专利名称：一种中药组合物制剂的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种中药组合物制剂的检测方法，特别涉及一种具有凉血、祛湿功效的中药组合物制剂的检测方法。
背景技术：
本发明中药组合物制剂由当归、苦参两味药组成，具有凉血，祛湿的功效，用于血燥湿热引起，头面生疮，粉刺疙瘩，湿疹刺痒，酒糟鼻赤。但是缺乏针对该组合物制剂的质量检测方法体系，因此，研究针对本发明中药组合物制剂的质量检测方法体系将是亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于公开一种中药组合物制剂的检测方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现 本发明检测方法包括如下鉴别和含量测定中的一种或几种 鉴别 A取本发明制剂日用制剂量的1/6-3/4重量倍，加乙醇6-15体积份，浸渍0.5-1.5小时，滤过，滤液浓缩至0.5-1.5体积份，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5-1.5重量份，加乙醇2-8体积份，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验。吸取上述两种溶液各0.001-0.005体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4-12∶0.5-1.5的甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开取出，晾干，在紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
B取本发明制剂日用制剂量的1/6-3/4重量倍，加三氯甲烷15-35体积份，用氨试液调节pH值至9～10，加热回流0.5-1.5小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1-3体积份使溶解，作为供试品溶液。另取苦参碱对照品，加乙醇制成每1ml含苦参碱1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液0.008-0.012体积份，对照品溶液0.001-0.003体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以2-6∶1-5∶1-3∶0.1-0.3的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定苦参碱照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以8-18∶65-102的四氢呋喃-0.3％十二烷基硫酸钠(用磷酸调pH值至4.0)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按苦参碱峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含苦参碱0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备取本发明制剂日用制剂量的1/40-1/8重量倍，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.2％盐酸甲醇溶液10-30体积份，密塞，超声处理25-45分钟，放冷，再称定重量，用0.2％盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜在0.45μm下滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.008-0.012体积份，注入液相色谱仪，测定，即得。
每日用制剂量含苦参以苦参碱C15H24N2O计，不得少于8-16mg。
本发明检测方法优选如下鉴别和含量测定中的一种或几种 鉴别 A取本发明制剂日用制剂量的1/4重量倍，加乙醇10体积份，浸渍1小时，滤过，滤液浓缩至1体积份，作为供试品溶液。另取当归对照药材1重量份，加乙醇5体积份，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验。吸取上述两种溶液各0.003体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1的甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开取出，晾干，在紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
B取本发明制剂日用制剂量的1/4重量倍，加三氯甲烷25体积份，用氨试液调节pH值至9～10，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2体积份使溶解，作为供试品溶液。另取苦参碱对照品，加乙醇制成每1ml含苦参碱1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液0.01体积份，对照品溶液0.002体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶3∶2∶0.2的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定苦参碱照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以14∶86的四氢呋喃-0.3％十二烷基硫酸钠(用磷酸调pH值至4.0)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按苦参碱峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含苦参碱0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备取本发明制剂日用制剂量的3/40重量倍，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.2％盐酸甲醇溶液20体积份，密塞，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用0.2％盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜在0.45μm下滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.01体积份，注入液相色谱仪，测定，即得。
每日用制剂量含苦参以苦参碱C15H24N2O计，不得少于12mg。
本发明药物组合物检测方法可以应用于组合物的各种剂型，如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、分散片、滴丸剂、水丸剂、蜜丸剂、微丸剂、浓缩丸剂、缓释剂、口服液体制剂或注射剂等临床可接受的剂型，由于不同剂型的制剂其中所含的相当生药量是相同的，因此各个剂型在进行检测时，所选用样品量可统一折算为日用制剂量为计量单位，每单位制剂可以为每片、每粒、每支或每丸等。
本发明中药组合物制剂的原料药组成为 当归300-800重量份苦参300-800重量份 本发明中药组合物制剂的原料药组成优选为 当归500重量份苦参500重量份 本发明中药组合物制剂的原料药组成优选为 当归650重量份苦参400重量份 本发明中药组合物制剂的原料药组成优选为 当归460重量份苦参680重量份 本发明所述的重量份和体积份的关系为g/ml的关系。
本发明所述的质量检测方法中的中药组合物制剂是按照常规工艺，加入常规辅料，制成药学上可接受的各种剂型，包括但不限于散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、分散片、滴丸剂、水丸剂、蜜丸剂、微丸剂、浓缩丸剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或注射剂。
图1当归的薄层色谱图1、当归对照药材；2、3、4、本发明中药组合物制剂(批号6030870、6031451、6031452)；5、阴性对照(缺当归)； 图2苦参的薄层色谱图1、2、3本发明中药组合物制剂(批号6030870、6031451、6031452)；4、苦参碱；5、阴性对照(缺苦参)； 图3苦参碱全波长(190-400nm)扫描图谱 图4本发明中药组合物制剂高效液相色谱图(磷酸调pH值至3.0) 图5本发明中药组合物制剂高效液相色谱图(磷酸调pH值至3.5) 图6本发明中药组合物制剂高效液相色谱图(磷酸调pH值至4.0) 图7苦参碱的标准曲线 图8空白溶液的高效液相色谱图 图9苦参碱对照品高效液相色谱图 图10本发明中药组合物制剂高效液相色谱图 图11苦参碱高效液相色谱图 图12本发明中药组合物制剂高效液相色谱图 图13苦参碱对照品高效液相色谱图 图14本发明中药组合物制剂高效液相色谱图 本发明对中药组合物制剂的质量标准进行了提高和完善，进行了苦参中苦参碱的薄层色谱鉴别，经复核，以上薄层色谱斑点清晰，重现性好，空白无干扰；同时采用高效液相色谱法测定苦参中苦参碱的含量，试验结果表明苦参碱色谱峰与杂质峰能较好分离；并且通过准确度试验，表明本方法具有良好的准确度；通过本发明的质量控制，提高了产品稳定性，有利于工业化生产的质量控制。
下面实验例和实施例进一步说明但不限于本发明。
实验例1鉴别实验 1、药品与试剂 苦参碱对照品110805-200306由中国药品生物制品检定所提供。
当归对照药材121057-200504由中国药品生物制品检定所提供。
样品本发明中药组合物制剂由实施例1所述方法制备；(批号6030870、6031451、6031452)由北京同仁堂科技发展有限公司制药厂提供。
试剂均为分析纯。
薄层色谱硅胶预制板青岛海洋化工厂、烟台市化学工业研究所生产。
2、当归的薄层鉴别。取本发明中药组合物丸剂约3g，经三批样品实验观察，空白无干扰。结果见附图1。
3、苦参的薄层鉴别。取本发明中药组合物丸剂约3g，展开剂为甲苯，空白溶液的制备是按处方中药材量的比例，自配不含苦参的群药，按其工艺制成空白制剂，再按实施例1所述的供试品溶液的制备方法制备，展开及检视条件见实施例1。经三批样品实验观察，空白无干扰。结果见附图2。
实验例2苦参中苦参碱的含量测定 1、仪器与试剂 仪器Agilent 1100高效液相色谱仪。
色谱柱Agilent ZORBAX Eclips Plus C18(4.6×250mm，5μm。苦参碱对照品(供含量测定用110805-200306)由中国药品生物制品检定所提供。纯度100.00％见附图12。
样品本发明中药组合物制剂由实施例1所述方法制备，(批号6030447、6030870、6031451、6031452、8030964、8030965、8038064、8038115、8038116、8038117)由北京同仁堂科技发展有限公司制药厂提供。
试剂配制标准溶液及供试品溶液的试剂均为分析纯，液相色谱用试剂为色谱级试剂，液相用水为超纯水。
2、色谱分析条件 流动相四氢呋喃-0.3％十二烷基硫酸钠(用磷酸调pH值至4.0)(14∶86) 流速1.0ml/分钟 检测波长210nm 理论板数按苦参碱峰计算应不低于5000。
3、实验条件的选择 (1)检测波长的选择取苦参碱对照品，加流动相溶解，注入液相色谱仪，用DAD(二极管距阵检测器)进行紫外全波长扫描(190～400nm)。结果表明，在苦参碱210nm附近有吸收峰，以210nm吸收度最大，灵敏度最高，且样品空白无干扰，故此本实验选择210hm作为检测波长(见附图3)； (2)色谱柱的选择《中国药典》2005版中“苦参”含量测定采用氨基色谱柱分离，因为关于用ODS色谱柱分离苦参中苦参碱或氧化苦参碱的报道很多，ODS色谱柱现使用较普遍，所以选用了ODS色谱柱。
(3)流动相的选择流动相的pH值选择流动相选择为四氢呋喃-0.3％十二烷基硫酸钠(14∶86)，分别用磷酸调整0.3％十二烷基硫酸钠pH值至3.0，3.5，4.0比较样品在不同pH值的流动相中的分离情况，结果磷酸调pH值至4.0的苦参碱峰的分离度合格(R＞1.5)，而且分离效果最佳(见附图4、5、6) (4)柱温的选择流动相为四氢呋喃-0.3％十二烷基硫酸钠(用磷酸调整pH值至4.0)，(14∶86)，分别选择柱温20℃、25℃、30℃、40℃，比较样品在不同柱温时的分离情况，结果柱温20℃～30℃时，苦参碱峰的分离效果最佳。
4、提取条件的选择 (1)提取溶媒的选择本实验采用不同溶剂为提取溶剂，超声提取30分钟，结果见表1。
表1提取溶媒的选择
从上表可见，用0.2％盐酸甲醇作为提取溶媒，苦参碱即可提取完全。
(2)提取时间的确定本实验采用0.2％盐酸甲醇为提取溶剂，对提取时间即超声时间进行了摸索实验，结果见表2。
表2提取时间的确定
从上表可见，超声提取30分钟，含量最高。故超声暂定为30分钟即可。
5、线性关系的考察 精密称取苦参碱对照品11.38mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取苦参碱对照品溶液(1.138mg/ml)0.2，0.5，2，5，8，10μl注入液相色谱仪，测得峰面积，结果见表3。以对照品进样量(μg)为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线(见附图7)，结果表明苦参碱在0.2276～11.38μg范围内呈良好的线性关系。回归方程为Y＝1697.18558x+0.251635，r＝0.99998(n＝6)。
表3线性关系考察
6、精密度试验精密吸取同一供试品溶液，重复进样6次，测定峰面积，RSD＜3％，结果见表4。
表4精密度试验
7、重复性试验按上述方法，对同一批样品(批号8030964)6份，进行测定，RSD＜2％，结果见表5。
表5重复性试验
8、空白试验空白溶液的制备是按处方中药味比例，自配不含苦参的制剂，再按实施例1所述的含量测定下供试品溶液制备方法制备并测定，空白溶液在与苦参碱对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为空白无干扰(见附图8)。
9、稳定性试验按实施例1所述的方法对同一批样品分别于配制后0，1，2，6，12，24小时，依法测定，结果表明，供试品溶液在24小时内稳定。RSD＜3％，结果见表6。
表6稳定性试验
10、准确度试验 采用加样回收法。精密称取已知含量的同批(8030964，苦参碱含量2.454mg/g)号样品0.4g，分别精密加入苦参碱对照品溶液(0.0855mg/ml)10ml，再精密加入0.2％盐酸甲醇溶液10ml，按实施例1所述的含量测定项下操作，平行制样6份，测定，按下式计算回收率，结果表明本方法具有良好的准确度，数据见表7。
表7回收率试验
11、样品测定结果按含量测定项下测定方法，测定10批样品，结果见表8 表8样品测定结果
即本发明中药组合物丸剂每1g含苦参以苦参碱(C15H24N20)计，按照测定的10批样品的含量平均值的70％为标准，即不得少于1.0mg。
12、范围试验 (1)采用加样回收法，按照苦参碱含量下限的50％～70％，精密称取已知含量的同批(6030447，苦参碱含量1.358mg/g)号样品0.3g，分别精密加入苦参碱对照品溶液(0.0447mg/ml)10ml，再精密加入盐酸甲醇溶液10ml，照实施例1所述的含量测定项下操作，平行制样6份，测定，按下式计算回收率，结果表明本方法具有良好的准确度，数据见表9。
表9含量下限50％～70％的回收率试验
(2)采用加样回收法，按照苦参碱含量下限的200％，精密称取已知含量的同批(6030447，苦参碱含量1.358mg/g)号样品0.9g，分别精密加入苦参碱对照品溶液(0.1225mg/ml)10.0ml，照实施例1所述的含量测定项下操作，平行制样6份，测定，按下式计算回收率，结果表明本方法具有良好的准确度，数据见表10。
表10含量下限的2～5倍的回收率试验
13、方法耐用性研究 (1)色谱柱Angilent ZORBAX Eclips Plus C184.6×250mm，5um。
流动相四氢呋喃-0.3％十二烷基硫酸钠(用磷酸调pH值至4.0)14∶86) 流速1.0ml/min 柱温20℃ 检测波长210nm 测定数据如下结果见表11。(苦参碱对照品色谱图见附图9，本发明中药组合物制剂色谱图见附图10) 表11耐用性结果
(2)色谱柱Phennomenex Luna C18250mm×4.6mm，5um 流动相四氢呋喃-0.3％十二烷基硫酸钠(用磷酸调pH值至4.0)(14∶86) 流速1.0ml/min 柱温20℃ 检测波长210nm 测定数据如下结果见表12。(苦参碱对照品色谱图见附图11，本发明中药组合物制剂色谱图见附图12) 表12耐用性结果
(3)色谱柱Angilent ZORBAX XDB C18250×4.6mm，5um。
流动相四氢呋喃-0.3％十二烷基硫酸钠(用磷酸调pH值至4.0)(14∶86) 流速1.0ml/min 柱温20℃ 检测波长210nm 测定数据如下结果见表13。(苦参碱对照品色谱图见附图13，本发明中药组合物制剂色谱图见附图14) 表13耐用性结果
根据三个品牌色谱柱测定同一份样品的结果，计算苦参碱含量的相对标准偏差为0.56％，以上实验说明本方法具有较好的耐用性。
实验例3标准复核及方法学验证实验报告如下 1.性状与样品实际性状相符。
2.鉴别(1)为当归、苦参二味药的显微特征，经复核，显微特征明显，易于查找。
3.鉴别(2)为当归的薄层色谱，(3)为苦参中苦参碱的薄层色谱。经复核，以上薄层色谱斑点清晰，重现性好，空白无干扰。
4.含量测定采用高效液相色谱法测定苦参中苦参碱的含量，规定不得少于1.0mg/g。试验结果表明苦参碱色谱峰与杂质峰能较好分离，经复核，三批样品含量均符合规定，测定数据见表14 表14苦参碱含量测定数据(mg/g)
5.空白试验按处方中药味比例，配制不含苦参的群药，按其制法制成空白制剂，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液，依法测定，结果空白溶液在与苦参碱对照品溶液相同保留时间处未出现色谱峰，空白无干扰。
6.重复性试验 取同一批样品(批号8034309)，平行制备3份进行测定，结果见表15。
表15重复性试验结果
7.准确度试验 采用加样回收法。精密称取已知含量的同一批样品(批号8034309，苦参碱含量为2.377mg/g)0.45g，精密加入苦参碱对照品溶液(含苦参碱0.0569mg/ml)20ml，照实验例1所述含量测定项下操作，平行制备3份，依法测定，结果表明本方法具有良好的准确度，数据见表16。
表16准确度试验数据
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
具体实施例方式 实施例1本发明药物组合物丸剂的检测方法 当归500g 苦参500g 取上述二味药，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末加炼蜜40～50g与适量水，泛丸，干燥；用玉米脘包衣，晾干，制成水蜜丸，即得。
鉴别 A取本发明水蜜丸约3g，粉碎，加乙醇10ml，浸渍1小时，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取当归对照药材1g，加乙醇5ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验。吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1的甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开取出，晾干，在紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
B取本发明水蜜丸约3g，粉碎，加三氯甲烷25ml，用氨试液调节pH值至9～10，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取苦参碱对照品，加乙醇制成每1ml含苦参碱1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶3∶2∶0.2的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定苦参碱照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以14∶86的四氢呋喃-0.3％十二烷基硫酸钠(用磷酸调pH值至4.0)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按苦参碱峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含苦参碱0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备取本发明水蜜丸粉末0.9g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.2％盐酸甲醇溶液20ml，密塞，在功率250W，频率40kHz下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用0.2％盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜在0.45μm下滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
每日用制剂量含苦参以苦参碱C15H24N2O计，不得少于12mg。
用法与用量口服。一次6g，一日2次。
规格每100粒重10g 实施例2本发明药物组合物散剂的检测方法 当归650g 苦参400g 取上述二味药，粉碎成细粉，过筛，混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成散剂。
鉴别 A取本发明散剂日用制剂量的1/4，加乙醇8ml，浸渍0.8小时，滤过，滤液浓缩至0.8ml，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.8g，加乙醇4ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验。吸取上述两种溶液各2.5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以8∶0.7的甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开取出，晾干，在紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
B取本发明散剂日用制剂量的1/4，加三氯甲烷20ml，用氨试液调节pH值至9～10，加热回流0.8小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取苦参碱对照品，加乙醇制成每1ml含苦参碱1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液9μl，对照品溶液1.8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3∶2∶1.8∶0.18的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定苦参碱照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以，12∶75的四氢呋喃-0.3％十二烷基硫酸钠(用磷酸调pH值至4.0)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按苦参碱峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含苦参碱0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备取本发明散剂日用制剂量的1/20，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.2％盐酸甲醇溶液18ml，密塞，超声处理28分钟，放冷，再称定重量，用0.2％盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜在0.45μm下滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各9μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
每日用制剂量含苦参以苦参碱C15H24N2O计，不得少于9mg。
实施例3本发明药物组合物片剂的检测方法 当归460g 苦参680g 取上述二味药，粉碎成细粉，过筛，混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂。
鉴别 A取本发明片剂日用制剂量的1/2，加乙醇12ml，浸渍1.4小时，滤过，滤液浓缩至1.4ml，作为供试品溶液。另取当归对照药材1.3g，加乙醇7ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验。吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以10∶1.3的甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开取出，晾干，在紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
B取本发明片剂日用制剂量的1/2，加三氯甲烷30ml，用氨试液调节pH值至9～10，加热回流1.3小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取苦参碱对照品，加乙醇制成每1ml含苦参碱1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液11μl，对照品溶液2.5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶4∶2.5∶0.25的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定苦参碱照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以16∶94的四氢呋喃-0.3％十二烷基硫酸钠(用磷酸调pH值至4.0)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按苦参碱峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含苦参碱0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备取本发明片剂日用制剂量的1/10，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.2％盐酸甲醇溶液25ml，密塞，在功率250W，频率40kHz下进行超声处理35分钟，放冷，再称定重量，用0.2％盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜在0.45μm下滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各11μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
每日用制剂量含苦参以苦参碱C15H24N2O计，不得少于14mg。实施例4本发明药物组合物口服液体制剂的检测方法 当归380g 苦参550g 取上述二味药，按照常规方法提取，加入常规辅料，按照常规工艺，制成口服液体制剂。
鉴别 A取本发明口服液体制剂日用制剂量的1/6，加乙醇7ml，浸渍0.8小时，滤过，滤液浓缩至0.7ml，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.6g，加乙醇3.5ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验。吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶0.8的甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开取出，晾干，在紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
B取本发明口服液体制剂日用制剂量的1/6，加三氯甲烷18ml，用氨试液调节pH值至9～10，加热回流0.7小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1.4ml使溶解，作为供试品溶液。另取苦参碱对照品，加乙醇制成每1ml含苦参碱1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液8.5μl，对照品溶液1.6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以2.5∶1.8∶1.6∶0.15的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例5本发明药物组合物胶囊剂的检测方法 当归720g 苦参450g 取上述二味药，粉碎成细粉，过筛，混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成胶囊剂。
含量测定苦参碱照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以17∶98的四氢呋喃-0.3％十二烷基硫酸钠(用磷酸调pH值至4.0)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按苦参碱峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含0苦参碱.1mg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备取本发明胶囊剂日用制剂量的1/8，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.2％盐酸甲醇溶液28ml，密塞，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用0.2％盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜在0.45μm下滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各12μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
每日用制剂量含苦参以苦参碱C15H24N2O计，不得少于15mg。
权利要求
1.一种中药组合物制剂的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和含量测定中的一种或几种
鉴别
A取本发明制剂日用制剂量的1/6-3/4重量倍，加乙醇6-15体积份，浸渍0.5-1.5小时，滤过，滤液浓缩至0.5-1.5体积份，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.5-1.5重量份，加乙醇2-8体积份，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各0.001-0.005体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4-12∶0.5-1.5的甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开取出，晾干，在紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
B取本发明制剂日用制剂量的1/6-3/4重量倍，加三氯甲烷15-35体积份，用氨试液调节pH值至9～10，加热回流0.5-1.5小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1-3体积份使溶解，作为供试品溶液；另取苦参碱对照品，加乙醇制成每1ml含苦参碱1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液0.008-0.012体积份，对照品溶液0.001-0.003体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以2-6∶1-5∶1-3∶0.1-0.3的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定苦参碱照高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以8-18∶65-102的四氢呋喃-0.3％十二烷基硫酸钠(用磷酸调pH值至4.0)为流动相；检测波长为210nm；理论板数按苦参碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含苦参碱0.1mg的溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备取本发明制剂日用制剂量的1/40-1/8重量倍，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.2％盐酸甲醇溶液10-30体积份，密塞，超声处理25-45分钟，放冷，再称定重量，用0.2％盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜在0.45μm下滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.008-0.012体积份，注入液相色谱仪，测定，即得；
每日用制剂量含苦参以苦参碱C15H24N2O计，不得少于8-16mg；
其中所述中药组合物的原料药组成为
当归300-800重量份 苦参300-800重量份。
2.如权利要求1所述的一种中药组合物制剂的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和含量测定中的一种或几种
鉴别
A取本发明制剂日用制剂量的1/4重量倍，加乙醇10体积份，浸渍1小时，滤过，滤液浓缩至1体积份，作为供试品溶液；另取当归对照药材1重量份，加乙醇5体积份，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各0.003体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1的甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开取出，晾干，在紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
B取本发明制剂日用制剂量的1/4重量份，加三氯甲烷25体积份，用氨试液调节pH值至9～10，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2体积份使溶解，作为供试品溶液；另取苦参碱对照品，加乙醇制成每1ml含苦参碱1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液0.01体积份，对照品溶液0.002体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4∶3∶2∶0.2的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定苦参碱照高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以14∶86的四氢呋喃-0.3％十二烷基硫酸钠(用磷酸调pH值至4.0)为流动相；检测波长为210nm；理论板数按苦参碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含苦参碱0.1mg的溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备取本发明制剂日用制剂量的3/40重量倍，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.2％盐酸甲醇溶液20体积份，密塞，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用0.2％盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜在0.45μm下滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.01体积份，注入液相色谱仪，测定，即得；
每日用制剂量含苦参以苦参碱C15H24N2O计，不得少于12mg。
3.如权利要求1或2所述的一种中药组合物制剂的检测方法，其特征在于该方法中药组合物的原料药组成为
当归500重量份 苦参500重量份。
4.如权利要求3所述的一种中药组合物制剂的检测方法，其特征在于该方法中药组合物的原料药组成为
当归650重量份 苦参400重量份。
5.如权利要求3所述的一种中药组合物制剂的检测方法，其特征在于该方法中药组合物的原料药组成为
当归460重量份 苦参680重量份。
6.如权利要求1、2、4或5所述的一种中药组合物制剂的检测方法，其特征在于该方法中药组合物制剂为
取上述原料药，按照常规工艺，加入常规辅料，制成药学上可接受的各种剂型，包括但不限于散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液体制剂或注射剂。
7.如权利要求3所述的一种中药组合物制剂的检测方法，其特征在于该方法中药组合物制剂为
取上述原料药，按照常规工艺，加入常规辅料，制成药学上可接受的各种剂型，包括但不限于散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液体制剂或注射剂。
全文摘要
本发明公开了一种中药组合物制剂的检测方法，其中所述的中药组合物制剂是取原料药，加入常规辅料，按照常规工艺制成药学上可接受的各种剂型。检测方法包括鉴别和含量测定对苦参中苦参碱的薄层色谱鉴别，经复核，以上薄层色谱斑点清晰，重现性好，空白无干扰；同时采用高效液相色谱法测定苦参中苦参碱的含量，试验结果表明苦参碱色谱峰与杂质峰能较好分离；通过本发明的质量控制，提高了产品稳定性，有利于工业化生产的质量控制。
文档编号A61K36/185GK101757093SQ201010034409
公开日2010年6月30日 申请日期2010年1月15日 优先权日2010年1月15日
发明者郑杰, 赵红英, 刘莹, 迟玉明, 解素花 申请人:北京同仁堂科技发展股份有限公司