专利名称：一种杏仁功能性混合肽及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种杏仁功能性混合肽及其制备方法。
背景技术：
杏蔷薇科落叶乔木植物原产我国，野生种和栽培品种资源都非常丰富。杏仁具有 丰富的营养价值和良好的药用价值。每IOOg杏仁中含蛋白质25g 27g，油脂47g 56g， 碳水化合物及粗纤维含量约占12g 19g，还含有钙、磷、铁、硒等多种元素和VE、硫胺素、核 黄素、尼克酸、抗坏血酸等多种维生素。杏仁中富含的优质蛋白质、脂肪及其他成分对人体 有极其重要的作用，长期食用可防癌、抗癌，增强抵抗力，延缓衰老，有益心脑健康。甜杏仁 蛋白含有人体所需的多种氨基酸且含量丰富，是有利于人体氨基酸营养平衡、具有保健作 用的天然干果资源，此外，苦杏仁中特有的具有多种药理作用的苦杏仁苷含量达5. 5 %，苦 杏仁苷具有抑制和杀死癌细胞的作用。目前国内外杏制品均以鲜食为主，加工比例不高。大部分杏仁仅限于制作杏仁乳、 杏仁罐头、焙烤杏仁及杏仁油初加工产品，而榨取油脂后剩余的杏仁粕多用于生产杏仁蛋 白粉等科技含量和产品附加值较低的产品。杏仁蛋白在加工中存在这功能性质和生理活性 较差、吸收较差等缺点，因此研发具有良好功能性质和生理活性的杏仁蛋白深加工产品势 在必行。多肽是由氨基酸以不同组成和排列方式构成的，是二肽到复杂的线型或环型结 构的不同肽类的总称。其中可调节生物体生理功能的多肽被称为功能肽或生物活性肽 (Bioactive ρ印tides)。生物活性肽的吸收机制优于氨基酸，蛋白质经消化道中酶作后并 不完全是以游离氨基酸的形式被吸收，而主要是以短肽的形式被吸收，且机体对短肽的吸 收代谢速度比对游离氨基酸快、耗能低、不易饱和，且肽间吸收无竞争性与抑制性的特点。 因此，功能性短肽的生物效价和营养价值更高。
发明内容
本发明的目的是提供一种脱脂杏仁粕提取物(杏仁功能性混合肽)及其制备方法。本发明所提供的杏仁功能性混合肽是按照包括下述步骤的方法制备得到的1)原料预处理将脱脂杏仁粕与水混合后，在80°C -90°C的条件下加热使蛋白变 性，得到杏仁粕浆液；2)酶处理向步骤1)得到的杏仁粕浆液中同时加入中性蛋白酶和复合蛋白酶，酶 解过程中需不断搅拌以使酶和底物充分接触，得到杏仁粕酶解液；3)酶灭活使杏仁粕酶解液中的中性蛋白酶和复合蛋白酶灭活，离心取上清液， 即为杏仁功能性混合肽原液；4)超滤将步骤3)得到的杏仁功能性混合肽原液通过截留分子量为5000Da的超 滤膜，去除大分子片段，得到杏仁功能性混合肽。
其中，步骤1)中所述脱脂杏仁粕与水的质量比为1 25-50。所述脱脂杏仁粕在 使用前需经过粉碎处理并过60-80目筛，制成杏仁蛋白粉。步骤2)中的中性蛋白酶的加入量为3000_4000U/g蛋白，复合蛋白酶的加入量为 2000-3000U/g 蛋白。本发明中所述中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的，属于一种内切 酶，其最适作用PH值为6-8，温度35-55°C ；如丹麦NOVO公司的NeutraseO. 8L。所述复合 蛋白酶具体可为N120P复合蛋白酶，如荷兰Sierry公司的N120P复合蛋白酶。所述酶解的条件为酶解温度50-55°C，酶解时间120-180min，酶解pH值为6_8。步骤幻中可按照下述方法使所述中性蛋白酶和复合蛋白酶灭活将杏仁粕酶解 液升温至90-95°C，保持10-20min。上述方法还包括对步骤4)得到的杏仁功能性混合肽进行浓缩并干燥的步骤。所 述干燥可采用冷冻干燥或喷雾干燥。本发明所制备的杏仁功能性混合肽中肽的质量百分含量高于75%，灰分含量 (6%，糖含量彡7%，干燥失重彡7%，脂肪彡2%;分子量小于5000D的肽含量彡90%，三 氯乙酸氮溶解指数>95%。本发明的再一个目的是提供所述杏仁功能性混合短肽的应用。本发明所提供的杏仁功能性混合短肽可用于制备抗高血压活性和/或抗氧化活 性的保健品本发明以粉状脱脂杏仁粕为原料，通过酶水解、膜分离等技术，制备出杏仁功能性 混合短肽。本发明的方法采用两种蛋白酶对杏仁粕进行同步复合酶解，使其水解度达到 20%以上，短肽得率>60%。与杏仁蛋白性相比，本发明的杏仁功能性混合短肽在等电点和 较高温度下仍具有良好的溶解性和稳定性。并且发明人通过试验证明，该杏仁功能性混合 短肽具有多种生物学功能，如抗高血压活性和抗氧化活性等，可将其开发成相关功能食品 如降压饮料、活性肽粉等。此外杏仁功能性混合短肽解决了杏仁蛋白本身营养丰富却不易 被吸收的难题，给人们提供了一种具有较高的营养保健功能且可被人体迅速吸收营养保健品。
具体实施例方式下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材 料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例1、杏仁功能性混合短肽的制备本发明杏仁功能性混合短肽的制备步骤如下原料预处理一酶解一灭酶一离心一超滤精制一真空浓缩一干燥详细步骤为①原料预处理冷榨脱脂杏仁粕经粉碎、过60-80目筛制成杏仁蛋白粉。再对其进一步处理杏仁蛋白粉一与水混合(料水质量比1 40) — 90°C下水浴搅拌一冷却②酶解将中性蛋白酶(丹麦NOVO公司，NeutraseO. 8L)和复合蛋白酶(荷兰Sherry公司，N120P)分别按3500u/g底物和2500u/g底物蛋白加入反应体系中进行酶解， 水解温度50-55°C，水解时间180min，pH6. 5，反应过程中不断搅拌。③酶灭活快速升温至90-95°C，保持10-20min使酶灭活，4200g离心15_20min， 取上清液即为杏仁功能性混合短肽原液。④超滤精制将所得杏仁功能性混合短肽原液通过截留分子量为5000Da的超滤 膜，去除大分子片段，得到分子量小于5000Da的杏仁功能性混合短肽液。⑤浓缩干燥通过真空浓缩至固形物含量35% -40%，经喷雾干燥或冷冻干燥制 成干粉，杏仁功能性混合短肽得率> 60% (以蛋白含量计)。总氮的测定采用凯氏定氮法；三氯乙酸氮溶指数的测定采用Lowry法；脂肪和灰 分的测定采用AOAC法；总糖的测定采用苯酚-硫酸法。测定结果表明上述方法制备得到的杏仁功能性混合短肽是一种白色或微黄色粉 末，分子量小于5000D的短肽含量为85%，灰分5 %，糖含量5 %，干燥失重4.5%，脂肪 0. 1%，三氯乙酸氮溶指数(TCA-NSI)为99. 5%，所得混合短肽的分子量小于5000Da。实施例2、杏仁功能性混合短肽的制备①原料预处理冷榨脱脂杏仁粕经粉碎、过60-80目筛制成杏仁蛋白粉。再对其进一步处理杏仁蛋白粉一与水混合(料水质量比1 50) — 90°C下水浴搅拌一冷却②酶解将中性蛋白酶(丹麦NOVO公司，NeutraseO. 8L)和复合蛋白酶(荷兰 Sherry公司，N120P)分别按4000u/g底物和3000u/g底物蛋白加入反应体系中进行酶解， 水解温度50-55°C，水解时间180min，pH6，反应过程中不断搅拌。③酶灭活快速升温至90-95°C，保持10-20min使酶灭活，4200g离心15_20min，
取上清液即为杏仁功能性混合短肽原液。④超滤精制将所得杏仁功能性混合短肽原液通过截留分子量为5000Da的超滤 膜，去除大分子片段，得到杏仁功能性混合短肽液。⑤浓缩干燥通过真空浓缩至固形物含量35% -40%，经喷雾干燥或冷冻干燥制 成干粉，杏仁功能性混合短肽得率> 60% (以蛋白含量计)。总氮的测定采用凯氏定氮法；三氯乙酸氮溶指数的测定采用Lowry法；脂肪和灰 分的测定采用AOAC法；总糖的测定采用苯酚-硫酸法。测定结果表明上述方法制备得到的杏仁功能性混合短肽是一种白色或微黄色粉 末，分子量小于5000D的短肽含量为82%，灰分5 %，糖含量6 %，干燥失重4.5%，脂肪 0. 1%，三氯乙酸氮溶指数(TCA-NSI)为99. 5%，所得混合短肽的分子量小于5000Da。实施例3、杏仁功能性混合短肽的制备①原料预处理冷榨脱脂杏仁粕经粉碎、过60-80目筛制成杏仁蛋白粉。再对其进一步处理杏仁蛋白粉一与水混合(料水质量比1 25) — 90°C下水浴搅拌一冷却②酶解将中性蛋白酶(丹麦NOVO公司，NeutraseO. 8L)和复合蛋白酶(丹麦NOVO 公司，Protamex)分别按3000u/g底物和2000u/g底物蛋白加入反应体系中进行酶解，水解 温度50-55°C，水解时间180min，pH7. 5，反应过程中不断搅拌。③酶灭活快速升温至90-95°C，保持10-20min使酶灭活，4200g离心15_20min，取上清液即为杏仁功能性混合短肽原液。④超滤精制将所得杏仁功能性混合短肽原液通过截留分子量为5000Da的超滤 膜，去除大分子片段，得到杏仁功能性混合短肽液。⑤浓缩干燥通过真空浓缩至固形物含量35% -40%，经喷雾干燥或冷冻干燥制 成干粉，杏仁功能性混合短肽得率> 60% (以蛋白含量计)。总氮的测定采用凯氏定氮法；三氯乙酸氮溶指数的测定采用Lowry法；脂肪和灰 分的测定采用AOAC法；总糖的测定采用苯酚-硫酸法。测定结果表明上述方法制备得到的杏仁功能性混合短肽是一种白色或微黄色粉 末，分子量小于5000D的短肽含量为78 %，灰分5 %，糖含量7 %，干燥失重4.5%，脂肪 0. 1%，三氯乙酸氮溶指数(TCA-NSI)为99. 5%，所得混合短肽的分子量小于5000Da。实施例4、杏仁功能性混合短肽的功能活性实验①超氧阴离子自由基的清除在一系列的试管中加入离子强度为0.05M，pH为8. 2的Tris-Hcl缓冲液9ml， 再分别加入样品溶液100μ 1，空白组加入同体积的蒸馏水，再加入0. 045Μ邻苯三酚(以 0. OlMHCL配制)100 μ 1，震荡计时三分钟，加入10%抗坏血酸100 μ 1终止反应，立即在 325nm处测吸光值。
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权利要求
1.一种制备杏仁功能性混合肽的方法，包括下述步骤1)原料预处理将脱脂杏仁粕与水混合后，在80°c-90°C的条件下加热使蛋白变性，得 到杏仁粕浆液；2)酶处理向步骤1)得到的杏仁粕浆液中同时加入中性蛋白酶和复合蛋白酶进行酶 解，得到杏仁粕酶解液；3)酶灭活使所述杏仁粕酶解液中的中性蛋白酶和复合蛋白酶灭活，离心取上清液， 即为杏仁功能性混合肽原液；4)超滤将步骤幻得到的杏仁功能性混合肽原液通过截留分子量为5000Da的超滤 膜，收集超滤液，得到杏仁功能性混合肽。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1)中所述脱脂杏仁粕与水的质量比 为 1 25-50。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于步骤幻中所述中性蛋白酶的加入量 为3000-4000U/g蛋白；所述复合蛋白酶的加入量为2000-3000U/g蛋白，所述复合蛋白酶为 N120P复合蛋白酶。
4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于步骤2、中所述酶解的条件如 下酶解温度50-55°C，酶解时间120-180min，酶解pH值为6_8。
5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于步骤3)中按照下述方法使所述 中性蛋白酶和复合蛋白酶灭活将杏仁粕酶解液升温至90-95°C，保持10-20min。
6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于所述脱脂杏仁粕在使用前经过 粉碎处理并通过60-80目筛。
7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于所述方法还包括对步骤4)得到 的杏仁功能性混合肽进行浓缩并干燥的步骤；所述干燥为冷冻干燥或喷雾干燥。
8.权利要求1-7中任一所述的方法制备得到的杏仁功能性混合肽。
9.根据权利要求8所述的杏仁功能性混合肽，其特征在于所述杏仁功能性混合肽中 肽的质量百分含量高于75% ；所述肽中，分子量小于5000D的肽含量彡90%。
10.权利要求8或9所述的杏仁功能性混合肽在制备抗高血压保健品和/或抗氧化保 健品和/或清除自由基保健品中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种杏仁功能性混合肽及其制备方法。本发明所提供的杏仁功能性混合肽是按照包括下述步骤的方法制备得到的1)将脱脂杏仁粕与水混合后，在80℃-90℃的条件下加热使蛋白变性，得到杏仁粕浆液；2)向杏仁粕浆液中同时加入中性蛋白酶和复合蛋白酶进行酶解，得到杏仁粕酶解液；3)将酶解液升温至90-95℃，保持10-20min使酶灭活，离心取上清液，即为杏仁功能性混合肽原液；4)将混合肽原液通过截留分子量为5000Da的超滤膜，收集超滤液，得到杏仁功能性混合肽。该杏仁功能性混合短肽在等电点和较高温度下仍具有良好的溶解性和稳定性。试验证明，该杏仁功能性混合短肽具有多种生物学功能，可将其开发成相关功能食品如降压饮料、活性肽粉等。
文档编号A61K38/02GK102086466SQ20091024172
公开日2011年6月8日 申请日期2009年12月2日 优先权日2009年12月2日
发明者王强, 王春艳 申请人:中国农业科学院农产品加工研究所