专利名称：β-咔啉-3-甲酰色氨酰氨基酸苄酯及其制备方法和应用的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及通式I的22种p-咔啉-3-甲酰色氨酰氨基酸苄酯，涉及这22种P-咔啉-3-
甲酰色氨酰氨基酸苄酯的制备方法，进一步涉及这22种P-咔啉-3-甲酰色氨酰氨基酸苄酯。 本发明属于生物医药领域。
背景技术：
恶性肿瘤是一种严重威胁人类健康的常见病和多发病，人类因恶性肿瘤而引起的死 亡率是所有疾病死亡率的第二位，仅次于心脑血管疾病。肿瘤的治疗方法有手术治疗，放 射治疗和药物治疗(化学治疗)。目前，化学治疗仍然是临床治疗肿瘤的主要手段。寻找 抗肿瘤药物是新药研究的热点之一。发明人认识到，在p-咔啉-3-羧酸的3位引入色氨酸并 在色氨酸羧端引入氨基酸苄酯可能产生抗肿瘤作用。按照这种构想，发明人提出本发明。
发明内容
本发明目的之一是提供一类具有抗肿瘤活性的化合物； 本发明目的之二是提供一种制备上述具有抗肿瘤活性化合物的方法； 本发明上述目的是通过以下技术方案来实现的 具有抗肿瘤活性的通式I化合物
其中，AA选自苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸、N^硝基精氨酸、天冬酰胺、异亮氨酸、 蛋氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苏氨酸、亮氨酸、色氨酸、缬氨酸、苄基组氨酸、脯氨酸、谷 氨酰胺、N"-苄氧羰基赖氨酸、对-甲氧基苄基半胱氨酸、P-丙氨酸、羟脯氨酸、卩-苄基天
冬氨酸或Y-苄基谷氨酸残基。
一种制备上述通式I化合物的方法，该方法包括
(1)(在甲醛和浓硫酸存在下)将L-色氨酸转变为p-咔啉-3-羧酸；(2) 将叔丁氧羰基(Boc)弓闺P-咔啉-3-羧酸的2位，得到2-Boc-(3-咔啉-3-羧酸；
(3) 将色氨酸苄酯引到2-Boc-(3-咔啉-3-羧酸的3位羧基上，得到2-Boc-p-咔啉-3-甲酰
色氨酸苄酯；
(4) 将2-Boc-(3-咔啉-3-甲酰色氨酸苄酯转化为2-Boc-p-咔啉-3-甲酰色氨酸；
(5) 将2-Boc-(3-咔啉-3-甲酰色氨酸与氨基酸苄酯偶联，得到2-Boc-P-咔啉-3-甲酰色氨
酰氨基酸苄酯；
(6)将2-Boc-(3-咔啉-3-甲酰色氨酰氨基酸苄酯脱去保护基Boc，即得。 上述制备方法中，步骤(5)中所述的氨基酸苄酯选自苯丙氨酸苄酯、丙氨酸苄酯、 甘氨酸苄酯、N6-硝基精氨酸苄酯、天冬酰胺苄酯、异亮氨酸苄酯、蛋氨酸苄酯、丝氨酸 苄酯、酪氨酸苄酯、苏氨酸苄酯、亮氨酸苄酯、色氨酸苄酯、缬氨酸苄酯、苄基组氨酸苄 酯、脯氨酸苄酯、谷氨酰胺苄酯、NW-苄氧羰基赖氨酸苄酯、对-甲氧基苄基半胱氨酸苄酯、 P-丙氨酸苄酯、羟脯氨酸苄酯、天冬氨酸二苄酯或谷氨酸二苄酯。
本发明的又一目的是提供一种治疗肿瘤的药用组合物，该药用组合物由治疗上有效 剂量的本发明通式I化合物与药学上可接受的赋型剂或者辅加剂组成，即将有效量的本发 明通式I化合物与药学上可接受的载体或稀释剂配合后，按本领域常规的制剂方法将其制 备成任意一种适宜的药物组合物。通常该组合物适合于口服给药和注射给药，也适合其他 的给药方法。该组合物可以是片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、栓剂，或口服液等液 体制剂形式。根据不同的给药方法，本发明药物组合物可以含有0. 1%-99%重量，优选10-60% 重量的本发明化合物。
本发明在小鼠S^肉瘤模型上评价通式1的化合物的抗肿瘤活性。实验结果表明，本 发明通式l化合物具有优秀的抗肿瘤活性，可作为抗肿瘤剂应用。
图l本发明通式I化合物的结构式。
图2本发明通式I化合物的合成路线图；i)甲醛，浓硫酸，25°C; ii)Boc酸酐,DMF， 三已胺；iii)THF， DCC， HOBt， MM，色氨酸苄酯，冰浴；iv)Pd/C，氢气；v)THF， DCC， HOBt， NMM， AA-OBzl; vi) 4N/氯化氢-乙酸乙酯，冰浴；通式1的AA选自苯丙氨酸、 丙氨酸、甘氨酸、NG-硝基精氨酸、天冬酰胺、异亮氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苏氨 酸、亮氨酸、色氨酸、缬氨酸、苄基组氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、NW-苄氧羰基赖氨酸、对 -甲氧基苄基半胱氨酸、卩-丙氨酸、羟脯氨酸、卩-苄基天冬氨酸或，苄基谷氨酸。
具体实施例方式
为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们 仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
实施例l制备p-咔啉-3-羧酸
将400ml水放入500ml圆底烧瓶中，缓慢加入0.2ml浓硫酸。在得到的稀硫酸水溶液中加 入5.0g (24.5mmo1) L-色氨酸并超声振荡至L-色氨酸完全溶解。往得到的溶液中加入 10ml35n/。的甲醛溶液。反应混合物室温搅拌8小时，薄层层析监测到Z-色氨酸点消失终止反 应。往反应溶液中缓慢滴加浓氨水，调反应混合物至pH6，静置半小时。减压滤出生成的 沉淀并用水洗，将滤出的无色固体平铺于表面皿，置于空气中干燥后得5.05g (95.4%)卩-咔啉-3-羧酸，为无色固体。ESI-MS (m/e) 217[M+H]+。
实施例2制备2-Boc-p-咔啉-3-羧酸
将14g (Boc)2O放入250ml圆底烧瓶中，10g(3-咔啉-3-羧酸,用DMF溶解，三己胺调节 pHll，室温反应48小时左右，薄层监测原料基本消失时停反应，将反应混合液室温蒸发吹 干，残留物用乙醚萃取三次后用饱和硫酸氢钾调节pH2，用乙酸乙酯萃取4次，无水硫酸钠 干燥合并的酯层，过滤，滤液浓縮得到的固体用二氯甲烷洗涤3次，得到10g (66.9%)标 题化合物，为无色固体。ESI-MS (m/e) 317[M+H]+。
实施例3制备色氨酸苄酯
将10g色氨酸放入250ml圆底烧瓶中，与50ml苄醇及20g多聚磷酸混合之后90摄氏度反 应8小时，薄层监测原料基本消失时停反应，降温，将反应混合液倒入放有500ml水和700ml 乙醚的混合液中，搅拌12小时，减压过滤并用水和乙醚洗涤得到9g (50.1%)标题化合物， 为淡黄色固体。ESI-MS (m/e) 294[M+H]+。
实施例4制备氨基酸苄酯
将O. lmol氨基酸放入250ml圆底烧瓶中与40ml苄醇、100ml环己垸及9g对甲苯磺酸混 合并回流8小时，薄层监测原料基本消失时停反应，降温，将反应混合液倒入适量乙醚中 搅拌，减压过滤，滤液用乙醚洗涤，得到标题化合物，为无色固体。实施例5制备2-Boc-p-咔啉-3-甲酰色氨酸节酯
在100ml茄瓶中0.005mol 2-Boc-l3-咔啉-3-羧酸用60ml无水THF溶解，冰浴下加入 0.005molDCC， 0.005mol HOBt，反应约30分钟后，加入0.004mol色氨酸节酯并用NMM 调节pH至9， TLC监测原料消失后终止反应，过滤，滤液减压浓縮至干。得到的残余物 用100ml乙酸乙酯溶解、置于250ml分液漏斗中、依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗(30mLx3)、 饱和氯化钠水溶液洗(30mLx3) 、 5%硫酸氢钾水溶液洗GOml")、饱和氯化钠水溶液 洗G0mlx3)、饱和碳酸氢钠水溶液洗G0mlx3)、饱和氯化钠水溶液洗(30mlx3)。合 并的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，得到2.76g(93.P/。)标题化 合物，为无色固体。ESI-MS (m/e) 593[M+H]+。
实施例6制备2-Boc-p-咔啉-3-甲酰色氨酸
将2-Boc-P-咔啉-3-甲酰色氨酸苄酯用20ml乙醇溶解在100ml茄瓶中，冰浴下滴加10ml 4N/NaOH水溶液,TLC监测原料消失时停反应。将反应混合物减压浓縮至干，残留物用饱 和硫酸氢钾调节pH2，用乙酸乙酯萃取4次，酯层合并后用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液 减压浓缩至干，得到2-Boc-(3-咔啉-3-甲酰色氨酸。ESI-MS (m/e) 503[M+H]+
实施例7制备22种2-Boc-p-咔啉-3-甲酰色氨酰氨基酸节酯的通法
在100ml莉瓶中0.004mol 2-Boc-p-咔啉-3-甲酰色氨酸用40ml无水THF溶解,冰浴下加 入O細mol DCC和0.004mol HOBt反应约30分钟后，加入0扁4mo1氨基酸苄酯，用 NMM调节pH9， TLC监测原料消失后终止反应。反应化合物过滤，滤液减压浓縮至干。 得到的残余物用100ml乙酸乙酯溶解、置于250ml分液漏斗中、依次用饱和碳酸氢钠水溶 液洗(30mlx3)、饱和氯化钠水溶液洗(30mlx3) 、 5%硫酸氢钾水溶液洗(30mlx3)、 饱和氯化钠水溶液洗(30mlx3)、饱和碳酸氢钠水溶液洗(30mlx3)、饱和氯化钠水溶液 洗(30mlx3)。合并的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓縮至干，得到22 种2-Boc-P-咔啉-3-甲酰色氨酰氨基酸苄酯，为无色固体。
实施例8制备22种p-昨啉-3-甲酰色氨酰氨基酸苄酯0.003mol 2-800^咔啉-3-甲酰色氨酰氨基酸苄酯用尽量少的无水乙酸乙酯溶解在 100ml茄瓶中，冰浴下滴加10ml4N/氯化氢-乙酸乙酯溶液，TLC监测反应，待原料点消失 后终止反应，加入80ml石油醚，有大量固体析出，静置液体层，反复3次后用乙醚替换 石油醚重复操作，乙醚洗过3次的固体减压过滤，得到22种p-咔啉-3-甲酰色氨酰氨基酸苄酯。
实施例9p-昨啉-3-甲酰色氨酰苯丙氨酸节酯(Ia)的数据
1.976g (四步反应总收率64%)，为无色固体。ESI-MS (m/e) 639[M+H]+。 ^ NMR (DMSO): S/ppm= 10.78 (m， 2H), 8.79 (m, 1H), 8.49 (m, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.15(m ,20H), 5.68 (m, 2H), 5.14 (m,lH), 4.75 (m,lH),4.60 (q, J=7.5 Hz, 1H), 4.35(q, J=7.5 Hz,lH), 3.16 (m, 3H), 3.08 (m, 2H), 2.95 (m, 1H),2.06(m, 1H) ; 13CNMR (DMSO) S/ppm=171.42, 170.82, 169.75, 161.40, 158.30, 144.53, 138.75, 136.76, 133.45, 132.94， 130.89, 129.02, 128.69, 128.45, 128.00, 127.82, 126.94, 126.52， 126.20, 125.32， 123.93, 122.84， 121.66, 120.88, 119.80, 118.92, 113.66, 111.90, 110.19, 110.03, 75.23, 64.88, 55.62, 54.34， 41.25, 36.08, 34.23, 24.02， 20.05。
实施例10p-咔啉-3-甲酰色氨酰丙氨酸苄酯(lb)的数据
1.645g(四步反应总收率62。/。)，为无色固体。ESI-MS (m/e) 564[M+H]+。 ^NMR (DMSO) S/ppm= 10.85(m, 2H), 8.56 (m, IH)， 8.33 (m， 2H)， 7.10 (m, 15H), 5.52 (m, 2H), 5.01 (m, 1H), 4.52 (m, 2H), 4.35 (m, 2H), 3.12 (m, 1H), 3.02(m, 1H), 2.98 (m, 1H),2.88(m, 1H), 1.45 (m, 3H); 13CNMR(DMSO) 5/ppm=171.10, 170.13, 169.71, 169.43, 141.25, 136.86, 136.42, 131.26, 129.18, 127.72, 127.00, 126.82, 122.82, 122.20， 121,95, 120.98, 119.14, 111.25, 110.24, 107.22, 67.22， 65.35, 56.23, 49.42, 37.33, 34.10, 22.42, 21.31。
实施例lip-咔啉-3-甲酰色氨酰甘氨酸苄酯(Ic)的数据
1.625g(四步反应总收率66。/。)，为无色固体。ESI-MS(m/e)550[M+H]+ HNMR(DMSO) S/ppm= 10.87 (m, J二7.5Hz,lH), 8.56 (m, J=7.5 Hz, 1H), 8.36 (m, 3H), 7.24 (m, 15H), 5.63 (d, J=6.5 Hz, 2H), 5.00 (d， J=13.5 Hz ,IH), 4.87 (m, J=6.5Hz ,IH), 4.78 (m， J=l 1.0 Hz ,2H), 4.56(m, J=3.5 Hz ,2H), 4.35 (m, 1H), 3.02 (m, J=6.0 Hz , 2H), 2.79 (m, J=6.5 Hz, 1H); 13CNMR(DMSO):S/ppm=172.41， 171.85， 170.53， 169.21， 137.80， 137.51， 135.22, 133.22，128.76， 127.35， 126.27， 124.40， 123.40， 122.54， 121.88， 119.07， 112.24， 111.32， 70.25， 67.55, 66.35， 57.25， 56.57， 35.25， 33.54， 23.03。
实施例12p-昨啉-3-甲酰色氨酰硝基精氨酸节酯(Id)的数据
2.224g (四步反应总收率54%)，为无色固体。ESI-MS (m/e) 694[M+H]+。 ！H NMR (DMSO): S/ppm= 10.78 (m, 2H), 8.75 (m, 1H),8.41 (m, 4H), 8.21 (m, IH), 7.32 (t, J=9.0 Hz, 1H),7.10 (m, 14H), 5.63 (m, 2H)， 5.00(m ,2H) , 4.65 (m,lH), 4.60 (m, 1H),4.35 (m, IH), 4.24(m, IH), 3.15(m, 2H),3.07 (m, 2H),2.96(m, 1H),1.68(m, 4H); 13CNMR (DMSO) S/ppm=171.32， 170.85， 170.52, 166.35， 142.57, 137.59, 136.82， 131.25, 131.11, 129.10, 128.44, 128.13, 127.52, 126.64, 126.10, 125.76, 124.32, 124.24, 121.31, 121.02, 118.68， 114.25, 113.52, 112.63, 112.04,
109.25, 69.15， 64.98, 55.24, 52.42, 36.22, 35.68， 34.52, 31.30, 23.42, 22.36。
实施例13p-昨啉-3-甲酰色氨酰天冬酰胺苄酯(Ie)的数据
1.391g(四步反应总收率52%)，为无色固体。ESI+-MS (m/e) 607[M+H]+。 ^NMR (DMSO): S/ppm= 10.74 (m, 2H), 8.64 (m, IH), 8.42 (m, IH), 7.25 (m, 16H)， 5.54 (m, 2H), 4.89(m ,IH), 4.74 (m,2H), 4.69 (m, 1H),4.52 (m, IH), 4.40(q, J=7.5 Hz, IH), 3.35(m, IH), 3.08(m, 2H), 2. 65 (m， 2H)， 1.04 (t, J=7.0 Hz,lH), 0.86(m, IH); 13CNMR (DMSO): S/ppm=173.42, 172.42， 172.26, 170.12, 138.42, 138.28, 132.10， 131.84, 130.46, 129.32， 128.03, 127.10,126.36， 124.8, 123.62, 122.46， 121.27, 121.03, 112.57,111.56, 110.75, 110.57, 73.14, 66.75, 64.58, 50.21, 42.26, 34.75, 34.42, 24.57。
实施例14 p-咔啉-3-甲酰色氨酰异亮氨酸节酯(If)的数据
1.497g (四步反应总收率52%)，为无色固体。ESI-MS (m/e) 606[M+H]+。 & NMR (DMSO): S/ppm= 10.78 (m， 2H), 8.82 (m， IH), 8.31 (m, 2H), 7.24 (m, 15H), 5.78(m ,2H), 5.02 (m, IH), 4.85 (m,2H), 4.70 (m,lH)，4.42 (m, 2H), 3.21(m, IH), 3.14 (m, 2H), 3.02 (m, IH), 1.98 (m, 1H),1.48(m, 1H)，1.02(t, J=7.5 Hz,3H) ，0.87(m, 3H) ; 13CNMR (DMSO): S/ppm=175.82， 171.52, 170.72， 170.15, 137.45, 137.25, 135.78, 132.34， 128.58, 128.04, 127.74, 127.54, 127.41，
127.26, 122.68, 122.19， 120.38, 118.31， 111.82, 110.47, 70.72， 65.45, 55.48, 51.64， 44.42， 35.72,34.52, 23.48， 22.84， 22.14， 22.02。
实施例15p-咔啉-3-甲酰色氨酰蛋氨酸苄酯(Ig)的数据
1.482g(四步反应总收率47。/。)，为无色固体。ESI-MS (m/e) 624[M+H]+。 ^NMR (DMSO): 5/ppm= 10.78 (m, 2H), 8.75 (m, 1H),8.52 (m, 2H), 7.26 (m, 15H), 5.71(m ，2H), 5.14(m ,IH), 4.75 (m,2H), 4.67 (m, 1H),4.45 (m, 1H),4.35(m, 1H)， 3.14(m， 2H), 3.07(m, 2H),2.74 (m, lH),2.14(s, 3H), L15(m, 1H),1.09(t， J=7.0 Hz，lH); 13CNMR (DMSO): S/ppm=171.75, 171.32， 170.47, 169.47, 140.56， 135.70, 135.65, 131.75, 130.50, 128.64, 127.44， 127.12, 127.01， 124.20, 123.35, 121.10, 118.41， 111.87, 111.12, 110.31, 109.75,69.49, 65.84， 54.89, 50.85, 35.48, 33.76, 30.47, 29.67， 21.45, 17.24。
实施例16p-咔啉-3-甲酰色氨酰丝氨酸节酯(Ih)的数据
1.49g(四步反应总收率52。/。)，为无色固体。ESI-MS(m/e)580[M+H]+ HNMR(DMSO): S/ppm= 10.78 (m, J = 5.5Hz,lH)， 10.68 (m， J=10.0 Hz, 1H), 8.67 (m, J=7.2 Hz, IH), 8.28 (m, J尸8.5Hz,2H),7.19 (m, 15H), 5.60 (m， J=6.3 Hz, 1H) , 5.25 (m, J=8.5 Hz ，IH)， 4.75 (m, J=11.0 Hz ,2H), 4.70 (m, J=15.0 Hz ,IH), 4.38(m, J=15.0 Hz ,IH), 4.27 (m, J=6.4 Hz , IH), 3.74(m， J=6.8 Hz , 2H), 3.30 (m， J=7.5 Hz , 3H) ; 13CNMR (DMSO): S/ppm= 172.68, 170.57, 169.68， 168.87， 143.87， 138.05, 137.45， 133.46, 132.78, 128.78， 128.25, 128.02， 127.51, 124.65， 124.21, 124.12, 123.31, 122.64, 122.01, 113.40, 113.11, 112.85, 112.45, 70.47, 65.28, 64.79, 57.54, 56.48,35.34,33.85,23.57。
实施例17p-咔啉-3-甲酰色氨酰酪氨酸节酯(Ii)的数据
1.425g(四步反应总收率46%)，无色固体。ESI-MS(m/e) 654[M+H]+。NMR (DMSO) S/ppm= 10.84 (m, 2H), 9.38 (d, J=5.5 Hz, IH)， 8.64 (m, IH), 8.32 (m， 2H), 7.25 (m, 19H), 5.74(m ,3H), 5.01 (m, IH), 4.75 (m,2H), 4.48 (q, J=7.2 Hz, IH), 4.53(m， IH), 3.21(m, IH), 3.10 (m, 2H); 13CNMR (DMSO) S/ppm =171.45, 170.81, 170.45, 169.73, 155.72， 142.45, 137.75, 136.85,133.52,132.58,129.25， 129.11,128.52， 127.24， 127.14,123.68,122.71,121.58,120.24, 119.07,115.45,112.72,111.28， 109.45,68.75,65,97,55.57， 54.46,43.37， 35.75,33.74,22.78。实施例18p-咔啉-3-甲酰色氨酰苏氨酸苄酯(Ij)的数据
1.664g(四步反应总收率55。/。)目标化合物，为无色固体。ESI+-MS (m/e) 594[M+H]+。 & NMR (DMSO): S/ppm= 10.85 (m, 2H), 8.75 (m, 1H),8.34 (d, J=7.1 Hz，lH)， 8.25 (s, 1H), 7.22 (m, 15H), 5.87(s ,IH) , 5.71(m ,2H), 5.25 (m, IH), 4.72 (m，2H), 4.38 (m， 1H),4.31 (m, 1H): 4.01(m, IH), 3.32(m, IH), 3.18(m, 1H),3.05 (m， 1H),1.22(m, 3H), 1.14(t, J=7.2 Hz,lH); 13CNMR (DMSO): S/ppm=171.52， 170.82, 170.52, 169.47， 142.74, 139.75, 137.85, 131.75, 131.24, 130.27, 129.95, 128.57, 127.47, 127.10, 122.32， 121.42, 120.74, 119.62, 112.94, 112.54, 111.04, 109.81, 71.56, 71.27, 64.35, 55.35, 38.27, 33.58, 21.57, 19.51。
实施例19p-咔啉-3-甲酰色氨酰亮氨酸苄酯(Ik)的数据
1.598g(四步反应总收率55Q/。)，为无色固体。ESI-MS(m/e)606[M+H]+ HNMR (DMSO) 5/ppm= 10.95 (m, IH), 10.84 (m, IH), 8.68 (m, IH), 8.45 (s, IH), 8.24 (s, IH), 7.25 (m, 15H)， 5.68 (d, J=7.0 Hz, 2H) ， 5.01 (m, 2H), 4.77(m, 2H)， 4.58 (m, IH), 4.27 (m, IH), 3.13 (m, 3H), 1.78 (m, IH), 1.61 (m, 2H), l.Ol(d, J=6.5 Hz ,2H)， 0.90 (m， 2H), 0.84 (d， J=6.5 Hz , 2H); 13CNMR (DMSO): 5/ppm=171.72, 171.45, 170.75, 169.77, 143.55, 137.38, 135.98, 132.34， 131.35, 129.57, 128.68, 128.24， 127.46, 124.21, 123.03, 122.46, 121.17, 120.28, 115.24, 111.75， 110.65, 70.24, 66.74, 55.72, 52.71, 45,32, 35.53, 34.71, 24.18,22.75, 22.19, 21.07。
实施例20p-咔啉-3-甲酰色氨酰色氨酸节酯(II)的数据
2.532g(四步反应总收率61。/。)目标化合物，为无色固体。ESI-MS (m/e) 6"[M+H〗+。 'H NMR (DMSO): S/ppm= 10.97 (m, 3H), 8.65 (m, 1H)，8.52 (s, IH), 8.24 (s, IH), 7.32 (m, J=7.5 Hz, 4H),7.25 (m, 20H)， 5.74 (m, 2H), 5.10(m ,IH) , 4.88 (m,lH), 4.75 (m, 2H),4.48 (m, IH), 4.45(t, J=7.0 Hz,lH), 3.31(m, 1H),3.24 (m, 1H)， 3.04(m, 1H); 13CNMR (DMSO) 5/ppm=172.20, 171.31, 170.38, 141.55, 138.48, 136.91, 136.71, 131.74， 130.65, 129.27, 128.34, 127.95, 127.75, 127.58, 123.75, 123.54, 122.14, 121.02, 120.84, 119.47, 119.25, 112.45, 112.25, 111.75,111.25,110.85, 69.87， 64.52, 54.42, 53.86, 35.74, 34.82, 34.47, 32.50。实施例21 P-咔啉-3-甲酰色氨酰缬氨酸苄酯(Im)的数据
1.264g(四步反应总收率51%),为无色固体。ESI-MS (m/e) 592[M+H]+。 'HNMR (DMSO): S/ppm= 10.89 (m, J=3.2 Hz，2H), 8.85 (m, 1H), 8.35 (m, 2H)， 7.20 (m, 15H), 5.45(d, J=7.0 Hz,2H), 5.01 (m,lH)， 4.84 (m,2H), 4.52 (m， 1H), 4.32(d, J=13.5 Hz ,IH), 3.21 (m, 1H), 3.14 (m, 2H), 3.04(m, 1H), 2.17(m, 1H), 1.07(m, 6H) ; 13CNMR (DMSO): 5/ppm=171.74， 171.21, 169.95, 169.71, 143.42, 137.67, 132.85, 131.82, 131.41， 130.72, 129.74, 129.21, 128.74, 128.49,125.54,123.25, 122.76, 121.24,112.85, 112.40, 112.17， 110.42, 70.64, 64.24, 58.52, 56.40, 36.24, 34.25, 24.45， 19.12。
实施例22p-昨啉-3-甲酰色氨酰苄基组氨酸节酯(In)的数据
2.253g(四歩反应总收率62。/。)，为无色固体。ESI-MS (m/e) 720[M+H]+。 ^NMR (DMSO): 5/ppm= 11.10 (m, 1H), 10.83 (m, 1H), 8.84 (m, 1H), 8.63(m, 2H), 7.55 (m, 1H), 5.14(m ，21H), 5.65 (m, 2H)， 5.45 (m,2H), 5,24 (m, 2H),4.75 (m, 1H), 4.60 (m, 2H), 4.38(m, 1H): 3.61 (m, 2H), 3.31(m， 3H), 1.78(m, 1H); 13CNMR (DMSO): 5/ppm=172.02, 171.25, 170.87, 169.24, 145.42, 138.52, 137.45, 135.85, 131.82, 131.45, 130.75, 129.87， 129.57, 128.52, 128.33, 127.45, 126.25， 125.75, 123.84, 122.48, 122.14, 119.84, 119.14, 113.24, 112.41, 110.74, 70.80, 64.88， 59.96, 57.42, 54.52, 37.45, 36.27, 33.75, 23.17。
实施例23p-昨啉-3-甲酰色氨酰脯氨酸苄酯(Io)的数据
0.876g(四步反应总收率28。/。)目标化合物，为无色固体。ESI+-MS (m/e) 590[M+H]+。 !H NMR (DMSO): S/ppm= 10.85 (m, 2H), 10.24 (s, 1H), 8.56 (m, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.34 (m, 4H), 7.25 (m, 3H)， 7.14 (m, 4H)， 6.12 (m ，3H), 5.64(m ，2H), 5.12 (m, 1H), 4.98 (m,2H), 4.82 (m, 1H),4.46 (m, 2H), 3.27(m, 2H), 3.14(m, 2H), 3.01 (m, 2H), 2.52(m, 2H), 1.97(m, 1H); 13CNMR (DMSO): S/ppm=171.71, 170.86, 170.48, 138.62, 138.38, 132.76， 129.44, 129.01, 128.75, 127.82, 127.36, 127.05, 124.46, 123.87, 122.81, 120.75, 120.47, 119.28, 112.48, 111.57, 108.56, 70.27， 65.75， 59.57, 56.23, 47.38, 37.14, 35.57, 33.11, 26.55, 23.28。实施例24p-咔啉-3-甲酰色氨酰谷氨酰胺苄酯(Ip)的数据
1.817g(四步反应总收率57y。)，为无色固体。ESI-MS (m/e) 621[M+H]+。 ^NMR (DMSO): S/ppm= 10.96 (d, J=15.0 Hz,lH), 10.45 (s， 1H), 8.74 (m, 1H), 8.48 (m, 2H), 7.25 (m， 15H), 5.70 (m, 2H)， 5.12(m ,IH), 4.75 (m,2H), 4.68 (s, 1H),4.46 (m, 1H), 4.34(s, 1H)， 3.27(m, 1H), 3.14 (m, 1H)， 3. 02 (m, 1H), 2.41 (m, 1H), 2.37(m, 1H),2.25(m, 2H); 13CNMR (DMSO): S/ppm=173.15, 172.36, 171.58, 171.35,143.85,138.45, 135.75,132.28， 129.64,128.75, 127.57, 127.27, 127.12, 125.27, 124.85, 123.27, 122.76, 122.54, 121.75, 119.15, 113.74， 112.41, 108.57, 71.42, 65.55, 55.71, 54.44, 37.82, 34.57, 33.38, 22.84。
实施例25p-咔啉-3-甲酰色氨酰N"-苄氧羰基赖氨酸苄酯(Iq)的数据
2.340g(四步反应总收率59。/。)目标化合物，为无色固体。ESI+-MS (m/e) 756[M+H]+。 'H NMR (DMSO): S/ppm= 11.02 (m, 1H), 10.85 (d, J=6.5 Hz,lH), 8.77 (m, 1H), 8.36 (m, 2H), 7.49 (m, 1H)， 7.41(m ,13H), 7.10(m ,6H), 5.68 (d, J=7.0Hz, 2H), 5.20 (m，lH), 5.10 (m, 2H),4.87 (m, 2H), 4.69(m, IH), 4.51(m, IH), 4.42(m， IH)， 3,28 (m, 1H)，3.21(m, 2H), 3.14(m, 3H),1.97(s, 1H) ,L34(m, 4H); 13CNMR (DMSO): S/ppm=171.62， 171.45, 170.66, 169.75, 159.72, 142.93, 142.74， 142.47， 137.54, 136.27, 132.42, 131.67, 130.57, 130.21, 129.42, 129.10, 128.11, 128.02, 127.55, 127.34, 127.22, 124.11, 123.25, 122.71, 120.25, 119.45, 113.21， 111.24, 110.71, 69.88， 68.24, 65.42, 56.44, 54.21, 42.58, 36.42, 36.27, 33.81, 30.71, 23.48, 22.14。
实施例26p-咔啉-3-甲酰色氨酰对-甲氧基苄基半胱氨酸节酯(Ir)的数据
2.490g (四步反应总收率67%),为无色固体。ESI-MS(m/e)700M+H]+ H NMR (DMSO): S/ppm= 10.87 (m, 2H), 8.89 (m, 1H),8.75 (s, 2H), 7.14 (m, 19H), 5.74 (m, 2H), 5.12(m ,2H), 4.84 (m,2H)， 4.59 (m, 1H),4.51 (q, J=7.0 Hz, IH), 3.71(m， 2H), 3.20(m, 1H),3.14 (m, lH),3.01(m, 1H),2.87(m, 2H), 2.22(m, 3H); 13CNMR (DMSO): S/ppm=171.78, 170.84, 169.54, 145.21, 138.57, 136.57， 131.24, 130.84, 129.51, 128.75, 128.32, 127.54, 127.22, 122.66， 121.14, 120.25,115.14, 112.22,111.20， 110.64, 71.54, 66.41, 56.51， 52.31， 45.52, 36.54， 35.32,24.36, 23.20, 22.51,22.11。实施例27p-咔啉-3-甲酰色氨酰-p-丙氨酸节酯(Is)的数据
1.58g(四步反应总收率59。/。)，为无色固体。ESI-MS(m/e) 564[M+H]+ HNMR(DMSO) S/ppm= 10.86(m, 2H), 8.57 (m, 1H), 8.28 (m, 2H), 7.10 (m, 15H), 5.56 (m, 2H), 5.04(m, 1H)， 4.47 (m， 2H) ， 4.41 (m， 1H), 3.59(m, 2H) ，3.14(m, 1H), 3.01(m, 1H), 2.88 (m， 1H),2.85(m, 1H)，2.82(m, 2H) ;13CNMR (DMSO) S/ppm=171.02， 170.15,169.81, 169.67， 141.45， 136.66, 136.32, 131.16， 129.82, 127.22, 127.10, 126.62, 122.47， 122.44, 121.86， 120.99, 119.22, 111.21, 110.34， 107.27, 67.17, 65.47, 56.49, 49.88, 37.33， 35.50,34.20, 22.37。
实施例28p-咔啉-3-甲酰色氨酰羟脯氨酸苄酯(It)的数据
0.924g(四步反应总收率32。/。)目标化合物，为无色固体。ESI+-MS (m/e) 606[M+H]+。 'H NMR (DMSO): 5/ppm= 10.82(m， 2H), 10.26 (s, 1H)， 8.54 (m, 1H)， 7.25 (m, 15H), 5.54(m ，2H), 5.11 (m, 1H), 4.95 (m,2H), 4.80 (m, 1H),4.51(m, IH), 3.31(m, 2H), 3.25(m, 2H), 3.00 (m, 1H)， 2.54(m, lH)，1.96(m,2H) ,1.64(m，lH); 13CNMR (DMSO): S/ppm=172.21, 171.86， 170.98, 138.62, 138.42， 132.75, 129.25, 129.11, 128.74, 127.52, 127.42, 127.21, 124.22, 123.89, 122.44, 120.89, 120.43, 119.75, 112.25, 111.51, 108.34,71.21,69.82, 65.21, 59.47,56.81,47.31, 37.56,35.27,33.21,26.57。
实施例29p-咔啉-3-甲酰色氨酰天冬氨酸二苄酯(Iu)的数据
1.52g (四步反应总收率60%)，为无色固体。ESI-MS(m/e) 564[M+H]+ H NMR (DMSO) S/ppm= 10.85(m, 2H), 8.56 (m, 1H), 8.33 (m, 2H)， 7.10 (m, 20H), 5.52 (m, 4H), 5.01 (m, IH), 4.52 (m, 2H) , 4.35 (m， 2H), 3.12 (m, IH), 3.02(m, IH)， 2.98 (m, 1H),2.88(m, lH),2.82(m,2H); 13CNMR(DMSO) S/ppm=172.56,17U0, 170.13, 169.71, 169.43, 141,25, 140.84， 136.86, 136.42, 131.26, 129.25,129.18, 127.72 , 127.65, 127.54, 127.20, 127.00, 126.82, 122.82, 122.20, 121.95, 120.98, 119.14, 111.25, 110.24, 107.22, 68.10,67.22, 65.35， 56.23, 49.42, 38.32,37.33, 34.10， 22.42。
实施例30卩-咔啉-3-甲酰色氨酰谷氨酸二苄酯(Iv)的数据1.52g (四步反应总收率60%)，为无色固体。ESI-MS(m/e) 564[M+H]+ H NMR (DMSO) S/ppm= 10.88(m， 2H)， 8.57 (m, 1H), 8.41 (m, 2H), 7.08 (m, 20H), 5.48 (m， 4H), 4.97 (m， 1H), 4.47 (m, 2H) , 4.41 (m, 2H), 3.22 (m, 2H), 3.1 l(m, 2H), 2.96 (m， 1H),2.85(m, lH),2.77(m,2H); 13CNMR(DMSO)S/ppm=172.47，171.20， 170.33， 169.85， 169.47, 141.26， 140.74, 136.85 , 136.42, 131.26, 129.27,129.08, 127.82 ,127.76, 127.47, 127.31， 127.10, 126.75, 122.72, 122.30， 121.85， 120.99,119.22,111.34 ， 110.11,107.24, 68.04,67.13, 65.34, 56.10, 49.58, 38.87,37.85, 34.25,25.86, 22.52。
实验例1 本发明化合物的抗肿瘤活性实验
1) 受试化合物本发明实施例9-30所制备的化合物(Ia-v);
阳性对照品阿糖胞苷
2) 实验动物ICR小鼠，雄性，体重20士2g(卩士s);每10只小鼠一组，空白及阳性对照各一 组。
3) 剂量设置
受试化合物及阳性对照设为8.9nmol/kg，均采用腹腔单次给药。 3)药物配制
受试化合物在水中难溶，实验时加入少量的吐温80润湿助溶，逐渐加入0.5 %CMC-Na 溶液至所需浓度。阳性对照品阿糖胞苷用生理盐水溶解。
4) 给药方案
受试化合物每天腹腔给药一次，0.2ml/鼠，连续给药7天，共给药7次。 阴性对照每天一次，0.2ml0.5XCMC-Na/鼠，连续给药7天，共给药7次。 阳性对照腹腔给药。每天一次腹腔给药一次，0.2ml/鼠，连续给药7天，共给药7次。
5) 动物模型
采用体内抗肿瘤腋皮下接种模型在无菌条件下抽取接种7d，后取生长旺盛S咖腹水 瘤瘤液，用生理盐水稀释成(1:2)的液体充分混合，将肿瘤细胞悬、液用新鲜配制的0.2%台盼 蓝染色,混匀后按白细胞计数方法计数，染蓝色者为死细胞，不染色者为活细胞，按如下公 式计算细胞浓度和细胞存活率。
细胞浓度=4大方格内活细胞数/4x 10、稀释倍数=细胞数/ml
细胞存活率=活细胞数/(活细胞数+死细胞数>100%
将存活率大于90X的瘤液用匀浆法制备成lxl(^个/ml的细胞悬液，于相应宿主腋皮下接种0.21111/鼠，制成实体瘤动物模型。
6) 实体瘤抑瘤率和体重增长的测定
各组连续给药7天后，于第8天脱颈椎处死小鼠,称取体重(处死体重)，然后用镊子固定 小鼠右腋肿瘤生长部位，剪开皮肤，暴露肿瘤，钝性剥离，称重，按如下公式计算抑瘤率。 抑瘤率％=[(阴性对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)+阴性^"照组平均瘤重]xl00%
7) 统计方法
本实验数据统计均采用f检验和方差分析，以(r士sD)表示。
8) 实验结果
受试化合物对荷S咖肉瘤的体内抗肿瘤活性实验结果如表1所示。在8.9pmol/kg剂量下 受试化合物经腹腔连续7天给药以后，对S180小鼠肿瘤有显著的抑制作用。 表l 受试化合物的抗肿瘤活性实验结果 给药组别 瘤重(mg) 抑瘤率％
白对照组837.2±122.9一
阳性组604.5±114.3**25.8±4.9"
608.6 ±50.9"26.6 ±7.广
Ib577.8±301.46'33.51 ±29.6*
Ic544.30土221.5"36.6 ±18.7"
Id312.6±101.0**63,2±8.9"
Ie572.5±316.3*34.1±31.8*
If930.5±149.3-11,4±13.4
Ig870.3±109.3-4,6±10.5
Ih572.8±117.7"31.9±6.广
Ii932肚121.0-11.7±7.4
Ij669.9±99.1'
Ik641.5±206.9*24.2±19.0*
11782.1±124.16.5±6.1
Im733.1±231.111.7±26,7
In167.4±78.6"78.2±8.广
Io527.0±163.7**38.0土12.5"
Ip778.8±133.66.9±9.9iq662.0±163.621.6±12.8
Ir519.3±153.2 **38.8±11.2*'
Is691.0±153.9*17.8±13.2*
It661.0±186.6*22.0±14.7*
Iu594.7±86.5"28.7±6.3**
Iv135.6±93.7**84.6±8.3"
注:与空白对照组比较，*尸<0.05; **尸<0.01 。 实验结果表明，本发明化合物具有确切的抗肿瘤活性，可作为抗肿瘤剂应用。
权利要求
1、具有抗肿瘤活性的通式I化合物其中，AA选自苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸、NG-硝基精氨酸、天冬酰胺、异亮氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苏氨酸、亮氨酸、色氨酸、缬氨酸、苄基组氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、Nω-苄氧羰基赖氨酸、对-甲氧基苄基半胱氨酸、β-丙氨酸、羟脯氨酸、β-苄基天冬氨酸或γ-苄基谷氨酸残基。
2、 一种制备权利要求1所述通式I化合物的方法，该方法包括(1) 将L-色氨酸转变为P-咔啉-3-羧酸；(2) 将叔丁氧羰基引到P-咔啉-3-羧酸的2位，得到2-Boc-(3-昨啉-3-羧酸；(3) 将色氨酸苄酯引到2-Boc-(3-咔啉-3-羧酸的3位羧基上，得到2-Boc-(3-咔啉-3-甲酰 色氨酸苄酯-，(4) 将2-Boc-p-咔啉-3-甲酰色氨酸苄酯转化为2-Boc-p-咔啉-3-甲酰色氨酸；(5) 将2-Boc-(3-咔啉-3-甲酰色氨酸与氨基酸苄酯偶联，得到2-Boc-P-咔啉-3-甲酰色氨酰氨基酸苄酯；(6) 将2-Boc-P-咔啉-3-甲酰色氨酰氨基酸苄酯脱去保护基Boc，即得。
3、 按照权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(5)中所述的氨基酸苄酯选自苯 丙氨酸苄酯、丙氨酸苄酯、甘氨酸苄酯、lf-硝基精氨酸苄酯、天冬酰胺苄酯、异亮氨酸苄 酯、蛋氨酸苄酯、丝氨酸苄酯、酪氨酸苄酯、苏氨酸苄酯、亮氨酸苄酯、色氨酸苄酯、缬 氨酸苄酯、苄基组氨酸苄酯、脯氨酸苄酯、谷氨酰胺苄酯、N"-苄氧羰基赖氨酸苄酯、对-甲氧基节基半胱氨酸苄酯、P-丙氨酸苄酯、羟脯氨酸苄酯、天冬氨酸二苄酯或谷氨酸二 苄酯。
4、 、 一种治疗肿瘤的药物组合物，由治疗有效量的权利要求l所述的化合物和药学上 可接受的载体或辅料组成。
5、 权利要求1所述的化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
全文摘要
本发明公开了具有抗肿瘤活性的通式I化合物及其制备方法，本发明还公开了该化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。式I中AA选自苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸、N<sup>G</sup>-硝基精氨酸、天冬酰胺、异亮氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苏氨酸、亮氨酸、色氨酸、缬氨酸、苄基组氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、N<sup>ω</sup>-苄氧羰基赖氨酸、对-甲氧基苄基半胱氨酸、β-丙氨酸、羟脯氨酸、β-苄基天冬氨酸或γ-苄基谷氨酸残基。本发明采用S<sub>180</sub>小鼠模型评价了通式1化合物的抗肿瘤活性，实验结果表明通式1化合物具有优秀的抗肿瘤作用，临床可作为抗肿瘤剂应用。
文档编号A61K38/06GK101597290SQ20081011456
公开日2009年12月9日 申请日期2008年6月4日 优先权日2008年6月4日
发明者彭师奇, 梅升辉, 明 赵 申请人:首都医科大学