专利名称：金花茶精制颗粒及其生产方法
技术领域：
本发明属于从植物提取物质制成的保健产品，特别是从植物金花茶叶提取的物质制成 的保健产品及其生产方法。
背景技术：
金花茶[C柳e7h'a c力rysa/7t力aft^rw/a/B3]是山茶科、山茶属、金花茶组植物，20世纪 60年代初在我国广西首次被发现，是一种世界珍稀的植物资源。作为壮族民间的一种传统 中草药，金花茶主要用于咽喉炎、痢疾、高血压、预防肿瘤，花用于便血、月经不调。
世界上80%以上的金花茶资源分布在广西壮族自治区防城港市，二十世纪80年代广西 中医学院的研究人员曾对金花茶叶进行提取分析和药理实验，发现金花茶叶含有茶多糖、茶 多酚、茶皂甙、黄酮类等多种生理活性成分，同时含有丰富的锗、硒和锌等维持人体健康有 益的微量元素。动物及临床实验表明，金花茶具有抗氧化、降血糖、降血压、降血脂、抑制 肿瘤生长、防止动脉粥样硬化、激活人体多种酶、提高机体免疫能力延缓衰老(1994年南 宁金花茶国际学术研讨会论文集)等多种生理功能。由于金花茶资源分布的局限性，国外在 该方面的研究尚未见报道。随着人们对金花茶研究的不断深入，金花茶的有效活性成分和医 学药用方面的潜力已逐渐被世人所认识。
围绕着金花茶在医药上的应用，目前人们对金花茶及其提取物进行了许多有效的研究和 探索，例如广西师范大学的陈全斌、湛志华、张巧云、廖娜在《广西热带农业》2005 (6). -10-11 发表题名为"金花茶叶中黄酮甙元的分离提纯及其表征"的文章，以金花茶叶为原料提取黄 酮，黄酮经水解，溶剂萃取、柱层析等手段，得到高纯度甙元；经熔点、TLC、液相色谱、 红外光谱、核磁共振法等分析手段进行结构表征，首次证实金花茶叶含有黄酮甙，其甙元为 槲皮素和山奈酚。在金花茶提取和制作保健食品方面，我们也检索到以下一些公开文献，例 如
1、中国专利申请号03149225.8，申请日2003.06.18，名称 一种金花茶浓缩液， 公开(公告)号CN1460438，申请(专利权)人广西富新科技股份有限公司，地址广
西壮族自治区北海市北海大道全景大厦东座8楼，摘要该发明公开了一种金花茶浓縮液。
4目前对金花茶提取液的浓縮均采用了常规的高温提取浓縮方法，在高温状态下，极易使金花 茶中的芳香类物质挥发散失，活性成分受到较大破坏。本发明采用的是纳米膜分离浓縮技术， 在25-4(TC条件下对金花茶提取液进行浓縮，避免了加热浓縮过程对活性成分的破坏，以及 有效成分的流失。本发明是进行金花茶系列产品开发的基础，可以进一步开发金花茶食品、 饮料、保健品、日用品及药品。
2、 中国专利申请号03140885.0，名称 一种金花茶提取液，公开(公告)号CN1476767， 申请(专利权)人广西富新科技股份有限公司，地址广西壮族自治区北海市北海大道全景 大厦东座8楼，摘要 一种金花茶提取液。金花茶中含有许多对人体有益的成分，但长期以 来没有得到充分利用，现有的提取金花茶成分的方法是高温提取和浓縮，这样会破坏部分有 效成分，本发明采用醇提和水提相结合，并采用超声波振荡，以提高提取效率，全过程采用 了低于60'C的低温条件，有效保护了金花茶中的芳香类物质和具有保健功能的各种成分， 提取率达到90%以上，并可縮短提取时间，降低了成本。
题名金花茶饮料工艺的研究作者赵彦华，田呈瑞，徐长波，韦能，秦立虎机构[l]陕西师范大学食品工程系，[2]西安海星现代饮品有限公司，[3]防城港市金花
茶有限公司，[4]西安市奶业科学研究所。刊名食品科学.2005， 26(9),323-32文摘
本文研究了生产条件下金花茶饮料浸提的基本工艺，及防止金花茶饮料出现货架期浑浊的澄 清工艺。通过多因素正交实验，确定了金花茶饮料的最佳生产工艺。
题名金花茶口服液加工工艺研究作者宁恩创[1]秦小明[2]杨宏[3]机构
[l]广西大学轻工与食品工程学院，[2]湛江海洋大学食品科技学院，[3]广西富新科技股份 有限公司。刊名食品工业科技.2006， 27(1).-121-122， 12文摘探讨了金花茶口服 液的加工工艺和最佳配方，以金花茶为原料，采用酶解处理，结合超声波振荡处理提取金花 茶叶药用保健成分，通过正交实验筛选出了口服液的最佳配方，研制出一种具有金花茶独特 风味，入口微苦，回味悠长，降血脂功能明显的保健产品。
题名金花茶叶药用保健成分提取新工艺研究作者秦小明[l]宁恩创[2]杨 宏[3]机构[l]湛江海洋大学食品科技学院，[2]广西大学轻工与食品工程学院，[3]广西 富新科技股份有限公司。刊名食品工业科技.2005， 26(10).-122-12文摘目的探 讨采用酶解处理结合超声波振荡处理对金花茶叶药用保健成分浸出率的作用效果。方法以 茶多酚和总皂甙作为浸出指标，通过正交实验，确定从金花茶叶中提取药用保健成分的最佳 提取工艺条件。结果最佳组合为超声波频率为25kHz，提取温度85'C，提取时间90min; 中试生产的实际效果表明新工艺与现行的生产工艺相比，茶多酚、总黄酮和总皂甙的浸提率分别提高了 17. 3%、 13. 2%和9. 3%，抽提工序时间縮短了 2h。
题名金花茶浓縮饮液加工工艺研究作者杨宏[l]秦小明[2]宁恩创[3]机 构[l]广西富新科技股份有限公司，[2]湛江海洋大学，[3]广西大学。刊名广西热带 农业.2005(3).-38-39文摘采用酶解处理结合超声波振荡处理提取金花茶叶药用保健成 分，通过正交试验筛选出浓缩饮液的最佳配方，研制具有金花茶独特风味的保健产品。
题名金花茶叶酶法提取工艺条件的研究作者王元凤、王登良等机构江 南大学食品学院，华南农业大学。刊名无锡轻工大学学报食品与生物技术.2001， 20(6),582-587， 59文摘添加外源酶把金花茶叶中的有效成分提取出来，其最佳提取 条件为加水量为金花茶叶干样的100倍，添加的木瓜蛋白酶的质量分数为0. 4%， pH值为 5.0-5.5，温度为50-55'C，恒温120min。在此条件下，金花茶叶水浸出率、可溶性糖和氨 基酸含量分别比对照增加39. 47%、 7. 39%和1. 84%,粗蛋白氨基酸的总浸出率为25. 5%左右， 金花茶叶中矿质元素Fe、 Zn、 Se、 Mn、 Co、 Mo、 Ge、 V的浸出率都在95%以上。
从上述公开文献了解到，目前对金花茶的成分研究和提取，生产的产品较多，但是由于 用普通方法提取金花茶叶的活性成分的回收率和活性较低，做成产品的功效也随之降低。主 要原因是金花茶叶片角质层极厚，含有丰富的纤维素、原果胶和叶绿素，表面又分布有大量 的蜡质层，对活性成分的提取十分不利。目前金花茶加工产品只限于袋泡茶、饮料、金花茶 速溶茶、金花茶口服液等，所公开的金花茶叶浸提工艺是沿用传统的作坊式中草药熬制方法 即采用夹层锅高温提取，常压高温浓縮工艺。在高温提取和高温浓縮过程中，具有保健功能 的生理活性物质的部分或者完全丧失，金花茶特有的芳香物质已大部分挥发损失，而且药用 保健成分的提取率低，造成单位产品原料(鲜叶)消耗量大，所加工的产品档次低(风味差， 带有刺激性异味)，质量很不稳定。因此，在金花茶药用活性成分的提取、浓縮和深加工利 用方面迫切需要进行科技攻关。
发明内容
本发明的目的是提供一种与现有技术不同的，从植物金花茶叶提取皂甙类物质，并将其 精制成金花茶颗粒及其生产方法。
其生产方法包括如下的工艺步骤
(1) 原料处理
将采摘不超过24小时的金花茶新鲜叶片去除黄叶和杂质，清洗，破碎成lctn左右的条 状碎叶片。
(2) 浸提金花茶新鲜叶碎片加入清水，采用超声波浸提法或者超声波浸提法结合酶解处理，其中 超声波浸提法是在金花茶新鲜碎叶片与清水质量比1: 10，浸提温度60-80°C，浸提时间60-70 分钟，频率25-80kHz的条件下提取；
所述的超声波浸提法结合酶解是将金花茶叶片移入超声波提取罐，加5倍的纯净水进行 搅拌，加热到40'C,然后加入料液量0.05%的复合果浆酶，恒温保持2小时，并不断搅拌。 酶解处理结束后迅速加热至IO(TC灭酶10分钟。再添加鲜叶重量5倍纯净水，当浆液温度 达到60-7(TC左右时，通过超声波中药提取机组(TCD-1000)对金花茶鲜叶中的皂甙活性成 分进行振荡提取。第一次超声波振荡结束后过滤，残渣再加入10倍的纯净水进行第二次超 声波振荡提取(提取条件同第一次)。
(3) 过滤
两次提取所得的浸提液经双效过滤机(120目)过滤后合并至不锈钢储罐(2m2)待用。
(4) 纳米膜分离浓缩
将上述溶液过滤后在40-60'C的条件下浓缩，采用加压纳滤法浓縮生产金花茶浓縮液， 纳滤膜组件为美国GE公司、OSMONIC或KOCH公司的产品，型号是DK系列，有效面积 2.5m2，材质聚酰胺，也可以使用醋酸纤维膜；整套实验装置由预处理、纳滤，清洗三部分 组成，物料由原料桶经加压泵加压，运行压力1.5Mpa，送入纳滤膜组件，调节纳滤膜出口 阀门，使过滤压力达到预定值，物料经纳滤膜过滤后分成滤过液和浓縮液。滤过液进入清液 罐，浓縮液从组件流出后回到浓縮罐，如此不断循环实3L料液的^fe縮和分离，最终浓度指标 以固形物含量浓度的8 — 10%为标准。
(5) 金花茶皂甙纯化
采用DiaionHP-lO (日本三菱合成工业公司)等大孔吸附树脂作分离纯化金花茶皂甙对 比试验，选出最佳的吸附剂树脂和工艺技术参数。将大孔吸附树脂装填到玻璃圆柱体内，并 以蒸馏水充分冲洗层析柱，把纳滤膜分离浓縮的溶液按每小时50—100升的速度经过树脂 柱，然后用质量浓度20—80%乙醇溶液洗脱，得到纯化的金花茶皂甙(树脂的再生用乙醇 95%浸泡5—10小时)，并进行乙醇回收。
(6) 混合干燥
把木糖醇和糊精于6(TC左右干燥2 3h后，粉碎过40 60目筛。将纯化的金花茶皂甙 加入木糖醇和糊精，金花茶皂甙与木糖醇的质量比例一般为1: 2.5 6，糊精加入量为颗粒 剂总质量的3-10%，另外，还加入羧甲基纤维素钠(CMC—Na)，质量含量为0. 02—0. 05%; 如果不加木糖醇，糊精加入量为颗粒剂总质量的2-5倍，混合均匀，加入70%左右的乙醇调节湿度，热风烘干，温度为4(TC 80'C。干燥所得的金花茶颗粒为浅黄色均匀颗粒，含 水率为3. 1%。加入质量含量0.02—0. 05%羧甲基纤维素钠(CMC—Na)的作用是将金花茶的 苦涩味包埋。
也可以采用喷雾干燥的工艺进行干燥，喷雾干燥的进口风温度为90 — 110'C;出口风温 度为70—80。C。 本发明的优点-
1、 本发明采用低温超声波提取金花茶叶活性成分，与传统的金花茶叶浸提工艺相比， 由于所公开的金花茶叶浸提工艺是沿用传统的作坊式中草药熬制方法即采用夹层锅高温提 取，常压高温浓缩工艺，致使具有保健功能的生理活性物质的部分或者完全丧失，特有的芳 香物质也大部分挥发损失；药用保健成分的提取率低，造成单位产品原料(鲜叶)消耗量大， 所加工的产品档次低(风味差，带有刺激性异味)，质量很不稳定。而本发明采用低温超声 波提取技术对金花茶中的活性成分进行提取分离，可以降低能量消耗，縮短提取时间，减少 提取过程中可能的破坏，有效提高金花茶活性成分的回收率和活性保持。
2、 我国中药的传统浓縮方法一般采用常温高压浓縮或者多效真空浓縮，这些浓縮方法 都有着很多的弊端，能耗高、有机溶剂损耗大、污染严重、产品的固有风味损失大、香气差、 活性成分损失大等缺点。金花茶鲜叶中含有丰富的总皂甙，但用传统工艺的浓縮过程中泡沫 极多，溢出部分损失大，经常需要打破真空，造成浓縮效率很低，能源消耗大，最终成品的 质量不稳定。本发明采用的纳滤膜分离浓縮技术与常规真空浓縮相比，简化生产工艺，缩短 加热时间，大大降低能耗，有效地提高了浸提液中金花茶皂甙的回收率和活性成分保持。
3、 采用大孔吸附树脂髙效吸附剂分离纯化金花茶皂甙，与常规分离纯化方法相比，具 有提取时间短、产率高、低温高效等优点。
4、 大量医学临床试验结果表明，金花茶具有抗氧化、降血糖、降血压、抑制肿瘤生长、 防止动脉粥样硬化、提高机体免疫能力、延缓衰老等作用。根据金花茶的成分分析结果，许 多专家推测金花茶的这些功效与皂甙类化学成分有密切相关。
5、 本发明生产得到的金花茶颗粒剂保存时间长，活性成分含量高，过去我们曾经开发 的金花茶口服液、金花茶速溶茶、金花茶饮料等产品由于功效因子没有被解明，这些产品还 仅仅停留在初级产品阶段，产品档次也难以提升，已经跟不上"第三代保健品"保健品的要 求。所以本发明是以金花茶皂甙为突破口开发功效因子明确的新型产品，提高产品的技术含 量和档次，提升企业发展的潜力优势，并在激烈的市场竞争中求得发展壮大。
6、 通过对金花茶的深加工，采用高新技术，实施三高一低(高科技、高品质、高质服务、低成本)的战略，以低值的农副产品生产高附加值的产品，使农产品增值，达到农民增 收，企业获利，增加国家税收，同时还能提高人们对金花茶的保健作用的认识，加强对金花 茶这一珍稀植物资源的有效保护，解决一部分剩余劳动力的就业问题，体现了良好的社会效 益。本发明也能将金花茶的经济价值开发出来并形成产业，提升金花茶产品的附加值，使金 花茶原料得到合理利用。
7、本发明的经济效益，金花茶颗粒剂由于具有很好的保健作用，具有很强的市场竞争力。
具体实施例方式
实施例1
将采摘不超过24小时的金花茶新鲜叶片去除黄叶和杂质，清洗、破碎成lcm左右的条 状碎叶片，然后采用超声波浸提法，金花茶新鲜碎叶片与清水质量比1: 10，浸提温度60-80 °C,浸提时间1-2h，频率25-80kHz下提取有效成分。浸提液再经双效过滤机(120目)过 滤后在40-60'C的条件下浓缩，采用加压纳滤法浓縮生产金花茶浓縮液，运行压力1.5Mpa， 滤过液流量1.75LPM,浓縮液流量43 LPM，最终浓度指标以固形物8--10%为标准。采用 DiaionHP-lO (日本三菱合成工业公司)等大孔吸附树脂作分离纯化金花茶皂武对比试验， 选出最佳的吸附剂树脂和工艺技术参数。将树脂装填到玻璃圆柱体内，并以蒸馏水充分冲洗 层析柱。把纳滤膜分离浓縮的溶液按每小时50—100升的速度经过树脂柱，然后用20—80 0%乙醇溶液洗脱，得到纯化的金花茶皂甙(树脂的再生用乙醇95%浸泡5—10小时)，并进 行乙醇回收。把木糖醇和糊精于60'C左右干燥2 3h后，粉碎过40 60目筛，将纯化的金 花茶皂甙加入木糖醇和糊精，金花茶皂甙与木糖醇的质量比例一般为1: 2. 5 6，糊精加 入量为颗粒剂总质量的3-10%，另外，还加入羧甲基纤维素钠(CMC—Na)，质量含量为0. 02 一0.05%。混合均匀，加入70%左右的乙醇调节湿度，热风烘干，温度为40'C 8(TC。干 燥所得的金花茶颗粒为浅黄色均匀颗粒，含水率为3.1%，包装，得到金花茶颗粒成品。
实施例2
将采摘不超过24小时的金花茶新鲜叶片去除黄叶和杂质，清洗、破碎成lcm左右的条 状碎叶片。将金花茶叶移入超声波提取罐，加5倍纯净水进行搅拌，加热到40'C，然后加 入料液量0.05%的复合果浆酶进行酶解，恒温保持2小时，并不断搅拌，酶解处理结束后迅 速加热到100。C灭酶10分钟。再添加鲜叶重量5倍纯净水，当浆液温度达到60-7(TC左右时， 通过超声波中药提取机组(TCD-1000)对金花茶鲜叶中的皂甙活性成分进行振荡提取。第一次超声波振荡结束后过滤，残渣再加入10倍的纯净水进行第二次超声波振荡提取(提取条 件同第一次)。浸提液再经双效过滤机(120目)过滤后，采用加压纳滤法浓縮生产金花茶 浓縮液，运行压力1.5Mpa，滤过液流量1.75LPM，浓缩液流量43 LPM，最终浓度指标以固 形物8—10%为标准。采用Diaion HP-10 (日本三菱合成工业公司)等大孔吸附树脂作分离 纯化金花茶皂甙对比试验，选出最佳的吸附剂树脂和工艺技术参数。将树脂装填到玻璃圆柱 体内，并以蒸馏水充分冲洗层析柱。把纳滤膜分离浓縮的溶液按每小时50—100升的速度经 过树脂柱，然后用20—80%乙醇溶液洗脱，得到纯化的金花茶皂武(树脂的再生用乙醇95 %浸泡5_10小时)，并进行乙醇回收。把糊精于60。C左右干燥2 3h后，粉碎过40 60 目筛，将纯化的金花茶皂甙加入糊精，糊精加入量为颗粒剂总质量的2-5倍，另外，还加入 羧甲基纤维素钠(CMC—Na)，质量含量为0.02 — 0.05%。混合均匀，加入70%左右的乙醇 调节湿度，热风烘干，温度为4(TC 80'C。干燥所得的金花茶颗粒为浅黄色均匀颗粒，含 水率为3.1%。包装，得到金花茶颗粒成品。 实施例3
将采摘不超过24小时的金花茶新鲜叶片去除黄叶和杂质，清洗、破碎成lcm左右的条 状碎叶片，将金花茶叶移入超声波提取罐，加5倍纯净水进行搅拌，加热到4(TC，然后加 入料液量0.05%的复合果浆酶进行酶解，恒温保持2小时，并不断搅拌，酶解处理结束后迅 速加热到IOO'C灭酶10分钟。再添加鲜叶重量5倍纯净水，当浆液温度达到60-70'C左右时， 通过超声波中药提取机组(TCD-1000)对金花茶鲜叶中的皂甙活性成分进行振荡提取。第一 次超声波振荡结束后过滤，残渣再加入10倍的纯净水进行第二次超声波振荡提取(提取条 件同第一次)。浸提液再经双效过滤机(120目)过滤后至不锈钢储罐(2m2)待用。采用加 压纳滤法浓縮生产金花茶浓縮液，运行压力1.5Mpa,滤过液流量1.75 LPM，浓縮液流量43 LPM，最终浓度指标为固形物8--10%为标准。采用DiaionHP-lO (日本三菱合成工业公司) 等大孔吸附树脂作分离纯化金花茶皂甙对比试验，选出最佳的吸附剂树脂和工艺技术参数。 将树脂装填到玻璃圆柱体内，并以蒸馏水充分沖洗层析柱。把纳滤膜分离浓縮的溶液按每小 时50—100升的速度经过树脂柱，然后用20—80%乙醇溶液洗脱，得到纯化的金花茶皂甙 (树脂的再生用乙醇95%浸泡5_10小时)，并进行乙醇回收。把木糖醇和糊精于6CTC左右 干燥2 3h后，粉碎过40 60目筛，将纯化的金花茶皂甙加入木糖醇和糊精，金花茶皂武 与木糖醇的质量比例一般为1: 2. 5 6,糊精加入量为颗粒剂总质量的3-10%，另外，还 加入羧甲基纤维素钠(CMC—Na)，质量含量为0.02—0.05%。混合均匀，加入70%左右的 乙醇调节湿度，采用喷雾干燥的工艺进行干燥，喷雾干燥的进口风温度为90—110'C;出口
10风温度为70—80'C。干燥所得的金花茶颗粒为浅黄色均匀颗粒，含水率为3.1%。包装，得
到金花茶颗粒成品。
图1是本发明金花茶颗粒有效成分对径基自由基( OH)的清除实验图； 图2是本发明金花茶颗粒有效成分对超氧阴离子((V —)清除试验实验图； 图3是本发明金花茶颗粒有效成分对亚硝酸根离子(N(V)的清除实验图； 图4是本发明金花茶颗粒有效成分对HA的清除实验图； 具体的解释见以下的试验研究。
金花茶颗粒以及有效成分的活性研究
一、 本发明的金花茶颗粒降血糖、降血脂和抗氧化活性的研究
本发明人经试验发现，金花茶在有效降低血糖、血压的同时，可有效调节血脂，改善因 高血压而引起的各种不适症状；能降低血清中胆固醇和脂蛋白，促进胰岛索分泌，增强免疫 力，防止动脉粥样硬化。
试验过程用高脂饲料喂养Wistar大鼠15d，造成大鼠高血脂症模型，然后分别灌胃(ig) 给予本发明金花茶颗粒剂每天O. 8， 0. 4， 0. 2g/kg，以临床降血脂药物洛伐他汀(O. Olg /kg)为阳性对照.灌胃实验第43天后取血清测定总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)、高密度脂 蛋白(HDL—C)和低密度脂蛋白(LDL—《).结果金花茶叶水提物高、中剂量组均能降低高血 脂症模型大鼠血清中TC、 TG和LDL"C含量，效果与阳性对照药洛伐他汀相当，与高脂 对照组比较，经t检验，差异均有显著性意义；高剂量组和洛伐他汀还能升高高血脂症模型 大鼠血清中HDL—C含量.表明金花茶叶颗粒剂具有明显的降血脂作用。
二、 本发明金花茶颗粒有效成分清除多种自由基的天然抗氧化物质试验研究 本发明人为了证实金花茶颗粒有效成分(皂甙)具有能够清除自由基的作用；对，OH、
02\ N(V、和11202进行了清除试验。 1材料与方法
1.1材料
1.1.1原料
本发明实施例1的喷雾干燥的金花茶皂甙细粉，由广东海洋大学生物技术实验室提供。
l丄2主要试剂-
无水乙醇、盐酸萘乙二胺、对氨基苯磺酸、亚硝酸钠、柠檬酸、硫酸亚铁、邻苯三酚、双氧水、邻二氮菲、盐酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、3—羟甲基氨基甲烷、抗坏血酸、香 兰素，人参皂甙标准品均为分析纯。 1.1.3主要仪器与设备
UV-9100紫外可见分光光度计，HH-4数显恒温水浴锅，BP210S电子分析天平，SHB-3 循环水式多用真空泵，RE-52AA旋转蒸发器，雷磁pHSJ-4A酸度计。
1.2实验方法
1.2.1金花茶皂甙的制备
采用DiakmHP-lO大孔吸附树脂对金花茶粗皂甙S进行分离纯化，依次使用蒸馏水、30 %、 60%的乙醇溶液进行洗脱，获得S!、 S2两个主要组分，它们分别是由30%、 60%的乙 醇溶液洗脱而来，将S 、 Si 、 S2分别配制成皂甙浓度依次为1、 2、 3、 4、 5mg/mL的溶液， 对它们的抗氧化活性进行研究，并与同浓度的Vc做对比，皂甙含量采用香草醛一硫酸比色 法进行测定。
1.2.2羟基自由基(-OH)清除实验
采用芬顿(Fenton)体系邻二氮菲-F,氧化法进行测定，取1.5mL lmM的邻二氮菲分 别放入试管中，加入4.5mL 100mMpH=7. 4的磷酸盐缓冲溶液，混匀后加入lmL lmM FeS04 溶液，立即混匀，分别加入lmL—定浓度的试样液，然后加入lmLO. 1%H202启动反应，于 37'C保温60min， 536nm处测定吸光度值。同时设置损伤管(加入1 mL蒸馏水代替样品液， lmL0.1。/。H2O2启动反应)和未损伤管(加入2mL蒸馏水代替样品液和双氧水)，以相同浓
度的VC作对比试验，其中损伤管和未损管以磷酸盐缓冲溶液调零，加药管以同浓度不加H202
的加药管调零。按下式计算羟基自由基的清除率
'OH的清除率(％) = (A加药一A损伤/ A未损—A报伤)xl00% 1.2.3超氧阴离子(0广)清除试验
采用邻苯三酚自氧化体系法进行测定，取4.5mLpH=8.2 Tris-HCl缓冲溶液，分别加入 lmL —定浓度的试样液，25。C保温20min后加入0.3ml lmM的邻苯三酚启动反应，5min后 测定325nm处的吸光度值A，同时设置对照(加入4.2 mL的蒸馏水代替样品液)，对照管以 缓冲溶液调零，加药管分别以相同浓度样品液调零。按下式计算超氧阴离子的清除率
(V的清除率(％) = (A对照一A加药/A对照)xl00% 1.2.4亚硝酸根离子(NOO的清除实验
采用亚硝基体系磺胺比色法进行测定，取lmL试样液于10mL比色管中，加入5jxg/mL 的NaN02标准溶液0.5mL，在37'C恒温水浴中反应30min。取出后立即加入lmL0.4。/。对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置5min后加入0.5mL0.2。/。的盐酸萘乙二胺溶液，加水至10mL刻 度，混匀，静置15min，以不加NaN02和样品溶液的试剂为空白，于538nm处测定吸光值。 通过NaN02标准曲线得到相应的NaN02含量。按下式计算N02—的清除率
N。2-的清除率=加入标准，02的量-聽》的細量x画^ 2 加入标准NaNC^量
1.2.5清除过氧化氢(11202)实验
取PH=7.4的磷酸盐缓冲液4.5mL，加入0.05% H202 2mL后，取lmL试样液，混合均 匀后在248nm处测得其吸光度为实验中以不加试样液的H202吸光度为Ao，以不加H202 的试样溶液吸光度为A2，按下式计算其平均值。
It02的清除率(％) =Ao-(Al-A2)xl00
Ao
2结果与分析
2.1羟基自由基(*OH)清除实验
-OH是造成脂质过氧化、核酸断裂、蛋白质和多糖分解的重要活性氧自由基，是体内最 活泼的活性氧。采利用Fenton体系检测金花茶皂甙、Vc对OH的清除效果，实验结果见说 明书附1。从图1可知，金花茶皂甙和Vc对'OH均有消除作用，且呈剂量效应关系， 其中S,的清除效果与Vc相当，在浓度为4 5mg/mL之间达到半数清除率；当浓度大于 lmg/mL后，S、 S2的清除效果要明显优于Vc ，两者在2 3mg/mL之间达到半数清除率。 当样液浓度达到5mg/mL时，S、 Si、 Vc的清除率达到了 85%以上，而S2的清除率则达到 97.44%。笔者在前期的研究中发现，在同样的体系下仅加入浓度为lmg生药/ml的金花茶 水提物，'OH的清除率即达到98.21X，这说明了金花茶叶中除了皂甙外还含有其他的抗氧 化活性更强的物质。 2.2超氧阴离子(02'—)的清除试验
邻苯三酚在碱性条件下迅速自氧化，自氧化过程中产生o广，(v—加速邻苯三酚自氧化
速率，同时生成有色中间产物，在325nm有强烈的光吸收，由于自氧化速率依赖于02、的浓 度，清除02'—则抑制自氧化反应，阻止中间产物的积累，从而评价受试物清除CV的能力。 金花茶皂甙和Vc对02'—的清除效果见说明书附2，如图2所示，在实验所给定的范围内， S、 Si、 S2和Vc对0广均具有一定的清除作用，但S、 S卜S2的清除效果明显低于Vc，虽然 三者在浓度为3 4mg/mL之间达到半数清除率，但在实验所给定的最大浓度5mg/mL时的清 除率仅为60%作用，其中S、 Si在浓度为lmg/mL时出现了清除率的负数，可能是由于它们 含有连羟基结构，02'—在加速体系中邻苯三酚自氧化的同时，也加速它们的自氧化，从而产
13生更多的(V—，检测呈负清除作用。但随着浓度的增大，S、 S!抑制02'—作用要大于体系中 02'—的生成速度，清除率呈现正值。通过与前期研究的对比发现，在相同的体系下加入浓度 仅为lmg生药/ml的金花茶水提物，02'—的清除率即达到了 76.92%,这再次表明金花茶的抗 氧化作用是由多种成分所协同产生的。 2.3亚硝酸根离子(N02—)的清除实验
N-亚硝基化合物是一类具有亚硝基(N-NO)结构的有机物，大部分具有致癌性，可由其 前体亚硝酸盐和胺类在体内外合成，它们是前致癌物，在体内需经过代谢后才具有致癌性。 因此，研究能清除亚硝酸盐、抑制亚硝胺合成的抗氧化剂是预防亚硝基化合物危害的有效途 径。按1.2.4的方法检测金花茶皂甙和Vc对N0,的清除作用，实验结果见说明书附3。 由图3可知，金花茶皂甙对亚硝酸盐都具有一定的清除作用，但清除能力明显不如Vc，在 实验所设计的浓度下，S、 Sb S2对N(V的清除作用相当，且随着浓度的增加其清除率均呈 现缓慢的上升趋势，当浓度达到5mg/mL时刚达到半数清除率，而Vc的浓度为lmg/mL时， 清除率即可达到93.38%。
2.411202的清除实验
H202添加入食品中可分解放出氧， 一方面起漂白、防腐和除臭等作用，另一方面可与 食品中的淀粉形成环氧化物而导致消化道癌症的发生，因此研究能分解残留在食品中的双氧
水的抗氧化剂可有效的提高食品的安全性。采用1. 2. 5的方法研究金花茶皂甙和Vc对H202 的清除作用，结果如说明书附4，图4所示，S、 Si、 S2对H202均具有一定的清除作用， 且在所设计的浓度范围内清除能力相当，清除率均在35%~52%之间，且浓度与其抑制率
并不呈明显的线性关系，实验未检测出Vc对H202具有清除作用。
3结论
金花茶颗粒(金花茶皂甙)对'OH、 02—、 N02—、和H202均具有清除作用，虽然对(V、 N02— 的清除作用不及Vc，但对'OH和H202的清除效果却明显优于Vc，尤其对'OH的清除作用 最为突出，实验结果证明金花茶皂甙是一种能清除多种自由基的天然抗氧化物质；实验还发 现，不同的金花茶皂甙组分在相同的浓度及自由基体系下的清除作用亦有不同，这与它们的 结构密切有关，因此有关金花茶皂甙的进一步分离纯化、结构分析还有待更深入的研究；此 外，通过与前期研究的对比发现，金花茶的抗氧化活性是由其皂甙类和其他活性成分协同作 用的结果。因此金花茶颗粒的抗氧化作用与其含有的皂甙类物质密切相关，本发明的结果为 将金花茶开发成为抗癌、抗衰老以及心血管保护等方面的功能食品提供理论依据。
本发明金花茶颗粒的食用典型例证
14例l、杨XX，男，58岁，农民，两年前患有冠心病，出现心肌供血不足，头晕、视力 模糊、肢体麻木等现象，浑身无力，对于一辈子辛勤劳动的他来说，无疑是丧失了劳动力， 给他的生活带来了巨大的困难。服用本发明金花茶颗粒后，冠心病的病症基本消失。
例2、李XX，女，72岁，退休干部。患有高血脂，高血压，同时经常出现头晕、麻木 等症状，更因重度的眩晕而无法出门，终日卧床，生活上形成障碍。其子代其购买了本发明 金花茶颗粒，服用后三个月，血脂下降到正常的指标，头晕正在基本消失，已可以正常出门 了。
例3、林XX，男，70岁，患高血压，上楼气喘，易感到乏力疲劳，失眠多梦等病痛困 扰了他数年，让林老苦不堪言。经介绍服用本发明金花茶颗粒，仅三个月后这些症状都得到 了缓解，睡眠质量特别号，老人精神焕发，红光满面。
例4、黄XX，男，48岁，公司经理。常年的繁忙的业务使他身心疲惫，经常性的胸口 发闷，呼吸困难，精神状态差，经医生检査确诊为冠心病，免疫力低，伴有高血脂。在好朋 友的建议下，服用了本发明的金花茶颗粒，两个月后，他的病情不但得到了控制，免疫能力 上升了，精神状态也变好了。
权利要求
1、一种金花茶精制颗粒的生产方法，包括如下的工艺步骤(1)原料处理将采摘不超过24小时的金花茶新鲜叶片去除黄叶和杂质，清洗、破碎成1cm左右的条状碎叶片；(2)浸提金花茶新鲜叶碎片加入清水，采用超声波浸提法或者超声波浸提法结合酶解处理得到浸提液；(3)过滤将浸提液经120目过滤机过滤后合并至不锈钢储罐备用；(4)纳滤膜分离浓缩将过滤液采用加压纳滤法浓缩生产金花茶浓缩液，物料由原料桶经加压泵加压，运行压力为1.5Mpa，送入纳滤膜组件，调节纳滤膜出口阀门，使过滤压力达到预定值，物料经纳滤膜过滤后分成滤过液和浓缩液，滤过液进入清液罐，浓缩液从组件流出后回到浓缩罐，如此不断循环实现料液的浓缩和分离，滤过液流量1.75LPM，浓缩液流量43LPM；(5)金花茶皂甙纯化将大孔吸附树脂装填到玻璃圆柱体内，把纳滤膜分离浓缩的溶液按每小时10-50升的速度经过树脂柱，然后用20-80％乙醇溶液洗脱，得到纯化的金花茶皂甙，树脂的再生用95％乙醇浸泡5-10小时，并进行乙醇回收；(6)混合干燥把木糖醇和糊精于60℃左右干燥2～3h后，粉碎过40～60目筛，将纯化的金花茶皂甙加入木糖醇和糊精，金花茶皂甙与木糖醇的质量比例一般为1∶2.5～6，糊精加入量为颗粒剂总质量的3-10％，另外，还加入羧甲基纤维素钠，质量含量为全部物料的0.02-0.05％，然后干燥，包装，得到产品。
2、 根据权利要求1所述的金花茶精制颗粒的生产方法，其特征在于纳滤膜组件为美 国GE公司、OSMONIC或KOCH公司的产品，型号是DK系列，有效面积2.5m2，材质聚 酰胺；或者使用醋酸纤维膜，整套实验装置由预处理、纳滤，清洗三部分组成。
3、 根据权利要求1所述的金花茶精制颗粒的生产方法，其特征在于加入木糖醇、糊 精、羧甲基纤维素钠，糊精加入量为颗粒剂总质量的3-10%，羧甲基纤维素钠含量为全部 物料的O. 02—0. 05%。
4、 根据权利要求1所述的金花茶精制颗粒的生产方法，其特征在于混合干燥的过程 是热风烘干，温度为40°C~80°C，干燥所得的金花茶颗粒为浅黄色均匀颗粒，含水率为 3.1%。
5、 根据权利要求1所述的金花茶精制颗粒的生产方法，其特征在于混合干燥的过程 是采用喷雾干燥的工艺进行干燥，喷雾干燥的进口风温度为90—110'C;出口风温度为70 一8(TC。
6、 根据权利要求1所述的金花茶精制颗粒，其特征在于所述的超声波浸提法是在金 花茶新鲜叶碎片与清水质量比1: 10，浸提温度60-80'C，浸提时间60-70分钟，频率25-80kHz条件下提取。
7、 根据权利要求1所述的金花茶精制颗粒，其特征在于所述的超声波浸提法结合酶 解是将金花茶叶片移入超声波提取罐，加5倍的纯净水进行搅拌，加热到40'C，然后加入 料液量0. 05%的复合果浆酶，恒温保持2小时，并不断搅拌，酶解处理结束后迅速加热至100 'C灭酶10分钟，再添加鲜叶重量5倍纯净水，当浆液温度达到60-7(TC左右时，通过超声 波中药提取机组对金花茶鲜叶中的皂甙活性成分进行振荡提取；第一次超声波振荡结束后过 滤，残渣再加入10倍的纯净水进行第二次超声波振荡提取，提取条件同第一次。
8、 如权利要求1的金花茶精制颗粒的生产方法得到的产品。
全文摘要
本发明是一种用金花茶叶制成的颗粒剂，其生产方法是从金花茶新鲜叶片提取的有效物质，经提取、浓缩、分离纯化、干燥，得到金花茶皂甙，加入木糖醇或助剂，干燥，包装，得到产品，本发明产品具有明显的抗氧化、抗衰老、美容及提高机体免疫力等功能，适合亚健康人群食用，保健效果明显。
文档编号A61P37/04GK101558875SQ20091011404
公开日2009年10月21日 申请日期2009年5月8日 优先权日2009年5月8日
发明者刘志新, 宁恩创, 杨继往, 秦小明 申请人:广西桂人堂金花茶产业集团股份有限公司