专利名称：间接测量大鼠小肠动力的方法
技术领域：
本发明涉及一种测量小型动物生理信息的方法，尤其涉及一种间接测量大鼠小肠动 力的方法。
背景技术：
肠道动力功能状态是影响危重病患者病程和预后的因素之一， 一旦肠道动力恢复， 即可进行肠内营养，这对于维持肠道黏膜屏障的完整性具有重要意义。因而对于肠道动 力功能状态的了解进行准确的评估对研究肠道功能状态具有重要的参考价值，从而为临 床间接提供治疗依据。既往多采用碳素墨汁、活性炭灌胃等方法进行大鼠肠道动力功能 的研究。上述方法采用肉眼观察黑染肠段与全肠道之间的比例，这个方法的缺点在于， 会导致已进入远端肠腔的但肉眼无法判断的活性碳漏检，此外，目测的精确度较低，这 些因素势必会导致精确度降低。发明内容本发明提供一种精确度高的间接测量大鼠小肠动力的方法，并具有成本低、安全、 无污染、方法简单的特点。本发明采用如下技术方案一种间接测量大鼠小肠动力的方法，包括如下步骤:将体积为大鼠胃容量的1/3—1/2倍、质量浓度为1-4%的蓝色葡聚糖2000对大鼠活体进行灌胃后，等待1-1.5小时，处 死大鼠，立即取上述大鼠的幽门到回肠末端的全部小肠，在无张力状况下将上述全部小 肠等分成至少6段，分别用双蒸水将每段肠管内容物洗净，分别收集冲洗液，再在 4000-10000转/分的转速下离心10-15分钟，利用波长为620nm的光分别对上述离心后 的上清液进行吸光度检测，从而获得反映大鼠小肠动力的蓝色葡聚糖2000在肠道内的 分布情况。在上述技术方案中优选将上述小肠等分成9-12段，数据量比较合理。蓝色葡聚糖 2000的浓度优选为2%。蓝色葡聚糖2000的体积优选为大鼠胃容量的1/3。另外，在蓝 色葡聚糖2000的体积为大鼠胃容量的1/3，同时，蓝色葡聚糖2000的浓度为2%时，小 肠不同部位蓝色葡聚糖2000的浓度差异明显，测量效果更好。本发明获得如下技术效果 1.通过了解指示剂在肠道内的传输过程，可以间接的了解小肠动力。本发明利用分光
光度计可分别精确检测一定时期内的各段小肠内的蓝色葡聚糖2000的浓度，从而获 得反映大鼠小肠动力的浓度分布曲线，通过上述曲线可以间接了解小肠动力的功能 状况，因而有助于更精确地分析大鼠小肠的动力功能。2. 本发明蓝色葡聚糖2000的浓度优选为2%。在该浓度下，检测获得的蓝色葡聚糖2000 浓度分布曲线对比更清晰，若浓度过高，则易造成浪费；浓度过低，易造成浓度差 异不明显。3. 蓝色葡聚糖2000的体积优选为大鼠胃容量的1/3，若蓝色葡聚糖2000的体积过大， 则易造成浪费，还可能导致蓝色葡聚糖2000被直接灌入小肠或者从口中溢出；若体 积过少，则导致浓度分布曲线差异不明显。4. 在蓝色葡聚糖2000的体积为大鼠胃容量的1/3，同时，蓝色葡聚糖2000的浓度为 2%时，小肠不同部位蓝色葡聚糖2000的浓度差异明显，测量效果更好，成本更低。5. 在上述技术方案中优选将上述小肠等分成9-12段，数据量比较合理，不仅能够全面 反映蓝色葡聚糖2000在小肠内的浓度分布，而且还节省了工作量，成本较低。若分 段过少，易导致数据采集量过少，无法判断小肠动力功能；若分段过多，则工作量 过大，成本较高。6. 本发明所用的蓝色葡聚糖2000作为指示剂，市场上可以直接购买，价格低廉，更适 合于批量应用。7. 本发明所用的蓝色葡聚糖2000没有放射性，可以在常规条件下长期保存，对环境无 污染，对人体无明显伤害，安全。8. 本发明所用的蓝色葡聚糖2000作为指示剂理化性质稳定，在取得大鼠小肠内容物标 本后无需立即检测，放置一段时间后并不影响检测结果，因而该检测方法可批量进 行，具有成本低的优势。9. 本发明所用的用于蓝色葡聚糖2000浓度检测的分光光度计装置是一种常规实验装 置，设备成本低，也不需要其他特殊的设备，因而该方法具有方法简单、成本低、 易于实现的优点。
图1是本发明采用蓝色葡聚糖2000为指示剂的大鼠小肠内的分布曲线。
具体实施方式
实施例l一种间接测量大鼠小肠动力的方法，包括如下步骤:将体积为大鼠胃容量的1/3—1/2倍、质量浓度为1-4%的蓝色葡聚糖2000对大鼠活体进行灌胃，蓝色葡聚糖2000的体积 用量可以选取为大鼠胃容量的9/24倍，5/12倍，11/24倍，质量浓度可以选取为1. 2%， 2%， 2.3%， 3%，蓝色葡聚糖2000可采用瑞典Pharmacia公司生产的Dex什an
Blue-2000(简称BD-2000),等待1-1. 5小时，时间可以选取为1小时，1. 2小时，1. 3 小时，1.4小时，处死大鼠，立即取上述大鼠的幽门到回肠末端的全部小肠，在无张力 状况下将上述全部小肠等分成至少6段，例如可以为6段，7段，8段，9段，10段， 11段，12段，13段，14段，分别用双蒸水将每段肠管内容物洗净(通常洗涤4-8次， 例如可以为5次，6次，7次)，分别收集冲洗液，再在4000-10000转/分的转速下离心 10-15分钟，转速例如可以选取为5000转/分，6000转/分，8000转/分(例如可以采 用德国Heraeus公司生产的Megafuge型低温高速离心机，时间可以为，12分钟， 13分钟，14分钟，利用波长为620nm的光分别对上述离心后的上清液进行吸光度检测， 将获得的每部分上清液的吸光度与其位置绘制曲线，从而获得反映大鼠小肠动力的蓝色 葡聚糖2000在肠道内的分布情况。所用分光光度计可以采用美国BECKMAN Coulter 公司生产的Du800分光光度计。 实施例2一种间接测量大鼠小肠动力的方法，包括如下步骤:将体积为大鼠胃容量的1/3—1/2 倍、质量浓度为1-4%的蓝色葡聚糖2000对大鼠活体进行灌胃，蓝色葡聚糖2000的体积 用量可以选取为大鼠胃容量的9/24倍，5/12倍，11/24倍，质量浓度可以选取为1. 2%， 2%， 2.3%， 3%，蓝色葡聚糖2000可采用瑞典Pharmacia公司生产的Dextran Blue-2000(简称BD-2000)，等待1-1.5小时，时间可以选取为1小时，1.2小时，1.3 小时，1.4小时，处死大鼠，在该段时间内，蓝色葡聚糖2000通过大鼠小肠的蠕动而发 生迁移，从而在小肠内形成一定的浓度分布，再立即取上述大鼠的幽门到回肠末端的全 部小肠，在无张力状况下将上述全部小肠等分成至少6段，例如可以为6段，7段，8 段，9段，10段，11段，12段，13段，14段，分别用双蒸水将每段肠管内容物洗净(通 常洗涤4-8次，例如可以为5次，6次，7次)，分别收集冲洗液，再在4000-10000转/ 分的转速下离心10-15分钟，转速例如可以选取为5000转/分，6000转/分，8000转/ 分(例如可以采用德国Heraeus公司生产的Megafuge型低温高速离心机，时间可以 为12分钟，13分钟，14分钟，利用波长为620nm的光分别对上述离心后的上清液进行 吸光度检测，将获得的每部分上清液的吸光度与其位置绘制曲线，从而获得反映大鼠小肠动力的 蓝色葡聚糖2000在肠道内的分布情况。所用分光光度计可以采用美国BECKMAN Coulter公司生产的Du800分光光度计。在本实施例中，优选将上述小肠等分成9-12段，数据量比较合理。蓝色葡聚糖2000 的浓度优选为2%。蓝色葡聚糖2000的体积优选为大鼠胃容量的1/3。另外，在蓝色葡 聚糖2000的体积为大鼠胃容量的1/3，同时，蓝色葡聚糖2000的浓度为2%时，小肠不 同部位蓝色葡聚糖2000的浓度差异明显，测量效果更好。获得蓝色葡聚糖2000在小肠内的分布情况及浓度高峰位置，从而精确了解各实验对 象的肠道动力情况。上述实施例中，实验所用大鼠采用同一性别24只健康雄性SD大
鼠(购于南京金陵医院动物实验中心)，月龄相同，体重相近，饲养环境相同。实施例3取健康雄性SD大鼠经口灌入2%BD-2000溶液0. 4ml，过lh后立即处死，处死后立 即剖腹取出幽门到回肠末端的全部肠管，在无张力状况下测量小肠全长，将全部小肠等 比分成10等分，每段肠管均沿系膜缘剖开肠管，分别对每段肠管用4ml双蒸水将肠内 容物彻底洗净，分别收集冲洗液至离心管，再在4000rpm转速下离心10min，取离心后 的上清液lml放入石英杯中，在.620nm条件下进行吸光度检测。检测获得的浓度与相应 位置的对应关系见附图1，这就是反映肠动力功能的蓝色葡聚糖2000浓度分布曲线。附图1中，蓝色葡聚糖2000分布于全小肠，其中浓度高峰位于回肠中段。本实施例中，具体可采用健康雄性SD大鼠(购于南京金陵医院动物实验中心)，体 重220 250g，在室温、有昼夜变化的房间里饲养1周，自由饮水和进食。直接根据蓝色葡聚糖2000浓度分布曲线并不能得出肠动力好坏的判断。在实际应 用中，在获得不同条件下上述大鼠的蓝色葡聚糖2000浓度分布曲线，根据不同对象的 蓝色葡聚糖2000在小肠内的分布曲线的对比，可以间接获得各个体之间的肠动力差异， 从而判断单个大鼠肠道功能的好坏。例如，在实际应用本发明的方法时，将不同对象的蓝色葡聚糖2000在小肠内的分 布曲线测出，分别获得如附图l的曲线，确定其峰值及其所对应的位置，再将获得的类 似于附图1的多组数据之间进行比较，其中，主要根据浓度高峰的位置判断大鼠小肠动 力功能，上述高峰的位置越远离幽门，肠道动力功能通常越好。本发明通过对蓝色葡聚 糖2000浓度分布曲线可更精确地区别所试验个体之间的小肠功能之间的差异。本发明 的间接测量大鼠小肠动力的方法实际上是一种间接测量方法，所获得的数据是在灌胃一 段时间内的反映小肠动力的指示剂的浓度分布曲线。
权利要求
1.一种间接测量大鼠小肠动力的方法，其特征在于包括如下步骤将体积为大鼠胃容量的1/3-1/2倍、质量浓度为1-4％的蓝色葡聚糖2000对大鼠活体进行灌胃后，等待1-1.5小时，处死大鼠，立即取上述大鼠的幽门到回肠末端的全部小肠，在无张力状况下将上述全部小肠等分成至少6段，分别用双蒸水将每段肠管内容物洗净，分别收集冲洗液，再在4000-10000转/分的转速下离心10-15分钟，利用波长为620nm的光分别对上述离心后的上清液进行吸光度检测，从而获得反映大鼠小肠动力的蓝色葡聚糖2000在肠道内的分布情况。
2. 根据权利要求l所述的间接测量大鼠小肠动力的方法，其特征在于蓝色葡聚糖2000 的体积为大鼠胃容量的1/3。
3. 根据权利要求1或2所述的间接测量大鼠小肠动力的方法，其特征在于蓝色葡聚糖 2000的浓度为2%。
4. 根据权利要求3所述的间接测量大鼠小肠动力的方法，其特征在于等待时间为l小 时。
5. 根据权利要求1或2所述的间接测量大鼠小肠动力的方法，其特征在于将上述小肠 等分成9-12段。
全文摘要
本发明公开一种间接测量大鼠小肠动力的方法，将体积为大鼠胃容量的1/3-1/2倍、质量浓度为1-4％的蓝色葡聚糖2000对大鼠活体进行灌胃后，等待1-1.5小时，处死大鼠，立即取上述大鼠的幽门到回肠末端的全部小肠，在无张力状况下将上述全部小肠等分成至少6段，分别用双蒸水将每段肠管内容物洗净，分别收集冲洗液，再离心10-15分钟，分别对上述离心后的上清液进行吸光度检测获得蓝色葡聚糖2000在肠道内的分布情况。本发明利用分光光度计可获得反映大鼠小肠动力的浓度分布曲线，有助于更精确地分析大鼠小肠的动力功能。本发明所用的蓝色葡聚糖2000作为指示剂，价格低廉，没有放射性，对人体无明显伤害，安全。
文档编号A61B5/22GK101116617SQ20071013086
公开日2008年2月6日 申请日期2007年8月29日 优先权日2007年8月29日
发明者征 楼 申请人:征 楼