专利名称：不可分型流感嗜血杆菌疫苗和它们的用途的利记博彩app
技术领域：
本申请涉及 不可分型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)疫苗和它们在治疗肺病如慢性阻塞性肺病和哮喘中的用途。本申请也涉及用于治疗肺病如慢性阻塞性肺病和哮喘的新的流感嗜血杆菌菌株。
背景技术：
主要归因于吸入烟草烟雾的慢性阻塞性肺病(COPD)是发病率和死亡率的主要病因，为世界上第四大最常见的死亡原因(Lung Disease Data(2008).美国肺学会)。根据国家心、肺和血液研究所估计，在2007年美国COPD的年度费用是426亿美元，包括0. 267亿美元直接健康护理费用(Lung Disease Data(2008).美国肺学会)。建立旨在大幅度改善结局的医学疗法的失败是令人失望的并且需要新的治疗策略(C0PD全球倡议(2006). COPD 诊断、治疗和预防的全球策略，这可以在慢性阻塞性肺病全球倡议的网址上找到)。COPD的基础性病理学包括小气道狭窄和肺实质毁坏，这至少部分是炎性过程的结果。再发急性病情加重与气流阻塞和健康状态的恶化有关，可能因为它们反映更强烈的支气管内炎症。这种炎性应答的原因是复杂的，但部分地包括细菌定居已经因吸入有毒物质而受损的肺内支气管黏膜(Sethi, 2006, Chest 129:223-224)。急性病情加重是COPD自然历程中的重要事件并且在严重疾病中更常见。急性病情加重降低生活质量、加速肺功能进一步降低并且是入院治疗和死亡的主要决定因素 (C0PD 全球倡议，2006 ；Niewoehner, 2006, Am. J. Med. 119 (10 增干Ij 1) 38-45 ；Wedzicha 和 Seemungal，2007，Lancet370(9589) :786_96 ；Sethi,2006, Chest 129 223~224 ；Anzueto, 2007，Clin. Chest Med. 28 (3) :609_16，vii ；和 Look 等人，2006，Proc. Am. Thorac. Soc. 3 (6) :482-3)。一旦患者在病情加重情况下入院，他们仍有再次入院或死亡的高风险 (Sin 和 Tu，2001，Am. J. Respir. Crit. Care Med. 164(4) :580_4)。防止COPD病情加重是治疗的主要目标(C0PD全球倡议指南，2002 ;Celli和 MacNee, 2004，Eur. Respir. J. 23 (6) :932_46 ；0' Donnell 等人，2007，Can. Respir J. 14 增刊B :5B-32B)，防止病情加重或减少其数目同样对疾病的长期临床过程和患者的生活质量产生有益影响(Burge 等人，2000，BMJ320 (7245) 1297-303 ;Calverley 等人，2003，Chest 124(4) 1350-6 ；Vincken 等人，2002，Eur. Respir. J. 19(2) :209_16 ；和 Casaburi 等人， 2002, Eur. Respir J. 19(2) :217_24)。哮喘是以可逆性气道阻塞为特征的气道慢性炎性疾病，并且传统上已经分类为外源性哮喘(因对吸入的变应原如花粉和屋尘螨的变态反应引起)或内源性哮喘(不因经典变态反应引起)，其机制未知。外源性哮喘也称作“变应性”哮喘，而内源性哮喘也称作“非变应性”或“特发性”哮喘。与COPD相反，哮喘是经常应答于一种或多种触发物的涉及呼吸系统的典型慢性病症，其中气道偶尔收紧、变得红肿并且内衬有过量粘液。这些发作可以由以下事物触发， 如暴露于环境刺激，如变应原、环境烟雾、冷或暖空气、香料、宠物毛屑、潮湿空气、运动或用力或者情绪压力。在儿童中，最常见的触发物是病毒疾病如引起普通感冒的那些疾病。这种气道狭窄引起症状如喘鸣、气短、胸闷和咳嗽。气道窄缩应答于支气管扩张剂。在发作之间，大部分患者感觉良好但是可能具有轻微症状，并且在运动时间长于未患病的个体后，他们可能仍然气短。通常可以用药物和环境改变的组合控制从轻微到致命威胁范围的哮喘症状。在最近报道的基于确诊的哮喘受试者的研究中，基于痰中嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞计数的差异对哮喘分类(Simpso等，2006，Respirology 11:54-61)。与健康对照受试者相比较，基于这些细胞类型的存在，将该研究中的受试者划分成不同的哮喘亚型。鉴定了几种哮喘亚型，包括嗜中性粒细胞性哮喘(> 61%嗜中性粒细胞)和嗜酸性粒细胞性哮喘(> 1.01%嗜酸性粒细胞)。嗜中性粒细胞性哮喘群体占哮喘者总数的大约20%。该研究还报道了在两次取样之间的短期(4周)和长期(平均5. 3年)间隔范围内大多数的这些受试者中持久的嗜中性粒细胞增多症，尽管在评估前的当月期间没有受试者报道气道感染。虽然发现哮喘受试者比健康对照具有更高水平的胞内细菌和巨噬细胞，但是在嗜中性粒细胞性哮喘者和其他哮喘群体之间未发现显著差异。实际上，该报道指出所发现的细菌水平低于与急性细菌感染相一致的细菌水平，并且该报道得出结论不存在解释嗜中性粒细胞性哮喘的炎性过程的细菌感染证据。支气管炎是肺中的支气管(中等大小的气道)发炎。慢性支气管炎(CB)不必定由感染引起并且一般是COPD综合征的一部分。CB在临床上定义为连续2年产生痰(粘痰)和粘液至少3个月的持续咳嗽。不可分型流感嗜血杆菌(Non-typable Haemophilus influenzae, NTHi)是与慢性支气管炎(CB)相关的最常见致病菌(Sethi和Murphy，2001，Clin. Microbiol. Rev. 14 336-363)。NTHi可以在健康患者和CB患者的上气道(例如鼻、中耳、咽和窦)(Sethi和 Murphy, 2001, Clin. Microbiol. Rev. 14 :336_363)中以及呼吸道的几个部位(包括腔，附着于粘膜下层间质组织中的粘膜上皮细胞)找到(Molle等人，1998,Am. J. Respir. Crit. Care Med. 157 950-56)。非阻塞性和阻塞性CB的研究已经观察到巨大比例的患者具有NTHi持续感染(Murphy 等人，2004，Am. J. Respir. Crit. Care Med. 170 :266_72)。以前已经显示NTHi和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)均诱导非IgE 介导的和增强型IgE介导的组胺从肥大细胞释放，其中所述的肥大细胞通过支气管肺泡灌洗术从CB患者的气道获得。在NTHi的情况下，已经报道外毒素可能负责增强IgE介导的组胺释放(Clementsen等人，1990，Allergy 45:10-17)。已经显示从急性病情加重期间的CB患者分离的免疫细胞被患者自身的细菌致敏并对其具有高反应性(Norn等人， 1994，Agents Actions 41，大会专刊(Special Conference Issue) 1994 :C22_C23)。几项研究也已经报道了应答于真菌(例如，曲霉属(Aspergillus))和病毒(例如，呼吸道合胞体病毒、副流感病毒(Welliver等人，1982，J. Pediatrics 101 :889_96))和细菌(肺炎链球菌(S. pneumoniae) (Kjaergard 等人，1996，APMIS104 :61_67 ；Tee 和 P印ys，1982， Clin. Allergy 12 439-50 ；PauweIs 等人，1980，Allergy 157 :665_9)、金黄色葡萄球菌 (S. aureus) (Rhode 等人，2004，Respir. Med. 98 :858_64 ；Tee 禾口 P印ys，1982，Clin. Allergy 12 :439-50)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)(Shen 等人，1981， Infect. Immun. 32 :967_68)和肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae) (Seggev 等人，1996，Ann. Allergy Asthma Immunol. 77 :67_73)所致呼吸道感染而产生的特异性IgE抗体。在CB患者(Kjaergard 等人，1996，APMIS 104 ；61-67 ；Tee 和 Pepys, 1982，Clin. Allergy 12 :439_50) 和囊性纤维化患者0^6和？印78，1982，(1丨11^116印712 :439_50)的血清中也已经鉴定到特异于NTHi的IgE抗体。 在支气管哮喘患者的研究中，在29%的患者中发现了针对NTHi的IgE抗体。针对 NTHi和/或肺炎链球菌的抗体也存在于22%的没有其他IgE介导超敏反应的患者中。然而，在具有针对多种吸入性抗原的明显IgE抗体(表明变应性表型)的患者中发现较高水平的IgE细菌抗体(Pauwels等人，1980，Allergy 157 :665_9)。虽然已假设细菌感染可能在诱发和加剧外源性哮喘中发挥作用，但认为哮喘的病情加重主要由病毒感染触发。确实， 细菌疫苗在哮喘治疗中的临床效果已遭质疑，导致国际世界卫生组织(WHO)提议细菌疫苗在现代哮喘治疗中没有用处。尽管有大量研究集中于治疗性哮喘干预和疗法，但该病症依然是现代西方社会中一个主要的、昂贵和日益增多的问题。对本申请中任何参考文献的援引和标识不应当解释为承认这种参考文献作为现有技术可获得本申请。发明概述开发了一种新形式的免疫疗法，其涉及口服施用灭活的不可分型流感嗜血杆菌 (NTHi)以刺激常见黏膜系统。针对COPD中急性病情加重的保护作用与NTHi在痰内的密度降低相关。这些早期研究使用了表征不良的NTHi分离株。使用了选择测定法的组合来鉴定诱导广泛交叉保护作用的一个NTHi分离株(除非另外说明，该分离株在本文中互换地称作 NTHi 164，HI-164,分离株 164 或菌株 164)。申请人:已经另外今人惊讶地发现HI-164接种可用于治疗哮喘并减少抗哮喘疗法的需求。因此，本申请涉及含有HI-164和相似NTHi菌株的疫苗和它们治疗疾病的用途，其中所述的疾病涉及黏膜系统(如下气道黏膜系统)定居的急性发作。本申请也涉及含有 HI-164和相似NTHi菌株的疫苗和它们治疗肺病如哮喘、COPD和与COPD不相关的慢性支气管炎的用途。在某些实施方案中，该疫苗是包含一个或多个NTHi菌株和/或所述NTHi物种的一种或多种免疫原性部分的单菌疫苗。在本申请疫苗中有用的NTHi菌株表征为任意(例如，2、3、4、5、6或全部)以下特征的组合(1)缺少B荚膜基因；(2)是生物型I;(3)缺少β -内酰胺酶基因；(4)需氧生长；(5)能够激发黏膜型流感嗜血杆菌特异性IgA反应，如唾液中流感嗜血杆菌特异性IgA至少10%、至少20%、至少50%、至少70%、至少100%或其他统计显著地增加所反映；(6)能够刺激派尔斑中的流感嗜血杆菌特异性T细胞，如来自应答于流感嗜血杆菌暴露的派尔斑的T-细胞的淋巴因子产生至少10%、至少20%、至少50%、至少70%、至少100%或其他统计显著地增加所反映；(7)编码与NTHi-164的外膜2蛋白显示至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、至少99. 5%或100%序列同一性的外膜蛋白2 ；(8)编码与NTHi-164的外膜26蛋白显示至少90 %、至少95 %、至少98 %、至少 99%、至少99. 5%或100%序列同一性的外膜蛋白26 ；(9)表达在一维聚丙烯酰胺凝胶电泳上作为双联体运行的外膜蛋白2 ；(10)表达具有pi 9. 1-9. 3、最优选地具有pi 9. 2的外膜蛋白2 ；(11)在全细胞提取物的二维凝胶上显著表达至少5种、至少10种或至少15种在表IlA中所列出的蛋白质；(12)在全细胞提取物的二维凝胶上显著表达至少2种或至少3种在表IlB中所列出的蛋白质；(13)在全细胞提取物的二维凝胶上显著表达至少3种、至少4种、至少5种、至少 7种或至少10种在表IlA中所列出、但在表IlC中未列出的蛋白质；
(14)在全细胞提取物的二维凝胶上显著表达至少3种、至少4种或至少5种在表 IlA和表IlD中所列出的蛋白质。如本文中所用的，术语“在二维凝胶上显著表达的蛋白质”表示该蛋白质存在于二维凝胶上足以提取和MALDI分析的一个点中。另外，本申请为COPD患者和哮喘患者提供了治疗方案。在某些实施方案中，哮喘的治疗方案包括(1)对患者(例如显示哮喘症状的患者) 检测(a)唾液中升高的嗜中性粒细胞水平，(b)痰或唾液中微生物的存在，和/或(c)对 NTHi特异的抗体，和(2)施用本申请的疫苗至测试为一个、二个或全部三个参数呈阳性的患者。在某些实施方案中，施用的疫苗包含本申请的一个、二个或多个NTHi菌株和/或本申请NTHi菌株的免疫原性部分。本申请的疫苗可以是多价疫苗或更优选地是单菌疫苗。在某些实施方案中，本申请的疫苗可以是片剂的形式，所述片剂包含了含有所述群体或所述膜部分的核芯和包围所述核芯的肠溶包衣。在本申请的疫苗中，核芯的重量是400mg至500mg。在本申请的疫苗中，灭活的细菌或膜部分构成所述片剂的核芯的7. 5%至15%重量。在本申请的疫苗中，灭活的细菌或膜部分构成所述片剂的所述核芯的大约10%重量。在本申请的疫苗中，所述的次肠溶包衣导致核芯的2%至3%重量。在本申请的疫苗中，所述的肠溶包衣导致核芯的10%至12%重量。对本说明书中已经包括的文件、文献、材料、装置、物品等的任何讨论仅出于为本申请提供背景的目的。不应视为承认任何或全部这些内容构成现有技术基础的一部分，或是构成于本申请优先权日之前已经存在的本申请所属技术领域的公知常识。本申请的特征和优点将由如下对其实施方案的详细描述而变得更加显而易见。附图简述
图1描述了 NTHi-164和参考菌株对多种肉汤培养基的生长曲线。图2描述了细菌的清除率数据，其从采用NTHi-164的不同接种方案在雄性Dard Agouti大鼠中产生。
图3A和图3B描述了用变动剂量大小的NTHi-164免疫的小鼠中的平均细菌水平。图4描述了来自用NTHi-164免疫的大鼠的肠系膜淋巴结淋巴细胞的平均增殖反
应。 图5A-5C描述了应答于HI-164接种的人受试者中的淋巴细胞增殖。图5A显示体外针对1 μ g HI-164抗原的外周血淋巴细胞增殖。图5B显示体外针对10 μ g HI-164抗原的外周血淋巴细胞增殖。图5C显示体外针对PHA的外周血淋巴细胞增殖。图6描述了用HI-164接种后人受试者中的唾液溶菌酶(均数士SEM)。图7显示用HI-164接种人受试者对血清IgG水平的影响。图8是显示安慰剂给药的人受试者研究组的漱口液中所分离NTHi的平均数的曲线图。图9是显示安慰剂组和用口服灭活的NTHi疫苗免疫的治疗组中的人受试者内血清NTHi特异性IgG水平的曲线图。图10是显示安慰剂组和用口服灭活的NTHi疫苗免疫的治疗组中的人受试者内唾液NTHi特异性IgG水平的曲线图。图11是与用安慰剂免疫相比，用HI-1640V免疫后痰中总细菌分离株的列表。图12是与用安慰剂免疫相比，用HI-1640V免疫后痰中特定细菌分离株的列表。图13描述了与(PCT申请号W086/05691中描述的)产品Broncostat 相比 HI-1640va功效的比较。图14显示一维凝胶电泳HI-164和HI-166的提取物的结果。图15显示一维凝胶电泳多种流感嗜血杆菌分离株/菌株的提取物的结果。图16A-16D显示二维凝胶电泳多种流感嗜血杆菌分离株/菌株的结果。图16A. HI-164，平板培育制备物2。图16B.HI-166，平板培育制备物1。图16C. HI-167，平板培育制备物1。图16D.HI-164，外膜蛋白(OMP)制备物。发明详述本申请提供基于NTHi的用于治疗肺病如哮喘和COPD的疫苗。患者不需要具有NTHi感染以从本申请的疫苗获益。因此，在某些方面，施用本申请疫苗的患者不具有NTHi感染或提示NTHi感染的标志物(例如，NTHi特异性抗体)。在其他方面，该患者对NTHi感染呈阳性或具有提示NTHi感染的标志物。在某些实施方案中，因为本申请的疫苗能够针对不同于NTHi的细菌激发非特异性免疫应答，患者可以对不同于NTHi的细菌感染呈阳性或具有提示被不同于NTHi的细菌感染的标志物。在具体实施方案中，该细菌是一种或多种下列细菌金黄色葡萄球菌；流感嗜血杆菌的可分型菌株；肺炎链球菌；大肠杆菌(Escherichia coli)；铜绿假单胞菌；肺炎支原体；副流感嗜血杆菌(Haemophilus parainfluenzae) ； β -溶血性链球菌某些物种(β-Haemolytic Streptococcus spp. ) ； α -溶血性链球菌某些物种；假单胞菌属(Pseudomonas)某些物种；肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)；粘质沙雷氏菌 (Serratia marcescens)；阴沟肠杆菌(Ehterobacter cloacae)；月市炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)禾口+砠貞iilif (Moraxella catarrhal is)。根据本申请施用疫苗的患者通常会是人，不过该疫苗也可以施用至任何合适的哺乳动物哮喘模型。
下文讨论施用本申请疫苗的患者的额外和备选参数。按惯例在哮喘研究中，关注于研究离散的群体，并且通常将患有清晰界定的哮喘 (例如，经典的外源性哮喘)的受试者与其他群体(例如，患有吸烟相关气道疾病的那些群体)分开，使得研究在与其他哮喘者群体隔离的经定义哮喘者群体上进行。然而，这是一种人为分类，并且，更现实的是将哮喘视为如线路图1所示的一系列气道疾病。
权利要求
1.疫苗，其包含(a)灭活的流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae)群体或灭活的流感嗜血杆菌群体的膜部分，其中所述流感嗜血杆菌表征为任意两个或多个以下特征的组合(i)是不可分型的； ( )是生物型I ；(iii)在需氧条件下生长；(iv)缺少B荚膜基因；和(ν)缺少β-内酰胺酶基因；和(b)可药用载体。
2.权利要求1的疫苗，其具有胃保护性包衣。
3.权利要求2的疫苗，其为胶囊剂、片剂或肠溶包衣颗粒剂形式。
4.权利要求3的疫苗，其中所述的片剂包含了含有所述群体或所述膜部分的核芯和包围所述核芯的肠溶包衣。
5.权利要求4的疫苗，其还包含在所述核芯与所述肠溶包衣之间的次肠溶包衣。
6.权利要求4的疫苗，还包含薄膜包衣作为其最外层。
7.权利要求4的疫苗，其中所述的核芯包含乳糖。
8.权利要求4的疫苗，其中所述的核芯包含纤维素或纤维素衍生物。
9.权利要求8的疫苗，其中所述的纤维素或纤维素衍生物是交联羧甲基纤维素钠。
10.权利要求4的疫苗，其中所述的核芯包含填料。
11.权利要求10的疫苗，其中所述的填料是硬脂酸镁。
12.权利要求4的疫苗，其中所述核芯的重量是400mg至500mg。
13.权利要求4的疫苗，其中灭活的流感嗜血杆菌或膜部分构成所述核芯的7.5%至 15%重量。
14.权利要求13的疫苗，其中灭活的流感嗜血杆菌或膜部分构成大约10%的所述核芯。
15.权利要求5的疫苗，其中所述的次肠溶包衣导致所述核芯的2%至3%重量。
16.权利要求15的疫苗，其中所述的次肠溶包衣包含OpadryII白。
17.权利要求4的疫苗，其中所述的肠溶包衣导致所述核芯的10%至12%重量。
18.权利要求17的疫苗，其中所述的肠溶包衣是水性丙烯酸包衣。
19.权利要求18的疫苗，其中所述的水性丙烯酸包衣是Acryl-E^红。
20.权利要求6的疫苗，其中所述的薄膜包衣是纯化水。
21.权利要求1至20任一项所述的疫苗，其是单菌疫苗。
22.权利要求1至20任一项所述的疫苗，其是多菌疫苗。
23.权利要求1至20任一项所述的疫苗，其中流感嗜血杆菌是如保藏于国家计量研究所(“匪I”)并赋予保藏号V08/021002的分离株NTHi-164或如保藏于匪I并赋予保藏号 V08/021003 的分离株 NTHi-167。
24.根据权利要求1至23任一项所述的疫苗，其中该疫苗的单位剂量包含约IO8至约 IO13个灭活的菌落形成单位的所述流感嗜血杆菌或约IO8至约IO13个灭活的菌落形成单位的所述流感嗜血杆菌的膜部分。
25.治疗患有慢性黏膜疾病的患者的方法，包括施用有效量的根据权利要求1至23任一项所述的疫苗至所述患者。
26.权利要求25的方法，其中所述的有效量是每日施用1至3个单位剂量的所述疫苗， 连续施用2至5日，每个单位剂量包含约IO8至约IO13个灭活的菌落形成单位的所述流感嗜血杆菌或约IO8至约IO13个灭活的菌落形成单位的所述流感嗜血杆菌的膜部分。
27.权利要求沈的方法，还包括3周至5周间隔后重复所述的施用。
28.权利要求27的方法，其中所述的施用重复两次，每个施用在前次施用后以3周至5 周时间期间重复。
29.权利要求25的方法，其中所述的慢性黏膜疾病是慢性阻塞性肺病或囊性纤维化相关疾病。
30.权利要求四的方法，其中所述的慢性阻塞性肺病是慢性支气管炎。
31.权利要求四的方法，其中所述的慢性阻塞性肺病是肺气肿。
32.权利要求四的方法，其中所述的慢性阻塞性肺病是中度至重度的。
33.治疗哮喘的方法，包括施用有效量的根据权利要求1至23任一项所述的疫苗至有需求的患者。
34.权利要求33的方法，其中所述的有效量是每日施用1至3个单位剂量的所述疫苗， 连续施用2至5日，每个单位剂量包含约IO8至约IO13个灭活的菌落形成单位的所述流感嗜血杆菌或约IO8至约IO13个灭活的菌落形成单位的所述流感嗜血杆菌的膜部分。
35.权利要求34的方法，还包括3周至5周间隔后重复所述的施用。
36.权利要求35的方法，其中所述的施用重复两次，每个施用在前次施用后以3周至5 周时间期间重复。
37.权利要求33的方法，其中哮喘是内源性哮喘。
38.如保藏于匪I并赋予保藏号V08/021002的不可分型流感嗜血杆菌分离株 NTHi-164或其传代培养物。
39.如保藏于匪I并赋予保藏号V08/021003的不可分型流感嗜血杆菌分离株 NTHi-167或其传代培养物。
全文摘要
提供了用于治疗患者中慢性阻塞性肺病和哮喘的不可分型流感嗜血杆菌疫苗。在某些方面，所述疫苗是单菌疫苗。也提供了用于本申请疫苗中的细菌菌株。
文档编号A61K35/74GK102159225SQ200980136455
公开日2011年8月17日 申请日期2009年9月17日 优先权日2008年9月17日
发明者M·邓克利, R·克兰西 申请人:亨特免疫有限公司