专利名称：：治疗湿疹皮炎的消炎抗菌涂剂及其检测方法
技术领域：
：本发明属于临床医学领域治疗皮肤疾病的外用制剂，及其检测方法。该制剂是一种治疗湿疹皮炎炎菌清涂剂及其检测方法。
背景技术：
：湿疹类皮肤病是由内外多种复杂因素引起的一种常见的过敏性、炎症性皮肤病。本类疾病的发病原因和病理机制比较复杂，目前有些机制仍不十分明了。湿疹患者具有一定的过敏素质,可能受遗传因素支配。如异位性皮炎为一种慢性、难治性、炎症性、瘙痒性皮肤病，具有遗传性和明显的年龄阶段性。据统计，大约70%80%的患者有家族遗传过敏史，但家族成员所表现出的过敏性疾病却不一定与患者相同。逾疹的分子遗传学研究主要集中在参与免疫反应的基因方面,包括人类白细胞抗原基因(位于6p)、T细胞受体(T2cel1rec印tor，TCR)a/S链基因(14q11.2)、细胞因子基因簇(5q3133)及IgE高亲合力受体P亚单位基因(llql3),这些基因的多态性、突变或异常表达可能与湿疹有一定相关性。种差别。湿疹的病因复杂，是内外因素相互作用的结果，常是多方面的。外在因素如生活坏境、气候条件等均可导致湿疹的发生。外界物理化学性刺激如日光、紫外线、寒冷、炎热、干燥、多汗、搔抓、摩擦以及各种动物皮毛、植物、化学物质等均可诱发湿瘆，R常用品如香脂类化妆品、肥皂、人造纤维也可诱发湿疹，某些食物致敏原同样可使湿疹加重。近年来许多研究证明感染性变应原在湿疹的发病过程中起着极为重要的作用，尤其是金黄色葡萄球菌分泌的超抗原是诱发或加重湿疹的原因之一。超抗原是一类有细菌外毒素或逆转录蛋白所构成的新的抗原物质。此类物质可直接与抗原递呈细胞表面的主要组织相容性抗原211(MHC2II)分子结合，并为多数T细胞活化提供信号，致其活化。这种能使多数T淋巴细胞活化的抗原被称为超抗原。超抗原引起湿疹的机制主要是:直接与专职抗原递呈细胞(APC)如巨噬细胞或树枝状细胞上的分子结合,也可与细胞因子诱导的非专职APC如角质形成细胞上的HLA2DR分子结合,这些HLA2DR细胞和此后激活的T淋巴细胞，局部或系统性的大量释放细胞因子和炎症介质，从而产生病理效应。超抗原也可以激活B淋巴细胞和T淋巴细胞而影响炎症和自身免疫。根据超抗原引起湿疹的学说，我们研究发现，在治疗湿疹的外用药剂中加入对分泌的超抗原金黄色葡萄球菌有抑制作用的抗生素利福平，可以明显提高这些药物的疗效'在加入利福平的同时，添加具有促进药物透皮吸收的薄荷脑'缉成一组具有对皮肤产生免疫抑制'抗炎，抗菌作用的治疗湿疹皮炎炎菌清涂剂'该炎菌清涂剂在临床应用'取得十分理想的疗效。研究表明具有消炎、止痛、止痒、抗菌、抗真菌、抗过敏五大功效'对各类皮肤炎症、搔痒、过敏及细菌、真菌感染均有独到的疗效。可用于湿疹(亚急性期/慢性期)、皮炎(脂溢性皮炎、神经性皮炎、接触性皮炎、过敏性皮炎、虫咬皮炎等)，痒疹、搔痒症、药疹、汗疱疹、手足癣、银屑病、指掌角化症、白癜风、玫瑰糠疹等。在研究的同时，我们也建立了一种方法简单可靠的药品检测方法
发明内容本发明提到的炎菌清涂剂是由肾上腺皮质激素、广谱抗生素、消炎止痛药及药物透皮吸收促进剂组成。糖皮质激素本方中采用地塞米松，也可采用醋酸泼尼松，醋酸泼尼松龙，醋酸氢化可的松，醋酸可的松，甲泼尼松，曲安西龙，，倍他米松，氟氢可的松，氯泼尼醇，地夫可特，氟米龙，曲安奈德，布丁奈德，莫米松，氯倍他索，氟氢松，丁氯倍他松，倍氯米松，氯氟轻松，阿氯米松，卤米松，甲羟松，去羟米松，氟氢縮松，二氟可龙；广谱抗生素本方中采用利福平，也可采用氯霉素，四环素，喹诺酮类等广谱抗生素，消炎止痛药本方中采用水杨酸，也可采用阿司匹林，吲哚美辛，布洛芬，非诺洛芬等消炎止痛药，药物透皮吸收促进剂本方中采用薄荷脑和丙二醇。具体实施例方式一、炎菌清涂剂的配方及生产方法如下配方一醋酸曲安奈德l.Og,利福平l.Og，水杨酸20g，薄荷脑20g，95%乙醇400ml，丙二醇300ml'蒸馏水300ml，共配制1000ml。生产方法取醋酸曲安奈德l.Og、利福平1.0g、水杨酸20g、薄荷脑20g分别按次溶于95W乙醇400ml中，搅匀至全溶解，即加进丙二醇300ml,、蒸馏水300ml，混合均匀，即得炎菌清涂剂产品。该产品可以分装为10ml/瓶，15ml/瓶，20ml/瓶或25ml/瓶.配方二醋酸地塞米松250mg，利福平l.Og,水杨酸20g，薄荷脑20g，95%乙醇，400ml,丙二醇300ml，蒸馏水300ml,，共配制lOOOml。生产方法取醋酸地塞米松、利福平、水杨酸、薄荷脑分别按次溶于95%乙醇中，搅匀至全溶解，即加进丙二醇、蒸馏水300ml，混合均匀，即得炎菌清涂剂产品。该产品可以分装为10ml/瓶，15ml/瓶，20ml/瓶或25ml/瓶。配方三醋酸曲安奈德1.0g,利福平l.Og，阿司匹林20g，薄荷脑20g，95%乙醇，400ml,丙二醇300ml，蒸馏水300ml，共配制1000ml。生产方法取配方三醋酸曲安奈德、利福平、阿司匹林、薄荷脑分别按次溶于95%乙醇中，搅匀至全溶解，即加进丙二醇、蒸馏水300ml，混合均匀'即得炎菌清涂剂产品。该产品可以分装为10ml/瓶，15ml/瓶'20ml/瓶或25ml/瓶。5配方四醋酸曲安奈德l.Og，氯霉素l.Og,水杨酸20g，薄荷脑20g，95%乙醇400ml，丙二醇300ml，蒸馏水300ml，共配制画ml。生产方法取醋酸曲安奈德1.0g、氯霉素1.0g、水杨酸20g、薄荷脑20g分别按次溶于95%乙醇400ml中，搅匀至全溶解，即加进丙二醇300m1，、蒸馏水300ml，混合均匀，即得炎菌清涂剂产品。该产品可以分装为10ml/瓶，15ml/瓶，20ml/瓶或25ml/瓶在上述配方中，肾上腺皮质激素类药物曲安奈德或地塞米松，也可采用醋酸泼尼松，醋酸泼尼松龙，醋酸氢化可的松，醋酸可的松，甲泼尼松，曲安西龙，倍他米松，氟氢可的松，氯泼尼醇，地夫可特，氟米龙，曲安奈德，布丁奈德，莫米松，氯倍他索，氟氢松，丁氯倍他松，倍氯米松，氯氟轻松，阿氯米松，卤米松，甲羟松，去羟米松，氟氢縮松，二氟可龙来代替；在上述配方中，广谱抗生素利福平，也可采用氯霉素，四环素，喹诺酮类等广谱抗生素替代。在上述配方中，消炎止痛药水杨酸，也可采用阿司匹林，吲哚美辛，布洛芬，非诺洛芬等消炎止痛药替代。二炎菌清搽剂的三种主要成分的高效液相色谱法检测方法为了完成对炎菌清搽剂中水杨酸、醋酸曲安奈德和利福平三种主要成分的含量测定，建立高效液相色谱法。具体方法如下-1仪器和试药LC1200型高效液相色谱，包括四元泵、DAD检测器、在线脱气机、LC1200中文工作站(美国，安捷伦科技有限公司)；AE204型十万分之一分析天平(瑞士，梅特勒托利多公司)；MILLI-Q超纯水制备仪(美国，密理博科技公司)；对照品水杨酸(批号100106-200303)、醋酸曲安奈德(批号100125-200404)、利福平(批号130496-200001)均购自中国药品生物制品检定所；炎菌清搽剂由广东医学院海滨医院提供；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。2方法和结果2.1溶液制备对照品储备液精密称取水杨酸对照品0.50g，醋酸曲安奈德0.0125g，利福平0.050g'加适量甲醇溶解，转入50mL棕色量瓶，加甲醇定容到刻度，即为混合对照品储备液。供试品溶液精密量取炎菌清搽剂3mL，转入25mL棕色量瓶中'加甲醇稀释到刻度'摇匀即可。阴性对照品溶液按照处方配制不加3种药物成分的空白溶剂即成。2.2色谱条件及系统适应性色谱条件为HypersilC8(4.6mmX250mm，5nm)色谱柱；流动相为甲醇-乙腈-0.075mol'L-l磷酸二氢钾溶液-1.0mol.L-l枸橼酸溶液(30:30:26:4)，检测波长254nm，流速0.8mL'min-l，柱温30'C。在上述色谱条件下，取对照品、供试品和阴性对照品溶液各20pL,分别进样HPLC分析，记录色谱图如附图1。附图(A)为对照品，(B)为供试品，(C)为空白对照品；色谱图中，1.为水杨酸2.为醋酸曲安奈德3.为利福平。制剂中3种药物成分能有效分离，水杨酸、酸醋酸曲安奈德和利福平的理论塔板数分别为9072,8571,5070,分离度分别为10.37,9.33，试验结果表明色谱峰分离度高，系统适应性良好。阴性对照品无显著色谱峰，表明空白溶剂不干扰供试品的检测。2.3线性关系考察精密量取对照品储备液0.5,1.Q,2.0,3.0，4.0,5.0mL，分别放入25mL量瓶中，加甲醇定容到刻度，摇匀即得系列浓度的对照品溶液。分别取配制好的各浓度对照品溶液20pL，进样高效液相色谱，记录峰面积积分值。分别以对照品含量X(jigTiiL-l)为横坐标，峰面积积分值Y为纵坐标计算标准曲线，水杨酸、醋酸曲安奈德及利福平的线性方程分别为Y=4.347X+147.835r=0.9991Y=27.402X-7.291r=0.9994Y=33.85X-89.334r=0.9996线性范围分别为202.242022.4，5,252,20.23202.3吗'mL-l。2.4精密度试验精密吸取供试品溶液，按照上述色谱条件连续进样5次，每次进样量20nL,以各药物成分峰面积计算相对标准偏差RSD。计算得水杨酸、醋酸曲安奈德和利福平的日内精密度RSD分别为1.4%,1.2%,0.89%,表明试验方法精密度良好。2.5重复性试验取同一批号的样品，按照"2.1"项下供试品溶液配制方法，制备6份供试品溶液，按上述色谱条件进样分析，计算含量，水杨酸、醋酸曲安奈德、利福平的RSD分别为1.2%、1.6%和0.92%。表明该试验方法的重复性良好。2.6稳定性试验取相同供试样品溶液，分别在O，1，2，4h进样HPLC测定水杨酸、醋酸曲安奈德、利福平的峰面积，计算相对标准偏差RSD。计算3种药物成分的RSD分别为1.3%、1.5%和1.7%，表明样品溶液在4h内稳定。2.7回收率试验取同一批空白样品9份，按处方量的110%,100%，85%分别精密加入对照品溶液，配制成低、中、高3种浓度的溶液各3份。按照样品测定方法测定含量，计算回收率。结果见表l。水杨酸，醋酸曲安奈德，利福平的平均回收率(n=9)分别为100.6%,97.8%禾Q100.5%。表l3种化合物成分的回收率试验结果(/7=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2.8样品含量测定取3个批号的炎菌清样品，按照供试品溶液配制方法制样，进样20pL高效液相色谱分析，按色谱条件测定峰面积，外标法测定含量，计算各批号样品标示量的百分含量。结果见表2。表2样品含量测定结果(％，<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>3讨论3.1本试验将2005版《中国药典》中检测利福平的色谱条件略作调整'将流动相中磷酸盐的比例调低，将流速调整为0.8mL.min-l避免泵压力过高，保持柱温箱温度控制在30'C。在该条件下搽剂中水杨酸、醋酸曲安奈德和利福平3种药物成分能有效分离'且分离度高、色谱峰形好、分离时间短，能同时完成制剂中3种药物成分的含量检测。3.2对本制剂药物成分作紫外波长扫描检测发现，水杨酸、醋酸曲安奈德和利福平的最大吸收波长分别是233，240,254nm。制剂中醋酸曲安奈德含量最低，水杨酸含量最高，为提高检测灵敏度，应选择240nm作检测波长，由于水杨酸质量浓度远大于激素的浓度，而且水杨酸的最大吸收波长与240nm很接近，为避免水杨酸峰高过大而影响含量最低的醋酸曲安奈德检测，最终选择254nm作为检测波长。结果表明在该波长条件下各成分峰高比例合适，线性关系良好。3.3在HPLC检测过程中，采用四元泵在线混合流动相时发现泵压力不稳定，有较大程度的瞬间波动，泵压力从160bar瞬间降落到10bar然后迅速回复到160bar，据文献报道可能和流动相混合过程中产生瞬时结晶有关。将流动相按比例预先混合均匀，保持室温27'C左右存放，检测时未再出现泵压力波动情况，检测基线平稳，泵压力保持恒定。3.4考察制剂的稳定性时发现，水杨酸和醋酸曲安奈德稳定性良好，在搽剂溶液中含量基本保持不变。利福平稳定性差，随着放置时间增长，利福平在搽剂溶液中的含量降低，其氧化产物醌式利福平的含量增加，光照能加速这种转化。因此在制剂生产过程中可采取措施延缓利福平的转化，如将利福平单独压制成小片，临用前投入药液中混匀使用；小体积分装确保制剂在几天内用完；采用不透光容器分装；加入适当的抗氧化剂等措施可延缓利福平的氧化。图1是对照品、供试品和阴性对照品HPLC色谱图附图中A:对照品，B:为供试品，C:为空白对照品色谱图中，1:水杨酸；2:醋酸曲安奈德；3:利福平。9权利要求1、一种治疗湿疹皮炎的炎菌清涂剂，其特征是该涂剂的配方与生产方法是取醋酸曲安奈德1.0g，、利福平1.0g、水杨酸20g、薄荷脑20g分别按次溶于95％乙醇400ml中，搅匀至全溶解，即加进丙二醇300ml，、蒸馏水300ml，混合均匀，即得炎菌清涂剂产品。2、如权利要求1所述的一种治疗湿疹皮炎的炎菌清涂剂，其特征是该涂剂的检测方法是用高效液相色谱法，色谱条件为HypersilC8(4.6mmX250mm，5jxm)色谱柱；流动相为甲醇-乙腈-0.075mol-L"磷酸二氢钾溶液-1.0moH/1枸橼酸溶液(30:30:26:4),检测波长254nm,流速0.8mL'min-l，柱温30。C。3、如权利要求1所述的一种治疗湿疹皮炎的炎菌清涂剂，其特征是该涂剂的配方醋酸曲安奈德可用醋酸地塞米松250mg代替。4、如权利要求1所述的一种治疗湿疹皮炎的炎菌清涂剂，其特征是，其特征是该涂剂的配方水杨酸可用阿司匹林代替。5、如权利要求1所述的一种治疗湿疹皮炎的炎菌清涂剂，其特征是该涂剂的配方中利福平可用氯霉素来替代。6、如权利要求1所述的一种治疗湿疹皮炎的炎菌清涂剂，其特征是该涂剂的配方肾上腺皮质激素类药物曲安奈德，可采用醋酸泼尼松，醋酸泼尼松龙，醋酸氢化可的松，醋酸可的松，甲泼尼松，曲安西龙，倍他米松，氟氢可的松，氯泼尼醇，地夫可特，氟米龙，布丁奈德，莫米松，氯倍他索，氟氢松，丁氯倍他松，倍氯米松，氯氟轻松，阿氯米松，卤米松，甲羟松，去羟米松，氟氢縮松，二氟可龙来代替。7、如权利要求1所述的一种治疗湿疹皮炎的炎菌清涂剂，其特征是该涂剂的配方中广谱抗生素利福平，也可采用氯霉素，四环素，喹诺酮类等广谱抗生素来替代。8、如权利要求1所述的一种治疗湿疹皮炎的炎菌清涂剂，其特征是该涂剂的配方消炎止痛药水杨酸，也可采用吲哚美辛，布洛芬，非诺洛芬等消炎止痛药来替代。全文摘要本发明公开了治疗湿疹皮炎的消炎抗菌涂剂及其检测方法，该涂剂是由肾上腺皮质激素、广谱抗生素、消炎止痛药及药物透皮吸收促进剂组成。该制剂具有消炎、止痛、止痒、抗菌、抗真菌、抗过敏五大功效，对各类皮肤炎症、搔痒、过敏及细菌、真菌感染均有独到的疗效。可用于湿疹(亚急性期/慢性期)、皮炎(脂溢性皮炎、神经性皮炎、接触性皮炎、过敏性皮炎、虫咬皮炎等)，痒疹、搔痒症、药疹、汗疱疹、手足癣、银屑病、指掌角化症、白癜风、玫瑰糠疹等。在研究炎菌清涂剂的同时，我们也建立了一种方法简单可靠的炎菌清涂剂药品检测方法，采用高效液相色谱法，在检测波长254nm等条件下可以同时准确地检测3种主要药物的含量。文档编号A61K31/045GK101574353SQ200810182060公开日2009年11月11日申请日期2008年11月24日优先权日2008年11月24日发明者吕应年,怡吴,铁吴,燎崔申请人:广东医学院