专利名称：：含有vegf抑制剂和伊立替康的抗肿瘤组合的利记博彩app含有VEGF抑制剂和伊立替康的抗胂瘤组合本发明涉及VEGF抑制剂和拓朴异构酶抑制剂类的化学毒性剂的可用于治疗肺瘤疾病的组合。VEGF抑制剂是血管内皮细胞生长因子的抑制剂，在大多数情况中是选自可溶性受体、反义、RNA适配体和抗体的生物制品。用于治疗已知肿瘤疾病的拓朴异构酶的抑制剂选自喜树碱类，其包括CPT11、拓朴替康和pyridobenzoindole。本发明的组合特别地针对于治疗结肠癌或者胃癌。优选用于本发明的VEGF抑制剂(其为VEGFTrap嵌合蛋白)的描述和制备描述在专利申请WO00/75319中。存在许多嵌合蛋白的获得方式。对应VEGFTrap的获得方式是描述于图24(序列)的那种。用于本发明的VEGFTrap是融合蛋白，其包含与VEGFR1受体的IgD2结构域融合的VEGFR1信号序列，而VEGFR1受体的IgD2结构域自身则与VEGFR2受体的IgD3结构域融合，VEGFR2受体的IgD3结构域接着又与IgGl的Fc结构域融合，其又被称作VEGFRlR2-FcACl或FltlD2.FlklD3.FcACl。通常，用于人类的VEGFTrap剂量依赖于待治疗的个体的特异性因素，在皮下或静脉内途径进行给药时，该剂量通常为1~0毫克/千克。拓朴异构酶的抑制剂中，伊立替康(非专有名称也称作CPT-U)被优选使用。根据给药方案，伊立替康通常以100mg/m2500mg/m2的剂量通过静脉内途径进行使用。例如，对于每周的方案为]50mg/m2的剂量，对于每三周的方案为200400mg/m2的剂量。出片反于"TheNewEnglandJournalofMedicine"中的HHurwitz,LFehrenbacher,WNovotny,TCartwright,JHainsworth,WHeim,JBerlin,ABaron,SGriffing，EHolmgren,NFerrara，GFyfe,BRogers,RRoss,FKabbmavar的论文描述了一种临床试验，其证明使用贝伐单抗(bevacizumab)和伊立替康、5FU和曱酰四氲叶酸的组合时，与不含贝伐单抗的相同组合相比，得到了更好的存活率。在该临床试验中，3没有证明存活率的改善来自于伊立替康与贝伐单抗的组合，其可能来自于5FU或甲酰四氬叶酸与贝伐单抗的组合，或者可以来自于四种成分的组合。现在，由于已经知道各种抗癌药伴随其治疗效果会引起毒性副作用，因此，看起来明智的是尽可能限制它们的存在，特别是在能够在它们至少一种不存在时仍能够获得相同的效果。此外，这篇论文没有提供任何在科比特(Corbett)意义上的协同效应，即在以其最大耐受量单独使用組合的各种元素时都无法获得的效果。VEGFTrap是一种可溶性受体，其是通过以下融合而产生EGFR-1的第二Ig结构域与EGFR-2的第三Ig结构域融合(fusion),该EGFR-2的第三Ig结构域随后又与人的IgGl的Fc部分融合。如VEGFR-1受体，阿柏西普(aflibercept)(VEGFTrap)对VEGF-A具有非常高的亲和力，其Kd为0.5皮M。VEGFTrap与VEGF-A的高亲和力的结合导致形成复合物，该复合物阻止VEGF结合到细胞表面上并激活其在细胞表面上的受体。与阿瓦斯汀(Avastin)(或贝伐单抗)相比，VEGFTrap是一种可溶性受体，而阿瓦斯汀则是针对VEGF-A的抗体。与阿瓦斯汀相比，VEGFTrap具有高得多的对VEGF-A的亲和力，并且具有不同的选择性特征，因为VEGFTrap还与VEGFR1-2受体的其它配体连接，即连接到P1GF(胎盘生长因子)和连接到VEGF-B。另一方面，VEGFTmp具有比阿瓦斯汀显著低的分子量(阿柏西普为115kDa,而阿瓦斯汀为160kDa)，其更有利于渗入实体瘤中。现在已经发现，并且这也是本发明的主题，当将它们与至少一种用于抗癌治疗的具有与VEGF抑制剂不同的作用机制的治疗物质组合进行给药时，VEGF抑制剂的效率可以:帔显著地改善。而且，因为产品的活性依赖于所使用的剂量，所以可以使用更高的剂量并且通过减少毒性现象或延緩它们的出现(通过组合与VEGF抑制剂或它们与其它的造血类型生长因子的治疗活性物质(例如G-CSF或GM-CSF或某些白细胞介素)的类似物进行组合)而提高活性。更特别地，本发明涉及VEGFTrap与4尹立替康的组合。本发明的组合的改善的效率可以通过确定治疗协同作用而得到证明。如果其在治疗上优越于以最佳剂量使用的所述组分的一种和另一种，则组合显示出治疗协同作用。为了证明组合的效率，可以需要将组合的最大耐受剂量与所考虑的研究中的分离的各种组分的最大耐受剂量进行比较。这种效率可以例如通过被杀死细月包的logio(logi。descellulestu6es)进行定量，其是才^据下面的式子进行确定被杀死细胞的<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中，T-C代表细胞生长的延迟，其是对于经治疗的组(T)的肿瘤和对照组(C)的肺瘤已经达到预定值(例如1g)以天为单位的平均时间，Td代表肿瘤体积在对照动物中翻倍所需要的以天为单位的时间[T.H.Corbett等人，Cancer,巡2660.2680(1977);F.M.Schabel等人,CancerDrugDevelopment,PartB,MethodsinCancerResearch,12，3-51,NewYork,AcademicPressInc.(1979)]。如果4皮杀死细月包的log10大于或等于0.7,则产品被认为是有活性的。如果被杀死细胞的log!。大于2.8，则产品被认为是非常有活性的。以其自己的最大耐受剂量进行使用的组合(在该组合中所述组分的每种都以通常低于或等于其最大耐受剂量的剂量存在)，在被杀死细胞的l0g1Q大于最好组分在其单独给药时杀死细胞的10g!。时，则将显示出治疗协同效应，特别是超过值为至少为l个log杀死细胞时。所述组合对实体瘤的效率可以以下列方式实-睑确定在第0天，将进行实验的动物(通常为小鼠)两侧皮下植入3060mgHCT116人肿瘤碎片(Brattain，M.G.,Fine,W.D.,Khaled,F.M.,Thompson,J.和Brattain,D.E.,Heterogeneityofmalignantcellsfromahum肌colonicc肌inoma.CancerRes.,1981,41,1751-1756)。在进行各种治疗和对照之前，将携带肺瘤的动物是随机的。在本发明的治疗肿瘤的情况中，使肿瘤发展到48294mg的尺寸，这能够获得每组129162mg之间的中值肿瘤。经历单独用VEGFTrap的治疗的动物的重量为17.122.7g,经历单独用伊立替康治疗的动物的重量为17.522.3g,接受组合的那些动物的重量为17.523.6g。携带肿瘤的动物还进行了仅利用赋形剂的相同治疗，以能够从化学治疗对肿瘤的实际效果中分离出赋形剂的毒性作用。该化学治疗在肿瘤植入后的第12天开始。与注射伊立替康(根据每天注射两次，它们通过静脉内途径来进行)同时，通过皮下途径进行VEGFTrap注射。这些注射是在植入肿瘤后的笫12、15和18天进行的。每周对各个组的动物进行称重3~4次，直到达到最大重量减轻，接着每周对这些组进行称重至少一次直到试-睑结束。每周对肿瘤进行测量2或3次，直到肿瘤达到大约2g，或者直到动物死亡(如果在肿瘤达到2g之前发生死亡的话)。在处死时，对动杨进行解剖分析。根据各种记录的参数对抗肿瘤活性进行确定。作为例子，后面的表格提供了利用VEGFTrap和伊立替康(以它们最佳剂量进行使用)的组合所获得的结果。本发明还涉及药物组合物的试剂盒，其含有在根据本发明的组合中使用的产品。构成组合的产品可以被同时、分开或随时间先后地给药，以便获得组合的最大效率；每次给药可以具有不同的持续时间，从快速完全给药到连续输注。对于本发明的目的，作为其结果，组合并不仅仅限于通过将这些组分物理组合而获得的那些，而且不仅仅限于允许分开给药(其可以是同时或随时间先后)的那些。本发明的组合物优选是能够通过肠胃外途径给药的组合物。用于肠胃外给药的组合物通常是药物上可以接受的无菌溶液或者悬浮液，其可以任选地在使用时临时地制备。为了制备非含水溶液或者悬浮液，可以使用天然的植物油例如橄榄油、芝麻油或者液体石蜡或者可注射的有机酯例如油酸乙酯。含水的无菌溶液可由产品在水中的溶液构成。所述水溶液在pH可以#皮适当地调节和获得等渗性(例如通过充足数量的氯化钠或者葡萄糖)方面适于静脉内给药。灭菌可以通过加热或任何其它不损害组成的措施来进行。所述组合还可以是脂质体形式的，或者以与载体(例如环糊精或者聚乙二醇)组合的形式。在本发明的组合中，其组分的施用可以是同时的、分开的或者随时间先后的，特别有利地，VEGFTmp衍生物的量占组合的10重量Q/。80重量％，该含量可以根据相关物质的性质、期望的效率以及待治疗的癌症的性质而变化。本发明的组合特别可以用于治疗结肠癌和/或胃癌。特别地，它们能够具有以比它们单独使用时的剂量低得多的剂量使用这些组分的优点。下面的实施例描绘了根据本发明的组合。实施例根据常用技术准备用于皮下给药的lcm3的安瓿剂，其含有25mgVEGFTrap,所述VEGFTrap稀释在5mM磷酸盐、5mM种檬酸钠、100mM氯化钠、聚山梨醇酯20和20%蔗糖的緩冲液中。每只小鼠的给药体积是O.lml。在植入肿瘤后的第12、15和18天，每日给药VEGJTrap—次。根据常用技术，由20mg/ml伊立替康的市售溶液(用5%右旋糖的水溶液稀释)准备用于每只小鼠0.3ml静脉内给药。在适当的稀释后，同时给药这些溶液。在植入肿瘤后的第12、15和18天，一天重复两次利用伊立替康的治疗，间隔为4小时。试验结果附于后面的表中。肿瘤翻倍时间=3.2天。所使用的缩写(T-C)胂瘤生长的延迟，lck:杀死细胞的log值。对于单独伊立替康，在52.4、32.5和20.2mg/kg/注射的剂量，观察到了毒性，因为在52.4的剂量有死亡，而对于另外两个较低的剂量则观察到超过20%的重量减轻。因此，对于伊立替康的最大耐受剂量为12.5mg/kg/注射(注射总剂量为75.0mg/kg)。12.5mg/kg/注射的剂量被发现是有活性的，其lck为1.8。对于VEGFTrap,该产品在所测试的所有剂量下是很好耐受的，并且发现是有活性的，其在40mg/kg/给药和25mg/kg/给药时的lck为1.7。较低剂量10mg/kg/给药也是有活性的，其lck为l丄剂量2.5mg/kg/给药是无活性的。对于32.5mg/kg/注射的伊立替康的组合，无论VEGFTrap为如何，发现这种组合是有毒性的，具有接近于毒性的18%重量减轻。较低剂量20.2mg/kg/注射的伊立替康与40mg/kgVEGFTrap被认为是最大耐受剂量。这种剂量的lck为3.0,被判断为非常有活性。利用较低剂量的VEGFTrap(例如25、10、2.5mg/kg/给药)发现了相同的活性水平,(lck分别为2.9、3.0和2.9)。与40mg/kg/给药的VEGFTrap组合的12.5mg/kg/注射的伊立替康是有活性的，其lck为2.7。与25和10mg/kgVEGFTmp维持了这种抗肿瘤活性(lck分别为2.9和2.7)。与2.5mg/kg/给药VEGFTrap的组合的活性为2.0lck总而言之，在该组合的最大耐受剂量下，VEGFTrap与伊立替康的组合的活性显示了协同效应，其log细胞杀死(logcellkill)为3.0,与单独使用每种化合物的活性相比(其具有1.8和1.7的log细胞杀死(分别对于12.5mg/kg/注射的伊立替康和40mg/kg/给药的VEGFTrap)),其相当于超出1个log细胞杀死。在组合的最大耐受剂量以下的多个剂量水平都保持了抗肺瘤活性。8<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>权利要求1.包含VEGF抑制剂与伊立替康的组合，其具有治疗肿瘤疾病的治疗用途。2.根据权利要求1的组合，其包含VEGFTrap抑制剂与伊立替康。3.根据权利要求1和2任一项的组合，其特征在于，其含有10重量％80重量％的VEGFTrap。4.在肿瘤疾病治疗中作为组合制剂的包含VEGF抑制剂和伊立替康的产品，该组合制剂在抗癌治疗中同时、分开或随时间先后使用。5.不包含任何其它化学毒性衍生物的包含VEGFTrap抑制剂与伊立替康的组合，其在肿瘤疾病的治疗中具有治疗协同效应。全文摘要VEGF抑制剂与伊立替康的抗肿瘤组合，其具有用于治疗肿瘤疾病的治疗用途。文档编号A61K31/4745GK101686975SQ200880023537公开日2010年3月31日申请日期2008年7月2日优先权日2007年7月5日发明者M·-C·比塞里,M·奇龙-布朗德尔,P·夫里格诺德,P·莱杰恩申请人:艾文蒂斯药品公司