专利名称：：包含蜕皮类固醇的组合物的用途的利记博彩app包含蜕皮类固醇的组合物的用途本发明涉及包含蜕皮类固醇、蜕皮类固醇衍生物或含其的天然植物或动物提取物的组合物的用途，所述用途为刺激皮肤和粘膜细胞的天然防御例如p53蛋白，以对抗由于暴露于紫外线辐射而引起的后果。蜕皮类固醇是携带7-烯-6-酮基团和14-ot-羟基的多羟基类固醇，其在A环和B环之间呈顺式连接。其是昆虫蜕皮的激素，然而也常常在植物中发现(LafontR.，ChemListy97，280-281，2003)。对于哺乳动物(包括人)的许多效应已经得到证实-刺激细胞的生长、繁殖、增殖和分化，刺激蛋白质、糖类和脂类的代谢，刺激神经系统和心血管系统，刺激肝脏和肾脏的解毒作用；-抗炎和免疫调节效应；-抗生效应(LafontR.和DinanLJournalofInsectScience3:7，30pp，2003,可在线查阅insectscience.org)。文献CN-860106791-A涉及包含p-蜕皮素的护肤美容产品，它能防止皮肤老化、保持皮肤的水分、以及消除痤疮和褐色斑。文献WO-90/03778-A涉及包含例如蜕皮类固醇的基于水化层状相或脂质体的组合物，该组合物尤其能够作为促进愈合或抗皱组合物进行使用。文献WO-94/04132-A涉及包含例如蜕皮类固醇的美容或皮肤学组合物，该组合物尤其旨在使皮肤表面更加光滑和柔软，加强皮肤的水屏障的功能，以及增加表皮细胞的致密性。文献FR-2801504-A涉及包含至少一种蜕皮类固醇和至少一种环烯醚薛类化合物的新疆筋骨草植物的提取物，以及包含该提取物的美容组合物，以用于改善角质形成细胞的分化，或者调节表皮中的水流量以及水的重吸收，或者使表皮水化。专利US-6641848涉及包含三碎皂苷和蜕皮类固醇的联合的组合物，以用于刺激皮肤中iv型胶原的合成。文献FR-2863378-A涉及蜕皮类固醇用于制备抗脱发的美容或皮肤学组合物的用途。文献FR-863886-A涉及蜕皮类固醇受体的配体在制备用于保持皮肤内环境稳定的组合物中的用途。此外，蜕皮甾酮还被广泛用于养蚕业，以用于控制蚕的蜕皮，并且它还已进入非常多的用于提高肌肉质量的食品补充物的组成中(LafontR.等人，2003，已引用)。另一方面，皮肤反复暴露于紫外线辐射导致皮肤和粘膜细胞中存在的DNA的损伤，尤其是在叫做成纤维细胞的细胞中，该细胞负责更新构成真皮的细胞外基质的大分子(GoukassianD.等人，FASEBJ.，14:1325-34，2000)。这些损伤可被天然地修复。但是，当未能修复时，就可能对细胞产生严重后果，和甚至可能导致光致癌(GoukassianD.A.和GilchrestB.A,，RejuvenationRes.7(3):175-85，2004)。此外，人们长期以来一直认为暴露于阳光的皮肤的细胞会更快地失去其繁殖的能力(GilchrestB.A.,JGerontol.，35(4):537-41，1980)。不再能够繁殖的细胞称为衰老的细胞，其特征为大量表达在PH6时具有活性的p-半乳糖苷酶。与在经过连续传代而变老的细胞的培养物中(DimriG.P.等人，Proc.Nat.Acad.Sci.USA92:9363-67，1995)或者在已经历反复紫外线应激的培养物中(ChainiauxF.等人，Int.J.Biochem.Cell.Boil.34(11):1331-9，2002)—样，人们在老年人的皮肤的角质形成细胞和成纤维细胞中间也发现了较多的表达这种P-半乳糖苷酶的细胞。此外，近来已表明(Debacq-ChainauxF.等人，J.Cell.Sci.118(Pt4):743-58，2005)，成纤维细胞随年龄增加会丧失一部分其修复由紫外线(UV)辐射引起的损伤的能力(GoukassianD.等人，2000，已引用)。因此，显然，令人十分感兴趣的是，能够拥有用于刺激由紫外线辐射引起的皮肤细胞损伤的天然修复的手段，以便延迟丧失繁殖能力的衰老细胞的出现。因此，本发明的目的之一就是提供用于刺激细胞的天然防御例如p53蛋白的手段，以对抗由于暴露于紫外线辐射而引起的皮肤细胞损伤。这一目的以及随后出现的其他目的，是通过如此来达到的，即使用包含蜕皮类固醇、蜕皮类固醇衍生物或含其的天然植物或动物提取物的组合物来刺激皮肤和粘膜细胞的天然防御，以对抗由于暴露于紫外线辐射而引起的后果。有利地，根据本发明的蜕皮类固醇为蜕皮甾酮。优选地，所述蜕皮类固醇为衍生物形式，例如单或多酰基化尤其是乙酰基化的衍生物、丙酮化合物、磷酸酯。有利地，所使用的蜕皮类固醇也包含在植物提取物例如蛛丝毛蓝耳草(C7a/2""arsc//70油a)、蓝耳草(C，o〃s)、新疆筋骨草(A/〃Wf"rire"s/7/cfl)、伊瓦筋骨草(^/wfl、金疮小草f/ec"/z76e/7s)、伪泥胡菜(Se_r_r"z/7acoro""s)、鹿草(Zewzea(或i力apo/2〃cu迈)cs"力a迈o油s)、七叶一枝花(户ar/spo/y;力y7/a)、南美宽(尸尸a/V7aps/2/ci//afa)、户尸fl/Y7a/res//3o/f/es、"e"op/zy"a、多足蕨(尸oi，cf/咖7"/gare)、尸o/，d/咖awre亂尸o77PCid油7e;7油;7fer/s、黄雪轮(o"tes)、川牛膝(C/由7ao/77c//7"/s)、头花杯览(C7""7a，""a)、土牛膝(Jc力/i^"/esas/7ers)、二齿牛膝(Jc力/ra/^es6/^e/3faffl)、-菱菜(^/7//7ac/so/eracea)、昆i若阿幕(C力e/70/7od/i;iZ7《/7//20<3)的提取物中，或者包含在动物提取物例如家蚕(A0/^/I/Z70W)的提取物中。根据本发明，所述组合物还括包含-至少一种抗氧化剂，例如维生素E、维生素C，类胡萝卜素、黄酮类化合物、异黄酮类化合物、多酚、原花青素、白藜芦醇、表没食子儿茶素没食子酸酯、染料木碱、大豆黄素、芒柄花素、雌马酚、绿茶提取物。-至少一种抗炎物质，例如光果甘草(C7ycyrr力/zag/s6ra)提取物、甘草次酸。优选地，根据本发明的皮肤学或美容组合物用于刺激由于暴露于紫外线而对皮肤造成的细胞损伤的修复，其包含0.001至95重量％，和更准确地0.01至1重量％的蜕皮甾酮，有利地，更特别地将该组合物涂在皮肤上。其也可以通过口服途径进行施用，例如以食品补充物的形式。优选地，利用该组合物来刺激皮肤或粘膜细胞中p53蛋白的活性。不过，现在已完全出乎意料和令人惊讶地发现，如果在进行照射之前，通过添加蜕皮类固醇来对经历反复紫外线暴露的成纤维细胞的培养基进行补充，就能非常显著地减少进入衰老状态的细胞的数目，所述衰老状态的特征在于出现与之相关的P-半乳糖苷酶活性("衰老相关的P-半乳糖苷酶"或"SAe-gal")。以下没有表现出任何限定特性的描述，特别地涉及本发明的一些实施例，这些实施例使得本领域技术人员能够更好地理解本发明。在下面的实施例和组合物中所使用的蜕皮类固醇(在这种情况下，蜕皮甾酮)包含在植物提取物例如蛛丝毛蓝耳草、蓝耳草、新疆筋骨草、伊瓦筋骨草、金疮小草、伪泥胡菜、鹿草、七叶一枝花、南美苋、户尸a/Y7a/re^2'/2o/ei、尸尸s/V7a"e/7。;AK"a、多足蕨、户o/j/0d/i/边awre亂？。///7<^//"迈7e/7油/^er/s、黄雪轮、川牛膝、头花杯芄、土牛膝、二齿牛膝、菠菜、昆诺阿藜的提取物中，或者包含在动物提取物例如家蚕的提取物中。实施例1:通过蜕皮类固醇来减弱由于反复暴露于紫外线辐射而引起的对于培养的成纤维细胞的损伤。所用的蜕皮类固醇为纯度大于90%蛛丝毛蓝耳草提取物的蜕皮齒酮样品，由昆明植物研究所(中国云南昆明)提供。按传统方法培养皮肤的成纤维细胞，其为与ChainiauxF等人(2002，已引用)所用的同样的林系BJ。经证实，在0.4-250jug/ml的范围内，在24小时内，蜕皮齒酮无细胞毒性。在5天中，将成纤维细胞每天一次暴露于剂量为500mj/cn^的紫外线B中。每次照射之后，将所述培养基用含(0.4)、2、10、50和250jag/ml蜕皮甾酮的培养基替换。每次新的照射之前，将这些培养基用不含蜕皮甾酮的培养基替换。在最后一次照射之后，让细胞与补充有蜕皮齒酮的培养基接触72小时，每24小时更新一次培养基。在该最后的接触时间段结束时，根据DimriGP等人的方法(已引用)，通过比色法以及通过在BioAnalyseur上的荧光，评价pH6下P-半乳糖苷酶的活性("衰老相关的P-半乳糖苷酶"或"SAp-gal")，每个蜕皮甾酮浓度至少测400个细胞。表达SAp-gal的细胞百分数的平均值如下<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>可以看出—由于反复暴露于紫外线B而引起的损伤导致呈现出SAp-gal活性的成纤维细胞显著增加，所述SAP-gal活性是不再能够繁殖的细胞的特征(称为"衰老")。—在照射后用蜕皮甾酮对细胞进行处理，从10ng/ml的浓度开始使得能够减弱由紫外线引起的损伤，而从50jig/ml起，效果则更为显著，这表现为"衰老的"成纤维细胞的数目保持与未经照射的培养物相同或者更少。因此看来，根据本发明，使用蜕皮类固醇使得能够很好地减弱由于暴露于紫外线辐射而引起的细胞损伤。实施例2:进行了与实施例1相同的实验，其中仅在5次照射后的72小时恢复期的时候摻入蜕皮甾酮。对于p-半乳糖苷酶活性进行测定给出了如下结果条件通过比色法测定的P-半乳糖苷酶对照UVB+Ojig/ml蜕皮甾酮UVB+50pg/ml蜕皮甾酮UVB+250ng/ml蜕皮甾酮13.4±144.0±634.8±346.3±4因此可以看出，在一系列暴露于紫外光B辐射后，蜕皮甾酮严格说来没有了修复效应。实施例3:进行了与实施例1相同的实验，但在每次紫外线B照射前24小时(包括第一次照射前)以及在5次照射后72小时期间向细胞培养基中掺入蜕皮齒酮。对于细胞中(3-半乳糖苷酶活性进行测定给出了如下结果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>因此可以看出，在uv照射前用蜕皮齒酮处理成纤维细胞使得能够减少衰老细胞的出现。实施例4:在经历了由细胞内所含DNA的损伤所引起的应激之后，细胞激活p53蛋白(被称为"基因组卫士")，其诱导初始损伤的修复过程(参见deMagalhaesJ.P.等人，ExpertGerontol.39(9):1379-89，2004)。已评价了在如在实施例l那样经历了反复的紫外线暴露的实施例1的成纤维细胞中p53表达的刺激在每次暴露前24小时以及最后一次暴露后，向培养基中加入250pg/ml蜕皮甾酮。第一"对照"培养物经历相同的使用250mg/l蜕皮甾酮的处理，但没有紫外线照射。第二"对照"培养物经历与经处理的培养物相同的紫外线暴露，但完全没有蜕皮甾酮。在最后一次照射之后6小时，提取成纤维细胞的蛋白质并用Pierce公司"MicroBCA试剂盒，，系统来测定其含量。然后，在用寡核苷酸包被的微量培养板中孵育5ng核蛋白质，所述寡核苷酸携带可以与转录因子p53结合的特异性DM序列。最后，借助这种蛋白质的特异性抗体以及缀合有过氧化物酶的抗体(TransAMdeActiveMotif效寸试，Rixensart，Belgique)，通过比色法来测定被结合的p53蛋白的含量。所得结果如下:<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>因此，令人吃惊地发现，在不存在uv时，蜕皮甾酮处理可使成纤维细胞的p53蛋白含量增加至6倍。因此还确证了，在不存在蜕皮甾酮时，暴露于紫外线使成纤维细胞的p53蛋白含量增加至9倍。最后，已表明，在蜕皮齒酮存在下暴露于紫外线的成纤维细胞所表达的p53蛋白为既未经处理也未暴露的"对照，，细胞的16倍。该实施例使得能够令人吃惊地证明，蜕皮甾酮刺激了p53防御蛋白，该蛋白质是防止由紫外线辐射引起的损伤所必需的，例如防止丧失繁殖能力的衰老细胞的出现。组合物1:刺激天然防御的美容霜剂。为了制备传统的水包油乳液，如此来进行，即于851C在搅拌下混合疏水相和水相，其中含有各种用于赋予该产品以常规使用特性的原料，这些特性例如为稳定性、安全性、易涂敷、愉快的最终触感等等。在搅拌下进行冷却，并且当温度降至45t:时，加入0.1重量％的蜕皮甾酮。优选在早晨将此霜剂应用于面部、颈部和手，因为刺激天然防御的成分渗透入活细胞中需要时间，以便在中午当太阳uv照射强度达到最大时，处于接触之中。组合物2:刺激天然防御并具有抗氧化保护的美容霜剂。按如下所述制备包含ot-生育酚以及醋酸oc-生育酚的水包油乳液；并且在冷却至45X:时，加入蜕皮掛酮和磷酸维生素C，其量足以达到如下在最终组合物中的以重量计的浓度-蜕皮甾酮0.1%-a-生育酚0.05%-醋酸a-生育酚0.2%-磷酸维生素C,镁盐0.2%。该制剂为日霜。组合物3:刺激天然防御并具有滤过性保护的美容霜剂。如制备组合物l那样，制备添加有氧化钛的水包油乳液，然后于45。C在搅拌下，按2重量％加入鹿草的无水醇提取物。保护系数SPF等于6。本产品用于每天早晨应用在未遮盖的皮肤部位，并且如果可能，在中午应重新应用。组合物4:用于敏感型皮肤的刺激天然防御的美容凝胶。制备水性丙烯酸凝胶，其中蜕皮甾酮含量为o.i重量％,并且还包含2重量％的黄茶(ScWe/ZaWa6aicfl/ei3s/s)的水二醇(hydroglycolique)提取物。组合物5:刺激天然防御的皮肤学凝胶。制备含0.2重量％蜕皮甾酮的水性丙烯酸凝胶。此凝胶于早晨或白天中应用于暴露的皮肤部位。组合物6:食品补充物，其用于在完全暴露于阳光之前刺激皮肤的天然防御。釆用传统技术，从包含20重量％蜕皮齒酮的粉末制剂来制备剂量为15mg蜕皮甾酮/片的片剂。所述片剂在早晨和中午进餐时以少量水送服，其中根据预期的接受阳光照射的强度和持续时间，每次服用1至2片。组合物7:食品补充物，其用于在完全暴露于阳光之前刺激皮肤的天然防御。制备胶嚢，其包含15mg蛛丝毛蓝耳草提取物(含约90重量％的蜕皮甾酮)，和由明胶外壳构成的固体(即约10重量°/。)。所述胶嚢如组合物6的片剂一样进行服用。組合物8:食品补充物，其用于使皮肤对于暴露于阳光做好准备。制备包含粉末制剂的胶嚢，其含20重量％蜕皮甾酮(剂量为10mg蜕皮甾酮)、15mg绿茶提取物、25mg维生素C/胶囊。建议的日剂量为每天2-4粒胶嚢，分两次服用，早晨和中午进餐时用少量水送服。组合物9:饮料，其用于在完全暴露于阳光之前刺激皮肤的天然防御。制备包含20重量％菠菜浓缩汁和0.05重量％蜕皮甾酮的基于豆浆的饮料。该饮料以100ml的剂量给予。建议在早晨和中午进餐时各饮用一剂。权利要求1.包含蜕皮类固醇、蜕皮类固醇衍生物或含其的植物或动物提取物的组合物的用途，所述用途为用于刺激细胞的天然防御以对抗由于细胞暴露于紫外线辐射而引起的后果。2.权利要求1的用途，其特征在于，所述蜕皮类固醇为蜕皮甾酮。3.权利要求1的用途，其特征在于，所述蜕皮类固醇为衍生物形式，例如单或多酰基化尤其是乙酰基化的衍生物、丙酮化合物、磷酸酯。4.权利要求1的用途，其特征在于，所使用的蜕皮类固醇包含在植物提取物例如蛛丝毛蓝耳草、蓝耳草、新疆筋骨草、伊瓦筋骨草、金疮小草、伪泥胡菜、鹿草、七叶一枝花、南美苋、尸尸a/Y7a/re"./2o/des、户尸fl/V7fl"e/o;7Ay//a、多足蕨、户o7/;70(l/wz7awre"/zz、户o/ZPod/i/迈/ep/i/o;^er"、黄雪轮、川牛膝、头花杯苋、土牛膝、二齿牛膝、菠菜、昆诺阿藜的提取物中，或者包含在动物提取物例如家蚕的提取物中。5.权利要求1至4中任一项的用途，其特征在于，所述组合物还包含-至少一种抗氧化剂，例如维生素E、维生素C，类胡萝卜素、黄酮类化合物、异黄酮类化合物、多酚、原花青素、白藜芦醇、表没食子儿茶素没食子酸酯、染料木碱、大豆黄素、芒柄花素、雌马酚、绿茶提取物。-至少一种抗炎物质，例如光果甘草提取物、甘草次酸。6.权利要求2的用途，其特征在于，所述组合物包含0.001-95重量％的蜕皮甾酮。7.权利要求6的用途，其特征在于，所述组合物包含0.01-1重量y。的蜕皮甾酮。8.权利要求1至7中任一项的用途，其特征在于，所述组合物用于局部应用。9.权利要求1至7中任一项的用途，其特征在于，所述组合物用于食用。10.权利要求1至7任一项的用途，其特征在于，所述组合物刺激皮肤或粘膜细胞中p53蛋白的活性。全文摘要本发明涉及包含蜕皮类固醇、蜕皮类固醇衍生物或含其的天然植物或动物提取物的美容组合物、药物组合物或作为食品补充物的组合物的用途，即用于刺激细胞的天然防御例如p53蛋白，以对抗由于细胞暴露于紫外线辐射，尤其是太阳辐射而引起的后果。文档编号A61K8/63GK101374496SQ200680051526公开日2009年2月25日申请日期2006年11月13日优先权日2005年11月25日发明者A·梅贝克,杨崇仁申请人:安植物顾问有限责任公司