专利名称：一种用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白g脂质体的方法
技术领域：
本发明涉及一种制备免疫球蛋白G脂质体的方法。
背景技术：
近几年，抗体医药产业在欧美国家蓬勃发展，并开始向健康食品领域拓展，由此产生了一种新型食品，即"抗体食品"抓通过向食品中添加免疫球蛋白来增强人体免疫力。又因为免疫球蛋白的提取技术已经成熟，所以以动物血液为原料的免疫球蛋白产品在国内外已经实现了产业化。但是，免疫球蛋白在pH〈3条件下容易变性，特别是与蛋白酶共存时损失更加严重。为了克服这一缺陷，经研究表明，脂质体能在促进营养吸收、维持母乳体系稳定性和发挥免疫活性等方面发挥重要作用。而从牛乳中分离的乳脂肪球膜(Milk Fat Globule Membrane, MFGM)磷脂可以用来生产脂质体，这种磷脂的脂肪酸比未氢化的大豆或卵黄磷脂的脂肪酸饱和度更高，有更高的膜相变温度和抗氧化性。这样一来脂质体微胶囊化能有效地保护蛋白在胃蛋白酶环境下的活性。因此，以脂质体包埋免疫球蛋白是解决免疫球蛋白G(IgG)在胃中稳定性的一个有效途径。
目前，将磷脂、胆固醇和其他疏水性成分经旋转蒸发制备出脂质体为最广泛和效果最好的方法。但是此方法存在微弱的胶囊化、产量低、包埋率差(仅为36% 45%)以及在制备过程中使用有机溶剂的问题，限制了脂质体的大规模生产。
发明内容
本发明是为了解决现有制备脂质体的方法存在微弱的胶囊化、产量低、包埋率差以及在制备过程中使用有机溶剂的问题，而提供了一种用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体的方法。 用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体的方法如下 一、将叠氮化钠添加到pH为6.2 7.8的咪唑缓冲液中，得混合溶液A; 二、将乳脂肪球膜磷脂和免疫球蛋白G依次加入到混合溶液A中形成分散相，然后用旋涡振荡器将分散相混合5 15min，而后在室温、避光条件下放置1.5 2.5h，得混合溶液B;三、将混合溶液B在均质压力为60 85MPa、均质次数为3 7次的条件下进行高压均质处理，即得免疫球蛋白G脂质体；其中步骤一中叠氮化钠添加量为咪唑缓冲液的质量浓度的0.2% ;步骤二中乳脂肪球膜磷脂添加量为混合溶液A的质量浓度的2% 10% ;步骤二中免疫球蛋白G添加量为混合溶液A的质量浓度的0.05% 0.15%。 本发明得到的免疫球蛋白G脂质体不存在胶囊化的问题，免疫球蛋白G脂质体产量提高了 10% 15%，包埋率为48% 55%。 本发明整个制备过程没有加入有机溶剂，解决了有机溶剂造成二次污染的问题。本发明的制备方法成本低，所使用设备简单、造价低。
具体实施例方式
3
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式
，还包括各具体实施方式
间的任意组合。
具体实施方式
一 本实施方式用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体的方法如下 一、将叠氮化钠添加到pH为6.2 7.8的咪唑缓冲液中，得混合溶液A; 二、将乳脂肪球膜磷脂和免疫球蛋白G依次加入到混合溶液A中形成分散相，然后用旋涡振荡器将分散相混合5 15min，而后在室温、避光条件下放置1.5 2.5h，得混合溶液B;三、将混合溶液B在均质压力为60 85MPa、均质次数为3 7次的条件下进行高压均质处理，即得免疫球蛋白G脂质体；其中步骤一中叠氮化钠添加量为咪唑缓冲液的质量浓度的0.2% ;步骤二中乳脂肪球膜磷脂添加量为混合溶液A的质量浓度的2% 10% ;步骤二中免疫球蛋白G添加量为混合溶液A的质量浓度的0.05% 0.15%。
本实施方式得到的免疫球蛋白G脂质体在密封、避光和温度为4t:的条件下保存。 具体实施方式
二本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中咪唑缓冲液的pH为6.5 7.5。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
的pH为7.0。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
的pH为7.2。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
肪球膜磷脂添加量为混合溶液A的质量浓度的4% 8 %式一至四相同。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
肪球膜磷脂添加量为混合溶液A的质量浓度的5%。其它步骤及参数与具体实施方式
一至四相同。 具体实施方式
七本实施方式与具体实施方式
一至四的不同点是步骤二中乳脂
肪球膜磷脂的质量溶度为6%。其它步骤及参数与具体实施方式
一至四相同。 具体实施方式
八本实施方式与具体实施方式
五至七的不同点是步骤二中免疫
球蛋白G添加量为混合溶液A的质量浓度的的0.08% 0.12%。其它步骤及参数与具体
实施方式五至七相同。
具体实施方式
九本实施方式与具体实施方式
五至七的不同点是步骤二中免疫球蛋白G添加量为混合溶液A的质量浓度的的0.10%。其它步骤及参数与具体实施方式
五至七相同。
具体实施方式
十本实施方式与具体实施方式
一、二、三、四、八或九的不同点是步骤二中所使用旋涡振荡器的参数为转速为400 1200r/min，振幅为4.5mm。其它步骤及参数与具体实施方式
一、二、三、四、八或九相同。
具体实施方式
i^一 本实施方式与具体实施方式
一、二、三、四、八或九的不同点是步骤二中所使用旋涡振荡器的参数为转速为800r/min，振幅为4.5mm。其它步骤及参数与具体实施方式
一、二、三、四、八或九相同。
具体实施方式
十二本实施方式与具体实施方式
十或i^一的不同点是步骤二中
一不同的是步骤一中咪唑缓冲液
一不同的是步骤一中咪唑缓冲液
一至四的不同点是步骤二中乳脂。其它步骤及参数与具体实施方
一至四的不同点是步骤二中乳脂混合时间为8 12min。其它步骤及参数与具体实施方式
十或十一相同。
具体实施方式
十三本实施方式与具体实施方式
十或i^一的不同点是步骤二中
混合时间为9 llmin。其它步骤及参数与具体实施方式
十或十一相同。
具体实施方式
十四本实施方式与具体实施方式
十或i^一的不同点是步骤二中
混合时间为10min。其它步骤及参数与具体实施方式
十或十一相同。
具体实施方式
十五本实施方式与具体实施方式
一、二、三、四、八、九、
十二、十三或十四的不同点是步骤二中放置时间为1.8 2.2h。其它步骤及参数与具体实
施方式一、二、三、四、八、九、十二、十三或十四相同。
具体实施方式
十六本实施方式与具体实施方式
一、二、三、四、八、九、十二、十三或十四的不同点是步骤二中放置时间为1.9 2.1h。其它步骤及参数与具体实施方式
一、二、三、四、八、九、十二、十三或十四相同。 具体实施方式
十七本实施方式与具体实施方式
一、二、三、四、八、九、十二、十三或十四的不同点是步骤二中放置时间为2h。其它步骤及参数与具体实施方式
一、二、三、四、八、九、十二、十三或十四相同。
具体实施方式
十八本实施方式与具体实施方式
十五、十六或十七的不同点是步骤三中均质压力为70 82MPa。其它步骤及参数与具体实施方式
十五、十六或十七相同。
本实施方式与具体实施方式
十五、十六或十七的不同点是其它步骤及参数与具体实施方式
十五、十六或十七相同。本实施方式与具体实施方式
十五、十六或十七的不同点是其它步骤及参数与具体实施方式
十五、十六或十七相同。:本实施方式与具体实施方式
一、二、三、四、八、九具体实施方式
十九步骤三中均质压力为75MPa。
具体实施方式
二十步骤三中均质压力为80MPa。
具体实施方式
二十-
十二、十三、十四、十八、十九或二十的不同点是步骤三中均质次数为4 6次。其它步骤及参数与具体实施方式
一、二、三、四、八、九、十二、十三、十四、十八、十九
或二十相同。
具体实施方式
二十二本实施方式与具体实施方式
一、二、三、四、八、九、十二、十三、十四、十八、十九或二十的不同点是步骤三中均质次数为5次。其它步骤及参数与具体实施方式
一、二、三、四、八、九、十二、十三、十四、十八、十九或
二十相同。
具体实施方式
二十三本实施方式用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体的方法如下 一、将叠氮化钠添加到pH为7.0的咪唑缓冲液中，得混合溶液A; 二、将乳脂肪球膜磷脂和免疫球蛋白G依次加入到混合溶液A中形成分散相，然后用旋涡振荡器将分散相混合10min，而后在室温、避光条件下放置2h，得混合溶液B;三、将混合溶液B在均质压力为80MPa、均质次数为5次的条件下进行高压均质处理，即得免疫球蛋白G脂质体；其中步骤一中叠氮化钠添加量为咪唑缓冲液的质量浓度的0.2% ;步骤二中乳脂肪球膜磷脂添加量为混合溶液A的质量浓度的5X ;步骤二中免疫球蛋白G添加量为混合溶液A的质量浓度的0.10% 。 本实施方式得到的免疫球蛋白G脂质体在密封、避光和温度为4t:的条件下保存。
本实施方式得到的免疫球蛋白G脂质体不存在胶囊化的问题，免疫球蛋白G脂质体产量提高了 14.6%，包埋率为55%。 本实施方式整个制备过程没有加入有机溶剂，解决了有机溶剂造成二次污染的问题。本实施方式的制备方法成本低，所使用设备简单、造价低。
具体实施方式
二十四本实施方式用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体的方法如下 一、将叠氮化钠添加到pH为7.5的咪唑缓冲液中，得混合溶液A; 二、将乳脂肪球膜磷脂和免疫球蛋白G依次加入到混合溶液A中形成分散相，然后用旋涡振荡器将分散相混合8min，而后在室温、避光条件下放置2h，得混合溶液B ;三、将混合溶液B在均质压力为750MPa、均质次数为4次的条件下进行高压均质处理，即得免疫球蛋白G脂质体其中步骤一中叠氮化钠添加量为咪唑缓冲液的质量浓度的0.2% ;步骤二中乳脂肪球膜磷脂添加量为混合溶液A的质量浓度的6X ;步骤二中免疫球蛋白G添加量为混合溶液A的质量浓度的0.08% 。 本实施方式得到的免疫球蛋白G脂质体在密封、避光和温度为4t:的条件下保存。 本实施方式得到的免疫球蛋白G脂质体不存在胶囊化的问题，免疫球蛋白G脂质体产量提高了 13.8%，包埋率为53%。 本实施方式整个制备过程没有加入有机溶剂，解决了有机溶剂造成二次污染的问题。本实施方式的制备方法成本低，所使用设备简单、造价低。
权利要求
一种用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体的方法，其特征在于用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体的方法如下一、将叠氮化钠添加到pH为6.2～7.8的咪唑缓冲液中，得混合溶液A；二、将乳脂肪球膜磷脂和免疫球蛋白G依次加入到混合溶液A中形成分散相，然后用旋涡振荡器将分散相混合5～15min，而后在室温、避光条件下放置1.5～2.5h，得混合溶液B；三、将混合溶液B在均质压力为60～85MPa、均质次数为3～7次的条件下进行高压均质处理，即得免疫球蛋白G脂质体；其中步骤一中叠氮化钠添加量为咪唑缓冲液的质量浓度的0.2％；步骤二中乳脂肪球膜磷脂添加量为混合溶液A的质量浓度的2％～10％；步骤二中免疫球蛋白G添加量为混合溶液A的质量浓度的0.05％～0.15％。
2. 根据权利要求1所述的一种用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体的方法，其 特征在于步骤一中咪唑缓冲液的pH为6.5 7.5。
3. 根据权利要求1或2所述的一种用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体的方 法，其特征在于步骤二中乳脂肪球膜磷脂添加量为混合溶液A的质量浓度的4% 8%。
4. 根据权利要求3所述的一种用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体的方法，其 特征在于步骤二中免疫球蛋白G添加量为混合溶液A的质量浓度的的0.08% 0.12%。
5. 根据权利要求1、 2或4所述的一种用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体的 方法，其特征在于步骤二中所使用旋涡振荡器的参数为转速为400 1200r/min，振幅为 4.5mm。
6. 根据权利要求5所述的一种用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体的方法，其 特征在于步骤二中混合时间为8 12min。
7. 根据权利要求1、 2、 4或6所述的一种用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体 的方法，其特征在于步骤二中放置时间为1.8 2.2h。
8. 根据权利要求7所述的一种用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体的方法，其 特征在于步骤三中均质压力为70 82MPa。
9. 根据权利要求7所述的一种用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体的方法，其 特征在于步骤三中均质压力为80MPa。
10. 根据权利要求1、 2、 4、 6、 8或9所述的一种用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白 G脂质体的方法，其特征在于步骤三中均质次数为4 6次。
全文摘要
一种用乳脂肪球膜磷脂制备免疫球蛋白G脂质体的方法，它涉及一种制备免疫球蛋白G脂质体的方法。本发明解决了现有制备脂质体的方法存在微弱的胶囊化、产量低、包埋率差以及在制备过程中使用有机溶剂的问题。方法一、制备混合溶液A；二、制备混合溶液B；三、将混合溶液B进行高压均质处理，即得免疫球蛋白G脂质体。本发明得到的免疫球蛋白G脂质体不存在胶囊化的问题，免疫球蛋白G脂质体产量提高了10％～15％，包埋率为48％～55％。本发明整个制备过程没有加入有机溶剂，解决了有机溶剂造成二次污染的问题。本发明的制备方法成本低，所使用设备简单、造价低。
文档编号A61K9/127GK101690715SQ20091030902
公开日2010年4月7日 申请日期2009年10月29日 优先权日2009年10月29日
发明者刘宁, 李博群 申请人:东北农业大学