专利名称：蒺藜全草皂甙用于制备抗胰岛素抵抗的高血糖和高脂血症的药物的方法
技术领域：
本发明涉及一种蒺藜全草皂甙用于制备抗胰岛素抵抗的高血糖和高脂血症的药物的方法，或者说，涉及一种全草STT用于制备抗胰岛素抵抗的高血糖和高脂血症的药物的方法，属中药制备的技术领域。蒺藜全草皂甙是指从蒺藜除根以外的植物整个地上部分中提取的全草STT。
背景技术：
从传统药用部位蒺藜果实(见国家药典)中提取的蒺藜皂甙，现代药理学研究表明具有抗衰老作用。见张秀芹、王珏玫、金春花等，“蒺藜总皂甙抗衰老作用的研究”，[J].中药材，1990，13(2)34-36；宿燕岗、杨学义、陈灏珠，“心脑舒通的临床应用及研究现状”，[J].深圳中西医结合杂志，1999，9(1)39-40；吴恩融、马建、立长龄等，“蒺藜皂甙抗衰老作用的实验研究”，[J].中国药学杂志，2000，35(2)49-50；孙少敏、张维君、杨晶等，“刺蒺藜对衰老小鼠的红细胞SOD活性和MDA含量的影响”，[J].黑龙江医药科学，2000，23(1)5；杨晶、张涛、白大芳等，“蒺藜子对D-乳糖致衰老小鼠肝细胞膜Na+-K+-ATPase活性的影响”，[J].黑龙江医药科学，2001，24(1)32-34。大量基础和临床研究表明蒺藜皂甙具有保护血管内皮细胞，防治动脉硬化、抗血栓形成，改善血液流变性，改善微循环，保护心肌的作用。见李铁军、徐江平、芮耀诚等，“蒺藜总皂甙对TNF-α及IL-β诱导内皮细胞粘附的抑制作用”，[J].解放军药学学报，1992，15(1)6-8；徐江平，李铁军，芮耀诚等，“蒺藜总皂甙抑制培养的牛脑微血管内皮细胞表达E选择素”，[J].第二军医大学学报，1998，19(6)536-538；倪受东、徐先祥、蒋斗发等，“蒺藜总皂苷抗实验性血栓形成作用”，[J].基层中药杂志，2001，15(5)10-11。
国外的临床研究发现从蒺藜中提取的单一成份皂甙-原薯蓣皂甙(protodioscin)能增强性欲，提高性功能。原薯蓣皂甙可能是在体内通过代谢转化成DHEA(De-hydro-Epi-Androsterone)而起上述作用的。进一步研究发现，生活在不同环境中的蒺藜，不一定都含有这一活性成份。见K Gauthaman，P.G.Adaikan，R.N.V.Prasad.‘Aphrodisiac properties of Tribulus Terrestris extract(Protodioscin)in normal and castrated rats’[J].LifeSciences，2002，711385-1396(‘蒺藜提取物对正常和阳痿大鼠的性强壮’，生命科学，2002，711385-1396)。
现代中药“心脑舒通”打破了蒺藜传统的用药部位，用全草提取有效成分入药，是蒺藜全草入药的成功例子，该药主要用于抗心血管疾病，见宿燕岗、杨学义、陈灏珠，“心脑舒通的临床应用及研究现状”，[J].深圳中西医结合杂志，1999，9(1)39-40。
本发明人的前期研究发现从蒺藜全草提取的皂甙具有较传统药用部位蒺藜果实及其中提取的皂甙完全不同的药效。见李明娟，瞿伟菁，褚书地，汪虹，田翠平，屠铭，“蒺藜水煎剂对小鼠代谢中糖异生的作用”，[J].中药材，2001.24(8)；586～588；李明娟，瞿伟菁，王煜非，汪虹，田翠平，“蒺藜皂苷的降血糖作用”，[J].中药材，2002.25(6)420-422；孙斌，瞿伟菁，柏忠江，“蒺藜皂苷对乳腺癌细胞Bcap-37的体外抑制作用”，[J].中药材，2003.26(2)104～106；褚书地，瞿伟菁，逄秀凤，孙斌，黄晓青，“蒺藜皂苷对高血脂症的影响”，[J].中药材，2003.26(5)341～344；褚书弟，瞿伟菁，李穆，曹群华，“蒺藜化学成分及其药理作用研究进展”，[J].中国野生植物资源，2003.22(4)4-7；孙斌，瞿伟菁，张晓玲，杨煌健，庄秀园，章平，“蒺藜皂苷对人肝癌细胞BEL-7402生长抑制和诱导凋亡作用的研究”，[J].中国中药杂志，2004.29(7)681-684。
发明内容
蒺藜全草是全国广泛分布的一年生草本植物，传统入药部位是蒺藜的果实，除“心脑舒通”是利用蒺藜全草复方治疗心血管疾病外，蒺藜全草尚未被充分利用。有关从蒺藜全草中提取的蒺藜全草之甙(saponin from tribulus terrestris STT，下同)，确切地说，不是从蒺藜果实中提取的蒺藜皂甙，而是从除根以外的植物整个地上部分中提取的全草STT用于制备抗胰岛素抵抗的高血糖和高脂血症的药物方法，至今未见任何报道。
本发明要解决的技术问题是提出一种全草STT用于制备抗胰岛素抵抗的高血糖和高脂血症的药物的方法。本发明解决上述技术问题的技术方案是先以全草STT为活性物质，配以辅料，微晶纤维素(MCC)、羟丙基纤维素钠(HPC)、羧甲基淀粉钠(CMS-Na)、硬脂酸镁中的全部或部分，混匀，制得片剂或药物胶囊的药用原料，再将该药用原料加工成片剂或充入胶囊，制得抗胰岛素抵抗的高血糖和高脂血症的药物。
现详细说明本发明的技术方案。
一种全草STT用于制备抗胰岛素抵抗的高血糖和高脂血症的药物的方法，其特征在于，以全草STT为活性物质，制备药物的剂型为片剂，具体操作步骤第一步 配料按所需制备片剂片数和每片含全草STT 1份重量，微晶纤维素0.15～0.25份重量，羟丙基纤维素0.02～0.1份重量，羧甲基淀粉钠0.01～0.06份重量，硬脂酸镁0.001～0.01份重量的配比配料，1份重量为0.2～0.5g；第二步 制备将全草STT过筛，与微晶纤维素和羟丙基纤维素钠混匀，干燥后，与羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁混匀，制得片剂的药用原料，药用原料压片，制得所需片数的药片。
一种全草STT用于制备抗胰岛素抵抗的高血糖和高脂血症的药物方法，其特征在于，以全草STT为活性物质，制备药物的剂型为胶囊，具体操作步骤第一步 配料按所需制备药物胶囊个数和每个药物胶囊含全草STT 1份重量，微晶纤维素0.03～0.1份重量的配比配料，1份重量为0.2～0.5g；
第二步 制备将全草STT和微晶纤维素混匀，过筛，干燥后，制得药物胶囊的药用原料，药用原料填充入胶囊中，制得所需个数的药物胶囊。
本发明的优点是方法简单，生产设备要求低，生产成本低廉，易于实施。
具体实施例方式
所有实施例按上述的制备方法的操作步骤操作。
实施例1第一步，所需制备片剂的片数为1000片，每片含全草STT 0.3g，微晶纤维素0.045g，羟丙基纤维素0.006g，羧甲基淀粉钠0.003g，硬脂酸镁0.0003g；第二步，按常规制片剂方法将全草STT过80目筛，与微晶纤维素和羟丙基纤维素钠混匀，干燥后，再与羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁混匀，压片，制得每片含全草STT 0.3g的药片1000片。
实施例2第一步，所需制备片剂的片数为1000片，每片含全草STT 0.3g，微晶纤维素0.06g，羟丙基纤维素0.015g，羧甲基淀粉钠0.009g，硬脂酸镁0.0015g；第二步，按常规制片剂方法将全草STT过80目筛，与微晶纤维素和羟丙基纤维素钠混匀，干燥后，再与羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁混匀，压片，制得每片含全草STT 0.3g的药片1000片。
实施例3第一步，所需制备片剂的片数为1000片，每片含全草STT 0.3g，微晶纤维素0.075g，羟丙基纤维素0.03g，羧甲基淀粉钠0.018g，硬脂酸镁0.003g；第二步，按常规制片剂方法将全草STT过80目筛，与微晶纤维素和羟丙基纤维素钠混匀，干燥后，再与羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁混匀，压片，制得每片含全草STT 0.3g的药片1000片。
实施例4第一步，所需制备药物硬胶囊个数为1000粒，每粒胶囊含全草STT 0.5g，微晶纤维素0.015g；
第二步，按常规方法将上述物料混匀，过筛，干燥后填充至硬胶囊中，制得每个胶囊含全草STT 0.5g的药物胶囊1000个。
实施例5第一步，所需制备药物硬胶囊个数为1000粒，每粒胶囊含全草STT 0.5g，微晶纤维素0.025g；第二步，按常规方法将上述物料混匀，过筛，干燥后填充至硬胶囊中，制得每个胶囊含全草STT 0.5g的药物胶囊1000个。
实施例6第一步，所需制备药物硬胶囊个数为1000粒，每粒胶囊含全草STT 0.5g，微晶纤维素0.05g；第二步，按常规方法将上述物料混匀，过筛，干燥后填充至硬胶囊中，制得每个胶囊含全草STT 0.5g的药物胶囊1000个。
现说明本发明的方法制备的药物的使用方法和抗胰岛素抵抗的高血糖和高脂血症的效果。
本发明的方法制备的药物的使用方法根据动物试验结果折算，患者每天服用该药物一次，每次服用的剂量按患者自身体重计，介于每kg体重0.005～0.025g，连续服用21d。
本发明的方法制备的药物的抗胰岛素抵抗的高血糖和高脂血症的药物的效果，以动物试验说明如下1、评估蒺藜皂甙对高血糖作用的有效剂量模型制备正常雄性昆明种小鼠，体重35～40g，禁食10h后，按体重190mg/kg剂量腹腔注射pH4.5的柠檬酸缓冲液配制的STZ溶液。96h后，尾静脉采血，测定禁食6h后的空腹血清葡萄糖值，取血清葡萄糖值大于15.00mmol/L的小鼠为成型糖尿病小鼠。
治疗试验将成型糖尿病小鼠随机分为4组，每组8只，设为高剂量组(III)、中剂量组(IV)、低剂量组(V)和阳性对照组(II)，组间血清葡萄糖差异小于1.5mmol/L，同时设一组正常对照组(I)。高、中和低剂量组分别按体重300mg/kg、150mg/kg和75mg/kg的剂量灌胃蒺藜皂甙，连续一次性灌胃两周。
检测每周测一次血清葡萄糖。根据降血糖效果选择最有效剂量。
结果高、中、低三种剂量在灌胃蒺藜皂甙7d时均能有效的降低STZ致高血糖小鼠的血糖，并具有浓度依赖性；但灌胃14d时结果显示蒺藜皂甙中剂量组具有持续的降血糖作用，见表1。
表1蒺藜皂甙高、中和低剂量对STZ致高血糖小鼠的降血糖效果
*p＜0.05**p＜0.01，t(0.05)＝2.145，t(0.01)＝2.997，下同2、评估蒺藜皂甙对STZ诱导的高血糖模型大鼠的影响模型制备选正常雄性SD大鼠，体重215～240g，按体重60mg/kg剂量腹腔注射STZ溶液。96h时，取血糖值大于10.00mmol/L的大鼠为成型糖尿病大鼠。
治疗实验成型大鼠随机分为阳性对照组，灌胃蒸馏水；降糖灵治疗组100mg/kg·d和全草STT治疗组150mg/kg·d，组间血清葡萄糖差异小于1.11mmol/L；同时设正常对照组。口服给药，每天一次性灌胃，连续21d。
检测每隔7d检测血糖，21d后，检测肝糖原含量、血糖，血清果糖胺水平及血清胆固醇、甘油三酯水平。
结果对STZ诱导的高血糖模型大鼠，每天一次性灌胃全草STT，结果显示7d、14d、21d时，150mg/kg剂量全草STT的降糖幅度分别为11.60％、22.20％和28.50％，并能够显著增加肝糖原的含量，同时降低血清胆固醇和甘油三酯的含量，显著增强模型鼠胰腺SOD活性，极显著降低血清MDA、NO含量。同时全草STT还具有调节胰岛素水平，改善胰岛素抵抗的作用。(结果见表2，3)表2蒺藜皂甙对STZ致高血糖大鼠血清葡萄糖的影响
*p＜0.05**p＜0.01，t(0.05)＝2.145，t(0.01)＝2.997，下同表3蒺藜皂甙对STZ致高血糖大鼠胰岛素敏感性的影响
2、评估蒺藜皂甙对四氧嘧啶(Alloxan)诱导的高血糖模型小鼠的影响模型制备用柠檬酸缓冲液(pH 4.6)，灭菌后配制4％的四氧嘧啶注射液。将健康雄性昆明种小鼠，体重25g，适应性喂养3天后按体重160mg/kg剂量腹腔注射四氧嘧啶，72小时后测定禁食血糖值，挑选血糖值高于15mmol/L的动物为成型动物。
治疗试验随机分组，口服给药；将成型小鼠设为对照组(灌胃蒸馏水)；全草STT给药组，灌胃150mg/kg·d剂量；阳性药物对照(降糖灵)组，灌胃100mg/kg·d剂量。每组8只，组间差小于1.1mmol/L。
检测10d时各组小鼠禁食6h后眼眶取血，测定血清葡萄糖、甘油三酯、胆固醇含量以及SOD活性等的。
结果采用四氧嘧啶诱导的高血糖模型小鼠，按体重150mg/kg·d剂量的蒺藜皂甙每天一次性灌胃7d，结果显示能有效降低Alloxan致糖尿病小鼠的血清葡萄糖水平(p＜0.05)，与对照组相比，降糖率为33.64％，同时能显著降低血清甘油三酯水平(p＜0.05)，结果见表4～5。
表4蒺藜皂甙对四氧嘧啶致高血糖小鼠血清葡萄糖的影响
与对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01，t(0.05)＝2.145，t(0.01)＝2997，下同表5蒺藜皂甙对四氧嘧啶致高血糖小鼠血脂的影响
与对照组相比，*p＜0.05。
3、评估蒺藜皂甙对胰岛素抵抗高血糖的影响模型制备将体重220-230g的SD大鼠，禁食6h，按体重腹腔注射230mg/kg剂量的烟酰胺，15min后按体重尾静脉注射60mg/kg剂量的STZ，大鼠以高脂饲料喂养5周。选择血糖值显著高于正常大鼠、胰岛素敏感指数显著低于正常的为成型大鼠，见表6。
表6制备成型的胰岛素抵抗高血糖大鼠的血液生化指标
与正常组比a＝p＜0.05，aa＝p＜0.01(括号内为实际参试大鼠数)。
治疗试验将成型大鼠随机分为阳性对照、阳性给药对照、全草STT低、中、高剂量组，同时另设正常组。低、中、高三种剂量分别按体重为2.8、28、84mg/kg；阳性给药对照组按体重3.5mg/kg剂量的美吡哒灌胃。各组自由饮水，并喂基础饲料。
检测每周测定血糖值，45d时，眶后取血，测定血清葡萄糖、胆固醇、甘油三酯、胰岛素等。
结果按体重2.8、28、84mg/kg剂量的全草STT均可显著降低胰岛素抵抗高血糖大鼠的血清葡萄糖水平，提高胰岛素的敏感性，其中以按体重28mg/kg剂量效果最佳，结果见表7。在药效试验结束时，还分析了各参试组大鼠血清中TC、TG、HDL-C、胰岛素的生化指标，结果显示通过药物治疗各模型组大鼠与正常组相比无显著性差异，提示全草STT具有与阳性对照药对2型糖尿病同等临床效果的可能，结果见表8。
表7全草STT对胰岛素抵抗高血糖大鼠血清葡萄糖含量的影响
与正常组组比a＝p＜0.05，aa＝p＜0.01；与阳性对照比b＝p＜0.05，bb＝p＜0.01(括号内为实际参试大鼠数)。
表8、全草STT对大鼠血清中胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白胆固醇和胰岛素的影响
与正常组组比a＝p＜0.05，aa＝p＜0.01；与阳性对照比b＝p＜0.05，bb＝p＜0.01(括号内为实际参试大鼠数)。
4、评估蒺藜皂甙对营养性肥胖大鼠胰岛素抵抗和高脂血症影响模型制备及分组将65只雄性SD大鼠常规饲养3d，然后随机分出8只为阴性对照组，其余为模型制备组，分笼饲养。阴性对照组给予普通饲料(大麦粉20％、脱水菜10％、豆粉20％、酵母1％、玉米粉16％、麸皮16％、鱼粉10％、食盐2％、骨粉5％)。模型组给予高脂高糖饲料(每100g普通饲料中加入猪油20g，蔗糖20g)诱导，自由饮水。饲养18周后，选择模型组中体重最大者24只，按体重随机分为全草STT治疗组，阳性给药治疗组和阳性对照组，每组各8只。治疗期间，除阴性对照组外，其他各组继续给予高脂高糖饲料胁迫诱导。
治疗试验每天一次性灌胃给药，治疗6周。阴性对照组和阳性对照组按体重1mL/kg剂量灌服蒸馏水。全草STT治疗组按体重40mg/kg剂量灌服全草STT，阳性给药治疗组按体重0.48mg/kg剂量灌服文迪雅(RTZ)。各组常规喂养，按时通风，冲刷粪便，保持环境安静。室温保持在22℃左右，每天观察活动程度，体毛色泽、饮食、饮水及粪便形状等。
检测体重，Lee’s指数和附睾脂肪垫重量的测定治疗前后定期称量大鼠体重；测量体长(从鼻到肛门的长度)，按照公式计算Lee’s指数Lee’s指数＝体重(g)1/3*1000/体长(cm)；附睾脂肪垫重量测定，取血后处死动物，剖取附睾脂肪垫并称重。
血液生化指标测定治疗结束时，动物禁食12h以上，眼眶取血，分离血清保存于-20℃。血清血糖(serum glucose，Glu)，血清果糖胺(fructosamine，FruA)，血清甘油三脂(serum triglyceride，TG)，血清总胆固醇(serumtotal cholesterol，TC)，血清游离脂肪酸(serum free fatty acid，FFA)，血清高密度脂蛋白按试剂盒说明书方法测定。血清胰岛素(seruminsulin，Ins)采用放射免疫法测定。
结果全草STT对营养性肥胖大鼠体重，Lee’s指数和腹睾脂肪垫重量的影响采用高脂高糖饲料诱导制备的营养性肥胖大鼠体重和Lee’s指数(Lee’s index)与阴性对照组相比均有极显著差异。经过全草STT40mg/每kg体重治疗6周后，全草STT治疗组的体重增长得到明显控制，体重和Lee’s指数与阳性对照组和RTZ治疗组相比均有极显著差异。解剖发现，全草STT治疗组的附睾脂肪垫重量与阳性对照组和RTZ治疗组相比均降低，有极显著差异，结果见表9。
表9、全草STT对营养性肥胖大鼠体重，Lee’s指数和腹睾脂肪垫重量的影响 (n＝8)
Compared with positive*P＜0.05，**P＜0.01全草STT对营养性肥胖大鼠血糖和胰岛素敏感性的影响与阴性对照组相比，阳性对照组大鼠的血清葡萄糖和血清胰岛素显著升高，胰岛素敏感指数极显著下降，而血清果糖胺无显著差异。全草STT和RTZ治疗组的血清葡萄糖，血清胰岛素均显著低于阳性对照组，胰岛素敏感指数极显著提高，果糖胺水平亦无显著性差异，结果见表10。
表10、全草STT对营养性肥胖大鼠血糖和胰岛素敏感性的影响 (n＝8)
Compared with positive*P＜0.05，**P＜0.01全草STT对营养性肥胖大鼠血脂的影响阳性对照组的血清甘油三脂(TG)，血清总胆固醇(TC)和血清游离脂肪酸(FFA)均比阴性对照组升高。全草STT治疗组上述三项指标均比阳性对照组显著降低，而阳性给药治疗组仅FFA显著低于阳性对照组；TG，TC无显著差异，结果见表11。
表11、全草STT对营养性肥胖大鼠血脂的影响 (n＝8)
Compared with positive*P＜0.05，**P＜0.0权利要求
1.一种蒺藜全草皂甙用于制备抗胰岛素抵抗的高血糖和高脂血症的药物方法，其特征在于，以蒺藜全草皂甙为活性物质，制备药物的剂型为胶囊，具体操作步骤第一步 配料按所需制备药物胶囊个数和每个药物胶囊含蒺藜全草皂甙1份重量，微晶纤维素0.03～0.1份重量的配比配料，1份重量为0.2～0.5g；第二步 制备将蒺藜全草皂甙和微晶纤维素混匀，过筛，干燥后，制得药物胶囊的药用原料，药用原料填充入胶囊中，制得所需个数的药物胶囊。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体操作步骤第一步，所需制备药物硬胶囊个数为1000粒，每粒胶囊含蒺藜全草皂甙0.5g，微晶纤维素0.015g；第二步，按常规方法将上述物料混匀，过筛，干燥后填充至硬胶囊中，制得每个胶囊含蒺藜全草皂甙0.5g的药物胶囊1000个。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体操作步骤第一步，所需制备药物硬胶囊个数为1000粒，每粒胶囊含蒺藜全草皂甙0.5g，微晶纤维素0.025g；第二步，按常规方法将上述物料混匀，过筛，干燥后填充至硬胶囊中，制得每个胶囊含蒺藜全草皂甙0.5g的药物胶囊1000个。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体操作步骤第一步，所需制备药物硬胶囊个数为1000粒，每粒胶囊含蒺藜全草皂甙0.5g，微晶纤维素0.05g；第二步，按常规方法将上述物料混匀，过筛，干燥后填充至硬胶囊中，制得每个胶囊含蒺藜全草皂甙0.5g的药物胶囊1000个。
全文摘要
一种蒺藜全草皂甙用于制备抗胰岛素抵抗的高血糖和高脂血症的药物的方法，属中药制备的技术领域。该药物的制备方法是先以蒺藜全草皂甙为活性物质，配以辅料，微晶纤维素、羟丙基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁中的全部或部分，混匀，制得药物胶囊的药用原料，再将该药用原料充入胶囊，制得抗胰岛素抵抗的高血糖和高脂血症的药物。本发明的方法的优点是方法简单，生产设备要求低，生产成本低廉，易于实施。本发明的方法制备的药物适于用来治疗抗胰岛素抵抗的高血糖和高脂血症。
文档编号A61K131/00GK101053582SQ20071000411
公开日2007年10月17日 申请日期2004年11月22日 优先权日2004年11月22日
发明者瞿伟菁, 张雯, 庄秀园, 牛伟, 李明娟, 褚书弟 申请人:华东师范大学