透明质酸二元混合物及其治疗用途的利记博彩app

专利名称：：透明质酸二元混合物及其治疗用途的利记博彩app
技术领域：
：本发明涉及可从具有不同重均分子量的透明质酸样品获得的透明质酸二元混合物以及它们在关节病中的关节内应用或在软组织病症中的关节外应用的用途。
背景技术：
：透明质酸是熟知的高分子量生物多糖，属于糖胺聚糖的类别，很大程度上存在于脊推动物的所有结締组织、存在于在其中透明质酸是主要的成分的关节滑液和软骨以及眼睛球内液体，并且广泛用于治疗多种病理疾病。在性质上，其分子量可达到大于10,000kDa的分子量，但是如已知的，在提取和处理透明质酸始终是通过平均分子量通常识别的样品时，透明质酸由具有包含在分子量范围内的分子量的不同聚合物形成。换句话说，这种生物聚合物的样品呈现分子量分布，以致HA的任何样品还可具有多分散性的指数的特征。因此，即使没有说明，当用词透明质酸或透明质烷(hyaluronan)或通常以钠盐的形式的透明质酸盐(在下文中也表示为HA)具有以盐形式的外源性透明质酸的含义时，对于透明质酸，其必须预期是具有确定的重均分子量(或数均分子量)或分子量分布的透明质酸样品。至于它的生物医学应用，从动物来源或细菌肉汤中提取的这种生物聚合物的很多样品长期用于病理疾病，如创伤愈合、关节病/关节炎疾病和眼手术，这些用途基本上基于它的生物学作用以及基于其水溶液的非牛顿学说的物理性质(例如粘度和/或其结构的粘弹性)。粘度和/或粘弹性主要依赖于HA样品的分子量范围、聚合物浓度，但是其他的技术特征如交联度可有助于增加流变性能以及所要求的分子量。实际上，HA的流变性质由所考虑的样品的不同技术特征的组合影响或引起。但是，当特别例如在膝关节炎症疾病下要求高粘度和/或粘弹性时，提及高分子量HA样品是常识和习惯，其中透明质酸用于滑液的补充目的以及用于其粘度/粘弹性。实际上，在滑液中内源性HA的基本作用是通过其粘度和/或粘弹性提供关节的适当的机械性质，然后保存软骨关节基质的结构和功能，尽管两者在关节病中均受影响。例如，骨关节炎是使关节软骨正常的降解合成不稳定的机械事件和生物事件的结果CCfe/peP.OsteoaW/rn'fe.爿"aCW/jop/卯S，'2S六2-",并且它的特征在于内源性HA的浓度和分子量的减少，这又可导致承重关节如膝的疼痛以及功能丧失的征兆(Sfl/awoyfeo"W/zr/to(粘度补充骨关节炎治疗的新观念).Ji^ewwato/7993，'，(Swpp/39;.J-9;。因此，为了用HA样品的关节内的粘度补充/软骨保护，已经在适当的粘度和/或粘弹性和适当的重均分子量，优选高重均分子量之间建立直接的关系，目的是恢复用于改善疼痛控制和关节功能的滑液的浓度和分子量特征。在临床试验中，关节内的HA制剂已显示疼痛緩解显著大于安慰剂(Da/z/6erg丄，丄o/7/wa"ofer丄.5".，丄.，/"/rawW/cw/ar/"/eC/om^o//戸/wra憩w戸Z/ewte術Y/zcaW/"get7Zwo削a//^1awd戸/w(透明质坑在具有软骨异常和膝痛的患者中的关节内注射).jw/2r/to//7^mJ7.'527-52S;Z)owg"(iaM，A^w少ewM，丄/Wr"/1K，J/worS.///g/wo/ecw/arWo-co^ra〃edWa/(在膝骨关节炎中的高分子量透明质酸钠(sodiumhyaluronate，sodiumhyalectin):1年安慰、剂只于照i式马佥).Qsfecwt/znTfeC/A3ge7993/7.97-705;PetrellaR.J.,DC/veWraMD.，i//WeZ)ra"dC.</z_ya/wrawateso^f/訓戶/w//2戸.ca//^wWom'"g0We0aW/2Wfeo/bee(透明质酸钠对在膝骨关节炎中的疼痛和身体功能的岁文应).爿rc/z/wtewikfed2002/Xar/Mo"/"》ogw丄.X，w欣AeeosfeoaW/zr/macow加〃e《rawd簡fee《t/oz/6/e-W"c/，para〃e/-cfe/g"Ww办(两种透明质烷药物和安慰剂在具有膝骨关节炎的患者中的比较对照、随机、双盲、平行设计的多中心研究).i/zeMmato/0<gyfOjc/oW)2^2/W,7^/0-7^/》，并且比得上或优于关节内的糖皮质激素(M謹/^zZ.^，她诉Cj.'尸"rc/z廳"M爭乂，M""，歴w/o/osto9aW/zn'/7'so/f/zebeejW7'/warycarep/z3AS7'c/ara(通过谇刀纟及4呆i)t医师治疗膝的骨关节炎).^r/z.7卯S，'7:563-567)。尽管用HA制剂比用关节内的糖皮质激素注射剂更緩慢地实现疼痛緩解，但是效应可显著地持续更长的时间(A/omsAf.五.，^汰/raw2M//"丄z^s7'erU爭乂，TTzera/eo/fl/o"e，/zy/a"G77-20w"/z"o"stero/(ia/"""-/w/Zawwa^o^ydr"gs(7V5!/4/D^am/A/S^TOsa/wze(用hylanGF-20(Synvisc)的粘度补充在治疗膝的骨关节炎中的作用比较单独的hylanGF-20、hylanGF-20和非甾体类抗炎药物(NSAIDs)—起以及单独的NSAIDs的加拿大多中心试验).0teo"W/2nfeCZ/"取7卯5，'3:"3-"6人类似地，与口服抗炎症制剂相比，关节内HA在疼痛上已显示比得上的改善^^WMME爭乂，1995re/c//.)。几种HA制剂目前被临床医师广泛利用，他们在HA的分子量(从500,000至6xl06)、给药方式和功效的要求的一贯方式上不同。具体地，当患者接受特定产品而没有对于给定的选择的任何客观标准时，在产品中是否发现功效的差异并不清楚(丄oG./Z"丄a&〃eyM，Afc4/zWowJ""Fe/sow￡).77./"加-ar/7'cw/ar/z戸/Mrom'c(2c/t//rea加e"f<Azeeo他oar^znto,a膨ta-awa/拜's(在治疗膝关节炎中的关节内的透明质酸荟萃分析).WM42^X5/2卯:W"-2"。此外，已描述了内源性HA组合物的差异在成人中出现，伴有与严重性程度和症状特征一致的骨关节炎的粘弹性的转换(Sa/asz和"93re/d)。根据Balasz的论文估计的分子量的变量是从5至2百万。用相对低平均分子量HA治疗关节病可受益于在文献中提到的外源性HA分子可能被捕集或吸收在胶原纤维网络中的事实Cga/"w五.A，J5/oowG.D.，5Vra朋D乂Fe&ra"o/VoceeAVzgs"66，25，M/3画7SM」。与关节软骨的表面层的精细结构和聚糖含量有关，由于胶原分子的存在甚至通过静电相互作用，不能排除这种来自粘度补充施用的生物聚合物吸附在有吸引力的软骨表面上。因此，特别地，与高重均分子量比较，HA分子在界面层中的扩散和以相对高的浓度包含在具有低的或相对低的平均分子量的HA样品中的聚合物在软骨表面上的吸附可被考虑并可被优选。在另一方面，在软骨和滑液两者中的透明质酸的存在增强内源性透明质酸的双重生物学作用一种与其在软骨细胞外基质结构组织中的生物学作用有关，一种与其在滑液中的物理性质有关，并且甚至认为，仅仅后者方面，用于关节病治疗目的的HA样品的选择的问题并不如所预期的那样容易，尽管大部分试验数据存在于这种多糖。实际上，动态运动的膝需要与粘性需要平衡的最佳分子量的弹性组合物。例如，与透明质酸的载荷为低频率时的更多的粘性比较，通过透明质酸的动态变化使通过滑液的高频率载荷消散，朝向更多的弹性模量(^^^^1)^>^^1993厂e/"力。尽管给定的HA产品具有通常低、中或高的有限范围的分子量，但是没有产品已被设计来根据滑液的弹性模量和粘性模量提供模拟活动的骨关节炎膝关节的需要的补体组合物。此外，粘度和粘弹性公认为在关节病的粘度补充治疗中都有用，但是HA的相同样品未必同时具有两个这些适于粘度补充的特征，以致无论什么重均分子量可优选用于关节病治疗是预料不到的。相同的问题也在软组织如韧带的病症中发生，以致在这些例子中，粘度和粘弹性之间的适当的平衡是必要的。因此，什么是关于分子量、具体关于用于这些治疗的透明质酸的所得到的物理性质的最适合种类的透明质酸的问题仍然是未解决的问题，并且，对具有与其重均分子量无关的合适的粘度和适当的粘弹性的透明质酸制剂的需要仍未解决。概述本发明提供了透明质酸样品的二元混合物，所述透明质酸样品具有关于粘度和/或粘弹性和主要不同分子量的所述HA样品的不同特征并具有被证实在它们的使用中，特别是在治疗关节病中，在粘性模量和粘弹性模量之间的适当的平衡的这些HA混合物。因此，本发明的第一目的是以盐形式的两种透明质S复样品的二元混合物，其中所述二元混合物于水溶液中在10mg/ml的浓度和在25。C的温度下的流变特征是-在1秒的剪切速率下至少5Pa/秒的值的流动粘度，-在1Hz下具有至少7.5Pa的G'和至少7Pa的G"的动态流变学的粘弹性，并且其中所述两种透明质酸样品含有a)第一样品，其重均分子量低于l，OOO，OOODa;b)第二样品，其重均分子量高于l,500,000Da。本发明的透明质酸样品的二元混合物适于恢复滑液弹性和生物学润作为通过关节内应用的在关节镜检查中的辅剂和通过关节外应用用于软组织病症的用途。将从下文阐述的详细描述中，更好地理解这些目的和其他目的以及本发明的特征和优点。附图简述盟丄显示了低重均分子量透明质酸(LMHAo,)、高重均分子量透明质酸(HMHA■，口)和以80:20w/w比的相同的LMHA:HMHA的混合物(令，O)的动态流变学G'/G"。明显的是，跃迁(transition)G^G"是较低频率的转换且增加了在HMHA的存在下LMHA溶液的弹性行为。图2显示了混合物的组合物对作为低重均分子量透明质酸(LMHA□)、高重均分子量透明质酸(HMHA■)、以80:20(O)和60:40(命)w/w比的相同的LMHA:HMHA的混合物的频率的函数的复数粘度的影响。图3显示了低重均分子量透明质酸(LMHAo，)、高重均分子量透明质酸(HMHA□,謹)和以50:50w/w比的相同的LMHA:HMHA的混合物(命，^)的动态流变学。明显的是，跃迁G^G"在低频率出现且增加了在添加HMHA下LMHA溶液的弹性行为。图4显示了混合物的组合物对作为低重均分子量透明质酸(LMHA□)、高重均分子量透明质酸(HMHA■)和以50:50w/w比的相同的LMHA:HMHA的混合物(O)的频率的函数的复数粘度的影响。图5显示了作为剪切速率的函数的低重均分子量透明质酸(LMHAo)、高重均分子量透明质酸(HMHA參)和以50:50w/w比的相同的LMHA:HMHA的混合物(口)的流动粘度。发明详述本发明的特征和优点在下列描述和从为了例示和非限制目的而给出的优选实施方案中将变得明显。更多的实施方式或变更以及为那些本领域技术人员容易明白的实施方案将被认为在本发明的范围内。本发明允许通过透明质酸样品的二元混合物来克服用于关节病治疗的现有的透明质酸的制剂的缺点，其中所述混合物的一种HA样品给予生物学润滑性质，且第二种样品给予滑液的弹性。如先前所述，具有从500,000至6xl06Da的分子量的HA样品，由于它们的粘度和/或粘弹性，被长久用于关节病的粘度补充治疗。然而，在用于关节的润滑的粘性作用和用于相同的动态运动的粘弹性之间的适当的平衡不是以适当的方式来实现。实际上，熟知的是，当具有低分子量的HA样品显示主要的粘性行为时，具有高分子量的HA样品显示主要的粘弹性行为。其他技术特征如聚合物浓度、交联度，可有助于增加流变性能和所要求的分子量。申请人目前已发现将具有不同重均分子量、从而具有在水溶液中的不同粘度/粘弹性的两种HA样品混合在一起，所得到的HA二元混合物具有在粘性模量和粘弹性模量之间的平衡，其适于在关节病治疗或软组织病症中的粘度补充，是对生物学润滑必要的粘度和对关节的动态运动必要的粘弹性。因此，本发明的透明质酸二元混合物药用级的组合物特别用于在关节炎症和/或外伤疾病中的关节内应用或在软组织病症中的关节外应用，解决了根据在相同的产品的粘度和粘弹性行为，组合适当特征的粘度和粘弹性的上述问题。为实现本发明的目的，透明质酸混合物是二元混合物，其于水溶液中在10mg/ml的浓度和在25。C的温度下具有-在1秒的剪切速率下至少5Pa/秒的值的流动粘度，-在1Hz下具有至少7.5Pa的G'和至少7Pa的G"的动态流变学的粘弹性，并且优选-在1秒的剪切速率下在包括从5Pa/秒至25Pa/秒的范围内的值的流动粘度，-在1Hz下具有在包括从7.5Pa至30Pa的范围内的G'和在包括从7Pa至20Pa的范围内的G"的动态流变学的粘弹性。在10mg/ml的浓度和在25。C的温度下，所述二元混合物的最优选的流变特征是-在1秒的剪切速率下在包括从10Pa/秒至15Pa/秒的范围内的值的流动粘度，-在1Hz下具有在包括从10Pa至15Pa的范围内的G'和在包括从7Pa至10Pa的范围内的G"的动态流变学的粘弹性。在本发明的一个实施方案中，HA二元混合物用含有不同重均分子量的透明质酸样品是可获得的。特别地，具有较低重均分子量的HA的样品具有低于l,OOO，OOODa(LMHA),并优选在包括从300,000Da至1,000,000Da的范围内的重均分子量，且最优选具有500,000-900,000Da的重均分子量。通常来说，在这些分子量的范围内，一些透明质酸样品各自具有在0.1s—1时的约1Pa.s的粘度和在1Hz下低于G"的约1Pa弹性模量G'。具有高重均分子量的第二HA样品具有不少于1，500,000Da(HMHA),并优选在包括从1,500,000Da直到6,000,000Da的范围内的重均分子量，且优选具有在1,800,000Da和3,500,000Da之间的重均分子量。通常来说，在这些分子量的范围内，一些透明质酸样品各自具有在0.31s"时的大于或等于70Pa.s的粘度和大于65Pa的粘弹性模量G'。依照通过适于实现本发明目的的动态流变学的流动粘度和粘弹性的具有流变特征的HA二元混合物可由本文上述的两种HA样品以在它们之间的适当的w/w比来获得。本发明的一个优选的实施方案是含有以盐样品形式的两种透明质酸的二元混合物，其中于水溶液中在10mg/ml的浓度和在25。C的温度下，所述二元混合物的流变特征是-在1秒的剪切速率下在包括从5Pa/秒至25Pa/秒的范围内的值的流动粘度，-在1Hz下具有在包括从7.5Pa至30Pa的范围内的G'和在包括从7Pa至20Pa的范围内的G"的动态流变学的粘,弹性，并且其中所述两种透明质酸样品含有a)第一样品，其重均分子量在包括从300,000Da直到1,000,000Da的范围内，b)第二样品，其重均分子量在包括从1,500,000Da直到6,000,000Da的范围内，成为通过以在包括从80:20至20:80的范围内的w/w比来混合以盐样品形式的透明质酸a)和以盐样品形式的透明质酸b)可获得的所述二元混合物。其他优选的透明质酸样品a)和透明质酸样品b)的w/w比在包括乂人40:60至60:40的范围内，且最优选w/w比为50:50。为了本发明的目的，用于制备二元混合物的HA样品优选但不限于，线性的透明质酸，同时其盐是碱金属盐，并优选Na盐或K盐。关节外应用，本发明的透明质酸二元混合物的组合物可以是为了预见的用途与可接受的稀释剂和赋形剂结合的药用级的组合物，所述稀释剂和赋形剂优选緩冲介质和溶剂化介质，其中透明质酸是从IOmg/ml至20mg/ml的浓度。在优选的实施方案中，透明质酸是10mg/ml或20mg/ml的浓度。优选地，稀释剂是在生理pH下的具有适当的同渗浓度的緩沖溶剂化介质。在下文给出的试验部分包括可商购的所选的HA样品及其二元混合物(部分A)的物理性质(即流变学)的特征的表征，并且包括用也可商购的并且对于受管理问题可使用的HA药品对具有骨关节炎患者进行的临床研究(部分B)。为了表征和评价本发明的透明质酸混合物在所进行的试验中的流变行为，在粘性作用(viscouscontribution)作为脉动(md/s)或频率(Hz)的函数(co)的同时测定应力响应并且测量弹性作用(elasticcontribution)。实际上，固有粘度可在零剪切速率和零聚合物浓度下获得，并且熟知的是，经验关系式存在于在给定的溶剂和给定的温度下的固有粘度和分子量之间(对于在0.15MNaCl中的HA,Mark-Houwink关系式[rj](mL/g)二0.0336MQ79)。此外，溶液的粘度也直接取决于这个固有粘度以及在低剪切速率下的聚合物浓度。在给定的临界聚合物浓度下(取决于这两种因素)，链重叠，并且一个在流动试验中获得非牛顿性行为。因此，评价聚合物溶液特别是评价透明质酸溶液的最重要的技术特征是表征了聚合物溶液的粘弹性(其在动态流变试验中获得，在所述试验中当考虑线性条件时，强加净皮应用在溶液上的应力的频率或脉动会变化)。试验部分部分A:二^遂合參^^悉^T/;f力材料与方法为了研究,已使用不同的透明质酸样品由ARD生产的具有由生产商公布的约1()S的MW的ARD样品(批次n。03167)(样品1);具有由生产商公布的2.59xl(^的MW的HyluMed样品(Genzyme，批次690113)(样品2);具有由生产商公布的6xl0、々MW的含有20。/。交联HA和80%直链HA的HylanGF20或Synvisc(Genzyme)(样品3);Suplasyn(Bioniche)，具有由生产商公布(MW500,000-1,000，000Da)的MW的来自细菌源的直链HA(样品4);80/20的ARD和HyluMed样品的混合物(样品5);60/40的混合物(样品6);50:50的HylanGF20或Synvisc与Suplasyn的混合物(样品7)。已经在温度、溶剂、剪切速率的确定条件下测量未由生产商公布的HA样品的粘度。已经用设置有平面-锥体几何构型的TA仪器流变仪在25。C的温度下分析了在0.15MNaCl水溶液中的10mg/ml的浓度的这些样品的流变行为；所述锥体为4cm直径和3.59度角。该仪器允许进行(1)流动试验(作为以s"表示的剪切速率的函数，测定以Pa.s的粘度)和(2)动态试验，测量作为变形的频率的函数(以Herz的co)、以Pa表示的储能模量(G')和损耗模量(G");G'表示在应力下溶液的弹性行为(固体样特征)以及G"表示粘性特征。对于粘弹性溶液，在低频率下得到G"〉G',然后G'和G"在coq下交叉，并且G'在高频下变得比G"大。还计算复数粘度|<1(Pa.s),并且该复数粘度结合G'和G"。为恢复滑液的粘弹性，需要制备具有低于0.5Hz(相当于由Balazs给出的行走频率C8a/aa￡J.，G%fe"r/zer/^ofog/ca/o/Ae/Wrace〃w/ww"Wx(透明质酸的流变性质和作用.细胞内基质的化学和分子生物学)."，翁禅Sa/azs五.A，爿cacfem/cpmss，丄o"tfo"和A^，1970,1241-1254))的①o的溶液。设置有3个在线4全测器(折射计、WyattMALLS光散射计、粘度计)的空间排阻色谱法(WatersGPCVAlliance2000)用来在缺乏4交准下测定重均分子量和所有分子量分布，在我们看来，这是唯一有效测定分子量的技术。在0.1MNaN03洗脱液中制备0.5g/L的样品，并在108微升的注射之前通过多孔膜(0.2孩吏米孔径)过滤该样品。不同混合物可通过混合可控量的每种HA样品来制备，如保持固定在10g/L的总聚合物浓度。HMHA以趋于0.5Hz的临界值的相对低的值强加cDo的位置；LMHA允许保持HA注射时的总量，同时也以与软骨更好地接触为条件以形成富含HA的界面区。对于ARD和Genzymes样品和其二元混合物，在表1中报道所获得的结果，并且对于Synvisc和Suplasyn样品及在下文报道的临床试验中使用的其混合物，在表2中报道所获得的结果。表1.混合物组合物对性质的影响。溶液在0.15MNaCl中，10g/L,T=25°C。(ARDL固A/GenzymeHMHA)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>在图1-2中显示相同的结果。在图1中，所显示的是，当ARD样品较少缠结时，Genzyme样品有4艮好的粘弹性。对于ARD,G'、G"跃迁的频率coo位于更高的值(3.7Hz>Genzyme的0.064Hz),但位于模量G'=20Pa相同的值。在图2中，对于相同的溶液，给出作为剪切速率的函数的复数粘度；其显示为随着增加粘弹性缠结的溶液的剪切速率而正常的减少。表2.混合物组合物对性质的影响。溶液在0.15MNaCl中，10g/L，T=25。C。(SynviscHMHA/SuplasynLMHA)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>在图3-5中显示相同的结果。在图3中，给出初始溶液和10g/L的50/50%混合物的动态模量。Synvisc在所有所覆盖的频率域中是弹性的；Suplasyn主要是粘性的，在没有模量的交叉点下，与相对低分子量相关。50/50%混合物具有非常有意思的行为，在宽范围的频率中主要是弹性的，具有比行走频率0.5Hz更低的在o=0.075Hz处的交叉点。在图4和图5中，复数粘度|71*|和粘度11给出为剪切速率的函数。Suplasyn因其相对低分子量显示了牛顿平稳段(Newtonianplateau)。部分B:^^^"廢矛^，义W,悉,^的^，^邊效l趁f二无"遂合參在以形成关于目前所使用的、在功效上没有明显差异的从较低分子量至较高分子量范围的几种产品的本发明的HA混合物的优点为目的情况下，已进行对具有膝骨关节炎的患者的临床研究。方法.以随机、预期的、单盲的自然分组招摹被归为膝骨关节炎处理的23位患者(年龄68士8岁；症状平均持续时间7.4+4.1年)，患者没有接触过关节内透明质酸治疗，并且满足包括以下的入围标准>45mm的休息视觉类似物规模(VAS)疼痛、放射照相证实单侧膝1-3级骨关节炎和愿意接受以单个范围或组合范围的分子量的关节内透明质酸治疗，之后开始12周研究。在初始期间随机选择患者，以在3周内接受三种关节内注射系列中之一种Suplasyn(10mg/ml;2ml/注射，MW500,000-1,000,000Da,在下文称为LMW)、Synvisc(8mg士2/lmL;2ml/注射，MW600万Da,在下文称为HMW)或组合的Suplasyn-Synvisc(15mg/1.5mL+12mg±3/1.5ml;3ml/注射，在下文称为L-HMW)。患者自行斟酌决定随意使用伴随的药物疗法或物理疗法。患者在每次研究出诊时和最后注射后一周完成静息和行走VAS疼痛(主要的功效变量)的初始期间评价、收集5点的分类的总体满意度评分以及不良事件的记录和伴随的治疗模态用途。指导患者在12周时回来进行包括不良事件的重复测量。结果.随机将患者分至三个组中的一个[LMW二9;HMW=6;L-HMW=8]。组之间没有观察到初始期间的人口统计、骨关节炎症状的等级、较低MW或较高MW的产品用途的早期使用或初始期间功效结果的差异。两位受治疗者(LMW;L-HMW)因非研究相关的理由退出。在4周和12周时，在任何组之间，在限于疼痛和局部胂胀的不良事件上没有差异(所有<1.3%)。分别在4周和12周时，所有三个组的行走VAS疼痛的变化从初始期间显著改善LMW(81.3%,pO.001;63.6%,pO.001);HMW(78.1%,pO.001;59.1%,p〈0.001)和L-画W(50/50混合物)(89.3%,pO.001;79.6%,pO.OOl)。在4周和12周两个中时，与互相没有区别的其他组比较，L-HMW组的患者有显著更大的改善(p0.007)。类似地，在4周和12周时，所有3组的静息VAS疼痛从初始期间显著减少，然而，各组之间没有显著性差异。在4周时伴随的治疗模态的使用在组之间并没有差异，但是在12周时与其他2组比较，使用伴随的治疗模态的LMW患者显著更多(p0.05)。在12周时，与其他2组比较，L-HMW的总体满意度显著更高(p〈0.005)。结论.使用任何低、高或组合的MW的关节内透明质酸注射剂在改善具有膝骨关节炎的患者的静息中是高度有效的，且在改善行走疼痛中更是这样。在12周时，在接受组合的L-HMW组的患者中静息和活动结果两者中的更大改善、和伴随的更多患者的满意度以及伴随的治疗模态的更少使用表明了，组合在范围内的MW透明质酸可能是有利的，特别是在活性骨关节炎患者中有利。因此，对于治疗关节、特别是选自由骨关节炎、关节病组成的组的外伤关节病和/或炎症关节病的特定病理疾病的治疗以及对于包括半月板石皮裂的各种征候的关节镜检查期间的辅助治疗，通过关节内应用施用本发明的HA二元混合物可能是有用的。本发明的HA混合物的另一个应用是在软组织例如韧带的病症中的关节外应用，所述病症主要是劳损、扭伤和外伤。根据它们在滑液的粘度补充和基质软骨的软骨保护中的用途，HA二元混合物可通过以药物组合物与本领域技术人员已知的或甚至新近已知的可预测的药物用途相容的赋形剂、分散剂和稀释剂结合的关节内给药来施用。在一个实施方案中，本发明的混合物可以是可溶解的或溶解在生理等渗水溶液，优选盐水中，然而不排除非电介质等渗水溶液中。剂量取决于病状的严重性以及患者的情况(年龄、体重、一般健康状况)。出于示例性目的，但不限于此，根据本发明混合物的剂量可在10mg/lml至20mg/lml之间的范围内，注射体积为2ml至6ml,以单一给药或每周重复给药，持续范围从l周至3周的时期。权利要求1.一种二元混合物，其包含以盐形式的两种透明质酸样品，其中所述二元混合物于水溶液中在10mg/ml的浓度和在25℃的温度下的流变特征是-在1秒的剪切速率下至少5Pa/秒的值的流动粘度，-在1Hz下具有至少7.5Pa的G′和至少7.0Pa的G＂的动态流变学的粘弹性，并且其中所述两种透明质酸样品含有a)第一样品，其重均分子量低于1,000,000Da，b)第二样品，其重均分子量高于1,500,000Da。2.根据权利要求1所述的二元混合物，其中所述二元混合物于水溶液中在10mg/ml的浓度和在25。C的温度下的所述流变特征是-在1秒的剪切速率下在包括从5Pa/秒至25Pa/秒的范围内的值的流动粘度，-在1Hz下具有在包括从7.5Pa至30Pa的范围内的G'和在包括从7.0Pa至20Pa的范围内的G"的动态流变学的粘弹性。3.根据权利要求2所述的二元混合物，其中所述二元混合物于水溶液中在10mg/ml的浓度和在25。C的温度下的所述流变特征是-在1秒的剪切速率下在包括从10Pa/秒至15Pa/秒的范围内的值的流动粘度，-在1Hz下具有在包括从10Pa至15Pa的范围内的G'和在包括从7.0Pa至10Pa的范围内的G"的动态流变学的粘弹性。4.根据权利要求1所述的二元混合物，其中所述两种透明质酸样品含有a)第一样品，其重均分子量在包括从300,000Da直到l,OOO，OOODa的范围内，b)第二样品，其重均分子量在包括从1,500,000Da直到6,000,000Da的范围内。5.根据权利要求4所述的二元混合物，其中所述两种透明质酸样品含有a)第一样品，其重均分子量在包括从500,000Da直到卯O,OOODa的范围内，b)第二样品，其重均分子量在包括从1,800,000Da直到3,500,000Da的范围内。6.才艮据权利要求1所述的二元混合物，其中以盐样品形式的所述透明质酸a)和以盐样品形式的透明质酸b)是在包括从80:20至20:80的范围内的w/w比。7.才艮据权利要求6所述的二元混合物，其中所述透明质酸样品a)和所述透明质酸样品b)是在包括从40:60至60:40的范围内的w/w比。8.根据权利要求7所述的二元混合物，其中所述透明质酸样品a)和所述透明质酸样品b)是在50:50的w/w比。9.一种以盐形式的两种透明质酸样品的二元混合物，其中所述二元混合物于水溶液中在10mg/ml的浓度和在25。C的温度下的流变特征是-在1秒的剪切速率下在包括从5Pa/秒至25Pa/秒的范围内的值的流动粘度，-在1Hz下具有在包括从7.5Pa至30Pa的范围内的G'和在包括从7.0Pa至20Pa的范围内的G"的动态流变学的粘弹性，并且其中所述两种透明质酸样品含有a)第一样品，其重均分子量在包括从300,000Da直到1,000,000Da的范围内，b)第二样品，其重均分子量在包括从1,500,000Da直到6,000,000Da的范围内，成为通过以在包括从80:20至20:80的范围内的w/w比来混合以盐样品形式的透明质酸a)和以盐样品形式的透明质酸b)可获得的所述二元混合物。10.根据权利要求9所述的二元混合物，其中所述两种透明质酸样品含有a)第一样品，其重均分子量在包括从500,000Da直到卯O，OOODa的范围内，b)第二样品，其重均分子量在包括从1,800,000Da直到3,500,000Da的范围内。11.根据权利要求9所述的二元混合物，其中所述透明质酸样品a)和所述透明质酸样品b)是在包括从40:60至60:40的范围内的w/w比。12.根据权利要求11所述的二元混合物，其中所述透明质酸样品a)和所述透明质酸样品b)是在50:50的w/w比。13.—种药物组合物，其用适当的稀释剂或赋形剂和根据权利要求1至12任一项所述的以盐形式的两种透明质酸样品的二元混合物来制备。14.根据权利要求13所述的药物组合物，其中所述以盐形式的两种透明质酸样品的二元混合物是在包括从10mg/ml至20mg/ml的范围内的浓度。15.根据前述权利要求1至12任一项所述的以盐形式的两种透明质酸伤关节病的药物组合物的用途。16.根据前述权利要求1至12任一项所述的以盐形式的两种透明质酸样品的二元混合物用于制备通过关节内应用用于关节镜检查期间的辅助治疗的药物组合物的用途。17.根据权利要求15和16所述的以盐形式的两种透明质酸样品的二关节病或半月板破裂组成的组。18.根据前述权利要求1至12任一项所述的以盐形式的两种透明质酸样品的二元混合物用于制备在软组织的病症中的关节外应用的药物组合物的用途。19.根据权利要求18所述的以盐形式的两种透明质酸样品的二元混合物的用途，其中所述病症选自由劳损、扭伤和外伤组成的组。全文摘要本发明涉及存在于透明质酸样品的二元混合物中的透明质酸组合物，所述透明质酸样品具有主要不同的重均分子量以及因而具有在水溶液中不同的流变性质。所得到的组合物已证实具有粘度和粘弹性之间的平衡的特有流变行为。因此，这些透明质酸的组合物具有通过关节内施用治疗关节病或具有在软组织病症中的关节外应用的用途。文档编号A61K31/726GK101437527SQ200680054502公开日2009年5月20日申请日期2006年5月11日优先权日2006年5月11日发明者桑德拉·戈博,罗伯特·派特莱拉申请人:桑德拉·戈博;罗伯特·派特莱拉