专利名称：：犬干扰素新剂型的制备方法
技术领域：
：本发明属于生物药物的制备
技术领域：
，特别涉及一种犬干扰素新剂型的制备方法。
背景技术：
：目前，犬干扰素都是以注射的途径给药有较好的治疗效果，多者每天需要注射1—2次，给养犬者的使用带来很多不便，因此将其制成口服制剂便成为人们追求的目标。如果在此方面有所突破，将会产生巨大的社会和经济效益。但直接将这些生物药物口服，由于胃肠道内酶的降解消化及肠道的吸收屏障，使其利用度很低，治疗效果较差。因此，提供一种犬干扰素新剂型的制备方法，有效预防和防治各种犬病毒性疾病，是该
技术领域：
科研人员急需开发的新课题之一。
发明内容本发明的目的是为克服已有技术的不足之处，提供一种制备简单、应用方便、效果显著的犬干扰素新剂型的制备方法。一种犬干扰素新剂型的制备方法，其特征在于包括如下步骤(1)将一定量的犬干扰素溶解在水相缓冲溶液中，该溶液(A)的pH值为2.5—7.0，犬干扰素的含量为0.5_5.0毫克/毫升；(2)将上述含犬干扰素的酸性溶液(A)加入到亲水亲油平衡值(HLB)为9《HLB《15的液态的非离子型表面活性剂溶液中，或双亲性油酯中，或他们的混合液中；所述溶液(A)与这些表面活性剂，或双亲性油酯，或他们的混合液的比例为l:4至1:40;该两种溶液在温度5—3(TC下进行搅拌，使其均匀的混合在一起，成为一种透明的溶液(B);(3)将溶液(B)加入至亲水亲油平衡值为0《HLB《9的液态的油相中，或亲油性乳化剂中，或油相与亲油性乳化剂的混合液中，溶液(B)与其的比例为l:l至l:9，使这两种溶液在温度5—3(TC下搅拌混合，最终成为一种透明的油相制剂(C)，在4—l(TC下保存；(4)为了保持溶液的稳定，加入一定量的稳定剂；稳定剂直接加入到所述制备步骤(1)溶液中，或者所述的步骤(3)中的溶液中。所述步骤(2)中的表面活性剂，或双亲性油酯，或他们的混合液采用以下一种或两种以上混合十甘油单辛酸酯、聚乙二醇-8-甘油辛酸/癸酸酯、吐温80。所述的搅拌速度为100—1800转/分，搅拌时间为O.4—4小时。所述步骤(3)中的亲油性溶液或乳化剂为甘油油酸酯、聚甘油-3-油酸酯、聚乙二醇-6-甘油单油酸酯。所述步骤(3)中的搅拌温度为5—30。C，搅拌速度为100_1800转/分，搅拌时间为0.4—4.O小时。所述稳定剂选自海藻糖、牛血清白蛋白、猪血清白蛋白和聚乙二醇的一种或一种以上。所述稳定剂的加入量为最终溶液的O.1。％_10%。所述犬干扰素为重组犬基因工程干扰素IFN-a、IFN-e和犬天然白细胞干扰素。本发明方法的有益效果是具有制备工艺简单，容易实现，应用方便，所需成本低等特点，该方法采用毒性小，口服安全的分散剂及油相等材料，使犬干扰素均匀的分散溶解到油相中，最终成为一种透明的犬干扰素油相制剂。采用该方法制成的油相制剂体外实验表明，它在不同的pH(2-11)溶液中，都能发生乳化作用，并且犬干扰素基本上仍然包裹在油中而不进入水相。因此在口服时，能比较好的抵抗胃肠道酶的降解作用，且容易吸收，更好的发挥抗病毒药效。具体实施例方式以下结合实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详述如下实施例l一种犬干扰素新剂型的制备方法，其特征在于具体实施步骤如下(1)在8mlpH为4.5的溶液中加入32.0mg犬基因工程干扰素IFN-a，使其溶解(A溶液)；(2)取聚乙二醇-8-甘油辛酸/癸酸酯40.0ml，将A溶液加入搅拌混合成48ml。搅拌速度500转/分；时间3.0小时；温度20°C(B溶液)；(3)取聚甘油-3-油酸酯152ml，将B溶液加入搅拌混合成200ml，搅拌速度500转/分，时间3.0小时，温度20°C(C溶液)；(4)在C溶液加入500mg海藻糖和500mg猪血清白蛋白；并混合均匀，存放于冰箱中冷藏。实施例2一种犬干扰素新剂型的制备方法，其特征在于具体实施步骤如下(1)在10mlpH=3.5的溶液中加入犬天然白细胞干扰素16.0mg，使其溶解(溶液A);(2)取吐温8014ml，十甘油单辛酸酯26ml，混合均匀，然后将溶液A加入混合，搅拌均匀；搅拌速度1000转/分；时间2.5小时；温度18°C(溶液B);(3)取甘油油酸酯150ml，将上述B溶液加入混合成200ml;搅拌速度1000转/分；时间2.5小时；温度18°C(C溶液)；(4)在C溶液中加入IOOmg海藻糖和200mg牛血清蛋白，混合均匀，存放于冰箱中冷藏。实施例3一种犬干扰素新剂型的制备方法，其特征在于具体实施步骤如下(1)在10mlpH二4的溶液中加入50.Omg犬基因工程干扰素IFN-P，200mg聚乙二醇5000，使其溶解(A溶液)；(2)取聚乙二醇-8-甘油辛酸/癸酸酯80ml;将A溶液加入，混合成90ml;搅拌速度1500转/分；时间2小时；温度25°c(b溶液)；(3)取聚甘油3油酸酯55ml和聚乙二醇-6-甘油单油酸脂55ml，混合成110ml溶液，然后将B溶液与该混合液在下列条件下混合，搅拌速度1500转/分；时间2小时；温度25°C(C溶液)，存放于冰箱中冷藏，在4一10。C下保存。应用实例l犬干扰素新剂型对犬瘟热的临床疗效试验一、材料与方法(一)试验材料犬干扰素新剂型是采用实施例2方法制备；用法用量为口服，lml/条犬。毒株犬瘟热(CDV)强毒分离株。实验动物3月龄外观健康的土种犬40条。(二)试验方法1.犬瘟热(CDV)强毒株的分离经临床诊断、组织包涵体检査后，筛选出可疑病犬，然后取脑、肝、肺组织抽提RNA进行RT-PCR检测，将确认为犬瘟热阳性的病犬组织匀浆后，经青链霉素处理，作为攻毒用毒株。2.对实验动物进行CDV诊断每条犬采血分离血清，用北京世纪元亨动物防疫技术有限公司的CDV抗体ELISA试剂盒检测是否为犬瘟热抗体，若为阳性，则淘汰掉，再补充实验动物，重新检测，直至得到60条犬瘟热抗体阴性犬。3.分组试验犬40条随机分为A、B、C、D四组，每组10条，A组攻毒后用犬干扰素新剂型治疗，B组攻毒后用病毒唑治疗，C组为攻毒对照组，只感染病毒但不治疗，D组为健康对照组，不感染病毒。4.攻毒A、B、C三组结合点眼、滴鼻和腹腔注射三种方式接种犬瘟热病毒，D组以生理盐水作对照，也按照点眼、滴鼻和腹腔注射三种方式进行。其中点眼每次0.5毫升，滴鼻每次l毫升，腹腔注射每次3毫升。5.治疗A组10条犬于接种犬瘟热病毒后24小时、48小时按lml/条犬口服犬干扰素新剂型进行治疗；B组10条犬于接种犬瘟热病毒后24小时、48小时分别按2毫克/公斤体重注射病毒唑进行治疗；C组、D组不进行任何治疗。6.记录观察并记录临床症状，统计死亡数。(三)试验结果及分析犬干扰素新剂型对犬瘟热的临床治疗效果，详见表l。由表1可见，犬口服犬干扰素新剂型对犬瘟热的治疗效果要远远优于病毒唑。A组于攻毒后24小时和48小时连续两次口服犬干扰素新剂型治疗，结果仅6条出现食欲减退和精神不振的症状，但状态好于B组攻毒犬，且未出现咳嗽和呕吐症状，死亡数为1条，死亡率为10.0%。B组于攻毒后24小时和48小时连续两次肌注病毒唑治疗，结果有8条出现食欲减退和精神不振的症状，出现咳嗽和呕吐症状，死亡5条，死亡率为50.0°/。。C组于攻毒后第3天起出现厌食，眼角出现脓性或浆液性分泌物，伴有咳嗽、呕吐等症状，于攻毒后1015天有9条病犬死亡，死亡率为90.0%。D组未出现任何临床症状，死亡条数为O。表l犬口服犬干扰素新剂型对犬瘟热的疗效试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实验结果如下本次试验结果表明，本发明犬干扰素新剂型治疗犬瘟热有效率为88.6%，经统计分析，A组与B组、C组、D组差异非常显著(P<0.01)，说明本发明犬口服犬干扰素新剂型对犬瘟热病具有显著的治疗作用。应用实例2犬干扰素新剂型对犬传染性肝炎的治疗作用临床治疗试验选典型犬传染性肝炎发病犬，将30条犬随机分成3组，A组以拌料口服方式给予犬干扰素新剂型l.Oml/条，犬干扰素新剂型是采用实施例2方法制备；B组注射犬高免血清。C组口服生理盐水。实验结果表2犬口服"犬干扰素新剂型"治疗犬传染性肝炎病试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>由表2可见，"犬干扰素新剂型"试验组有效率为70.0%，口服生理盐水组的有效率为10.0%。可见，以拌料口服方式给予犬干扰素新剂型对犬传染性肝炎有很好的治疗效果。实验证明，说明拌料口服给予犬干扰素新剂型可控制犬传染性肝炎病情。犬干扰素新剂型主要对治疗犬病毒性疾病的预防和治疗具有显著的优势。研究证实犬干扰素新剂型对人工感染犬瘟热病毒的犬模型和犬传染性肝炎发病犬亦有显著治疗作用。可见，以口服方式给予犬干扰素新剂型是治疗犬病毒性疾病的有效药物。上述参照实施例对该犬干扰素新剂型的制备方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。权利要求1.一种犬干扰素新剂型的制备方法，其特征在于包括如下步骤(1)将一定量的犬干扰素溶解在水相缓冲溶液中，该溶液(A)的pH值为2.5-7.0，犬干扰素的含量为0.5-5.0毫克/毫升；(2)将上述含犬干扰素的酸性溶液(A)加入到亲水亲油平衡值(HLB)为9≤HLB≤15的液态的非离子型表面活性剂溶液中，或双亲性油酯中，或他们的混合液中；所述溶液(A)与这些表面活性剂，或双亲性油酯，或他们的混合液的比例为1∶4至1∶40；该两种溶液在温度5-30℃下进行搅拌，使其均匀的混合在一起，成为一种透明的溶液(B)；(3)将溶液(B)加入至亲水亲油平衡值为0≤HLB≤9的液态的油相中，或亲油性乳化剂中，或油相与亲油性乳化剂的混合液中，溶液(B)与其的比例为1∶1至1∶9，使这两种溶液在温度5-30℃下搅拌混合，最终成为一种透明的油相制剂(C)，在4-10℃下保存；(4)为了保持溶液的稳定，加入一定量的稳定剂；稳定剂直接加入到所述制备步骤(1)溶液中，或者所述的步骤(3)中的溶液中。2、根据权利要求l所述的犬干扰素新剂型的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中的表面活性剂，或双亲性油酯，或他们的混合液采用以下一种或两种以上混合聚乙二醇-8-甘油辛酸/癸酸酯、吐温80、十甘油单辛酸酯。3、根据权利要求l所述的犬干扰素新剂型的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中的亲油性溶液或乳化剂为甘油油酸酯、聚甘油-3-油酸酯、聚乙二醇-6-甘油单油酸酯。4、根据权利要求l所述的犬干扰素新剂型的制备方法，其特征在于所述稳定剂选自海藻糖、牛血清白蛋白、猪血清白蛋白和聚乙二醇的一种或一种以上。5、根据权利要求l所述的犬干扰素新剂型的制备方法，其特征在于所述稳定剂的加入量为最终溶液的O.1%—10。％。6、根据权利要求l所述的犬干扰素新剂型的制备方法，其特征在于所述犬干扰素为重组犬基因工程干扰素IFN-ct、IFN-P和犬天然白细胞干扰素。全文摘要本发明涉及一种犬干扰素新剂型的制备方法，步骤如下(1)将犬干扰素溶解在水相缓冲溶液中，该溶液(A)的pH值为2.5-7.0，犬干扰素的含量为0.5-5.0毫克/毫升；(2)将上述含犬干扰素的酸性溶液(A)加入到亲水亲油平衡值为9≤HLB≤15的液态的非离子型表面活性剂溶液中，或双亲性油酯中，或他们的混合液中混合成为溶液(B)；(3)将溶液(B)加入至亲水亲油平衡值为0≤HLB≤9的液态的油相中，或亲油性乳化剂中，或油相与亲油性乳化剂的混合液中，溶液(B)与其的比例为1∶1至1∶9，使这两种溶液在温度5-30℃下搅拌混合，成为油相制剂(C)；(4)加入稳定剂。其制备简单，应用简便，易吸收，更好的发挥治疗犬病毒性疾病的效果。文档编号A61P31/00GK101297961SQ20081005336公开日2008年11月5日申请日期2008年5月30日优先权日2008年5月30日发明者古长庆申请人:天津生机集团股份有限公司