专利名称：白花蛇舌草注射液的制备方法
技术领域：
本发明涉及白花蛇舌草注射液的制备方法。
背景技术：
白花蛇舌草(Oldenlandia diffusa(Willd)Roxb)始载于《广西中药志》，为茜草科 植物白花蛇舌草的带根全草。广泛分布于长江流域及以南，主产福建、广东、广西等地，其味 苦、甘、寒，入心、肝、脾三经，有清热解毒，活血化瘀，消炎止痛等功效。现代药理研究表明白 花蛇舌草具有抗菌消炎、清热解毒、活血化瘀、利水通淋及抗肿瘤等作用，可用于治疗胃癌、 食管癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、肺癌、肝癌、子宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌等，临床应用广泛。白花 蛇舌草中的黄酮类、三萜混合酸，香豆素类和多糖类为其抗癌的主要有效成分。溶剂提取法是根据中草药中各种成分在溶剂中的溶解性质，选用对活性成分溶解 度大，对不需要溶出成分溶解度小的溶剂，而将有效成分从药材组织内溶解出来的方法。当 溶剂加到中草药原料(需适当粉碎)中时，溶剂由于扩散、渗透作用逐渐通过细胞壁透入 到细胞内，溶解了可溶性物质，而造成细胞内外的浓度差，于是细胞内的浓溶液不断向外扩 散，溶剂又不断进入药材组织细胞中，如此多次往返，直至细胞内外溶液浓度达到动态平衡 时，将此饱和溶液滤出，继续多次加入新溶剂，就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部 溶出。
发明内容
本发明提供了一种白花蛇舌草注射液的制备方法，目的是提供一种总黄酮含量高 的白花蛇舌草注射液。本发明所提供的一种白花蛇舌草注射液的制备方法，用60%的乙醇加热回流提取 白花蛇舌草，滤过，得到乙醇提取液和滤渣，所述滤渣用水提取，滤过，得到水提取液，将所 述乙醇提取液和所述水提取液合并，用石炭水调PH至12，冷藏，滤过，滤液用50%硫酸溶液 调节PH值为3，静置，滤过，滤液再用40%氢氧化钠溶液调至中性，加入乙醇，冷藏，滤过，滤 液加入适量活性炭，搅拌，滤过，滤液用40%氢氧化钠溶液调节pH值为6. 5 7. 0，加入聚 山梨酯和亚硫酸氢钠，搅拌，滤过，加注射用水，灌封，灭菌，获得白花蛇舌草注射液。其中，所述乙醇加热回流进行三次，每次提取时间分别为2、1和1小时。所述水提取2次，每次提取的时间为2和1小时.所述乙醇提取液浓缩至相对密度为1. 23-1. 25。所述乙醇提取液和所述水提取液合并后的溶液浓缩至相对密度为1. 20-1. 25。本发明的白花蛇舌草注射液中有效成分的总黄酮比渗漉提取的白花蛇舌草注射 液中的有效成分高出一倍。
具体实施例方式实施例1、白花蛇舌草注射液
取IOOOg的经阴干呈鲜绿色的广西白花蛇舌草全草，置提取罐中，以60%乙醇加 热回流提取3次，每次提取时间分别为2、1、1小时，合并提取液、滤过、滤液浓缩至相对密度 1. 23-1. 25备用。药渣再置另一个提取罐中以5倍白花蛇舌草全草质量的水提取2次，每次 提取的时间为2和1小时，合并提取液，滤过，浓缩至相对密度1. 20-1. 25后，将两浓缩液合 并，用石灰水调pH至12，冷藏12小时，滤过，滤液用50%硫酸溶液调节pH值为3，静置12 小时，滤过，滤液再用40%氢氧化钠溶液调至中性，加入乙醇2000ml，冷藏24小时，滤过，滤 液减压浓缩至250ml，加水至500ml，加入适量活性炭，搅勻，滤过，滤液用40%氢氧化钠溶 液调节PH值为6. 5 7. 0，加入IOg聚山梨酯80、Ig亚硫酸氢钠，充分搅勻，滤过，加注射用 水至1000ml，灌封，灭菌，即得白花蛇舌草注射液。白花蛇舌草注射液为棕黄色的澄明液体。取白花蛇舌草注射液30ml，加于已处理好的聚酰胺柱(50目，2g，内径12 15mm， 湿法装柱)上，用50ml水洗脱，弃去水液，用70%乙醇洗脱，自黄色色带流出时开始收集洗 脱液5ml，作为供试品溶液。取供试品溶液数滴，点于滤纸上，晾干，滴加5%三氯化铝乙醇 溶液，晾干，置紫外光灯(365nm)下观察，显黄绿色荧光。精密称取在120°C减压干燥至恒重的芦丁对照品10mg，置50ml量瓶中，加适量 70%乙醇，置水浴上微热使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，摇勻，即得(每Iml中含无水芦 丁 0. 2mg)对照品溶液。精密量取对照品溶液0. O、1. O、2. O、3. O、4. O、5. O与6. 0ml，分别置25ml量瓶中， 各加70%乙醇至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇勻，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml， 摇勻，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇至刻度，摇勻，放置15分钟，照分光光度 法，在507nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。精密量取白花蛇舌草注射液IOml，加于已处理好的聚酰胺柱(50目，2g，内径12 15mm,湿法装柱)上，用50ml水洗脱，弃去洗脱液，用70%乙醇洗脱，收集洗脱液约25ml，置 25ml量瓶中，加70 %的乙醇稀释至刻度，摇勻，分别精密量取5ml，置甲、乙两个25ml量瓶 中，甲瓶中加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇勻，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇勻，放置 6分钟，在甲、乙两瓶中各加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇稀释至刻度，摇勻，放置15分钟， 照分光光度法，以乙瓶为空白，在507nm的波长处测定吸收度，从标准曲线上读出白花蛇舌 草注射液中芦丁的量，计算。8份白花蛇舌草注射液中以芦丁计每毫升含总黄酮的量分别为0. 59,0. 56,0. 61、 0. 58,0. 52,0. 50,0. 54 和 0. 62mg。对比例、取白花蛇舌草lOOOg，粉碎成粗粉，用80%乙醇作溶剂，浸渍24小时，缓缓渗漉，漉 液浓缩至约250ml，用石灰乳调节pH值至12，冷藏12小时，滤过，滤液用50%硫酸溶液调节 PH值为3，静置12小时，滤过，滤液再用40%氢氧化钠溶液调至中性，加入乙醇2000ml，冷 藏24小时，滤过，滤液减压浓缩至250ml，加水至500ml，加入适量活性炭，搅勻，滤过，滤液 用40%氢氧化钠溶液调节pH值为6. 5 7. 0，加入IOg聚山梨酯80、Ig亚硫酸氢钠，充分 搅勻，滤过，加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得白花蛇舌草注射液。白花蛇舌草注射液为棕黄色的澄明液体。取白花蛇舌草注射液30ml，加于已处理好的聚酰胺柱(50目，2g，内径12 15mm，湿法装柱)上，用50ml水洗脱，弃去水液，用70%乙醇洗脱，自黄色色带流出时开始收集洗 脱液5ml，作为供试品溶液。取供试品溶液数滴，点于滤纸上，晾干，滴加5%三氯化铝乙醇 溶液，晾干，置紫外光灯(365nm)下观察，显黄绿色荧光。精密称取在120°C减压干燥至恒重的芦丁对照品10mg，置50ml量瓶中，加适量 70%乙醇，置水浴上微热使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，摇勻，即得(每Iml中含无水芦 丁 0. 2mg)对照品溶液。精密量取对照品溶液0. O、1. O、2. O、3. O、4. O、5. O与6. 0ml，分别置25ml量瓶中， 各加70%乙醇至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇勻，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml， 摇勻，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇至刻度，摇勻，放置15分钟，照分光光度 法，在507nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。精密量取白花蛇舌草注射液10ml，加于已处理好的聚酰胺柱(50目，2g，内径12 15mm,湿法装柱)上，用50ml水洗脱，弃去洗脱液，用70%乙醇洗脱，收集洗脱液约25ml，置 25ml量瓶中，加70 %的乙醇稀释至刻度，摇勻，分别精密量取5ml，置甲、乙两个25ml量瓶 中，甲瓶中加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇勻，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇勻，放置 6分钟，在甲、乙两瓶中各加氢氧化钠试液10ml，再加乙醇稀释至刻度，摇勻，放置15分钟， 照分光光度法，以乙瓶为空白，在507nm的波长处测定吸收度，从标准曲线上读出白花蛇舌 草注射液中芦丁的量，计算。8份白花蛇舌草注射液中以芦丁计每毫升含总黄酮的量分别为0. 28,0. 25,0. 29、 0. 27,0. 24,0. 23,0. 25 和 0. 29mg。
权利要求
1.一种白花蛇舌草注射液的制备方法，其特征在于用60%的乙醇加热回流提取白花 蛇舌草，滤过，得到乙醇提取液和滤渣，所述滤渣用水提取，滤过，得到水提取液，将所述乙 醇提取液和所述水提取液合并，用石炭水调PH至12，冷藏，滤过，滤液用50%硫酸溶液调节 PH值为3，静置，滤过，滤液再用40%氢氧化钠溶液调至中性，加入乙醇，冷藏，滤过，滤液加 入适量活性炭，搅拌，滤过，滤液用40%氢氧化钠溶液调节pH值为6. 5 7. 0，加入聚山梨 酯和亚硫酸氢钠，搅拌，滤过，加注射用水，灌封，灭菌，获得白花蛇舌草注射液。
2.根据权利要求1所述的白花蛇舌草注射液的制备方法，其特征在于所述乙醇加热 回流提取三次，每次提取时间分别为2、1和1小时。
3.根据权利要求1或2所述的白花蛇舌草注射液的制备方法，其特征在于所述水提 取2次，每次提取的时间为2和1小时.
4.根据权利要求3所述的白花蛇舌草注射液的制备方法，其特征在于所述乙醇提取 液浓缩至相对密度为1. 23-1. 25。
5.根据权利要求4所述的白花蛇舌草注射液的制备方法，其特征在于所述乙醇提取 液和所述水提取液合并后的溶液浓缩至相对密度为1. 20-1. 25。
全文摘要
本发明公开了一种白花蛇舌草注射液的制备方法，属于中药领域，用60％的乙醇加热回流提取白花蛇舌草，滤过，得到乙醇提取液和滤渣，所述滤渣用水提取，滤过，得到水提取液，将所述乙醇提取液和所述水提取液合并，用石炭水调pH至12，冷藏，滤过，滤液用50％硫酸溶液调节pH值为3，静置，滤过，滤液再用40％氢氧化钠溶液调至中性，加入乙醇，冷藏，滤过，滤液加入适量活性炭，搅拌，滤过，滤液用40％氢氧化钠溶液调节pH值为6.5～7.0，加入聚山梨酯和亚硫酸氢钠，搅拌，滤过，加注射用水，灌封，灭菌，获得白花蛇舌草注射液。
文档编号A61K36/74GK102078411SQ20091023851
公开日2011年6月1日 申请日期2009年11月30日 优先权日2009年11月30日
发明者刘锁兰, 王振国, 王振贤, 王磊 申请人:北京振国天仙生物技术有限公司, 吉林省通化振国药业有限公司