专利名称:一组苦丁茶皂苷类化合物的利记博彩app
技术领域:
本发明涉及从苦丁茶中分离的具有医药用途的有效成分,特别是涉及从苦丁茶中分离新的三萜类化合物及其制备工艺、医药用途和分析方法。
背景技术:
苦丁茶为我国南部及西南部民间传统的药用植物,多以植物的嫩叶或叶入药。性味苦甘,具有清热凉血、滋养肝肾之功效,能散风热、清头目、除烦渴。多用于治疗头痛、齿痛、目赤、热病烦渴和痢疾等症。《中国医学大辞典》记载,苦丁茶还有“活血脉、凉子宫”之功效。我国民间两千多年的应用和现代医学临床试验表明,苦丁茶具有清热解毒、抑菌消炎、解痉止痛、降压减肥、抑癌防癌、提神醒脑、明目益思、止渴生津、去腻醒酒、健胃强身、护肤美容以及活血脉、抗衰老、降血脂、降胆固醇、降甘油三脂、改善血液粘稠度和微循环、扩张血管、清除自由基、增强人体免疫力等药理功能,长期饮用具有良好的医疗保健作用,故被誉为保健茶、美容茶、减肥茶、降压茶和益寿茶。
前人对苦丁茶的化学成分研究仅分离得到了少数三萜类化合物。我们通过对苦丁茶进行系统、现代、科学的分离技术,从苦丁茶冬青(Ilex kudincha C.J.Tseng)干燥叶的95%乙醇提取物,运用反复硅胶柱色谱、大孔树脂柱色谱、Sephadex LH-20、制备薄层、制备HPLC等分离纯化手段共得到40个化合物,通过化合物的理化性质和波谱数据鉴定了36个化合物的结构,分别为α-香树脂醇(α-amyran,1),熊果酸(ursolic acid,2),齐墩果酸(oleanic acid,3),苦丁酮A(kudinone A,4),苦丁皂苷LZ1(kudinoside LZ1,5),苦丁酮B(kudinone B,6),苦丁皂苷LZ3(kudinoside LZ3,7),苦丁皂苷LZ4(kudinoside LZ4,8),苦丁皂苷LZ5(kudinoside LZ5,9),苦丁皂苷LZ6(kudinoside LZ6,10),苦丁皂苷LZ7(kudinoside LZ7,11),苦丁皂苷LZ8(kudinoside LZ8,12),苦丁皂苷LZ9(kudinoside LZ9,13),苦丁皂苷LZ10(kudinoside LZ10,14),苦丁酮C(kudinone C,15),苦丁皂苷LZ11(kudinoside LZ11,16),苦丁皂苷LZ12(kudinoside LZ12,17),苦丁皂苷LZ13(kudinoside LZ13,18),苦丁皂苷LZ14(kudinoside LZ14,19),苦丁皂苷LZ15(kudinoside LZ15,20),苦丁皂苷LZ16(kudinoside LZ16,21),苦丁皂苷LZ17(kudinoside LZ17,22),苦丁皂苷LZ2(kudinoside LZ2,23),苦丁皂苷LZ18(kudinosideLZ18,24),苦丁皂苷LZ19(kudinoside LZ19,25),苦丁皂苷LZ20(kudinoside LZ20,26),苦丁皂苷LQ1(kudinoside LQ1,27),没食子酸(gallic acid,28),阿魏酸(ferulic acid,29),香草醛(vanillin,30),咖啡酸甲酯(methyl caffeate,31),咖啡酸(caffeic acid,32),对羟基苯甲醛(p-hydroxybenzaldehyde,33),β-谷甾醇(β-sitosterol,34),胡萝卜苷(daucosterol,35),α-香树醇-3β-棕榈酸酯(3β-palmitoyl-α-amyrin,36)。
表2-1列出了这36个化合物的结构及其主要鉴定方法。
其中,化合物4~14、16、17、23~26(合计17个)为未见文献报道的新化合物,化合物27为一新天然产物,化合物31、33为首次从冬青属植物中分离得到。化合物1~27为三萜类化合物,其中化合物1~4、6、15为三萜类化合物的苷元,化合物5、7~14、16~27为三萜皂苷类化合物。化合物28~33为酚酸类化合物,化合物34、35为甾体类化合物,化合物36为三萜化合物的酯。
发明内容
本发明的目的提供一组苦丁茶三萜类化合物,包括苦丁酮A,B,D,E,F,G,苦丁皂苷LZ11,苦丁皂苷LZ12及其衍生物,其中苦丁酮A及其衍生物,具有式1所示结构,其中,R和R1各自独立的选自氢、糖基,酰基,烷基或芳香取代基,所述糖基选自β-D-葡萄糖基,α-L-鼠李糖基,β-D-木糖基,β-D-木糖基,β-D-阿拉伯糖基,α-L-阿拉伯糖基,α-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-鼠李糖基-(1→2)]-α-L-阿拉伯糖基;酰基选自乙酰基、苯甲酰基、邻苯二甲酸单酰基、丁二酸单酰基、苹果酸单酰基、枸橼酸单酰基,以及多酸酰基所成的各种盐类,如3-二甲酸单酰基苦丁酮C钠盐,烷基选自直链和支链类烷基;芳香取代基选自各种芳香类取代基。
其中苦丁酮B及其衍生物,具有式2所示结构,其中,R和R1各自独立的选自氢、糖基,酰基,烷基或芳香取代基,所述糖基选自β-D-葡萄糖基,α-L-鼠李糖基,β-D-木糖基,β-D-木糖基,β-D-阿拉伯糖基,α-L-阿拉伯糖基,α-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-鼠李糖基-(1→2)]-α-L-阿拉伯糖基;酰基选自乙酰基、苯甲酰基、邻苯二甲酸单酰基、丁二酸单酰基、苹果酸单酰基、枸橼酸单酰基,以及多酸酰基所成的各种盐类,如3-二甲酸单酰基苦丁酮B钠盐,烷基选自直链和支链类烷基;芳香取代基选自各种芳香类取代基。
苦丁酮D及其衍生物,具有式3所示结构,其中,R和R1各自独立的选自氢、糖基,酰基,烷基或芳香取代基,所述糖基选自β-D-葡萄糖基,α-L-鼠李糖基,β-D-木糖基,β-D-木糖基,β-D-阿拉伯糖基,α-L-阿拉伯糖基,α-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-鼠李糖基-(1→2)]-α-L-阿拉伯糖基;酰基选自乙酰基、苯甲酰基、邻苯二甲酸单酰基、丁二酸单酰基、苹果酸单酰基、枸橼酸单酰基,以及多酸酰基所成的各种盐类,如3-二甲酸单酰基苦丁酮D钠盐,烷基选自直链和支链类烷基;芳香取代基选自各种芳香类取代基。
苦丁酮E及其衍生物,具有式4所示结构,其中,R和R1各自独立的选自氢、糖基,酰基,烷基或芳香取代基,所述糖基选自β-D-葡萄糖基,α-L-鼠李糖基,β-D-木糖基,β-D-木糖基,β-D-阿拉伯糖基,α-L-阿拉伯糖基,α-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-鼠李糖基-(1→2)]-α-L-阿拉伯糖基;酰基选自乙酰基、苯甲酰基、邻苯二甲酸单酰基、丁二酸单酰基、苹果酸单酰基、枸橼酸单酰基,以及多酸酰基所成的各种盐类,如3-二甲酸单酰基苦丁酮E钠盐,烷基选自直链和支链类烷基;芳香取代基选自各种芳香类取代基。
苦丁酮F及其衍生物,具有式5所示结构,其中,R和R1各自独立的选自氢、糖基,酰基,烷基或芳香取代基,所述糖基选自β-D-葡萄糖基,α-L-鼠李糖基,β-D-木糖基,β-D-木糖基,β-D-阿拉伯糖基,α-L-阿拉伯糖基,α-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-鼠李糖基-(1→2)]-α-L-阿拉伯糖基;酰基选自乙酰基、苯甲酰基、邻苯二甲酸单酰基、丁二酸单酰基、苹果酸单酰基、枸橼酸单酰基,以及多酸酰基所成的各种盐类,如3-二甲酸单酰基苦丁酮F钠盐,烷基选自直链和支链类烷基;芳香取代基选自各种芳香类取代基。
苦丁酮G及其衍生物,具有式6所示结构,其中,R和R1各自独立的选自氢、糖基,酰基,烷基或芳香取代基,所述糖基选自β-D-葡萄糖基,α-L-鼠李糖基,β-D-木糖基,β-D-木糖基,β-D-可拉伯糖基,α-L-阿拉伯糖基,α-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-鼠李糖基-(1→2)]-α-L-阿拉伯糖基;酰基选自乙酰基、苯甲酰基、邻苯二甲酸单酰基、丁二酸单酰基、苹果酸单酰基、枸橼酸单酰基,以及多酸酰基所成的各种盐类,如3-二甲酸单酰基苦丁酮G钠盐,烷基选自直链和支链类烷基;芳香取代基选自各种芳香类取代基。
苦丁皂苷LZ11,具有式7所示结构。
苦丁皂苷LZ12,具有式8所示结构。
本发明具体的化合物如下
本发明还包括本发明以上化合物的制备方法,其特征在于,步骤如下苦丁茶用水或含水有机溶剂提取,提取物应用大孔树脂、离子交换树脂、聚酰胺、葡聚糖凝胶、反相硅胶等色谱手段精制分离,先用水或低浓度有机溶剂洗脱除去杂质,再用高浓度有机溶剂洗脱得到产物,采用反复以上色谱分离精制纯化,或重结晶纯化,其中,提取用有机溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮,大孔树脂、离子交换树脂包括苯乙烯型、丙烯酸型高分子树脂。
另外,本发明还提供利用含有本发明化合物的苦丁茶粗提取物酸水解制备本发明化合物的方法,其中所述酸选自无机酸和有机酸如硫酸、盐酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸。
本发明还包括上述化合物的结构测定以及检测方法如HPLC分析,以质谱(MS)检测、紫外(UV)检测、圆二色谱(CD)检测、蒸发光散射检测器等为检测器。如以下检测方法 对照品溶液的配置三萜类化合物化学对照品精密称取适量,用甲醇配制成适量的对照品溶液。
样品溶液的配置精密称取苦丁茶样品各适量,用100ml氯仿(或甲醇、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、石油醚、环己烷等有机溶剂及其不同浓度的水溶液)提取,回收提取液,甲醇(或氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、石油醚、环己烷等有机溶剂及其不同浓度的水溶液)溶解,经装填ODS的SPE小色谱柱预处理,95%乙腈(或甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、石油醚、环己烷等有机溶剂及其不同浓度的水溶液)洗涤,合并洗脱液,甲醇定容,过滤,即得。
测试方法进行HPLC分析,以质谱(MS)检测、紫外(UV)检测、圆二色谱(CD)检测、蒸发光散射检测器等为检测器。以样品中各化合物的色谱峰面积,与标准对照样品相应色谱峰面积,按照标准曲线法(或外标1点法、外标2点法等),进行定量分析,计算,即得。
本发明还包括含有本发明的化合物的药物组合物。
所述组合物可以是本发明化合物和药物可接受的载体混合制备成的药物制剂。
这些制剂包括通用的药物剂型如片剂,胶囊,颗粒,口服液,注射剂等。
本发明的药物组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量,可每日服三次,每次1-20剂,如1-20袋或粒或片,每剂1mg-1000mg。
本发明还包括本发明的化合物在制备清热解毒、抑菌消炎、解痉止痛、降压减肥、抑癌防癌、提神醒脑、明目益思、止渴生津、去腻醒酒、健胃强身、护肤美容以及活血脉、抗衰老、降血脂、降胆固醇、降甘油三脂、改善血液粘稠度和微循环、扩张血管、清除自由基、增强人体免疫力等药物中的应用。
以下为本发明化合物的功效测定实验 试验表明,本发明化合物具有抑制羟甲基戊二酸辅酶A还原酶活性和抗炎活性,其中抑制羟甲基戊二酸辅酶A还原酶活性结果如下
以下实验用于说明本发明化合物比现有类似化合物更加优越。
本发明化合物的小鼠口服一次给与最大给药浓度10g/Kg体重,均未见毒副反应,血液生化指标均正常,因此说明本发明化合物与其他化合物具有更大的优势。
图1工艺流程图苦丁茶的提取流程图 图2工艺流程图苦丁茶石油醚层的分离流程图 图3工艺流程图苦丁茶氯仿层的分离流程图 图4工艺流程图苦丁茶乙酸乙酯层的分离流程图 图5工艺流程图苦丁茶正丁醇层大孔树脂分离流程图 图6工艺流程图苦丁茶正丁醇层大孔树脂70%乙醇洗脱物分离流程图 图7化合物7的CD和UV谱 图8化合物7的3D模型(扇形规则)
具体实施例方式 实施例1化合物的分离 苦丁干燥叶6kg,用95%乙醇60L回流提取两次。减压回收乙醇得糖浆状浸膏。用适量水混悬,依次用等量石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得各层萃取物分别为354g、30g、85g、640g。
1.石油醚层 石油醚层萃取物(354g),经反复硅胶柱色谱,以石油醚/丙酮梯度(100∶0~0∶100)洗脱。
石油醚/丙酮(100∶6)流分重结晶得到化合物2(150mg) 石油醚/丙酮(100∶20)流分重结晶得到化合物34(60mg) 石油醚/丙酮(100∶1)得次流分15,经制备薄层(石油醚/丙酮(10∶1))、重结晶得化合物1(2mg) 石油醚/丙酮(100∶10)得次流分16,经制备薄层(石油醚/丙酮(5∶1))、重结晶得化合物36(2mg) 2.氯仿层 氯仿层萃取物(30g),经反复硅胶柱色谱,以石油醚/丙酮梯度(100∶0~0∶100)洗脱。
石油醚/丙酮(100∶1)得流分10,流分10依次经硅胶柱色谱(石油醚/丙酮(50∶1))、制备薄层(石油醚/丙酮(10∶1))、葡聚糖凝胶LH-20(氯仿/甲醇洗脱系统,70%氯仿/甲醇流分重结晶得化合物3(8mg) 石油醚/丙酮(100∶2)得流分35,流分35依次经硅胶柱色谱(石油醚/丙酮(30∶1))、制备薄层(石油醚/丙酮(8∶1))、葡聚糖凝胶LH-20(氯仿/甲醇洗脱系统,50%氯仿/甲醇流分重结晶得化合物4(15mg) 石油醚/丙酮(100∶5)得流分4,流分4依次经硅胶柱色谱(石油醚/丙酮洗脱系统(20∶1))、制备薄层(石油醚/丙酮(8∶1))、葡聚糖凝胶LH-20(氯仿/甲醇洗脱系统,60%氯仿/甲醇流分重结晶得化合物6(9mg) 石油醚/丙酮(100∶8)得流分15,流分15依次经硅胶柱色谱(石油醚/丙酮洗脱系统(10∶1))、葡聚糖凝胶LH-20(氯仿/甲醇洗脱系统,50%氯仿/甲醇流分重结晶得化合物5(60mg) 3.乙酸乙酯层 乙酸乙酯萃取层(85g)经反复硅胶柱色谱,以石油醚/丙酮(100∶0~0∶100)梯度洗脱。
石油醚/丙酮(100∶4)流分重结晶得化合物35(5mg),化合物33(3mg) 石油醚/丙酮(100∶6)流分重结晶得化合物30(2mg) 石油醚/丙酮(100∶8)流分重结晶得化合物31(15mg),化合物32(35mg) 石油醚/丙酮(100∶10)流分重结晶得化合物29(3mg) 石油醚/丙酮(100∶15)流分重结晶得化合物28(5mg) 4.正丁醇层 正丁醇萃取层(640g)经大孔树脂PD101柱色谱依次以水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇洗脱,分别得到水层(200g)、30%乙醇层(40g)、70%乙醇层(183g)、95%乙醇层(5g)。
取70%乙醇洗脱部分180g,经硅胶柱色谱,以氯仿/甲醇(100∶0~0∶100)梯度洗脱。
氯仿/甲醇(100∶4)得流分38,流分38经葡聚糖凝胶分离纯化(氯仿/甲醇35%、45%、60%、65%、70%、75%、80%、90%梯度)得次馏分3-10,次馏分3-10又经反相制备高效液相色谱 (60%乙腈),在不同保留时间依次接峰,回收溶剂重结晶分别得化合物17(14mg)、化合物18(5.6mg)、化合物19(6mg)、化合物20(8mg)。
氯仿/甲醇(100∶5)得流分40,流分40经葡聚糖凝胶分离纯化,50%氯仿/甲醇洗脱得化合物7(60mg),75%氯仿/甲醇洗脱化合物8(15mg)。
氯仿/甲醇(100∶6)得流分45,流分45经葡聚糖凝胶分离纯化(氯仿/甲醇45%、60%、65%、75%、80%、85%)得流分10-15,流分10-15又经反相制备高效液相色谱(78%乙腈),在不同保留时间依次接峰,回收溶剂重结晶分别得化合物11(3.8mg)、化合物12(12mg)、化合物13(5mg)。
氯仿/甲醇(100∶7)得流分52-55,流分52-55经葡聚糖凝胶分离纯化(氯仿/甲醇梯度)得次馏分10-14,次馏分10-14又经反相制备高效液相色谱(62%乙腈),在不同保留时间依次接峰,回收溶剂重结晶分别得化合物26(0.8mg),化合物27(5.9mg)。
氯仿/甲醇(100∶8)得流分58-62,流分58-62经葡聚糖凝胶分离纯化(氯仿/甲醇60%、65%、70%、80%梯度)得次馏分10-14,次馏分10-14又经反相制备高效液相色谱(55%乙腈),在不同保留时间依次接峰,回收溶剂重结晶分别得化合物14(15mg)、化合物15(2.5mg)、化合物16(5.6mg)。
氯仿/甲醇(100∶10)得流分69-71,流分69-71经葡聚糖凝胶分离纯化(氯仿/甲醇60%、65%、70%、80%梯度)得次馏分10-14,次馏分10-14又经反制备相高效液相色谱(74%乙腈),在不同保留时间依次接峰,回收溶剂重结晶分别得化合物9(120mg),化合物10(25mg)。
氯仿/甲醇(100∶12)得流分71-86,流分71-86经葡聚糖凝胶分离纯化(氯仿/甲醇50%、55%、60%、65%、75%、80%、90%梯度)得次流分10-16,次流分10-16又经反相高效液相色谱(84%乙腈),在不同保留时间依次接峰,回收溶剂重结晶分别得重结晶得化合物21(30mg),化合物22(8mg)、化合物23(12mg),化合物24(7mg)、化合物25(45mg)。
实施例2化学结构鉴定 利用1维、2维核磁共振谱(1D,2D-NMR)、质谱(MS)、圆二色谱(CD)等光谱手段以及其他物理化学方法确定了分离得到的35个化合物的化学结构。其中三萜及其苷类衍生物(包括新化合物)的化学结构和鉴定手段如下
实施例3HPLC-TOF-MS分析 对照品溶液的配置三萜类化合物化学对照品精密称取适量,用甲醇配制成适量的对照品溶液。
样品溶液的配置精密称取苦丁茶样品各适量,用100ml氯仿(或甲醇、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、石油醚、环己烷等有机溶剂及其不同浓度的水溶液)提取,回收提取液,甲醇(或氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、石油醚、环己烷等有机溶剂及其不同浓度的水溶液)溶解,经装填ODS的SPE小色谱柱预处理,95%乙腈(或甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、石油醚、环己烷等有机溶剂及其不同浓度的水溶液)洗涤,合并洗脱液,甲醇定容,过滤,即得。
测试方法进行HPLC分析,以质谱(MS)检测、紫外(UV)检测、圆二色谱(CD)检测、蒸发光散射检测器等为检测器。以样品中各化合物的色谱峰面积,与标准对照样品相应色谱峰面积,按照标准曲线法(或外标1点法、外标2点法等),进行定量分析,计算,即得。
实施例4糖残基立体结构测定 反应原理糖噻唑三甲硅醚反应
不同立体构型的标准糖在与手性反应物L-半胱氨酸甲酯盐酸盐反应后产生的噻唑衍生物色谱性质不同,保留时间tR为3.75min的色谱峰是L-Rha,tR为4.65min的色谱峰是L-Ara,因此可以区别糖残基的立体构型。
4.1化合物16的水解反应 分别取1mg的样品,用1ml 2NTFA溶解于安瓿瓶中,封瓶,110℃反应2h。CHCl3萃取三次,水层用N2吹干,加甲醇,再用N2吹干,反复此过程直至产物中不存在TFA。
4.2糖噻唑三甲基硅醚的合成 完全水解的产物加1ml吡啶和2ml L-半胱氨酸甲酯盐酸盐(L-cysteine methy esterhydrochloride),60℃反应2h,用N2吹干产物,再加入三甲基硅烷咪唑(N-(trimethyl)imidazole,TMLI),0.2ml,60℃反应1h。
4.3后处理 加入1ml水终止反应,用环己烷萃取(3×1ml),萃取液浓缩至1ml,进行气相色谱(GC)分析。标准糖从“加1ml吡啶和2ml L-半胱氨酸甲酯盐酸盐……”开始操作。
4.4GC条件 毛细管柱OV-17,30m×0.32mm×0.5um 柱温220℃ 气化室280℃ 检测器FID 280℃ 实施例5内酯环开环反应 反应原理在碱性环境中打开内酯环反应。
通过碱性条件打开内酯环,分别进液相分析,通过对比反应前后CD图谱的变化,验证内酯环的立体构型。
5.1化合物10的水解 取1mg样品,加入2mol/L氢氧化钠甲醇溶液1ml,70℃水浴加热3h,反应物调PH值6~7,真空旋干,用少量甲醇溶解,旋干,反复三次。再用少量甲醇溶解,过滤膜后进HPLC-CD分析。
5.2液相条件 色谱柱TEDAChrom YWG C 18(5μm,4.6×250mm) 流动相甲醇∶水(100∶75) 实施例6酸水解 分别取1mg的样品,用1ml 2N三氟乙酸(TFA)溶解于安瓿瓶中,封瓶,110℃反应2h。CHCl3萃取三次,水层用N2吹干,加甲醇,再用N2吹干,反复此过程直至产物中不存在TFA,即得。
实施例7结构鉴定方法苦丁皂苷LZ3(kudinoside LZ3)为例
白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。高分辨质谱给出[M+Na]+峰m/z 787.4230,计算值787.4245,误差-1.5ppm,结合碳谱确定分子式为C41H64O13。UV最大吸收波长为228nm。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)谱中给出七个甲基质子信号δ1.68(3H,s)、1.62(3H,s)、1.49(3H,s)、1.18(3H,s)、1.08(3H,s)、0.90(3H,s)、0.87(3H,s),两个连氧碳质子信号3.26(1H,dd,J=12.0,4.2Hz,H-3),5.92(1H,br.s,H-12)。13C-NMR(150MHz,Pyr-d5)谱中,δ175.4为28位羰基碳信号,两个烯碳信号δ146.4、137.5分别为13、18位双键碳信号,三个连氧碳信号δ88.8、85.7和74.1,其中δ74.1为19位连氧碳的特征信号,δ85.7和175.4为F环C-20和C-28内酯环的特征碳信号[4]。在HMBC谱中,H-12(δ5.92)与C-11(δ26.6)、C-13(δ146.4)和C-14(δ43.9)有相关信号,证实了C-11、12、13、18的骨架片断错误!未找到引用源。(见Fig.2-1)。同样,H-22(δ2.57)与C-17(δ44.1)、C-18(δ137.5)、C-21(δ28.0)和C-28(δ175.4)有相关信号,证实内酯环与双键相连。在NOESY谱中,H-12(δ5.92)与CH3-29(δ1.68)有相关信号,确定12位氢的取向为β,羟基取向为α(见Fig.2-12)。在CD谱中,化合物7在232nm处呈现负的Cotton效应(见Fig.2-13),根据扇形规则结合八区律[5]观察内酯环(见
Fig.2-12化合物7的相关谱 Fig.2-14),可以确定内酯环的立体构型为(17R,20S),结合NOESY谱可以确定化合物7的苷元为苦丁酮B。
1H-NMR谱中,δ4.91(1H,d,J=5.4Hz)为阿拉伯糖的端基质子信号;δ6.15(1H,br.s)为鼠李糖的端基质子信号,δ1.63(3H,d,J=6.0Hz)为鼠李糖6″位甲基特征质子信号。1H-NMR谱中给出鼠李糖的端基碳JC1-H1为174.5Hz,判断鼠李糖的构型为α-L。13C-NMR谱中也给出阿拉伯糖(δ104.9)和鼠李糖(δ101.8)端基碳信号。苷元部分C-3位的化学位移值为88.8ppm,与苷元相比向低场位移了约10.7ppm,表明C-3位成苷。HMBC谱中,阿拉伯糖的端基质子δ4.91(1H,d,J=6.0Hz)与苷元3位碳(δ88.8)有远程相关,鼠李糖的端基质子δ6.15(1H,br.s)与阿拉伯糖的2′位碳(δ75.9)有远程相关。同样,在NOESY谱中,苷元3位质子δ3.2δ(1H,dd,J=12.0,4.2Hz)与阿拉伯糖的端基质子δ4.91(1H,d,J=6.0Hz)有相关信号,鼠李糖端基质子δ6.15(1H,br.s)与阿拉伯糖2′质子δ4.57(1H,t,J=5.4Hz)有相关信号,可以确定阿拉伯糖在内侧,与苷元3位相连;鼠李糖在外侧,连在阿拉伯糖的2′位。由此确定化合物7的绝对构型为 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-α-L-arabinopyranosyl-(3S)-3β,12α,19α-trihydroxyurs-13(18)-en-28,20β-lactone,为一未见文献报道的新化合物,命名为苦丁皂苷LZ3(碳信号归属见表2-2)。
实施例8部分化合物结构鉴定数据 化合物4苦丁酮A(kudinone A) 白色固体,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阴性。UV(MeOH)228nm。IR(KBr)3500,3369,3233,2939,1715,1653,1461,1383,1368,1255,1183,1133,1075,1044,1001,946,927,848,805,773,699,662,551。HR-TOF-MSm/z 995.6579([2M+Na]+,C60H92NaO10,计算值995.6588,误差-0.9ppm)。CD spectrum(c=1.08*10-4,MeOH)232nm(-29.8)。
1H-NMR(300MHz,Pyr-d5)δ4.93(1H,dd,J=11.9,5.5Hz,H-12),3.46(1H,dd,J=10.5,5.4Hz,H-3),1.80(3H,s,H-29),1.54(3H,s,H-30),1.23(3H,s,H-27),1.22(3H,s,H-23),0.99(3H,s,H-24),0.93(3H,s,H-26),0.89(3H,s,H-25)。
13C-NMR数据见表2-2。
化合物5苦丁皂苷LZ1(kudinoside LZ1) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)228nm。HR-TOF-MSm/z 949.4785([M+Na]+,C47H74NaO18,计算值949.4773,误差为-1.2ppm)。CD spectrum(c=1.05*10-4,MeOH)234nm(-42.5)。
1H-NMR(300MHz,Pyr-d5)苷元δ4.93(1H,dd-like,J=11.9,5.4Hz,H-12),3.24(1H,d,J=11.1,3.6Hz,H-3),1.78(3H,s,H-29),1.53(3H,s,H-30),1.25(3H,s,H-27),1.18(3H,s,H-23),1.07(3H,s,H-24),0.86(3H,s,H-26),0.80(3H,s,H-25)。阿拉伯糖δ4.83(1H,d,J=5.9Hz,H-1′),葡萄糖δ5.10(1H,d,J=7.8Hz,H-1″),鼠李糖δ6.18(1H,br.s,H-1″′),1.60(3H,d,J=6.0Hz,H-6″′)。
13C-NMR数据见表2-2。
化合物6苦丁酮B(kudinone B) 无色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阴性。UV(MeOH)226nm。HR-TOF-MSm/z 995.6575([2M+Na]+,C60H92NaO10,计算值995.6588,误差-1.3ppm)。CDspectrum(c=1.08*10-4,MeOH)230nm(-8.4)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)δ5.91(1H,br.s,H-12),3.42(1H,dd,J=10.5,5.4Hz,H-3),1.66(3H,s,H-29),1.59(3H,s,H-27),1.50(3H,s,H-30),1.24(3H,s,H-23),1.04(3H,s,H-24),0.94(3H,s,H-26),0.93(3H,s,H-25)。
13C-NMR数据见表2-2。
化合物7苦丁皂苷LZ3(kudinoside LZ3) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)228nm。HR-TOF-MSm/z 787.4230([M+Na]+,C41H64NaO13,计算值787.4245,误差-1.5ppm)。CDspectrum(c=1.05*10-4,MeOH)232nm(-62.5)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ5.92(1H,br.s,H-12),3.26(1H,dd,J=12.0,4.2Hz,H-3),1.68(3H,s,H-29),1.62(3H,s,H-27),1.49(3H,s,H-30),1.18(3H,s,H-23),1.08(3H,s,H-24),0.90(3H,s,H-26),0.87(3H,s,H-25)。阿拉伯糖δ4.91(1H,d,J=5.4Hz,H-1′),4.57(1H,t,J=5.4Hz,H-2′),4.32(m,H-3′),4.32(m,H-4′),3.84(1H,dd,J=11.4,1.8Hz,H-5′),4.32(m,H-5′)。鼠李糖δ6.15(1H,br.s,H-1″),4.64(m,H-2″),4.74(1H,d,J=1.8Hz,H-3″),4.32(m,H-4″),4.60(m,H-5″),1.63(3H,d,J=6.0Hz,H-6″)。
13C-NMR数据见表2-2。
化合物8苦丁皂苷LZ4(kudinoside LZ4) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)229nm。HR-TOF-MSm/z 803.4207([M+Na]+,C41H64NaO14,计算值803.4194,误差1.3ppm)。CDspectrum(c=1.05*10-4,MeOH)232nm(-29.5)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ5.93(1H,s,H-12),3.35(1H,dd,J=9.6,4.2Hz,H-3),1.64(3H,s,H-29),1.63(3H,s,H-27),1.49(3H,s,H-30),1.32(3H,s,H-23),0.98(3H,s,H-24),0.90(3H,s,H-26),0.87(3H,s,H-25)。阿拉伯糖δ4.74(1H,d,J=7.2Hz,H-1′),葡萄糖δ5.40(1H,d,J=7.8Hz,H-1″)。
13C-NMR数据见表2-2。
化合物9苦丁皂苷LZ5(kudinoside LZ5) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)230nm。HR-TOF-MSm/z 801.4424([M+Na]+,C42H66NaO13,计算值801.4401,误差为-2.3ppm)。CD spectrum(c=1.05*10-4,MeOH)234nm(-85.0)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ5.32(1H,br.s,H-12),3.35(3H,s,12-OCH3),3.25(1H,dd,J=12.0,4.2Hz,H-3),1.58(3H,s,H-29),1.50(3H,s,H-30),1.44(3H,s,H-27),1.18(3H,s,H-23),1.07(3H,s,H-24),0.88(3H,s,H-26),0.84(3H,s,H-25)。阿拉伯糖δ4.91(1H,d,J=6.0Hz,H-1′),鼠李糖δ6.20(1H,br.s,H-1″),1.63(3H,d,J=6.6Hz,H-6″)。
13C-NMR数据见表2-2。
化合物10苦丁皂苷LZ6(kudinoside LZ6) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)229nm。HR-TOF-MSm/z 949.4778([M+Na]+,C47H74NaO18,计算值949.4773,误差0.5ppm)。CDspectrum(c=1.05*10-4,MeOH)232nm(-34.0)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ5.92(1H,br.s,H-12),3.30(1H,dd,J=10.2,4.0Hz,H-3),1.63(6H,m,H-29/27),1.49(3H,s,H-30),1.21(3H,s,H-23),1.12(3H,s,H-24),0.89(3H,s,H-26),0.86(3H,s,H-25)。阿拉伯糖δ4.85(1H,d,J=5.4Hz,H-1′)。葡萄糖δ5.09(1H,d,J=7.8Hz,H-1″)。鼠李糖δ6.14(1H,br.s,H-1″′),1.63(3H,m,H-6″′)。13C-NMR数据见表2-2。
化合物11苦丁皂苷LZ7(kudinoside LZ7) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)227nm。HR-TOF-MSm/z 963.4938([M+Na]+,C48H76NaO18,计算值963.4929,误差为0.8ppm)。CDspectrum(c=1.05*10-4,MeOH)230nm(-10.6)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ5.31(1H,br.s,H-12),3.35(3H,s,12α-OCH3),3.30(1H,dd,J=11.7,3.9Hz,H-3),1.57(3H,s,H-29),1.50(3H,s,H-30),1.44(3H,s,H-27),1.21(3H,s,H-23),1.11(3H,s,H-24),0.87(3H,s,H-26),0.83(3H,s,H-25)。阿拉伯糖δ4.86(1H,d,J=5.7Hz,H-1′),葡萄糖δ5.12(1H,d,J=7.8Hz,H-1″),鼠李糖δ6.19(1H,s,H-1″′),1.63(3H,d,J=6.0Hz,H-6″′)。
13C-NMR数据见表2-2。
化合物12苦丁皂苷LZ8(kudinoside LZ8) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)233nm。HR-TOF-MSm/z 977.5078([M+Na]+,C49H78NaO18,计算值977.5086,误差为-0.8ppm)。CD spectrum(c=1.05*10-4,MeOH)236nm(-98.0)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ5.42(1H,br.s,H-12),3.29(1H,dd,J=12.0,4.5Hz,H-3),1.63(3H,s,H-29),1.49(3H,s,H-30),1.48(3H,s,H-27),1.22(3H,s,H-23),1.11(3H,s,H-24),1.06(3H,t,J=6.0Hz,H-12β),0.89(3H,s,H-26),0.85(3H,s,H-25)。阿拉伯糖δ4.86(1H,d,J=5.7Hz,H-1′),葡萄糖δ5.11(1H,d,J=7.8Hz,H-1″),鼠李糖δ6.16(1H,s,H-1″′),1.65(3H,d,J=6.0Hz,H-6″′)。
13C-NMR数据见表2-2。
化合物13苦丁皂苷LZ9(kudinoside LZ9) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)230nm。HR-TOF-MSm/z 1111.5297([M+Na]+,C53H82NaO22,计算值1111.5301,误差为-0.4ppm)。CD spectrum(c=1.05*10-4,MeOH)232nm(-35.0)。
1H-NMR(300MHz,Pyr-d5)苷元δ5.92(1H,br.s,H-12),3.27(1H,dd,J=11.2,3.6Hz,H-3),1.64(3H,s,H-29),1.61(3H,s,H-27),1.49(3H,s,H-30),1.23(3H,s,H-23),1.16(3H,s,H-24),0.88(3H,s,H-26),0.85(3H,s,H-25)。阿拉伯糖δ4.73(1H,d,J=6.9Hz,H-1′)。葡萄糖(内侧)δ5.15(1H,d,J=8.4Hz,H-1″),葡萄糖(外侧)δ5.26(1H,d,J=7.8Hz,H-1″)。鼠李糖δ6.39(1H,br.s,H-1″′),1.70(3H,d,J=6.0Hz,H-6″′)。
13C-NMR数据见表2-2。
化合物14苦丁皂苷LZ10(kudinoside LZ10) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)227nm。HR-TOF-MSm/z 1125.5472([M+Na]+,C54H86NaO23,计算值1125.5458,误差为1.4ppm)。CD spectrum(c=1.05*10-4,MeOH)246nm(-6.4)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ5.31(1H,br.s,H-12),3.35(3H,s,12α-OCH3),3.27(1H,dd,J=12.0,4.8Hz,H-3),1.58(3H,s,H-29),1.50(3H,s,H-30),1.43(3H,s,H-27),1.23(3H,s,H-23),1.15(3H,s,H-24),0.88(3H,s,H-26),0.84(3H,s,H-25)。阿拉伯糖δ4.78(1H,d,J=6.6Hz,H-1′)。葡萄糖(内侧)δ5.16(1H,d,J=7.8Hz,H-1″),葡萄糖(外侧)δ5.26(1H,d,J=7.8Hz,H-1″)。鼠李糖δ6.39(1H,br.s,H-1″′),1.70(3H,d,J=6.0Hz,H-6″′)。
13C-NMR数据见表2-2。
化合物15苦丁酮C(kudinone C) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阴性。HR-TOF-MSm/z 959.6380([2M+Na]+,C60H88NaO8,计算值959.6377,误差0.3ppm)。UV(MeOH)260nm。CD spectrum(c=1.08*10-4,MeOH)248nm(-52.5)。
1H-NMR(300MHz,Pyr-d5)δ7.52(1H,d,J=10.2Hz,H-12),5.86(1H,d,J=10.5Hz,H-11),3.47(1H,dd,J=9.9,5.4Hz,H-3),1.69(3H,s,H-29),1.52(3H,s,H-30),1.22(3H,s,H-23),1.03(3H,s,H-27),1.01(3H,s,H-24),0.94(3H,s,H-25),0.87(3H,s,H-26)。
13C-NMR数据见表2-3。
化合物16苦丁皂苷LZ10(kudinoside LZ10) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性,酸水解检出L-阿拉伯糖和L-鼠李糖。IR(KBr)3429,2938,1730,1634,1455,1384,1236,1130,1073,984,947,783,627。UV(MeOH)262nm。HR-TOF-MSm/z 769.4130([M+Na]+,C41H62NaO12,计算值769.4139,误差-0.9ppm)。CD spectrum(c=1.05*10-4,MeOH)260nm(-22.5)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ7.52(1H,dd,J=10.5,3.0Hz,H-12),5.79(1H,d,J=10.5Hz,H-11),3.23(1H,dd,J=9.9,5.4Hz,H-3),1.69(3H,s,H-29),1.52(3H,s,H-30),1.16(3H,s,H-23),1.04(3H,s,H-27),1.04(3H,s,H-24),0.88(3H,s,H-25),0.82(3H,s,H-26)。阿拉伯糖δ4.88(1H,d,J=6.0Hz,H-1′),4.57(m,H-2′),4.33(m,H-3′),4.29(m,H-4′),4.33(m,H-5′),3.84(1H,d,J=10.5Hz,H-5′)。鼠李糖δ6.16(1H,br.s,H-1″),4.60(m,H-2″),4.71(1H,br.s,H-3″),4.29(m,H-4″),4.57(m,H-5″),1.64(3H,d,J=6.3Hz,H-6″)。
13C-NMR数据见表2-3。
化合物17苦丁皂苷LZ12(kudinoside LZ12) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)226,280nm。HR-TOF-MSm/z 755.3972([M+Na]+,C40H60NaO12,计算值755.3982,误差为-1.0ppm)。CD spectrum(c=1.05*10-4,MeOH)254nm(-1.12)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ7.51(1H,dd,J=10.8,3.0Hz,12-H),5.76(1H,d,J=10.8Hz,11-H),3.27(1H,dd,J=11.4,4.2Hz,H-3),1.67(3H,s,H-29),1.51(3H,s,H-30),1.25(3H,s,H-23),1.03(3H,s,H-27),0.95(3H,s,H-24),0.84(3H,s,H-25),0.81(3H,s,H-25)。阿拉伯糖(吡喃型)δ4.90(1H,d,J=6.0,H-1′),4.28(1H,m,H-5′),3.77(1H,dd,J=12.6,3.0Hz,H-5′),阿拉伯糖(呋喃型)δ6.18(1H,br.s,H-1″),4.28(1H,m,H-5″),4.22(1H,m,H-5″)。
13C-NMR数据见表2-3。
化合物18苦丁皂苷LZ13(kudinoside LZ13) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)255nm。HR-TOF-MSm/z 799.4253([M+Na]+,C42H64NaO13,计算值799.4245,误差0.8ppm)。CDspectrum(c=1.05*10-4,MeOH)262nm(-24.2)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ7.50(1H,d,J=10.8Hz,H-12),5.72(1H,d,J=10.8Hz,H-11),3.34(1H,dd,J=11.8,4.2Hz),1.67(3H,s,H-29),1.51(3H,s,H-30),1.23(3H,s,H-23),1.15(3H,s,H-24),1.02(3H,s,H-27),0.84(3H,s,H-25),0.80(3H,s,H-26)。葡萄糖δ4.96(H-1′),鼠李糖δ6.60(1H,br.s,H-1″),1.71(3H,d,J=6.0Hz,H-6′)。
13C-NMR数据见表2-3。
化合物19苦丁皂苷LZ14(kudinoside LZ14) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)246nm。HR-TOF-MSm/z 785.4098([M+Na]+,C41H62NaO13,计算值785.4088,误差为1.0ppm)。CDspectrum(c=1.05*10-4,MeOH)265nm(-13.8)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ7.49(1H,d,J=10.8Hz,H-12),5.76(1H,d,J=10.8Hz,H-11),3.22(1H,dd,J=11.6,4.2Hz),1.68(3H,s,H-29),1.51(3H,s,H-30),1.22(3H,s,H-23),1.02(3H,s,H-27),1.01(3H,s,H-24),0.86(3H,s,H-25),0.82(3H,s,H-26)。阿拉伯糖δ4.94(H-1′),葡萄糖δ5.18(1H,d,J=7.8Hz,H-1″)。
化合物20苦丁皂苷LZ15(kudinoside LZ15) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)261nm。HR-TOF-MSm/z 785.4097([M+Na]+,C41H62NaO13,计算值785.4088,误差为0.9ppm)。CDspectrum(c=1.05*10-4,MeOH)256nm(-60.5)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ7.51(1H,dd,J=10.2,3.0Hz,H-12),5.77(1H,d,J=10.8Hz,H-11),3.34(1H,dd,J=12.0,4.2Hz),1.67(3H,s,H-29),1.51(3H,s,H-30),1.19(3H,s,H-23),1.08(3H,s,H-27),1.04(3H,s,H-24),0.87(3H,s,H-25),0.81(3H,s,H-26)。阿拉伯糖δ4.74(1H,d,J=7.2Hz,H-1′),葡萄糖δ5.41(1H,d,J=7.8Hz,H-1″)。
13C-NMR数据见表2-3。
化合物21苦丁皂苷LZ16(kudinoside LZ16) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)261nm。HR-TOF-MSm/z 931.4666([M+Na]+,C47H72NaO17,计算值931.4667,误差-0.1ppm)。CDspectrum(c=1.05*10-4,MeOH)254nm(-72.0)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ7.49(1H,d,J=9.0Hz,H-12),5.75(1H,d,J=10.2Hz,H-11),3.28(1H,dd,J=10.8,3.6Hz),1.67(3H,s,H-29),1.51(3H,s,H-30),1.19(3H,s,H-23),1.08(3H,s,H-27),1.04(3H,s,H-24),0.86(3H,s,H-25),0.81(3H,s,H-26)。阿拉伯糖δ4.85(1H,d,J=5.4Hz,H-1′),葡萄糖δ5.10(1H,d,J=7.8Hz,H-1″),鼠李糖δ6.16(1H,br.s,H-1″′),1.62(3H,d,J=6.0Hz,H-6″′)。
13C-NMR数据见表2-3。
化合物22苦丁皂苷LZ17(kudinoside LZ17) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)262nm。HR-TOF-MSm/z 1093.5211([M+Na]+,C53H82NaO22,计算值1093.5195,误差为1.6ppm)。CD spectrum(c=1.05*10-4,MeOH)258nm(-25.0)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ7.48(1H,dd,J=10.5,2.6Hz,H-12),5.74(1H,d,J=10.5Hz,H-11),3.25(1H,dd,J=11.5,3.9Hz),1.68(3H,s,H-29),1.51(3H,s,H-30),1.12(3H,s)1.12(3H,s),1.02(3H,s),0.85(3H,s,H-24),0.82(3H,s)。阿拉伯糖δ4.73(1H,d,J=6.6Hz,H-1′),葡萄糖(内侧)δ5.16(1H,d,J=7.5Hz,H-1″),葡萄糖(外侧)δ5.26(1H,d,J=7.6Hz,H-1″′),鼠李糖δ6.16(1H,br.s,H-1″″),1.71(3H,d,J=6.3Hz,H-6″″)。
13C-NMR数据见表2-3。
化合物23苦丁皂苷LZ2(kudinoside LZ2) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Mo1ish反应阳性。UV(MeOH)268nm。HR-TOF-MSm/z 947.4616([M+Na]+,C47H72NaO18,计算值947.4616,误差0ppm)。CDspectrum(c=1.05*10-4,MeOH)268nm(-19.0)。
1H-NMR(300MHz,Pyr-d5)苷元δ3.25(dd,J=11.9,4.5Hz,H-3),2.59(1H,dd,J=15.0,2.4Hz,H-11),2.51(1H,m,H-11),2.51(1H,m,H-21),2.37(1H,td,J=7.8,3.0Hz,H-16),2.03(1H,s,H-2),1.90(1H,s,H-15),1.80(1H,m,H-22),1.79(1H,s,H-2),1.72(1H,dd,J=6.0,2.4Hz,H-9),1.50(1H,s,H-6),1.38(3H,s,H-30),1.37(1H,s,H-1),1.31(1H,s,H-6),1.30(1H,s,H-7),1.28(3H,s,H-29),1.24(1H,s,H-15),1.19(3H,s,H-23),1.09(3H,s,H-24),1.00(3H,s,H-27),0.82(3H,s,H-26),0.79(3H,s,H-25),0.77(1H,s,H-1),0.71(1H,d,J=4.5Hz,H-5)。阿拉伯糖δ4.84(1H,d,J=6.0Hz,H-1′),4.67(1H,t,J=6.6Hz,H-2′),4.32(1H,m,H-3′),4.54(1H,br.s,H-4′),4.19(m,H-5′),3.74(1H,dd,J=10.2,2.0Hz,H-5′)。葡萄糖δ5.13(1H,d,J=7.8Hz,H-1″),3.94(1H,m,H-2″),4.19(1H,m,H-3″),4.19(1H,m,H-4″),3.94(1H,m,H-5″),4.51(1H,dd,J=10.8,1.8Hz,H-6″),4.32(1H,m,H-6″)。鼠李糖δ6.20(1H,br.s,H-1″′),4.75(1H,br.s,H-2″′),4.60(1H,m,H-3″′),4.32(1H,m,H-4″′),4.60(1H,m,H-5″′),1.63(3H,d,J=6.0Hz,H-6″′)。
13C-NMR数据见表2-3。
化合物24苦丁皂苷LZ18(kudinoside LZ18) 白色固体,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)238nm。HR-TOF-MSm/z 905.4869([M+Na]+,C46H74NaO16,计算值905.4875,误差为-0.6ppm)。CD spectrum(c=1.05*10-4,MeOH)250nm(+3.3),267nm(-5.0),386nm(1.5)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ5.89(1H,s,H-18),5.35(1H,t,J=3.0Hz,H-12),3.32(1H,dd,J=12.0,4.2Hz,H-3),2.40(3H,s,H-29),1.51(3H,s,H-28),1.22(3h,s.H-23),1.14(3H,s,H-24),1.06(3H,s,H-27),0.90(3H,s,H-25),0.86(3H,s,H-26)。阿拉伯糖δ4.88(1H,d,J=6.0Hz,H-1′),葡萄糖δ5.11(1H,d,J=7.8Hz,H-1″),鼠李糖δ6.16(1H,br.s,H-1″′),1.63(3H,d,J=6.6Hz,H-6″′)。
13C-NMR数据见表2-3。
化合物25苦丁皂苷LZ19(kudinoside LZ19) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)278nm。HR-TOF-MSm/z 859.4455([M+Na]+,C44H68NaO15,计算值859.4456,误差为-0.1ppm)。CD spectrum(c=1.05*10-4,MeOH)234nm(-7.8),280nm(-37.5),317nm(+24.3)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ5.64(1H,t-like,12-H),2.55(1H,dd,J=12.0,3.6Hz,H-21),2.05(1H,H-11),2.00(1H,dd,H-21),1.97(1H,H-11),1.80(3H,d,J=3.0Hz,H-27),1.25(3H,s,H-22),1.16(3H,s,H-22),0.94(3H,s,H-26),0.93(3H,s,H-25),0.92(3H,s,H-24)。阿拉伯糖δ4.88(1H,d,J=5.4Hz,H-1′),葡萄糖δ5.11(1H,d,J=7.8Hz,H-1″),鼠李糖δ6.17(1H,br.s,H-1″′),1.64(3H,d,J=6.0Hz,H-6″′)。
13C-NMR数据见表2-3。
化合物26苦丁皂苷LZ20(kudinoside LZ20) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)253nm。HR-TOF-MSm/z 933.4821([M+Na]+,C47H74NaO17,计算值933.4824,误差为-0.3ppm)。CD spectrum(c=1.05*10-4,MeOH)252nm(-57.0)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ3.29(1H,dd,J=12.0,4.2Hz,H-3),2.42(3H,s,H-30),1.21(3H,s,H-23),1.20(3H,d,J=3.0Hz,H-28),1.15(3H,s,H-27),1.12(3H,s,H-26),1.10(3H,s,H-24),0.78(3H,s,H-25)。阿拉伯糖δ4.87(1H,d,J=6.0Hz,H-1′),葡萄糖δ5.12(1H,d,J=7.8Hz,H-1″),鼠李糖δ6.19(1H,br.s,H-1″′),1.63(3H,d,J=6.0Hz,H-6″′)。
13C-NMR数据见表2-3。
化合物27苦丁皂苷LQ1(kudinoside LQ1) 白色结晶,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。UV(MeOH)246nm。HR-TOF-MSm/z 919.5041([M+Na]+,C47H76NaO16,计算值919.5031,误差为1.0ppm)。CDspectrum(c=1.05*10-4,MeOH)232nm(-18.0),256nm(+6.0),267nm(-2.4)。
1H-NMR(600MHz,Pyr-d5)苷元δ5.41(1H,t,J=3.0Hz,H-12),3.22(1H,dd,J=12.0,4.2Hz,H-3),1.25(3H,s),1.15(3H,s),1.08(3H,s),1.05(3H,s),0.90(3H,s),0.87(3H,s),0.85(3H,s),0.76(1H,d,J=12.0Hz,H-5)。阿拉伯糖δ4.88(1H,d,J=5.4Hz,H-1′),葡萄糖δ6.13(1H,d,J=8.4Hz,H-1″),鼠李糖δ6.10(1H,br.s,H-1″′),1.61(3H,d,J=6.0Hz,H-6″′)。
13C-NMR数据见表2-3。
权利要求
1.一组苦丁茶皂苷类化合物,包括苦丁酮A,B,D,E,F,G,苦丁皂苷LZ11,苦丁皂苷LZ12及其衍生物,其中苦丁酮A及其衍生物,具有式1所示结构,其中,R和R1各自独立的选自氢、糖基,酰基,烷基或芳香取代基,所述糖基选自β-D-葡萄糖基,α-L-鼠李糖基,β-D-木糖基,β-D-木糖基,β-D-阿拉伯糖基,α-L-阿拉伯糖基,α-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-鼠李糖基-(1→2)]-α-L-阿拉伯糖基;酰基选自乙酰基、苯甲酰基、邻苯二甲酸单酰基、丁二酸单酰基、苹果酸单酰基、枸橼酸单酰基,以及多酸酰基所成的各种盐类,如3-二甲酸单酰基苦丁酮A钠盐,烷基选自直链和支链类烷基;芳香取代基选自各种芳香类取代基。
2.权利要求1的化合物,其中苦丁酮B及其衍生物,具有式2所示结构,其中,R和R1各自独立的选自氢、糖基,酰基,烷基或芳香取代基,所述糖基选自β-D-葡萄糖基,α-L-鼠李糖基,β-D-木糖基,β-D-木糖基,β-D-阿拉伯糖基,α-L-阿拉伯糖基,α-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-鼠李糖基-(1→2)]-α-L-阿拉伯糖基;酰基选自乙酰基、苯甲酰基、邻苯二甲酸单酰基、丁二酸单酰基、苹果酸单酰基、枸橼酸单酰基,以及多酸酰基所成的各种盐类,如3-二甲酸单酰基苦丁酮C钠盐,烷基选自直链和支链类烷基;芳香取代基选自各种芳香类取代基。
3.权利要求1的化合物,其中苦丁酮D及其衍生物,具有式3所示结构,其中,R和R1各自独立的选自氢、糖基,酰基,烷基或芳香取代基,所述糖基选自β-D-葡萄糖基,α-L-鼠李糖基,β-D-木糖基,β-D-木糖基,β-D-阿拉伯糖基,α-L-阿拉伯糖基,α-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-鼠李糖基-(1→2)]-α-L-阿拉伯糖基;酰基选自乙酰基、苯甲酰基、邻苯二甲酸单酰基、丁二酸单酰基、苹果酸单酰基、枸橼酸单酰基,以及多酸酰基所成的各种盐类,如3-二甲酸单酰基苦丁酮C钠盐,烷基选自直链和支链类烷基;芳香取代基选自各种芳香类取代基。
4.权利要求1的化合物,其中苦丁酮E及其衍生物,具有式4所示结构,其中,R和R1各自独立的选自氢、糖基,酰基,烷基或芳香取代基,所述糖基选自β-D-葡萄糖基,α-L-鼠李糖基,β-D-木糖基,β-D-木糖基,β-D-阿拉伯糖基,α-L-阿拉伯糖基,α-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-鼠李糖基-(1→2)]-α-L-阿拉伯糖基;酰基选自乙酰基、苯甲酰基、邻苯二甲酸单酰基、丁二酸单酰基、苹果酸单酰基、枸橼酸单酰基,以及多酸酰基所成的各种盐类,如3-二甲酸单酰基苦丁酮C钠盐,烷基选自直链和支链类烷基;芳香取代基选自各种芳香类取代基。
5.权利要求1的化合物,其中苦丁酮F及其衍生物,具有式5所示结构,其中,R和R1各自独立的选自氢、糖基,酰基,烷基或芳香取代基,所述糖基选自β-D-葡萄糖基,α-L-鼠李糖基,β-D-木糖基,β-D-木糖基,β-D-阿拉伯糖基,α-L-阿拉伯糖基,α-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-鼠李糖基-(1→2)]-α-L-阿拉伯糖基;酰基选自乙酰基、苯甲酰基、邻苯二甲酸单酰基、丁二酸单酰基、苹果酸单酰基、枸橼酸单酰基,以及多酸酰基所成的各种盐类,如3-二甲酸单酰基苦丁酮C钠盐,烷基选自直链和支链类烷基;芳香取代基选自各种芳香类取代基。
6.权利要求1的化合物,其中苦丁酮G及其衍生物,具有式6所示结构,其中,R和R1各自独立的选自氢、糖基,酰基,烷基或芳香取代基,所述糖基选自β-D-葡萄糖基,α-L-鼠李糖基,β-D-木糖基,β-D-木糖基,β-D-阿拉伯糖基,α-L-阿拉伯糖基,α-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-鼠李糖基-(1→2)]-α-L-阿拉伯糖基;酰基选自乙酰基、苯甲酰基、邻苯二甲酸单酰基、丁二酸单酰基、苹果酸单酰基、枸橼酸单酰基,以及多酸酰基所成的各种盐类,如3-二甲酸单酰基苦丁酮C钠盐,烷基选自直链和支链类烷基;芳香取代基选自各种芳香类取代基。
7.权利要求1的化合物,其中苦丁皂苷LZ11,具有式7所示结构。
8.权利要求1的化合物,其中苦丁皂苷LZ12,具有式8所示结构。
9.权利要求1-8中任何一项化合物的制备方法,其特征在于,步骤如下苦丁茶用水或含水有机溶剂提取,提取物应用大孔树脂、离子交换树脂、聚酰胺、葡聚糖凝胶、反相硅胶等色谱手段精制分离,先用水或低浓度有机溶剂洗脱除去杂质,再用高浓度有机溶剂洗脱得到产物,采用反复以上色谱分离精制纯化,或重结晶纯化,其中,提取用有机溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮,大孔树脂、离子交换树脂包括苯乙烯型、丙烯酸型高分子树脂。
10.权利要求1-8中任何一项化合物的制备方法,其特征在于,步骤如下利用含有权利要求1-8化合物的苦丁茶粗提取物酸水解制备,所述酸选自硫酸、盐酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸。
11.权利要求1-8任何一项化合物在制备清热解毒、抑菌消炎、解痉止痛、降压减肥、抑癌防癌、提神醒脑、明目益思、止渴生津、去腻醒酒、健胃强身、护肤美容以及活血脉、抗衰老、降血脂、降胆固醇、降甘油三脂、改善血液粘稠度和微循环、扩张血管、清除自由基、增强人体免疫力等药物和食品中的应用。
12.权利要求1-8任何一项化合物,其特征在于,是以下具体化合物
13.含有权利要求1-8任何一项化合物的药物组合物。
全文摘要
本发明涉及一组苦丁茶皂苷类化合物,特别是涉及从苦丁茶中分离新的三萜类化合物及其制备工艺、医药用途和分析方法,本发明的化合物,包括苦丁酮A,B,D,E,F,G,苦丁皂苷LZ11,苦丁皂苷LZ12及其衍生物,其中苦丁酮A及其衍生物,具有式1所示结构。
文档编号A61P3/04GK101775061SQ200910176449
公开日2010年7月14日 申请日期2009年9月15日 优先权日2009年9月15日
发明者王金辉, 左文健, 李国玉, 陈惠琴 申请人:沈阳药科大学