专利名称：：灭活的流感疫苗的利记博彩app
技术领域：
：本发明涉及灭活的佐剂流感疫苗。
背景技术：
：流感病毒为能够感染鸟类和哺乳动物的正粘病毒(Orthomyxoviridae)科(流感病毒)的RNA病毒。流感病毒具有RNA的8段反义单链(节段)RNA的节段基因组(segmentedgenome)，缩写为PB2，PB1，PA，HA，NP，NA，M和NS。这些节段编码10个基因。HA节段编码血细胞凝集素蛋白，其为在病毒颗粒的蛋白质外壳(病毒包膜)中发现的抗原性蛋白。所述蛋白参与病毒的细胞进入。NA节段编码神经氨酸酶，其为也在流感病毒颗粒的表面上发现的抗原性糖基化酶。其促进子代病毒从感染细胞的释放。存在3种流感病毒A、B、和C。人类能够被A、B和C型流感病毒感染。A型流感病毒基于两种主要的糖蛋白血细胞凝集素(HA)和神经氨酸酶(NA)被进一步分类为亚型。对于B和C型流感尚未鉴定出不同的H和N亚型。对于A型流感病毒存在16种已知的HA亚型和9种已知的NA亚型。例如，“H5m”病毒具有属于亚型5的HA蛋白和属于亚型1的NA蛋白。目前全世界在人们中传播的A型流感亚型包括H1N1、H1N2和H3N2病毒。然而，已经报道人类被其它亚型感染，例如H9N2、H7N7或H2N2，引起发病和死亡。B型流感病毒不进一步分类，尽管描述了两种独特的基因和抗原性世系(维多利亚(Victoria)和亚马它达(Yamagata))。在流感病毒中存在两种类型的抗原性变异，称为"抗原性漂移(antigenicdrift)"和“抗原性转变(antigenicshift)，，。抗原性漂移为连续出现的新流感菌株的一部分，所述新流感菌株与其祖先的不同之处在于HA和NA基因中的突变(点突变)。改变的量可以为微小的或显著的。抗原性变异的第二类型为‘抗原性转变”。当共感染相同宿主的两种不同的流感病毒，交换全基因组节段时，能够发生基因转变。这能够导致具有新基因星座(geneconstellation)并因此具有新性质的“重排”病毒。当病毒亚型在中间宿主中不经重排直接跨越种间屏障时，也能够发生基因转变。抗原性转变的发生可能引起基因改变，使新的流感病毒能够在人类中复制以及更重要的是有效地在人类中传播。当此类病毒具有人类群体对其免疫学上幼稚(naYve)的亚型时，可能发生大流行病。在过去的世纪中发生了3次流感大流行病，其中1918年的西班牙流感是最严重的。此次大流行在全世界杀死了约50百万人。由于在亚洲、欧洲和非洲在家禽群体中的持续爆发和相当量的人类病例(317，dd29June2007)(其中60%是致命的)，目前禽流感(H5N1)具有日益增长的全世界关注。该病毒是高度传染性的并且超过200百万家禽已经被挑出杀死或死于随后的感染。到目前为3止人-人传播是高度无效的，但是当适应时该病毒可以获得此能力。此类事件将显著地增加大流行病爆发上的风险。在大流行病的控制中，疫苗可以起重要作用。如果由于非易感性或抗性，通过化学或药学产品(例如抗生素或抗病毒剂)，或通过卫生措施，不能与病因的传染源战斗，控制可能甚至完全依赖于免疫接种。众所周知在免疫接种后诱导的抗体在针对流感的保护上起关键作用。除了体液免疫性之外，细胞介导的免疫性起重要作用以消灭感染。细胞介导的免疫性的诱导是重要的，因为T细胞识别保守性表位，其导致针对不同菌株的广泛保护。目前灭活的流行性流感疫苗用3种流感病毒菌株生产，该3种流感病毒菌株被世界卫生组织基于从全球流感监视获得的信息每年推荐。这些疫苗的抗原通常在鸡胚胎卵中生产。这些季节性疫苗包含15μg血细胞凝集素每菌株。由于人群对于大流行病流感菌株是免疫学上幼稚(nai've)的，剂量高得多的大流行病流感疫苗对于诱导保护性免疫是需要的。已经显示为了诱导针对H5m菌株的保护性免疫，需要两剂量的90μg血细胞凝集素。考虑到可利用的抗原的受限的量，此类高剂量是不方便的。佐剂的使用可能克服针对大流行病流感疫苗菌株的差的应答。疫苗的组成，特别是佐剂的性质，在免疫应答的动力学上起重要作用。不仅是免疫反应的水平，而且还有免疫反应的开始和持续受疫苗组成影响。众所周知储存性(repository)(油性)佐剂例如油包水乳液为强佐剂，诱导稳定增加的免疫应答，其达到高的最大水平并且持续长时间。另一方面，水性佐剂诱导快速开始的免疫性，但是通常，达到低的多的最大水平，其持续短的多的时间。为了规避不充分水平的免疫性，增强免疫常常在首次注射3周或更多周后给予，其显著地延长了建立免疫性所需的总时间(‘免疫时间’)。在大流行病而不是流行病的情况下，时间和生产能力是关键因素。用最小浓度的抗原，在单次注射(一次注射(one-shot))后短时间(例如1周)建立保护性免疫的疫苗，对于控制大流行病将开放机会，其将大于需要几周或甚至用包含高浓度抗原的制剂第二次施用的产品的可能性。诱导高水平抗体并伴随着细胞介导的免疫性的诱导的疫苗可以不仅针对同源性菌株(确切的大流行病菌株)，而且针对相同亚型的异源性，或不完全匹配流感菌株保护人群。这将对潜在的大流行病爆发能够形成甚至更及时的应答，如使用佐剂H5N2疫苗在家禽中控制H5W爆发所例举的。在新兴大流行病的首次警报信号显示后可以快速和大规模(剂量数量)生产的此类疫苗，将有利于控制。实际上，显著地降低首次警报信号(‘出发时间(cbparturetime)’)和人类群体以充分程度被保护的情况(到达时间)之间的时间的每一和任何措施具有积极影响。因此，对于尽可能大的群体在新兴大流行病过程期间尽可能早的获得理想的大流行病疫苗，并且在尽可能多的受试者中尽可能早地建立充分水平的保护性免疫(体液和细胞)。
发明内容本发明提供克服已存在的灭活的流感疫苗的许多缺点的疫苗。本发明提供灭活的流感疫苗，包括0丙内酯(BPL)灭活的全流感病毒和包括作为佐剂的一种或多种单_或二糖衍生物，所述单_或二糖衍生物具有至少一个但不多于N-1个脂肪酸酯基团和任选的，一个但不多于N-1个硫酸酯基团，其中N为所述衍生物衍生自的单-或二糖的羟基的数量。此类佐剂描述于W00140240,HilgersL.A.，andBlomA.G.Sucrosefattyacidsulphateestersasnovelvaccineadjuvant。Vaccine24:S2_81(2006),禾口BlomA.G.,andHilgersL.A.SucrosefattyacidsulphateestersasnovelvaccineadjuvantseffectofthechemicalcompositionVaccine23:743-54(2004)。该类型的佐剂不像油性佐剂一样形成抗原的储存库(depot)，其导致抗原对宿主免疫系统的立即可用性。特别在大流行病情况下免疫性的快速开始是重要的。该佐剂优选为CoVaccineHT。CoVaccineHT包含在亚微米的水包角鲨烷乳液(squalane-in-wateremulsion)中引入的蔗糖脂肪酸硫酸酯。蔗糖脂肪酸硫酸酯的剂量为0.1至40mg。优选地，蔗糖脂肪酸硫酸酯的剂量为0.25至10mg。最优选，蔗糖脂肪酸硫酸酯的剂量为0.5至4mg。角鲨烷的剂量为0.4至160mg。优选地，角鲨烷的剂量为1至40mg。最优选，角鲨烷的剂量为2至16mg。血细胞凝集素的剂量为0.1至60iig。优选地，血细胞凝集素的剂量为0.25至15yg。最优选，血细胞凝集素的剂量为1至3iig。CoVaccineHT刺激Thl和Th2应答(对于诱导细胞介导的免疫性是重要的)二者，而例如氢氧化铝仅给出Th2应答。CoVaccineHT在挑战感染(challengeinfection)后不诱导增强的病理。在根据本发明的疫苗中的流感病毒优选为细胞培养物源的。用于在细胞培养物中产生流感病毒的方法在本领域是已知的。该病毒可以在哺乳动物、鸟类或人类起源(origen)的细胞，例如MadinDarbyCanineKidney(MDCK)，Vero,MDBK,CLDK,EBx或PerC6细胞上生长。MDCK细胞在本领域是已知的细胞。MDCK细胞系由S.H.Madin和N.B.Darby于1958年9月上从表面上正常的成体雌性考克斯班尼犬(cockerspaniel)的肾获得。最初的MDCK细胞系(NBL-2)保藏在ATCC(目录编号ATCCCCL34)。MDCK细胞可以例如在转瓶中或在微载体上，优选在无血清介质中粘附地生长(Merten,0.ff.,etal.Productionofinfluenzavirusincellculturesforvaccinepreparation。AdvExpMedBiol.；397:141_51(1996)；Kalbfuss,B.,etal.HarvestingandconcentrationofhumaninfluenzaAvirusproducedinserum-freemammaliancellculturefortheproductionofvaccines.BiotechnologyandBioengeneering,97(2007)。MDCK细胞还可以悬浮培养地生长(Nakamura，K.，etal.MethodofsuspensioncultureforMDCKcellsandisolationofinfluenzavirusinMDCKsuspensionculturedcells.KansenshogakuZasshi；54:306_12(1980)。用于大流行病用途的疫苗旨在保护人类抵抗具有大流行病潜力的高度病原性(禽)流感病毒的感染，例如H5m菌株。根据本发明的疫苗优选基于H5型，特别是H5m型的灭活的流感病毒。5测试了基于流感病毒菌株NIBRG-14的疫苗，所述NIBRG-14在MDCK细胞上培养，用BPL灭活并且辅助有CoVaccineHT。令人惊奇的是，在雪貂(ferret)(流感疫苗的动物模型)中单次注射该疫苗，赋予高的病毒-中和抗体滴度，表明高度的保护。以其作为人类流感疫苗的用途为目的，NIBRG-14病毒由NationallnstituteforBiologicalStandardsandControl(PottersBar，England)设计。NIBRG—14为减毒的重排病毒，包含来自A/Vietnam/1194/2004(H5m)的2个表面基因(改性的HA&NA)和来自egg-highgrowthA/PR/8/34(HlNl)的6个内部基因。为了提高该菌株的安全性，除去了在血细胞凝集素基因中的多碱基裂解位点(polybasiccleavagesite)。该疫苗菌株的非病原性在胚卵、鸡和雪貂中确认。(Wood,J.M.,etal.Fromlethalvirustolifesavingvaccine:developinginactivatedvaccinesforpandemicinfluenza.NatureReviewsinMicrobiology2，842-847(2004).用于病毒生产的细胞培养物(代替卵)的(组合)使用，全病毒(代替裂解物或亚单位)、BPL(代替交联剂)、水性(代替油性)、非储存性(代替储存性)佐剂和/或简单的添加(代替乳化)抗原和佐剂赋予重要的优点。首先，该疫苗导致免疫性的快速开始，其在面对大流行病威胁时是关键的。此外，根据本发明的疫苗更易于以更高产量(剂量的数量)生产。由于使用根据本发明的疫苗，仅需要单次注射的事实，所需的抗原的量降低。由于该疫苗诱导高的抗体和细胞介导的应答的事实，可以获得不仅针对同源性，而且针对异源性菌株的保护。本发明由以下给出的实施例进一步举例说明。提出的试验显示根据本发明的疫苗在单次免疫后达到意想不到高的HI抗体滴度。这些滴度使用比较疫苗不能够达到，所述比较疫苗的不同之处仅在于佐剂的选择(氢氧化铝代替CoVaccineHT)。具体实施例方式实施例实施例1疫苗的形成流感病毒NIBRG14(H5N1))在MDCK细胞上生长。发酵3_5天后，在用BPL(0.025%w/v)灭活前收获病毒上清液并且将其澄清。灭活后，灭活的病毒通过超滤浓缩并且进一步纯化。抗原浓度通过单向免疫扩散(SRID)分析确定。疫苗通过将病毒抗原与所需量的佐剂和/或磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)混合来配制(表1)。佐剂CoVaccineHT由CoVaccineBV(Utrecht,TheNetherlands)友情提供。实施例2在小鼠中使用CoVaccineHT辅助的细胞培养物源的灭活的全病毒疫苗的免疫接种/挑战试验(challengeexperiment)试验设计6-8周年龄的雌性Swiss小鼠随机分成5组(n=5)。疫苗以0.lmL通过肌肉内(IM)注射施用至后腿。所述疫苗制剂如表1中所示。挑战病毒(Challengevirus)(A/PuertoRico/8/34)(H1N1)通过将0.2mL病毒接种入9-11天大小的SPF胚卵(embryonatedSPFegg)中来生产。在34°C-37°C下3天孵育时间后，收获尿囊液并将其在MDCK细胞上滴定。为了评价抗体的诱导，在免疫接种后24天取血液样品。抗体滴度通过血凝抑制检验来确定。抗原特异性IgGl和IgG2a抗体滴度通过酶联免疫吸附(ELISA)来测定。免疫接种后4周，所有动物用小鼠适应的(A/PuertoRico/8/34；H1N1)挑战(challenge，也可称为“攻击”)。每天测定体重以评价针对临床症状的保护。挑战后12天杀死所有动物。表1疫苗制剂组抗原(灭活的全病毒)佐剂1PBS2A/Pr/8/3470ngHA/剂量3A/Pr/8/3470ngHA/剂量氧氧化招(0.2%)(BrenntagBiosector,Denmark)4A/Pr/8/3470ngHA/剂量CoVaccineHT(2mg/剂量)(CoVaccineBV,theNetherlands)5A/Pr/8/3470ngHA/剂量CoVaccineHT(0.5mg/剂量)(CoVaccineBV)结果为了评价佐剂CoVaccineHT提高细胞培养物源的灭活全病毒流感疫苗的免疫原性的能力，将小鼠用不同的疫苗制剂接种。免疫接种后3周，HI抗体滴度在从来自组的免疫接种的和对照动物取得的血清中确定。如在表2中所示，CoVaccineHT不强烈地增强针对A/Pr/8/34的HI滴度。该HI滴度甚至低于由包含氢氧化铝的疫苗诱导的滴度。表2在免疫接种后24天取得的血清中的针对A/Pr/8/34的HI滴度组抗原佐剂HI滴度fLog)1PBS<3.32A/Pr/8/3470ngHA/剂量5.1士1.13A/Pr/8/3470ngHA/剂量氢氧化铝(0.2%)7.3士1.34A/Pr/8/3470ngHA/剂量CoVaccineHT(2mg/剂量)5.1士1.35A/Pr/8/3470ngHA/剂量CoVaccineHT(0.5mg/剂量)6.1士1.67确定IgG同种型以确定CoVaccineHT是否对诱导的免疫性的类型具有影响。如表3中所示，氢氧化铝的共递送诱导高滴度的IgGl和IgG2a。随着IgGl/IgG2a比强烈地降低，CoVaccineHT的共递送明显地诱导IgG同种型上的转变。该转变成降低的IgGl/IgG2a比可能是重要的，因为低的IgGl/IgG2a比在小鼠中与细胞介导的免疫性(Thl应答)的良好诱导有关，而高比例与细胞介导的免疫性(Th2应答)的差的诱导有关。表3在血清中的抗A/Pr/8/34IgG同种型组佐齐[JIgGlIgG2aIgGl/IgG2a比~~210.024+0.031~1.486+1.101NC^S氧化铝(0.2%)2.964+0.359~1.790+1.0661.656~CoVaccineHT(2mg/0.131士0.0992.133士1.1650.061mW)~CoVaccineHT(0.50.253士0.1892.583士1.2520.097mg/齐[J量)NC=未计算，因为平均IgGl滴度低于背景两次。将血清预稀释200倍并且在用抗原包被的96孔ELISA板中连续地稀释2倍。免疫接种后27天，将所有小鼠用同源性小鼠适应的A/Pr/8/34挑战。每天测定体重。在PBS对照组中的所有动物在体重上下降并且在8天内死亡。在组2(仅抗原)中的动物证明清除组(cleargroup)平均体重降低直到挑战后6天，其后体重增加至正常水平。在组3-5中的动物被更好的保护，因为这些动物在挑战后未失重。尽管CoVaccineHT比氢氧化铝不诱导更高的HI滴度，其对应答的Thl/Th2比具有有益的效果。实施例3在雪貂中的CoVaccineHT辅助的细胞培养物源的灭活的全病毒疫苗(菌株A/Pr/8/34)的免疫原性(试验I)·(免疫接种/挑战)CoVaccineHT对细胞培养物源的灭活的全病毒流感疫苗的免疫原性的影响也在雪貂中评价。试验设计四组阉割的雄性雪貂(η=7)用于该试验。在免疫接种前1个周，雪貂同时地接受应答器(BiomedicDataSystemsIPTT-200)以测定体温和以能够身份识别。所有动物用不同的制剂通过肌肉内注射0.5mL来免疫接种一次。HI滴度在免疫接种后21天和49天取得的血液样品中确定。免疫接种后8周，雪貂用感染性A/PuertoRico/8/34(HlNl)挑战。挑战病毒(A/PuertoRico/8/34)(HlNl)通过将0.2mL病毒接种入9-11天大小的SPF胚卵(embryonatedSPFegg)中来生产。在34°C_37°C下3天孵育时间后，收获尿囊液并将其在MDCK细胞上滴定。挑战前，频繁地测定体重和体温以建立正常的基线值。挑战后，每天两次的监视体重和体温。在挑战感染后第4天，在大体病理(grosspathology)进行后将动物通过心脏穿刺来失血致死。制剂示于表4。表4在雪貂试验I中的疫苗制剂<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>结果如表5中所示，使用CoVaccineHT的免疫比用氢氧化铝的免疫导致高6_至7_倍的HI滴度。表5在免疫接种后21和48天取得的血清中的针对A/Pr/8/34的HI滴度<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>雪貂在免疫接种后8周用同源性感染性病毒挑战。在挑战感染后第4天，将雪貂杀死并且取出肺组织以用于组织学。组1的未免疫接种的动物在肺中显示最严重的病理学损伤。免疫接种组(组2至4)的动物仅显示细支气管/支气管和肺泡的微小发炎。挑战后，存在淋巴样刺激，并伴随着小血管的血管周淋巴细胞浸润(在组3中最高分)，和间质单核细胞浸润(在组2和3中最高分，但是在对照组中最严重)。不同免疫接种组之间的差异不是非常明显地降低(cut)。推断出在雪貂而不是在小鼠中，CoVaccineHT比氢氧化铝诱导显著更高的HI抗体滴度。实施例4在雪貂中的CoVaccineHT辅助的细胞培养物源的灭活的全病毒疫苗(菌株NIBRG-14)的免疫原性(试验II).为了评价CoVaccineHT是否也提高H5W菌株的免疫原性，进行新的免疫接种试验。为了产生疫苗，使用在GMP下产生的灭活的全病毒抗原。试验设计7组雄性雪貂(n=7)用于该试验。在免疫接种前1个周，雪貂同时地接受应答器(BiomedicDataSystemsIPTT-200)以测定体温和以能够身份识别。所有动物用不同的制剂通过在左股二头肌中注射0.5mL两次来免疫接种。为了产生疫苗，使用灭活的全病毒抗原(菌株NIBRG14(H5N1)，在GMP下产生)。不同的疫苗制剂在表6中示出。血液样品在不同的时间点取得。表6在雪貂试验II中的疫苗制剂<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>所有动物以3周间隔免疫接种2次。如表7中所示，lmg/剂量CoVaccineHT的共递送与氢氧化铝佐剂疫苗相比在HI滴度上导致4.9倍的增加。41^/剂量0^肌(^1^肌111的共递送甚至导致8.5倍的增加。该增强进一步增加HI滴度。使用CoVaccineHT的制剂在第35天导致最高的HI滴度，但是使用氢氧化铝佐剂疫苗的差异小于在第21天。表7在第21天(首次免疫接种后21天)和在第35天(增强免疫接种后14天)取得的血清中针对NIBRG-14的HI滴度<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>从所述试验可以推断出保护性的HI滴度可以在用辅助有CoVaccineHT的灭活的全病毒疫苗单次免疫接种后获得(在人类中HI滴度>5.3认为是保护性的)与CoVaccineHT共递送的H5W菌株与氢氧化铝的共递送相比在HI滴度上导致8.5倍增加(4mg/剂量)或4.9倍增加(lmg/剂量)。单次免疫接种后，由7.5μgHA/剂量+CoVaccineHT诱导的HI滴度比由15μgHA/剂量+氢氧化铝诱导的滴度高4倍。实施例6在非人灵长类中CoVaccineHT和氢氧化铝辅助的流感疫苗的比较本发明通过在非人灵长类中的免疫接种研究进一步举例说明。为此目的，将CoVaccineHT和氢氧化铝辅助的H5W疫苗注射入3岁年龄的雌性食蟹猴(Cynomolgusmacaques(Macacafascicularis))(HartelustBV,Tilburg,TheNetherlands)并且在1和2次注射后测定抗体应答。所述动物以6只动物每组住在使用锯屑作为床具的正常笼中。动物设备条件为昼/夜循环(12h/12h)，温度21摄氏度士2°C，相对湿度40-60%。所述动物具有不受限的自来水和食物(颗粒饲料(pellets)和水果)供应。它们每天就疾病的明显标志检查。符合用于动物试验的荷兰法，并且符合“Guideforthecareanduseoflaboratoryanimals”，ILAR推荐和AAALAC标准地进行动物试验。动物每天就副作用评价(移动或呼吸困难、打喷嚏)。为了处理，动物用氯胺酮(25mg/kg；肌肉内)镇静，其提供约20-40分钟的深度镇静并且其为标准步骤。动物由动物设备技术员每天观察两次。在第0天，动物免疫入其中皮肤被削去的左后腿股间肌(LH)。在研究第21天，将所述疫苗施用至其中皮肤被削去的右后腿(RH)股间肌。注射位点在每次免疫之前和每次免疫后4和24小时检查。抗原的剂量为7.5iigHA(灭活的NIBRG-14)。氢氧化铝以0.2%(w/v)的浓度使用。CoVaccineHT的剂量为2mgSFASE。结果未注意到局部或全身的不良事件，除了在少数情况下一些局部发红之外。为了血凝抑制(HI)检验，将病毒悬浮液用血清样品的连续(2-倍)稀释液孵育，所述血清样品用cholerafiltrate(获自Vibriocholeraecultures)预处理。随后，将红细胞添加至所述稀释液，并且在孵育后将显示血细胞凝集素的完全抑制的试剂的最大稀释度定义为血凝抑制的滴度。表8在猕猴中用氢氧化铝(组1)和CoVaccineHT-辅助的(组2)，全病毒H5W流感疫苗1和2次免疫后的HI抗体滴度。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>GMT为几何平均滴度；SD为GMT的标准偏差；antilog为2~GMT；增长因子为在某天的antilog除以在第0天的antilog,即10。HI测试系统的检出限为10。用具有氢氧化铝或CoVaccineHT作为佐剂的细胞培养物源的、全病毒、H5W流感病毒首次注射后3周，与第0天(免疫前)相比HI滴度分别增加至少1.6和17.2倍。用具有氢氧化铝或CoVaccineHT作为佐剂的细胞培养物源的、全病毒、H5W流感病毒第二次注射后3周，与第0天(免疫前)相比HI滴度分别增加至少12.3和175.1倍。用于评估流感疫苗功效的3个EMEA标准为1)血清转化的数量或HI滴度上的显著增加应该>40%，2)GMT上的增加应该>2.5和3)具有HI滴度>40的受试者的比例应该至少为70%。令人惊奇的是，单剂量的根据本发明的疫苗在未接触抗原动物(imprimedanimals)中导致容易满足这些标准的免疫应答，而对于传统的氢氧化铝_佐剂疫苗，需要两次免疫。权利要求灭活的流感疫苗，包括β丙内酯(BPL)灭活的全流感病毒和包括作为佐剂的一种或多种单-或二糖衍生物，所述单-或二糖衍生物具有至少一个但不多于N-1个脂肪酸酯基团，其中N为所述衍生物衍生自的单-或二糖的羟基的数量。2.根据权利要求1所述的灭活的流感疫苗，其特征在于所述佐剂为在水包角鲨烷乳液中引入的蔗糖脂肪酸硫酸酯。3.根据权利要求2所述的灭活的流感疫苗，其特征在于所述佐剂为CoVaccineHT。4.根据权利要求1-3任一项所述的灭活的流感疫苗，其特征在于所述流感病毒为细胞培养物源的。5.根据上述权利要求任一项所述的灭活的流感疫苗，其特征在于所述细胞培养物为MDCK细胞培养物。6.根据上述权利要求任一项所述的灭活的流感疫苗，其特征在于所述流感属于H5型。7.根据权利要求6所述的灭活的流感疫苗，其特征在于所述流感属于H5W型。8.根据权利要求7所述的灭活的流感疫苗，其特征在于所述流感为NIBRG-14。9.根据上述权利要求任一项所述的灭活的流感疫苗，其特征在于一次剂量的疫苗包含0.1至60iigHA。10.根据权利要求1-3任一项所述的灭活的流感疫苗，其特征在于一次剂量的疫苗包含0.lmg至40mg蔗糖脂肪酸(硫酸)酯。11.权利要求1-9任一项所述的疫苗在保护人类或动物抵抗流感的方法中的用途。12.根据权利要求10所述的用途，其中所述人类或动物以一次注射疫苗方案免疫接种。全文摘要本发明涉及灭活的佐剂流感疫苗。本发明提供克服已存在的灭活的流感疫苗的许多缺点的疫苗。本发明提供灭活的流感疫苗，包括β丙内酯(BPL)灭活的全流感病毒和包括作为佐剂的一种或多种单-或二糖衍生物，所述单-或二糖衍生物具有至少一个但不多于N-1个脂肪酸酯基团和任选的，一个但不多于N-1个硫酸酯基团，其中N为所述衍生物衍生自的单-或二糖的羟基的数量。在根据本发明的疫苗中的流感病毒优选为细胞培养物源的。用于在细胞培养物中产生流感病毒的方法在本领域是已知的。该病毒可以在哺乳动物、鸟类或人类起源的细胞，例如MadinDarbyCanineKidney(MDCK)，Vero，MDBK，CLDK，EBx或PerC6细胞上生长。文档编号A61K39/39GK101808659SQ200880108502公开日2010年8月18日申请日期2008年9月23日优先权日2007年9月24日发明者H·L·戈兰斯比克,J·G·M·海尔登斯申请人:诺比龙国际有限责任公司