺血性或出血性疾病，包括冠心 病、心绞痛、心肌缺血、脑缺血、脑出血、脑缺氧、脑栓塞、脑痴呆等。本发明提供 了高山离子芥或其提取物在制备防治心脑血管疾病的药物中的应用， 特别是高山离子芥或其提取物在制备防治脑血管疾病药物中的应用，包括但不局限于脑缺 血、脑缺氧、脑血栓、血管性痴呆等脑血管疾病。高山离子芥植株可以于每年7 8月从海拔高度为3700 4000m的天山附近向阳 砾石山坡上采集后，连同泥土一起在纸箱中运回实验室，途中喷水保持湿润。植株高约3 IOcm,被白色短柔毛，地下有粗的肉质根，根端有直立的根状茎，叶多数，基生，深裂到全裂， 叶片椭圆形，羽状(阿依吐尔汗，谭敦炎，李志军，等.高山离子芥营养器官的结构与环境的 关系研究[J].新疆农业大学学报，1998，21 (4) :273-277)。高山离子芥提取物可以通过以下方式制备(1)取新鲜高山离子芥全株，净选除杂质，使用粉碎机粉碎，置IOOOml圆底烧瓶 中，加药材重量的4倍水浸泡约lh，热煎煮，提取三次，每次1.5h，过滤(用80目尼纶布)， 合并滤液，3000rpm离心lOmin，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得高山离子芥水提物。(2)取新鲜高山离子芥全株，净选除杂质，烘干，使用粉碎机粉碎，置IOOOml圆底 烧瓶中，加药材重量的4倍水浸泡约lh，热煎煮，提取三次，每次1.5h，过滤(用80目尼纶 布)，合并滤液，3000rpm离心lOmin，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得高山离子芥水 提物。(3)取新鲜高山离子芥全株，净选除杂质，使用粉碎机粉碎，置IOOOml圆底烧瓶 中，加药材4倍重量的60% 80% (ν/ν)乙醇浸泡约lh，回流提取3次，每次lh，过滤(用 80目尼纶布)，合并滤液，3000rpm离心lOmin，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得高山 离子芥醇提物。(4)取新鲜高山离子芥全株，净选除杂质，烘干，使用粉碎机粉碎，置IOOOml圆底 烧瓶中，加药材4倍重量的60% 80% (ν/ν)乙醇浸泡约lh，回流提取3次，每次lh，过滤 (用80目尼纶布)，合并滤液，3000rpm离心lOmin，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得 高山离子芥醇提物。本发明所述的高山离子芥或其提取物可以根据临床需要，加入相应药用载体，以 片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊、悬浮液、溶液、糖浆、注射剂、霜剂、软膏、凝胶剂、喷雾剂、口嚼剂 或贴剂等制剂形式存在。本发明所述的高山离子芥或其提取物可根据临床需要，采用口服或非口服方式用 药，优选口服给药方式。本发明所述的高山离子芥或其提取物制剂采用口服方式用药时，人用剂量优选 0.05-50g/人/日(相当于生药量)，其中更优选为0.5-25g/人/日(相当于生药量)，最 优选为2. 5-5g/人/日(相当于生药量)。以下结合实验例对本发明进行说明，但本发明并不受限于该实施例。实施例1高山离子芥提取物的制备 于每年7 8月从海拔高度为3700 4000m的天山附近向阳砾石山坡上采集高山离子芥植株，连同泥土一起在纸箱中运回实验室，途中喷水保持湿润。取80g新鲜高山离子 芥全株，净选除杂质，使用粉碎机粉碎，置IOOOml圆底烧瓶中，加药材重量的4倍水浸泡约 lh，热煎煮，提取三次，每次1.5h，过滤(用80目尼纶布)，合并滤液，3000rpm离心lOmin， 取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得1. 7g高山离子芥水提物。实施例2高山离子芥提取物的制备 于每年7 8月从海拔高度为3700 4000m的天山附近向阳砾石山坡上采集高 山离子芥植株，连同泥土一起在纸箱中运回实验室，途中喷水保持湿润。取80g新鲜高山离 子芥全株，净选除杂质，烘干，使用粉碎机粉碎，置IOOOml圆底烧瓶中，加药材重量的4倍水 浸泡约lh，热煎煮，提取三次，每次1. 5h，过滤(用80目尼纶布)，合并滤液，3000rpm离心 lOmin，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得6. 9g高山离子芥水提物。实施例3高山离子芥提取物的制备于每年7 8月从海拔高度为3700 4000m的天山附近向阳砾石山坡上采集高 山离子芥植株，连同泥土一起在纸箱中运回实验室，途中喷水保持湿润。取80g新鲜高山离 子芥全株，净选除杂质，使用粉碎机粉碎，置IOOOml圆底烧瓶中，加药材4倍重量的60% 80% (ν/ν)乙醇浸泡约lh，回流提取3次，每次lh，过滤(用80目尼纶布)，合并滤液， 3000rpm离心lOmin，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得1. 9g高山离子芥醇提物。实施例4高山离子芥提取物的制备于每年7 8月从海拔高度为3700 4000m的天山附近向阳砾石山坡上采集高 山离子芥植株，连同泥土一起在纸箱中运回实验室，途中喷水保持湿润。取80g新鲜高山离 子芥全株，净选除杂质，烘干，使用粉碎机粉碎，置IOOOml圆底烧瓶中，加药材4倍重量的 60% 80% (ν/ν)乙醇浸泡约lh，回流提取3次，每次lh，过滤(用80目尼纶布)，合并滤 液，3000rpm离心lOmin，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得7. 3g高山离子芥醇提物。实施例5高山离子芥提取物抗脑血栓研究1.材料和方法1. 1实验动物健康成年雄性Wistar大鼠，SPF/VAF级，体重250 300g，由北京 维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号SCXK (京)2007-0001。实验前在北京联 合大学应用文理保健食品功能检测中心SPF级实验动物房适应环境一周。1. 2试剂高山离子芥提取物在上述制备实施例中制备；脑心通胶囊咸阳步长 制药有限公司。1. 3仪器AR_2140型万分之一电子天平梅特勒-托利多仪器有限公司。1. 4实验动物分组及给药取雄性Wistar大鼠，随机分为5组模型组，高山离子芥(相当于生药量5、2. 5、 1. 25g/kg)组，脑心通胶囊(0. 324g/kg)组，每组24只，术前灌胃给药14d，每天1次。模型 组灌胃给予溶剂蒸馏水作为对照。1. 5血栓形成实验用10%水合氯醛(350mg/kg，ip)麻醉大鼠。将动物体温维持在37°C。让动物仰 卧固定，沿颈部中线切开皮肤及皮下组织。手术显微镜下分离右侧颈总动脉和左侧颈外静 脉。两端进行插管，形成大鼠颈动_静脉旁路15min后，取出4号丝线，在滤纸上除去浮血 后称重，即得到血栓湿重。将称重后血栓置于烘干箱中，在60°C，干燥4h后取出称重，即为血栓干重。
1. 6统计学处理实验结果均以I士s表示，采用单因素方差分析进行组间显著性比较，样本均数 间比较采用t检验。*表示P < 0. 05，表明给药组与模型组比较有显著性差异广表示P < 0.01，表明给药组与模型组比较有极显著性差异。2.结果2. 1高山离子芥提取物对大鼠颈动静脉血栓重量的影响表1高山离子芥提取物对大鼠颈动静脉血栓重量的影响G士s，η = 8)高山离子芥提取物组的血栓重量明显低于模型组，表明高山离子芥提取物具有抗 脑血栓作用。
Λα αι剂量 _ 血栓重量(mg)
组别, -
(g/kg)湿重干重
模型—— 24.63±5.07 4.96±1.92
高山离子芥高5 14.50±3.46" 2.70±1.09w
高山离子芥中2.5 17.25±2.66" 3.28±1.07*
高山离子芥低1.25 22. 38±3. 66 4. 28士 1.20
脑心通胶囊 0. 324_16. 75 ±3. 54"_2. 78±0. 92"注与模型组比较，*表示P < 0. 05 **表示P < 0. 01实施例6高山离子芥提取物抗脑缺血研究1.材料和方法1. 1实验动物健康成年雄性Wistar大鼠，SPF/VAF级，体重200 250g，由北京 维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号SCXK (京)2007-0001。实验前在北京联 合大学应用文理保健食品功能检测中心SPF级实验动物房适应环境一周。1. 2试剂高山离子芥在上述制备实施例中制备；脑心通胶囊咸阳步长制药有 限公司；复方阿司匹林片湖北制药有限公司；水合氯醛天津市光复精细化工研究所；红 四氮唑(2，3，5-triphenyltetrazolium，TTC) :Sigma 公司；MDA、MPO、SOD、考马斯亮蓝试剂 盒南京建成生物工程研究所；TT、FB试剂盒美国太平洋公司。1. 3仪器AR_2140型万分之一电子天平梅特勒-托利多仪器有限公司；电热恒 温水浴锅北京市长风仪器仪表公司；TGL 16M离心机湖南凯达科学仪器有限公司；MH-2 微量振荡器江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司；DY89-II型电动玻璃勻浆机宁波新 芝生物科技股份有限公司；WG-2003台式烘干箱惠阳南方电气实验设备厂；酶标仪美国 Thermo公司；ACL Advance全自动凝血分析仪美国贝克曼库尔特有限公司。1. 4动物分组及给药取雄性Wistar大鼠，随机分为6组假手术组，模型组，高山离子芥(相当于生药 量5,2. 5,1. 25g/kg)组，脑心通胶囊(0. 324g/kg)组，每组24只，灌胃给药，每天1次。第 5d给药后lh，实施手术。
1. 5ffistar大鼠局灶性脑缺血模型的制作大鼠以水合氯醛350mg/kg，腹腔注射麻醉，仰卧固定，颈正中切口，依次暴露并分 离左侧颈总动脉(Common carotid artery, CCA),颈内动脉(Internalcarotid artery, ICA)、颈外动脉(External carotid artery,ECA)0用动脉夹夹闭颈总动脉和颈内动脉，结 扎颈外动脉远心端，在颈外动脉上开一小口，将头端圆钝并经 多聚赖氨酸处理的鱼线插入 颈内动脉，插入长度以分叉处计约为18 20mm。结扎颈内动脉和颈总动脉，固定鱼线，缝合 皮肤(鱼线预留少许于体外)。缺血2h后，固定大鼠，将鱼线抽拉出至颈内、颈外动脉分叉 处，实现再灌注。假手术组仅分离三叉口，不闭塞大脑中动脉。1. 6神经功能缺陷评分模型组及各用药组大鼠作神经功能缺陷评分，评分标准为1)提大鼠尾观察前肢屈曲情况。如双侧前肢对称伸向地面，计为0分；如手术对侧 腕曲，计为1分；如手术对侧肘屈曲，计为2分；如手术对侧肩内旋，计为3分；如手术对侧 既有腕肘屈曲又有肩内旋，计为4分。2)将大鼠置于水平地面上，分别推双肩向对侧移动， 检查阻力。如双侧阻力对等且有力，计为0分；如向手术对侧推动大鼠时阻力轻度下降，计 为1分；如向手术对侧推动动物时阻力中度下降，计为2分；如向手术对侧推动大鼠时阻力 重度下降，计为3分。3)将大鼠双前肢置于一金属网上，观察前肢的肌张力。如双侧前肢肌 张力对等且有力，计为0分；如向手术对侧前肢肌张力轻度下降，计为1分；如向手术对侧 前肢肌张力中度下降，计为2分；如向手术对侧前肢肌张力重度下降，计为3分；4)大鼠有 不停向手术对侧转圈者，计为1分。根据以上标准评分，满分为11分，分数越高，表明大鼠 神经功能障碍越严重。1.7脑梗死范围测定采用TTC染色法测定脑梗死范围。将动物断头后迅速取出完整大脑，冠状切成2mm 的脑片，于2% TTC溶液中(以磷酸缓冲盐溶液配制)37°C水浴中孵育30min。梗死组织呈 白色，而周围正常组织呈玫瑰红色。然后在10%的中性甲醛溶液中固定。对每脑片正反两 面进行扫描，用图像分析软件积分求出梗死区和非梗死区面积。1. 8脑含水量的测定缺血2h再灌注22h后，将小鼠迅速断头取脑，用干湿法测脑组织含水量，在冰块上 迅速取脑，将取出的脑组织放在一个内有生理盐水湿润的定性滤纸的培养皿中，以防水分 蒸发，同时快速去掉脑皮质表面的软脑膜和凝血块。用千分之一天枰准确称取脑重量，然后 置于100°C烘箱24h后，再次称重，以(1-干重/湿重)X 100%即为相对含水量。1.9凝血功能测定于再灌注22h后，下腔静脉取血3ml，用ACL Advance全自动凝血分析仪测定血浆 凝血酶时间(TT)及纤维蛋白原含量(FB)。1. 10脑组织MDA含量、MPO及SOD活性测定大鼠在脑缺血2h再灌注22h后断头处死，在冰盘上快速取脑。称重，按1 9(W/ V)加入冰冷生理盐水，制成10%的脑组织勻浆。将勻浆液以3000r/min离心lOmin，取上 清夜，在-70°C超低温冰箱保存待测。按试剂盒说明书测定MDA含量、MPO活性以及SOD活 性。蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝法。1.11统计学处理
实验结果均以I士s表示，采用单因素方差分析进行组间显著性比较，样本均数 间比较采用t检验。*表示P < 0. 05，表明给药组与模型组比较有显著性差异广表示P < 0.01，表明给药组与模型组比较有极显著性差异。2 结果2. 1高山离子芥 提取物对大鼠神经功能缺陷、脑梗死范围、脑含水量的影响结果如表2所示，与假手术组比较，模型组神经功能缺陷评分、脑梗死范围及脑含 水量明显增加，高山离子芥提取物呈剂量依赖性地降低神经功能缺陷评分，减小脑梗死范 围，减轻脑水肿，表明高山离子芥具有抗脑缺血再灌注损伤作用。表2高山离子芥提取物对大鼠神经功能缺陷、脑梗死范围、脑含水量的影响 G士 s，η = 8)
α1 剂量 神经功能缺陷 脑梗死范围 、入 组别 ，/1 、 ^八 ，η、 脑含水量 _(g/kg)__(%)_
假手术—— 0" (Γ77.32±0.68w
模型——7.56±1.2528.45±5.4683.54±1.24
高山离子芥高 54. 23±0.85w14. 25±5. 2(Γ78. 31±0. 78"
高山离子芥中2.55.59±0.97*23.35±4.56*79.52±0.95”
高山离子芥低1.257.32±1.2027.67±5.8980.19±1.05"
脑心通胶囊0.3244.49±1.03**14.39±4.83**79.67±0.83**与模型组相比较，*表示P < 0. 05 **表示P < 0. 012. 2高山离子芥提取物对大鼠凝血功能的影响缺血2h再灌注22h能引起大鼠血浆凝血酶时间明显地缩短，纤维蛋白原含量显著 地升高。与模型组相比，高山离子芥能明显地延长血浆凝血酶时间，降低纤维蛋白原含量， 表明高山离子芥抗脑缺血作用与抗凝血活性有关。 _表3高山离子芥提取物对大鼠凝血功能的影响G士s，η = 8)
剂量
组别 , TT(S) FB(g/L) _(g/kg)_
假手术—— 53.94 ±7.99"3.29 士 1.29**
模型—— 37.63±4.695.66±1.60
高山离子芥高5 47.86±6.42"3.45±1.2广
高山离子芥中2.5 45.00±5.42*3.78±1.00*
高山离子芥低1.25 39.75±5.474.46±1.18
阿司匹林0.02_45. 54±5. 19"_3. 51 ±1. 18"与模型组相比较，*表示P < 0. 05 **表示P < 0. 01
2. 3高山离子芥提取物对大鼠脑组织MPO、SOD活性及MDA含量的影响如表3所示，高山离子芥提取物对大鼠缺血再灌注后脑组织SOD活性的降低有明 显地抑制作用，同时，能有效地降低MPO活性和MDA含量，表明其抗脑缺血作用与其抗炎、抗 氧化活性有关。_表4高山离子芥提取物对大鼠脑组织MP0、S0D活性及MDA含量的影响G士s，n = 8)
权利要求
1.高山离子芥或其提取物在制备预防或治疗心脑血管疾病药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征是高山离子芥或其提取物在制备预防或治疗脑 血管疾病药物中的应用。
3.根据权利要求1、2所述的用途，其特征是所述的脑血管疾病是脑缺血、脑缺氧、脑血 栓或血管性痴呆。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征是所述的高山离子芥提取物是高山离子芥水提物。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征是所述的高山离子芥提取物是高山离子芥醇提物。
6.根据权利要求3所述的用途，其特征是所述的高山离子芥水提物通过以下方式制 备取高山离子芥全株或全株的一部分，使用粉碎机粉碎，加水浸泡，加热煎煮，提取3次， 过滤，合并滤液，离心，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得高山离子芥水提物。
7.根据权利要求4所述的用途，其特征是所述的高山离子芥醇提物通过以下方式制 备取高山离子芥全株，使用粉碎机粉碎，加乙醇浸泡，回流提取3次，过滤，合并滤液，离 心，取上清液浓缩，冷冻干燥成干浸膏即得高山离子芥醇提物。
8.—种药物组合物，其特征是所述药物组合物包含高山离子芥或高山离子芥提取物及 常规药用载体。
9.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物是采用常规制剂工 艺制备而成的口服或非口服途径方式给药的制剂。
10.一种预防或治疗心脑血管疾病的方法，包括向心脑血管疾病患者给予高山离子芥 或其提取物。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，提供了高山离子芥或其提取物用于制备心脑血管疾病药物的用途。本发明的高山离子芥提取物包括高山离子芥水提物和醇提物，研究表明，高山离子芥或其提取物在体内具有明显的抗脑缺血、抗脑缺氧、抗脑血栓、抗血管性痴呆，副作用小，可以长期服用。
文档编号A61P25/28GK102138953SQ201010117378
公开日2011年8月3日 申请日期2010年2月1日 优先权日2010年2月1日
发明者刘婷, 向云, 孙雅煊, 安黎哲, 张华 , 王东晖, 盛红梅 申请人:中国科学院寒区旱区环境与工程研究所, 兰州大学