3-酰胺基-4-吲哚马来酰亚胺化合物及其制备方法和应用的利记博彩app

专利名称：3-酰胺基-4-吲哚马来酰亚胺化合物及其制备方法和应用的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及医药化学领域，具体涉及一种3-酰胺基-4-吲哚马来酰亚胺化合物，还包括 该化合物的制备方法和应用。
背景技术：
近年来，随着人们生活水平的提高，工业现代化进程加速，化学品在食品、化妆品和 材料等领域的广泛使用，以及环境污染的加剧，胃癌、肺癌、白血病和乳腺癌等恶性肿瘤 的发病率呈逐年上升趋势。目前，临床中使用的抗肿瘤药物如环磷酰胺(Cyclophosphamide)、 顺铀(Cisplatin)、氟尿嘧啶(Fluorouracil)、去氧氟尿苷(Doxifluridine)、叶酸类抗肿瘤药如甲 氨蝶呤(methotrexate)等都存在毒性大和缺乏广谱抗肿瘤作用等缺点。
近年来，随着肿瘤生物学及相关学科的迅速发展，人们认识到细胞癌变的本质是细胞 信号转导通路的失调导致的细胞无限增殖，随之而来的是抗肿瘤药物的研发和焦点正从传 统细胞毒药转移带针对肿瘤细胞内异常信号系统靶点的特异性新一代抗肿瘤药物。如作用 于表皮生长因子酪氨酸激酶(tyrosine kinase)的药物伊马替尼(Imatinib)、吉非替尼 (Gefitinib)、厄洛替尼(Erlotinib)和苏拉替尼(Sorafenib)等。作用于丝氨酸/苏氨酸的蛋白激酶 C(protdnkinaseC,PKC)是另一类蛋白激酶家族，是一类Ca2+、磷脂依赖性的蛋白激酶，在 跨膜信号传递过程中起着很重要的作用。现已发现PKC有12个亚型 (Newton,A.C丄Biol.Chem. 1995,270,28495.)，正常情况下，PKC处于失活状态，当受到外界 刺激时，PKC被激活。 一系列证据表明，癌症以及糖尿病诱发的微循环病变等疾病的发生 都与PKC的异常表达有关。
以微生物Streptomyces sp.代谢物中星型孢菌素(Staurosporine)为先导化合物进行结构 修饰得到的吲哚马来酰亚胺类化合物是一类新型的蛋白激酶C抑制剂。生物活性研究表明， 该类化合物能抑制PKC活性，具有抗肿瘤等多种生物活性。如化合物Enzastaurin目前正 处于治疗B细胞白血病和非霍奇金淋巴瘤等的III期临床研究。(例如可参阅下列文献 Jirousek,M.R.;Giling，J.R.;Gonzalea，C.M.;etal"J.Med.Chem.,1996,39，2664;Robertson,MJ.;Kahl ,B.S.;Vose,J.M.;et.al.,丄Clin.Oncol.2007,25，1741;Tanaka,M.;Sagawa,S.;Hoshi,J.;et.al"Bioorg.Me d.Chem丄ett.2006,16,5781)
1991年Schultz等报道了 4-(3-吲哚)马来酰亚胺类化合物具有抗变态反应和免疫治疗作 用(Schultz,M.;Tsaklakidis,R.;Haag，R.;et.al.DE4005970,1991)，在该专利中报道了 3-乙酰氨基 —4-喷哚-N-甲基马来酰亚胺化合物。近年来，文献还报道了一些3-氨基取代的吲哚马来酰
亚胺类化合物具有抑制H202诱发的坏死细胞死亡和抑制GSK-3的活性 (Tanaka,M.;Sagawa，S.;Hoshi，J.;etal.Bioorg.Me(lChem丄ett.2004，14,5171; Tanaka,M.; Sagawa. S.;Hoshi，J.;et.al.Bioorg.Med.Chem丄ett.2006，16，5781)。
但文献报道的化合物中马来酰亚胺环N-原子上多数为H原子，N-上无取代基的3-酰 胺基吲哚马来酰亚胺化合物尚未见文献报道，因此，我们合成了一类3-酰胺基-4』引哚马来 酰亚胺新化合物，并且通过实验发现该化合物具有较好的抗肿瘤活性。

发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种3-酰胺基-4-f"引哚马来酰亚胺化合物及其制备 方法和应用，该化合物是一类新型蛋白激酶C抑制剂，具有较好的抗肿瘤活性，可用于制 备预防或治疗肿瘤、糖尿病及其并发症等疾病的药物。
本发明的一类3-酰胺基-4-吲哚马来酰亚胺化合物，结构式如(I)示
(I)
其中，R为甲基、乙基和丙基、取代的苯基。 所述苯环上的取代基为氢、氯、溴、羟基、甲氧基和硝基等。 优选R基团为甲基。
优选目标化合物为N-[4-(lH-吲哚-3-)-2，5-二氧代-2,5-二氢-lH-吡咯-3]-乙酰胺，结构式<formula>formula see original document page 5</formula>
本发明的一种3-酰胺基-4-吲哚马来酰亚胺化合物的制备方法，包括
(1) 将133 mg 0.5 mmol的3-氨基-4-(lH-3-卩引哚基)-lH-吡咯-2，5-二酮与101 mg 1 mmol的三乙胺溶于5 ml四氢呋喃(THF)溶液中，室温下将1 mmol酰氯溶于5 ml THF中， 滴入反应液，N2保护下搅拌，反应结束后加入15mlH20，搅拌30min;
(2) 对有机层采用15 ml乙酸乙酯萃取3次，20ml饱和NaHCO3洗涤1次，经水洗、 饱和NaCl溶液洗涤、无水Na2S04干燥、浓縮，最终通过柱层析分离得红色固体。
其中，中间体3-氨基-4-(lH-吲哚-3)-马来酰亚胺的制备方法参见文献 (Mahboobi,S.;Eluwa,S.;Koller,M.;et.al.,J.HeterocyclicChem.,2000，35,1177):以马来酰亚胺为 起始原料，经溴代反应生成3,4-二溴马来酰亚胺，而后在溴乙烷和镁的作用下与吲哚反应 生成吲哚溴化镁，与3，4-二溴代马来酰亚胺发生取代反应3-溴-4-(lH-吲哚-3)马来酰亚胺， 经与迭氮化钠反应，再用三苯基膦还原合成得到。
步骤(1)所用的酰氯为乙酰氯、对氯苯甲酰氯或4-羟基-3-硝基苯甲酰氯。
步骤(1)优选的酰氯为乙酰氯。
步骤(1)所述的酰化反应中，乙酰氯用量为78mg，反应6h，对氯苯甲酰氯用量为 175 mg，反应12h， 4-羟基-3-硝基苯甲酰氯用量为201mg，反应24 h。
步骤(2)所述柱层析分离的展开剂为乙酸乙酯与石油醚的混合溶液，其体积比例为 1:1 2:1。
所述3-酰胺基-4-吲哚马来酰胺化合物的医药用途在制备用于预防和治疗肿瘤、糖尿病 及其并发症的药物中的应用。 有益效果
该化合物是一类新型蛋白激酶C抑制剂，研究发现该化合物在体外对宫颈癌Hda细 胞和肝癌SMMC7721等具有抗肿瘤活性。


图1是实施例中N-[4-(lH-吲哚基-3)-2,5-二氧代-2,5-二氢-lH-吡咯-3]-乙酰胺的红外光谱 图2是实施例中N-[4-(m-吲哚基-3)-2，5-二氧代-2,5-二氢-lH-吡咯-3]-4-氯苯甲酰胺的红外
光谱图3是实施例中N-[4-(lH-吲哚基-3)-2,5-二氧代-2,5-二氢-lH-吡咯-3]-3-羟基-4-硝基苯甲酰
胺的红外光谱图。
具体实施例方式
下面结合具体实施例，进一歩阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而 不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人 员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。
1.化合物的制备
实施例1
<formula>formula see original document page 7</formula>
N-〖4-(lH-吲哚基-3)-2，5-二氧代-2，5-二氢-lH-吡咯-3]-乙酰胺的制备
3-氨基-4-(lH-3-吲哚基)-lH-吡咯-2,5-二酮(133 mg,0.5 mmol)，三乙胺(IOI mg,l mmol) 溶于5 ml THF中，室温下将乙酰氯(78 mg，l mmol)溶于5 ml THF中，滴入反应液，N^呆 护下室温搅拌6h。加入H2015ml，搅拌30 min。乙酸乙酯萃取(15 ml"),饱和NaHC03 洗涤(20mlxl)有机层，水洗，饱和NaCl溶液洗，无水Na2S04干燥，浓縮后通过柱层析分 离[展开剂V(乙酸乙酯):V(石油醚^l:l]得红色固体94mg，收率70%, m.p. 248~250°C。 IR(KBr)v:3408,3261,1704,1642， 1504,1425,1347,1268 cm";红外IR光谱中3408 cm-1附 近为酰胺键N-H伸缩振动吸收峰，1704cm"为羰基O0伸縮振动吸收峰，1642cm—1为马 来酰亚胺OO伸缩振动吸收峰，1347 cm"为甲基C-H面外伸縮振动吸收峰； 'H-NMR(400Hz,DMSO)5:1.98(s3H)，7.07(t，J二7.4Hz,m)，7.15(t,h7,4Hz,lH)，7.44 7.50(m，2H)，7 .85(s,1H),9.99(s，1H)，10.86(s,1H),11.81(s,1H);化学位移在S在1.98的单峰显示为3个氢，为 甲基产生的氢信号，化学位移在7.07、 7.15和7.44-7.50显示为4H为吲哚环上氢信号，化 学位移在9.99显示为1个氢为酰胺N上氢信号，化学位移在10.86显示1个氢为n引哚环N 上氢信号，化学位移在11.81显示一个氢为马来酰亚胺N上氢信号； ESI(+)-MSm/z(%),70V:270.1[M+H]+,292.2[(M+Na),100]+。 m/z在270.1为化合物分子离子 +1^的信号。
N-[4-(lH-吲哚基-3)-2，5-二氧代-2,5-二氢-lH-吡咯-3]-4-氯苯甲酰胺的制备
3-氨基-4-(lH-3-吲哚基)-lH-吡咯-2，5-二酮(133 mg，0.5 mmol)，三乙胺(101 mg，l mmol)
实施例2
<formula>formula see original document page 7</formula>
溶于5mlTHF中,室温下将对氯苯甲酰氯(175 mg，l mmol)溶于5 ml THF中，滴入反应液， N2保护下回流12 h。加入H2015 ml，搅拌30 min。乙酸乙酯(15mlx3)萃取，饱和 NaHCO3(20mlxl)洗涤有机层，水洗，饱和NaCl洗，无水Na2S04千燥,浓缩后通过柱层析 分离[展开剂V(乙酸乙酯):V(石油醚)-2:1]得红色固体90mg,收率59%, m.p.258 262。C。 IR(KBr) v:3399，3228，1703,1663，1639，1505,1427,1349,1206,1113 cm";红外IR光谱中3399 cm—1附近为酰胺键N-H伸縮振动吸收峰，1703 cm"为羰基C=0伸縮振动吸收峰，1663 cm" 附近为马来酰亚胺 C=0 伸縮振动吸收峰； 'H-NMR(400Hz，DMSO)5:6.88(UN7.5Hz,lH),7.08(t,h7.5,lH)，7.43(d，J二8.0Hz,lH)，7.51(d,J-8. 0Hz，lH),7.57(d,J=8.5Hz，2H),7.92-7.95(m,3H),10.45(s，lH)，10.99(s,lH),11.86(s,lH),化学位移 在5在6.88、 7.08、 7.43和7.51显示为4个氢，吲哚环上氢产生的信号，化学位移在7.57 显示2个氢，7.92~7.95显示为3H为吲哚环和苯环上氢信号，化学位移在10.45显示为1 个氢位酰胺N上氢信号，化学位移在10.99显示1个氢为B引哚环N上氢信号，化学位移在 11.86显示一个氢为马来酰亚胺N上氢信号；ESI(-)-MSm/z(%)70V:364.0[(M-H)-,100]， m/z 在364.0为化合物分子离子-H的信号。
N-[4-(lH—吲哚基-3)-2，5-二氧代-2，5-二氢-lH-吡咯-3]-3-羟基-4-硝基苯甲酰胺的制备
3-氨基-4-(lH-3』引哚基)-lH-吡咯-2,5-二酮(133 mg,0.5 mmoi)，三乙胺(101mg，lmmo1) 溶于5 mlTHF中，室温下将对4-羟基-3-硝基苯甲酰氯(201 mg,l mmol)溶于5 mlTHF中，滴 入反应液，N2保护下回流24小时。加入H2015ml，搅拌30min。乙酸乙酯萃取(15 mlx3), 饱和NaHCO3(20 mlxl)洗涤有机层，水洗，饱和NaCl洗，无水Na2S04干燥,浓缩后通过柱 层析分离[展开剂V(乙酸乙酯):V(石油醚"1:1]得红色固体58.8 mg,收率30%， m.p.260~ 262°C。 IR(KBr)vcm":3408，3325，1710,1669,1521,1506，1415,1340,1237 cm-1;红外IR光谱中 3408 cm—1和3325 crrT1附近为酰胺键N-H和羟基O-H伸縮振动吸收峰，1710 cm"为羰基 OO伸縮振动吸收峰，1669 cm—1为马来酰亚胺环中CK)伸缩振动吸收峰，1506和1415 cm—' 为硝基 N-0 面外伸縮振动吸收峰 ； ？H-NMR(400Hz,
实施例3
H NDMSO)S:6.86(m,lH),7.07(t,J=7.2Hz，lH),7.20(d,J=8.7Hz,lH)，7.50(m,2H)，7.93(s，lH)，8.06(d,J=8 .7Hz,1H),8.53(s，1H)，10.48(s,1H),10,98(s,1H),11.80(s,1H),11.85(s，1H)，化学位移在S在6.86、 7.07和7.20显示为3个氢吲哚环上氢产生的信号，化学位移在7.50显示2个氢，化学位 移在7.93、 8.06和8.53分别显示l个氢，共为3H为吲哚环和苯环上氢信号，化学位移在 10.48显示为1个氢为酰胺N上氢信号，化学位移在10.98显示1个氢为b引哚环N上氢信 号，化学位移在11.80显示1个氢为马来酰亚胺N上氢信号； ESI(-)-MSm/z(%)70V:391.0[(M-H)-,100]， m/z在391.0为化合物分子离子-H的信号。
2.抗肿瘤活性筛选实验
用MTT法检测了 3-乙酰胺基-4-卩引哚马来酰亚胺化合物对体外培养人宫颈癌Hela细胞 和肝癌SMMC7721的抑制作用，测定方法和条件如下
筛选方法MTT法
细胞株人宫颈癌Hela细胞株和肝癌SMMC7721细胞株 操作步骤
取处于指数生长期生长状态良好的细胞一瓶，加入0.25%胰蛋白酶消化，使贴壁细胞 脱落，制成每毫升含2xl(^ 4xl0"细胞的悬液，接种于96孔板中，每孔150 ^L，置5%C02 培养箱中于37。C培养72 h，每孔加入5 mg/mLMTT[3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二溴苯溴 化四氮唑]溶液100pLDMSO溶解甲臢(formazan)结晶，用微量振荡器混匀后，用酶标仪于 492nm为吸收波长，630nm为参比波长测定光密度，计算化合物对肿瘤细胞生长的抑制率。
药理研究结果表明，在lxiO—Smol/L浓度下，优选目标化合物对宫颈癌Hela细胞和肝 癌SMMC7721细胞有一定的抑制活性，抑制率分别为28.8%和55.2%，阳性对照药 Ro31-6233分别为33.2%和48.5%。
权利要求
1.一种3-酰胺基-4-吲哚马来酰亚胺化合物，如结构式(I)所示
2. 根据权利要求1所述的3-酰胺基-4-吲哚马来酰亚胺化合物，其特征在于R为甲基、 乙基、丙基或取代的苯基，苯环上的取代基可为氢、氯、溴、羟基、甲氧基或硝基中的一 种或几种。
3. 根据权利要求1或2所述的3-酰胺基-4-B引哚马来酰胺化合物，其特征在于R为甲基， 该化合物为^[4-(1//-吲哚-3)-2，5-二氧代-2,5-二氢-1//-吡咯-3]-乙酰胺，结构式为，m.p. 248 250°C。
4. 一种3-酰胺基-4』引哚马来酰亚胺化合物的制备方法，包括(1) 将133 mg 0.5mmo1的3-氨基-4-(lH-3-卩引哚基)-lH-吡咯-2,5-二酮与101 mg lmmol的三乙胺溶于5 ml四氢呋喃溶液中，室温下将1 mmol酰氯溶于5ml THF中，滴入反应液， 于N2保护下搅拌12h，反应结束后加入15mlH20，搅拌30min;(2) 对有机层采用15 ml乙酸乙酯萃取3次，20 ml饱和NaHC03洗涤1次，经水洗、饱 和NaCl溶液洗涤、无水Na2S04干燥、浓縮，最终通过柱层析分离得红色固体。
5. 根据权利要求4所述的3-酰胺基-4-吲哚马来酰亚胺化合物的制备方法，其特征在于 步骤(1)所用的酰氯为乙酰氯、丁酰氯、对氯苯甲酰氯、对硝基苯甲酰氯、对甲氧基苯 甲酰氯或4-羟基-3-硝基苯甲酰氯。
6. 根据权利要求4或5所述3-酰胺基-4-n引哚马来酰亚胺化合物的制备方法，其特征在于 步骤(1)所用的酰氯为乙酰氯。
7. 根据权利要求4或5所述3-酰胺基-4-吲哚马来酰亚胺化合物的制备方法，其特征在于 步骤(l)所述的酰化反应中，乙酰氯用量为78mg，反应6h，对氯苯甲酰氯用量为175 mg， 反应12h， 4-羟基-3-硝基苯甲酰氯用量为201mg，反应24h。
8. 根据权利要求4所述3-酰胺基-4-吲哚马来酰亚胺化合物的制备方法，其特征在于步 骤(2)所述柱层析分离的展开剂为乙酸乙酯与石油醚的混合溶液，其体积比例为1:1 2:1。
9.根据权利要求l 8任一项所述的3-酰胺基-4-吲哚马来酰亚胺化合物的医药用途，其特 征在于3-酰胺基-4-吲哚马来酰胺化合物在制备用于预防和治疗肿瘤、糖尿病及其并发症 的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种3-酰胺基-4-吲哚马来酰亚胺化合物及其制备方法和应用，其结构式R为甲基、乙基、丙基或取代的苯基，苯环上的取代基可为氢、氯、溴、羟基、甲氧基或硝基中的一种或几种；制备1)将3-氨基-4-(1H-3-吲哚基)-1H-吡咯-2，5-二酮与三乙胺溶于四氢呋喃溶液中，N₂保护下与酰氯的四氢呋喃溶液室温搅拌反应结束后再加H₂O搅拌；2)有机层经乙酸乙酯萃取、饱和NaHCO₃洗涤、水洗、饱和NaCl溶液洗涤、无水Na₂SO₄干燥、浓缩，通过柱层析分离得到。它是一类新型蛋白激酶C抑制剂，可用于制备预防或治疗肿瘤、糖尿病及糖尿病并发症等疾病的药物。
文档编号A61K31/403GK101348482SQ20081004134
公开日2009年1月21日 申请日期2008年8月4日 优先权日2008年8月4日
发明者筠 孙, 牟世伟, 赵圣印, 钦维民, 陈志龙 申请人:东华大学