肝细胞生长因子内含子融合蛋白的利记博彩app

专利名称：：肝细胞生长因子内含子融合蛋白的利记博彩app肝细胞生长因子内含子融合蛋白相关申请本申请要求PeiJin、H.MichaelSh印ard和IreneNi于2005年11月10日提交的、名称为"HEPATOCYTEGROWTHFACTORINTRONFUSIONPROTEINS，，的美国临时申请序列号No.60/735,609的优先jM51益。本申请与PeiJin、H.MichaelShepard和IreneNi于与本申请同曰提交的、名称为"HEPATOCYTEGROWTHFACTORINTRONFUSIONPROTEINS，，的美国申请序列号(代理人案巻号No.17118-045001/2824)相关，该申请也要求了美国临时申请序列号No.60〃35，609的优先权。本申请还与名称为"/AT及6wFi/^oiv尸及or五/ivs;jivz)OF/Z)^7V77F177V(^V/)t/S/iV(75^3/F，的、提交于2004年5月14日的美国申请序列号No.10/846,113以及2005年2月24日公开的相关国际PCT申请No.WO05/016966相关。本申请还与名称为"CELLSURFACERECEPTORISOFORMSANDMETHODSOFIDENTIFYINGANDUSINGTHESAME"的、提交于2005年5月13日的美国申请序列号No.11/129,740以及提交于2005年5月13日的相关国际PCT申请No.US2005/17051相关，本申请还与2005年5月4日提交的、名称为"ISOFORMSOFRECEPTORFORADVANCEDGLYCAT腿ENDPRODUCTS(RAGE)ANDMETHODSOFIDENTIFYINGANDUSINGSAME"的美国临时申请No.60/678,076和与本申请同日提交的名称为"METHODSFORPRODUCTIONOFRECEPTORANDLIGANDISOFORMS，，的美国申请No，(代理人案巻号No.17118-041P01/P2822)相关。在允许的情况下，上述申请、临时申请和国际申请以M文公开中提到的任何申请中的每项的内^jJ通过引用并入本文。发明领域本发明提供了配体的同种型，包括含有内含子编码部分的肝细胞生长因子(HGF)的同种型，以及含有HGF同种型的药物组合物。HGF配体同种型以及含有它们的组合物可用于治疗疾病，例如癌症和其它血管发生性(angiogenic)疾病的方法。背景生长因子是多种不同细胞类型产生的，它们通过自分泌和旁分泌机制施加其影响。它们作为细胞分裂、分化和迁移(migration)的刺激物或抑制物发挥作用，并且参与癌发生(carcinogenesis)，其中，它们影响多种功能，包括细胞增殖、细胞^X(invasion)、转移形成、血管发生、局部免疫系统功能和细胞外基质合成.特别地，肿瘤细胞的^A和随后转移的建立是与癌症;Ol和严重性相关的破坏性亊件。肝细胞生长因子(HGF,也被称为^Hlt因子(scatterfactor))是c-met原癌基因(MET受体)的生长因子配体。在正常组织中，HGF在器官形成和组织再生(包括胚胎组织(包括肝、肾、肺、乳腺、牙齿、胎盘和骨骼肌)的发育)期间，在组织的构建和重构中发挥功能。HGF还在成熟组织的再生和保护中发挥功能。但是，在恶性组织中，肿瘤细胞利用HGF的生物学作用用于它们的侵入和转移行为。HGF通过调控细胞-细胞附着、细胞-基质联结(association)、细胞外基质的蛋白水解破坏、细胞行进(locomotion)和血管发生来促进肿瘤的侵入行为。因为HGF参与增殖性和血管发生性疾病，包括很多癌症，因此，HGF是治疗性介入的把标。已设计了靶向HGF或其受体，MET的小分子治疗剂(therapeutics)。虽然可设计出作为治疗剂靶向此类细胞表面受体和/或其它血管发生受体或其配体的小分子，但是，此类策略有很多局限。小分子可以是不加选择的，其可能影响到并非目标靶的受体。此外，一些小分子与受体不可逆或实质上不可逆结合(即，亚纳摩结合亲和性)。此类手段的价值还没有得到确认。针对受体和/或受体配体的抗体可用作为治疗剂。但是，抗体治疗可能导致受试者的免疫应答，因此，此类治疗通常需要大量适应性处理(taaoring)，以避免治疗中的并发症，因此，人们仍需要治疗下述疾病的治疗剂。所述疾病包括癌症和涉及到不想要的细胞增殖和血管发生性反应的其它疾病。因此，本发明的目的之一是提供此类治疗剂，以及用于鉴定或发现候选治疗剂的方法，以及治疗的方法。概述本发明提供了治疗下述疾病的治疗剂，所述疾病包括癌症和涉及到不想要的细胞增殖、血管发生性和炎症反应的其它疾病。本发明还提供了鉴定或发现候选治疗剂的方法，以^U吏用治疗剂进行治疗的方法。治疗剂是多肽或经修饰的多肽，例如包括拟肽鍵在内的多肽。本发明提供了HGF多肽同种型。所述同种型中包括含有HGF配体K4结构域的全部或部分的经分离的HGF多肽同种型。所述部分^UL以赋予K4结构域所展示出的活性的，或者>^有来自K4结构域的至少10、15、20、25、30或更多个氨基酸。这些同种型中有为内含子融合蛋白的HGF同种型多肽。经分离的HGF多肽同种型还可包括SerP结构域的全部或部分。HGF同种型的实例是下述核苷酸的序列编码的那些，所述核苷酸序列包括选自关联(cognate)HGF基因(即，编码包括所有外显子的HGF配体的基因)(例如，人HGF基因)的内含子l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16和17的内含子的全部或部分。其等位基因的序列示于SEQIDNO:1中。本发明还提供了是其等位变体、物种变体或其它变体的HGF同种型，这包括，例如，这样的同种型，针对其的关联HGF配体与SEQIDNO:1的相应部分编码的氨基酸的序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%或更高的序列同一性。内含子编码部分可以是一个密码子(包括终止密码子)或更多密码子，使得得到的HGF同种型在外显子的末端终止，或者包括内含子编码的1、2、3或更多个氨基酸。本发明还提供了上文所述的经分离的HGF多肽同种型，其包括N末端结构域的全部或部分，Kl结构域的全部或部分，K2结构域的全部或部分，或K3结构域的全部或部分或其任意组合。本发明提供的同种型包括下述核酸分子编码的那些，所述核酸分子包括内含子ll的全部或部分。所述部分可以是一个密码子(包^f止密码子)，使得得到的同种型在外显子的末端终止，并且不包括其它氨基酸，或者所述部分可以是多于一个密码子，使得所述同种型包括内含子编码的氣基酸的l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21个直到^P的M酸。在示例性的实施方案中，同种型包括内含子ll编码的一个、两个或三个氨基酸。本发明提供了下述HGF多肽同种型，其与SEQIDNO:10、12、18或20中任何所示的#^酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性，和/或是其等位变体或物种变体。HGF多肽的示例性等位变体具有SEQIDNO:16所示的4M^酸序列。由此，HGF同种型将包括是特定同种型一部分的任何外显子或内含子中存在的变化。本文提供的HGF同种型变体包括含有与SEQIDNO:10、12、18或20中任何所示的A^酸数量相同的氨基酸的那些变体。本发明提供的同种型包括下述核酸分子编码的那些，所述核酸分子包括内含子13的4^P或部分。所述部分可以是一个密码子(包括终止密码子)，使得得到的同种型在外显子的末端终止，并且不包括其它4fL^酸，或者所述部分可以是多于一个密码子，使得所述同种型包括内含子13编码的絲酸的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21个直到全部的氨基酸，在示例性的实施方案中，同种型包括内舍子13编码的一个、两个或三个氨基酸.本发明提供了下述HGF多肽同种型，其与SEQIDNO:14所示的M酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性，以及提供了其等位变体和物种变体，包括序列如SEQIDNO:16所示的等位变体的部分。这包括含有与SEQIDNO:14所示的絲酸数量相同的絲酸的变体。本发明提供的经分离的HGF多肽同种型包括作为HGF多肽的拮抗物作用的那些，例如，关联HGF多肽；与MET受体结合的那些；抑制选自有丝分^JL生、形态发生和运动发生的一种或多种由MET介导的活性的那些；抑制血管发生的那些；与糖胺聚糖例如硫酸肝素结合的那些；与血管发生性分子结合的那些，所iiA管发生性分子例如ATP合酶、血管动蛋白(angiomotin)、avp3整联蛋白、膜联蛋白II、MET、VEGFR和FGFR中的任何一种；抑制关联HGF、FGF-2和/或VEGF诱导的血管发生的那些；以及是HGF拮抗物并且抑制血管发生的那些。HGF同种型可以具有这些活性和/或其它活性中的任何一种或多种。本发明还提供了药物组合物，其含有处于可药用运栽体中的一种或多种HGF多肽同种型。药物组合物可被配制，以通过任何合适的途径施用。组合物可包括另外的活性剂，包括但不限于，其它抗癌和/或fefiL管发生剂。HGF同种型的量S:有效于特定活性的，所述活性包括对关联HGF多肽的拮抗，例如，其中，对关联HGF的拮抗抑制了选自有丝分裂发生、运动发生和形态发生中任何一种或多种的由MET介导的活性中的一种或多种；和/或抑制了血管发生，例如，关联HGF、FGF-2和/或VEGF诱导的血管发生。本发明提供了编码任何HGF多肽的核酸分子。换供的核酸分子含有外显子的4^P或部分以及来自不是内含子5的内含子的至少一个密码子。内含子可以含有处于任何基因座(包括第一基因座)上的终止密码子。例如，本发明提供了编码下述可读框的核酸分子，所述可读框跨越外显子内含子的连接处，其中，所述可读框在(不是内含子5的)内含子(例如内舍子11或13)中的终止密码子处终止。本发明还提供了其中终止密码子是内含子(例如内含子13)中第一个密码子的核酸分子。在示例性实施方案中，提供了下述核酸分子，所述核酸分子含有SEQIDNO:9、11、13、17或19中任何一种所示的核苷酸序列，或其等位变体(例如，SEQIDNO:15中变化的一种或多种)或物种变体。本发明还提供了下述核酸分子，其编码如上文所述的同种型，所迷同种型包括K4结构域的全部或部分并且与SEQIDNO:9、11、13、17或19中任何序列具有至少60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99%的序列同一性;或者，其在中等严格度或高严格度条件下，以其全长的至少70%与包含SEQIDNO:9、11、13、17或19中任何序列所示的核苷酸序列的核酸分子杂交，其中，被编码的多肽含有K4结构域，并且含有来自内含子的至少一个密码子。本发明还提供了下述核酸分子，其含有上述任何核酸分子的简并密码子。本发明还提供了下述核酸分子，其是HGF基因的剪接变体，并且其包括不是内舍子5的内含子的全部或部分。本发明提供了任何这些核酸分子编码的多肽，以及含有任何所述核酸分子的栽体。栽体包括真核和原核栽体，表达栽体(例如哺乳动物表达栽体)以及适合用于基因疗法的栽体。示例性栽体是病毒栽体，其包括但不限于，腺病毒栽体、腺伴随病毒载体、EBV栽体、SV40栽体、巨细胞病毒栽体、痘苗病毒栽体、疱疹病毒栽体、反转录病毒栽体和慢病毒栽体。本发明还包括人工染色体。载体可以是游离型的或整合型的。本发明提供了含有栽体的细胞。细胞包括真核细胞(包括哺乳动物细胞和昆虫细胞)和原核细胞。本发明提供了治疗方法。所述方法可通it^fe用含有本文提供的HGF同种型的药物组合物来实现，和/或通过引入编码此类同种型的核酸分子的基因疗法来实现。基因疗法包括离体方法，其包括引入从受试者或相容来源移出的宿主细胞，基因疗法还包^^体内方法，其包括局部性(topical)、局部(local)和全身性施用。离体治疗可包括将核酸体外施用给细胞，接着将细胞施用给受试者。细胞可以来自合适的供体或者来自待治疗的受试者)例如人《本发明提供了通it^fe用含有一种或多种同种型的药物组合物来治疗疾病或病症的方法。同种型可以是能抑制血管发生、细胞增殖、细胞迁移、肿瘤细胞生长和/或肿瘤细胞转移的同种型。被治疗的病症包括但不限于癌症、血管发生性疾病和痴疾。血管发生性疾病包括眼部疾病、子宫内膜异位症、关节炎和其它慢性或急性炎性疾病。示例性的疾病是类风湿性关节炎、骨关节炎、^L屑病、Osier-Webber综合征、子宫内膜异位症、斯蒂尔病、心l^ik管发生、外周血管扩张、血友病性关节炎、年龄相关性黄斑变性、早产儿视网膜病、角膜移植排斥、系统性红斑狼掩、动脉粥样硬化、新生血管性青光眼、脉络膜新血管形成、晶状体后纤维组织形成、骨粗短症、神经纤维瘤、血管瘤、听神经瘤、神经纤维瘤、沙眼、化脓性肉芽肺和糖尿病相关疾病(例如糖尿病增殖性视网膜病变)和血管疾病、炎性肺部疾病、克罗恩氏病和4艮屑病。可被治疗的癌症包括胃癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、前列腺癌和其它肿瘤和血癌，其包括癌(carcinomas)、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性肿瘤、蜂状细胞癌、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌、肺的蜱状癌、劇溪癌、肝细胞癌、胃(gastric)或胃部(stomach)癌、胃肠癌、M癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(livercancer)、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾、;ftj泉癌、肾或肾脏癌、前列腺癌、外阴癌、曱状腺癌、肝脏癌(hepaticcarcinomas)、肛癌(analcarcinomas)、阴茎癌和头颈癌。可按照需要，经验确定将使用的特定同种型。可施用组合物，以抑制肿瘤侵入或肺瘤转移和/或抑制血管发生。本发明揭:供了缀合物，其含有HGF同种型，所述同种型直接或间接通过接头(linker)连接到另一部分。級合物包括融合蛋白以及化学級合物。缀合物可含有HGF同种型或其结构域或其功能性部分，以及来自不同HGF同种型或来自细胞表面受体(CSR)同种型或配体同种型的第二部分。细胞表面受体同种型包括，例如，细胞表面受体同种型细胞外结构域的全部或部分。细^^面受体同种型包括受体酪氨酸激酶，例如赫斯达汀多肽的全部或部分。示例性的赫斯达汀多肽包括SEQIDNO:186-200中任意一条所示的4^酸序列或其等位变体或物种变体。本发明还提供了下述缀合物，它们是嵌合多肽，其含有HGF同种型的全部或至少一个结构域以及不同的HGF同种型或另一细JJfc^面受体同种型的全部或至少一个结构域(例如内含子融合蛋白)，其它嵌合多肽包括HGF同种型的全部或至少一个结构域以及细胞表面受体同种型的内含子编码部分。本发明还提供了下^iE合，其含有一种或多种HGF同种型以及一种或多种其它细胞表面受体同种型和/或治疗药物。此类组合包括下述这些其中，同种型和/或药物处于分开的组合物中或者处于单种组合物中。所述组合可以作为试剂盒提供，与可选的使用说明书一起和/或与用于施用和使用所述组合的组分的其它试剂和器具和组分一^^供。本发明提供了通过施用所述组合进行治疗的方法。每种组分可分开、同时、间隔、在单种组合物中或其组合来施用。并入所述组合物或缀合物中的细胞表面受体同种型包括但不限于VEGFR、FGFR、DDR、TNFR、PDGFR、MET、TIE、RAGE、EPH或HER的同种型。同种型可以是内含子融合蛋白。示例性的Met同种型含有选自SEQIDNO:85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113和114中任何一种的M酸序列。本发明还提供了融合蛋白或缀合物，其含有CD45多肽的片段，所述片段直接或通过接头与蛋白质相连，其中，选用能添加糖类或糖基化作用位点的CD45的片段，并且所述片段由此包括至少一个此类位点，以及有足以延伸相连部分(例如，多肽)的血清半寿期的量。融合蛋白含有与多肽直接或间接相连的CD45多肽或其片段；缀合物含有与非肽部分(典型地，治疗剂)直接或间接相连的CD45多肽或其片段。相连的物质包括蛋白质和其它物质，例如小分子治疗剂。相连的蛋白质包括治疗性蛋白质，例如CSR或配体同种型，或细胞因子、CSR、配体、生长因子、激素或其在末端包括额外的M酸的形式。CD45多肽或片断含有足够数量的糖基化位点或糖类，由此使得蛋白质的血清半寿期增加1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多。连接可以是直接的或通过化学连接的，例如，肽鍵或化学接头，包括异双功能接头形成的连接，和/或其可以是光可切割接头。任选地，缀合物或融合蛋白包括多肽或肽或M酸接头，其可含有1-30、1-10、2-10或2-15个或更多个氨基酸残基。示例性的CD45多肽或其片段含有SEQIDNO:272、274、275、276、277、278、279、281、283、285、287、289、291、293和295中任何所示的4U^,列或其片段或其变体。与CD45蛋白质相连的蛋白质可以是配体，例如HGF或其同种型，或CSR或CSR同种型或含有额外的氨基酸的配体、CSR或同种型的形式。示例性蛋白质包括但不限于含有SEQIDNO:3、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、35、37、39、40、42、44、46、47、49、50、52、54、56、58、59、60、61、62、63、64、65、67、69、71、73、75、77、78、80、82、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、114、116、118、120、122、124、126、127、128、130、132、134、136、138、140、142、144、145、146、147、148、150、152、154、156、158、160、161、162、163、164、165、166、167、169、171、172、173、174、175、176、177、179、181、183、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、246、247、248、249、250和251中任何所示的氨基酸序列或其等位变体的那些。附图简述图1描述了示例性HGF基因(其序列见SEQIDNO:1)的基因组组织结构。该HGF基因4^有18个外显子(实线)，它们间隔有17个内含子(虚线)。HGF的优势剪接形式含有由18个外显子编码的多肽。本文提供的HGF同种型是HGF基因的选择性剪接变体编码的，其被外显子和来自内舍子部分的至少一个密码子编码。示出了编码示例性HGF同种型SR023A01、SR023A08和SR023E09的核酸的外显子-内含子组织结构。星号Usterix)示出了基因内含子部分中的终止密码子，其从而产生截短的同种型。SR023A02同种型中外显子5中的开放框(openbox)表明了外显子5的缺失部分。HGF同种型包括与HGF外显子有效相连的HGF基因的任何一个或多个内含子中的4^P或部分，这产生了HGF的内含子融合蛋白。图2描述了关联HGF的结构域组织结构。该闺描述了HGF同种型(包括SR023A02、SR023A08和SR023E09)的结构域组织结构。图3描述了HGF在癌症发展(包括肿瘤生长和血管发生)中作用的总览。HGF(A)作为形态发生和有丝分裂发生因子，促进癌细胞a和迁移、侵入和转移来发挥作用，(B)作为有丝分裂发生因子，刺激癌细胞增殖由此促进肿瘤生长来发挥作用，以及(C)作为血管发生因子，由此促iiik管发生和血管生长(作用于原发和继发性肿瘤生长和转移)来发挥作用。通过HGF同种型调节这些途径的靶点被标出。发明详述大纲A.定义B.肝细胞生长因子(HGF)和MET受体l.HGFa.HGF结构域结构1.N末端结构域ii.三环域(KringleDomain)iii.p画链2.HGF变体a.HGF剪接变体b.HGF等位变体3.MET受体C.HGF同种型l.HGF同种型的类型2.选择性剪接和HGF同种型的产生a.内含子,和内含子融^f"白1.天然内含子融合蛋白ii.组合的内含子融合蛋白b.通过外显子修饰产生的同种型2.HGF同种型多肽结构3.HGF同种型活性a.细胞表面作用改变b.竟争性拮抗物c.负面作用的抑制性同种型D.鉴定和产生HGF同种型的方法1.鉴定和分离同种型的方法2.鉴定同种型的等位变体和物种变体E.示例性HGF同种型1.HGF同种型2.HGF内含子融合蛋白F.产生编码HGF同种型多肽的核酸的方法1.合成的基因和多肽2.克隆和分离HGF同种型的方法3.表达系统a.原核表达b.酵母c.昆虫细胞d.哺乳动物细胞e.植物G.同种型缀合物1.同种型融合a.用于改进的HGF同种型多肽生产的HGF同种型融合i.组织纤^原活化物ii.TPA-HGF内含子融合蛋白融合b.嵌合和合成的内含子融合多肽c.HGF多聚体和多聚化结构域1.肽接头ii.多肽多聚化结构域(a)免疫球蛋白结构域(i)FC结构域(ii)突起-l-腔(即，隆突和洞)(b)亮氨酸拉链(i)FOS和JUN(ii)GCN4(c)其它多聚化结构域R/PKA-AD/AKAPd.产生和克隆HGF融合的方法2.把向剂/把向剂缀合物3.拟肽同种型H.改变血清半寿期以及其它治疗性质的方法I.N-连接的和O-连接的糖基化2.糖基化的影响3.针对糖基化的治疗用途4.CD45用于改变血清半寿期的用途a.CD45功能b.CD45二聚化和糖基化c.CD45融合蛋白d.CD45融合蛋白的级合物e.治疗性的CD45融合蛋白f.测量糖^^化的方法g.产生和增加糖JMt的方法h.HGF-CD45融合蛋白和治疗用途I.制备和分离HGF同种型特异性抗体的方法J.评价或监测HGF同种型活性的测定1.配体结合测定和HGF结合测定2.配体二聚化3.复合4.MET和ERK1/2裤酸化测定5.形态发生/血管发生测定6.有丝分HJC生/增殖测定7.运动发生/细胞迁移测定8.凋亡测定9.动物模型a.胂瘤阻抑测定b.血管发生疾病K.制备、配制和施用HGF同种型和HGF同种型组合物L.HGF同种型的体内表达以;5L^因疗法1.递送核酸a.栽体-游离型和整合型b.人工染色体和其它非病毒栽体递送方法c.脂质体和其它被包囊形式以;M"含有核酸分子的细胞的施用2.体外和离体递送3.全身性、局部和局部性递送M.HGF和癌症和血管发生1.肺瘤生长和转移a.有丝分^JL生b.运动发生和形态发生2.血管发生a.血管发生过程b.血管发生中的细il^面受体c.钟瘤血管发生中的HGFd.其它血管疾病中的HGF3.HGF同种型和癌症和血管发生N.示例性的采用HGF同种型进行的治疗1.癌症2.血管发生性疾病a.关节炎和'漫性炎性疾病b.眼部疾病c.子宫内膜异位症3.疟疾4.组合疗法5.对HGF同种型活性的评估O.实施例A.定义除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域技术人员通常所理解的相同的含义。本文所有公开内容中提到的所有专利、专利申请、公开的申请和出版物、GENBANK序列、网站和其它公开材料都通过引用整体并入本文。当对本文的术语存在多种定义时，以本章节中的为准。当提到URL或其它这类标识符或地址时，应当理解，此类标识符可改变，互联网上的特定信息可增加及删除，但是等同的信息是已知的，并可容易获取，例如通过搜索互联网和/或合适的数据库来获取。引用它们证实了此类信息的可获得性和公开传播。在本文中使用时，配体是细胞外物质，通常是多肽，其与一种或多种受体结合。配体可以是可'l的或者可以是跨膜蛋白。就本文目的而言，配体与受体结合，并且通过受体诱导信号转导。在本文中使用时，信号转导指一系列的顺序事件，例如蛋白质磷酸化，配体随后通过跨膜细胞表面受体结合，这将信号运经一系列中间分子，直到最后的调控分子(例如转录因子)应答于该信号而被修饰.信号转导触发的应答包括对特定基因的活化.基因活化导致进一步的影响，因为基因表达为蛋白质，其中很多是酶、转录因子或代谢活性的其它调控子，它们介导配体-受体相互作用的任何一种或多种生物学活性。在本文中4吏用时，肝细胞生长因子(HGF)指MET受体的配体，其诱导有丝分^JL生、形态发生和运动发生。通常，HGF在发育中组织和成熟组织中参与器官形成和组织再生。在恶性组织中，HGF通过促进肿瘤细胞的侵入、迁移和增殖作用于癌症发展，由此作用于肺痛发生。HGF还是血管发生因子，作用于癌的生长和蔓延以及其它血管发生性疾病。例如，人HGF编码728个氨基酸残基的配体，其具有31个氨基酸的信号肽、氨基酸34-124之间的N-末端结构域、氨基酸128-206之间的三环(Kringle)l结构域、氨基酸241-288之间的三环2结构域、氨基酸305-383之间的三环3结构域、氨基酸391-469之间的三环4结构域以及氨基酸495-728之间的丝氨酸蛋白酶结构域(见，例如，图2，SEQIDNO:3)。前体蛋白是单体，其被切割，产生通过二硫键相连的异源二聚体(由69kDa的a-链和34kDa的p-链组成)。HGF基因由18个外显子组成，其间间隔有17个内含子(见，例如，图1)。HGF的示例性基因组序列示为SEQIDNO:1。存在有HGF的选择性剪接变体。两种已知的剪接变体，NK1和NK2，是截短的HGF同种型，其含有N-末端结构域和三环1结构域(NK)1或三环1和三环2结构域(NK2)。NK1和NK2是MET信号传导的部分激动剂。已通过对HGF进行SWl切割，产生了HGF的工程变体，其被称为NK4，其是HGF-MET信号传导的拮抗物。HGF包括HGF(包括物种变体)的等位变体，以及SEQIDNO:1所示的HGF的等位变化的任何一种。除了在人中发现之外，HGF还被发现于不同物种中，包括牛、狗、猫、小鼠、大鼠、马或其它。HGF的示例性物种变体示于SEQIDNO:246-251中的任何一种。在本文中使用时，细胞表面受体(CSR)是在细胞的表面上表达的蛋白质，通常其包括跨膜结构域或将其锚向细j&4面的其它部分。其作为受体与介导或参与细iffc^面受体活性(例如信号转导或配体内在化)的配体结合。细1&*面受体包括但不限于，单跨膜受体和G-蛋白偶联受体。受体酪氨酸激酶，例如生长因子受体，也属于此类细胞表面受体。在本文中使用时，受体酪氨酸激酶(RTK)指蛋白质，通常是糖蛋白，其是蛋白质生长因子受体家族的一员.通常，生长因子受体参与细胞内过程，所述过程包括细胞生长，细胞分裂、分化、代谢和细胞迁移。RTK还已知参与细胞增殖、分化和对细胞命运的确定，以及肺瘤生长。RTK具有保守的结构域结构，其包括细胞外结构域、膜跨越(跨膜)结构域和细胞内酪氨酸激酶结构域。通常，细胞外结构域与多肽生长因子或细胞膜相关分子或其它配体结合。酪氨酸激酶结构域参与对受体的正调和负调。示例性的RTK是MET受体。RTK的二聚化活化了受体的催化性酪氨酸激酶结构域和酪氨酸自砩酸化。激酶结构域中的自磷酸化将酪氨酸激酶结构域保持为活化状态。蛋在一些RTK中，与细胞外结构域结合的配体导致受体的二聚化。在一些RTK中，受体可以在没有配体的情况下二聚化。二聚化还可被受体过量表达增加。在本文中使用时，同种型指这样的蛋白质，其具有较之关联蛋白质的全长野生型(优势)形式而言有改变的多肽结构，所述改变是由于同种型的核酸序列和所编码多肽较之相应蛋白质的不同导致的。就本发明的目的而言，同种型包括细胞表面受体(CSR)的同种型和CSR配体的同种型。通常，本文提供的同种型缺少足以改变蛋白质的优势形式的活性(例如酶活性)或蛋白质结构的结构域或其部分(或包括插入或二者都有)。本文提到具有改变的活性的同种型指，由于同种型较之蛋白质全长或优势形式的结构或序列不同导致的活性改变。提到同种型时，活性的改变指特定同种型与优势或野生型形式之间的活性不同。活性的改变包括活性增强或降低。在一种实施方案中，活性的改变是活性的降低；降低可以是较之受体的野生型和/或优势形式而言至少0.1、0.5、1、2、3、4、5或10倍。通常，活性降低5、10、20、50、100或1000倍或更多。例如，配体可与受体结合，并初始化或参与信号转导。在本文中使用时，配体同种型指缺少结构域或结构域一部分的配体，或者在结构域中具有打断的配体，所述打断例如是通过较之配体野生型或优势形式的多肽而言插入了一个或多个4y^酸造成的。通常，此类同种型是编码关联受体的基因的选择性剪接变体编码的，本发明提供的配体同种型包括能与受体结合但是不能初始化信号转导或初始化降低水平的信号转导的那些。此类配体同种型作为配体拮抗物发挥作用，以及还作为激动剂来进行较之野生型配体而言降低的活性。配体同种型通常缺少足以改变配体野生型全长和/或优势形式活性的结构域或其部分，和成能调节其受体活性，或缺少结构性特征，例如，结构域。此类配体同种型还包括插入和重排(rearrangements)。配体同种型包括下述这些，它们展示出较^M目应的野生型配体而言被改变的活性；例如，同种型可在配体结构域包括改变，使得其不能诱导受体的二聚化。在这样的实例中，同种型可与全长野生型配体竟争与其受体的结合，但是会降低或抑制受体的信号传导。通常，同种型中，活性较之配体野生型和/或优势形式改变至少0.1、0.5、1、2、3、4、5或10倍。典型地，活性改变至少2、5、10、20、50、100或1000倍或更多。一种实施方案中，配体同种型对活性的改变是较之配体优势形式而言活性降寸氐。在本文中使用时，细胞表面受体(CSR)同种型，例如受体酪氨酸激酶的同种型指下述受体，其较之受体的野生型和成优势形式而言缺少足以改变或调节活性的结构域或其部分，或缺少结构性特征，例如结构域。CSR同种型可包括具有较之所述受体有所改变的一种或多种生物学活性的同种型，例如，同种型可包括pl85-HER2细胞外结构域的改变，其将同种型从正面作用的受体调控多肽改变为负面作用的受体调控多肽，例如，从受体结构域改变为配体。通常，同种型中，活性较之受体野生型和/或优势形式改变至少O.l、0.5、1、2、3、4、5或10倍。典型地，活性改变至少2、5、10、20、50、100或1000倍或更多。在一种实施方案中，活性的改变是活性的降低。在本文中使用时，内含子融合蛋白指缺少一个或多个结构域或一个或多个结构域的部分的同种型。此外，内含子融合蛋白由含有与外显子密码子有效相连的一个或多个密码子(关于蛋白质的优势或野生型形式)(包括终止密码子)的核酸分子编码.内含子部分可以是终止密码子，这导致产生在外显子内含子连接处终止的内含子融合蛋白。典型地，内含子融合蛋白的活性不同于优势形式，通常是由于对内含子进行氨基酸残基截短、缺失和/或插入造成的。此类活性包括与受体相互作用的变化，或者由于与共激受体或配体、受体配体或辅因子或受体活性的其它调节子的相互作用的不同出现的间接变化。从细胞或组织中分离的内含子融合蛋白或具有从细胞或组织中分离的此类多肽的序列的内含子融合蛋白是"天然的"。天然不存在而是通过将分子连接到内含子上来制备的或合成的那些被称为"合成的"或"重组的"或"组合的"。内含子融合蛋白包括缺少一个或多个结构域或一个或多个结构域的部分的CSR同种型或配体同种型，导致关联受体或配体的活性有所改变，所述改变是由于内含子融合蛋白与其受体或配体之间的相互作用或其它相互作用的变化导致的。通常，此类同种型较之CSR或配体基因编码的野生型或优势形式而言是缩短的。但是，它们可以包括外显子部分中的插入或其它修饰，由此与优势形式大小相同或更长。但是，每一种都是下述核酸分子编码的，所述核酸分子包括来自内含子编码部分的至少一个密码子(包括终止密码子)，导致CSR或配体同种型在外显子的末端截短，或者导致加上内含子编码的1、2、3、4、5、8、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75和更多个氛基酸。内含子融合蛋白可被经选择性剪接的RNA编码，和/或可以是合成生产的，例如，通过鉴定可能的剪接位点然后通过重组方法产生此类分子，从通过计算鉴定的RNA分子来生产的。典型地，由于内含子融合蛋白编码RNA中一个或多个终止密码子(在编码相应多肽野生型或优势形式的RNA的相应序列中不存在)的存在，内含子融合蛋白被缩短。如果内含子包括与外显子部分符合读框的可读框，那么内含子编码部分可插入多肽。M酸和/或终止密码子的添加产生了内含子融合蛋白，其大小和序列上与多肽的野生型或优势形式不同。就本发明的目的而言，内含子融合蛋白包括天然的、组合的和合成的内含子融合蛋白。天然的内含子融合蛋白指经选择性剪接的RNA分子编码的多肽，其含有与基因的一个或多个外显子编码的多肽的一个或多个部分相连的、内含子编码的一个或多个氨基酸。经选择性剪接的mRNA是经分离的，或者可通过将剪接供体和受体位点在基因中相连来合成制备。天然内含子融合蛋白含有一个或多个M酸，或由于内含子含有终止密码子作为第一密码子从而在外显子-内含子连接处被截短。天然内含子融合蛋白通常存在于细胞和/或组织中。内含子融合蛋白可合成产生，例如，基于基因编码的序列合成产生，这通过鉴定剪M沐和受体位点以及鉴定可能的被编码的剪接变体来实现。组合的内含子融合蛋白指较之多肽的野生型或优势形式而言缩短的多肽。典型地，缩短从多肽除去一个或多个结构域或其部分，使得活性被改变。组合的内含子融合蛋白通常模拟天然的内含子融合蛋白，其中天然内含子融合蛋白中缺失的一个或多个结构域或其部分源自同样的基因或源自相关基因家族中的基因。天然不存在而是通过将分子与内含子相连使得得到的构建体能调节CSR活性来制备或合成的那些是"合成的"。在本文中使用时，在提到内含子融合蛋白或CSR或配体同种型时，天然的指在动物基因组中编码的和/或在动物中生产或产生的或可从基因来生产的任何蛋白质、多肽或肽或其片段(由于存在合适的剪接受体/M位点)。天然的内含子融合蛋白包括等位变体和物种变体。内含子融合蛋白可经翻译后^^饰。在本文中使用时，外显子指含有下述核苷酸序列的核酸分子，所述核苷酸序列被转录为RNA，并且在剪接和其它的RNA加工后呈现为RNA的成熟形式，例如mRNA(信使RNA)的形式。mRNA含有一个或多个有效相连的外显子。外显子可编码多肽或多肽的部分.外显子还可含有非翻译序列，例如，翻译调控序列。外显子序列通常是保守的，其在基因家族成员之间展示出同源性。在本文中使用时，内含子指这样的核苷,列，其被转录为RNA，随后典型地通过剪接从RNA中被除去，以产生RNA的成熟形式，例如mRNA。典型地，内含子的核苷^^列不被并入成熟的RNA，典型地，内含子序列或其部分也不被翻译及被并入多肽。通过细胞剪接机制，使用剪接信号序列，例如剪^^和受体，来从RNA中除去内含子。显而易见地，一种剪接变体中的内含子可以是另一种变体中的外显子(即，剪接转录本中存在的)。因此，编码内含子融合蛋白的经剪接mRNA可包括外显子和内含子。在本文中使用时，剪接指RNA成熟过程，其中，mRNA中的内含子被除去，外显子被有效连接，以产生信使RNA(mRNA).在本文中使用时，选择性剪接指从基因中产生多种mRNA的过程。选择性剪接可包括将基因的并非所有外显子有效连接起来，和/或将并非在源自基因的所有转录本中都存在的一个或多个备选的外显子或内含子有效地连接起来。在本文中使用时，外显子缺失指这样的选择性RNA剪接亊件，所述事件产生较之编码多肽野生型或优势形式的RNA分子而言缺少至少一个外显子的核酸分子。具有缺失外显子的RNA分子可通过此类选择性剪接产生，或者通过任何其它方法产生，例如体外方法以缺失外显子。在本文中使用时，外显子插入指这样的选择性RNA剪接亊件，所述事件产生含有在编码多肽野生型或优势形式的RNA分子中通常不存在的至少一个外显子的核酸分子。具有插入的外显子的rna分子可通过此类选捧性剪接来产生，或者可通过任何其它方法产生，例如体外方法来添加或插入外显子。在本文中使用时，外显子延伸指这样的选择性RNA剪接亊件，所述事件产生含有至少一个下述外显子的核酸分子，所述外显子在长度(外显子含有的核苷酸的数量)上比编码多肽野生型或优势形式的RNA中相应的外显子更长。具有延伸的外显子的RNA分子可通过此类选择性剪接来产生，或者可以通过任何其它方法产生，例如体外方法以延伸外显子.在一些情况下，如本文所述，通过外显子延伸产生的mRNA编码内含子融合蛋白。在本文中使用时，外显子截短指这样的选择性RNA剪接事件，所述事件产生含有一个或多个外显子被截短或缩短的核酸分子，使得一个或多个外显子在长度(核苷酸的数量)上比编码多肽野生型或优势形式的RNA分子中相应的外显子更短。具有截短的外显子的RNA分子可通过此类选择性剪接来产生，或者可通过任何其它方法产生，例如体外方法以截短外显子。在本文中4吏用时，内含子驻留(intronretention)指这样的选择性RNA剪接事件，所迷事件产生含有与一个或多个外显子有效相连的内含子或其部分的核酸分子。可通过此类选择性剪接来产生驻留有内含子或其部分(通常是编码l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多个密码子(包括仅一个终止密码子)的内含子部分)的RNA分子，或者可通过任何其它方法产生，例如体外方法以产生具有驻留的外显子的RNA分子。一些情况下，如本文所述，通过内含子驻留产生的mRNA分子编码内含子融合蛋白。在本文中使用时，也被称为基因序列的基因指转录为RNA(内含子和外显子)的核苷酸序列，包括编码至少一种多肽的核苷酸序列。基因包括调控RNA转录和加工的核苷酸序列。基因还包括核苷酸调控序列，例如启动子和增强子，以及翻译调控序列。在本文中使用时，提到本文提供的被编码的多肽时，关g因指这样的基因序列，其编码优势多肽并且是与特定同种型相同的基因。就本文目的而言，关联基因可包括天然基因或合成的基因，例如通过使用重组DNA技术合成的。通常，关联基因也是特定细胞或组织中的优势形式。在本文中使用时，剪接位点指基因中的一个或多个核苷酸，其参与对内含子的去除和/或对外显子的连接。剪^i点包括剪接受体位点和剪##体位点。在本文中使用时，可读框指这样的核普酸序列，其编码功能性多肽或其部分，典型地，至少大约50个氨基酸.可读框可编码全长多肽或其部分。可通过将一个或多个外显子或外显子和内含子(当终止密码子在内含子中，以及内含子的全部或部分在转录的mRNA中时)有效连接起来，来产生可读框。在本文中使用时，多肽指共价连接的两个或多个氨基酸。术语"多肽"和"蛋白，，在本文中可互换^f吏用。在本文中使用时，提到核酸分子或蛋白质的缩短时，截短或缩短指较之蛋白质或核酸分子的野生型或优势形式而言比全长更短的M酸或核苷紗列。在本中使用时，参考基因指可被用来在基因中对内含子和外显子的基因作图。参考基因可以是基因组DNA或其部分，其可与，例如，表达的基因序列加以比较，以在基因中对内含子和外显子作困。参考基因还可以是编码多肽野生型或优势形式的基因。在本文中使用时，提前终止密码子(prematurestopcodon)是序列可读框中在用于产生或制造出全长形式的蛋白质(例如，多肽的野生型或优势形式)的终止密码子之前存在的终止密码子。提前终止密码子的存在可以是，例如，选择性剪接和突变的结果。在本文中使用时，表达的基因序列指从基因转录或被预测将从基因转录的任何核苷酸序列。表达的基因序列包括但不限于，cDNA、EST和表达的序列的计算机化预测(例如，基于剪a点的预测)和经剪接序列的计算机化产生。在本文中使用时，表达序列标签(EST)指从表达的基因序列产生的核苷酸序列。通过使用mRNA的群产生cDNA，来产生EST。可例如通过从mRNA上存在的多聚A尾巴进行引导，来产生cDNA分子。还可通过使用一种或多种寡核苷酸(其在mRNA中内在引导cDNA合成)进行随机引导来产生cDNA分子。对产生的cDNA分子加以测序，典型地，将序列存储于数据库中。EST数据库的实例是可从ncbi.nlm.nili.gov/dbEST在线获得的dbEST。典型地，每条EST序列被分配以独特的标识符，以及与标识符相关有一些信息，例如核苷酸序列、长度、表达的组织类型和其它相关数据。在本文中使用时，提到本文提供的同种型时，关联配体指与特定同种型相同的基因编码的配体。通常，关联配体也是特定细胞或組织中的优势形式。在本文中使用时，野生型形式，例如，多肽的野生型形式，指基因编码的多肽。典型地，野生型形式指没有突变或改变功能或结构的其它修饰的基因(或源自其的RNA或蛋白质)；野生型形式包括物种间和物种之间的等位变化。在本文中使用时，优势形式，例如多肽的优势形式，指是基因产生的主要多肽的多肽。"优势形式，，随来源而变化。例如，不同的细胞或组织类型可产生不同形式的多肽，例如，通过选择性剪接和/或通过选择性蛋白质加工来产生。在每种细胞或组织类型中，不同的多肽可以是"优势形式"。在本文中使用时，结构域指多肽链中的下述部分(典型地，三个或更多，通常是5或7个或更多个氨基酸的序列)，其能形成在由一个或多个结构基序(例如，a螺旋和/或p链的组合，其间通过环区域相连)构成的蛋白质内的独立折叠结构，和/或其因为功能性活性，例如激酶活性而被识别。蛋白质可具有一个或多于一个不同的结构域。例如，可通过其中的序列与相关家族成员的同源性，例如，与定义出细胞外结构域的基序的同源性，来对结构域加以鉴定、定义或区分.在另一实例中，可通过其功能，例如通过酶活性，例如激酶活性，或者通过与生物分子相互作用的能力，例如DNA结合、配体结合和二聚化，来对结构域加以区分。结构域可独立展示出生物学功能或活性，由此结构域可独立或与另一分子融合，来发挥活性，例如，蛋白水解活性或配体结合，结构域可以是来自多肽的线性的M酸序列或非线性的4^酸序列。很多多肽^^有多个结构域。例如，典型地，受体酪氨酸激醉包括细胞外结构域、膜跨越(跨膜)结构域和细胞内酪氨酸激酶结构域。在本文中使用时，缺少结构域全部或部分的多肽指较之关联多肽而言结构域的一个或多个M酸缺失或4^MU^酸缺失的多肽。缺少结构域全部或部分的多肽中缺失的氨基酸可以是连续的，但其不必须是关联多肽结构域中连续的氨基酸。缺少结构域全部或部分的多肽可展示出改变，例如较之关联多肽活性而言多肽活性的损失或降低，或者较之关联多肽而言多肽结构的丟失或添加。在本文中使用时，结构域(例如三环域，即K4，或丝氨酸蛋白酶，即SerP)的部分包括所述结构域的至少一个氨基酸，典型地，2、3、4、5、6、8、10、15或更多个氨基酸，但是比构成所述结构域的4^p4y^酸要少。例如，如果关联配体具有三环域，那么缺少三环域的全部或部分的配体同种型多肽则可以在对应于关联配体中相同jy^酸位置的jyi酸上有i、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个M酸缺失。本文提供的含有此类部分的任何同种型都展示出想要的活性，例如，对细J!^面受体活性的调节。在本文中使用时，含有结构域的多肽指含有完整结构域的多肽(参照关联配体的相应结构域时)。完整结构域是参照对关联多肽中该特定结构域的定义来确定的。例如，包含结构域的配体同种型指这样的同种型，其含有对应于在所述关联配体中发现的完整结构域的结构域。如果关联配体例如含有4y^酸位置241-288之间的47个氨基酸的三环域，那么包含此类三环域的配体同种型则>^有与关联配体的47个氨基酸的结构域具有充分同一性的47个氨基酸的结构域。充分同一性指较之关联配体的结构域而言可含有等位变化和保守取代的结构域。充分相同的结构域较之关联配体的结构域而言没有M酸缺失、非保守取代或插入。通过与特定蛋白质的结构和/或序列同源性来鉴定结构域(即，三环域，丝氡酸蛋白酶结构域)。此类结构^A能够鉴定其的本领域技术人员已知的。本文为示例性目的提供了定义，但M当理解，本领技术人员/H^可通it^称识别特定结构域。如果需要的话，可以用合适的软件来鉴定结构城.在本文中使用时，N-末端结构域属于结构域的PAN模块(module)超家族，该超家族还包括血浆前激肽释放酶/凝固因子XI家族的苹果域和多种线虫蛋白质的结构域。PAN结构域模块含有三个二硫桥的保守核心。在该家族的一些成员中，有另外的第四个二>^#，其将结构域的N和C末端连起来。该结构域^Ut现于不同的蛋白中。在一些中，该结构域能介导蛋白质-蛋白质相互作用，在另一些中，其介导蛋白-糖类相互作用。HGF含有与MET受体和与肝素分子结合的N-末端结构域。HGF的N-末端结构域的结构含有特征性的发夹-环结构，该结构被两个二;Ml^稳定。在本文中使用时，三环域含有大约80个氨基酸，并且具有特征性的折叠模式，所述折叠模式由三个内部二硫键和另外的保守残基来定义。通常，三环域参与蛋白质-蛋白质相互作用。本文提供的如SEQIDNO:3所示的示例性HGF^^有四个三环域。在本文中使用时，丝氨酸蛋白酶结构域通常指共享共同的封闭p桶结构的一大组肽酶。典型地，蛋白酶结构域是蛋白酶的催化活性部分。蛋白质的蛋白酶结构域^^有该蛋白质的蛋白水解活性所需的所有必需性质，例如，其催化中心。丝氨酸蛋白酶的催化中心是三个M酸——天冬氨酸、组氨酸和丝氨酸的催化三联体。在本文提供的示例性HGF中，催化三联体中的残基被突变，使得蛋白质不具有蛋白水解活性。在本文中使用时，等位变体或等位变化指群体中，由与基因的参考形式不同的基因编码的多肽(即，等位基因编码的)，典型地，基因的参考形式编码来自群体或物种的单个参考成员的多肽的野生型形式和/或优势形式。典型地，等位变体与来自同一物种的野生型和/或优势形式具有至少80%、90%、95%或更高的氨基酸同一性。在本文中4吏用时，物种变体指相同多肽在物种间或物种之间的变体。通常，种间等位变体与另一物种的野生型和/或优势形式具有至少大约60%、70%、80%、85%、90%或95%或更髙的同一性，包括与多肽的野生型和/或优势形式96%、97%、98%、99%或更高的同一性。在本文中使用时，修饰指对多肽的4U^酸序列或核酸分子的核苷,列的修饰，其分别包^^ij^酸和核苷酸的缺失、插入和置换，在本文中使用时，指定的指选择分子或其部分作为参考或比较点。例如，可以为了构建在所选结构域中被修饰的多肽的目的，将结构域选为指定结构域。在另一实例中，可以为了鉴定出包括或没有所选内含子的RNA转录本的目的，将内含子选为指定内含子。在本文中使用时，激动剂指引发受体最大应答的分子。在本文中使用时，部分激动刑指这样的分子，其引发受体应答，但是获得的最大应答小于用激动剂(例如，生理配体)获得的。在本文中使用时，拮抗物和竟争性拮抗物指这样的分子，其针对受体结合与野生型或优势配体竟争，没有其自身的情况下将导致受体的活化。在本文中使用时，配体拮抗物指同种型对配体与CSR的相互作用导致的活性拮抗的活性。在本文中使用时，抑制(动词)和抑制(名词)指活性(例如生物学活性)相对于未受抑制的活性的降低。在本文中4吏用时，活性指生物分子(例如多肽)中或其相互作用的功能或机能或改变。示例性的而非限制性的此类活性是复合、二聚化、多聚化、受体相关的激酶活性或其它酶促或催化活性、磷酸化、去鳞酸化、自鳞酸化、与其它分子形成复合物的能力、配体结合、催化活性或酶活性、活化(包括自活化和对其它多肽的活化)、对另一分子功能的抑制或调节、刺激或抑制信号转导和/或细胞应答例如细胞增殖(有丝分HJL生)、迁移(运动发生)、分化(形态发生)、血管发生、生长、降解、膜定位、膜结合和癌发生。可通过本文描述的测定，以及通过本领域技术人员已知的任何合适的测定(包括但不P艮于，体外测定(包括基于细胞的测定)，体内测定(包括在针对特定疾病的动物模型中的测定))，来对活性做出评价。生物学活性指体内展示出的活性。就本文目的而言，生物学活性指本文提供的多Jlt艮示出的任何活性.在本文中使用时，复合指两个或多个分子(例如蛋白质的两个分子)之间发生相互作用形成复合物。相互作用可以是通过非共价健和/或共价鍵，其包括但不限于，疏水相互作用和静电相互作用，范德瓦尔斯力和氩键。通常，蛋白质-蛋白质相互作用涉及疏水相互作用和氩鍵。复合可受到环境M(例如温度、pH、离子强度和压力)以及蛋白质浓度的影响。在本文中使用时，二聚化指相同类型的两个分子(例如受体的两个分子)的相互作用。二聚化包括同源二聚化，其中两个同样的分子发生相互作用。二聚化还包括两个不同分子的异源二聚化，例如，受体的两个亚基，以及两个不同受体分子的二聚化。典型地，二聚化涉及通过每个分子中含有的二聚化结构域的相互作用从而彼此发生相互作用的两个分子。在本文中4吏用时，有丝分裂发生指物质诱导有丝分裂和细胞增殖的过程。在本文中使用时，运动发生指调节细胞移动或迁移的过程，其通常是指一群细胞从一个地方受调控地移动到另一个地方。在本文中^"吏用时，形态发生指细胞、组织或器官的分化和生长。分化可在生物体或部分的结构形成期间发生，例如在器官形成期间发生。分化还可在细胞水平上发生，例如当细胞经历导向更特化的形式或功能的变化时发生。在本文中使用时，血管发生指新的血管的形成。在本文中使用时，"抗血管发生，，或"血管抑制性，，分子指抑制血管发生的分子。在本文中使用时，调节(动词)和调节(名词)指对分子(例如蛋白质)活性的改变。示例性的活性包括但不限于下述活性，例如信号转导和蛋白质磷酸化。调节可包括活性增加(即，激动剂活性的上调)、活性减少(即，下调或抑制)或活性的任何其它改变(例如，周期性、频率、持续期间和动力学)。调节可以是背景依赖性的，典型地，调节是与指定状态相比的，所述指定状态例如野生型蛋白质、组成型状态的蛋白质或在指定细胞类型或条件中表达的蛋白质。在本文中使用时，提到对细胞表面受体活性进行调节表示CSR或配体同种型以某种方式与受体发生相互作用，由此使得活性(例如但不限于，配体结合、二聚化和/或其它信号转导相关活性)被改变。在本文中使用时，提到具有改变的活性的配体同种型(包括HGF同种型)时是指，由于CSR或配体同种型较之关联受体或配体而言不同的结构或序列导致的活性改变。在本文中使用时，组合物指^T混合物。其可以是溶液、悬浮液、液体、粉末、糊、含水、不含水或其任何组合。在本文中使用时，组合指两种或多种事物间或之间的任何关联。组合可以是两种或多种分别的亊物，例如两种组合物或两种集合物，可以是其混合物，例如两种或多种亊物的单混合物，或其任何变化。组合的元件通常是功能相关联或相关的。试剂盒是有包装的组合，其任选包括4吏用该组合或其元件的说明书和/或任选包括用于该试剂盒的目的方法中的其它试剂和容器和工具和设备。在本文中4吏用时，药物效果指施用意欲用于治疗疾病或病症或用于改善其症状的药剂后观察到的效果.在本文中使用时，治疗指下述任何手段，其中，病症、陣碍或疾病或其它适应证的症状被改善或另外朝有利方向改变。在本文中使用时，涉及HGF的疾病或HGF介导的疾病指下述/^T疾病，其中，HGF发挥作用，由此对其活性的调节将影响到对疾病或疾病症状的治疗。HGF介导的疾病包括MET介导的涉及HGF-MET信号传导的疾病，以及涉及通过其它CSR(包括FGFR或VEGFR)的信号传导的其它血管发生性疾病。此类疾病的实例包括癌症和涉及不想要的细胞增殖、血管发生性和炎性反应或应答的其它疾病。在本文中使用时，治疗效M示从对受试者的治疗获得的效果，其改变了，典型地，改进或改善了疾病或病症的症状，或者治愈了疾病或病症。治疗有效量指施用给受试者之后产生治疗效果的组合物、分子或化合物的量。在本文中使用时，术语"受试者，，指动物，包括哺乳动物，例如人类。在本文中使用时，患者指人受试者。在本文中使用时，血管发生性疾病(或血管发生相关疾病)是这样的疾病，其中，血管发生的平mt改变，或者其时杌故改变。血管发生性疾病包括下述这些，其中发生了血管发生的改变，例如不想要的血管化。此类疾病包括但不限于，细胞增殖性病症，包括癌症，糖尿病视网膜病变和其它糖尿病并发症、炎性疾病、子宫内膜异位症和其中过度血管化是疾病过程一部分的其它疾病，包括上文提到的那些。在本文中使用时，计算机化(insilico)指使用计算来进行研究和实验。计算机化方法包括但不限于，分子建模研究，生物分子停靠实验(biomoleculardockingexperiment)以及分子结构和/或过程(例如分子相互作用)的虚拟表现。在本文中使用时，生物学样品指从活的来源或病毒来源或大分子和生物分子的其它来源获得的任何样品，包括可从中获得核酸或蛋白质或其它大分子的受试者的任何细胞类型或组织。生物学样品可以是直接从生物学来源获得的样品，或是经加工的样品。例如，扩增的经分离核酸也构成生物学样品。生物学样品包括但不限于，体液，例如血液、血浆、血清、脑脊髄液、滑液、尿和汗，来自动物和植物的组织和器官样品以及源自其的经加工样品。还包括土壤和水样品以及其它环境样品、病毒、细菌、真菌、藻类、原生动物及其组分。在本文中使用时，大分子指具有数百直至数百万的分子量的任何分子。大分子包括肽、蛋白质、核苷酸、核酸和通常由生物体合成的其它此类分子，但是其也可以是合成制备的或者使用重组分子生物学方法制备的。在本文中使用时，生物分子是自然界发现的任何化合物或其衍生物。示例性生物分子包括但不限于寡核苷酸、寡核苷、蛋白质、肽、氨基酸、肽核酸(PNA)、寡糖和单糖。在本文中使用时，术语"核酸，，指单链和/或双链多核苷酸，例如脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)以及RNA或DNA的类似物或衍生物。术语"核酸"还包括核酸的类似物，例如肽核酸(PNA)、硫代裤酸DNA和其它此类类似物和衍生物或其组合。核酸可以指多核苷酸，例如脱氣核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。该术语还包括从核苷酸类似物、单链(正义或反义)和双链多核苷酸制得的RNA或DNA的等价物、衍生物、变体和类似物。脱氧核糖核苷酸包括脱氧腺苷、脱氧胞苷、脱氣鸟苷和脱氧胸苷。对RNA而言，尿嘧咬M是尿普。在本文中使用时，术语"多核苷酸"指含有至少两个相连的核苷酸或核普酸衍生物的寡聚体或多聚体，包括脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)和DNA或RNA衍生物，所述衍生物^^有，例如，核苷酸类似物或并非裤酸二酯键的"骨架(backbone)"键，例如，鳞酸三酯键、絲磷酸酯键、硫代辨酸酯键、疏酯键或肽键(肽核酸)。术语"寡核苷酸"在本文中还基本与"多核苷酸"同义使用，虽然本领域技术人员知道，寡核苷酸，例如，PC[R引物通常长度小于大约50至100个核苷酸。多核脊酸可包括核苷酸类似物，包括，例如，经质量修饰的核苷酸，其令多核番酸产生质量差异；含有可检测标记的核苷酸，所述标记例如荧光、放射〗性、发光或化学发光标记，其允许对多核苷酸加以检测；或者含有反应基团的核苷酸，所述基团例如生物素或硫醉基，其协助将多核苷酸固定到固体支持物上。多核苷酸还可含有一个或多个可被选择性切割的骨架键，例如，可被化学、S^或光分解切割。例如，多核苷酸可包括一个或多个脱氧核糖核苷酸，接着一个或多个核糖核苷酸，再接着一个或多个脱氧核糖核苷酸，可通it^水解在核糖核苷酸序列处切割此类序列。多核苷酸还可含有一个或多个对切割相对有抗性的键，例如，嵌合寡核苷酸引物，其可包括通过肽核酸键连接的核苷酸以及通过砩酸二酯鍵或其它合适的键连起来的3，末端的至少一个核苷酸，并且其能通过聚合酶得以延伸。可使用公知方法来制备肽核酸序列(见，例如，Weiler等人，NucleicacidsRes.25:2792-2799(1997))。在本文中使用时，在提到合成序列和合成基因的上下文中，合成指通过重组方法和/或通过化学合成方法产生的核酸分子。在本文中使用时，寡核苷酸指下述聚合物，其包括DNA、RNA、核酸类似物，例如PNA，及其组合。就本文目的而言，引物和探针是单链寡核苷酸，或者是部分单链的寡核苷酸。在本文中使用时，引物指含有两个或多个(通常超过三个)脱氣核糖核苷酸或核糖核苷酸的寡核苷酸，可从其起始引物延伸产物的合成。有益于合成的实验条件包括存在三裤酸核苷和用于聚合和延伸的物质(例如DNA聚合酶)和合适的緩沖液、温度和pH。在本文中使用时，通过使用重组DNA方法由重组手段进行的生产指使用7>知的分子生物学方法，^达被克隆DNA编码的蛋白质。在本文中使用时，提到分子(例如核酸分子、寡核苷酸、多肽或抗体)时"经分离的"表示，已通过人手使分子从其^L现于自然环境中的情形有所改变。例如，通过重组宿主细胞产生的和/或重组宿主细胞中含有的分子被i人为是"经分离的"。类似地，已经部分或充分从天然来源或重組宿主细胞纯化出来的分子，或通过合成方法生产的分子被认为是"经分离的"。根据希望的应用，经分离的分子可以以任何形式存在，例如在动物、细胞或其提取物中；脱水的，在蒸汽、溶液或悬浮液中；或被固定于固体支持物上。在本文中使用时，术语"栽体"指这样的核酸分子，其能运送与其相连的另一核酸。一种类型的栽体是附加体，即，能进行染色体外复制的核酸。载体包括能自主复制和/或表达与它们相连的核酸的那些。能指导与它们有效相连的基因表达的栽体在本文中被称为"表达栽体"，通常表达栽体通常以"质粒，，形式存在，其通常是环状双链DNA环，当它们以栽体形式存在时，不与染色体相连。"质粒"和"栽体，，可互换4吏用，因为质粒是最广泛使用的栽体形式。表达栽体的其它形式包括提供等同功能以及随后为本领域所已知的那些。在本文中使用时，"转基因动物，，指下述任何动物，通常是非人类动物，例如，哺乳动物、鸟或两栖动物，其中，动物的一个或多个细胞^^有通过人类介入而引入的异源核酸，例如通过本领城ziH^的转基因技术引入的。核^A通过引入细胞的前体直接或间接引入细胞的，这是通过刻意的遣传操作，例如通过显微注射或者通过用重组病毒进行感染来实现的。该分子可在染色体中稳定整合，即，作为染色体的一部分复制，或者其可以是染色体外复制的DNA.在典型的转基因动物中，转基因使得细胞能表达蛋白质的重组形式。在本文中使用时，报道基因构建体是下述核酸分子，其包括编码与转录控制序列有效相连的报道子的核酸。报道基因的转录是这些序列控制的。这些控制序列中至少一种或多种的活性受另一分子的直接或间接调控，所述另一分子例如细胞表面蛋白质、参与细胞中信号转导的蛋白质或小分子。转录控制序列包括启动子和其它调控区域，例如增强子序列(其能调节启动子的活性)，或者调节RNA聚合酶活性或效率的控制序列。此类序列在本文中被统称为转录控制元件或序列。此外，构建体可包括改变得到的mRNA的翻译，由此改变报逸基因产物量的核苷酸序列。在本文中使用时，"报道子"或"报道部分"指允许对目标分子进行检测的任何部分，例如，细M达的蛋白质，或生物学顆粒。典型的报道部分包括，例如，荧光蛋白，例如红色、蓝色和绿色荧光蛋白(见，例如，美国专利No.6,232,107，其提供了来自海肾(RenUla)物种和其它物种的GFP)，来自大肠杆菌(五.co//)的lazZ基因，碱性磷酸醃，氯審素乙酰转移酶(CAT)和其它此类公知基因。为在细胞中表达，编码报道部分的核酸(在本文中被称作"报道基因")可作为与目标蛋白质的融合蛋白表达，或在目标启动子的控制下表达.在本文中使用时，提到核断列时短语"有效相连"表示，核酸分子或其片断共价连接进一段核酸，例如DNA或RNA中，其可以是单链或双链形式的。片断不必须是连续的，而是两种或多种组分以下述方式并置，所述方式使得组分之间的关系允许它们以它们想要的方式发挥作用。例如，RNA的片断(外显子)可例如通过剪接有效连接，以形成单条RNA分子。在另一实例中，DNA片断可有效相连，由此，调控序列对一条片断的控制能控制其它片断的表达或复制或对其它片断进行其它此类控制。由此，当调控区域与报道子或任何其它多核苷酸有效相连时，或当报道子或任何多核苷酸与调控区域有效相连时，多核苷酸/报道子的表达受调控区城的影响或控制(例如，调节或改变，例如增加或减少)，就基因表达而言，当合适的分子信号(例如转录活化蛋白)与调控序列结合时，核苷酸序列和调控序列以能控制或允许基因表达的方式相连。异源核酸(例如DNA)与调控核苷酸序列和效应器核苷酸序列(例如启动子、增强子、转录和翻译终止位点和其它信号序列)的有效相连指此类DNA与此类核苷酸序列之间的关系。例如，异源DNA与启动子的有效相连指DNA和启动子之间的物理关系，所述关系使得此类DNA的转录由RNA聚合酶从所述启动子起始，所述聚合酶能特异性识别可读框中的DNA，与之结合并使其转录。在本文中使用时，提到多肽中的氨基酸时，术语"有效相连"指氨基酸的共价连接(直接或间接的)。例如，与编码配体的基因的内含子编码的至少一个M酸有效相连的配体(例如HGF)的至少一个结构域表示，来上。此类连接，典型地，通过肽鍵直接的，还可间接实现，例如通过接头或者通过非肽连接实现。因此，含有与编码细JJ^面受体的基因的内含子编码的至少一个^y^酸有效相连的配体的至少一个结构域的多肽可以是内含子融合蛋白。当内含子序列被剪接，或者符合读框地共价连接到外显子序列(编码细J^面受体的结构域)上时，可产生编码此类多肽的核酸。核酸分子的翻译产生了下述多肽，其中，氨基酸的内含子编码部分(至少含有内含子序列编码的终止密码子)与配体的结构域共价相连。还可通过将含有外显子的部分连到含有内含子的部分上，来对它们进行合成生产，包括嵌合内含子融合蛋白，其中外显子是由来自与内含子部分不同的同种型的基因编码的，所述同种型包括不同的配体同种型或细JI^面受体同种型，反之亦然。在本文中4吏用时，提到多肽(例如同种型和内^融合蛋白)的产生时，短语"从核酸产生的"包括字面上多肽分子的产生和从核酸序列向jy^酸序列的翻译来产生多肽的M酸序列。在本文中使用时，缀合物指核酸或多肽连到一起.缀合可以直接或间接实现。在一些实例中，可使用接头，例如肽接头、限制性酶接头或其它接头。缀合还可通过化学方式实现，例如使用异双功能交联试剂来实现。在本文中使用时，交联指通过共价键将两个或多个分子化学地连到一起的过程。交联试剂含有针对蛋白质或其它分子上特定官能团(伯胺、巯基等)的反应末端.交联剂包括同双功能和异双功能交联剂。同双功能交联剂具有两个相同的反应基团，并且通常在一步反应流程中使用，以将蛋白质相互交M来或者使得四级结构稳定。异双功能交联剂具有两个不同的反应基团，其允许顺序(两阶段)缀合，以协助最小化不想要的聚合或白缀合。在本文中使用时，融合蛋白指通过重组DNA技术产生的蛋白质，可通过将一条基因的核酸序列的全部或部分与另一基因核酸序列的全部或部分有效连接来获得。在一些情况下，融合可编码含有两种或多种蛋白质或肽的嵌合蛋白。在本文中使用时，提到多肽时，生产(产生)指表达及回收表达的蛋白质(或可回收的或可分离的表达的蛋白质)。可影响到蛋白质生产的因素包括选用的表达系统和宿主细胞、细胞培养^ft、宿主细胞对蛋白质的分泌以及就纯化目的检测蛋白质的能力。可通过对蛋白质的分泌(例如向细胞培养基分泌)加以评价，来监测蛋白质的产生.在本文中使用时，"提高的产量"指较i^I"照多肽的产量而言多肽的产量增加。例如，将同种型融合蛋白的产量与并非融合蛋白或含有不同融合的对应同种型相比，例如，可将^t^有tPA前/原序列(pre/prosequence)的同种型的产量与^^有其内源信号序列的同种型相比。通常，蛋白质的产量可提高超过，大约或至少1、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、IO倍及更多。典型地，蛋白质的产量较之不是同种型融合或者不含相同融合的对应同种型而言提高5、10、20、30、40、50倍或更多。在本文中使用时，分泌指下述过程，蛋白质通过该过程#>运送进细胞外环境，或者在革兰氏阴性细菌的情况下，^L运送进周质间隙。通常，分泌经由细胞中的分泌途径发生，例如在真核细胞中，这涉及内质网和高尔基体。在本文中使用时，"前体序列"或"前体肽"或"前体多肽，，指这样的絲酸序列，其被加工，并且在加工或切割之前存在于多肽的末端(典型地，M末端)。前体序列包括影响相连的多肽分泌和/或运输的^酸序列。前体序列可包括一个或多个功能性部分。例如，其可包括前序列(信号多肽)和/或原序列。将多肽加工成成熟多肽导致从多肽切割下前体序列。当前体序列包括前序列和原序列时，其也可被称为前/原序列.在本文中使用时，"前序列"、"信号序列"、"信号肽"、"前导序列，，或"前导肽"指初生多肽M末端的^酸序列，其将蛋白质靶向分泌途径，一旦易位进内质网膜后，其就从初生链上被切割下来。在本中使用时，原序列指编码原肽(propeptide)的序列，当所述原肽与多肽相连时，其可展示出不同的调控功能，包^fe但不限于，有助于成熟多肽正确的折叠及二硫鍵形成，原肽被切割后有助于对多肽的活化，和/或作用为识别位点。通常，原序列在分泌前在细胞中被切下，虽然也可以通过外蛋白酶对其进行细胞外切割。在一些实例中，原序列被自催化切割，而在其它一些实例中，另一多肽蛋白酶对原序列加以切割。在本文中^:用时，同源指相互对应的、并且互相相同或者非常相似的来自不同物种的分子(例如核酸分子或多肽)(即，是同源体)。在本文中使用时，异源指活性或序列独特的分子(例如核酸或多肽)。异源分子可源自不同的遣传来源或物种。就本文目的而言，异源分子是并非CSR或配体同种型的蛋白质或多肽或其等位变体(无论是什么来源)。因此，与CSR或配体同种型异源的分子包括含有下述序列的任何分子，所述序列并非源自、内源于或同源于CSR或配体同种型的序列。本文中目标异源分子的实例包括来自相同或不同物种的不同多肽的分泌信号，标签(例如融合标签)或标记，或与CSR同种型或配体不同源且其序列与CSR同种型或配体的序列不相同的任何其它分子的全部或部分。异源分子可与目标核酸或多肽序列融合，以产生融合或嵌合分子。在本文中使用时，异源分泌信号指来自多肽的信号序列，其来自相同或不同物种，在序列上与CSR或配体同种型的信号序列有所不同.异源分泌信号可用于其所源自于的宿主细胞中，或者其可用于与信号序列源自的细胞不同的宿主细胞中。在本文中使用时，内源前体序列或内源信号序列指天然存在的与多肽的全部或部分相关的信号序列。基于其相应关联受体或配体信号序列，CSR和配体同种型的信号序列的大致定位是本领域技术人员已知的。但是，信号肽C-末端边界可变化，典型地，在信号肽C-末端边界任一侧变化不超过大约5个氨基酸。本领域技术人员已知并且可获得算法，来鉴定信号序列以及预测它们的切割位点(见，例如，Chou等人，(2001)，42:136;McGeoch等人，(1985)K/r"s及饥3:271;vonHeijne等人，(1986)7Viic/e/c爿ciVfa及"14:4683)。在本文中使用时，组织纤溶酶原活化物(tPA)指具有纤维蛋白溶解活性以及典型地具有五个结构域的结构(指、生长因子、三环-1、三环-2和蛋白酶结构域)的非固有(extrinsic)(组织类型)纤溶酶原活化物。哺乳动物t-PA包括来自任何动物(包括人)的t-PA。其它物种包括但不限于，兔、大鼠、猪、非人灵长类、马、鼠、狗、猫、牛和羊tPA。编码tPA(包括来自人和非人物种的前体多肽)的核fibi本领域已知的。在本文中使用时，tPA前体序列指下述氨基酸残基序列，其包括来自tPA的前序列和原序列(即，是前/原序列，见，例如，美国专利6，693，181和美国专利4，766，075)。该多肽与tPA天然相连，作用于指导tPA从细胞的分泌。针对tPA的示例性的前体序列示于SEQIDNO:253中，其是SEQIDNO:252所示的核酸序列编码的。前体序列包括信号序列(M酸1-23)和原序列(M酸24-35)。原序列包括两个蛋白酶切割位点一个在残基32之后，另一个在残基35之后。前体序列示例性的物种变体如SEQIDNO:258-265中任何一项所示；示例性的核普酸和M酸等位变体如SEQIDNO:256或257所示。在本文中使用时，tPA前体序列的全部或部分指tPA前体序列中足以指导对tPA的加工和/或tPA从细胞的分泌的任何M，连续部分。前体序列的全部或部分可包括野生型或优势tPA前体序列的全部或部分，例如SEQIDNO:253所示且被SEQIDNO:252编码的，SEQIDNO:257所示的其等位变体或SEQIDNO:256-265所示的物种变体。例如，对于SEQIDNO:253所示的示例性tPA前体序列而言，tPA前体序列的部分可包括SEQIDNO:253中所示的氨基酸1-23,或氨基酸24-35、24-32,或氨基酸33-35，或氨基酸1-35中的任何其它连续序列。在本文中^L用时，多肽的活性部分(例如提到同种型的活性部分时)指多肽的具有活性的部分。在本文中使用时，对蛋白质的纯化指例如从匀浆(其可能含有细胞和组织组分，包括DNA，细胞膜和其它蛋白质)分离蛋白质的过程。可以以本领域技术人员已知的多种方法中的任何来纯化蛋白质，例如，通过使它们跑经pH梯度亂欧或离子交换柱根据其等电点来纯化，通过大小排阻层析或SDS-PAGE(十二烷M酸钠-聚丙烯酖胺皿电泳)分析根据其大小或分子量来纯化，或者根据其疏水性来纯化。其它纯化技术包括但不限于沉淀或亲和层析(包括免疫亲和层析)以及其它技术和方法，包括上述任何方法的组合。此外，可通过将标签包括到分子上来协助纯化，所述标签例如用于亲和纯化的his标签，或者用于鉴定的可检测的标志物。在本文中使用时，检测包括允许对蛋白进行观察(通过眼睛或仪器)的方法。可使用对蛋白质具有特异性的抗体来观察蛋白质.还可通过将标签(包括表位标签)或标记与蛋白质融合，来协助对蛋白质的检测。在本文中使用时，"标签"指M酸序列，典型地，其被加入到多肽的N-末端或C-末端。包括融合入多肽的标签可协助多肽纯化和/或检测。在本文中使用时，表位标签包括下述M酸序列，所述Jl^酸序列具有的残基足够提供可针对其产生抗体的表位，但又足够短从而不会干扰到与其融合的多肽的活性。合适的标签多肽通常具有至少6个氨基酸残基，通常在大约8至50个氨基酸残基之间。在本文中使用时，标记指可检测的化合物或组合物，其与同种型直接或间接缀合，以产生经标记的同种型。标记可自身即是可检测的(例如，放射性同位素标记或荧光标记)，或者在S^l标记的情况下，其可催化底物化合物组成的化学改变，这进而是可检测的.标记的非限制性实例包括荧光部分、绿色荧光蛋白或荧光素酶。在本文中使用时，融合标签化多肽指含有与标签多肽融合的同种型多肽的嵌合多肽。在本文中使用时，表达指下述过程，基因的编码信息由该过程转变为结构，其存在于细胞中并在其中运作。表达的基因包括转录为mRNA再翻译成蛋白质的那些，以及转录为RNA但是不翻译成蛋白质(例如，转移RNA和核糖体RNA)的那些。就本文目的而言，表达的蛋白质可保留在细胞内，例如在胞质中，或者可从细胞分泌。蛋白质的总表达在本文中使用时，融合构建体指下述核酸序列，其含有来自一种核酸分子的编码序列以及来自另一核酸分子的编码序列，其中，所述编码序列处于相同读框中，使得当融合构建体在宿主细胞中转录和翻译时，产生含有两种蛋白质的蛋白质。两种分子可在构建体中邻接，或者可被接头多肽分开，所述接头多肽含有l、2、3或更多个氨基酸，但是典型地是少于IO、9、8、7、6个氨基酸。融合构建体编码的蛋白产物被称为融合多肽。在本文中使用时，同种型融合蛋白或同种型融合多肽指下述核酸分子编码的多肽，所述核酸分子含有来自同种型的编码序列(有或没有内含子序列)以及编码另一多肽的编码序列，例如前体序列或表位标签。核^A有效相连的，^L得当同种型融合构建M转录和翻译时，产生下述同种型融合多肽，其中，同种型多肽与另一肽直接相连或通过接头相连。典型地，同种型多肽在N-末端或C-末端或两个末端与一种或多种其它的多4M目连。在本文中使用时，启动子区域指基因中控制其有效相连的DNA转录的DNA部分。启动子区域包括特定的DNA序列，其足够被RNA聚合酶识别、结合并起始转录。该启动子区域部分被称为启动子。此外，启动子区域包括调节RNA聚合酶的这种识别、结合和转录起始活性的序列。这些序列可以是顺式作用的，或者可以应答于反式作用因子。取决于调控的性质，启动子可以是组成型的或者是受调控的。在本文中使用时，调控区域表示正面或负面影响到有效相连基因的表达的顺式作用核苷酸序列.调控区域包括赋予基因可诱导(即，需要物质或刺激用于增加的转录)表达的核苷酸序列。当存在诱导刑或以增加的浓度存在诱导刑时，基因表达可被增加。调控区域还包括赋予对基因表达的阻遏(repression)的序列(即，物质或刺激减少转录)。当存在阻遏物或以增加的浓度存在阻遏物时，基因表达可被减少。调控区域已知能影响、调节或控制很多体内生物学活性，包括细胞增殖、细胞生长和死亡、细胞分化和免疫调节。典型地，调控区域与一种或多种反式作用蛋白结合，这导致基因增加或减少的转录。基因调控区域的特定实例是启动子和增强子.启动子是位于转录或翻^^起始位点周围的序列，典型地，位于翻if^始位点的5，.启动子通常位于翻译起始位点的lKb以内，但是也可以离得更远，例如，2Kb、3Kb、4Kb、5Kb或更远，直到且包括10Kb。已知增强子位于基因5，或3，端或者位于外显子或内含子中或一部分中时，其能影响基因表达。增强子还可在离基因相当远的距离处发挥作用，例如，在大约3Kb、5Kb、7Kb、10Kb、15Kb或更远的距离处发挥作用。除了启动子区域之外，调控区域还包括协助翻译的序列、协助内含子的剪接信号的序列、协助保持基因的正确读框以允许mRNA符合读框地翻译的序列，以及终止密码子、前导序列和融合伴侣序列、内部核糖体结合位点(IRES)、产生多基因体的元件，或多顺反子、信使、聚腺普化信号(以提供目标基因转录的恰当聚腺苷化)和终止密码子，以及任选地，调控区域可被包括于表达栽体中。在本文中使用时，存在于本文中出现的多条^J^^列中的"M酸"是根据它们公知的三字母或单字母缩写(见表1)来表示的。存在于多条DNA片段中的核苷酸是用本领域中常规使用的标准单字母命名法来命名的。在本文中使用时，"氨基酸^Ul"指对多肽在其肽连接处进行化学消化(水解)形成的氨基酸。本文所述的氨基酸残基通常是"L"异构形式的。"D"异构形式的残基可被任何L-t^酸^J^代，只要多肽能保留想要的功能性质即可。NH2指存在于多肽IUt末端的游离氨基.COOH指存在多肽羧基末端的游离氛基。与在J.Biol.Chem.，243:3552-59(1969)中描述的并且在37C.F.R..§§1.821-1.822中予以采纳的标准多肽命名法一致，关于M酸残基的缩写如表l所示表l-对应关系表<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>本文式子中所示的氨基酸戎基的所有序列都按照常规的4UM^端到羧基末端的方向从左到右定向。此外，短语"4^酸^i"被定义为包括对应关系表中列出的修饰的A^酸、非天然和非常见的氨基酸.此外，应当注意，在氨基酸残基序列开头或结尾的破折号表示与一个或多个氨基酸^的另一序列，或与絲末端基团(例如NH2)或絲末端基团(例如COOH)相连的肽鍵。在肽或蛋白质中，氨基酸的合适保守取代是本领域技术人员已知的，其通常在不改变得到分子的生物学活性的情况下进行.本领域技术人员知道，通常，在多肽非关鍵区域的单个4y^酸取代不会实质改变生物学活性(见，例如，Watson等人3/ofec"tor5iotogvo/^e(e"e，第4版，1987，TheBenjamin/CummingsPub.co.，第224页)。此类取代可按照下表2所示来进行表2<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>其它取代也是可行的，可通过经验或按照其它已知保守或非保守取代来确定其它取代。i在本文中4吏用时，拟肽物是这样的化合物，其模拟特定的肽的生物学活性形式的构象和某些立体化学特征。通常，拟肽物被设计为模拟化合物的某些想要的性质，而非不想要的性质，例如，柔性(flexibility)，这导致生物学活性构象的丢失和键的破裂。可通过用生物等构物(bioisostere)来替换作用于不想要的性质的某些基团或鍵，从生物学活性化合物制备拟肽物。生物等构物是本领域技术人员已知的。例如，亚甲基生物等构物CH2S已在脑啡肽类似物中被用作为酖胺替换物(见，例如，Spatola(1983)笫267-357页，在ChemistryandBiochemistryofAminoAcids,Peptides,andProteins中，Weinstein，编著第7巻，MarcelDekker，NewYork)。通过口服施用的吗啡是这样一种化合物，其是内啡肽的拟肽物。就本文目的而言，其中形成多肽骨架的一个或多个肽鍵被生物等构物替换的多肽是拟肽物。在本文中使用时，两种蛋白质或核酸之间的"相似性"指蛋白的絲酸序列或核酸的核苷酸序列之间的相关性。相似性可基于残基的序列和其中含有的残基的同一性和/或同源性程度。用于评价蛋白质或核酸间相似性程度的方法是本领域技术人员已知的。例如，在评价序列相似性的一种方法中，以能在序列间产生最大水平的同一性的方式，对两条氨基酸或核苷酸序列加以比对。"同一性"指狄酸或核苷酸保持不变的程度。对絲,列的比对(以及在一定程度上对核苷酸序列的比对)还可考虑到氨基酸(或核苷酸)中的保守差异和/或常见取代。保守差异是所涉及的残基物理化学性质得以保持的那些。比对可以是整体上的(在序列的全长上对被比较的序列加以比对，包括所有残基)或者可以是局部的(对仅包括最相似的一个或多个区域的序列部分加以比对)。"同一性"本身具有本领域已知的含义，其可使用公开的技术来计算。(见，例如，。附/;"她Vwia/Mfecn/flr祝o/ogy，LeskjA.M.，编著，OxfordUniversityPress,NewYork,1988;祝oco附/iwft'"g:/"/w附flricsa"rfG^"o附e尸r。ye"s1,Smith，D.W.，等人，AcademicPress,NewYork,1993;GwipnteriS^狄/iceZ)fl,"，第I部分，Griffin,A.M.，和Gri伤n，H.G.，编著，HumanaPress,NewJersey,1994;iS^wewce/"Mofec"/wJ5/o/ogy，vonHeinje，G.，AcademicPress,1987;和SequenceAnalysisPrimer,Gribskov，M.和Devereux，J.，编著，MStocktonPress,NewYork,1991)。虽然存在多种方法来测量两条多核苷酸或多肽之间的同一性，但是术语"同一性"是本领域技术人员7^知的(Carrillo，H.&Lipman，D.，/々/;/i^/M"狄48:1073(1988))。在本文中使用时，对多肽和另一多肽在全长上进行比较的序列同一性指在多肽全长上氨基酸同一性的百分比。例如，当对多肽A的全长与多肽B的全长比较序列同一性时，如果多肽A具有100个氨基酸，多肽B具有与多肽A的氨基酸1-95相同的95个氨基酸，那么多肽B具有95%的同一性。如下文所讨论的，以及如本领域技术人员已知的，用于评价同一性的多种程序和方法是本领域技术人员已知的。可不用软件，容易地确定高水平的同一性，例如卯％或95%的同一性。在本文中使用时，同源(在提到核酸和/或M酸序列时)表示，大约超过或等于25%的序列同源性，典型地，超过或等于25%、40%、60%、70%、80%、85%、90%或95%的序列同源性；如果需要的话，可以指明精确的百分比。就本文目的而言，除非另有指明，术语"同源性"和"同一性"通常可互换使用。通常，为测定百分比同源性或同一性，对序列加以比对，以获得最高的顺序匹配(见，例如，G附/"toftVwa/Mofecw/arJiWogy，Lesk，A.M.,编著，OxfordUniversityPress,NewYork,l卿；胁co附p"ft'"g../"/or/warics1朋</iVo乂ec&，Smith,D.W.，编著，AcademicPress,NewYork,1993;CWi/wter/4"崎s/sSe《we"ceZ)她，PartI，Griffin,A.M"和Griffm，H.G.，编著，HumanaPress,NewJersey,1994;"拜/i"y4"ff(vs/s,Vi胁/ecw/ar倫/，，vonHeinje，G.，AcademicPress,1987;和i^w柳ceJ""/"/s/V/附er，Gribskov，M.和Devereux，J"编著，MStocktonPress,NewYork,1991;Carrillo等人.(1988)/J/^&W3fa^48:1073)。关于序列同源性，通过标准比对算法程序来测定保守氨基酸的数量，这可用每个供应者建立的缺省空位罚分。典型地，充分同源的核酸分子将能在中等严格度或高严桔，度下，沿着目标核酸的全长杂交.本发明还包括这样的核酸分子，其含有简并密码子，以替换杂交核酸分子的密码子。可使用已知的计算机算法，例如，"FASTA"程序，使用例如Pearson等人(1988)/Voc.AW/.Jcarf.USA85:2444中的缺省参数，来确定任何两条核酸序列是否具有至少60。/。、70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%"相同"或"同源"的核苷酸序列(其它程序包括GCG程序包(Devereux，J"等人，iV"c/c及ewarcA12(I):387(1984))、BLASTP、BLASTN、FASTA(Altschul，S.F.，等/s/Mo/"5!》/215:403(1990);GuidetoHugeComputers,MartinJ.Bishop,编著，AcademicPress,SanDiego，1994和Carrillo等人(1988)/J/ip/iWMafA48:1073))。例如，国立生物技术信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation)数据库的BLAST函数可用于测定同一性。其它商业或公众可获得的程序包括，DNAStar"MegAlign"程序(Madison,WI)和威斯康辛大学遗传计算机组(UniversityofWisconsinGeneticsComputerGroup)(UWG)的"Gap"程序(MadisonWI).可例如通过使用GAP计算^L^序(例如，Needleman等人(1970)丄Af"Jio/.48:443，按Smith和Waterman((1981)Adv.ApplMath.2:482所修订的)，对序列信息加以比较，来测定蛋白质和/或核酸分子的百分比同源性或同一性。简言之，GAP程序将相似性定义为对齐的相似符号(即，核苷酸或氨基酸)的数量除以两条序列中较短序列符号的总数。用于GAP程序的缺省M可包括(1)一元比较矩阵(含有相同为1值而不同为0值)和Gribskov等人(1986)7Vc/及战14:6745的加权比较矩阵，如Schwartz和Dayhoff，编著，JTX^SOFPUOr五/7V5^g^^VC五A/VD5T及(7Cn7i^，NationalBiomedicalResearchFoundation,第353-358页(1979)所述；(2)对于每个空位3.0罚分，以及对于每个空位中的每个符号另外的0.10罚分；以及(3)对于末端空位没有罚分。因此，在本文中使用时，术语"同一性，，或"同源性，，表示对测试多肽或多核苷酸与参考多肽或多核苷酸之间的比较。在本文中使用时，术语至少"90%相同，，指相对于参考核酸或多肽絲紗列而言90至99.99的百分比同一性。90%水平或更高的同一性表明下述事实为示例性目的個二没，对100个氨基酸长度的测试多肽和参考多肽加以比较。测试多肽氨基酸中仅有不超过10%(即，100个中的10个)与参考多肽的氨基酸不同。类似比较可在测试多核苷酸和参考多核苷酸之间进行。此类差异可^示为随机分布于多肽全长上的点突变，或者它们可以聚集一个或多个位置，长度可变，但不超过最大可允许值，例如，10/100个氨基酸的差异(大约卯％同一性)。差异可被定义为核酸或氦基酸取代、插入或缺失.在高于大约85-90%的同源性或同一性水平上，结果应当独立于程序和空位参数设置；这样高水平的同一性可容易地评价，通常通itA工比对即可，而无须依赖软件.在本文中使用时，被比对的序列指使用同源性(相似性和/或同一性)来比对核苷酸或M酸序列中的相应位置。典型地，对通过50。/。或更高同一性相关的两条或多条序列加以比对。序列的比对集指相应位置比对的两条或多条序列，其可包括对源自RNA的序列(例如EST和其它cDNA)与基因组DNA序列加以比对。在本文中使用时，"引物"指这样的核酸分子，在合适的条件下(例如，存在四种不同的三裤酸核苷和聚试剂，例如DNA聚合酶、RNA聚合酶或逆转录酶的情况下)，在合适的緩沖液中以及合适的温度下，所述核酸分子可作为模板指导的DNA合成的起始点。技术人员将理解，某些核酸分子可用作为"探针"和"引物"。但是，引物具有3，羟基以用于延伸。引物可用于多种方法中，所述方法包括，例如，聚合酶链式反应(PCR)、逆转录酶(RT)-PCR、RNAPCR、LCR、多重PCR、锅柄PCR(panhandlePCR)、捕获PCR、表达PCR、3，和5，RACE、原位PCR、连接介导的PCR和其它扩增方案。在本文中使用时，"引物对，，指一组引物，其包括与待扩增(例如，通过PCR)序列5，末端杂交的5，(上游)引物和与待扩增序列3，末端的互补序列杂交的3，(下游)引物。在本文中使用时，"特异性杂交"指，核酸分子(例如，寡核苷酸)通过互补威基配对退火到M酸分子上。本领域技术人员熟悉影响到特异性杂交的体外和体内^lt，例如特定分子的长度和组成。与体外杂交特别相关的^lt还包括退火和洗涤温度、緩沖液组成和盐浓度。用于除去非特异性结合的核酸分子的示例性洗涂条件在高严格度下是O.lxSSPE,0.1%SDS，65°C，在中等严格度下是0,2xSSPE，0.1%SDS，50。C。等同严格度M是本领域内已知的。技术人员可以容易地调节这些M，以获得核酸分子与适合于特定应用的M酸分子的特异性杂交。在本文中^f吏用时，有效量^1预防、治愈、改善、阻抑(arrest)或部分阻抑疾病或障碍症状所必需的治疗刑的量。在文中使用时，单位剂量形式指适合于人类和动物受试者的、如本领域所已知的那样各自包装的物理上离散的单位。除非上下文中另有明确指明，在本文中使用时，单数形式，"一个/种"、"这个/种"("a"、"an"和"the")也包括复数指代.因此，例如，提到化合物时，包括"一个细胞外结构域"也包括具有一个或多个细胞外结构域的化合物。在本文中使用时，范围和数量錄示为"大约"是一个特定的值或范围。大约也包M确的数量。因此，"大约5个威基"既表示"大约5个M"也表示"5个>^"。在本文中使用时，"任选的"或"任选地，，表示，其之后描述的亊件或情形发生或不发生，该描述包括其中所述亊件或情形发生的情况，也包括不发生的情况。例如，^i被取代的基团表示该取代未被取代或被取代。在本文中使用时，除非另有指明，用于任何保护性基团、氨基酸和其它化合物的缩写都与其常见用法、公认缩写或IUPAC-IUB生物化学命名协会(CommissiononBiochemicalNomenclature()见(1972)Biochem.U:1726)—致。B.肝细胞生长因子(HGF)和MET受体本文提供了肝细胞生长因子(HGF)的同种型。由于存在插入和/或缺失，所以HGF同种型与关联配体不同，由此得到的HGF同种型展示出与HGF相比而言一种或多种活性或功能或结构上的差异。活性或功能包括但不限于受体二聚化、细胞信号传导、细胞迁移、细胞生长和增殖以^Uk管发生。HGF同种型具有多种活性，包括作为HGF受体MET调节子的活性以及血管抑制活性。本文提供的HGF同种型包括调节其它生长因子受体活性的那些，例如通过调节VEGFR配体或FGFR配体来调节VEGFR或FGFR，还包括具有一般性血管抑制活性的HGF同种型。本文提供的HGF同种型包括展示出MET受M抗物活性以;ML示出抗血管发生活性的那些。l.HGF肝细胞生长因子(HGF，也被称为^t因子，SF和肝细胞生长素A)是把向多种上皮和内皮细胞的多效因子。HGF在器官再生、器官形成、胚胎发生和癌发生中起作用。其具有有丝分裂发生、运动发生(细胞运动性的增强)和形态发生活性。HGF的特殊生理学功能包括通过介导上皮-间充质相互作用来支持多种器官的器官形成，以及通过介导肿瘤-基质相互作用来刺激肿瘤的新血管形成。HGF含有与其它丝氨酸蛋白酶(例如，纤维蛋白溶酶原、tPA、nPA和因子XII)的催化结构域同源的蛋白酶结构域。但是，HGF并不展示出蛋白酶活性，因为构成催化三联体的三个M酸中的两个有所改变(即，H534Q和S673Y)。示例性的人HGF由728个氨基酸的单可读框前体编码，其在N-末端氨基酸1-31>^有信号序列。成熟的HGF蛋白质被蛋白水解加工为通过二硫键相连的异源二聚体分子，其由69kDa的a-链(也被称为二聚体的重链X从SEQIDNO:3所示的示例性HGF的絲酸32延伸到狄酸494)和34kDa的p-链(也被称为二聚体的轻链)(从SEQIDNO:3所示的示例性HGF的氨基酸495延伸到氨基酸728)构成。HGF分子的a-链含有四个三环结构，其作为蛋白质结合模块发挥作用，p-链含有丝氨酸蛋白酶(SerP)样结构域(见，例如图2)。例如，在本文如SEQIDNO:3(由SEQIDNO:2编码)提供的示例性全长HGF多肽中，信号肽位于M酸l-31处，N-末端结构域位于氨基酸34-124处，三环l结构域位于氨基酸128-206处，三环2结构域位于氨基酸211-288处，三环3结构域位于氨基酸305至383处，三环4结构域位于氨基酸391至469处，a-链和卩-链之间的链间区域(interchain)位于氨基酸487-604之间，丝氨酸蛋白酶(SerP，肽酶S1)结构域位于氨基酸495-728处。HGF基因(SEQIDNO:1)由18个外显子构成，它们被17个内含子隔开(见，例如图1)。HGF的外显子1含有5，非翻译区域和与分泌相关的信号肽，外显子2和外显子3编码N结构域(这^1被两个二^L稳定44120-44247;49290-49392;52772-52905;58618-58656;59894-5999162773-62847;63710-63850;64384-64490;64602-64747;外显子10外显子11外显子12外显子13外显子14外显子15外显子16外显子17包括核苷酸包括核苷酸的发夹环区域)，外显子4-11编码四个三环，每个三环由两个外显子编码，外显子12含有a-链和p-链之间的间隔区，剩下的六个外显子编码SerP样结构域(见，例如，Seki等人，(1991)Gene102:213)。在本文提供的如SEQIDNO:1的示例性HGF基因组序列中，外显子1包括核苷酸1-253，起始密码子在核苷酸位置166处开始；内含子l包括核苷酸254-7264;外显子2包括核苷酸7265-7431;内含子2包括核苷酸7432-11333;外显子3包括核苷酸11334-11445;内含子3包括核苷酸11446-12833;外显子4包括核苷酸12834-12948;内含子4包括核苷酸12949-17874;外显子5包括核苷酸17875-18117;内含子5包括核苷酸18118-25016;外显子6包括核苷酸25017-25137;内含子6包括核苷酸25138-26665;外显子7包括核苷酸26666-26784;内含子7包括核苷酸26785-40357;外显子8包括核苷酸40358-40532;内含子8包括核苷酸40533-44119;外显子9内含子9包括核苷酸44248-49289;内含子10包括核苷酸49393-52771;内含子11包^t核苷酸52906-58617;内含子12包括核苷酸58657-59893;内含子13包括核苷酸59992-62772;内含子14包括核苷酸62848-63709;内含子15包括核苷酸63851-64383;内含子16包括核苷酸64491-64601;内含子17包括核苷酸64748-67379;以及外显子18包括核苷酸67380-68009。HGF通过调节被命名为MET的受体来参与其多种活性。这些活性包括与细胞(包括癌细胞)的运动性、有丝分m生和形态发生相关的那些，以及对血管发生的促进。例如，HGF作为针对肝细胞(Nakamura等人(1991)，/"3:67)、上皮细胞(Dignass等人，(1994)必/oc&附.丑/o/^".G附附.202:701)、内皮细胞(Bussolino等人，(1992)/CW/AV/:119:629)、皮肤成纤维细胞(Kataoka等人，(1993)CellBiol.包括核苷酸包括核苷酸包括核苷酸包括核苷酸包括核苷酸包括核苷酸Internat.17:65)、,果素细J&(Matsiimoto等人，(1991)丑/ocAe肌丑/op/^s.I76:45)和itiL前体细胞(Kmiecik等人，(1992)80:2454)有丝分裂因子发挥作用。此外，HGF作为针对内皮细胞和很多上皮细胞(包括肝细胞)以及针对若干种增强细胞侵入性的肿瘸细胞的运动发生因子发挥作用(Stoker等人，(1987)iVfl似re321:239;Weidner等人，(1991)7Vfl汰JcW.88:7001)。HGF还作为形态发生因子发挥作用，以通过肾上皮细胞诱导小管(tubule)形成(Montesano等人，(l"l)Ce//67:卯1)，通过乳房上皮细胞诱导输乳小导管形成(Tsafarty等人，(1992)5Wewce257:1258);以及通过肝细胞诱导索(cord滩成(Michalopoulos等人，(1993)爿m.156:443)。HGF的其它性质包括作为细胞毒性或抑制细胞因子的活性，例如，在肺瘤细胞中(Shiota等人，(1992)iVwcWa汰S"89:373)，以及作为血管发生因子的活性(Morishita等人，(2004)C"/rGe"e7%er.4:199)。此外，HGF还展示出免疫调控活性，例如，阻抑树突细胞功能(Okimishi等人，(2005)/J附附"朋/:175:4745).当其受体，MET结合以及酪氨酸自磷酸化后，HGF介导的一些活性被诱导出来，一组信号传导分子和/或衔接蛋白(adaptorprotein)被新招募到MET的胞质结构域上，导致多种信号传导^m大被活化，这形成完整的细胞内和细胞外应答网络。HGF结合之后，MET调动了多种含SH2的信号转导物，包括砩脂跣肌醇-3-激酶、磷脂酶C-Y、Stat3、Grb2和Grb2相关入鸿蛋白Gabl，并且间接活化Ras-促分裂原活化的蛋白激斷MAPK)途径。信号传导途径和信号传导分子的不同组合和/或应答大小的差异导致HGF/MET活性不同。此外，HGF的活性受细胞类型以及不同细胞环境的影响。通过HGF的MET活化机制需要将单链HGF切割为两条链的形式。HGF的单链形式保留了受体结合活性，但是缺少HGF两^形式的生物学活性，由此其作为HGF活性的拮抗物发挥作用。切割为两^的形式导致构象变化和结构域的可能重排是有可能的(CWrgadze等人，(1998)F五5SZ^股,s430:126)。典型地，对受体酪氨酸激蘇(例如MET)的活化需要在结合它们的关联配体时从单体转变为二聚体状态.因此，配体必须具有两个结合位点或者自身是二聚体。假定，HGF变为两^形式的构象变化允许HGF在受体活化之前二聚化。SerP结构域之间的相互作用可使得二聚体的相互作用稳定，因为SerP结构域对于HGF的生物学活性来说是关键的，对受体结合来说却不是。肝素和疏酸肝素可进一步稳定全长二聚体，它们对于天然HGF同种型单体NK1和NK2的交联(用于激动剂活性)来说是关鍵的(Chirgadze等人，(1998)^EASZ^股re430:126),a.HGF结构域结构结构-功能研究已经阐释了HGF结构域的功能。N-末端结构域的发夹环、三环1或三环2或SerP结构域的缺失使得HGF的生物学活性被消除。相反，具有三环3或三环4缺失的分子展示出降低的但仍可测量到的活性(Chirgadze等人，(1998)i^ASjLe股M430:126)。HGF的a-链负责与MET受体的结合，并且这一相互作用主要由N-末端结构域和第一三环(Kl)结构域介导。i.N末端结构域N-末端结构域含有SEQIDNO:3所示的示例性HGF中的氨基酸34至124，其被认为与硫酸肝素糖胺聚糖(HSGAG)在细J!^面上的结合相关，这种结合是与其受体MET之间的高亲和性相互作用所需要的。典型地，在具有较不丰富的、更高亲和性的、参与信号转导的酪氨酸激酶受体时，配体与HSGAG或可溶肝素的结合傻进了配体的稳定和/或定位。肝素结合促进了配体的寡聚化，这能通过刺激酪氨酸激酶受体的二聚化来增强信号传导。多种生长因子(例如HGF、FGF1和FGF2)依靠含肝素共同受体提供次级结合位点，所述位点补充特定受体的相互作用，并且增强粘着力。例如，用类肝素酶(从细lfe^面切下HSGAG)处理细胞，减少了HGF-MET交联，并且向细胞施用可溶肝素改变了HGF介导的功能(Sakata等人，(1997)JJBiWC^肌，272:9457)。HGF的肝素结合位点由HGFN-末端结构域中的碱性和/或极性残基构成(Zhou等人，(1998)Structure,6:109)，研究表明，向重组N-末端结构^MaAJ!f素，而不向重组Kl结构域中加入，就足以诱导结构域的寡聚化(Sakata等人，(1997)/祝o/CAe抓，272:9457)。因此，HGF的N-末端结构域保留了肝素或内源HSGAG结合能力，这是配体寡聚化、受体结合和受体活化和信号传导所需要的。结合HGF的受体MET需要N-末端结构J^明N-末端结构^A经工程^Lit的HGF同种型NK4拮抗活性的关鍵性决定子(见，下文，Kuba等人，(2000)5fWAe肌说oj^ys.及饥Owf附"/f.279:846)。除了通过与肝素的相互作用促进受体二聚化之外，N-末端结构域与硫酸肝素的相互作用还对不依赖受体的血管发生抑制起作用，HGFN-末端结构域的重组肽并不是通过破坏HGF/MET相互作用来抑制血管发生的，其而是通过干扰HGF与内皮GAG(包括HSGAG)的结合来抑制的。此外，HGFN-末端结构域的抗血管发生作用并不限于HGF，因为N-末端结构域可对多种GAG依赖性生长因子(例如，HGF、FGF2和VEGF)拮抗，这通过阻断它们与细胞表面GAG相互作用的能力来实现(Merkulova誦Rainon等人，(2003)/祝o/Ore抓278:37400)。ii.三环域HGF含有被命名为K1、K2、K3和K4的四个三环域。基于SEQIDNO:3示出的示例性HGFM酸序列而言，Kl结构域包括氨基酸128-206，K2结构域包括氨基酸211-288，K3结构域包括氨基酸305-383，K4结构域包括氨基酸391-469。三环域在蛋白质-蛋白质相互作用中的参与表明，HGF的受体结合位点定位于一个或多个其三环域中。通过对HGF的Kl结构域加以诱变而降低HGF活性间接支持了Kl在结合MET中的作用。其它一些研究显示，Kl结构域可模拟HGF活性，这直接证明了功能性的K1/MET相互作用。例如，Kl结构域自己(而非N-末端结构域)就足以结合并活化MET受体，例如通过诱导受体酪氨酸激酶活化、MAP激酶活化、细胞运动性和细胞增殖来实现。Kl介导的功能^f素依赖性的和不依赖肝素的，例如，Kl对有丝分裂发生信号传导的刺^bi肝素依赖性的，而Kl对细胞运动性的刺激则是不依赖肝素的(Rubin等人，(2001)/5fe/C&附.276:32977)。Kl结构域自身不结合肝素，表明疏酸肝素可能通过并非HGF-硫SUf素结合的机制来协助Kl信号传导，例如，通过硫酸肝素与MET受体的直接相互作用来协助。事实上，其它生长因子配体/受体需要肝素结合才能发挥功能。例如，通过FGFR的FGF信号传导不仅需要FGF-硫酸肝素结合，还需要FGFR和硫酸肝素之间的相互作用。支持此点的是，MET的细胞外结构域含有肝素结合位点。因此，介导K1诱导的运动发生和有丝分装良生的应答是否需要硫酸肝素的矛盾表明，MET-硫酸肝素相互作用招募来了新的细胞内效应器，其介导不同的细胞应答。重组型(NK1，见下文)有所降低表明，含有可与疏酸肝素结合的N-末端结构域的HGF能调节配体的自身-关联性，由此加强HGF信号传导。通常，三环域还与血管发生抑制相关，这是由于它们的蛋白质结合能力导致的，这由大量含有三环域的蛋白质所证实。例如，制管张素(含有纤维蛋白溶酶原的Kl-K4结构域的分子)能抑制内皮细胞的增殖和迁移，以及诱导调亡。类似地，凝血酶原的K2结构域、tPA的Kl-K2结构域以及uPA的K2结构域都展示出^jfiL管发生性质。通过三环域抑制血管发生的机制被假定为涉及与内皮细胞上可能的血管发生性结合分子的相互作用，例如，结合到ATP合酶、血管动蛋白(angiomotin)、av卩3整联蛋白、膜联蛋白II或伶阿一种或多种生长因子受体，例如MET上(Matsumoto等人，(2005)丑/ocAeifi及m333:316;Kuba等人，(2000)祝ocAe肌JJ/印A".及dOwiiww汰279:846)。同样，在不存在HGF的p-链或N-末端结构域时，Kl-K4结构域足以介导HGF的血管抑制活性(Kuba等人，(2000)5/ocAe饥Bio/^p.及战Co附附"".279:846)。Kl结构域也能独立发挥作用，以抑制生长因子诱导的血管发生性功能，例如FGF2刺激的内皮细胞增殖(Xin等人.，(2000)5/印A".Jes.Owt附"".277:186)。K3和K4结构域与前两种三环域组合，展示出上文所讨论的^jfc管发生性质，它们对于协助与p-链的相互作用(受体活化必需的)来说也是重要的(见下文)。iii.p誦链HGF的P-链含有SEQIDNO:3示出的示例性HGF的狄酸495-728，其结构上类似丝氨酸蛋白酶，并且含有丝氨酸蛋白酵(SerP)结构域，但是由于催化三联体中两处非保守取代导致缺乏蛋白水解活性。HGF的p-链不能与MET受体结合，其不能单独展示出HGF的活性。但是，p-链的缺失却导致HGF生物学活性的损失，即使a-链单独就可与HGF受体结合(Date等人(1997)inters420:1-6)。用重组分子和HGF卩-链一起对细胞的伴随刺激(concomitantstimulation)诱导HGF应答，所述重组分子基本上含有含HGF全部四个三环域的a-链(NK4同种型，见下文)(Matsumoto等人，(1998)/CAe肌36:22913)。而施用卩-链和仅含N-末端结构域和两个三环域的HGF同种型则没有支持p-链的受体结合或受体活化。这些结果表明a和p链之间的合作性相互作用，这依赖于HGF的K3和K4结构域的存在以用于与p-勤目互作用。因此，HGF的卩-链是最佳活化以及对细胞内信号转导途径的随后活化(这导致HGF介导的有丝分M生、形态发生和运动发生应答)所必需的。2.HGF变体a.HGF剪接变体除了HGF的全长同种型之外，体内鉴定出了至少三种另外的HGF剪接变体。一种被称为缺失HGF(delHGF，SEQIDNO:24)，其在第一个三环域中含有5个氨基酸的缺失。delHGF显示出与全长HGF相似的活性。另外两种HGF天然变^^t称为NK1(SEQIDNO:30)和NK2(SEQIDNO:22)，它们含有N-末端N结构域，然后是第一个三环域(NK1)或前两个三环域之后(NK2)。NK1和NK2展示出全长HGF功能中的许多，但是，实J^研究提出了这些HGF同种型的拮抗物和激动剂功能。一种经工程tit的HGF变>(**称为NK4，其含有N末端N结构域和全部四个三环域，并且作为HGF的拮抗物发挥作用，因为其可针对与MET的结合与全长HGF发生竟争，但是其不能刺激可检测到的对受体的罅酸化。提出的其它HGF同种型包括SEQEDNO:26或28所示的那些。NK1和NK2的激动剂或拮抗物活性是环境相关的，并且取决于细胞类型和/或实验条件。特别地，这些HGF同种型的激动剂功能与肝素结合能力相关。这是因为HGF和截短的HGF形式NK1和NK2的受体结合和活化机制有重要的不同。成熟HGF被假定为通过形成二聚体配体和/或诱导受体酪氨酸激酶的构象变化来诱导MET受体二聚化，而NK1和NK2单独不能实现这点，因为它们是作为单体存在的。肝素或GAG的存在可促进配体二聚化和/或一些生长因子配体的配体-受体寡聚化。这允许单体生长因子诱导出受体活化所必需的受体二聚化。NK1的晶体结构预测了下述模型，其中，硫酸肝素的重复单元与两个NK1分子结合(通过与其分别的N-末端结构域相互作用)，由此协助配体二聚化以及对相关受体激酶的反式激活作用(Rubin等人,(2001)/i/o/C^e抓，276:32977)。由此，HGF在缺少硫酸肝素的细胞中具有完全活性，而NK1和NK2则只在存在肝素或者显示有硫酸肝素的细胞中才有活性。NK1和NK2都保留了N-末端结构域，其介导在细胞表面上与肝素或紧密相关的疏酸肝素糖胺聚糖(HSGAG)的结合。例如，在缺少肝素的细胞(即，硫酸肝素(HS)曙缺陷型CHO细胞)中，NK1不能与MET结合，相反，表达肝素的细胞或者将加入肝素的肝素缺陷型细胞则展示出了HGF同种型的配体结合以及增加的对MET的配体依赖性活化(Sakata等人，(1997)C&抓272:9457)。此外，在肝素存在的情况下，NK1和NK2还保留有增殖活性，而在肝素不存在时没有(8<^￥311等人，(1996)/0//5!"133:709-718)。因此，存在肝素时，或存在肝素表达细胞时，NK1和NK2可作为具有与HGF非常相似的性质的激动剂发挥作用，而在不存在肝素时，它们可作为拮抗物发挥作用。重要的是，根据所用的细胞类型和肝素的存在，NK1和NK2可以作为激动剂或拮抗物发挥作用。使用转基因小鼠进行的对NK1和NK2活性的体内研究表明，NK1和NK2的功能是不同的。NK1转基因小鼠展示出与HGF转基因小鼠相似的表型，这暗示NK1事实上是部分激动剂，并且保留有体内结合和活化受体的能力(Jakubczak等人，(1998)MWCe汰18:1275)。相反，NK2的转基因小鼠展示出解离的激动刑和拮抗物表型.NK2转基因小鼠在MET驱动的转移性散布的运动发生性质方面展示出激动刑活性，而较之HGF和NK转基因小鼠中观察到的失调的细胞生长而言，其却展示出拮抗物有丝分fJL生活性(Otsuka等人(2000)Mo/CW/5i》/:20:2055)。NK4(SEQIDNO:32)是HGF的工程变体，其是真正的HGF拮抗物。NK4能拮抗HGF的有丝分裂发生、运动发生、形态发生和肿瘤抑制活性。NK4是通过用弹性蛋白酶对经高度纯化的重组HGF进行酴傻消化来制备的。用弹性蛋白酶消化HGF产生了两条片段，一条片段由a-链N-末端的447个M酸构成，包括N-末端发夹结构域和四个三环域(被称为NK4)，第二条片段含有p-链和a-链的一部分，所述a-链含有487Cys，其与卩-链形成《=1^#。NK4能与MET结合，虽然较之HGF而言亲和性降低，但是因为P-链不存在，其不能活化受体。与其它HGF同种型(包括，例如NK1或NK2)不同，NK4中K4的存在能诱导HGF中的构象变化，由此抑制受体二聚化和活化，除非存在有P-链(Matsumoto等人，(1998)/说o/C&抓，36:22913)。因此，NK4能与HGF竟争性竟争与MET受体的结合，由此拮抗HGF的生物学功能。例如，NK4能抑制HGF诱导的癌细胞(包括乳腺、膀胱癌、结直肠癌细胞，前列腺、神经胶质瘤、胰腺、胃、肺和卵巢癌细胞)的细胞迁移、^€^和粘附(Jiang等人，(2005)CWf及evOwe.i^附a53:35)。NK4还能抑制HGF的其它功能，包括HGF诱导的从内皮细胞进行的小血管(vasculartubule)形成(Jiang等人，(1999)C7/"Om"r/^5:3695)以及HGF信号传导介导的对细胞粘附和紧密连接的破坏(Martin等人，(2004)O//5!W/"Z28:361)。NK4的N-末端结构域缺失消除了NK4介导的HGF拮抗物活性，il^明N-末端结构域对于NK4与MET的结合来说是关键的(Kuba等人，(2000)祝oc&肌及仏O附鹏".279:846)0除了作为HGF的拮抗物发挥作用之外，NK4迅艮示出一般性的1管发生性质。NK4的抗血管发生性质，包括对内皮细胞增殖和迁移的抑制，是不依赖于MET受体的，因为NK4不仅拮抗HGF介导的功能，还拮抗FGF-2和VEGF介导的功能。HGF的三环域与血管发生抑制相关(Kuba等人，(2000)及战279:846)，亊实上，HGF的Kl结构域^i人为与NK4的血管抑制活性相关，因为笫一个三环域单独就足以抑制FGF-2剌激的细胞增殖，以及增强牛主动脉内皮细胞的凋亡(Xin等人，(2000)5!ocAe/w.Co附iw"".277:186)。N-末端结构域还展示出一些仏血管发生功能，因为其与生长因子(例如HGF、FGF-2和VEGF)竟争与肝素的结^(Merkulova-Rainon等人(2003)CAe肌278:37400)。因此，三环域，特别是K1，负责NK4的血管抑制活性，而HGF的N-末端结构域通过竟争性抑制血管发生性生长因子与内皮细胞的结合而增加了fefiL管发生活性(Matsumoto等人，(2005)5ioc/^肌祝c;pA".333:316)。NK4被假定为广谦抗癌治疗候选物，这是由于其具有既可作为HGF-拮抗物又可作为一般性血管发生抑制物的双功能性，能介导不同的抗肿瘤活性，例如对肿瘤转移的抑制，对侵入的抑制，对细胞外基质降解的抑制以及对肿瘤血管发生的抑制(Matsumoto等人，(2005)AW/re抓5—ies:333:316)。b.HGF变体变化可发生于种群或物种的成员间(等位变化)，也可发生于物种间(物种变化)。HGF的等位变>^之SEQIDNO:1或2可含有一处或多处核苷酸变化，或者较之SEQIDNO:3可含有一处或多处氨基酸变化。等位变化可发生于HGF基因外显子或内含子序列中的任何一个或多个中。编码HGF蛋白质的核酸和被编码的HGF多肽可包括HGF的等位变体。示例性的HGF等位变体示于表3中。示例性的HGF等位变体可包括SEQIDNO:15中示出的任何一处或多处核苷酸变化，或者SEQIDNO:16示出的任何一处或多处M酸变化。在一个实例中，HGF中的等位变体可包括较之SEQIDNO:3示出的关联HGF而言的一处或多处氨基酸变化。例如，一处或多处氨基酸变化可发生于HGF的N-末端结构域中。等位变体可包括第78位上的氨基酸变化(其中，例如，K可被N替换)，或者第82位上的氨基酸变化(其中，例如，F可被L替换)。HGF的等位变体还可发生于HGF的任何一个三环域中。例如，等位变体可包括K1结构域中的氨基酸变化，例如，第153位上的氨基酸变化(其中，例如，S可被I替换)，或者第180位上的氨基酸变化(其中，例如，P可被T替换)。另外的氨基酸变化可发生于K3结构域中。等位变体可包括第293位上的氨基酸变化(其中，例如，M可被V替换)，或第300位上的氨基酸变化(其中，例如，L可被M替换)，或第304位上的氨基酸变化(其中，例如，E可被K替换)，或第317位上的氨基酸变化(其中，例如，V可被A替换)，或第325位上的氨基酸变化(其中，例如，P可被S替换)，或笫330位上的氨基酸变化(其中，例如，D可被Y替换)，或笫336位上的氨基酸变化(其中，例如，E可被K替换)。等位变体还可发生于K4结构域，例如，第387位上的M酸变化(其中，例如，H可被N替换)，或第416位上的氨基酸变化(其中，例如，D可被N替换)。其它等位变化可发生于HGF的丝氨酸蛋白酶结构域中。等位变体可包括第494位上的氨基酸变化(其中，例如，R可被Q替换)，或笫505位上的氨基酸变化(其中，例如，I可被V替换)，或第509位上的氨基酸变化(其中，例如，V可被I替换)，或第558位上的氨基酸变化(其中，例如，D可被E替换)，或第561位上的氨基酸变化(其中，例如，C可被R替换)，或第592位上的氨基酸变化(其中，例如，D可被N替换)，或第595位上的氨基酸变化(其中，例如，S可被N替换)。在一些情况下，核苷酸或4y^酸的差异可以是"沉默的"，对生物学活性没有或实质上没有可检测到的影响。在其它一些实例中，等位变体可导致产生截短或缩短的多肽。例如，笫1256位核苷酸上的等位变化(其中，例如，G可被N替换)导致改变为终止密码子，导致翻译的蛋白被缩短。在其它一些实例中，等位变体，例如，在配体的野生型或优势形式的背景中的等位变体可能与疾病、病症或生物学活性的改变相关.表3:<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>HGF的变体还包括物种变体。除了存在于人中之外，HGF存在于多个物种中，例如但不限于，牛、狗、猫、小鼠、大鼠和鸡，HGF物种变体的示例性序列示于SEQIDNO:246-251中的任何一条中。3.MET受体MET受体(也被称为c-MET、肝细胞生长因子受体、HGFR)是受体酪氨酸激酶(RTK)，其作为前体蛋白质产生，被蛋白水解切割成为异源二聚体分子，所述异源二聚体分子包括与跨膜145kDap-链^ri^鍵相连的细胞外的50kDaa-链。在经过完全加工的MET蛋白质中，a亚基含有参与蛋白质-蛋白质相互作用的Sema结构域和衫l称为MET相关序列的富含半胱氨酸的基序。p亚J^跨过膜并且是细胞外和细胞内的，含有三个功能性结构域，包括近膜结构域、催化结构域和C-末端尾区。HGF是MET的配体。HGF与MET的结合触发了受体二聚化和近膜、催化;SJ&质尾区结构域中多个残基上的磷酸化，由此调控受体内在化、催化活性和多底物入塢。例如，近膜结构域含有Ser985戎基，其丝氨酸鳞酸化能抑制MET的激酶活性；Ser985的去磷酸化则允许HGF依赖性的MET活化。i^Jl结构域还含有Tryl003，其参与对MET的负调(通过将MET靶向泛素化)和通过蛋白酶体途径的降解。MET催化结构域中的裤酸化位点包括Tyrl230、Tryl234和Tyrl235，胞质尾区中的磷酸化位点包括Tyr1349和Tyrl356。对MET的礴酸化和活化导致^艮多细胞内信号传导蛋白(包括多种衔接蛋白(例如Grb2、Shc、Cbl、Crk、cortectin、桩蛋白和GAB1))和多种其它信号转导物(例如，PI3-激酶、FAK、Src、ERK1/2、JNK1/2、PLC-y和STAT-3)的结合和/或砩酸化。MET高度表达于上皮细胞和肝细胞中，并且也表达于造血来源的其它细胞中，所述其它细胞包括生发中心B细胞以及终端分化的血浆细胞。MET还在很多癌组织中和实体痛上表达。正常情况下，HGF-MET信号传导参与胚胎发育，虽然MET信号传导也介导癌细胞的生长、^A、运动性和转移，以及促进肿瘤中的血管发生。除了在癌症中的作用之外，MET还是疾疾感染JSUL的关鍵因子，其作为信号的介体，使得宿主对感染易感，例如通过对宿主细胞肌动蛋白细胞骨架重排以及抑制受感染细胞的凋亡来实现(Carrolo等人，(2003)NatMed.，9:1363;Leiriao等人，(2005)CellMicrobiol.7:603)。示例性的MET受体(SEQIDNO:34示出的GenBankNo.NP一000236洽有氨基酸1-307之间的a链和4M^酸308-1390之间的p链，其中pl链的细胞内结构域在残基956-1390之间。MET的特征在于氨基酸55-500之间的Sema结构域。在MET中，Sema结构域除了参与配体结合之外还参与受体二聚化。MET蛋白质的特征还在于氨基酸519-562之间的丛蛋白半胱氨酸富集重复和氨基酸563-655、氨基酸657-739以及氨基酸742-836之间的三个IPT/TIG结构域。IPT^由丛蛋白(Plexins)和转录(Transcription)因子共享的免疫球蛋白(Immunoglobulin)样折叠。TIG代表转录因子中的免疫球蛋白样结构域(转录因子IG，TranscriptionfactorIG)。MET中的TIG结构域可能在介导一些细胞外基质和受体信号传导间相互作用中发挥作用。MET蛋白质的特征还在于氨基酸933-955之间的跨膜结构域，其后为从氨基酸956开始的近膜结构域、氨基酸1078-1337之间的胞质蛋白质激酶结构域以;sjMtC区。C.HGF同种型本发明提供了HGF同种型以及使用HGF同种型调节有丝分亂&生、形态发生和血管发生(包括通过MET受体活性来调节)的方法。在一种实施方案中，本文提供的HGF同种型不同于全长HGF关联配体，因为编码该同种型的核酸保留了17个内含子中任何一个或多个的全部或部分。得到的HGF同种型多肽含有#*酸插入和/或缺失，使得HGF蛋白质包括关联HGF的一个或多个结构域的全部或部分的打断或消失(elimination),由此较之关联配体在一种或多种活性或功能或结构方面展示出差异。例如，HGF同种型较之HGF展示出的变化可包括但不限于，信号肽、N-末端结构域、一个或多个三环域和/或Ser-P结构域全部或部分的消失和/或打断。本发明提供的HGF同种型可用于调节细JI&^面受体(包括MET受体、VEGFR或FGFR)的活性。它们还可用作为靶向剂，用于体内或体外将分子(例如药物或毒素或核酸)递送到靶细胞或组织中。本发明提供了药物组合物，其含有一种或多种HGF同种型，典型地，一种或多种不同的同种型。药物组合物可用于治疗下述疾病，所述疾病包括癌症、呈现出异常血管发生的其它疾病、痴疾以^L^I域技术人员已知的其中牵连、涉及MET或血管发生受体(例如MET、VEGFR或FGFR)或者MET或血管发生受体(例如MET、VEGFR或FGFR)参与的其它疾病。癌症包括乳腺癌、肺癌、结肠癌、胆囊癌、胃癌、胰腺癌、乳癌、卵巢癌和前列腺癌、成胶质细胞瘤、淋巴瘤、恶性黑素瘤和其它。本发明还提供了通过施用药物组合物或递送HGF同种型，例如通过施用编码同种型的栽体，来治疗疾病和病症的方法。施用可体内或离体(exvivo)进行。本发明提供了生产、分离和配制HGF同种型的方法，包括生产HGF同种型和编码HGF同种型的核酸分子。本发明还提供了HGF同种型与MET信号传导的其它调节子的组合。I.HGF同种型的类别如本文所述，HGF同种型是这样的多肽，其较之HGF的野生型或优势形式而言缺少结构域或结构域的部分，或具有结构域打断，这足以导致较之关联配体而言去除或降低或改变(包括对活性的正面或负面影响)活性。HGF同种型包括可通过选择性剪接或可通过重组或合成方法产生的HGF基因的剪接变体(或重組缩短变体).HGF同种型可由经选择性剪接的RNA编码。还可通过重组方法和通过4吏用计算机化和合成方法来产生HGF同种型。典型地，从经选择性剪接的RNA产生的HGF同种型并非基因编码的多肽的优势形式。在一些情况下，HGF同种型可以是组织特异性的或发育阶段特异性的多肽，或者其可以是疾病特异性的(即，随组织不同或阶段不同而以不同水平表达，或者在疾病状态以与非疾病状态不同的水平表达，或者仅可在组织、阶段或在疾病过程或进程期间表达)。可编码HGF同种型的经选择性剪接的RNA形式包括但不限于，外显子缺失、外显子驻留、外显子延伸、外显子截短以及内含子驻留型选择性剪接的RNA。HGF同种型包括内含子融合蛋白。2.选择性剪接和HGF同种型的产生真核生物中的基因包括内含子和外显子，其被RNA聚合酶转录为RNA产物(通常被称为前mRNA)。典型地，前mRNA是中间产物，经由RNA剪接和加工对其进行进一步加工，产生最终的信使RNA(mRNA)。典型地，最终的mRNA含有外显子序列，其可通过剪掉内含子来获得。内含子和外显子的边界被剪接连接处标志出，这是被细胞剪接机制用作为除去内含子以及将外显子序列连起来的信号和底物的核苷酸序列。将外显子有效地连起来，以形成成熟的RNA分子。典型地，mRNA中的一个或多个外显子含有编码多肽的可读框。在很多情况下，可通过将两个或多个外显子有效相连来产生可读框；例如，编码序列可跨越外显子连接处，可读框可保持穿过连接处。RNA还可经历选择性剪接，以从单种基因产生多种不同的mRNA转录本。经选择性剪接的mRNA可含有不同数量和/或排列的外显子。例如，具有10个外显子的基因可产生多种经选择性剪接的mRNA。一些mRNA可含有全部10个外显子，一些则仅具有9、8、7、6、5个等。此外，例如具有10个外显子中9个的产物也可包括多种mRNA，每种缺少一个不同的外显子。可选地，经剪接mRNA可含有另外的外显子，其不典型地存在于编码优势或野生型形式的RNA中。外显子的添加和缺失包括5，外显子、3'外显子和RNA内部的外显子的分别地添加和缺失。经选择性剪接的RNA分子还包括加入与RNA有效相连或RNA内部的内含子或内含子一部分。例如，正常情况下通it^t编码野生型或优势形式的RNA进行剪接除去的内含子可存在于经选择性剪接的RNA中。内含子或内含子的部分可在RNA中有效地相连，例如，相连于两个外显子之间。内含子或内含子的部分可在RNA的一个末端有效地相连，例如转录本的3，末端。在一些实例中，内舍子序列在RNA中的存在能终止转录，ilj^于内舍子中的聚腺苷化序列实现。备选的RNA剪接模式可根据细胞和组织类型而变化。备选的RNA剪接还可受生物、细胞或组织类型的发育阶段的调控，例如，调控RNA剪接的RNA剪接酶和多肽可以以不同浓度存在于特定细胞和组织类型中和在发育的特定阶段。在一些情况下，特定细胞或組织类型中，或在特^JL育阶段，特定的酶或调控多肽可以不存在。这些差异可在细胞或组织类型或阶段中产生RNA的不同剪接模式，由此产生不同的mRNA群。此类复杂度可产生适合于特定细胞类型或发育阶段的多种蛋白质产物.经选择性剪接的mRNA可产生多种不同的多肽，它们在本文中也被称为同种型。此类同种型可包括具有缺失、添加和缩短的多肽。例如，在经选择性剪接的mRNA中，正常情况下由外显子编码的可读框的部分可被除去，由此产生更短的多肽。同种型可在N或C末端有被除去的氨基酸，或者缺失可以是内部的。由于缺失的外显子，同种型可缺少结构域或结构域的部分。经选择性剪接的mRNAs还可产生具有频外序列的多肽。例如，终止密码子可被含有于外显子中；当该外显子没有被包括于mRNA中时，终止密码子即不存在，可读框持续进下游外显子^^有的序列。在此类实例中，另外的可读框序列向多肽加上了另外的氨基酸残基，并且能导致新结构域或其部分的添加。a.内含子修饰和内含子融合蛋白可通过备选RNA剪接模式产生的HGF同种型包括通过内含子修饰产生的同种型，也被称为内含子融合蛋白。在一种实例中，HGF同种型是通过选择性剪接产生的，使得较之编码HGF野生型或优势形式的mRNA转录本而言保留了一个或多个内含子。并入的内含子序列可包括一个或多个内含子或其部分。此类mRNA可通过内含子驻留机制产生。例如，在剪接机制除去一个或多个内含子之前，前mRNA就从细胞核运出i^t了。在一些情况下，剪接位点可被主动封闭，例如通过细胞内蛋白来进行，以阻碍对一个或多个内含子的剪接。一条或多条内含子序列的驻留可产生编码较之HGF的野生型或优势形式而言缩短的HGF同种型的转录本。保留下来的内含子序列可在转录本中引入终止密码子，由此提前终止被编码多肽。保留下来的内含子序列还可向HGF多肽中引入另外的氨基酸，例如向转录本中插入一个或多个密码子，使得向HGF结构域中插入一个或多个氨基酸。内含子驻留包括将完整或部分的内含子序列包括进编码HGF同种型的转录本。保留下来的内含子序列可将具有密码子的核苷酸序列符合读框地引入附近的外显子，或者其可向转录本中引入移码。内含子驻留转录本的示例性核苷^列包括SEQIDNO:9、11或13。通常，内含子融合蛋白是这样的同种型，其由于任何一条或多条内含子序列的驻留，缺少结构域或结构域的部分，或含有额外的结构域或结构域的部分，这足以与关联配体相比改变生物学活性。此外，内含子融合蛋白可含有不由外显子编码的一个或多个氨基酸，它们与外显子编码的M酸有效J^目连，导致形成较之HGF基因编码的野生型或优势形式而言增长或缩短的同种型。典型地，由于在编码内含子融合蛋白的RNA中存在一个或多个终止密码子(所述终止密码子在编码HGF多肽的野生型或优势形式的RNA的对应序列中不存在)，使得内含子融合蛋白是被缩短的。氨基酸和/或终止密码子的添加可导致产生大小和序列与多肽野生型或优势形式不同的内含子融合蛋白。内含子融合蛋白的一种或多种生物学活性可被,。例如，内含子融合蛋白中氨基酸的加入可使得生物学活性较之多肽的野生型或优势形式有所增加、延伸或修饰。例如，内含子编码的M酸序列与蛋白质的融合可导致具有新的功能性的结构域的添加。内含子编码的多肽与蛋白质的融合还可对蛋白质的现有生物学活性加以调节，例如通过抑制生物学活性，例如，抑制受体二聚化和/或抑制受体信号传导。内含子融合蛋白包括天然的和组合的内含子融合蛋白。天然的内含子融合蛋白由下述经选择性剪接的RNA编码，所述RNA含有与基因的一个或多个外显子有效相连的一个或多个内舍子或其部分.组合的内舍子融合蛋白是通过重组或合成手段产生的，其通常模拟天然的内含子融合蛋白(因为内含子编码序列可与外显子序列有效地相连)，由此编码出下述多肽，其中，象源自相同基因序列或源自相关基因家族的基因序列的天然内含子融合蛋白一样，缺失或添加了一个或多个结构域或其部分。i.天然内含子融合蛋白天然内含子融合蛋白是从一类经选择性剪接的mRNA产生的，所述mRNA包括含有内含子序列以及夕卜显子序列的mRNA，例如内含子驻留RNA分子以及一些外显子延伸RNA。它们包括存在并可从细胞或组织中分离或在数据库中鉴定的所有此类变体。可能的并且包括来自内含子的一个或多个密码子(仅包括终止密码子)的任何剪接变体都被认为是天然内含子融合蛋白。一个或多个内含子或其部分的驻留可导致产生在本文中被称为内含子融合蛋白的同种型。例如，内含子序列可含有通过RNA剪接与外显子序列有效相连的可读框。内含子编码序列可向多肽添加氨基酸，例如，在多肽的N-末端或C-末端，或在多肽的内部。在一些实例中，内含子序列可含有一个或多个终止密码子。内含子编码的、与一个或多个外显子中的可读框有效相连的终止密码子可终止被编码的多肽。因此，作为终止密码子的结果，可产生被缩短的同种型。在一些实例中，mRNA中保留的内含子可导致向可读框添加了一个或多个M酸和终止密码子，由此产生以内含子编码序列终止的同种型。本发明提供了可通过内含子驻留产生的天然内含子融合蛋白，其包括添加有内含子编码结构域或结构域部分的内含子融合蛋白，以及缺失了一个或多个结构域或结构域部分的内含子融合蛋白。例如，内含子序列可以以代替典型存在于基因的mRNA中的外显子的方式有效地相连。外显子编码的结构域或其部分由此可被缺失，而内含子编码的4y^酸可被包括进编码的多肽。在另一实例中，除典型存在于mRNA中的外显子之外，还有效地相连有内含子序列。在一个实例中，有效相连的内含子序列可以引入与编码多肽的外显子序列符合读框的终止密码子。在另一实例中，有效相连的内含子序列可向多肽中引入一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，符合读框的终止密码子可与编码多肽的外显子序列有效地相连，由此产生编码下述多肽的mRNA，所述多肽在C末端具有内含子编码的氨基酸。在天然内含子融合蛋白的一个实例中，内含子序列编码的一个或多个Ai酸有效地相连于多肽的c-末端。例如，可从下述核酸序列产生内含子融合蛋白，所述序列含有位于RNA5'端的一条或多条外显子序列，接着是RNA3'端保留的一条或多条内含子序列或内含子序列的部分。M类核酸产生的内含子融合蛋白在N-末端含有外显子编码的氨基酸，在C-末端含有内含子序列编码的一或多个4M^酸。在另一实例中，通过将内含子序列中编码的终止密码子与一条或多条外显子序列有效^目连，由此产生编码缩短的多肽的核酸序列，从核酸来产生内含子融合蛋白。ii.组合的内含子融合蛋白还可通过重组方法和/或计算机化和合成方法以产生较之多肽的野生型或优势形式而言经修饰的多肽，来产生内含子融合蛋白。典型地，此类HGF同种型较之野生型或优势形式而言具有经修饰的序列，这是由于存在与基因外显子序列有效相连的内含子序列导致的。例如，如本文进一步描述的，可通过使用可获得的软件程序，在核酸，例如，HGF基因中鉴定出内含子和外显子的序列和编码的蛋白质结构域。可合成含有一个或多个外显子和内含子序列或其部分的编码多肽的重组核酸分子。此类重组分子可含有与外显子有效相连的，由内含子编码的l、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个絲酸和/或终止密码子，以产生内含子融合蛋白。通过重组手段产生的内含子融合蛋白可包括比野生型或优势形式更长或更短的多肽，这是由于存在被编码的内含子序列导致的。典型地，组合的内含子融合蛋白是较之野生型或优势形式而言缩短的多肽。例如，重组分子可舍有与外显子有效相连的、由内含子编码的一个或多个氨基酸和/或终止密码子，由此产生出比HGF的野生型或优势形式更短的同种型。缩短可除去一个或多个结构域或其部分。这些截短的形式可在内部、在N-末端、在c-末端或它们的组合处具有缺失。在另一实例中，如果内含子编码的M酸序列导致向HGF多肽中引入另外的氨基酸，例如向转录本中插入一个或多个密码子，使得HGF结构域中被插入一个或多个氨基酸，或导致加入结构域，那么内含子序列可导致产生增长的蛋白质。可选地，被编码的内含子序列可导致HGF转录本的移码，使得下游外显子中读不出来终止密码子，导致增长的转录本。作为该方法的一部分，可使用基序扫描来识别可能的免疫原性表位，用保守4M^酸取代或通过本领域公知的其它修饰(例如聚乙二醇化)来对其进行修饰。通常，可以以这种相同的方式修饰任何治疗性的内含子融合蛋白，以获得经优化的药代动力学，或者避免免疫原性。b.通过外显子修^饰产生的同种型还可通过对外显子加以修饰(相对于编码HGF多肽野生型或优势形式的RNA的相应外显子而言)，来产生HGF同种型。外显子修饰包括经选择性剪接的RNA形式，例如外显子截短、外显子延伸、外显子缺失和外显子插入。这些经选择性剪接的RNA分子可编码下述HGF同种型，它们由于包括进另外的氨基酸和/或缺少HGF多肽野生型或优势形式中存在的氨基酸残基，而与HGF多肽的野生型或优势形式有所不同。插入的外显子可将插入的外显子编码的另外的氨基酸与RNA中存在的其它外显子有效地连接起来。插入的外显子还可含有一个或多个终止密码子，使得RNA编码的多肽由于此类终止密码子而终止。如果含有此类终止密码子的外显子被插入到含有用于多肽野生型或优势形式的多肽终止的终止密码子的外显子上游，那么可以产生出缩短的多肽.插入的外显子可保持可读框，使得当插入外显子时，RNA编码这样的同种型，其含有多肽野生型或优势形式的iy^酸序列，还具有插入的外显子编码的另外的氨基酸.插入的外显子可在RNA的5，、3'或内部插入，使得插入的外显子编码的另外的JU^酸分别在同种型的N-末端、C-末端或内部相连。插入的外显子还可改变其所插入的RNA的读框，使得产生这样的同种型，其仅含多肽野生型或优势形式中JUI^酸序列的一部分。此类同种型可另外含有插入的外显子编码的Ai酸序列，以及还可作为插入的外显子中含有的终止密码子的结果而终止，HGF同种型g外显子缺失亊件产生。外显子的缺失可产生^^选大小的多肽,例如，通过除去编码氨基酸的序列，以及通过改变编码多肽的RNA的读框。外显子缺失可从编码的多肽中除去一个或多个氨基酸，此类M酸可以是多肽N-末端、C-末端或内部的，这取决于外显子在RNA序列中的位置。RNA中外显子的缺失还可导致读框位移，使得产生下述同种型，所述同种型含有多肽野生型或优势形式中不存在的一个或多个氨基酸。读框位移还可产生在读码框中的终止密码子，由此产生下述同种型，其终止于与多肽野生型或优势形式不同的序列。在一个实例中，读框位移产生较之多肽的野生型或优势形式而言缩短的同种型。此类缩短的同种型还可含有多肽的野生型或优势形式中不存在的M酸序列。还可通过RNA中的外显子延伸来产生HGF同种型.外显子延伸中含有的另外的序列可编码另外的M酸和/或可含有终止多肽的终止密码子。含有符合读框的终止密码子的外显子插入可产生缩短的同种型，其在外显子延伸的序列中终止'外显子插入还可使RNA的读框位移，产生含有在多肽的野生型或优势形式中不存在的一个或多个氨基酸的同种型和/或在不同于多肽的野生型或优势形式的序列处终止的同种型外显子延伸可包括编码多肽野生型或优势形式的RNA的内含子中含有的序列，并且由此产生出内含子融合蛋白。还可通过外显子截短来产生HGF同种型。具有外显子截短的RNA分子可产生较之多肽的野生型或优势形式缩短的多肽'外显子截短还可导致读框位移，4吏得产生下述同种型，所述同种型^^有多肽野生型或优势形式中不存在的一个或多个氨基酸。读框位移还可导致读框中产生终止密码子，从而产生下述同种型，其在不同于多肽野生型或优势形式的序列处终止。包括外显子修饰的、经选择性剪接的RNA分子可产生下述HGF同种型，所述同种型缺少结构域或其部分，这^A以降4氐或去除生物学活性的。例如，经外显子修饰的RNA分子可编码缩短的HGF多肽，该多肽缺少结构域或其部分。经外显子修饰的RNA分子还可编码下述多肽，其中，结构域被插入的氨基酸中断，和/或被读框位移中断，所述位移用多肽野生型或优势形式中不存在的一个或多个氨基酸中断结构域。2.HGF同种型多肽结构示例性的HGF基因(见例如SEQIDNO:1，困1)包括18个外显子，其含有被17个内含子隔开的蛋白质编码序列。在HGF多肽的野生型或优势形式(例如SEQIDNO:3所示的多肽，其可由具有SEQIDNO:2所示序列的核酸分子编码)中，18个外显子通过RNA剪接i^来，形成编码728个氨基酸的多肽的转录本，该多肽包括信号序列、N-末端结构域、四个三环域(kl-K4)和SerP结构域(见，例如困2)。可通过选择性剪接，使得HGF的剪接模式较之编码HGF野生型或优势形式的转录本而言有所改变，来产生HGF同种型，例如本文4^供的那些。通过选择性剪接，例如通过外显子缺失、外显子驻留、外显子延伸、外显子截短或内含子驻留产生的HGF同种型通常导致产生下述配体，其缺少结构域或结构域的部分，或者其在结构域中具有断裂(例如通过较之配体野生型或优势形式的HGF多肽而言插入一个或多个#^酸来实现)。HGF同种型较之配体的野生型和/或优势形式还可含有新的结构域和/或功能。HGF同种型多肽序列中的缺失、断裂和/或插Aj^以使得活性校之HGF有所改变，或者4吏得结构较之HGF有所改变，例如通过消除一个或多个结构域或通过添加结构域或其部分(例如，HGF基因中内含子编码的那个)来实现。本文提供了通过内含子驻留产生的HGF同种型，其缺少HGF多肽的全部或一些结构域。本文提供的HGF同种型还可包括内含子编码的、较之关联配体而言插入到编码的同种型内部或N-末端或C-末端的氨基酸。较之配体的野生型或优势形式的多肽序列，HGF同种型可缺少一个或多个结构域或一个或多个结构域的部分。例如，HGF同种型可缺少SerP结构域或SerP结构域的部分。此类同种型可缺少SEQIDNO:3的m酸495-728所示的氨基酸中的一些或4^P。缺少SerP结构域的示例性HGF同种型包括SEQIDNO:10、12、18或20，缺少SerP结构域中一些的示例性HGF同种型包括SEQIDNO:14。HGF同种型可缺少三环域的4^P或部分。此类同种型包括缺少四个三环域(包括K1、K2、K3或K4结构域)中任何一个或多个或任何一个或多个的部分的同种型。HGF同种型可缺少第一个三环域的部分、第一个三环域的全部、第二个三环域的部分、笫二个三环域的全部、笫三个三环域的部分、第三个三环域的全部、第四个三环域的部分和/或笫四个三环域的全部，或它们的组合。此类同种型可缺少SEQIDNO:3的^J^酸128-206(Kl)、211-288(K2)、305-383(K3)和/或391-469(K4)所示的M酸中的一些或全部，缺少部分Kl结构域的示例性HGF同种型包括SEQIDNO:10和18。HGF同种型还可缺少N-末端结构域的全部或部分.HGF同种型可包括结构域中的断裂，例如通过较之HGF野生型或优势形式的多肽序列而言插入一个或多个M酸来实现的。例如，HGF同种型可包括信号肽、N-末端结构域、一个或多个三环域和/或SerP结构域中插入一个或多个氨基酸。HGF同种型还可包括下述HGF多肽序列，所述序列包括向序列中添加的结构域或部分结构域。例如，HGF同种型可包括在蛋白质C-末端添加的氨基酸，其中，此类M酸序列是HGF野生型和/或优势形式中没有发现的。在多肽序列C-末端包括另外M酸序列的示例性HGF同种型包括SEQIDNO:10、12、18或20。HGF同种型多肽还可含有并非结构域的正常部分而是在指定结构域之间(在本文中被称为连接区域)发现的氨基酸。HGF同种型还可包括一个或多个连接区域中的插入、缺失和/或断裂。在连接区域中包括断裂的示例性HGF同种型包括SEQIDNO:10、12、18或20。3.HGF同种型活性较之HGF的野生型或优势形式而言，本文提供的HGF同种型可具有不同的或改变的活性.HGF同种型可以是MET信号传导的激动剂、部分激动剂或拮抗物。HGF同种型还可展示出独立于HGF-MET信号传导的其它活性。通常，本文提供的HGF同种型抑制其受体MET的活性，例如通过作为配体拮抗物发挥作用。本文提供的HGF同种型还可抑制其它生长因子配体(包括VEGF和FGF-2)的血管发生活性。改变的活性包括，例如，改变的信号转导和/或改变的与一种或多种细胞表面分子的相互作用。通常，较之配体的野生型和/或优势形式而言，活性被同种型改变至少0.1、0.5、1、2、3、4、5或10倍，典型地，活性被改变IO、20、50、100或IOOO倍或更多。例如，较之配体的野生型和/或优势形式而言，同种型的活性可被降低.较之配体的野生型和/或优势形式而言，同种型的活性还可被增加。在对HGF同种型活性的评价中，可将同种型与HGF的野生型和/或优势形式相比.例如，较之SEQIDNO:3所示的HGF多肽而言，HGF同种型的活性可被改变。还可在存在HGF的野生型和/或优势形式的情况下，或存在其它生长因子(例如VEGF或FGF-2)的野生型和/或优势形式的情况下，通过对HGF同种型的活性加以评价，针对拮抗或抑制活性，来对同种型加以测试。a.细胞表面作用改变在一个实例中，HGF同种型在细胞表面相互作用(包括受体相互作用)的方面被改变。例如，同种型针对一种或多种受体(例如，MET受体)的结合亲和性被降低。在另一实例中，同种型针对一种或多种受体的亲和性被增加。HGF同种型还可在与其它细Jf^面分子的结合方面有所改变。在一个实例中，同种型可在与GAG(例如肝素或疏酸肝素)的结合方面有所改变。在另一实例中，同种型可在与血管发生所涉及的其它细胞表面蛋白质(例如，内皮ATP合酶、血管动蛋白、av卩3整联蛋白、膜联蛋白II)、任何一种或多种生长因子受体(例如MET、FGFR或VEGFR)或已知与生长因子受体合作以诱导血管发生性应答的任何其它细^1&*面分子的结合方面有所改变。同种型还可在针对受体或其它细胞表面结合分子的特异性方面有所改变。例如，同种型可优先于其它受体或细lfe^面蛋白质而与一种受体或其它细胞表面蛋白质结合，其中，此类优先结合是与HGF的野生型或优势形式的受体特异性相比较而言的。受体或细胞表面相互作用方面有所改变的同种型可包括缺少N-末端结构域的全部或部分或N-末端结构域被打断的同种型。具有改变的受体或细胞表面结合的HGF同种型还可包括下述同种型，所述同种型缺少K1、K2、K3或K4结构域中任何一种或多种的全部或部分，受体相互作用有所改变的HGF同种型还可包括下述同种型，其较之HGF的野生型或优势形式而言具有构象改变，包括单体同种型。与细Jf^面分子(包括其受体MET)的相互作用有所改变的HGF同种型可在信号转导的一个或多个方面有所改变。同种型较之HGF的野生型或优势形式可在对一种或多种细胞应答的调节方面有所改变，所述调节包括对来自受体或其它细胞表面蛋白质(例如血管发生应答中涉及的蛋白质)的细胞应答的诱导、增加、阻抑和阻碍。可被HGF同种型改变的细胞应答的实例包括但不限于，对有丝分裂发生、运动发生、形态发生和/或血管发生性应答的诱导。b.竟争性拮抗物HGF同种型可针对受体结合与另一HGF形式，例如关联HGF的野生型或优势形式竟争。此类同种型因此可结合MET受体，降低可用于与其它HGF多肽结合的受体的量，与HGF的一种或多种受体结合并针对所述受体竟争的HGF同种型可包括下述HGF同种型，它们不参与信号转导，或者它们参与信号转导的能力较之关联HGF而言降低。通过与MET细j^面受体结合而与优势配体竟争的HGF同种型拮抗物可包括关联HGF配体的任何一个或多个三环域的全部或部分和N-末端结构域。拮抗性的HGF同种型可缺少一个或多个结构域，使得同种型虽然与其受体结合，但是不能调节信号转导。例如，此类同种型可缺少p-链的全部或部分，其包括SerP结构域的全部或部分。在一个实例中，HGF同种型缺少SerP结构域的一个或多个氨基酸，例如，缺少对应于SEQIDNO:3所示的HGF多肽的氨基酸495-728的一个或多个氨基酸。HGF同种型拮抗物还可缺少四个三环域中任何一个的全部或部分.在一个实例中，HGF同种型缺少对应于SEQIDNO:3所示的关联配体三环域中任何一个的一个或多个氨基酸，例如SEQIDNO:3的氨基酸128-206(Kl)、211-288(K2)、305-383(K3)和/或391-469(K4)之间的一个或多个氨基酸。c.负面作用的和抑制性同种型HGF同种型还可调节另一多肽的活性。被调节的多肽可以是HGF的野生型或优势形式，或者可以是另一生长因子(例如但不限于，FGF-2或VEGF)的野生型或优势形式。HGF同种型还可调节另一HGF、FGF-2或VEGF同种型，例如，疾病或病症中表达的同种型。此类HGF同种型可作为负面作用的配体发挥作用，这通过阻碍或抑制生长因子配体/受体对的野生型或优势形式的一种或多种生物学活性来实现。HGF同种型还可直接或间接相互作用，以调节HGF或其它生长因子多肽的活性。负面作用的配体不需要结合或影响受体的配体结合结构域，也不需要影响配体与受体的结合。在一个实例中，HGF同种型可针对与细胞表面蛋白质的结合(介导受体二聚化和/或生长因子的血管发生性应答所必需的)与另一生长因子配体竟争。例如，HGF同种型可针对与肝素或GAG的结合与另一生长因子配体竟争，由此阻碍配体介导的、关联受体的信号传导所必需的二聚体配体的形成。此类HGF同种型包括足以与GAG结合的HGFN-末端结构域的部分或4^P。HGF同种型还可缺少关联HGF的SerP结构域，或Kl、K2、K3或K4结构域中任何一种或多种的全部或部分，只要HGF同种型能与GAG结合而自身不能诱导受体二聚化和活化即可。在另一实例中，HGF同种型可与下述细J!^面分子结合，所述分子能调节另一配体-受体对诱导的信号传导或与其合作。例如，HGF同种型可与血管发生性应答中涉及的蛋白质，例如，内皮ATP合酶、血管动蛋白、av卩3整联蛋白、膜联蛋白n，生长因子受体(例如MET、FGFR或VEGFR)或任何其它细胞表面分子结合，所述其它细胞表面分子能调节HGF、VEGF、FGF-2或其它生长因子与其受体的结合诱导的血管发生性信号和/或与所述信号^f乍。此类HGF同种型包括K1结构域的全部或部分。HGF同种型还可缺少N-末端结构域、K2、K3、K4或SerP结构域中任何一种或多种的全部或部分，只要HGF同种型能与血管发生性分子结合，以调节生长因子诱导的血管发生性应答，而自身不M导MET受体活化即可。D.鉴定和产生HGF同种型的方法可通过多种方法中的任何来鉴定和产生HGF同种型。例如，可通过使用克隆方法组合生物信息学方法，例如，序列比对和结构域作图和选择，对基因和表达产物(RNA分子)进行分析和鉴定，来对HGF同种型加以鉴定。1.鉴定和分离同种型的方法用于鉴定和分离HGF同种型的示例性方法包括克隆表达的基因序列，与基因序列(例如基因组DNA序列)进行比对.分离出表达的序列(例如cDNA分子或cDNA分子的区域)。可设计引物，以扩增cDNA或cDNA的区域。在一个实例中，可设计出侧翼为HGF基因可读框起始密码子或与所i^始密码子重叠的引物，以及设计出側翼为可读框终止密码子或与所述终止密码子重叠的引物。可在PCR中使用引物，例如在逆转录酶PCR(RT-PCR)(使用mRNA)中使用引物，以扩增编码可读框的核酸分子。此类核酸分子可被测序，以鉴定出编码同种型的那些，在一个实例中，大小(例如分子量)与预测的大小(例如，针对编码的野生型或优势形式预测的大小)不同的核酸分子被选用作为候选同种型。然后可对此类核酸分子加以分析，例如通过本文所述的方法进行分析，以进一步选出具有特定性质的同种型编码分子。使用获得的核断列进行计算机分析，以进一步选择候选同种型。例如，将cDNA序列与选出的候选基因的基因组序列加以比对.此类比对可手工进行，或者可使用生物信息学程序，例如SIM4(用于分析剪接变体的计算;l^序)来进行。选出具有规范糊一-受体剪接位点(例如GT-AG)的序列。可选出M经选择性剪接产物(例如，外显子缺失、外显子驻留、外显子延伸和内含子驻留)的分子。还可以使用经分离的核酸分子的序列分析以进一步选出较之野生型或优势形式而言保留或缺少结构域和/或功能的同种型。例如，可使用生物信息学程序，例如，本文所述的那些来鉴定蛋白质结构域，来分析经分离的核酸分子编码的同种型。然后可选出保留或缺少结构域或其部分的同种型。在一种实施方案中，选出缺少SerP结构域或其部分的同种型，所述缺少足以降低活性。例如，选出缺少SerP结构域的一个或多个M酸，或在SerP结构域中具有断裂(例如，一个或多个氨基酸的插入)的同种型。还可选出这样的同种型，其缺少SerP结构域或其部分，并且具有有效相连的一个或多个氨基酸，以代替缺少的结构域或结构域部分。此类同种型可以是选择性剪接亊件(例如，外显子延伸、内含子驻留、外显子缺失和外显子插入)的结果。在一些情况下，此类经选择性剪接的RNA分子改变了RNA的读框和/或有效地连接了在编码野生型或优势形式的RNA中没有发现的序列。在另一实施方案中，选出缺少至少一个三环域或三环域的部分的同种型。例如，选出缺少K1、K2、K3或K4结构域中任何一个或多个和/或任何一个或多个的部分的同种型。此类同种型可包括缺少Kl结构域的一个或多个氨基酸的那些。例如，HGF同种型可缺少对应于SEQIDNO:3的氨基酸128-206的氨基酸中的一个或多个。此类同种型还可缺少SerP结构域。同种型可以是选择性剪接亊件(例如外显子延伸、内含子驻留、外显子缺失和外显子插入)的结果。在一些情况下，此类经选择性剪接的RNA分子改变了RNA的读框和/或有效地连接了在编码野生型或优势形式的RNA中没有发现的序列。此类同种型可包括HGF的野生型或优势形式中没有发现的另外的氨基酸序列。在一个实例中，另外的氨基酸被含有于HGF同种型的C-末端。可以选出下述核酸分子，其编码HGF同种型，并且具有与HGF的野生型或优势形式不同的活性。在一个实例中，选出缺少SerP结构域的HGF同种型，从而所述同种型不能刺激MET导致的信号转导。在另一实例中，选出下述HGF同种型，所述同种型缺少至少一个三环域的全部或部分，但是保持与MET和/或另一细Jf&^面相互作用伴侣(例如肝素)结合，并且改变了其生长因子配体刺激的生长因子受体的一种或多种生物学活性(包括配体相互作用和信号转导)。2.鉴定同种型的等位变体和物种变体可以产生或筌定出配体同种型(例如HGF同种型)的等位变体和物种变体。此类变体与特定的HGF同种型或关联HGF有一个或多个氨基酸的不同。等位变化在种群的成员间发生，而物种变化在物种间发生。例如，同种型可源自基因的不同等位基因；每种等位基因可以与另一种具有一个或多个M酸的差异。此类等位基因可具有保守和/或非保守4M^酸差异。等位变体还包括从不同受试者(例如个体受试者或动物模型或其它动物)产生或鉴定的同种型。氨基酸变化可导致对同种型生物学活性的调节。在一些情况下，氨基酸差异可以是"沉默的"，对生物学活性没有或实质上没有可检测到的影响。同种型的等位变体还可通过诱变产生。此类诱变可以是随机的或受指导的。例如，可产生这样的等位变体同种型，其改变了氨基酸序列或可能的糖基化位点，以实现同种型糖基化的变化，包括备选糖基化、同种型中位点上糖基化的增加或抑制。等位变体同种型在序列上可以与同种型至少90%相同。通常，来自相同物种的等位变体同种型与同种型至少95%、96%、97%、98%、99%相同，典型地，等位变体与同种型98%、99%、99.5%相同。例如，HGF同种型(包括本文的HGF同种型)可在HGF多肽中包括等位变化。例如，HGF同种型可包括关联HGF等位变体中存在的一种或多种M酸差异。在一个实例中，HGF同种型包括SEQIDNO:16所示的一种或多种等位变化。等位变化的实例包括N-末端结构域、三环域或SerP结构域中的变化，其包括但不限于在对应于SEQIDNO:16中所示的#^酸78、82、153、180、293、300、304、317、325、330、336、387、416、494、505或509的位置上的氨基酸变化。HGF同种型还包括关联HGF的物种变体。E.示例性HGF同种型l.HGF同种型本发明提供了HGF的同种型。特别地，本发明提供了这样的HGF同种型，其是被截短的，但是包括K4区域的至少全部或部分，却缺少一种或多种N-末端结构域、Kl、K2、K3或SerP结构域的全部或部分中。2.HGF内含子融合蛋白本文提供了示例性的HGF同种型，其较之关联HGF而言具有改变的结构域组织结构，这是由于编码HGF同种型的核酸分子中内含子编码序列的驻留导致的。本文提供的HGF同种型是下述核酸分子编码的，所述核酸分子包括与外显子有^目连的HGF任何内含子(除了内含子5)的4^或部分。内含子部分可包括一个密码子，包括终止密码子，其导致在外显子的末端终止的HGF同种型，或者其可包括更多密码子，使得HGF同种型包括内含子编码的残基。图1展示了示例性HGF同种型的内含子/外显子结构。其序列如SEQIDNO:l所示。在SEQIDNO:1示出的示例性HGF基因组序列中，本文提供的HGF同种型可包括HGF任何内含子的4^P或部分，例如，含有核苷酸254-7264的内含子l，含有核苷酸7432-11333的内含子2，含有核苷酸11446-12833的内含子3，含有核苷酸12949-17874的内含子4，含有核苷酸25138-26665的内含子6，含有核苷酸26785-40357的内含子7，含有核苷酸40533-44119的内含子8，含有核苷酸44248-49289的内含子9，含有核苷酸49393-52771的内含子10,含有核苷酸52906-58617的内含子11，含有核苷酸58657-59893的内含子12，含有核苷酸59992-62772的内含子13，含有核苷酸62848-63709的内含子14，含有核苷酸63851-64383的内含子15，含有核香酸64491-64601的内含子16和含有核苷酸64748-67379的内含子17的全部或部分。示例性的HGF同种型保留有HGF基因的内含子11或内含子13的M或部分。同种型的内含子编码部分可在与内含子有效相连的外显子序列的N-末端、C-末端或内部存在。在一种实施方案中，本文提供的HGF的内含子融合蛋白或其等位变体缺少全长关联HGF的结构域的全部或部分，使得HGF同种型展示出拮抗和/或抗血管发生活性。本文提供的同种型缺少关联HGF的N-末端结构域的部分、Kl结构域的部分、K2结构域的部分、K3结构域的部分、K4结构域的部分以及SerP结构域的全部或部分中的一种或多种，或其组合。选择时的截短和缺失产生了具有上述活性的同种型。同种型包括处于同种型内部或N-末端或C-末端的、来自内含子l、2、3、4、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17中的任何一个或多个的内含子编码氨基酸，或者同种型可在外显子末端被截短。本文提供的HGF同种型及其等位变体可展示出M管发生活性。例如，同种型可缺少N-末端结构域的全部或部分、Kl结构域的部分、K2结构域的全部或部分、K3结构域的全部或部分、K4结构域的全部或部分或SerP结构域的全部或部分或其组合。同种型可在同种型内部或N-末端或C-末端包括来自内含子1、2、3、4、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17中的任何一个或多个的内含子编码氨基酸。在一些实例中，抗血管发生的同种型还可展示出拮抗物活性。本文提供的HGF同种型包括其编码核酸分子被命名为SR023A02的同种型。其核酸和"IL^^列如SEQIDNO:9或17所示。克隆SR023A02含有1471个M，包括位于C-末端编码端的内含子部分。所述内含子部分含有内含子11的前34个核苷酸。内含子11部分编码三个4U^酸接着是终止密码子.在该克隆中，该部分与外显子1-11的可读框有效地相连。被编码的HGF同种型较之关联HGF来说是被截短的，并且包括C-末端处由内含子编码的三个氨基酸.SR023A02编码467个氨基酸的HGF同种型多肽，其序列如SEQIDNO:10或18所示，它们各自编码SR023A02同种型，但是有两个M酸有区别。SEQIDNO:10含有第82位上的Leu和第320位上的Ser。SEQIDNO:18在这些位置上分别含有Phe和Pro,所述位置对应于SEQIDNO:3所示关联HGF的氨基酸。其在氨基酸1-31的N-末端处含有信号序列，以^^J^酸34-124处含有接着信号序列的N-末端结构域。较之SEQIDNO:3所示的关联受体而言，SR023A02编码的HGF同种型在Kl结构域中《^有氨基酸161-165的缺失(见，例如图2)。此外，该同种型包括分别对应于SEQIDNO:3的氨基酸211-288、305-383和391-469的K2、K3和K4结构域，并且其缺少SerP结构域。SR023A02编码的同种型还包括K4结构域之后的另外3个氨基酸(氨基酸465-467)，所述M酸在SEQIDNO:3所示的关联HGF中不存在。本发明还提供了SR023A02的等位变体和物种变体。它们是通过将其从其它来源分离或者基于关联受体的已知序列进行合成来产生的。它们在编码核酸与SEQIDNO:2有所不同的戎基上有所区别。示例性的HGF等位变体如SEQIDNO:15或16所示。本发明提供了另一种示例性的HGF同种型，其由被命名为SR023A08的核酸分子编码，其序列如SEQIDNO:11或19所示。SR023A08含有1495个M，包括C-末端的内含子部分，其含有内含子11的前34个核苷酸。内含子11部分编码三个M酸接着是终止密码子，其与被编码的多肽的外显子1-11的可读框有效地相连，由此产生较之关联HGF而言被截短的HGF同种型。SR023A08编码的HGF含有SEQIDNO:12或20所示的472个M酸，它们各自编码SR023A08同种型，但是有一个4RJ^酸有所不同。SEQIDNO:12在第304位含有Lys，而SEQIDNO:20则在该位置含有Glu，这对应于SEQIDNO:3所示关联HGF的氨基酸。该同种型包括氨基酸1-31处的N-末端信号序列、氨基酸34-124处的N-末端结构域、氨基酸128-206处的Kl结构域、氨基酸211-288处的K2结构域、氨基酸305-383处的K3结构域和氨基酸391-469处的K4结构域(见，例如图2)。SR023A08编码的HGF同种型缺少SerP结构域，但是含有K4结构域之后的另外3个在SEQIDNO:3所示的关联HGF中不存在的氨基酸(氨基酸470-472)。本发明提供了SR023A08变体，包括等位变体和物种变体。它们在编码核酸与SEQIDNO:2有所不同的残基上有所区别。示例性的HGF等位变体如SEQIDNO:16所示，其被SEQIDNO:15编码。本发明提供了克隆SR023E09编码的另一示例性HGF同种型。编码核酸序列示于SEQIDNO:13中。该克隆含有1613个碱基，包括C-末端的内含子部分，其含有内含子13的前66个核苷酸。内含子13部分编码终止密码子，其与被编码的多肽的外显子1-13的可读框有效地相连，由此产生较之关联HGF而言被截短的HGF同种型。SR023E09编码的同种型长度为514个氨基酸，其包括信号序列。该同种型的M酸序列如SEQIDNO:14所示。该同种型含有氨基酸1-31处的N-末端信号序列、氨基酸34-124处的N-末端结构域、氨基酸128-206处的Kl结构域、氨基酸211-288处的K2结构域、氨基酸305-383处的K3结构域以及氨基酸391-469处的K4结构域(见，例如图2)。该同种型在第514位^JJ^被截短，由此缺少对应于SEQIDNO:3所示关联HGF的氨基酸515-728的SerP结构域的部分。本发明提供了SR023A08编码的HGF同种型的变体，包括等位变体和物种变体。它们包括等位变化，例如分别如SEQIDNO:15或16所示的关联HGF核酸或多肽的等位变化中的任何一种。F.产生编码HGF同种型多肽的核酸的方法用于产生HGF同种型核酸分子和多肽的示例性方法包括本领域技术人员已知的分子生物学技术。此类方法包括用于核酸分子的体外合成方法，例如PCR，合成基因构建和将经分离和/或合成的核酸片段体外连接起来。还可通过克隆方法来分离HGF同种型核酸分子，包括对从细胞分离的RNA和DNA进行PCR,以及通过杂交和/或表达筛选方法来筛选核酸分子文库。可使用体外和体内合成方法从HGF同种型核酸分子来产生HGF同种型多肽。HGF同种型可表达于适用于生产需要的量和形式的同种型(施用和治疗所需的)的任何生物中。表达宿主包括原核生物和真核生物，例如大肠杆菌、酵母、植物、昆虫细胞、哺乳动物细胞(包括人细胞系)和转基因动物。还可^达HGF同种型的细胞和生物中分离出HGF同种型，所述细胞和生物包括在其中重组生产同种型的那些，以及在其中不用重组手段合成同种型(例如选择性剪接亊件产生的基因组编码的同种型)的那些。1.合成的基因和多肽可使用对合成基因的合成，通过本领域技术人员已知的方法，来合成HGF同种型核酸分子和多肽。在此类方法中，对HGF同种型的多肽序列进行"反翻译(back-translated)，，，以产生编码同种型的一种或多种核酸分子。然后将反翻译得到的核酸分子合成为一条或多条DNA片段，例如通过使用自动DNA合成技术来进行。然后可将片段有效连接起来，以形成编码同种型的核酸分子。还可将核酸分子与另外的核酸分子，例如，载体、用于调控转录和翻译的调控序列以及其它多肽编码核酸分子相连。还可将同种型编码核酸分子与例如用于追踪的标记(包括it射性标记和荧光部分)相连。反翻译的过程4吏用遗传密码子，以获得伶阿目标多肽(例如HGF同种型)的核苷睃基因序列。遗传密码子是简并的，64种密码子说明了加种M酸和3种终止密码子。这种简并性允许核酸设计和产生中的灵活性,允许，例如，加上限制性位点，以协助对核酸片段的连接，以及将独特的标识序列放到每条合成的片段中。遗传密码子的简并性还使得可以在对核酸分子的设计中避开不想要的核苷酸序列，包括不想要的限制性位点、剪*沐或受体位点或对于高效翻译来说可能有害的其它核苷酸序列.此外，生物体有时偏好特定的密码子选择和/或受P艮制的GC/AT核苷酸之比。因此，遗传密码子的简并性允ifi殳计出专门用于在特定生物或生物组中表达的核酸分子。此外，可基于对序列的优化(或非优化)，针对不同表达水平设计核酸分子。通过选择编码多肽的密码子来进行反翻译。可使用遗传密码子表和多肽序列，人工进行此类过程。可选地，可使用计算机程序，包括公众可获得的软件，来产生经反翻译的核酸序列。为合成经反翻译的核酸分子，可以使用本领域中用于核酸合成的任何可获得的方法。例如，通过标准自动方法来合成对应于编码HGF同种型的核苷酸序列的片段的各寡核苷酸，再在退火或杂a应中将它们混^来。合成此类寡核苷酸，从而退火导致从寡核苷酸的基因的自装配，这是用在将互补序列双链体化时形成的重叠单链突出端(通常为大约100个核苷酸长)来实现的。双链体DNA中的单核苷酸"切口"被使用连接封住，例如，用噬菌体T4DNA连接酶来进行。然后，例如可使用限制性内切核酸酶接头序列，将合成的基因插入适于进行蛋白质表达的多种重組DNA载体的任何一种中。在另一类似方法中，通过化学寡核苷酸合成方法制备一系列重叠的寡核苷酸。这些寡核苷酸的退火导致产生有缺口的DNA结构。可使用通过酶(例如DNA聚合酶I)催化的DNA合成，来填补这些缺口，并且使用连接来封住双链体结构中的任何切口。PCR和/或其它DNA扩增技术可用于扩增形成的线性DNA双链体。可将另外的核苷酸序列连到编码HGF同种型的核酸分子上，所^列包括含有限制性内切核酸酶位点的接头序列，以用于将合成的基因克隆进载体的目的，所述栽体例如，蛋白质表达栽体或设计来扩增编码核心蛋白质的DNA序列的栽体。此外，提供功能性DNA元件的另外的核苷,列也可被有效地连到编码同种型的核酸分子上。此类序列的实例包括但不限于，设计来协助细胞内蛋白质表达的启动子序列以及设计来协助蛋白质分泌的分泌序列。还可将另外的核苷酸序列(例如，提供蛋白质结合区域的序列)连到编码同种型的核酸分子上。此类区城包括但不限于，协助摄取同种型i^/v特定把细胞的序列，或者另外增强合成的基因的药代动力学的序列。还可使用自动合成多肽的合成方法，来合成HGF同种型。可以合成以片段的克隆和/或计算机化产生的多肽序列，然后通过化学方法将它们连接起来。可选地，还可将同种型合成为单种多肽。然后，此类多肽可用于本文所述的测定和治疗施用。2.克隆和分离HGF同种型的方法可使用本领域已知用来克隆和分离核酸分子的任何可获得的方法，来克隆或分离HGF同种型。此类方法包括对核酸的PCR扩增，以及对文库的筛选，包括核酸杂交筛选、基于抗体的筛选和基于活性的筛选。可以用用于扩增核酸的方法，来分离编码同种型的核酸分子，所述方法包括，例如，聚合酶链式反应(PCR)方法。可使用含有核酸的材料作为起始材料，可从其分离出编码同种型的核酸分子。例如，在扩增方法中可使用DNA和mRNA制品、细胞提取物、组织提取物、流体样品(例如，血液、血清、唾液)和来自健康和/或患病受试者的样品。还可用核酸文库作为起始材料的来源。可设计引物来扩增同种型。例如，可基于从其产生同种型的表达序列，来设计引物。可基于对同种型M,列的反翻译来设计引物。可对通过扩增产生的核酸分子进行测序，以验证其的确编码同种型。还可使用文库筛选来分离编码同种型的核酸分子。例如，可通过与编码HGF同种型的核酸分子或其部分杂交，来筛选呈现有表达的RNA转录本(例如cDNA分子)的核酸文库。例如，可用来自HGF基因的内含子序列或其部分，基于与同源序列的杂交，来筛选含有内含子驻留的分子，可使用表达文库筛选来分离编码HGF同种型的核酸分子。例如，可使用能识别特定同种型或同种型的部分的抗体，来筛选表达文库。可获得和/或制备与HGF同种型或同种型含有的区域或肽特异性结合的抗体。与同种型特异性结合的抗体可用于筛选含有编码同种型的核酸分子的表达文库。用于产生同种型特异性抗体的示例性方法如下文所述，3.表达系统可通过本领域技术人员已知的任何方法，包括体内和体外方法，来生产HGF同种型，包括天然的和组合的内含子融合蛋白。HGF同种型可表达于适用于生产需要的量和形式的HGF同种型(施用和治疗所需的)的任何生物中。表达宿主包括原核生物和真核生物，例如大肠杆菌、酵母、植物、昆虫细胞、哺乳动物细胞(包括人细胞系)和转基因动物。表达宿主的蛋白质产生水平和翻译后修饰(呈现于表达的蛋白质上)的类型可有所不同。对表达宿主的选择可基于这些因素和其它因素(例如，调控和安全方面的考虑，生产成本，以及纯化的需要和方法)来进行。对于本领域技术人员来，已知并且可获得很多表达栽体，它们可用于表达HGF同种型。对表达载体的选择将受到对宿主表达系统的选择的影响。通常，表达栽体可包括转录启动子，以及任选地，增强子、翻译信号和转录和翻译终止信号。典型地，用于稳定转化的表达栽体具有可选择标志，其允许对经转化细胞的选择和保持。在一些情况下，可使用复制起点来扩增载体的拷贝数。HGF同种型还可作为蛋白质融合被使用或表达。例如，可产生同种型融合，以向同种型加上另外的功能。同种型融合蛋白的实例包括但不限于，信号序列、标签(例如，用于定位的标签，例如his6标签或myc标签，或者用于纯化的标签，例如，GST融合)以及用于指导蛋白质分泌和/或膜相关的序列的融合。a.原核表达原核生物，尤其是大肠杆菌，提供了生产大量蛋白质(例如HGF同种型)的系统。对大肠杆菌的转化是本领域技术人员公知的简单且迅速的技术。用于大肠杆菌的表达栽体可含有诱导型启动子，此类启动子可用于诱导高水平的蛋白质表达，以及用于表i^Jl示出对宿主细胞有一定毒性的蛋白质。诱导型启动子的实例包括lac启动子、trp启动子、杂交tac启动子、T7和SP6RNA启动子和温控XPL启动子。同种型可在大麻杆菌的胞质环境中表达，^是还原性环境，对于一些分子来说，这可能导致不可溶内含体的形成。可以使用还原剂(例如，二硫苏糖醇和P-St基乙醇)和变性剂(例如，盐酸胍和尿素)来使蛋白质重新溶解。一种备选手段是在细菌的周质间隙中表达HGF同种型，所述周质间隙孩:供了氣化环境和类蛋白伴侣和二硫化物异构酶，这可导致对可溶蛋白质的生产。典型地，将前导序列融合到待表达的蛋白质上，其能将蛋白质指导向周质。然后可通过周质中的信号肽酶去除该前导区。靶向周质的前导序列的实例包括来自果胶酸裂合酶基因的pelB前导区和源自碱性磷酸酶基因的前导区。在一些情况下，周质表达允许表达的蛋白质渗入培养基。蛋白质的分泌允许了从培养物上清液中迅速且简单的纯化。可通过渗透性溶解(osmoticlysis)从周质获得未分泌的蛋白质。与胞质表达类似，在一些情况下，蛋白质可能成为不可溶的，可以用变性剂和还原剂来协助溶解和重折叠。诱导和生长的温度也可能影响到表达水平和溶解度，典型地，使用25。C和37。C之间的温度。典型地，细菌生产非糖基化的蛋白质。因此，如果蛋白质需要糖基化以发挥功能，那么可在从宿主细胞纯化之后体外加上糖JMt。b.酵母酵母如酉良酒酵母(S"ccAara附ycescerev&fle)、粟酒裂殖酵母(Sc似z仍accA"/v/fiyc"/w附6e)、耶罗威亚解月旨酵母(F"r/Yw/a/j^o/yric")、乳酸克鲁维酵母(JT/"3w/wi^cm)和巴斯德毕赤酵母(jP/cA/"/wwtora)是公知的酵母表达宿主，它们可被用于生产HGF同种型。可用游离的复制栽体来转化酵母，或者可通过同源重组通过稳定的染色体整合来转化酵母。典型地，使用诱导型启动子来调控基因表达。此类启动子的实例包括GAL1、GAL7和GAL5以及金属疏蛋白启动子，例如CUP1、AOX1或者其它毕赤酵母属(外cA/")或其它酵母启动子。表达栽体通常包括可选择标志，例如LEU2、TRP1、HIS3和URA3，以用于对经转化的DNA加以选择和保持。酵母中表达的蛋白质通常是可溶的。与蛋白伴侣(例如Bip和蛋白质4化物异构酶)的共表达可提高表达水平和溶解度。此外，可使用分泌信号肽融合(例如，来自酿酒酵母的酵母交配型tt-因子分泌信号)和与酵母细胞表面蛋白质(例如，Aga2p交配粘附受体或/i/^"to"^te/fiVi/vwYi/w葡糖淀粉酶)的融合，来指导酵母中表达的蛋白质的分泌。可对蛋白酶切割位点，例如Kex-2蛋白酶进行工程改造，以在离开分泌途径之后M达的多肽除去融合的序列。酵母还能在Asn-X-Ser/Thr基序处进行糖基化。c.昆虫细胞昆虫细胞可用于表达多肽，例如HGF同种型，特别地，使用杆状病毒表达来进行。昆虫细胞能表达高水平的蛋白质，并且能进行大多数高等真核生物采用的翻译后修饰。杆状病毒具有有限的宿主范围，这提高了安全性，并且降低了对真核表达调控方面的忧虑。典型的表达栽体使用用于高水平表达的启动子，例如，杆状病毒的多角体蛋白启动子。通常使用的杆状病毒系统包括杆状病毒，例如，苜蓿银蚊夜蛾(^"togra//wcfl/iybr附'c")核型多角体病毒(AcNPV)和家蚕(5o附;c附肌')核型多角体病毒(BmNPV)，以及昆虫细胞系，例如源自草地贪^tM(S/wwtop紐/Yi/rMgi>en/<i)的Sf9、美洲一星粘虫(尸se"rf"/eftVi"w!;p"""fl)(A7S)和大红斑蝶(Dfl朋"s/ifex:,:p!pMS)(DpNl)。为进行高水平表达，待表达分子的核苷^列被融合在病毒多角体蛋白起始密码子的M下游。在昆虫细胞中对哺乳动物分泌信号进行精确加工，其可用于将表达的蛋白质分泌进培养基。此外，细胞系美洲一星粘虫(A7S)和大红斑蝶(DpNl)能以类似于哺乳动物细胞系统的糖基化模式产生蛋白质，昆虫细胞中备选的表达系统是使用经稳定转化的细胞。可使用细胞系伊J如Schnieder2(S2)和Kc细胞(，累、腹果掩(Droso/^/Za附e/aifogaWer))和C7细胞(白玟伊蚊(爿Wm)来进行表达。可在存在钩或铜的重金属诱导的情况下，使用果蝇(DfWfl!pMfl)金属疏蛋白启动子来诱导高水平的表达。典型地，通过使用可选择标志(例如新審素和潮審素)来保持表达栽体。d.哺乳动物细胞可使用哺乳动物表达系统来表达HGF同种型。可通过病毒感染(例如腺病毒)或通过直接的DNA转移(例如脂质体、裤酸钩、DEAE-葡聚糖以及通过物理手段，例如电穿孔和显微注射)，将表ii^建体^进哺乳动物细胞。典型地，哺乳动物细胞的表达栽体包括mRNA加帽位点、TATA框、翻译起始序列(Kozak共有序列)和M苷酸化元件。此类栽体通常包括转录启动子-增强子，用于高水平表达，例如，SV40启动子-增强子、人巨细胞病毒(CMV)启动子和Rous肉瘤病毒(RSV)的长末端重复。这些启动子-增强子在4艮多细胞类型中具有活性。还可4吏用組织和细胞类型启动子和增强子区域来用于表达。示例性的启动子/增强子区域包括但不限于，来自下述基因的那些，所述基因例如，弹性蛋白酶I、胰岛素、免疫球蛋白、小鼠乳腺瘤病毒、清蛋白、甲胎蛋白、a-l-抗胰蛋白酶、p-珠蛋白、髄鞘碱性蛋白、M^蛋白轻链2和促性腺激素释放激素基因控制。可使用可选择标志来选#^保持具有表^建体的细胞。可选择标志基因的实例包括但不限于潮霉素B磷酸转移酶、腺苷脱氨酶、黄嘌呤-鸟嘌呤鳞酸核糖转移酶、M糖苷砩酸转移酶、二氩叶酸还原酶和胸苷激酵。与细胞表面信号传导分子(例如TCR-;和FceRI-Y)的融合可指导蛋白质以活性状态在细胞表面上表达。对于哺乳动物表达而言，很多细胞系都是可获得的，其包括但不限于，小鼠、大鼠、人、猴、鸡和仓鼠细胞。示例性的细胞系包括但不限于CHO、Balb/3T3、Hela、MT2、小鼠NS0(非分泌)和其它骨徵痗细胞系、杂交瘤和异杂交瘤细胞系、淋巴细胞、成纤维细胞、Sp2/0、COS、NIH3T3、HEK293、293S、2B8和HKB细胞。还可获得被&生为适应不含血清的培养基的细胞系，这有助于从细胞培养基中纯化分泌的蛋白质。一种此类实例是不含血清的EBNA-1细胞系(Pham等人，(2003)iJ/otecAwi^84:332-42.)e.植物可使用转基因植物细胞和植物来表达HGF同种型。典型地，使用直接的DNA转运(例如微粒轰击)和PEG介导的向原生质体中的转运，以及农杆菌介导的转化，将表ii^I建体转入植物。表达栽体可包括启动子和增强子序列、转录终止元件和翻译控制元件。表达栽体和转化技术通常被分为用于双子叶宿主(例如拟南芥(Arabidopsis)和烟草)和单子叶宿主(例如玉米和稻)的。用于表达的植物启动子的实例包括花椰菜花叶病毒启动子、胭脂氨酸合成酶启动子、核糖二砩酸Kt化醉启动子和泛素和UBQ3启动子。通常，4吏用可选择标志，例如，潮霉素、磷酸甘露糖异构醉和新霉素磷酸转移酶，来协助对经转化细胞的选择和保持。可将经转化的植物细胞作为细胞、聚集体(愈伤组织)保持于培养基中，或者将其再生为整椒汰物。转基因植物细胞还可包括经工程&造以生产CSR同种型的藻类(见，例如，Mayfield等人(2003)/WAS7卯:438-442)'因为植物具有与哺乳动物细胞不同的糖基化模式，因此这可能影响到对这些宿主中产生的CSR同种型的选择，G.同种型級合物本发明提供了HGF同种型的多种合成缀合物。在一个实例中，提供了作为融合蛋白的HGF同种型，其与编码另一多肽的核酸分子(例如，促进同种型分泌的多肽)直接或间接相连。在一些实例中，融合蛋白可导致产生嵌合多肽。例如，嵌合体可包括下述多肽，其中，细胞外结构域部分和C-末端部分(例如，内含子编码部分)来自不同同种型。合成形式还包括下述缀合物，其中，同种型或其内舍子编码部分与另一物质(例如靶向剂或被把向剂)直接或通过接头连接，或与将HGF同种型或HGF同种型的内含子编码部分呈递到细胞表面受体(CSR)(例如MET)上使得CSR的活性祐:调节的任何其它分子直接或通过接头相连。本发明还提供了"拟肽"同种型，其中，肽骨架的一个或多个鍵被生物等构物或其它鍵替换，导致得到的多肽拟肽物较之未经修饰的形式而言具有改进的性质，例如对蛋白酶的抗性。可^L计并生产出具有一种或多种经修饰性质的HGF同种型缀合物。这些性质包括但不限于，增加的产生，包括增加的分泌或表达。例如，可对HGF同种型进行修饰，使其展示出较之未经修饰的HGF同种型而言提高的分泌。其它性质包括增加的蛋白质稳定性，例如，增加的蛋白质半寿期、增加的热耐受性和/或对一种或多种蛋白酶的抗性。例如，可对HGF同种型进行^"饰，以增加蛋白质的体外和/或体内稳定性。体内稳定性可包括在特定施用条件下的蛋白质稳定性，例如，在血液、唾液和/或消化液中的稳定性。还可使用本领域中已知用于修饰蛋白质的任何方法，对HGF同种型加以修饰，使其展示出经修饰的性质，而不生产缀合多肽。此类方法可包括定点诱变和随机诱变。可向HGF同种型中引入非天然M酸和/或多肽J^酸之间的非天然共价鍵，以增加蛋白质稳定性。在此类经修饰的HGF同种型中，同种型的生物学功能较之未经修饰的同种型而言可保持不变。在一些实例中，还可换^供作为级合物的经修饰的HGF同种型，例如，融合蛋白、嵌合蛋白或本文提供的其它缀合物。本文提供的以M领域已知的测定(例如，针对生物学功能的测定)可用于评估经催辦HGF同种型的生物学功能。将合成HGF同种型连接为融合蛋白或合成缀合物可以是直接或间接的。在一些实例中，可通过核酸接头(例如，限制性酶接头)或促进被编码多肽的折叠或稳定性的其它肽接头来协助连接。还可通过化学连接来实现多肽級合物的连接，或者通过异双功能接头(例如，本领域已知或本文提供的任何)来协助多肽缀合物的连接。示例性的肽接头和异双功能交联试剂在下文中提供。例如，示例性肽接头包括但不限于，(Gly4Ser)n、(Ser4Gly)n和(AlaAlaProAla)n(见，例如SEQIDNO.270)，其中，n是l至4，例如，1、2、3或4,例如，(1)具有Ncol末端的Gly4Ser，SEQIDNO.266CCATGGGCGGCGGCGGCTCTGCCATGG(2)具有Ncol末端的(Gly4Ser)2，SEQIDNO.267(3)具有NcoI末端的(Ser4Gly)4，SEQIDNO.268CCATGGCCTCGTCGTCGTCGGGCTCGTCGTCGTCGGGCTCGTCGTCGTCGGGCTCGTCGTCGTCGGGCGCCATGG(4)具有Ncol末端的(Ser4Gly)2，SEQIDNO.269CCATGGCCTCGTCGTCGTCGGGCTCGTCGTCGTCGGGCGCCATGG(5)(AlaAlaProAla)n，其中，n是l至4，例如2或3(见，例如SEQIDNO:270)本领域技术人员已知用于在氨基和硫醇基间形成共价鍵以及用于向蛋白质中引入硫醇基的多种异双功能交联试剂(见，例如，thePIERCECATALOG,ImmunoTechnologyCatalog&Handbook,1992-1993，其描述了对此类试剂的制备和使用，并且提供了此类试剂的商业来源；还见，例如，Cumber等人(1992)祝ocwi/"g"teCAe肌3:397-401;Thorpe等人(1987)CancerRes.47:5924-5931;Gordon等人(1987)Proc.Natl.AcadSci.84:308-312;Walden等人.(1986)J.Mol.CellImmunol.2:191-197;Carisson等人(1978)Biochem.J.173:723-737;Mahan等人(1987)Anal.Biochem.162:163-170;Wawrzynczak等人.(1992)Br.J.Cancer66:361-366;Fattom等人(1992)Infection&Immun.60:584-589)。这些试剂可用于在N-末端部分和C-末端的内含子编码部分之间形成共价键，或在每个这样的部分和接头之间形成共价鍵。这些试剂包括但不限于N-琥多白跣亚胺基-3-(2-吡咬二疏基)丙酸酯(SPDP，二疏4匕物接头)、硫代琥珀酰亚胺基6-3-(2-吡咬二疏基)丙,基己酸酯(硫代LC-SPDP)、琥珀酰亚胺基氧g-a-甲基苯曱M代疏酸酯(SMBT，受阻的焦疏酸盐接头)、琥珀酰亚胺基6-3-(2-吡咬二硫基)丙酰胺基-己酸酯(LC-SPDP)、硫代琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-l凌酸醋(疏代SMCC)、琥珀酰亚胺基3-(2-吡咬二4)丁酸酯(SPDB，受阻的^lt键接头)、硫代琥珀酰亚胺基2-(7-叠氮基-4-甲基香豆素-3-乙酰胺)乙基-l，3，-二硫代丙酸酯(SAED)、硫代琥珀醜亚胺基7-叠氮-4-甲基香豆素-3-乙酸酯(SAMCA)、硫代琥珀酰亚胺基-6-fa-甲基-a-(2-吡啶二硫基)甲苯甲酰胺基(tohmmido)-己酸酯(硫代LC画SMPT)、1，4國二-3'隱(2'-吡咬二硫基)丙酰胺基丁烷(DPDPB)、4-琥珀酰亚胺基氧g-a-曱基-a-(2-吡咬二疏基)曱苯(SMPT，受阻的焦硫酸盐接头)；硫代琥珀酰亚胺基-6-[a-甲基-a-(2-嘧咬二硫基)甲苯甲跣胺基I己酸酯(硫代-LC-SMPT)、间马来酰亚胺苯甲酰基-N-羟基-琥珀酰亚胺酯(MBS)、间马来酰亚胺苯甲跣基-N-羟磺基-琥珀酰亚胺酯(硫代MBS)、N-琥珀酰亚胺基(4-硪乙酰)氨基苯甲酸酯(SIAB;硫酸接头)、硫代琥珀酰亚胺基-(4-碘乙跣)4y^苯甲酸酯(硫代SIAB)、琥珀酰亚胺基-4-(对马来酰亚胺苯基)丁酸酯(SMPB)、硫代琥珀酰亚胺基4-(对马来酰亚胺-苯基)丁酸酯(硫代SMPB)、叠氮苯甲酰酰肼(ABH)。这些接头，例如，可与肽接头组+使用，所述肽接头例如增加了柔性或溶解度的那些，或者提供了空间位阻或使空间位阻消失的那些。本领域技术人员已知的用于将多肽分子与另一分子^来的任何其它接头可以使用。一般性性质是使得得到的分子是生物相容性的(用于施用给动物，包括人)，以及使得得到的分子能调节细胞表面分子(例如MET受体、血管发生性分子或其它细;fe4面分子或受体)的活性。可制^sfHGF同种型級合物的药物组合物，并且通过施用治疗有效量的缀合物(例如，在生理学可接受的赋形剂中)来实现治疗。HGF同种型缀合物还可用于体内治疗方法，例如，通过递送含有编码HGF同种型缀合物(作为融合蛋白)的核酸的栽体来实现。1.同种型融合HGF同种型融合包括HGF核酸序列与另一核酸序列的有效连接。可与HGF同种型相连的核酸分子包括但不限于，设计来协助细胞内蛋白质表达的启动子序列、设计来协助蛋白质分泌的分泌序列、用于调控转录和翻译的调控序列、调控被编码多肽(例如，CD45的部分，或免疫球蛋白的Fc部分)的血清稳定性的分子以及编码其它多肽的核酸分子，例如编码被耙向剂或靶向剂的那些或编码另一配体或细胞表面受体内含子融合蛋白的全部或部分的那些。融合序列可以是表达栽体的组分，或者其可以是插入表达载体的同种型核酸序列的部分。融合可导致产生两个或多个基因编码的嵌合蛋白，或者，融合可导致产生仅编码HGF同种型多肽的蛋白质序列(例如，如果融合的序列是在多肽分泌进分泌途径之后被切下来的信号序列的话)。在一个实例中，与HGF同种型全部或部分融合的核酸可包括能改进同种型生产的任何核酸序列，例如启动子序列、表位或融合标签或分泌信号。在另一实例中，HGF同种型融合可包括与被把向剂或靶向剂的融合，以产生例如下文所述的HGF同种型缀合物.此外，编码HGF同种型全部或部分的核酸可与编码另一配体或细JJfe^面受体内含子融合同种型的核酸或其内含子部分相连，由此产生嵌合内含子融合蛋白。示例性的HGF嵌合体如下文所述。被编码的HGF同种型融合蛋白可含有另外的、不会对经纯化的同种型蛋白质活性造成不利影响的氨基酸。例如，另外的氨基酸可作为接头序列(其将被编码的同种型蛋白质与被编码的融合序列分开)被包括进融合蛋白，从而在融合蛋白中提供例如有利的空间构型。可作用为分离序列的此类另外的氛基酸的数量可变化，其通常不超过60个M酸。下文提供了示例性的接头序列。在另一实例中，融合蛋白可含有限制性酶接头序列编码的氨基酸残基。在另外的实例中，同种型融合蛋白可在另一分子与HGF同种型的融合之间的一处或多处连接处含有选择性切割位点。例如，此类选择性切割位点可包含一个或多个氨基酸残基，其提供对选择性酶切、蛋白水解、化学切割或其它切割易感的位点。在一个实例中，另外的氨基酸可以是针对位点特异性蛋白酶切割的识别位点。融合蛋白还可被进一步加工，以从其切割下融合的多肽；例如，当同种型蛋白质与表位标签融合，但是例如用于治疗目的时不需要另外的M酸的情况下。a.用于改进的HGF同种型多肽生产的HGF同种型融合本发明提供了编码HGF融合多肽的核酸序列，用于改进的HGF同种型的生产。HGF同种型的核酸，例如SEQIDNO:9、11、13、17或19中任何一条所示的，可与同源或异源前体序列融合，所述序列取代和/或提供了功能性分泌序列。其它示例性HGF同种型可包括关联HGF的其它天然或经改造的同种型变体，例如，SEQIDNO:21、23、25、27、29和31中任何一条所示，其编码SEQIDNO:22、24、26、28、30或32中任何一条所示的多肽。在一个实例中，含有关联HGF配体的天然内源前体信号序列的同种型(例如内含子融合蛋白同种型)自身的前体序列可被异源或同源前体序列(例如，组织纤溶酶原活化物的前体序列或本领域技术人员已知的任何其它信号序列)替换，以改进HGF同种型多肽的分泌和生产。通过将前体序列定位于待从宿主细胞分泌的重组蛋白质N-末端最能有效利用该前体序列，核酸前体序列可与含有HGF同种型编码区域的核酸以下述方式有效地连接，所述方式使得前体序列编码区域处于同种型编码区域的上游(即，5，)，并且与之以相同的读框，由此提供同种型融合。同种型融合可在宿主细胞中表达，以提供包含以其I(U^末端连到HGF同种型氨基末端上的前体序列的融合多肽。融合多肽可从宿主细胞分泌。典型地，在分泌过程期间，从融合多肽上切下前体序列，导致分泌的同种型在细胞外环境中积累，或者，在一些情况下，在周质间隙中积累。任选地，是融合核酸的HGF同种型(包括内含子融合蛋白)还可包括与另外的一种或多种核酸序列(例如，编码融合标签的序列、促进对同种型多肽的纯化和/或检测的序列)的有效连接。融合标签的非限制性实例包括myc标签、多聚-His标签、GST标签、Flag标签、荧光或发光部分(例如，GFP或荧光素酶)或本领域技术人员已知的任何其它表位或融合标签。在其它实施方案中，HGF同种型的核酸序列可^^有内源信号序列，并可包括与编码一种或多种融合标签的核酸序列的融合。很多前体序列，包括信号序列和原序列和/或融合标签序列，已被鉴定出来，并且是本领域已知的，其例如但不限于，本文H供和描述的那些，它们被考虑与同种型核酸分子联合使用。前体序列可以是同种型基因或cDNA同源或异源的，或者，前体序列可以是化学合成的.在大多数情况下，同种型多^at过信号肽和/或原肽的存在而从宿主细胞分泌，将导致信号肽或原肽被从分泌的内含子融合蛋白多肽中除去。i.组织纤溶酶原活化物组织纤溶酶原活化物(tPA)是丝氨酸蛋白酶，其通过将纤维蛋白溶酶原这种酶原转化为其活性形式(纤维蛋白溶酶)而对止血加以调控。与其它丝氨酸蛋白酶类似，tPA作为非活性酶原合成并分泌，其被蛋白水解加工活化。特别地，tPA的成熟的部分活性的单链醉原形式可被进一步加工成两条链的具有完全活性的形式，这是通过在SEQIDNO:255的Arg-310之后进行切割来实现的，所述切割由纤维蛋白溶酶、组织激肽释放酶或因子Xa催化。tPA通过血块紧邻的附近区域中的内皮细胞分泌进血液，所述区域富含纤维蛋白。tPA对于纤维蛋白溶酴原向纤维蛋白溶酶(纤维蛋白凝块的调控子)的转化具有高催化活性，因此其调控纤维蛋白溶解。纤维蛋白溶酶也是丝氨酸蛋白酶，tPA对其酶原形式进行切割之后，其转化为具有催化活性的两条廷的形式。纤维蛋白溶酶作用为降解血块的纤维蛋白网络，这是通过在多个位置切割纤维蛋白网来实现的，这导致产生了循环片段，所述片段被其它蛋白酶或被肾和肝清除。tPA的前体多肽包括被SEQIDNO:255所示的全长tPA序列的残基l-35编码的前序列和原序列，如SEQIDNO:253所示例的。tPA的前体序列含有信号序列(包括氨基酸1-23)，其还含有两条原序列(包括SEQIDNO:253或255所示的示例性tPA序列的M酸24-32和33-35)。tPA的信号序列在ER中被共翻译切割，而原序列则在高尔基体中被除去，这是通过在SEQIDNO:253或255所示的示例性序列氨基酸29-32处存在的RFRR序列之后的弗林蛋白酶加工位点进行切割来实现的对tPA原序列的弗林蛋白酶切割在成熟的多肽tPA序列中保留了三个M酸的原序列和外肽酶切割位点GAR，如SEQIDNO:253或255所示的示例性tPA序列的氨基酸33-35所示。对保留的原序列位点的切割由纤维蛋白溶酶样的细胞外蛋白*导，以获得从SEQIDNO:253或255示出的Ser36起始的成熟tPA多肽。在培养基中包括进蛋白酶抑制物(例如抑酶肽)可防止外肽酶切割，从而在tPA的成熟多肽中保留GAR原序列(Berg等人，(1991)丑ioc/^附丑ic;pAj^及esOwi附，179:1289)。典型地，tPA通过组成型分泌途径分泌，虽然在一些细胞中，tPA以受调控的方式分泌。例如，在内皮细胞中，内皮细胞活化后，tPA的受调控分泌被诱导出来，例如，被组胺、血小板活化因子或嚷呤核苷酸诱导，并且所述受调控分泌需要内皮内的Ca2+和cAMP信号传导(Knop等人，(2002)祝ocAem说印A"Jcto1600:162)。在其它细胞中，例如，在神经细胞中，能诱导tPA分泌的特定刺激包括，运动、精神压力、电休克疗法和手术(Parmer等人，(1997)/5iWCAe附272:1976)。介导tPA受调控分泌的机制需要tPA多肽自身上的信号，而因为当不存在氨甲酰M刺激时，仅与tPA信号序列有效相连的GFP分子是组成型分泌的，所以tPA的信号序列高效介导tPA的组成型分泌(Lochner等人，(1998)Mo/丑,V/CW/,9:2463)。在不存在tPA信号序列的情况下，tPA/GFP杂交蛋白质不从细胞中分泌。包括tPA前/原肽序列的示例性tPA前体序列如SEQIDNO:253所示，并且由SEQIDNO:252所示的核酸序列编码。tPA的信号序列包括SEQIDNO:255的狄酸1-23，原序列包括SEQIDNO:255的絲酸24-35,其中，被弗林蛋白酶切割的原序列包括氨基酸24-32,被纤维蛋白溶酶样外蛋白酶切割的原序列包括氨基酸33-35。本发明还提供了tPA前/原序列的等位变体，例如SEQIDNO:256或257所示的那些。此外，哺乳动物和非哺乳动物来源的tPA的前/原序列的同种型蛋白质融合也包括在内，并且示例性序列如SEQIDNO:258-265所示，ii.tPA-HGF同种型融合本发明提供了编码tPA-HGF同种型多肽的核酸序列，用于改进的HGF内含子融合蛋白同种型的生产。本发明提供了与tPA前/原序列有效相连的编码HGF同种型(包括HGF的内含子融合蛋白同种型)或其等位变体的核酸序列，例如SEQIDNO:9、11或13中任何一条所示，其编码SEQIDNO:10、12、14、18或20中所示的氨基酸。tPA前/原序列可包括如SEQIDNO:252所示的tPA前/原序列，其编码SEQIDNO:253中l-35位所示的氨基酸。在一些实例中，tPA前/原序列可替换HGF的内源前体信号序列，和/或提供用于分泌内含子融合蛋白多肽的最优前体序列。在其它实施方案中，如SEQIDNO:9、11或13中任何一条所示的HGF同种型或其等位变体(编码SEQIDNO:10、12、14、18或20中所示的氨基酸)可与tPA前/原序列的部分有效地相连，所述部分包括最多直到tPA前/原序列弗林蛋白酶切割位点的核酸序列(编码的SEQIDNO:253所示的示例性tPA前-原序列的氨基酸1-32)，由此将编码氨基酸GAR的核酸排除在外(编码的SEQIDNO:253所示的示例性tPA前-原序列的氨基酸33-35)。此外，HGF同种型或其等位变体的核酸序列，例如，SEQIDNO:9、11或13中任何一条所示的(编码SEQIDNO:10、12、14、18或20中所示的氨基酸)，可包括与tPA前/原序列的全部或部分(例如，SEQIDNO:252或253所示)的等位变体的有效连接，或者，其可包括与哺乳动物和非哺乳动物来源的其它tPA前/原序列(如SEQIDNO:258-265中任何一条所示)的全部或部分的有效连接'本发明提供的HGF内含子融合蛋白-tPA前/原融合序列可展示出增强的细ife^达和HGF同种型多肽的分泌，以改进生产。在另一实施方案中，编码HGF同种型或其等位变体的核酸序列，例如，SEQIDNO:9、11或13中任何一条所示的(编码SEQIDNO:10、12、14、18或20中所示的氨基酸)，可包括与tPA前/原序列的仅前序列(信号序列)(例如，编码SEQIDNO:253所示的示例性tPA前/原序列中氨基酸l-23的示例性信号序列)的有效连接。本发明提供的HGF内含子融合蛋白-tPA前序列融合可展示出提高的细il^达和HGF同种型多肽的分泌，以改进生产。在另外的实施方案中，编码含有关联HGF配体的内源信号序列的HGF同种型或其等位变体的核酸序列，例如，SEQIDNO:9、11或13中任何一条所示的(编码SEQIDNO:10、12、14、18或20中所示的氨基酸)，可包括与tPA原序列的融合，其中，在HGF同种型内源信号序列和HGF同种型编码序列之间插入有tPA原序列。在一个实例中，tPA原序列包括编码SEQIDNO:253所示的示例性tPA前/原序列的氨基酸24-32的核酸序列。在另一实例中，tPA原序列包括编码SEQIDNO:253所示的示例性tPA前/原序列的氨基酸33-35的核酸序列。在另外的实例中，tPA原序列包括编码SEQIDNO:253所示的示例性tPA前/原序列的M酸24-35的核酸序列。其它tPA原序列可包括tPA前/原序列等位变体(例如SEQIDNO:256或257所示)的氨基酸24-32、33-35或24-35。本发明提供的HGF内含子融合蛋白-tPA原序列融合可展示出提高的细M达和HGF同种型多肽的分泌，以改进生产。此外，用于改进内含子融合蛋白多肽的分泌的HGF同种型、HGF内含子融合蛋白-tPA前/原序列融合、HGF内含子融合蛋白-tPA前序列融合和/或HGF内含子融合蛋白-tPA原序列融合还可任选地包括一个、两个、三个或更多个融合标签，它们有助于HGF同种型多肽的纯化和/或检测。通常，针对特定标签的编码序列可在JiJ^或l^末端与编码HGF同种型多肽的核酸分子的编码序列一起被符合读框地剪接，可以有或没有接头区域。当融合在序列4U^末端时，融合标签可^t置于内源或异源前体序列之间。在一种实施方案中，融合标签，例如c_myc标签、8XHis标签或本领域技术人员已知的任何其它融合标签，可枕故置于HGF同种型内源信号序列和HGF编码序列之间。在另一实施方案中，融合标签可枕故置于异源前体序列，例如tPA前/原序列、前序列或原序列(如SEQIDNO:252所示的)和HGF同种型编码序列之间。在其它一些实施方案中，融合标签可直接放到编码HGF同种型融合多肽序列的核酸lStS末端上。在一些情况下，HGF同种型融合可在内源或异源前体序列和融合标签之间含有接头。本发明提供的含有一种或多种融合标签的HGF同种型融合(包括HGF内含子融合蛋白-tPA融合)可协助对HGF同种型多肽的更为简单的检测和/或纯化，以改进生产。b.嵌合和合成的内含子融合多肽本发明还提供了嵌合HGF融合多肽。嵌合HGF同种型是两种或多种基因的全部或部分编码的蛋白质，这导致产生这样的多肽，其含有与另一多肽有效相连的被编码HGF序列的全部或部分。通常，嵌合HGF同种型含有HGF同种型的4^P或部分，包括来自HGF内含子融合多肽的内含子，其在N-末端与另一多肽或其它分子有效地相连，使得产生的分子能调节细胞表面分子，特别是RTK受体或其它血管发生性分子(包括参与炎性应答、血管发生、新血管形成和/或细胞增殖的途径中涉及的任何分子)的活性。这些合成的"多肽"包括嵌合的内含子融合多肽，其中，HGF同种型的4^P或部分与内含子融合蛋白的^P或部分(例如，SEQIDNO:36-245所示序列和编码的^J^酸中任何一条的全部或部分)相连。示例性的嵌合内含子融合多肽包括与赫斯达汀的内含子8部分相连的HGF同种型的全部或部分(见，例如SEQIDNO:231-245和SEQIDNO:216-230所示的编码的氨基酸)。示例性的赫斯达汀，或其内含子8部分，如SEQIDNO:201-245所示。下表4指出了较之SEQIDNO:186所示的显著性(prominent)赫斯达汀分子的氨基酸341-419之间包括的显著性内含子8(SEQIDNO:216)而言，赫斯达汀的内含子8编码部分中的变化。示例性内含子8和赫斯达汀分子(包括内含子8或赫斯达汀的变体)的序列标识符(SEQIDNO)示于括号中。其它赫斯达汀变体包括等位变体，特别是具有细胞外结构域部分中的变化的那些。表4:赫斯达汀变体<table>complextableseeoriginaldocumentpage111</column></row><table>HGF同种型的N-末端部分可与合成的内含子融合蛋白的C-末端(内含子编码部分)直接或通过接头(例如多肽接头)相连.例如，连接可通过融合蛋白的重组表达实现，其中，编码HGF同种型的核酸的全部或部分在5，端与编码另一内含子融合蛋白的核酸的4^或部分有效连接。连接可以在存在被编码的肽接头(例如，本文所述的或本领域已知的任何接头)或存在限制性SI接头的情况下实现。HGF同种型编码的多肽还可与另一多肽的全部或部分连接或缀合，这通过化学连接(例如，通过使用异双功能交联试剂)或可以化学实现的任何其它连接(例如，上文中针对同种型缀合物描述的)来实现。可以选用任何合适的接头，只要得到的HGF嵌合分子能与细lfe4面受体(例如MET受体)或其它细胞表面分子(包括血管发生性分子)相互作用，并且能调节(典型地，抑制)细^面分子的活性。可以选用接头以添加想要的性质，例如，增加血清稳定性、溶解度和/或细胞内浓度，以及降低其中N-末端部分和内含子编码部分之间插入一个或多个接头的紧密相邻导致的空间位阻。产生的分子可被i殳计为，或祐ii择为保留了调节细JI^面分子(特别是RTK或其它血管发生性分子，包括涉及炎性应答、新血管形成、血管发生和细胞增殖以及肿瘤;SUl的途径中涉及的任何分子)活性的能力。c.HGF多聚体和多聚化结构域同种型多聚体，包括HGF多聚体可以是一种或超过一种多肽的共价连接、非共价连接或化学连接的多聚体，以形成同种型的二聚体、三聚体或更高数量级的多聚体。多聚体的多肽组分可以相同或不同。典型地，本发明提供的多聚体在本发明提供的HGF同种型(例如，SEQIDNO:10、12、14、18或20所示的任何)中的任何一种或多种间形成.在一些实例中，多聚体可在HGF同种型和另一CSR或配体同种型间形成。示例性的CSR同种型包括但不限于，编码SEQIDNO:36-245所示的多肽的核酸分子和肽，及其变体。多肽的多聚体可通过二聚化形成，例如通过Fc结构域间的相互作用形成，或者它们可共价连接。两个同种型多肽之间的多聚化可以是自发的，或者可以是两个或多个多肽之间的被动(forced)连接导致的。在一个实例中，多聚体可通过同种型多肽上半胱氨酸残基间形成的二^lt连接。在另外的实例中，多聚体可通过化学连接(例如，通过使用异双功能接头)在两个多肽间形成。i.肽接头肽接头可用于产生多肽多聚体。在一个实例中，肽接头可与第一多肽的C-末端和第二多肽的N-末端融合。该结构可重复数次，使得至少一个，优选2、3、4或更多个可溶多肽通过肽接头在其各末端互相相连。例如，多聚体多肽可具有ZrX-Z2的序列，其中，Zi和Zz每个都是CSR或配体同种型全部或部分的序列，其中x是肽接头的序列.在一些情况下，z,和/或Z2是同种型多肽的4^p或部分。在另一实例中，Zi和Z2是相同的，或者它们是不同的。在另一实例中，多肽具有序列ZrX-Z2(-X-Z)n，其中，"n"是任何整数，即，通常是1或2。典型地，肽接头足够长到能使得产生的多肽可溶。肽接头的实例包括甘氛酸丝氨酸多肽，例如，s-Gly-Gly-、GGGGG(SEQIDNO:313)、GGGGS(SEQIDNO:311)或(GGGGS)n、SSSSG(SEQIDNO:312)或(SSSSG)n。例如，在Huston等人(1988)iW^S85:5879-5883、Whitlow等人(1993)iVo紐iVi￡>ig/weeW"g6:989-995和Newton等人.，(1996)J5/oc/ie/wis外35:545-553中描述了连接部分。其它合适的肽接头包括美国专利No.4,751,180或4，935，233中所述的任何那些，它们被引入本文作为参考。可使用任何合适的常规技术，将编码想要的肽接头的多核苷酸符合读框地插入同种型中的任何位置，或N-末端或C-末端，或前体序列(例如t-PA前原序列)之间。ii.多肽多聚化结构域两条或多条多肽之间的相互作用可被它们与下述任何部分或其它多肽直接或间接的连接所协助，所述部分或其它多肽自身能够相互作用以形成稳定结构。例如，分别的被编码多肽链可通过多聚化连起来，其中，多肽的多聚化被多聚化结构域所介导。典型地，多聚化结构域提供了笫一嵌合多肽和第二嵌合多肽之间稳定的蛋白质-蛋白质相互作用的形成。嵌合多肽包括，例如，编码同种型多肽的核酸与编码多聚化结构域的核酸的连接(直接或间接的)。同源多聚或异源多聚多肽可从分别的嵌合多肽的共表达来产生。第一和第二嵌合多肽可以是相同或不同的。通常，多聚化结构域包括能形成稳定的蛋白质-蛋白质相互作用的任何结构域。多聚化结构域可通过免疫球蛋白序列、亮氨酸拉链、疏水区域、亲水区域或游离硫醇(其在同源或异源多聚体的嵌合分子间形成分子间二硫键)发生相互作用'此外，多聚化结构域可包括与包含穴的4Ut酸序列互补的包含突起(protuberance)的4M^酸序列，例如，如美国专利申请序列号No.08/399,106所述。此类多聚化区域可经过工程改造，使得空间相互作用不仅能促进稳定的相互作用，还能进一步促进异源二聚体优先于同源二聚体从嵌合单体混合物中形成。通常，可通过用较大側链(例如，酪氨酸或色氨酸)替换第一多肽界面上的小^*酸側链来构建突起。任选地，在第二多肽的界面上制造与突起的大小相同或相近的补偿性腔(cavity)，这通过用较小的^J^酸側链(例如，丙氨酸或苏氨酸)替换大M酸侧链来实现。嵌合同种型多肽，例如，本文提供的任何HGF同种型多肽可在任何位置(但是典型地，通过其N-末端或C-末端)连接到多聚化结构域的N-或C-末端上，以使得最终在表达时形成嵌合多肽。可通过任何合适的方法，例如，通过在A蛋白或G蛋白柱上进行的亲和层析，来纯化产生的嵌合多肽以及由此形成的多聚体。当编码不同嵌合多肽的两种核酸分子转化进细胞时，将发生同源和异源二聚体的形成。可对用于表达的4Hf进行调整，使得异源二聚体的形成优先于同源二聚体的形成。(a)免疫球蛋白结构域多聚化结构域包括包含游离疏醇部分(能发生反应，与另外的M酸序列的多聚化结构域进行分子间二硫键)的那些。例如，多聚化结构域可包括免疫球蛋白分子的部分，例如来自IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgM和IgE。通常，此类部分是免疫球蛋白恒定区(Fc)。已经描述了对与源自抗体的多肽的多种部分(包括Fc结构域)融合的融合蛋白的制备，见，例如，Ashkenazi等人(1991)88:10535;Byrn等人(19卯)A^"re，344:677和Hollenbaugh和Aruffo，(1992)"ConstmctionofImmnoglobulinFusionProteins,"在C"/re"f/"/附附""otogy中，增刊4，第10.19.1-10,19.11页。抗体与特异性抗原结合，其含有两条相同的重链和两条相同的轻链，它们之间通过^t鍵共价相连。重链和轻链含有与抗原结合的可变区以及恒定区(c)。在每条链中，一个结构域(v)根据分子的抗体特异性具有可变的M酸序列。另一个结构域(c)则具有同一类分子间共同的相对恒定的序列。从M末端开始依^序对结构域编号。例如，IgG轻链由以VL-CL(分别表示轻链可变结构域和轻链恒定结构域)的顺序从N-到C-末端相连的两个免疫球蛋白结构域构成。IgG重链由以VH-CH1-CH2-CH3(指可变重链结构域、恒定重链结构域1、恒定重链结构域2和恒定重链结构域3)的顺序从N-到C-末端相连的四个免疫球蛋白结构域构成。产生的抗体分子是四条链的分子，其中，每条重链通过二硫键与轻链相连，两条重链又通过二硫键互相相连。重链的连接由重链柔性区域(作为铰链区已知)介导。可例如通过H^切割来产生抗体分子的片段。例如，通it^瓜蛋白酶进行蛋白酶切割时，从两条Fab区域(即，含有可变区的部分)上切下重链恒定区的二聚体，Fc结构域。在人中，基于^tfc示为delta(8)、gamma(y)、mu和alpha(a)和epsilon(￡)的重链，可分类出五种抗体同种型(isotype)，分别为IgD、IgG、IgM、IgA和IgE类的抗体。IgA和IgG类含有IgAl、IgA2、IgGl、IgG2、IgG3和IgG4亚类。免疫球蛋白重链间的序列差异导致多种同种型在例如C结构域的数量、铰链区的存在以及链间二疏鍵的数量和位置方面有所不同。例如，IgM和IgE重链含有另外的C结构域(04)，其替换了铰链区。IgG、IgD和IgA的Fc区域通过其0/3、C83和Ca3结构域互相配对，而IgM和IgE的Fc区域通过其Cn4和Cs4结构域二聚体化。IgM和IgA分别形成具有10个和4个抗原结合位点的多聚结构。本发明提供的免疫球蛋白嵌合多肽包括全长免疫球蛋白多肽。可选地，免疫球蛋白多肽比全长要短，即含有重链、轻链、Fab、Fab2、Fv或Fc。在一个实例中，免疫球蛋白嵌合多肽作为单体或异源或同源多聚体装配，特别是作为二聚体或四聚体装配，可利用不同的结构的链或基本单元来装配单体以及异源和同源多聚体。例如，同种型多肽可与免疫球蛋白分子的全部或部分(包括免疫球蛋白分子的CH、Cl、Vh或Vl結枸域的全部或部分)融合(见，例如，美国专利申请5,116,964)。可通过经合适核酸分子转化过的哺乳动物细胞，容易地产生并分泌嵌合同种型多肽。分泌的形式包括下述这些，其中同种型多肽存在于重链二聚体中；轻链单体或二聚体中；以及重链和轻链异源四聚体中，其中，同种型多肽与一条或多条轻链或重链融合，包括至多和包含全部四个可变区类似物被取代的异源四聚体。在一些实例中，一种或超过一种核酸融合分子可被转化进宿主细胞，以产生多聚体，其中，多聚体的同种型部分是相同或不同的。在一些实例中，存在非同种型多肽轻-重链可变样结构域，由此产生异双功能抗体。在一些实例中，可产生与缺少铰链二疏鍵(disulfide)的免疫球蛋白分子的部分融合的嵌合多肽，其中，两条多肽之间非共价或共价相互作用将分子结合成同源或异源二聚体。(i)FC结构域典型地，免疫球蛋白嵌合多肽融合(例如，与HGF同种型的融合)的免疫球蛋白部分包括免疫球蛋白多肽的重链，最通常是重链的恒定结构域。人IgG亚型重链恒定区的示例性序列是已知的。例如，对于SEQIDNO:296所示的示例性重链恒定区而言，CH1结构域对应于4RJ^酸1-98，铰链区对应于氨基酸99-110，CH2结构域对应于氨基酸111-233，CH3结构域对应于氨基酸224-330。在一个实例中，免疫球蛋白多肽嵌合蛋白可包括免疫球蛋白多肽的Fc区域。典型地，此类融合至少保留有具有功能活性的、免疫球蛋白重链恒定区的铰链、CH2和CH3结构域。例如，IgGl的全长Fc序列包括SEQIDNO:296所示的序列的氨基酸99-330。已知多种Fc结构域，包括其T细胞活性降低或消失的变体Fc结构域。连接的精确位置并不关鍵特定位点是公知的，其可被选用，以优化同种型多肽的生物学活性、分泌或结合特征。Fc结构域的示例性序列如SEQIDNO:297或SEQIDNO:298所示。除了hlgGlFc之外，本文^1供的同种型多肽中还可包括进其它Fc区域。例如，当要将Fc/FcYR相互作用介导的效应器功能最小化时，考虑与很难募集补体或效应细胞的igG同种型(例如，IgG2或IgG4的Fc)融合。此外，Fc融合可含有基本上由属于任何抗体类的免疫球蛋白基因编码的免疫球蛋白序列，所述抗体类包括但不限于IgG(包括人的IgGl、IgG2、IgG3或IgG4亚类)、IgA(包括人的IgAl和IgA2亚类)、IgD、IgE和IgM的抗体类。此外，可使用接头，以将Fc与另一多肽共价连接，以产生Fc嵌合体。经修饰的Fc结构域也是已知的(示例性修饰见，例如美国专利公开号No.US2006/0024298;以及国际专利公开号No.WO2005/063816)。在一些实例中，Fc区域是这样的其较之野生型免疫球蛋白重链的Fc区域的效应器功能而言具有改变的(更多或更少的)效应器功能。抗体的Fc区域与大量Fc受体和配体相互作用，从而赋予一批被称为效应器功能的重要功能性能力。Fc效应器功能包括，例如，Fc受体结合、^H^固定和T细胞排除活性(见，例如美国专利号No.6，136，310)。测定T细胞排除活性、Fc效应器功能和抗体稳定性的方法是本领域已知的。例如，IgG分子的Fc区域与FcyR相互作用。这些受体表达于多种免疫细胞(包括，例如，单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、血小板、B细胞、大颗粒淋巴细胞、朗格汉斯细胞、天然杀伤细胞和^T细胞)中。Fc/FqR复合物的形成将这些效应细胞募集到结合的抗原的位点，典型地，导致发生细胞内的信号传导亊件，以及重要的随后免疫应答，例如，炎症介体的释放、B细胞活化、胞吞作用、吞嘸作用和细胞毒性攻击。介导细胞毒性和吞嗡作用效应器功能的能力是抗一波坏靶向细胞的可能机制。表达FqR的细胞毒性细胞对靶细胞上结合的抗体的识别和溶解#皮称为抗体依赖性的、细胞介导的细胞毒性(ADCC)。针对多种抗体同种型的其它Fc受体包括FceR(IgE)、FcaR(IgA)和FqiR(IgM)。因此，经修饰的Fc结构域可具有针对Fc受体的改变的亲和性，包括但不限于增加的或降^f氐的亲和性，或者没有亲和性。例如，不同的IgG亚类针对FcYR具有不同的亲和性，其中，典型地，IgGl和IgGS与受体的结合要比IgG2和IgG4好得多。此外，不同的FcyR介导不同的效应器功能，FcyR1、FcYRIIa/c和FcYRIIIa是免疫复合物触发的活化的正调节物，其特征在于，具有下述细胞内结构域，该结构域具有免疫受体基于酪氨酸的活化基序(ITAM)。但是FcYRIIb具有免疫受体基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)，并且因此是抑制性的.因此，改变Fc区域针对受体的亲和性可调节Fc结构域裔导的效应器功能。在一个实例中，使用为了与某些FcyR的最优结合而被修饰的Fc区域，以更好地介导效应器功能，例如，ADCC。此类经修饰的Fc区域可含有对应于SEQIDNO:297中所示示例性Fc序列的G20S、G20A、S23D、S23E、S23N、S23Q、S23T、K30H、K30Y、D33Y、R39Y、E42Y、T44H、V48I、S51E、H52D、E56Y、E56I、E56H、K5犯、G65D、E67L、E67H、S82A、S82D、S88T、S108G、S108I、K110T、K110E、K110D、A111D、A114Y、A114L、A114I、U16D、1116E、1116N、1116Q、E117Y、E117A、K118T、K118F、K118A和P180L中的任何一种或多种的修饰，或其组合。含有这些突变的经修饰Fc可具有增强的与FcR的结合，例如，活化受体FcYlIIa，和/或可具有降低的与抑制性受体FqRIIb的结合(见，例如，US2006/0024298)。经修饰已增强了与FcR的结合的Fc区域，在协助对患者癌细胞的破坏中可更为有效，甚至当与同种型多肽相连时仍是如此。抗体破坏肿瘤细胞的可能机制有很多种，包括，通过阻断必要的生长途径来抗增殖、导致凋亡的细胞内信号传导、增强的受体下调和/或周转、ADCC以及通过促进适应性免疫应答来实现。在另一实例中，还已知多种Fc突变体，它们具有取代，以使与FcyR的结合降低或消失,此类突变蛋白可用于需务使Fc介导的效应器功能降低或消失的情况下。这通常是这样的情况，其中需要拮抗而非杀死携有把抗原的细胞。此类Fc的实例是美国专利号No.5，457，035描述的Fc突变蛋白。示例性的Fc突变蛋白示于SEQIDNO:299中。在还一实例中，可利用其与FcRn的结合被修饰的Fc区域，由此改进Fc嵌合多肽的药代动力学。FcRn是新生儿的FcR，其结合使得^J^的抗体从内体循环回血流中。该过程与大尺寸的全长分子导致的对肾过滤的妨碍偶联,使得产生范围从1至3周的有利的抗朱血清半寿期。Fc与FcRn的结合还在抗体运送中发挥作用。典型地，多肽多聚体是通过将两个相同或不同同种型多肽与Fc多肽直接或间接相连产生的两个嵌合蛋白的二聚体。在一些实例中，编码HGF同种型-Fc嵌合蛋白的基因融合被插入合适的表达栽体中。得到的Fc嵌合蛋白可在经重组表达栽体转化过的宿主细胞中表达，并且被允许装配得很像抗体分子，其中，Fc部分间形成链间二硫键，以产生二价多肽。典型地，宿主细胞和表达系统是哺乳动物表达系统，以允许糖基化，^定Fc蛋白质。当在该位置的糖基化无须考虑时，还可使用其它宿主细胞。可以通过在A蛋白或G蛋白柱上的亲和层析，来容易地纯化出得到的含有Fc部分的嵌合多肽以及从其形成的多聚体。当将编码不同嵌合多肽的两条核酸分子转化进细胞时，应当是通过生物化学方式形成异源二聚体，因为携带有Fc结构域的嵌合分子也能作为通过二^lt相连的同源二聚体表达。因此，在偏好打断链间二疏鍵，而不影响链内二硫鍵的条件下，降低同源二聚体。典型地，具有不同细胞外部分的嵌合单体以等摩尔的量被混合，并被氧化以形成同源二聚体和异源二聚体的混合物'通过层析技术将该混合物的组分分离开。可选地，可通过遗传工程改造和表达含有同种型多肽接着是hlgG的Fc结构域再接着是c-jim或c-fos亮氨酸拉链(见下文)的融合分子，来偏向于这种类型的异源二聚体的形成。因为亮氨酸拉链主要形成异源二聚体，它们可被用来在想要的时候驱动异源二聚体的形成。还可对含有Fc区域的嵌合多肽进行工程改造，以包括进具有金属螯合物或其它^^位的标签。加上标签的结构域可用于通过金属螯合层析和/或通过抗体(允许进行western印迹检测，免疫沉淀，或生物测定中的活性排除/阻断)来进行快速纯化。(ii)突起-t-腔(即，隆突和洞)可对多聚体进行工程改造，使其含有第一嵌合多肽和笫二嵌合多肽之间的界面，以协助异源寡聚化优先于同源寡聚化。典型地，第一和第二嵌合多肽之一或两者的多聚化结构域是经修饰的抗体片段，使得抗体分子的界面被修饰，以协助和/或促进异源二聚化。在一些情况下，抗体分子是经修饰的Fc区域。因此，修饰包括向第一Fc多肽中引入突起以及向第二Fc多肽中引入腔，从而使得突起能定位于腔中，以促进第一和笫二含Fc嵌合多肽的复合，典型地，第一嵌合多肽和笫二嵌合多肽之间的稳定相互作用是通it^目同或不同的下述多聚化结构域之间的界面相互作用来实现的，所述多聚化结构域含有免疫球蛋白恒定结构域的CH3结构域的足够部分，多項结构和功能数据表明，抗体重链的关^bi由CH3结构域指导的。例如，X射线晶体学证实，Fc区域中的人IgGl重链之间的分子间关联包括CH3结构域间广泛的蛋白质/蛋白质相互作用，而糖基化的CH2结构域通过它们的糖类发生相互作用(Deisenhofer等人(1981)Biochem.20:2361)。此外，存在两个重链间二^，其是抗体在哺乳动物细胞中表达期间有效形成的，除非重链被截短移除了CH2和CH3结构域(King等人(1992)Biochem.J.281:317)。因此，重链装配看起来能促进二硫鍵的形成，而非反过来。对CH3结构域的界面的工程^it促进了不同重链异源多聚体的形成，并且妨碍了相应同源多聚体的装配(见，例如，美国专利号No.5，731，168;国际专利申请WO98/50431和WO2005/063816;Ridgway等人(1996)尸rote/"￡>igf>im*/"g，9:617-621)。因此，本发明孩:供的多聚体可在第一和笫二嵌合同种型多肽(第一和第二多肽可以是相同的或不同的)的界面之间形成，其中，第一多肽的多聚化结构域至少含有已经被修饰以含有突起的、Fc结构域的CH3界面的足够的部分，笫二多肽的多聚化结构域至少含有已经被修饰以含有腔的、Fc结构域的CH3界面的足够的部分。经修饰的CH3界面的全部或足够的部分可来自IgG、IgA、IgD、IgE或IgM免疫球蛋白.在多种免疫球蛋白分子的CH3结构域中的靶向于修饰的界面残基示于美国专利号No.5,731,168中。通常，多聚化结构域是源自IgG抗体，例如IgGl抗体的CH3结构域的全部或足够的部分。典型地，多肽中针对替换和/或修饰以产生M或腔而靶向的IUI^A与第二多歉齐面中一个或多个^J^酸相互作用或接触的界面氨基酸。经修饰以含有突起氨基酸的第一多肽包括用这样的#*酸替换天然或原始氨基酸，所述M酸具有至少一种下述侧链，所述側链能突起于第一多肽的界面上，由此可定位于第二多肽的相邻界面的#^性腔中。更通常地，替换M^I:具有比原始氨基酸残基更大的側链体积的4^酸。本领域技术人员能测定和/或评估M酸^l&的性质，以鉴定出理想的替换M酸，以制造出突起。通常，用于形成突起的替换残基是天然存在的氣基酸残基，包括，例如，精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)或色氨酸(W)。在一些实例中，鉴定出的用于替换的原始残基是具有小侧链的氨基酸残基，例如，丙氨酸、天冬耽胺、天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氦酸或缬氦酸。被修饰以《^有腔的第二多肽是包括下述用这样的4y^酸替换天然或原始的氛基酸的多肽，所述M酸具有至少一种下述側链，所述側链凹陷于第二多肽的界面上，由此能够容纳来自第一多肽界面的对应的突起。通常，替换^J^^A具有比原始氨基酸泉基更小的側链体积的氨基酸。本领域技术人员能测定和/或评估Jl&酸残基的性质，以鉴定出对于腔的形成而言理想的替换残基。通常，用于腔的形成的替换残基是天然存在的氨基酸，包括，例如，丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)和缬氨酸(V)。在一些实例中，鉴定出的用于替换的原始^^^A具有大側链的氨基酸，例如，酪氨酸、精氛酸、苯丙氨酸或色氨酸。例如，人IgGl的CH3界面涉及位于四条反平行的P-链上的每个结构域上的16个残基，其埋入每个界面10卯AZ(见，例如，Deisenhofer等人(1981)jB/oc/^附&外，20:2361-2370;Miller等人，(1990)/Mo/.jBio"216，965-973;Ridgway等人，(1996)尸r"￡Wg/".，9:617-621;美国专利5，731,168)。对CH3结构域进行的用于制造突起或腔的料被描述于，例如，美国专利5，731，168;国际专利申请WO98/50431和WO2005/063816以及Ridgway等人，(l"6)/V"￡>igz".，9:61;621中。例如，在CB3结构域中进行的用于制造突起或腔的修饰可以是替换对应于SEQIDNO:296所示的序列中的界面M酸Q230、V231、Y232、T233、L234、V246、S247、L248、T249、C250、L251、V252、K253、G254、F255、Y256、K275、T276、T277、P278、V279、L280、D281、G285、S286、F287、F288、L289、Y290、S291、K292、L293、T294和V295的任何4U^酸。在一些实例中，典型地，对CH3结构域进行的用于制造突起或腔的修饰靶向位于两条中央反平行P-链上的残基。这#^的目的是使得产生的突起可能通过突出到周围溶剂而被容纳而非被伴侣CH3结构域中补偿性腔所容纳的风险得以最小化。此类修饰的实例包括，例如，替换对应于界面氨基酸T249、L251、P278、F288、Y290和K292的任何氨基酸。用于在CH3结构域界面中进行制造突^/腔相互作用的修饰的示例性氨基酸对包括对T249和Y2卯的修饰；以;SjitF288和T277的修饰。例如，修饰可包括T249Y和Y290T;T249W和Y290A;F288A和T277W;F288W和T277S;以及Y2卯T和T249Y。在一些实例中，可以产生多于一种界面相互作用.例如，修饰还包括，例如，用于产生突起的第一多肽中的两处或多处修饰，以及用于产生腔的第二多肽中两处或多处修饰。此类修饰的实例包括，例如，在第一多肽中的T249Y和F288A修饰以及第二多肽中的T277W和Y290T修饰；第一多肽中的T277W和F288W修饰以及第二多肽中的T277S和Y290A修饰；或者第一多肽中的F288A和Y290A修饰以及第二多肽中的T7紗W和T277S修饰。如本文所描述的其它多聚化结构域(包括任何免疫球蛋白分子或其变体的全部或部分，例如Fc结构域或其变体)一样，含有CH3突~腔修饰的Fc变体可与同种型多肽在任何位置相连，但是典型地，通过其N-或C-末端连到第一和/或第二同种型多肽的N-或C-末端上，以形成嵌合多肽。连接可以是直接的，或者可以是通过接头间接实现的。另外，嵌合多肽可以是融合蛋白，或者可以通过化学连接形成，例如通过共价或非共价相互作用形成。典型地，隆突和穴分子是通过第一同种型多肽和第二同种型多肽的共表达产生的，所述第一同种型多肽与含有CH3突起修饰的Fc变体相连，所述第二同种型多肽与含有CH3腔修饰的Fc变体相连。(b)亮氨酸拉链制备多聚体的另一方法涉及到对亮氨酸拉链结构域的使用。亮氨酸拉链是能促进其中发现有亮氨酸拉链的蛋白质多聚化的肽。典型地，亮氨酸拉链是用于指代在若干种蛋白质中作为保守结构域存在的、含有四至五个亮氨酸残基的重复七残基基序的术语。亮氨酸拉链折叠为短的、平行巻曲螺旋，其可作用于蛋白质(它们形成其中的结构域)的寡聚化。亮氛酸拉链最初被鉴定于若干种DNA结合蛋白中(见，例如，Landschulz等人(1988)^/e""240:1759)，从那以来其已被发现于多种蛋白质中。已知的亮氨酸拉链包括天然存在的J1UL其二聚化或三聚化的衍生物。含有与亮氨酸拉链肽直接或间接相连的同种型多肽的重组嵌合蛋白可在合适的宿主细胞中表达，可从培养物上清液中回收形成的多肽多聚体。亮氨酸拉链折叠为短的、平行巻曲螺旋(O'Shea等人(1991)Sde"ce，254:539)。平行巻曲螺旋的一般性构造特征在于具有"隆突-^-穴"的堆积，这由Crick在1953年首先提出(j"aO^to/togr.,6:689)'亮氨酸拉链结构域形成的二聚体被七残基重复序列所稳定，该重复序列被称为(a6afe/g)n(见，例如McLachlan和Stewart(1978)/祝o/.98:293)，其中残基"和rf通常是疏水残基，"是亮氨酸，其排列于螺旋的同一面上。位置g和e上通常存在带相反电荷的残基。因此，在从两个螺旋状的亮氨酸拉链结构域形成的平行巻曲螺旋中，通过第一螺旋的疏水側链形成的"隆突，，被紅第二螺旋的側链间形成的"穴"中。位置上的亮氨酸^贡献了大的疏水稳定能量，它们对于二聚体形成很重要(Krystek等人(1991)/幼:229)。疏水稳定能量为从螺旋单体形成巻曲螺旋提供了主要的驱动力。静电相互作用也为巻曲螺旋的化学计量学和几何学做出了贡献。(i)/仍和乂""两种核转化蛋白，/iw和y""，展现了亮氛酸拉链结构域，和鼠原癌基因产物c-附K一样。亮氦酸拉链结构^A这些蛋白质中的生物学活性(DNA结合)所必需的。核癌基因/iw和y"w的产物含有亮氨酸拉链结构域，其优先形成异源二聚体(O'Shea等人(1989)Sc!e"ce，245:646;Turner和Tijian(1989)Sde"ce，243:1689)。例如，人转录因子c-y'"/f和的亮氨酸拉链结构域已显示出可以以1:1的化学计量形成穗定的异源二聚体(见，例如，Busch和Sassone-Corsi(1990)7>e"<feCe"幼cs，6:36-40;Gentz等人，(1989)Sde"ce，243:1695-1699)。虽然也显示形成了jun-jun同源二聚体，但是比jun-fos异源二聚体不稳定1000倍。因此，典型地，使用jim-fos组合来产生本发明提供的同种型多肽多聚体。通常，c-jun或c-fos的亮氨酸拉链结构域通过经遗传工程改造的融合基因符合读框地融合于多肽同种型C-末端。c-jun或c-fos亮氨酸拉链结构域的示例性序列分别如SEQIDNO:300和301所示，在一些情况下，可以对亮氨酸拉链的序列进行修饰，例如，通过加入半胱氨酸残基来进行，以允许二硫鍵形成，或者，通过在C-末端加入酪氨酸残基来进行，以协助对肽浓度加以测量。经修饰的c-jun或c-fos亮氛酸拉链结构域的示例性序列分别如SEQIDNO:302和303所示。此外，同种型多肽与亮氨酸拉链的连接可以是直接的，或者可使用柔性接头结构域(例如，IgG的铰链区)或多种长度和组合的其它小氨基酸(例如，甘氦酸、丝氨酸、苏氡酸或丙氨酸)多肽接头来实现。在一些情况下，可通过与编码蛋白酶切割位点(例如，凝血酶切割位点)的序列融合，将亮氨酸拉^被编码多肽的C-末端分离开。此外，可对嵌合蛋白加上标签，例如，加上6XHis标签，以允许通过金属螯合层析来进行快速纯化，或者，加上其抗体是可获得的表位，例如myc标签，以允许在western印迹、免疫沉淀或活性排除/阻断生物测定上进行检测。(ii)GCN4亮氨酸拉链结构域还存在于核蛋白中，所述核蛋白作为基因家族的转录活化因子发挥作用，所述基因参与酿酒酵母中氮代谢的一般性调控(GCN4)。GCN4亮氨酸拉链结构城的示例性序列示于SEQIDNO:304。该蛋白质能二聚化，并且能结合含有GCN4识别序列的启动子序列，由此在氮损失时对转录进行活化。呈现GCN4亮氨酸拉链结构域的合成肽中，a和d残基上的#*酸取代改变了亮氨酸拉链结构域的寡聚化性质。例如，当a位置上的所有^UMfF被变为异亮氨酸时，亮氛酸拉链仍形成平行二聚体。除了这种变化之外，当d位置上的所有亮氨酸^U^也变为异亮氨酸时，得到的肽将自发形成不断变化的三聚平行巻曲螺旋。GCN4亮氨酸拉链结构域的三聚体和四聚体形式的示例性序列分别示于SEQIDNO:305和306中。(c)其它多聚化结构域其它多聚化结构*1本领域技术人员已知的，是能协助分别产生和表达的两条或多条多肽的蛋白质-蛋白质相互作用的^r结构域。能用于提供多肽间或多肽之间蛋白质-蛋白质相互作用的其它多聚化结构域的实例包括但不限于，芽抵fr菌RNA酶-芽孢杆菌RNA酶抑制剂模块(见，例如，Deyev等人，(2003)W"5f》tecA朋/:21:1486-1492);对特定蛋白质结构域的选择(见，例如，Terskikh等人，(1997)/W^y94:1663-1668和Muller等人，(1998)Ffi^y丄e汰422:259-264);对特定ilL^序的选择(见，例如，deKruif等人，(1996)/祝o/.271:7630-7634和Muller等人，(1998)丄M.432:45-49);以及使用二硫键来增强穗定性(deKmif等人，(1996)/.5/。/:CAe肌271:7630-7634和Schmiedl等人，(2000)iVote/"13:725-734)。另外一种多聚化结构域类型的实例是这样的，其中，不同亚基多肽间的蛋白质-蛋白质相互作用协助了多聚化，例如，下文针对PKA/AKAP相互作用所描述的那样。(i)R/PKA-AD/AKAP还可利用cAMP依赖性蛋白激酶(PKA)的调控亚基(R)(见，例如SEQIDNO:307或SEQIDNO:309)和A激iNil蛋白(AKAP,见，例如，Rossi等人，(2006)103:6841-6846)的锚定结构城(AD)(见，例如，SEQIDNO:308或SEQIDNO:310)之间的蛋白质-蛋白质相互作用来产生多聚体多肽。在PKA中发现了两种类型的R亚基(RI和RII)，每种具有a和p同种型。R亚基作为二聚体存在，对RII而言，二聚化结构域存在于44个4y^末端残基中。AKAP通过其AD结构域的相互作用，与PKA的R亚勤目互作用，以调节其活性。AKAP仅与二聚化的R亚基结合。例如，对于人RIIa而言，AD与从23个M酸末端残基形成的疏水表面结合。d.产生和克隆HGF融合昧的方法可用来获得DNA序列并将其相连以提供编码融合蛋白的DNA序列的方法是重组DNA
技术领域：
^^p的。可通过多种方法来产生将与HGF同种型融合的序列的DNA，包括HGF同种型的序列、前体信号序列、融合标签、另一同种型或其内含子编码部分或者任何其它想要的序列，所述方法包括使用寡核苷酸合成仪进行合成；通过合适的限制性酶消化，从靶DNA，例如从含有该序列的生物、细胞或栽体进行分离；或者其可使用合适的引物通it^基因组DNA进行PCR从乾来源获得。在PCR方法中，针对粑序列(例如HGF同种型序列)的引物可被工程改造，以含有小表位标签(例如myc标签、His标签或者其它小表位标签)的序列和/或任何其它另外的DNA序列，例如，限制性酶接头序列或蛋白酶切割位点序列，使得整条PCR序列得以在PCR扩增中并入M酸序列。在示例性的实施方案中，引物可向HGF同种型序列或其它把序列中引入限制性酶位点，以协助将序列克隆进栽体。在一个实例中，可通过连续轮下述操作来产生HGF同种型融合序列，所述操作是将通过PCR扩增的DNA把序列在经工程改造的重组位点连接进栽体。例如，可使用能与反向链杂交，并且側翼为靶DNA中目标区域的引物，PCR来扩增HGF同种型、融合标签、同源或异源前体序列的核酸序列，或者其它想要的核酸序列，已知能表达乾DNA分子的细胞或组织或其它来源，或含有针对靶DNA分子的序列的栽体，可用作为PCR扩增亊件的起始产物.PCR扩增得到的产物可被亚克隆进栽体，以对序列进行进一步的重组操作，例如，制造与栽体中已经含有的另一核酸序列的融合，或者用于表达把分子。用于PCR扩增中的PCR引物还可被工程改造，以协助对核酸序列的有效连接。例如，可将非^K板互补性5，延伸加到引物上，以允许对PCR产物进行多种扩增后操作，而不会对扩增本身造成显著影响。例如，这些5，延伸可包括限制性位点、启动子序列、表位标签的序列等。在一个实例中，为制造融合序列的目的而言，可被并入引物的序列包括，例如，编码myc表位标签或其它小表位标签的序列，使得，扩增得到的PCR产物有效含有目标核酸序列与表位标签的融合。在另一实例中，将限制性酶位点并入引物可协助将扩增产物亚克隆进含有相符合的限制性位点的栽体中，例如，通过提供用于连接核酸序列的粘末端来实现。将多种PCR扩增得到的产物亚克隆进单一栽体可用作为将不同核酸序列有效连接或融合的策略。可并入引物序列的限制性酶位点的实例可包括但不限于，Xhol限制性位点、Nhel限制性位点、Notl限制性位点、EcoRI限制性位点或XbaI限制性位点。用于将PCR产物亚克隆进栽体的其它方法包括平端克隆、TA克隆、不依赖于连接的克隆以及体内克隆。在引物中制造有效的限制性酶位点能协助用相符合的限制性酶对PCR片段的消化，以使得粘末端暴露出来，或者对于一些限制性酶位点而言，使得平端暴露出来，以用于随后的亚克隆。在将限制性酶位点工程改造进引物的过程中要考虑到若千因素，使得其保留有针对限制性酶的相容性。首先，在PCR引物中工程改造的限制性位点上游添加2-6个另外的碱基，可显著增加对扩增产物进行消化的效率。可用于提高限制性醉对限制性酶位点的消化的其它方法包括蛋白酶K处理，以除去任何热稳定的可阻断DNA的聚合酶、用Klenow或T4DNA聚合酶的补平末端和/或加上亚精胺。用于提高对PCR产物的消化效率的一种^^选方法还包括在扩增之后对片段进行连环化(concatamerization)。这通过首先用T4多核苷酸激酶处理纯化过的PCR产物来实现(如果引物还没有被礴酸化的话)。如果使用了校正性热稳定聚合酶(例如/>/")，那么末端可能已经是平的了，或者，如果使用了非校正性酶，例如r叫，可用T4DNA聚合酶来处理扩增得到的PCR产物，以将末端补平，PCR产物可用T4DNA连接酶连接。这能有效地将限制性酶位点从片段末端移开，并且允许高效消化。在将含有暴露的限制性酶位点的PCR产物亚克隆进栽体(例如，用于制造与目标序列的融合)之前，有些时候必须将已被消化的PCR产物与保持未被切割的那些拆分开。在此类实例中，可在PCR之前向引物5，末端添加荧光标签。这允许对经消化产物加以鉴定，因为已被成功消化的那些将在消化过程中丢失荧光标记。在一些情况下，4吏用含有限制性位点的经扩增PCR产物用于进一步的亚克隆进栽体，以产生融合序列，可导致将限制性酶接头序列并入融合蛋白产物。通常，此类接头序列较短，并且只要序列是有效连接的话，就不会损害多肽的功能。编码同种型融合蛋白的核酸分子可作为包含核酸分子的栽体的形式提供。此类栽体的一个实例是质粒。对于本领域技术人员来说，已知并且可获得很多表达栽体，这些栽体可用于表达HGF同种型，包括同种型融合。对表达载体的逸择可受到对宿主表达系统选择的影响。通常，表达载体可包括转录启动子，以及任选地，增强子、翻i^信号和转录及翻译终止信号。典型地，用于穗定转化的表达栽体具有可选择标志，这允许对经转化细胞加以选#^保持。在一些情况下，复制起点可用于扩增栽体的拷贝数。2.把向剂/把向剂級合物还可提供作为同种型和另一物质间的级合物的HGF多肽同种型。缀合物可用于靶向同种型相互作用的受体和/或靶向用于递送同种型的另一被把向受体。此类缀合物包括HGF同种型与被把向剂和/或把向剂的连接。可通过^r合适的方法来产生缀合物，包括，通it^达下述融合蛋白来实现，所述融合蛋白中，例如，编码被粑向剂或把向剂的DNA在有或没有接头区域的情况下与编码HGF同种型的DNA有效顺目连。还可通过化学偶联HGF同种型多肽来生产蛋白质級合物，典型地，通过组分中存在或向其中添加的半胱氨酸a^之间的二硫键来偶联，或者通过醜胺键或其它合适的键来偶联，例如，使用异双功能交联试剂，例如，本文提供的或本领域已知的那些来实现。离子连接或其它连接也包括在内。缀合物可含有与一种或多种被乾向剂直接或通过接头相连的一种或多种HGF同种型(HGF同种型)n、(L)q和(被乾向剂)m，其中，至少一种HGF同种型与至少一种被乾向剂直接相连，或通过一个或多个接头(L)相连。还可用HGF同种型的足以与靶(例如，用于治疗的靶细胞类型)结合的任何部分来生产此类缀合物。級合物元件间的任何合适联结，以及元件的任何数量(其中，n和m是大于1的整数，q是0或者任何大于1的整数)都包括在本发明内，只要得到的缀合物能与被把向的细M面受体(例如MET)或被把向的细胞类型相互作用即可。被靶向剂的实例包括，药物和其它细胞毒性分子，例如，在细胞表面或通过细M面发挥作用的毒素，以及在细胞内发挥作用的那些。此类部分的实例包括it射性核素、it射活性原子(其衰减，以递送离子化的a粒子或P粒子)，或X射线或Y射线，当与HGF同种型偶联时它们可被靶向。其它实例包括可通过与同种型偶联被乾向的化疗物。例如，格尔德霉素能靶向蛋白体。同种型-格尔德霉素分子可被指导进细胞内蛋白体，从而降解被乾向的同种型，并且在蛋白体释放出格尔德霉素。其它毒性分子包括毒素，例如，蓖麻毒蛋白、鞘脂激活蛋白和来自贝壳或软体动物门其它成员的天然产物。与被乾向剂的缀合物的另一实例是与抗体或抗体片段偶联的HGF同种型，例如，作为蛋白融合偶联的。例如，同种型可偶联到抗体的Fc片段(其能在嗜中性粒细胞、天然杀伤细胞和巨噬细胞中与特定细胞表面标志结合，以诱导出杀伤T细胞的活性)上。多种毒素是本领域技术人员公知的。缀合物还可含有与一种或多种靶向剂直接或通过接头相连的一种或多种HGF同种型(HGF同种型)n、(L)q和(把向剂)m，其中，至少一种HGF同种型与至少一种靶向剂直接相连，或通过一种或多种接头(L)相连。缀合物元件间的任何合适联结，以及元件的任何数量(其中，n和m是大于1的整数，q是0或者*何大于1的整数)都包括在本发明内，只要得到的缀合物能与靶(例如被把向的细胞类型)相互作用即可。靶向剂包括能将HGF同种型把向到把(例如特定的组织或细胞类型或器官)上的任何分子。靶向剂的实例包括细Jf^面上或细胞膜内的细胞表面抗原、细胞表面受体、蛋白质、脂类和糖类部分，细胞表面上加工的或分泌的分子，以及其它细胞外分子。可用作为靶向剂的分子包括但不限于有机化合物；无机化合物；金属复合物；受体；酶；抗体；蛋白质；核酸；肽核酸；DNA;RNA;多核苷酸；寡核苷酸；絲；脂类；脂蛋白；氨基酸；肽；多肽；拟狀物；糖类；辅因子；药物；前药；凝集素；糖；糖蛋白；生物分子；大分子；生物聚合物；聚合物；以及其它此类生物材料。可用作为靶向剂的示例性分子包括针对受体的配体，例如，蛋白质配体和小分子配体，以及抗体和结合蛋白，例如，抗原结合蛋白。可选地，与特定一种或多种受体或其它分子发生特异性相互作用的HGF同种型是把向剂，其与^JL把向剂(例如毒素、药物或核酸分子)相连。核酸分子可在被把向的细胞中转录和/或翻译，或者其可以是调控性的核酸分子。HGF同种型可与被乾向剂(或靶向剂)直接相连，或通过接头相连。接头包括肽接头和非肽接头，并且可以针对功能性对其加以选择，例如以减轻或减少被把向剂或靶向剂与HGF同种型之间接近导致的空间位阻，和/或增加或改变缀合物的其它性质，例如特异性、毒性、溶解度、血清稳定性和/或细胞内可获得性，和/或增加HGF同种型和被粑向剂或乾向剂之间键的柔性。连接还可以通过化学交联实现，例如，通过4吏用本文所述的异双功能交联剂。接头和缀合方法的实例是本领域已知的(见，例如，WO00/04926)。还可使用脂质体和能指导被包埋或嵌入的分子递送的其它此类部分，来靶向HGF同种型。3.拟肽同种型本发明还提供了"拟肽"同种型，其中，肽骨架中的一个或多个鍵(或其它一个或多个鍵)被生物等构物或其它鍵替换，导致得到的多肽拟肽物较之未经修饰的形式而言具有改进的性质，例如，对蛋白酶的抗性。H.改变血清半寿期以及其它治疗性质的方法
技术领域：
：本发明41供了增加多仗血清半寿期、稳定性、溶解度和/或降低多狀免疫原性的方法。增加蛋白质的糖类含量可影响到这些性质。用于增加糖类含量的方法包括向把蛋白中引入一个或多个用于糖基化的共有位点。还可通过改变乾蛋白中已有糖基化位点的模式或间隔，来增加糖类含量。可通过M酸取代，或通#入含有用于糖基化的共有位点的多肽序列，来引入共有糖基化位点或改变共有糖基化位点。含有用于糖基化的共有位点的多肽序列可与把蛋白的M末端或g末端融合，或者可选地，其可被工程改造，以存在于耙蛋白中，由此增加其糖类含量。本发明提供了增加多^b瞎类含量的方法以及具有增加的糖类含量的多肽产物。特别地，提供了含有CD45蛋白质全部或部分的融合蛋白。选用CD45的包括一个或多个，通常是两个、三个、四个或更多个糖基化位点的部分。将该部分融合到蛋白质上，这是在N-末端、C-末端或内部。选用用于插入的位点，使得蛋白保留活性(特别地，治疗活性)。CD45片段的插入应当1^不改变此类活性，其被选用为使得活性保留了至少1%、2%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多。保留的活性的特定的量取决于其糖类含量被增加的蛋白质，以^A们想要的用途。如果必要的话，可经验确定该量。一些蛋白质，例如蛋白酶，具有相当高的活性，从而仅仅1%的活性仍足以实现很多目的。而对于其它一些蛋白质而言，为了不危及其目的，可能仅能承受10%的活性损失。对于大部分(如果不是全部的话)治疗性蛋白质和其它活性蛋白质而言，用于评估活性的测定是可获得的，或可被开发出来的。1.N-连接的和O-连接的糖基化可以以能增加糖基化的任何方式对蛋白质加以修饰。例如，可通过添加N-连接的或O-连接的糖基化位点来对它们进行修饰。通过向把蛋白的Ser或Thr残基的羟基加上单糖(例如N-乙酰半乳糖胺(GalNac))来发生O-连接的糖基化。在胶原中，向羟赖氨酸的羟基添加半乳糖。糖基转移酶随后使另外的糖类部分附着到经修饰的残基上，以形成成熟的O-聚糖。典型地，O-连接的IMt含有1至4个糖残基。O-连接的糖基化发生于蛋白质二级结构定义的位点上，例如，延伸的p转角。通过向共有基序，Asn-X-Ser/Thr(其中X是除了Pro之外的任何氨基酸)中的Asn残基的酰胺氮上添加14个残基的^MI——N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)，来发生N-连接的糖基化。糖基转移酶随后改变附着的S^t，以形成成熟的N-聚糖。N-连接的S^含有甘露糖、N-乙酰葡糖胺，典型地，具有糖类的很多侧支，每条都以带负电的唾液酸残基终止。蛋白质的二级结构可影响到作为糖基化的把的共有位点的可获得性。糖基化反应在分泌途径涉及的细胞器(包括内质网(ER)和顺面、中间;5L良面高尔基体潴泡)内腔中发生。信号序列可将初生多肽靶向到ER上。信号序列可存在于野生型蛋白质中，或可通过重组DNA技术(通过将编码信号肽的核苷酸序列与编码乾蛋白的核苷酸序列融合)对其进行工程线。2.糖基化的影响糖基化可通过增加稳定性和溶解度来增加多肽的血清半寿期，以及能降低蛋白质的免疫原性。糖基化可通过降低对蛋白质的蛋白水解来增加蛋白质的稳定性。糖基化可保护蛋白质免于热降解、向变性剂的暴露、被氧自由基损坏以及pH的变化。糖基化还允许把蛋白逃避清除机制，所a制参与与其它蛋白质(包括细J!ML面受体)的结合。含有唾液酸的糖类部分可影响蛋白质的溶解度。唾液酸部分是高度亲水的，其可挡住把蛋白的疏水残基。这减少了把蛋白的聚集和沉淀。减少的聚集还有助于防止针对靶蛋白的免疫应答。糖类可进一步防护免疫原性序列免于遭受免疫系统。糖类部分占据的空间体积可减少免疫系统可影响到的表面积。这些性质导致靶蛋白的免疫原性降低。3.针对糖基化的治疗用途增加蛋白质的半寿期可提高它们用作为治疗剂的潜力。身体对治疗性蛋白质的快速清除将减少治疗效力，以及增加患者所需的注射数量。通过例如增强治疗性蛋白质的糖基化等方法来增加血清半寿期，可改善对于频繁注射的需求。糖基化的其它作用，例如，乾蛋白的溶解度以及降低的免疫原性，对于治疗性蛋白质来说也是人们希望看到的特征。增加的溶解度可增加用于递送治疗性蛋白质的合适组合物的选项，以及可增强治疗性蛋白质iiX体内后到达把組织的能力。减少蛋白质的免疫原性可减少可能不利的免疫反应。可被工程^Ut以增加其糖基化的治疗性蛋白质的实例包括但不限于，生长因子、抗体、细胞因子(例如肿瘤坏死因子和白细胞介素)以及细胞毒性剂和本文公开以及本领域技术人员已知的其它物质。此类物质包括但不限于，肿瘤坏死因子、a-干扰素、p-干扰素、神经生长因子、血小板衍生的生长因子、组织纤溶酶原活化物；或者生物应答修饰物，例如，淋巴因子、白细胞介素-I(IL-1)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、促红细胞生成素(EPO)、前凝血剂(例如组织因子和组织因子变体)、凋亡前剂(pro-apoptoticagent)(例如FAS-配体)、成纤维细胞生长因子(FGF)、神经生长因子和其它生长因子。4.CD45用于改变血清半寿期的用途CD必是跨膜蛋白酪氨酸磷酸酶，其含有高度糖基化的细胞外结构域、单个跨膜结构域以及含有两个连续双重(tandemlyduplicated)磷酸酶结构域的细胞内结构域。可工程tit把蛋白与CD45细胞外结构域或其片段的融合，以改变，特别是增加，把蛋白的血清半寿期，这通过增加重组蛋白的总糖类含量来实现。本发明4^供了使用CD45细胞外结构域或其片段来生产CD45融合蛋白的方法。示例性的全长CD45多絲本发明中被提供为SEQIDNO:272，其由SEQIDNO:271所示的核酸序列编码。CD45的等位变体可含有较之SEQIDNO:271而言的一处或多处核苷酸变化，或者较之SEQIDNO:272而言的一处或多处氨基酸变化。等位变化可发生于CD45基因的任何一条或多条外显子或内含子序列中。编码CD45蛋白质的核酸和被编码的CD45多肽可包括CD45的等位变体。示例性的CD45等位变体可包括如SEQIDNO:273所示的任何一处或多处核苷酸变化，或如SEQIDNO:274所示的任何一处或多处氨基酸变化。此外，当添加了CD45以增加糖类含量时，可引入确实能影响糖基化位点和/或添加另外的糖基化位点的变化和修饰。因此可以利用本文公开的CD45多肽的变体和本领域技术人员知道的那些。此类变体可与本文公开的CD45多肽或其等位变体和物种变体具有40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%的同一性。a.CD45功能CD45在itifc来源的所有具核细胞上表达，其在淋巴细胞受体活化和发育中具有功能。CD45的细胞内磷酸酶结构域能调节Src家族蛋白质酪氨酸激酶(例如Lck和Fyn)的活性，这通过除去肽活化环上的抑制性磷酸来实现，所述磷酸通过阻断底物结合来抑制激酶活性，对这些激酶的活化有助于T细胞活化、T细胞发育以及经由B细胞受体(BCR)活化的Bb.CD45二聚化和糖基化可通过受体的二聚化来控制CD45的活性。细胞外区域的二聚化可导致细胞内磷酸酶活性的失活。抑制通过一个CD45蛋白质的抑制性结构与另一CD45蛋白质的鳞酸酶结构域发生相互作用来实现，CD45二聚体代表受体的失活形式，而CD45的单体形式则^了受体活性状态或"全盛"状态，其中，活性砩酸酶准备着应答于淋巴细胞活化。受体二聚化的差异可通过CD45细胞外区域糖类含量的变化来实现。增加的糖基化可导致CD45单体形式的增加，进而导致增加的磷酸酶活性。细胞外区域的糖基化还能促进凝集素(例如CD22和半乳凝素-l)与细if^面的结合，虽然这些蛋白质通常与T-细胞糖蛋白结合，看起来并不会参与经由CD45砩酸酶结构域进行的信号传导。可通过对编码受体糖基化结构域的外显子进行选择性剪接，来获得CD45糖基化的变化。外显子4、5和6(即，分别是A、B和C结构域)编码靠近蛋白质N-末端的多肽区域，该区域被多变的唾液酸修饰高度O-糖基化。对4、5和6外显子的选择性剪接产生了不同的CD45同种型。同种型的细胞外区域在大小、形状和电荷上都有很大不同，这是由于糖类含量的差异导致的。缺少全部三个结构域的CD45同种型RO大约180kDa大，而包括A、B和C结构域的CD45同种型RABC则为大约220-240kDa。CD45的RO和RABC同种型表达有差别，这取决于细胞类型、发育阶段和细胞活化状态。例如，被活化的T细胞在刺激的第一天表达高水平的RABC同种型，然后随着活化的减少逐渐转向表达RO同种型。再举一例，被启动活化的幼稚T细胞表达高水平的RABC同种型，而具有较低酪氨酸激酶活化的记忆T细胞则表达RO同种型。其它经选择性剪接的CD45变体编码包括A、B和C结构域的不同组合的同种型。例如，210kDa的同种型含有A和B或B和C结构域，200kDa的同种型则含有B结构域。细胞外结构域的剩余部分也是高度糖基化的。该区域含有富含半胱氨酸的结构域(dl)，接着是三个纤连蛋白III型重复结构域(d2、d3和d4)。该区域的糖基化主要是N-连接的糖基化，N-连接的缀合物是四分支和三分支复合物型的糖类链，其含有聚(N-乙酰基乳糖胺)基团和a-2，6-唾液酸残基。这些结构域的N-连接的糖基化有助于B细胞的CD22、血清甘露^结合蛋白和内质网中发现的葡糖苷酶II凝集素的结合,这些蛋白质与CD45的结合可分别有助于细胞粘附、淋巴细胞成熟和对糖类含量的改变。表5:CD45细胞外区域-结构域和可能的糖基化位点<table>tableseeoriginaldocumentpage136</column></row><table>c.CD45融合蛋白CD45融合蛋白舍有多肽和CD45蛋白质片^8l其片段的组合。CD45片段源自CD45的细胞外区域，如上表5所总览以及SEQIDNO:281、283、285、287、289、291、293、295及其变体示出的。本发明提供了这样的CD45融合蛋白，其含有细JJ&^面受体(CSR)同种型和源自CD45细胞外区域的CD45蛋白质片^其片段组合。在另一实施方案中，CD"融合蛋白^^有CSR同种型和含有一个或多个糖基化位点的CD45蛋白质片段或其片^J且合。示例性的CD45蛋白质片段包括但不限于，SEQIDNO:281、283、285、287、289、291、293、295示出的线其变体，包括等位变体和物种变体，以及与这些CD45蛋白质具有至少或至少大约50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更高序列同一性的任何变体。示例性的CD45蛋白质片段由下述核酸分子编码，所述分子含有SEQIDNO:280、282、284、286、288、290、292、294所示的核苷酸序列及其变体(包括等位变体和物种变体)。示例性的CSR同种型包括但不限于，编码SEQIDNO:36-245所示的多肽的核酸分子和肽，以及其变体。在另一实施方案中，编码CD45融合蛋白的核酸分子含有CSR同种型和CD45蛋白质或其片段，它们被提供于本发明中。SEQIDNO:281、283、285、287、289、291、293和295所示的財列和SEQIDNO:280、282、284、286、288、2卯、292和294所示的核酸序列的变^Mt提供，分别如SEQIDNO:273和274所示。本发明提供了含有配体同种型和CD45蛋白质或其片段的CD45融合蛋白。本发明提供了含有配体同种型和源自CD45细胞外区域的CD45蛋白质片段或其片段组合的CD45融合蛋白。在另一实施方案中，CD45融合蛋白含有配体同种型和含有一个或多个推测的糖基化位点的CD45蛋白质片段或其片段的组合。示例性的蛋白质片段包括但不限于SEQIDNO:281、283、285、287、289、291、293、295中所示的肽及其变体。示例性的CD45蛋白质片段由SEQIDNO:280、282、284、286、288、2卯、292、294中示出的核酸及其变体编码。示例性的配体同种型包括但不限于编码SEQIDNO:10-14、18、20所示多肽的核酸分子和肽，及其变体。在另一实施方案中，编码CD45融合蛋白的核酸分子含有配体同种型和CD45蛋白质或其片段，它们被提供于本发明中。CD45融合蛋白可含有SEQIDNO:280-295所示的JIUL其变体的整条CD45蛋白质片段或部分的组合。CD45的等位变体还包括物种变体。CD45除了存在人中之外还存在于多种物种中，例如但不限于，其它哺乳动物、鸟、鱼、爬行动物、两栖动物和昆虫。CD45物种变体的示例性序列包括但不限于，示于SEQIDNO:275-279的黑猩猩、小鼠、大鼠、狗和鸡。在其它一些实施方案中，CD45融合蛋白含有CSR同种型的具有生物学活性和/或治疗活性的变体以及CD45蛋白质或其片段。在其它一些实施方案中，CD45融合蛋白含有配体同种型的具有生物学活性和/或治疗活性的变体以及CD45蛋白质或其片段。本发明提供了含有编码CD45-CSR同种型或CD45-配体同种型融合蛋白的核酸分子的栽体，以及含有所述栽体或核酸分子的细胞。提供的核酸分子包括含有内含子和外显子的核酸分子，其中，内含子含有终止密码子；所述核酸分子编码跨越外显子内含子连接处的可读框；并且，所述可读框终止于内含子的终止密码子处。内含子可编码被编码多肽的一个或多个氨基酸，或者所述密码子可以是内含子中的第一个密码子(并且可能是唯一一个密码子)。可与CD45或其片段融合的蛋白质同种型的非穷尽性列表包括但不限于，含有编码SEQIDNO:10-14、18、20和36-245所示的多肽的核酸和多肽的CSR同种型和配体同种型(包括其片段和变体)。d.CD45融合蛋白的徵合物可与CD45融合蛋白相连的核酸分子包括但不限于，例如，设计来协助细胞内蛋白质表达的启动子序列、设计来协助蛋白质分泌的分泌序列、用于调控转录和翻译的调控序列、调控被编码多肽(例如，免疫球蛋白的Fc部分)血清稳定性的分子，以及其它编码多肽的核酸分子，例如，编码被靶向剂或把向剂的那些，或者编码另一配体或细胞表面受体内含子融合蛋白的全部或部分的那些。融合序列可以是表达栽体的组分，或者其可以是插入表达载体的核酸序列的部分。在一种实施方案中，CD45融合蛋白可含有用于通过本领域已知技术(例如，通过western印迹、荧光显微镜检查、免疫组织化学、免疫沉淀和柱纯化)检测和/或分离融合蛋白的肽序列标签。示例性的序列标签包括但不限于，myc标签、多聚-His标签、GST标签、Flag标签、荧光或发光部分(例如GFP或荧光素酶)或者本领域技术人员已知的任何其它表位或融合标签。在另一实施方案中，CD45融合蛋白额外含有信号序列肽，其用于使得融合蛋白分泌和/或增强其分泌。示例性的信号序列肽包括但不限于，本文公开的tPA前/原信号序列(见，例如SEQIDNO:256-265)。另外的缀合物，例如耙向剂缀合、交联剂、多肽接头和与另一多肽的全部或部分的融合(如章节G所描述的)可应用于CD45融合蛋白。e.治疗性的CD45融合蛋白CD45-CSR融合蛋白和/或CD45-配体融合蛋白可用于治疗疾病，包括炎性疾病、免疫疾病、癌症和呈现出异常血管发生或新血管形成或细胞增殖的其它疾病。癌症包括乳腺癌、肺癌、结肠癌、胃癌、胰腺癌等。炎性疾病包括，例如，糖尿病视网膜病变和/或神经病以;su睹尿病的其它炎性血管并发症，自身免疫疾病，包括自身免疫型糖尿病，动脉粥样硬化，Crohn's症，糖尿病性肾病，嚢性纤维化，子宫内膜异位症，糖尿病诱导的血管损伤，炎性肠病，阿尔茨海默病和其它神经变性疾病，以及本领域技术人员已知涉及增殖性应答、免疫应答和炎性应答以及CSR牵连、涉及或参与的其它应答的其它疾病。f.测量糖^^化的方法
技术领域：
：本发明提供了用于评估糖基化程度和模式的方法。可通过本领域技术人员已知的方法来评估对氨基酸残基的修饰，这包括下述技术，例如，胰蛋白酶定位、高效液相色镨(HPLC)、阴离子交换层析、圆二色谱、荧光团标记、质谦、晶体学、凝胶电泳和对自PVDF膜的^Mt释放的酶促分析。使用一系列凝集素的western印迹可鉴定宽范围的在糖蛋白上发现的给定糖表位，所述凝集素展示出变化的特异性，并且与生物素或洋地黄毒普缀合。western印迹还可用于对CD45细胞外结构域的糖基化进行特异性测量。用于检测CD45的细胞外结构域并且能区分开CD45的糖基化变体的抗体是可获得的。g.产生和增加糖基化的方法
技术领域：
：本发明提供了用于生产CD45融合蛋白的方法。如章节F3d所述的哺乳动物表达系统可用于表达CD45融合蛋白。通常选用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞来生产糖蛋白，因为该细胞类型展示出对重组蛋白的高表达，并且能对蛋白质进行糖基化。还可获得经工程改造的人细胞系，例如，GlycoExpressTM细胞系(Glycotope),其能生产具有与内源野生型人蛋白质相似的糖基化模式的糖蛋白。对于生产治疗性蛋白质来说，经工程改造的人细胞系是优选的，因为它们具有对糖基化蛋白质进行恰当唾液酸化(sialylated)的能力，这会影响到治疗性糖蛋白的半寿期和免疫原性。h.HGF-CD45融合蛋白和治疗用途HGF同种型可与CD45或其片段融合，形成CD45-HGF融合蛋白。HGF同种型可与源自CD45细胞外结构域的CD45蛋白质片段或其片段组合融合。示例性的CD45蛋白质片段包括但不限于SEQIDNO:281、283、285、287、289、291、293、295中所示的JiUL其变体。示例性的CD45蛋白质片段由SEQIDNO:280、282、284、286、288、290、292、294中示出的核酸及其变体编码。可与CD45片段融合的示例性HGF同种型及其等位变体包括但不限于，SEQIDNO:10、12、14、18和20。可与CD45片段融合的其它HGF多肽包括但不限于，SEQIDNO:3、22、24、26、28、30、32和246-251所示的多肽。CD45-HGF融合蛋白可阻抑或者可选地增强HGF活性，例如，血管发生、细胞生长、形态发生、运动发生或肿瘤转移。CH45-HGF融合蛋白可被用于治疗、预防或改善涉及异常血管发生的疾病。CH45-HGF融合蛋白可被用于治疗血管发生相关疾病，包括但不限于，类风湿性关节炎、骨关节炎、银屑病、Osier-Webber综合征、子宫内膜异位症、斯蒂尔病、心肌血管发生、外周血管扩张、血友病性关节炎、年龄相关性黄斑变性、早产儿视网膜病、角膜移植排斥、系统性红斑狼疳、动脉粥样硬化、新生血管性青光眼、脉络膜新血管形成、晶状体后纤维组织形成、骨粗短症、神经纤维瘤、血管瘤、听神经瘤、神经纤维瘤、沙眼、化脓性肉芽肿和糖尿病相关疾病(例如糖尿病增殖性视网膜病变)和血管疾病。CH45-HGF融合蛋白可用于治疗和预防癌症的转移，癌症包括但不限于，鳞状细胞癌(例如辨状上皮细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌和肺的鱗状癌)、jgj溪癌、肝细胞癌、胃(gastric)或胃部(stomach)癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(livercancer)、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾或肾脏癌、前列腺癌、夕卜阴癌、甲状腺癌、肝脏癌(h印aticcarcinomas)、肛癌(analcarcinomas)、阴荽癌和头颈癌。I.制备和分离HGF同种型特异性抗体的方法用于制备和分离抗体(包括多克隆抗体和单克隆抗体)及来自其的片段的方法是本领域公知的.制备和分离重组抗体和合成抗体的方法也是本领域公知的。例如，可使用与候选多肽特异性结合的抗体的抗原结合位点的JL^酸和核苷酸序列信息，用固相肽合成来构建此类抗体，或者通过重组方法来生产此类抗体，还可通过筛选含有可变重链和可变轻链或其抗原结合部分的组合文库，来获得抗体。制备、分离和使用多克隆、单克隆和非天然抗体的方法综述见，例如，Kontermann和Dubel，编著(2001)"AntibodyEngineering"SpringerVerlag;Howard和Bethell，编著(2001)"BasicMethodsinAntibodyProductionandCharacterization"CRCPress和O'Brien和Aitkin，编著(2001)"AntibodyPhageDisplay"HumanaPress,此类抗体还可用于筛选同种型多肽的存在，例如，用于检测细胞、组织或提取物中HGF同种型的表达。J.评价或监测HGF同种型活性的测定通常，本发明提供的HGF同种型较之配体的野生型或优势形式展示出结构上的改变以及还有一种或多种活性上的改变。特别地，同种型展示出HGF拮抗物活性和/或抗血管发生活性。由此，同种型是候选治疗剂。如果需要的话，可使用体外或体内测定对筌定出的同种型加以筛选，以监测或鉴定HGF同种型的活性，或者选出展示出此类活性或活性改变的HGF同种型，和/或选出展示出受体结合或能调节HGF介导的MET活化和/或能调节生长因子血管发生活性的HGF同种型。可以利用任何合适的测定，包括本文示例的测定。针对HGF活性的多种测定都是本领域技术人员已知的。所述测定允许对HGF同种型的活性与HGF配体的野生型或优势形式的活性加以比较，以鉴定出缺少活性的同种型。此外，测定允许对能调节MET受体或其它生长因子受体(例如，涉瓦血管发生的那些，包括FGFR或VEGFR)活性的同种型。针对HGF和HGF同种型的测定包括但不限于，配体结合测定、受体二聚化/寡聚化测定、MET和ERK砩酸化测定、增殖和有丝分裂发生测定、运动发生测定、形态发生测定和凋亡测定。可选地或此外，HGF同种型能调节MET的活性和/或能与其它细ii^面蛋白结合或相互作用，所述细胞表面蛋白例如GAG，包括肝素，或者参与血管发生的其它细胞表面蛋白，包括生长因子受体和其它血管发生诱导分子，例如avp3整联蛋白或血管动蛋白。可针对此类活性对鉴定出的同种型加以筛选。用于筛选同种型以鉴定活性和与MET和/或其它细M面蛋白的功能性相互作用的测定是本领域技术人员已知的。本领域技术人员能针对与MET或另一细胞表面蛋白的相互作用对特定同种型加以测试，和/或测试以评估活性较之HGF的任何变化。本文例举了一些。1.配体结合测定和HGF结合测定可通过评估较之HGF而言HGF同种型与细胞的结合，来直接评估HGF同种型结合。在一些实例中，可评估HGF同种型与内皮细胞或其它已知能结合HGF的细胞的结合，以一般性确定HGF同种型的结合较之HGF有无改变(被增强或抑制)，在其它一些实例中，可使用HGF或其它已知配体，针对与已知能表达MET的细胞的结合，进行竟争性测定。可对HGF同种型与HGF竟争结合MET受体的能力加以评估。通过氯胺T方法(见，Nakamura等人，1997，CancerRes.57，3305-3313)对HGF和HGF同种型进行放射性橫化，并且测量125I-HGF和125I-HGF同种型的比活性。在多《LfeL中培养正常表达MET受体的细胞，用于结合测定。在冰冷的结合緩冲液中对细胞进行平衡，与多种浓度的12SI-HGF或12SI-HGF同种型一起孵育，其中具有或不具有未被标记的HGF或HGF同种型的过量摩尔比。就竟争性结合测定而言，将固定浓度的^I-HGF和多种浓度的未经标记HGF或HGF同种型与细胞一起觯育.孵育期后，对细胞进行洗涤、溶解，使用Y-计数器来测量结合的经标记蛋白。可针对一种或多于一种的细胞表面分子，直接或间接测量HGF与细#面分子(包括MET或肝素)的结合。例如，可测量HGF同种型结合肝素的能力。在另一测定中，采用免疫沉淀来评估细胞表面分子结合。将细胞裂解物与HGF同种型一起孵育。用针对细ife^面分子(例如avp3、肝素或生长因子受体)的抗体来对复合物进行免疫沉淀。用抗HGF抗体对免疫沉淀物进行western印迹，对复合物中HGF同种型的量加以定量和/或检测。细胞表面分子结合测定还可包括在存在其它分子的情况下与配体的结合。例如，可在可溶肝素存在的情况下，对HGF同种型结合的细胞表面分子加以评估。2.配体二聚化可对HGF配体(包括HGF同种型)的二聚化加以测试，以确定同种型是否形成二聚体。例如，可在存在或不存在交联试剂(例如双磺基琥珀酰亚胺辛二酸酯(bis(sulfosuccinimidyl)suberate))的情况下，对同种型进行孵育。在一些实例中，可向样品中加入肝素.淬灭之后，可通过SDS-PAGE对样品进行分离，并且通过用考马斯蓝蛋白质染色，或者通过使用抗HGF抗体或抗HGF同种型抗体，来检测蛋白质。可对蛋白条带加以分析，以评估出较之未与交联试剂孵育的蛋白质或在不存在肝素时孵育的蛋白质而言分子量较大的条带，这例如通过评估样品内单体、二聚体或其它复合形式的存在来实现。3.复合复合，例如METRTK通过HGF配体或HGF同种型的二聚化可被检测和/或测量。通常，RTK的受体二聚化是活化所需的。MET信号传导的拮抗物与MET结合，但是其不能诱导二聚化或活化。例如，经分离的多肽可被混合起来，对其进行凝胶电泳和western印迹。HGF和/或HGF同种型还可^X到细胞和细胞提取物中，例如全细胞或经分级分离的提取物，并对其进行凝胶电泳和western印迹。能识别多肽的抗体可被用于检测单体、二聚体和其它复合形式的存在。在一些实例中，复合实验进行前，可加入肝素，或者可用肝素酶对细胞进行处理。4.MET和ERK1/2砩酸化测定可通过测量MET的磷酸化状态，针对其影响MET受体活化的能力或干扰MET的HGF诱导的能力，对HGF同种型加以评估。正常表达MET受体的内皮细胞(例如人皮肤^jfc管内皮细胞)整夜处于血清饥俄状态。然后用多种浓度的HGF同种型对细胞进行10分钟的预处理，接着加入HGF或不含血清的培养基。用原钒酸钠(Na3V04)单独处理细胞作为阳性对照。孵育期后，对细胞进行洗涤和溶解。用抗MET抗体，例如抗METC画12(桑塔路生物技术公司(SantaCruzBiotechnology)，SantaCruz，CA)对等价蛋白质的量的细胞提取物进行免疫沉淀。洗涤免疫沉淀物，通过SDS-PAGE进行分离，并且转到膜上,通过与抗砩酸酪氨酸抗体，例如PY99或PY20(桑J^路生物技;^司(SantaCruzBiotechnology)，SantaCmz，CA和凯米肯国际公司(ChemiconInternational,Inc.)，Temecula，CA)的免疫反应性，来评估MET受体酪氨酸磷酸化的量。MET受体诱导的另一指标是MET途径中下游激酶的活化。通过HGF诱导的MET受体活化之后的磷酸化，来活化激酶，例如ERK1/2。可针对其单独影响ERK1/2砩酸化的能力或在存在HGF时影响ERK1^磷酸化的能力，对HGF同种型加以评估.按照上文所述用HGF同种型和/或HGF处理之后，对全细胞^取物进行SDS-PAGE，并转到膜上。通过与^^辨酸ERK1/2抗体(新英格兰生物实验室(NewEnglandBiolabs)，Beverly,MA)的庶^应性，来评估经裤酸化的ERK1/2的量。还可用针对ERK1/2裤酸化的测定，来评估HGF同种型抑制其它血管发生受体(例如，bFGF受体和VEGF受体)活化的能力。用HGF同种型预处理之后，将细胞与bFGF或VEGF—起孵育一段时间。按照上文所述，针对ERK1/2的鳞酸化，对全细胞提取物进行评估。5.形态发生/血管发生测定可通过测量小管形成，来评估HGF同种型体外影响HGF诱导的血管发生的能力。将内皮细胞，例如AJH^脉内皮细胞(HUVECS)涂布进包被有Matrigel(BD生物科学公司(BDBiosciences)，SanJose,CA)的多孔板，孵育过夜.然后吸出培养基，将另外的含有不含血清的培养基、HGF、HGF同种型或HGF与HGF同种型的组合的MatrigelTM復盖到细胞上。过夜孵育后，在相差显微镜下观察细胞。细胞的随机领域被照相，测量小管长度。代替HGF,HGF同种型还可与能刺激小管形成的其它血管发生性因子(例如bFGF和VEGF)共同孵育，以评估HGF同种型对于能刺激血管发生的其它因子活动的影响。该测定的另一版本涉及用产生HGF的成纤维细胞(例如MRC5细胞)作为HGF的来源。将内皮细胞，例如HUVECS涂布进已包被有Matrigel的Transwell室(6.5mm直径的聚碳酸酯膜，0.45jtm孔径，科斯^"^^司(Costar))的较低的室中。过夜孵育后，然后吸出培养基，将另外的含有不含血清的培养基或HGF同种型的MatrigelTM復盖到细胞上。表达HGF的MRC5细胞^UL、进Transwell板顶部的室的不含血清培养基中。过夜孵育后测量小管长度。通过ELISA对来自较室的腔的培养基进行分析，以發汪HGF的存在。还可通过RT-PCR，对从来自顶部室的MRC5细胞分离的RNA进行分析，以评估HGF的产生。还可用胶原凝胶中的三维培养来观察细胞(例如MDCK细胞)中的小管形成。将给定量的细胞悬浮于0.2%水冷的胶原溶液中。溶液胶凝之后，加入含有多种浓度的HGF同种型和/或HGF的培养基，对细胞进行6小时的培养。没有HGF培养的对照MDCK细胞将作为球形胞囊生长，而用HGF进行的处理则将诱导分支小管发生(tnbulogenesis)。可通过对小管数量和小管长度进行计数，来评估存在HGF同种型时对小管形成的抑制。可用其它血管发生因子，例如，FGF-2和VEGF代替HGF，来刺激^^^中的小管形成，可以评估HGF同种型对它们形态发生活性的影响。6.有丝分^JL生/增殖测定可以通过测量细胞增殖，来评估HGF同种型对于由HGF、FGF-2和VEGF诱导的内皮细M丝分^l生活性的影响。将预定密度的内皮细胞涂布到胶凝化的多孔组织培养板上，并孵育过夜。用含有多种浓度的HGF同种型与HGF、FGF-2、VEGF或其组合的新鲜培养基替换培养基，72小时后，将细胞用胰蛋白酶^t,使用Coulter计数器计数。还可使用3-(4，5-二甲基嚷唑-2-基)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)方法(见，例如Yonekura等人2003祝ocAe附/.370:1097-1109)来进行对细胞增殖的定量。7.运动发生/细胞迁移测定可针对其干扰HGF诱导的细胞运动性的能力，来对HGF同种型加以评估。在多孔板中培养内皮细胞，直到其与培#^表面紧密粘附。然后加入新鲜的培养基，用轻矿物油覆盖，以防止蒸发。加入含有HGF、HGF同种型或其组合的培养基，用数码相机和慢速拍摄记录器记录图像。从每个框中细胞的给定数量来计算经历的距离。还可通过内皮细胞受伤测定，来评估HGF同种型对HGF诱导的细胞迁移的影响。将内皮细胞培养于平板上，令其生长至汇合。用82号针损伤细胞，以产生大约200jim的创伤。然后洗细胞，加入^^有HGF同种型、HGF或其组合的新鲜培养基。按照上文所述记录细胞迁移的图像，计算创伤上的迁移JE巨离。还可使用经改良的#登室测定来评估细胞迁移。对内皮细胞，例如，人皮肤mi^管内皮细胞进行血清M，然后将其放到包被有13.4將/ml纤连蛋白的Transwell板(6.5mm直径的聚破酸酯膜，5jLim孔径，科斯^4S司(Costar)，Cambridge,MA)内室中，向外室加入含有HGF、FGF醫2或VEGF的培养基(有或没有HGF同种型)，孵育一段时间。通过对在每个孔的随机选择的显微视场中的细胞加以计数，对经过膜迁移到滤器表面下面的细胞数量进行定量.可通过细胞^t测定，来分析与细胞应答于HGF处理的解离相关的细胞移动。HGF同种型对HGF诱导的细胞^t的作用可被测量。在存在HGF同种型、HGF或其组合的情况下，将细胞，例如MDCK肾上皮细胞培养于多《m中。过夜孵育后，用苏木精(hemotoxylin)对细胞进行染色，并对其照相。不存在HGF时的对照细胞将形成紧密的集落并且保持细胞接触，而HGF处理诱导了细胞的分歉。8.凋亡测定HGF对经细胞毒剂(例如辐照和某些癌症治疗剂，包括顺铂、喜树碱(camtothesin)、阿霉素和紫杉醇)处理过的细胞行使抗凋亡作用。HGF同种型改变HGF处理的抗凋亡作用的能力可被测量。用4^有多种浓度的HGF同种型和/或HGF的培养基对细胞进行培养。然后将细胞暴露给细胞毒剂，进行一段孵育时间，使用3-(4，5-二甲基漆哇-2-基)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT，西格玛公司(Sigma))测定来测量细胞活力。凋亡细胞显示出特征性的核片段化，这可通过核染色观察到。用HGF处理过的细J!^J艮示出降低的应答于细胞毒剂的核片段化。HGF同种型拮抗HGF的这种影响的能力可被评估，将细胞涂布到栽玻片上，用细胞毒剂处理，接着用上文所述的HGF和/或HGF同种型进行处理。使用Hoescht33342染色和荧光显微镜(350nm的歉&波长和450nm的发射波长处)ifU见察细胞核，细胞核片段化是凋亡期间对基因组DNA切割的结果，其产生了双链和单链断裂("切口，，)，导致染色体DNA成梯状，这将被HGF处理所抑制。可在存在HGF同种型和/或HGF时，使用DNA片段化测定来测量应答于细胞毒剂的染色体DNA梯状程度。处理之后，细胞被溶解，分别通过RNaseA和蛋白酶K的处理，将RNA和蛋白质从样品中移出，沉淀染色体DNA，在含溴化乙锭的琼脂糖凝胶上进行电泳，观察凋亡细胞中存在的DNA梯度。还可使用DNA过滤洗脱测定来测量凋亡细胞中DNA断裂的程度。细胞与卩H胸苷一起孵育32小时，接着在不含同位素的培养基中孵育2小时。然后用多种浓度的HGF同种型和/或HGF对细胞进行预处理，接着用细胞毒剂处理。过夜孵育后，将细胞重新悬浮于狭蛋白酶中，应用到聚碳酸酯膜上。细胞在膜上裂解，并对其进行碱洗脱，以检测单链DNA断裂。在闪烁计数器上对样品进行计数，其被测量为洗脱的Dpm/(滤器结合的dpm+dpm总裂解物)。较大的未片段化DNA片段洗脱得较慢；因此作为时间函数的洗脱的DNA的量与DNA损伤成正比。测量DNA断裂的另一方法是TUNEL染色，其通过用经〗务饰的核苷酸在SI^反应中标记游离的3'-OH末端来鉴定DNA碎片。该方案可对单个细胞水平上的凋亡加以检测和定量。可获得用于TUNEL染色的商用试剂盒，包括Apotag原位凋亡检测试剂盒(英杰生命技术公司(Invitrogen)，Carlsbad，CA)。按上文所述用HGF同种型和/或HGF进行处理后，对细胞进行胰蛋白酶消化，并通过细胞离心涂片器转到栽玻片上。对细胞进行可渗透化处理，接着进行免疫细胞化学处理，这包括加入末端脱氧核苷酸转移酶、洋地黄毒苷-dUTP、抗洋地黄毒苷HRP和二M联苯胺。用曱基绿对细胞进行复染，通过对每片栽玻片上预定的细胞数中TUNEL阳性细胞的数量加以计数来进行定量。经标记细胞的分数^示为凋亡指数。此实验的阳性对照可包括将细胞与DNaseI—起孵育，以在标记"iW之前诱导DNA链断裂。对胱天蛋白酶-3(caspase-3)活性的测量可以是对凋亡程序的诱导的另一量度。按照上文所述用HGF同种型和/或HGF进行处理之后，将细胞溶解并且与荧光底物Ac-DEVD-AFC—起孵育。可使用胱天蛋白酶-3的抑制物，ZJ)EVD-CMK(博奥雷德公司(Bio-Rad))作为对照。通过荧光分光光度计在400nm的*^波长和520nm的发射波长来评估对底物的切割。通过减去存在对照抑制物时的峰值来测定活性，我们相信，HGF的抗凋亡作用是通过经由礴脂酖肌醇-3-激酶(PI3K)途径的AKT的活化来介导的。可进行体外激酶测定，来评估HGF同种型抑制HGF对AKT活性诱导的能力。用编码HA-AKT1或HA-AKT2的质粒来转染过量表达MET受体的SK-LMS-1细胞，并且血清M过夜。然后用多种浓度的HGF同种型和/或HGF来处理细胞。在加入HGF之前用PI3K抑制物(例如渥曼青霉素或LY294002)进行的处理可用作为针对AKT抑制的阳性对照。对细胞进行裂解，使用抗-HA抗体和/或抗-AKT抗体对AKT蛋白质进行免疫沉淀。样品的一半被用于对AKT蛋白质的量进行标准化。样品的另一半被用于激酶测定，其中将AKT蛋白质与作为底物的[32"ATP和组蛋白2B—起觯育。对样品进行SDS/PAGE以;Sj^l射自显影。9.动物模型a.肺瘤阻抑测定本领域技术人员已知多种测定，以评估HGF同种型对于肿瘤生长和转移的影响。针对受HGF-MET途径影响的多种癌症的模型包括将细胞或细胞系(包括经多种生长因子转化的细胞或癌细胞)注射进把组织，例如，用经人HGF和小鼠MET转化的C-127细胞对无胸腺棵小鼠进行皮下注射，在2-3周内在小鼠中产生了转移性肿瘤。可以在一段时间内，以规律间隔注射重组HGF同种型，可测量肿瘤大小。此外，除了HGF同种型处理之外，还可递送组合疗法，包括^l射或化疗药物，以检查抗肿瘤疗法的叠加小果或协同效果。可用于在特定癌症中测试HGF同种型处理的动物癌症模型的一些实例可包括神经胶质瘤恶性神经胶质瘤是中枢神经系统最常见的癌症，其与不良的预后相关，这是由于对于放疗和化疗的先天抗性导致的。恶性神经胶质瘤表达高水平的HGF。抑制HGF信号传导已显示出能在体外和体内逆转恶性表型.神经胶质瘤的小鼠模型涉及将经HGF转化的9L细胞注射进大鼠的尾状壳核，以产生脑肿瘤。可注射HGF同种型，以分析这些肺瘤的大小和转移。神经胶质瘤的其它模型包括细胞系异种移植物，例如，U-118人神经M瘤细胞系(GBM)，其对于内源HGF/MET信号传导而言是自分泌的。将GBM细胞皮下注射进无胸腺棵小鼠，以产生肺瘤，可评估HGF同种型对肿瘤生长的影响。HGF同种型的注射可在异种移植物注射时开始，或者可选地，可在肿瘤建立之后将HGF同种型注射进肺瘤内。结肠癌结肠癌是人最常见的癌症之一。其特征在于高死亡率，这是因为肝的高转移速率导致的转移性疾病。结肠癌转移的小鼠模型涉及将MC-38结肠癌细胞注射进小鼠的脾，在接种后大约21天时观察到转移的结节。用HGF同种型处理之后，可对肿瘤结节的数量和大小、结节中血管密度、结节中凋亡细胞的数量以及MET活化的程度加以评估。胰腺癌胰腺癌是具有非常差的预后的高度恶性癌形式。胰腺癌的小鼠模型涉及将SUIT-2细胞(狭腺癌细胞系)同位注射进棵小鼠的M。四周内小鼠将发展出大的团块，散布进腹膜腔。可在肿瘤生长的多个时间开始用HGF同种型进行处理，以评估存活和肿瘤生长。本领域技术人员可获得的、用于在癌症^A中研究HGF的其它小鼠模型可包括但不限于，胃癌、胆囊癌、肺癌、淋巴瘤、肝细胞瘤、恶性黑素瘤、乳癌和卵巢癌。b.血管发生疾病针对与过度新血管形成相关的疾病的动物模型是本领域技术人员已知的。除了在动物癌症模型中进行的肿瘤血管发生测定之外，还可用动物模型来研究疾病例如，糖尿病增殖性视网膜病变等疾病。一种此类模型涉及在眼中过量表达狭岛素样生长因子(IGF-1)的转基因小鼠。这些小鼠展示出视网膜血管的血管阻塞、静旨张和串珠形成、广泛的毛细血管无灌注区、视网膜内#管异常(IRMA)和视网膜中和玻璃体内的新血管形成。可用HGF同种型进行处理，以观察HGF信号传导抑制对于血管形成的影响。此外，可研究在存在血管发生因子(例如，VEGF和/或FGF-2)时HGF同种型的作用。用于研究血管增殖的另一模型是角膜微囊测定，其中，通过^A兔角膜的含有FGF-2或VEGF的粒状沉淀，来诱导角膜新血管形成。可在血管长度、数量和分支的方面，来测重角膜中新血管形成的程度。可通过植入、注射或本领域已知的其它递送方法来评估HGF同种型的影响。K.制备、配制和施用HGF同种型和HGF同种型组合物可以配制通过本领域技术人员已知的任何途径来施用的HGF同种型和HGF同种型組合物，所述途径包括，肌内、静脉内、皮内、JMI内、皮下、^外、鼻、口服、直肠、局部性、吸入、颊(例如舌下)和经皮施用或任何途径。可通过任何方便的途径来施用HGF同种型，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜衬(mucocutaneouslinings)(例如，口腔釉膜、直肠和肠黏膜等)的吸收，并且，其可与其它生物活性剂一起施用，例如依次、间隔施用或在同一组合物中施用。施用可以是局部的(local)、局部性的(topical)或全身性的，这取决于治疗的位置。可通过，例如但不限于，手术期间的局部输注，局部性应用，例如与手术后的伤口包扎联合，通过注射，通过导管，通过栓剂或通过tt^物，来向需要治疗的地方进行局部施用，施用还可包括受控释放系统，包括受控释放的制剂和受控释放的设备，例如通过泵来实现。在任何给定的情况下最合适的途径取决于多种因素，例如，疾病的性质、疾病的进程、疾病的严重性和使用的特定组合物。已知有多种递送系统，它们可用于施用HGF同种型，例如但不限于，包埋进脂质体、微顆粒、微胶囊、能表达化合物的重组细胞、受体介导的胞吞作用以及对编码HGF同种型的核酸分子的递送(例如反转录病毒递送系统)。可制名^^有HGF同种型的药物组合物。通常，就管理机构许可的角度来制备可药用组合物，或者根据通常被认可的用于动物和人的药典来制备。药物组合物可包括与同种型一起施用的运栽体，例如稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物(vehicle)。此类药物运栽体可以是灭菌液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，例如花生油、大豆油、矿物油和5J象油。当药物组合物静脉内施用时，水是典型的运栽体。盐水溶液和水性右旋葡萄糖(dextrose)和甘油溶液也可用作为液体运栽体，特别是用于可注射溶液。组合物可包含，连同活性成分一起稀释剂，例如乳糖、蔗糖、砩酸二钙或羧甲基纤维素；润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸钙和滑石；以及粘合剂，例如淀粉、天然胶质(例如阿拉伯树胶、明胶)、葡萄糖、糖蜜、聚乙烯吡咯烷嗣、纤维素及其衍生物、聚维酮、交聚维酮和本领域技术人员已知的其它此类粘合剂。合适的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑名、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二酵、水和乙醇。如果需要的话，组合物还可含有少量润湿剂或乳化剂或pH緩冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸钠、环糊精衍生物、山梨聚糖单月桂酸酯、三乙醇胺乙酸钠、三乙醇胺油酸盐和其它此类物质。这些组合物可采用溶液基、混悬剂、乳剂、片剂、丸剂、胶囊刑、散剂和緩释制剂的形式。组合物可被配制为含有传统粘合剂和运栽体(例如甘油三酯)的栓剂。口服制剂可包括标准运栽体，例如药物级的甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁和其它此类物质。合适的药物运栽体的实例如E.W.Martin的"Remington'sPharmaceuticalSciences，，所述。此类组合物将含有治疗有效量的化合物(通常是纯化形式的)以及合适量的运栽体，以提供用于向患者适当施用的形式。制剂应当适合施用模式。本发明提供了以单位剂量形式施用给人和动物的制剂，所述形式例如含有合适量的化合物或其可药用衍生物的片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒刑、灭菌肠胃外溶液剂或混悬刑以及口服溶液刑或混悉剂，和水包油乳剂(oilwateremulsion)。典型地，对可药用治疗活性化合物及其衍生物以单位剂量形式或多剂量形式加以配制和施用。每个单位剂量含有预定量的治疗活性化合物与需要的药物运栽体、媒介物或稀释剂的组合，所述的量足以产生想要的治疗效果.单位剂量形式的实例包括安瓿和注射器和单独包装的片剂或胶嚢剂。单位剂量形式可以^P分或者多次施用。多剂量形式是包装于单个容器中的、待以分开的单位剂量形式施用的多份相同单位剂量形式。多剂量形式的实例包括片剂或胶囊刑的小瓶、瓶或者品脱或加仓瓶。因此，多剂量形式是包装中没有分开的多份单位剂量。可以制^^有范围在0.005%至100。/。的活性成份以及由非毒性运栽体制成的平衡成分(balance)的组合物或剂量形式。对于口服施用而言，药物组合物可采用，例如，通过常规手段用可药用赋形剂，例如粘合剂(例如，预胶凝化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷嗣或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如，乳糖、微晶纤维素或砩酸氩钩)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石或硅石)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠)；或润湿剂(例如，十二烷M酸钠)制备的片剂或胶囊剂的形式。可用;M5域公知的方法对片剂加以包被。药物制剂还可以是液体形式的，例如溶液剂、糖浆剂或混悬剂，或者可呈现为在使用前用水或其它合适媒介物重构的药品的形式。可通过传统手段，用可药用添加剂，例如，助悬剂(例如，山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化的可食用脂肪)；乳化剂(例如，磷脂酰胆碱或阿拉伯胶(acacia));非水性媒介物(例如，杏仁油、油状酯类或经分铺的植物油)；以及防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯，或山梨酸)来制备此类液体制剂。适合用于直肠施用的制剂可作为单位剂量松剂的形式提供。可通过将活性化合物与一种或多种常规固体运栽体(例如，可可脂)混合，然后对得到的混合物成型，来制备所述制剂。适合局部性应用到皮肤或眼睛的制剂包括软奮基、乳骨剂、洗剂、糊剂、凝胶基、啧雾基、气雾刑和油。示例性运栽体包括凡士林、羊毛脂(lanoline)、聚乙二醇、醇和其两种或多种的组合。局部性制剂还可含有按重量计百分之0.05至15、20、25的增稠剂，其选自羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚(烯基二醇)(poly(alkyleneglycol))、l羟烷基、(甲基)丙烯酸酯或聚(甲基)丙烯酰胺。通常，局部性制剂通过滴注作为软骨剂应用进结膜嚢。还可用其沖洗或润滑眼睛、面部窦和外耳道。还可将其注射进眼前室(anterioreyechamber)和其它位置。液体状态的局部性制剂还可存在于条状(strip)或接触镜形式的亲水三维聚合物差^质中，活性组分从其中释放。为通过-iUV进行施用，本发明4吏用的化合物可以以气雾剂喷雾呈递的形式从加压包装或喷雾器被递送，这使用合适的抛射剂(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或者其它合适的气体)来实现。在4吏用加压气雾剂的情况下，可通过^l供阀门以递送给定计量来确定剂量单位。在吸入器或吹入器中使用的例如明胶的胶囊剂和药筒(cartridge)可被配制为含有化合物和合适粉末基底(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。适合经颊(舌下)施用的制剂包括，例如，含有处于有利基底(通常是蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)中的活性化合物的锭剂；以及含有处于惰性基底(例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)中的化合物的软锭剂。HGF同种型的药物组合物可被配制，以用于通过注射，例如通过推注或连续输注进行肠胃外施用。用于注射的制剂可以以单位剂量形式存在，例如，在务瓶中或在多剂量容器中，并且具有加入的防腐剂。组合物可以是处于油性或水性媒介物中的混悬液、溶液或乳液，其可含有配制剂，例如助悬剂、稳定剂和/或^t剂。可选地，活性成份可以以粉末形式存在，用于在使用前合适的媒介物，例如，灭菌的无热原水或其它溶剂加以重构。本发明提供了适合经皮施用的制剂。它们可以以任何合适的形式被提供，例如，适^留与接受者的表皮紧密接触一长段时间的离散型贴剂。此类贴刑含有处于任选经緩沖水溶液中的活性化合物(例如，活性化合物浓度为0.1至0,2M)。适合用于经皮施用的制剂还可通过离子电渗疗法来递送(见，例如，i%fl/w"ce"iicfl/JesircA3(6)，318(1986))，典型地，采用活性化合物的任选经緩冲的水溶液的形式。药物组合物还可通过受控^^:制剂和/或递送i殳备来施用(见，例如美国专利号Nos.3，536，809、3，598，123、3，630，200、3,845,770、3，847，770、3,916,899、4,008,719、4,687,610、4，769，027、5,059,595、5，073，543、5，120，548、5,354,566、5，591，767、5，639，476、5，674，533和5,733,566)。在某些实施方案中，还可4吏用脂质体和/或纳米颗粒来进行HGF同种型施用。脂质体是从^t于水性介质中的礴脂形成的，它们自发形成多层(multiamellar)同心双层小泡，其也被称为多复层脂质体(MLVs)。MLVs通常具有25nm至4pm的直径。对Ml/Vs的超声波处理导致直径为200至500.ANG.范围内的小的小单层脂质体(SUV)形成，其核心中含有水溶液。磷脂^t于水中时可形成除脂质体之夕卜的多种结构，这取决于脂类和水的摩尔比。在低比例下，脂质体形成。脂质体的物理性质取决于pH、离子强度和二价阳离子的存在。脂质体可展示出对离子和极性物质的低通透性，但是在升髙的温度下其将经历相变，这显著改变它们的通透性。相变涉及从作为皿状态已知的紧密堆积有序结构变为作为流体状态已知的松散堆积较无序结构。这在特征性相变温度下发生，并且导致对离子、糖和药物通透性的增加。脂质体通过下述不同机制与细胞发生相互作用通过网状内皮系统的吞噬细胞(例如巨噬细胞和嗜中性粒细胞)的胞吞作用；通过非特异性弱疏水力或静电力，或通过与细;fe^面组分之间的特异性相互作用，吸附到细胞表面；通过将脂质体的脂双层插入质膜来与质膜融合，同时将脂质体内容物释放^fe质；以及通过将脂质体脂类转运进细胞或亚细胞膜，或者反过来，而与脂质体内容物没有任何关联。改变脂质体制剂可改变运作机制，虽然可以有不止一种机制在运作。纳米胶嚢通常可使得化合物以稳定可再现的形式嵌入。为避免细胞内聚合物过栽造成的副作用，使用能体内降解的聚合物设计此类超微顆粒(大小约0.1Jim)。达到这些要求的可生物降解的聚氛基丙烯gbs;基酯纳米颗粒都被包括进来用于本发明，此类颗粒是容易制备的。施用方法可被用于减少HGF同种型暴露给降解过程，例如，蛋白水解降解和经由抗原和免疫原性应答的免疫千涉，此类方法的实例包括在治疗位点局部施用。已有报道称，治疗剂的聚乙二醇化能增加对蛋白水解的抗性、增加血浆半寿期以及减少抗原性和免疫原性。聚乙二醇化方法的实例是本领域已知的(见，例如，Lu和Felix，/^/尸印ftVfeiVote/"及es.，43:127-138，1994;Lu和Felix，及es.，6:142-6，1993;Felix等人，/ftcfe46:253-64，1995;Benhar等人.，/Ot脆，269:13398-404，1994;Brumeanu等人，//wwimo/，154:3088-95，1995;还见Caliceti等人(2003)」</v./V"gDe//v.iev.55(10):1261-77和Molineux(2003)i^n/wiicWAera/^23(82):3S-8S)。聚乙二醇化还可用于体内递送核酸分子。例如，腺病毒的聚乙二醇化可增加穗定性和基因转运(见，例如，Cheng等人(2003)jP/^im及战20(9):1444-51)。可以通过连续输注活性物质来保持想要的血液水平(通过血浆水平测定的)。应当注意，主治医师将知道如何以及何时终止、中断或调整疗法以降低剂量，这是因为毒性，或骨拔、肝或肾功能障碍。相反，如果临床应答不足够(排除毒性副作用)，主治医师还将知道如何以及何时将治疗调整至更高的水平。活性物质例如通过口服、肺部、肠胃外(肌内、JMI内、静脉内(IV)或皮下注射)、吸入(经由精细粉末制剂)、经皮、鼻、阴道、直肠或舌下施用途径来施用，并且可被配制为适合用于每种施用途径的剂量形式(见，例如，国际PCT申请号No.WO93/25221和WO94/17784以及欧洲专利申请613,683)。HGF同种型以足以施加治疗有用效果并且对接受治疗的患者没有不想要副作用的量被包括进可药用运栽体中。可通过在已知的体外和体内系统(例如，本发明提供的测定)中对化合物加以测试，通过经验确定治疗有效浓度。HGF同种型在组合物中的浓度取决于复合物的吸收、失活和排泄速率，复合物的物理化学特征，剂量安排方案，以及施用的量和本领域技术人员已知的其它因素。可通过标准临床技术来确定待施用以治疗疾病或病症(例如治疗癌症或血管发生)的HGF同种型的量。此外，可以利用体外测定和动物模型，来协助鉴定最优剂量范围。可通过经验确定的精确剂量，可取决于施用途径和疾病的严重性。合适的施用剂量范围可在大约0.01pg/kg体重至1mg/kg体重的范围内，更典型地，0.05mg/kg至200mg/kgHGF同种型:患者体重的范围内。HGF同种型可一次性施用，或者可分为多份更小的刑量按照时间间隔施用。在治疗期间(例如，数小时、数天、数周或数月)，HGF同种型可以以一份或多份剂量施用。在一些情况下，连续施用是有用的。应当理解，治疗的持续时间和精确剂量是被治疗的疾病的函数，其可使用已知的测试方案，或通it^体内或体外测试数据推断，来经验性地确定。应当注意，浓度和剂量值还可随着待被减轻的病症的严重性变化。还应当理解，对于任何特定受试者而言，都应当按照个体需要和施用或指导组合物施用的人的专业判断，随着时间对具体的刑量方案加以调整，本文所示的浓度范围仅作示例用，并不意味着对组合物和含有它们的组合的使用或范围加以限制。组合物可每小时、每天、每周、每月、每年或一次性施用。施用含多肽的组合物以及含核酸的组合物(用于基因疗法)的模式包括但不限于损害内、J5Ui内、肌内和静脉内施用。本发明还包括输注、鞘内、皮下、脂质体介导的和贮库制剂介导的施用。本发明还包括鼻的、眼的、口服、局部性、局部和耳的递送。可以经验性地确定剂量，其取决于适应证、施用模式和受试者。示例性的剂量包括O.l、1、10、100、200及更多mg/天/kg受试者体重。L.HGF同种型的体内表达以及基因疗法HGF同种型可通过核酸分子的表达被递送给细胞和组织。HGF同种型可作为编码HGF同种型的核酸分子施用，包括离体技术和直接的体内表达。1.HGF的递送可通过本领域技术人员已知的任何方法将核酸递送给细胞和组织。a.栽体-游离型和整合型用于通过编码核酸分子的表达来施用HGF同种型的方法包括施用重组栽体。栽体可被设计，以保持游离状态，例如通过包括进复制起点来实现，或者，栽体可祐:设计为能在细胞中整合进染色体。重组栽体可包括病毒栽体和非病毒栽体。非限制性的病毒载体包括，例如，腺病毒栽体、疱渗病毒栽体、反转录病毒载体和本领域技术人员已知的任何其它病毒载体。非限制性的非病毒栽体包括人工染色体或脂质体或其它非病毒栽体。HGF同种型还可在使用病毒和非病毒栽体的离体基因表达疗法中使用。例如，可对细胞进行工程改造，以表达HGF同种型，这例如通过以下来实现将HGF同种型编码核酸整合进基因组位置，其与调控序列有效J4^目连，或者使其被放置于与基因组位置中调控序列有效相连的位置上。然后此类细胞可被局部或全身性施用给受试者，例如，需要治疗的患者。HGF同种型可被施用给需要治疗的受试者的病毒表达。适合进行基因疗法的病毒栽体包括腺病毒、腺伴随病毒、反转录病毒、慢病毒和上文提到的其它病毒。例如，腺病毒表达技术是本领域公知的，腺病毒的产生和施用方法也是公知的。腺病毒血清型是可获得的，例如，从美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)(ATCC，Rockville，MD)获得。腺病毒可离体使用，例如，从需要治疗的患者分离细胞，用表达HGF同种型的腺病毒栽体对其进行转导。合适的培养期后，将经转导的细胞局部和/或全身性M用给受试者。可选地，可分离出表达HGF同种型的腺病毒颗粒，将其配制进可药用运栽体中，用于递送治疗有效量，以预防、治疗或改善受试者的疾病或病症。典型地，以每千克受试者体重1个颗粒至1014个颗粒的刑量范围来递送腺病毒颗粒，通常在每千克受试者体重106或108个顆粒至1012个颗粒之间。在一些情况下，人们想将核酸来源与能靶向细胞的物质一起提供，所述物质例如是针对细JJMl面膜蛋白或乾细胞的特异性抗体，或者针对靶细胞上受体的配体。b.人工染色体和其它非病毒栽体递送方法核酸分子可被引入人工染色体和其它非病毒栽体。人工染色体(见，例如，美国专利号No.6，077，697和PCT国际PCT申请号No.WO02/097059)可被工程^tit，以编码和表达同种型。c.脂质体和其它被包囊形式以;suit含有核酸分子的细胞的施用核酸分子可被包囊于媒介物(例如脂质体)中，或被引入细胞(例如细菌细胞，特别地，减毒细菌)中，或者可被引入病毒栽体。例如，当使用脂质体时，可使用能与胞吞作用相关的细胞表面膜蛋白结合的蛋白质，用于乾向和/或协助摄取，例如，针对特定细胞类型的衣壳蛋白或其片段，针对在循环中经历内在化的蛋白质的抗体，以及乾向细胞内定位并且能增加细胞内半寿期的蛋白质。2.体外和离体递送为进行离体和体内方法，将编码HGF同种型的核酸分子引入来自合适供体或待治疗受试者的细胞中，其中可为了治疗目的引入核酸的细胞包括，例如，适合待治疗的疾病或病症的任何想要的、可获得的细胞类型，其包括但不限于，上皮细胞、内皮细胞、角质形成细胞、成纤维细胞、肌细胞、肝细胞、血细胞(例如T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、巨核细胞、粒细胞)；多种干细胞或祖细胞，特别是造血干细胞或祖细胞，例如，从骨髄、脐带血、外周血、胎儿肝脏和其其它来源获得的干细胞。为进行离体治疗，移出来自与待治疗的受试者相容的供体的细胞，或者来自待治疗的受试者细胞，将核酸引入这些经分离的细胞，并将经修饰的细胞施用给受试者.治疗包括直接施用，例如，包埋在多孔膜内，其被植入患者(见，例如，美国专利号No.4,892,538和5,283,187)。适合将核酸体外转运进哺乳动物细胞的技术包括使用脂质体和阳离子脂类(例如，DOTMA、DOPE和DC-Chol)、电穿孔、显微注射、细胞融合、DEAE-葡聚糖和磷酸鈣沉淀方法。DNA递送的方法可用于体内表达HGF同种型。此类方法包括对核酸进行脂质体递送以及棵DNA递送，包括局部和全身性递送，例如使用电穿孔、超声和磷酸钩递送来实现。其它技术包括显微注射、细胞融合、染色体介导的基因转运、微细胞介导的基因转运和原生质球融合。HGF同种型的体内表达可与其它分子的表&目连。例如，HGF同种型的表达可与细胞毒性产物的表i^目连，例如，在经改造的病毒中或者表达于细胞毒性病毒中。此类病毒可被乾向特定细胞类型(其是治疗作用的靶)。表达的HGF同种型可用于增强病毒的细胞毒性。HGF同种型的体内表达可包括将HGF同种型编码核酸分子与特异性的调控序列(例如细胞特异性或组织特异性启动子)有效地相连。HGF同种型还可从特异性地感染把细胞类型和/或组织，和/或在把细胞类型和/或组织中复制的栽体表达。可使用诱导型启动子来对HGF同种型表达进行选择性调控。3.全身性、局部和局部性递送可通过全身性施用，局部性、局部和其它施用途径，将作为,酸或处于载体、人工染色体、脂质体和其它媒介物中的核酸分子施用给受试者。当全身性和体内进行时，核酸分子和含有核酸分子的媒介物可被把向到细胞。施用还可直接进行，例如通过施用典型地靶向细胞或组织的栽体或细胞来实现.例如，肿瘤细胞和增殖中的细胞可以是体内表达HGF同种型的被耙向细胞。用于体内表达同种型的细胞还包括患者自体细胞。此类细胞可从患者移出，向其中引入用于表达HGF同种型的核酸，然后施用给患者，例如通过注射或移植物植入来进行。M.HGF和癌症和血管发生HGF在通过其受体MET介导有丝分裂发生、形态发生、运动发生和血管发生方面具有显著作用。在癌症中，这些活性涉及肺瘤的生长、新血管形成和转移(见，例如图1)。原发肿瘤的转移通常与癌症患者的高死亡率相关，减少肿瘤生长转移过程(包括肿瘤诱导的血管发生)的治疗可提高恶性癌症预后。除癌症之外，HGF的血管发生性质还作用于多种血管疾病的JUL包括类风湿性关节炎和糖尿病增殖性视网膜病变。HGF同种型(例如本发明提供的HGF同种型)可用作为MET拮抗物以抑制癌症生长和扩散，还可用作为一般性的血管抑制性分子，以抑制与癌症;SUl或其它血管疾病相关的血管发生。1.肿瘤生长和转移HGF能调控细胞过程，包括增殖、凋亡、迁移和形态发生，它们有助于与癌症中恶性行为相关的侵入、血管发生和转移应答。HGF的受——MET最初作为致癌融合蛋白被分离出来，其由尔/ww"编码，具有组成型的、不依赖配体的酪氨酸激酶活性以及转化细胞的能力。对MET的过度活化可诱导肿瘤生长、肿瘤细胞运动性、细胞外基质的侵入以及血管发生。多种癌症，包括膀胱、乳腺、宫颈、结肠、食道、胃、头颈、肾、肝、肺、咽、卵巢、狭腺、前列腺和胸腺癌，肌骨骼肉瘤、软组织肉瘤、恶性血液病、成胶质细胞瘤、黑素瘤、间皮瘤和维尔姆斯瘤都展示出水平提高的HGF和/或MET表达，这有助于对HGF信号传导的自分泌上调。已在胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌和胸腺癌中鉴定出了基因中的突变，经工程改造以表达高水平HGF的转基因小鼠4LH出了间充质和上皮来源的组织学上各异的大批肿瘤。在具有提高的MET和/或HGF表达的癌症动物模型中，用能阻断MET受体活化的抑制物进行的治疗已成功影响了肿瘤生长和转移。癌症转化为恶性及转移的进程是多步过程，其涉及增强的细胞增殖、对细胞死亡的逃避、对细胞-细JI&^触的打断、细胞外基质的降解以及增加的细胞运动性和形态发生。HGF已经被认为参与了下述每种这样的过程的调控，所述过程与原发肿瘤建立和^相关以及与转移级糾目关，由此，细胞从原发肿瘤上脱离，经循环系统到达远处位点，形成继发性肺瘤。a.有丝分裂发生对HGF的刺激可诱导细胞增殖。虽然HGF的有丝分裂潜力可根据癌症类型变化，但是HGF清楚M示出了多种细胞循环促进活性。HGF处理可诱导有丝分^JL生信号传导途径(例如MEK/ERK途径)。HGF还可下调p27kipl，这导致使得提前进入细胞循环的高度磷酸化Rb蛋白质的积累。此外，HGF信号传导可导致P-联蛋白的积累，这促进了LEF/TCF转录因子复合物的形成，所述复合物能上调致癌基因转化中涉及的细胞循环调控物。HGF的有丝分H生性质还与对凋亡的抑制相连。对细胞存活因子的上调是癌细胞的关键特征，这贡献于它们逃避凋亡细胞死亡的能力。HGF处理已经显示出，能保护细胞免于血清饥俄、UV辐照和其它细胞毒剂诱导的凋亡。活化MET在细胞(例如肝细胞)中的组成型表达也可抑制凋亡。HGF的抗凋亡作用部分被经由磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)途径的Akt激酶活化所介导。为支持此观点，研究显示，用PI3K抑制物，例如LY294002进行的处理可阻断HGF的抗凋亡作用。此外，HGF可诱导抗凋亡蛋白质(包括BCL-xL、MAPK和GATA-4)的表达和/或活化。HGF信号传导还可干扰对对于凋亡程序来说重要的某些胱天蛋白酶的活化。MET受体还具有直接结合Fas以及防止Fas诱导的凋亡的能力。HGF处理能抑制DNA损伤刑(包括用于癌症治疗中的细胞毒剂)诱导的凋亡作用。研究显示，HGF处理促进了肺癌、成胶质细胞瘤细胞、结肠癌细胞、乳腺癌细胞、头颈蜂状细胞癌、骨號瘤细胞中和上皮细胞系中的细胞存活。举例而言，对MDA-MB-453人乳腺癌细胞、EMT6小鼠乳肿瘤细胞、IB"成胶质细胞瘤或MDCK肾上皮细胞的HGF处理保护了所述细胞免于细胞毒剂(例如，阿審素(ADR)、顺柏、喜树碱、紫杉醇、X-射线、Y辐照或紫外辐射)诱导的凋亡。既然HGF具有凋亡抑制作用，那么HGF在癌细胞中的积累就可能贡献于在癌症疗法中观察到的放疗和化疗抗性表型。HGF信号传导的抑制物由此有可能与癌症治疗的常规细胞毒剂一起用在组合疗法中。b.运动发生和形态发生癌细胞侵入周围组织以及迁移到远处位点的能力取决于对细胞运动性的刺激，并且涉及上皮和内皮细胞类型的形态发生。这些过程对于正常器官发育和伤口愈合来说也很重要。但是在癌症中，细胞运动性和形态发生的失调作用于癌症JSLH和转移。这对于下文讨论的肿瘤血管发生也是很重要的。用HGF处理癌细胞促进了细胞在多种基质上的快速迁移。HGF可通过对rho/rac途径组分的活化来刺激细胞的移动和形态发生。该途径对于细胞骨架重排和细胞底物粘附来说是重要的。rho家族的若干成员在癌症中异常表达。HGF刺激时，MET受体在多个酪氨酸残基上被鳞酸化，所述残基用作为信号传导分子(包括c-Cbl、PI3K、Grb2、Shc、Crk和Gab-l)的入坞位点。这些蛋白质进而活化与细胞骨架机制相关联的下游信号传导途径，导致了对粘附连接处的破坏、对膜起皱的刺激以及定向细胞移动。肿瘤转移中，细胞迁移中的另一重要因素就是对细胞接触的打断，从而促进细胞从其锚定位置解离和a。HGF信号传导促进了经由P-联蛋白辅助的途径的细胞^t，导致对保持细胞-细胞接触来说重要的钙黏着蛋白(例如E-钩釉着蛋白)的脱落和重新分布。癌细胞向周围组织的^V还需要对细胞外基质的降解。HGF有助于癌细胞通过对蛋白水解酶(包括M金属蛋白酶，例如MMp2、MMP7和MMp9，和丝氨酸蛋白酶，例如，纤溶酶原激活物uPA)分泌的刺激而侵入。细胞外基质的这种被破坏协助了转移细胞从原发肿瘤位点的迁移，以及协助了细胞在远处入坞位点的侵入能力。HGF还通常^L储存于肺瘤组织的细胞外M中。蛋白水解醉分泌之后，HGF的这种已准备的来源被释放，进一步协助了癌细胞的迁移和^。细胞外基质中的疏酸肝素糖胺聚糖还能独立于HGF与MET结合，并且也可调节运动性。在远处继发性肿瘤生长的位置上，细胞表面分子(例如CD44和整联蛋白)在将转移细胞锚定到侵入的远处位点时发挥作用。HGF表达可诱导CD44的表达。此外，MET在经由其与整联蛋白(例如a6p4整联蛋白)的相互作用而入坞中发挥关鍵作用。2.血管发生针对血管发生因子(正面和负面)的细胞受体可在多种疾病过程中用作为介入点，例如，在其中血管发生性生长因子的平衡被改变和/或血管发生的时机或数量被改变的疾病和病症中。例如，在一些情况，"太多的"血管发生可以是有害的，例如向肿瘤病灶提供血液的血管发生，以及在炎性应答和与异常血管发生相关的其它病症中。肿瘤的生长，或者慢性炎症中增殖的位点，通常都需要募集附近的血管和血管内皮细胞来支持它们的代谢需求。这是因为扩散受到组织中的氧的限制。需要血管发生的示例性病症包括但不限于，实体瘤和恶性血液病，例如，淋巴瘤、急性白血病和多发性骨髄瘤，其中，在病理性骨徵中观察到血管数量增加.针对血管发生的刺激包括低氣、炎症以及改变疾病细胞基因表达的癌基因或肿瘤阻抑物中的遗传损伤。a.血管发生过程血管发生包括若干步骤，这包括循环内皮细胞前体(CEP)的招募、通过生长因子对新内皮细胞(EC)生长的刺激、通过蛋白酶对ECM的降解、EC的增殖和迁移进把(可以是肿瘤位点或炎症导致的其它增殖性位点)。这导致最终形成新的毛细管。此类血管结构上并不一定是正常的。它们可具有混乱的构造和血流。由于血管发生性调控子，例如血管内皮生长因子(VEGF)，和血管生成素Ungiopoietin)的不平衡，导致支持肺瘤性或炎性位点的新血管蜿蜒曲折，以不均匀的直径膨胀，过度分支及分流。血流是多变的，其中低氧和酸中毒的区域导致选出对低氣诱导的消亡具有抗性的变体(通常是由于p53表达的丢失)；以及有增强的对促血管发生性信号的生产。疾病相关的血管壁具有多个开口、变宽的内皮细胞间连接以及不持续的或不存在的基膜；这有助于这些血管的高度的血管通透性，并且缺少功能性的淋巴/排出(drainage)，从而导致间质性高血压。与疾病相关的血管可能缺少血管周细胞，例如周细胞和平滑肌细胞(正常情况下能调控应答于组织代谢需求的血管活性控制)。与正常的血管不同，肿瘤血管的血管内衬并非EC的均质层，而是其通常含有EC和肺瘤细胞的拼嵌；源自癌细胞的血管通道的概念(可被肿瘤细胞分泌的ECM串起来)被称为血管拟态。血管3til^急性炎症位点时，发生类似的情况。血管发生性血管的EC不同于在成AJoL管中发现的休眠ECs(其中仅0.01。/。的EC分化)。在肿瘤血管发生期间，EC是高度增殖性的，其表达多种质膜蛋白，所述蛋白质的特征在于被活化的内皮，包括生长因子受体和粘附分子，例如整联蛋白。肿瘤利用多种机制来促进其血管化，在每种情况下，它们都扰乱正常的血管发生过程，以达到该目的。因此，血管发生性因子生产的增加、内皮和结构的增殖(令新血管系统分支增加)可能在疾病病灶处发生，如在癌症或慢性炎性疾病中那样。b.血管发生中的细胞表面受体细#面受体，包括受体酪氨酸激酶(RTK)和它们的配体，在血管发生调控中发挥作用。血管发生性内皮表达静止的内皮中不曾发现的多种受体。它们包括RTK(即，FGF、PDGF和VEGF受体)和整联蛋白，其与细胞外基质结合，并且介导内皮细胞粘附、迁移和^。经活化的RTK介导的功能包括内皮细胞的增殖、迁移和增强的存活，以及对向肿瘤募集血管周细胞和血源性传播循环内皮细胞前体和造血干细胞的调控.血管发生还涉及其它信号传导途径。基质细胞产生的血管生成素Angl与RTKTie-2结合，并且能促进内皮细胞与细胞外基质和血管周细胞(例如周细胞和平滑肌细胞)的相互作用，以形成密致不漏的血管。PDGF和碱性成纤维细胞生长因,(bFGF，也被称为FGF-2)协助募集这些血管周细胞。Angl是保持成熟血管的休眠和稳定性所必需的，其能防止正常情况下被VEGF和炎性细胞因子诱导的血管通透性。基质细胞或炎性细胞分泌促血管发生性细胞因子、趋化因子和生长因子对于新血管形成有重要作用，其包括bFGF、转化生长因子-a、TNF-a和IL-8。与正常内皮相反，血管发生性内皮过量表达细胞外基质结合蛋白的整联蛋白家族的特定成员，它们能介导内皮细胞粘附、迁移和存活。整联蛋白介导内皮细胞的扩散和迁移，是HGF、VEGF和bFGF诱导的血管发生所必需的，这进而能上调内皮细胞整联蛋白表达。VEGF促进循环内皮细胞前体(CEP)和造血千细胞(HSC)向肿瘤细胞的活动及募集，它们在那里共定位，并且似乎在新血管形成中合作。CEP表达VEGFR2，而HSC表达VEGFR1,这是VEGF或P1GF的受体。CEP和HSC都源自共同前#——成血管细胞。CEP被认为能分化为内皮细胞，而源自HSC的细胞(例如肿瘤相关的巨噬细胞)的功能可能是分泌内皮细胞萌发和稳定所需的血管发生性因子(VEGF、bFGF、血管生成素)，以及活化基质金属蛋白酶(MMP)，这导致细胞外基质的重塑以及生长因子的释放。在小鼠肿瘤模型和人癌症中，CEP和表达VEGFR1或VEGFR的HSC的亚组可在循环中可^t检测到，这可能与血清VEGF水平增加相关。HGF还作用于胚胎发育、伤口愈合和组织再生期间发生的正常的生理性血管发生。c.肿瘤血管发生中的HGF新血管形成是肿瘤生长的关鍵过程。原发性肿瘤生长和转移位点形成中的关键元素是肿瘤促进新的毛细血管从已有的主血管形成的能力。肿瘤相关的血管发生是复杂的过程，其涉及很多不同的细胞类型，这些细胞应答于来自微环境的信号而增殖、迁移、^v和分化。内皮细胞应答于HGF、VEGF、bFGF、Ang2和其它促血管发生性刺激从主血管萌发。萌发是HGF/MET、VEGF/VEGFR2、Ang2/Tie-2以及整联蛋白/细胞外基质相互作用刺激的。源自骨髄的循环内皮细胞前体应答于VEGF迁移至肺瘤，并分化成内皮细胞，而itik干细胞則分化为白细胞，包括肺瘤相关的巨噬细胞，其分泌血管发生性生长因子，并且产生M金属蛋白醃(MMP)，所述基质金属蛋白酶使得细胞外基质重塑，并且释放出结合的生长因子，HGF通过刺激形态发生变化来对血管发生做出贡献，所述变化能促进血管内皮细胞中的血管发生。HGF信号传导刺激内皮细胞中分支小血管发生，并且改变内皮细胞运动性。HGF还能上调血管发生性因子(包括VEGF和IL-8)的表达，以及下调血管发生性阻抑因子(例如血小J^L^应蛋白-1(TPS-1))，所述阻抑因子能抑制内皮细胞增殖以及诱导内皮细胞凋亡。HGF还参与介导内皮到间充质的转变，以及血管发生所必需的小管和腔的形成，虽然经由MET受体的HGF信号传导在与血管发生相关的形态变化中具有重要作用，但是用HGF拮抗物进行的研究已经揭示，HGF的血管发生活性可部分通过FGF和/或VEGF受体的活化来发挥功能。当肺瘤细胞产生于，或转移到无血管区域时，它们生长的大小受到低氧和营养丧失的限制。这种情况还可能发生于其它局部的增殖性疾病中，会导致能选出产生血管发生性因子的细胞。低IU1肿瘤血管发生的关鍵调控子，其导致对VEGF和HGF的转录诱导，这通过涉及对转录因子——低氧诱导因子(HIF)1的稳定的过程来实现。在含氧量正常的条件下，ECHIF-1水平保持于低水平，这是通过蛋白糾介导的破坏实现的，所述破坏受到VHL肿瘤阻抑子基因座编码的泛素E3-连接酶的调控。而在低氧M下，HIF-1蛋白质未被轻基化，与VHL的结合也不发生；因此，HIF-1水平增加，耙基因(包括HGF、VEGF、氧化氮合成酶(NOS)和Ang2)被诱导。如在家族性和散发的肾细胞癌中发生的，VHL基因的损失也导致HIF-1稳定化和对VEGF的诱导。大多数肿瘤由于血流不好都具有低氧区域，这些区域中的肿瘤细胞是HIF-1表达染色阳性的。d.其它血管疾病中的HGF血管发生还在炎性疾病中发挥作用。这些疾病具有增殖性成分，与肺瘤病灶类似。在类风湿性关节炎中，其一种成分特征在于滑膜成纤维细胞的异常增殖，导致血管發形成。血管翳由具有经转化细胞的一些表型特征的滑膜成纤维细胞构成。随着血管發在关节中的生长，其表i^艮多促血管发生性(pro-angiogenic)信号，并且经历很多与肿瘤相同的新生血管发生需求。对于另外的血液4I:供(新生血管发生)的需求是关鍵的。类似地，很多慢性炎性病症也具有增殖性成分，其中，具有其的一些细胞可能具有通常被归结到经转化细胞上的特征。涉及过度血管发生的病症的另一实例是糖尿病增殖性视网膜病变(PDR)(Lip等人BrJOphthalmology88:1543，2004)。PDR具有血管发生性、炎性和增殖性成分。其特征在于视网膜的新血管形成和血管侵入玻璃体腔中，并且还伴随有增殖性管道周围的出血和疤痕。PDR患者玻璃体流体中通常检测到HGF、VEGF和血管生成素-2的表达的提高。这种过量表达可能是疾病相关的血管重塑和分支所必需的，这又支持了该疾病的增殖性成分。VEGF可能在早期对于增加血管通透性来说重要，而HGF则在新血管形成的内皮细胞生长的较晚期起作用。3.HGF同种型和癌症和血管发生拮抗HGF/MET信号传导和/或抑制血管发生的HGF同种型可用于对癌症和血管发生相关的血管疾病的治疗中。通常，血管发生抑制物也是肿瘤生长和转移的有效抑制物，这是通过减少向肿瘤提供氧的血管的密度来实现。但是肿瘤的转移也有无血管生长的肿瘤低氧区域的贡献。这类低氧导致对癌症细胞中MET的上调，其进而导致肿瘤通过对HGF/MET信号传导途径的上调而侵入性生长的潜力。因此，抑制HGF/MET信号传导提供了减少与抗血管发生疗法偶联的转移性生长的另外的好处。本发明提供了能调节肿瘤发生和/或血管发生过程中一个或多个步骤的HGF同种型。肺瘤生长和血管发生途径中靶向HGF同种型的示例性步骤如困3所示。hgf同种型可单次施用、间隔施用或在一种或两种或多种组合物中一起施用，或者按照其其它组合施用。本发明提供的同种型包括与hgf竟争结合met和/或其它受体从而减少循环hgf相互作用的那些。循环hgf的降低可减轻循环hgf在癌症jSOL中的作用(包括抑制肿瘤生长、侵入和肺瘤细胞的转移)及其在血管发生中的作用。hgf同种型还可抑制血管发生，因为其能有助于原发性和继发性肿瘤的生长和转移，以及其它血管发生性疾病。n.示例性的采用hgf同种型进行的治疗本发明拔:供了用hgf同种型治疗与血管发生和/或met异常活化相关的疾病和病症的方法。hgf同种型可用于对多种疾病和病症(包括本文所述的那些)的治疗中。可通过合适的途径施用多肽制剂来实现治疗，所述多肽制剂可以作为多肽被提供于组合物中，或者其可以与靶向剂相连以进行乾向递送，或者其可被包埋于递送媒介物(例如脂质体)中。可选地，可施用编码多肽的核酸，其可作为^酸施用，或者可处于栽体中，所述载体特别是基因疗法栽体。此类基因疗法可通过下述方法离体实现从受试者中移出细胞，向细胞中引入栽体或核酸，然后重新引入经修饰的细胞。还可通过直接施用核酸或栽体体内实现基因疗法。使用本发明提供的hgf同种型进行的治疗包括但不限于，治疗与细胞增殖和新血管形成相关的疾病和病症，所述疾病和病症包括癌症和血管发生性疾病，包括类风湿性关节炎、糖尿病视网膜病变和血管瘤。本文针对用hgf同种型进行的治疗和疗法，描述了示例性的治疗和临床前研究。此类描述仅作示例之用，它们并不被限制于特定的hgf同种型。本领域技术人员可以基于待治疗的疾病的类型、疾病的严重性和病程、是为了预防性还是治疗性目的施用分子、之前的疗法、患者病历和对疗法的应答以及主治医师的判断，来确定施用的分子的合适剂量。1.癌症HGF同种型(包括本发明换:供的那些，例如但不限于，SEQIDNO:9-14所示的HGF同种型(及编码核酸))可用于对细胞增殖性疾病(包括癌症)的治疗。HGF信号传导通过影响与肺瘤增殖和^V相关的细胞过程来贡献于癌症的jUL所述细胞过程例如，细胞生长、对调亡的抑制、细胞形态发生、细胞粘附和细Ji^动性。待治疗癌症的实例包括但不限于，癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性肺瘤。此类癌症的其它实例包括蜱状细胞癌(例如上皮辨状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌和肺的辟状癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃(gastric)或胃部(stomach)癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(livercancer)、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾^>癌、肾或肾脏癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝脏癌(hepaticcarcinomas)、肛癌、阴茎癌和头颈癌。可用HGF同种型治疗的癌症通常是表达MET受体的癌症。可通过本领域已知用如险测MET表达的任何手段，例如，RT-PCR或免疫组织化学，来鉴定此类癌症。用HGF同种型对癌症的治疗可阻抑肿瘤生长和转移。例如，可通过向无免疫应答的无胸腺棵小鼠注射C6神经胶质瘤细胞，来产生肿瘤细胞形成的动物模型.向无免疫应答的小鼠施用HGF同种型(例如每日一次)可减少肿瘤体积，以及减少肿瘤位点的细胞增殖。在被称为Lewis肺癌模型的另一模型(其中，移走原发性肿瘤时爆发远处的转移)中，在切除原发性肺瘤(用野生型Lewis肺癌细胞接种导致的)'l^之前和'l^之后施用HGF同种型，导致肺表面转移数量的减少。HGF同种型可用于治疗展示出实体瘤新血管形成的癌症。肿瘤血管发生对肿瘤的生长和转移来说是关键的。高度血管化的肿瘤(vasculartumor)具有增加的发展出转移的风险。HGF同种型可通过抑制促血管发生因子(除了HGF之外还例如有FGF和VEGF)的作用来抑制血管生长。用HGF同种型治疗癌症的疗法包括在一段时间施用预定剂量的HGF同种型，以控制肺瘤血管化和生长。可4吏用HGF同种型来抑制肿瘤血管发生的示例性癌症包4^但不限于，乳腺癌、结肠癌、胆囊癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、g癌和前列腺癌、淋巴瘤和恶性黑素瘤。2.血管发生性疾病HGF同种型(包括本发明提供的那些，例如但不限于，SEQIDNO:9-14所示的HGF同种型(及编码核酸))可用于治疗与异常血管发生相关的疾病，所述疾病包括，类风湿性关节炎、骨关节炎、银屑病、Osier-Webber综合征、子宫内膜异位症、斯蒂尔病、心肌血管发生、外周血管扩张、血友病性关节炎、年龄相关性黄斑变性、早产儿视网膜病、角膜移植排斥、系统性红斑狼疾、动脉粥样硬化、新生血管性青光眼、脉络膜新血管形成、晶状体后纤维组织形成、骨粗短症、神经纤维瘤、血管瘤、听神经瘤、神经纤维瘤、沙眼、化脓性肉芽肺和糖尿病相关疾病(例如糖尿病增殖性视网膜病变)和血管疾病。被认为是使用HGF同种型治疗的疾病靶的示例性非限制性血管发生性疾病如下文所述。a.关节炎和慢性炎性疾病HGF同种型(包括但不限于本文所述的HGF同种型，例如，含有SEQIDNO:10、12、14、18或20中任何一条所示的M酸序列的多肽)可用于对炎性疾病和病症(包括关节炎、炎性肺病、克罗恩氏病和银屑病)的治疗中。炎性应答的特征在于血管系统的膨胀和增加的通透性以及内皮细胞的活化，接着是毛细血管和小静脉的血管发生性重塑。虽然对血管发生因子的刺激可能是正常炎性应答的一部分，但是慢性炎症通常特征在于，毛细血管密度的显著增加和血管的过度膨胀。炎性组织通常是低氧的，这导致对促血管发生因子(例如VEGF、FGF和HGF)的上调。对血管发生的阻抑可减少对发炎组织的养料供应、阻断炎性细胞1组织，以及防止内皮细胞活化以及细胞因子和细胞外基质蛋白蘇的分泌。在患有类风湿性关节炎和骨关节炎的患者滑液中，可以发现VEGF、FGF和HGF和其它^jfiL管发生性因子水平提高。在类风湿性关节炎中，滑膜血管發增生，并且^关节软骨和邻近的骨头。血管重组发生，导致滑膜中血管密度增加，从而向正发生侵入的血管贤提供了必要的氧和养料。增加的血管通透性还可使得水肺和关节肿胀增加。在骨关节炎中，滑膜中也发生血管重组；但是，并非是侵入的血管翳导致骨和软骨退化，而是由于软骨的直接血管侵入以及在骨软骨连接处的血管化增加，从而发生了软骨细胞肥大和软骨内成骨。用HGF同种型(包括SEQIDNO:10、12、14、18或20所示的一种或多种同种型)对类风湿性关节炎和骨关节炎进行治疗，可改善与这些疾病相关的症状，这是通过抑制导致关节损伤的新血管形成过程来实现的。慢性纤维增生性障碍，例如，炎性肺纤维化展现出失调的血管发生，并且可协助纤维组织形成和细胞外基质的沉积。由于在肺炎症期间被上调的^r管发生性因子的不平衡导致对血管发生的刺氣良生。在患有广泛的间质纤维化的患者肺中观察到了广泛的新血管形成。血管重新分布还可损伤气体交换，这通过有利于发炎组织附i^管形成的肺泡壁中血管密度的减少来实现，这使得血流进一步远离被需要的空间。用HGF同种型(包括SEQIDNO:10、12、14、18或20所示的一种或多种同种型)对肺部炎症的治疗可有助于预防不想看到的血管网络的重新分布以及有助于减少组织炎症。血管膨胀和扩^￡可部分参与其它炎性疾病(例如^^屑病和克罗恩氏病)的JOL牛皮癬型皮肤的特征在于异常增殖的上皮细胞和血管、毛细血管渗漏以及促血管发生性因子(包括VEGF和IL-8)的过量产生。牛皮癣损伤下的血管系统丰富且是伸长的。展示出增加的VEGF表达的皮肤损伤还展现出在下面的内皮中有丰富的VEGF受体表达。类似地，在患有炎性肠病(例如克罗恩氏病)的患者血清中观察到了增加的VEGF水平。增加的血管通透性可有助于巨噬细胞渗入的出现(recruitment)和针对受伤组织的免疫应答的刺激。用HGF同种型(包括SEQIDNO:10、12、14、18或20所示的一种或多种同种型)对炎性障碍，例如4PL屑病和克罗恩氏病的治疗可改善^l性炎症相关的症状。HGF同种型还可用于治疗血管疾病，例如动脉粥样硬化。对血管发生的刺激可作用于动脉粥样斑块的形成和生长，这通过増加的血管膨胀和将巨噬细胞募集到血管损伤上。在动脉粥样斑块位点上炎性应答的增加导致损伤扩大。用HGF同种型(包括SEQIDNO:10、12、14、18或20所示的一种或多种同种型)进行治疗可用于抑制动脉粥样硬化性疾病中斑块的生长。b.眼部疾病HGF同种型(包括但不限于本文所述的HGF同种型，例如，含有SEQIDNO:10、12、14、18或20中任何一条所示的^J^酸序列的多肽)可用于对眼部疾病和病症(包括衰老相关的黄斑变性和糖尿病增殖性视网膜病变)的治疗。年龄相关性黄斑变性与视觉损失相关，这是积累的黄斑玻璃疣(Brusch's膜上的细胞外沉积)和视网膜色素上皮细胞(RPE)功能障碍导致的，所述功能障碍是由于PRE和黄斑玻璃疣上叠復的光感受器中退行性细胞和分子变化导致的。RPE中发生的细胞和分子变化部分由于衰老眼睛中的氧化应激导致，其包括针对细胞因子、基质组织、细胞粘附和凋亡的基因表达改变，以使得可能在RPE-Bruch，s膜边界上诱导病灶炎性应答。例如，在早期年龄相关性黄斑变性中，氧化应激诱导血管发生性因子(包括HGF)在RPE和光感受器层中积累，并且诱导出多种炎性事件，包括NFkB核定位和洞亡。HGF能刺激RPE和血管内皮细胞的分裂和迁移。HGF还能刺激其它生长因子的产生，所述生长因子能促进新血管形成以及直接通过血管细胞侵入细胞外基质来支持新血管形成。用HGF同种型(包括SEQIDNO:10、12、14、18或20所示的一种或多种同种型)对早期年i^相关性黄斑变性的治疗可改善疾病的一种或多种症状。糖尿病增殖性视网膜病变(PDR)的特征在于，视网膜的新血管形成和血管^玻璃体腔中，这导致增殖性管道周围的出血和创伤。HGF表达在PDR患者眼中的玻璃体液中显著升高。VEGF表达也在PDR中被上调，并且可能在早期对于增加血管通透性来iW艮重要，而HGF则在新血管形成所需的内皮细胞生长和活化的较晚期起作用。用HGF同种型(包括SEQIDNO:10、12、14、18或20所示的一种或多种同种型)治疗PDR，可有助于抑制HGF和VEGF途径刺激的视网膜血管生长。c.子宫内膜异位症HGF同种型(包括但不限于本文所述的HGF同种型，例如，含有SEQIDNO:10、12、14、18或20中任何一条所示的^J^酸序列的多肽)可用于治疗子宫内膜异位症。受调控的血管发生是女性月经周期中发生的正常过程；但是，在子宫内膜异位症中，子宫内膜显示过度的血管发生，其特征在于增强的内皮细胞增殖。这些内皮细胞具有高度表达的促血管发生性(XvP3整联蛋白。这种增加的生长通过形成结节或损伤模拟肿瘤生长的一些特征，所述结节或损伤在腹腔(包括卵巢、输卵管、支持子宫的韧带、阴道和直肠之间的区域、子宫外表面和骨盆腔的内衬)区域中植入和生长。还能在腹部手术伤口中，肠上或直肠中，膀胱、阴道、宫颈和外阴上发现伤口。用HGF同种型(包括SEQIDNO:10、12、14、18或20所示的一种或多种同种型)治疗子宫内膜异位症，可有助于抑制过度的子宫内膜血管形成和结节生长。3.痴疾HGF同种型(包括但不限于本文所述的HGF同种型，例如，含有SEQIDNO:10、12、14、18或20中任何一条所示的M,列的多肽)可用于治疗疟疾。疟疾的病原体是痴原虫属(iV似/mw/i'"附)，其感染肝细胞，引发了哺乳动物感染。HGF使得肝细胞对依赖于经HGF受体MET的HGF信号传导的感染易感。HGF诱导的MET信号传导诱导了宿主细胞细胞骨架的形态发生性重排，这是肝细胞内寄生虫的早期发育所必需的.疟原虫属对肝细胞的感染还是由于HGF-MET信号传导诱导的抗凋亡信号的作用。用HGF同种型(包括SEQIDNO:10、12、14、18或20所示的一种或多种同种型)治疗疟疾可预防疟疾感染。4.组合疗法HGF同种型(包括本文提供的那些，例如但不限于SEQIDNO:10、12、14、18或20所示的HGF同种型(和编码核酸))可互相组合4吏用，和/或与其它物质、分子和/或现有的治疗疾病和病症(涉及癌症和其它增殖性障碍和/或异常血管发生的那些，如本文所示和本领域技术人员已知的)的药物和治疗剂組^用。例如，HGF同种型可与治疗癌症的抗肿瘤剂一起施用，所述癌症包括辨状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细iiW癌、肺的腺癌和肺的蜱状癌)、JdU溪癌、肝细胞癌、胃(gastric)或胃部(stomach)癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(livercancer)、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾或肾脏癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝脏癌(h印aticcarcinomas)、肛癌、阴茎癌和头颈癌以及涉及异常MET活化的其它癌症。抗肿瘤剂的实例包括血管发生抑制物、抗增殖剂、骨再吸收抑制剂、DNA修饰/修复剂、DNA合成抑制物、DNA-RNA转录调控子、酶激活剂、酶抑制物、HSP-90抑制物、微管抑制物和其它疗法的附属物。可与HGF同种型组^^吏用的示例性抗肿瘤剂包括但不限于制管张素、盐酸DL-a-二氟甲基鸟氨酸固体、内皮抑制素、染料木黄胡、星形孢菌素、沙立度胺、N-乙酰基-D-鞘氦醇、？荟大黄素、芹菜苷配基、盐酸小檗碱形式、二氯亚甲&磷酸二钠盐、大黄素、N-己酰基-D-鞘氨醇、7p-羟基胆固醇、25-羟基胆固醇、贯叶金丝桃素、小白菊内酯、雷帕霉素、阿仑磷酸钠三水合物、依替膦酸二钠固体、帕米膦酸二钠盐、蚜栖霉素、博来霉素硫酸盐、脱羧铂氨、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、环磷跣胺单水合物、达卡巴嗪、顺-二氯二氨賴(cis-diammineplatimim(II)dichloride)晶体、6,7-二羟基香豆素(6，7-dihydroxycourmain)、美法仑粉末、盐酸甲IU^胺、丝裂霉素C、二盐酸米托蒽載、奥沙利铂固体、氨甲蝶呤、胞嘧啶P-D-阿拉伯呋喃糖苷、5-氟-5'-脱氧尿苷、更昔洛韦、羟基脲、6-mecaptopurine单水合物、盐酸柔红霉素、(-)-鱼藤素、福美坦、福司曲星、吲哚美辛、oxamflatin、酪氨酸鳞酸化抑制物(tryphostin)AG、尿胰蛋白酶抑制物、维生素D3、褪黑激素、盐酸雷洛昔芬、他莫昔芬、曲格列網和/或格尔德霉素。HGF同种型可与抑制MET活化的其它物质一起施用。例如，HGF同种型可与MET受体的其它拮抗物或中和剂一起施用，例如，抗-HGF抗体、未经切割的原HGF、重组的METSema结构域和/或可溶的MET同种型。示例性的可溶MET同种型可包括SEQIDNO:84-114所示的任何一种MET同种型。HGF同种型还可与防止MET二聚化和信号传导的物质组合施用，所述试剂例如显性失活受体、抗METSema抗体、ATP竟争剂、SH2竟争剂、特定转导物的抑制物(例如Ptdlns3K、MAPK或STAT3抑制物)和/或反义序列、核酶、RNAi或使得MET表达沉默的其它分子。还包括，HGF同种型与内含子融合蛋白和其它物质(包括细胞表面受体(CSR)多肽同种型)组合，用于治疗癌症和涉及异常血管发生的其它障碍(见，例如，本文所述的那些，以及在共同未决和公开的专利美国申请序列号Nos.09/942,959、09/234,208、09/506,079;美国临时申请序列号No.60/571,289、60/580,990和60/666,825以及美国专利号No.6，414，130，公开的国际PCT申请号No.WO00/44403、WO01/61356、WO2005/016966中所述的那些)。细胞表面受体同种型可包括MET同种型以及其它细胞表面受体同种型，其包括受体酪氨酸激酶或肿瘤坏死因子受体(例如，VEGFR、FGFR、PDGFR、MET、TIE、Eph、RAGE和TNFR家族的成员)的同种型。它们可包括CSR(包括ErbB2(HER2)、ErbB3、ErbB4、DDR1、DDR2、EpbAl、EphA2、EphA3、EphA4、EphA5、EphA6、EphA7、EphA8、EphBl、EphB2、EphB3、EphB4、EphB5、EphB6、FGFR國1、FGFR-2、FGFR-3、FGFR-4、PDGFR-B、TEK、Tie-l、KIT、VEGFR-1、VEGFR陽2、VEGFR-3、Fltl、Flt3、TNFR1、TNFR2、RON、CSF1R和RAGE)的同种型。此类同种型的实例是赫斯达汀(见，SEQIDNO:186-200)以及包括赫斯达汀内含子部分的多肽(见，SEQIDNO:216-230)以及SEQIDNO:36-185中任何序列示出的同种型和编码核苷狄列。同种型和/或药剂和选用的HGF同种型的组合是待治疗的疾病的函数，其基于对靶组织和细胞和其上表达的受体来考虑。所述组合可以靶向两个或多个细胞表面受体或癌细胞增殖、生长、侵入和转移中涉及的步骤，和/或血管发生和/或内皮细胞维持途径中涉及的步骤，或者可以靶向疾病过程中的两个或多个细胞表面受体或步骤，所述疾病病程例如其中涉及所述途径的之一或两者的任何过程，例如血管发生性疾病，包括糖尿病、癌症和本文提到和本领域技术人员已知的所有其它疾病。两种或多种物质可以作为单一组合物施用，或者可以作为两种或多种(其中多于两种物质)组合物同时、间隔或顺序施用。它们可以被包装为试剂盒，所述试剂盒包含分开的或作为组合的组合物的两种或多种组合物以及任选地具有用于施用的说明书和/或用于施用的装置，例如注射器。5.对HGF同种型活性的评估如果需要的话，可使用动物模型来评价是候选治疗剂的HGF同种型。可被评估的M包括但不限于，效力和浓度应答、安全性、药代动力学、物种间换算(interspeciesscaling)和组织分布，模型动物研究包括例如本文所述的以;M^领域技术人员已知的那些测定。可使用动物模型来获得数据，然后这些数据可被外推至人类剂量，用于设计用HGF同种型进行的临床试验和治疗，例如，可从动物模型结构来推测效力和浓度应答。O.实施例下述实施例在本文中仅作示例性目的，而非意^t本发明的范围加以限制。实施例克隆HGF同种型A.制林使RNA从科隆技术,^司(Clontech)(BD生物科学/^司(BDBiosciences)，Clontech，PaloAlto，CA)和斯菜特因公司(Stratagene)(LaJolla，CA)购得从健康或患病组织的主要人类组织类型或细胞系分离的mRNA。合并等量的mRNA，用它们作为模板，进行基于逆转录的PCR扩增(RT-PCR)。B.cDNA合成在存在40。/。DMSO时，于70。C对mRNA进行10分钟变性，在冰上淬灭。用200ng寡(dT)或20ng随机六聚物在20jil反应体系中进行第一链cDNA合成，所述反应体系含有10%DMSO、50mMTris-HCl(pH8.3)、75mMKCl、3mMMgCl2、10mMDTT、2mM每种dNTP、5ngmRNA和200个单位的Stratascript逆转录酶(斯莱特因公司(Stratagene)，LaJolla，CA)。37。C觯育1小时后，合并来自两种反应的cDNA，用10个单位的RNaseH(普洛米加'公司(Promega)，Madison，WI)进行处理。C.PCR扩增设计用于RT-PCR克隆的正向和反向引物，克隆HGF的剪接变体。选用的正向引物(Fl、F2)侧翼为起始密码子，选用的反向引物(内含子11Rl、内含子11R2或内含子13R1)来自HGF基因组序列的内含子序列(表6)，其中使用了Hiller等人(GenomeBiology2005.6:R58)所述的方法(见表7)。每份PCR反应体系含有10ng逆转录的cDNA、0.2pMF1/R1引物混合物、1mMMg(OAc)2、0.2mMdNTP(阿姆^f7〉司(Amersham)，Piscataway，NJ)、IXXL-緩沖液和0.04U/jdrTthDNA聚合酶(应用生物系统公司(AppliedBiosystems))，总体积为70jil。PCR糾是94°C45秒、60。C1分钟和68。C2分钟的36个循环。反应以68。C20分钟的延伸步骤终止。用来自上述反应的liilRT-PCR产物、F2/R2引物混合物、1mMMg(OAc)2、0.2mMdNTP、IXXL-緩冲液和0.04U/fUrTthDNA聚合酶(应用生物系统7>司(AppliedBiosystems))以70^il的总体积进行嵌套PCR。PCR"^是94。C45秒、60。C1分钟和68。C2分钟的33个循环。反应以68。C20分钟的延伸步骤终止。表6:用于克隆HGF同种型的核酸<table>tableseeoriginaldocumentpage179</column></row><table>表7:用于PCR克隆的引物<table>tableseeoriginaldocumentpage179</column></row><table>D.对PCR产物进行克隆和测序在0.8。/。的琼脂糖皿上对PCR产物进行电泳，用Gelstar(百奥维塔克分子应用公司(BioWhitakerMolecularApplication)，Walkersville,MD)对来自可检测条带的DNA进行染色。用QiaQuick凝胶提取试剂盒(强基因公司(Qiagen)，Valencia,CA)来提取DNA条带，将其连接进pDriveUA克隆栽体(强基因公司(Qiagen)),转化进DH10B细胞(英杰生命科学公司(Invitrogen)，Carlsbad,CA)'在含有25ng/ml卡纳霉素、0.1mMIPTG和60照/mlX-gal的LB琼脂平板上选择重组质粒。对于每次转染而言，随机挑出12个集落，通过用UA栽体引物进行PCR来确定它们的cDNA插入片段的大小。然后用M13正向和反向栽体引物，从两个方向对克隆进行测序。4吏用定做引物，用于穿过缺口区域完成定向测序，对所有克隆进行完整测序，。E.序列分析使用SIM4(用于分析剪接变体的计算机程序)，通过将每条cDNA序列与其各自的基因组序列进行比对，来对选择性剪接进行计算机分析。只有具有规范(例如，GT-AG)供体-受体剪接位点的转录本才被考虑用于分析。编码HGF同种型的克隆被进一步研究(见下文，表8)。G.示例性的HGF同种型^使用本文所述的方法制备的编码HGF同种型的示例性核酸分子示于下表8中。本文提供了编码HGF同种型的核酸分子，其序列示于SEQIDNO:9、11、13、17或19中。示例性HGF同种型的多肽序列示于SEQIDNO:10、12、14、18或20中。表8:编码HGF同种型的核酸分子<table>tableseeoriginaldocumentpage180</column></row><table>鉴于本领域技术人员显而易见知道一些改变，因此本发明将仅受所附权利要求范围的限制.权利要求1.经分离的HGF多肽同种型，其包含HGF配体的K4结构域的全部或部分，其中，所述HGF多肽是内含子融合多肽。2.权利要求1的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述HGF多肽由下述核苷酸序列编码，所述核苷酸序列包括选自关联HGF基因的内含子1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16和17的内含子的全部或部分。3.权利要求1或权利要求2的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述关联HGF基因的序列示于SEQIDNO:l中，或者是其等位变体或物种变体。4.权利要求3的经分离的HGF多肽，其中，所述HGF多M其全长上与SEQIDNO:1的对应部分编码的"IU^酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、搏％或99%的序列同一性，5.权利要求3的经分离的HGF多肽，其中，所述关联HGF多肽与SEQIDNO:1编码的絲酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性。6.权利要求1-5中任意一项的经分离的HGF多肽同种型，其还含有N末端结构域的全部或部分，Kl结构域的全部或部分，K2结构域的全部或部分，或K3结构域的全部或部分或其組合。7.权利要求2-6中任意一项的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述内含子是内舍子11的全部或部分。8.权利要求1-7中任意一项的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述多肽与内含子11编码的至少一个M酸有效AM目连，9.权利要求8的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述多肽包含内含子11编码的三个氨基酸。10.权利要求9的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述HGF多肽与SEQIDNO:10、12、18或20中任何所示的M酸序列具有至少柳％、85%、卯％、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性。11.权利要求9或10的经分离的HGF多肽同种型，其包含SEQIDNO:10、12、18或20中任何所示的Ai酸序列，或是其等位变体。12.权利要求11的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述等位变体包含SEQIDNO:16所示的一处或多处M酸等位变化。13.权利要求9-12中任意一項的经分离的HGF多狀同种型，其中，所述多肽含有与SEQIDNO:10、12、18或20中,所示的数量相同的絲酸。权利要求1-6中任意一项的经分离的HGF多肽同种型，其还含有SerP结构域的全部或部分。14.权利要求13的经分离的HGF多肽，其中，所述内含子是内含子13的全部或部分。15.权利要求14的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述HGF多肽与SEQIDNO:14所示的4U^酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性。16.权利要求14或15的经分离的HGF多肽同种型，其包含SEQIDNO:14所示的4y^酸序列，或者是其等位变体或物种变体。17.权利要求16的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述变体包含SEQIDNO:16所示的一处或多处絲酸等位变化。18.权利要求15-17中任意一项的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述多肽含有与SEQIDNO:14所示的数量相同的樣酸。19.权利要求1-18中任意一項的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述多肽是关联HGF多肽的拮抗物。20.权利要求19的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述多肽与MET受体结合。21.权利要求20的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述多肽抑制选自有丝分裂发生、形态发生和运动发生的一种或多种的MET介导的活性。22.权利要求1-18中任意一項的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述多肽抑制血管发生。23.权利要求22的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述多肽与糖胺聚糖结合。24.权利要求23的经分离的HGF多肽同种型，其中，所^JI胺IMt是硫断素。25.权利要求22的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述多肽与血管发生性分子结合。26.权利要求25的经分离的HGF多肽同种型，其中，所itir管发生性分子选自ATP合酶、血管动蛋白、av卩3整联蛋白、膜联蛋白II、MET、VEGFR和FGFR。27.权利要求22-26中任意一项的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述多肽抑制关联HGF、FGF-2或VEGF诱导的血管发生。28.权利要求1-27中任意一项的经分离的HGF多肽同种型，其中，所述多肽是拮抗性的，并且抑制血管发生。29.药物组合物，其包^权利要求1-28中任意一项的HGF多肽同种型。30.权利要求29的组合物，其包含能有效拮抗关联HGF多肽的量的多狀。31.权利要求30的组合物，其中，所述拮抗关联HGF抑制选自有丝分裂发生、运动发生和形态发生中的任何一种或多种的一种或多种MET介导的活性。32.权利要求29的组合物，其包含有效抑制血管发生的量的多肽。33.权利要求32的组合物，其中，所述多肽抑制关联HGF、FGF-2或VEGF诱导的血管发生。34.权利要求29-33中任意一项的组合物，其还包含抗癌刑和/或抗血管发生剂。35.核酸分子，其编码权利要求1-28中任意一项的HGF多肽。36.核酸分子，其包含关联HGF基因的外显子和一个内含子的至少全部或部分，但是不含内含子5。37.权利要求36的核酸分子，其中，所述内含子含有终止密码子；所述核酸分子编码i^越外显子内^^连接处的可读框；以及所述可读框在所述内含子的终止密码子处终止，38.权利要求37的核酸分子，其中，所述内含子编码被编码的多肽的一个或多个氨基酸。39.权利要求38的核酸分子，其中，所述内含子是内含子11的4^P或部分。40.权利要求39的核酸分子，其包含SEQIDNO:9、11、17和19中任何一条所示的核苷酸序列，或其等位变体或物种变体。41.权利要求40的核酸分子，其中，所述等位变体是SEQIDNO:15所示的等位变化中的任何一种。42.权利要求37的核酸分子，其中，所述终止密码子是所述内含子中的第一个密码子。43.权利要求42的核酸分子，其中，所述内含子是内^"13的4^P或部分。44.权利要求43的核酸分子，其包含SEQIDNO:13中所示的核苷酸序列，或其等位变体。45.权利要求44的核酸分子，其中，所述等位变体是SEQIDNO:15所示的等位变化中的任何一种。46.核酸分子，其中，所述核酸分子选自a)核酸分子，其包含SEQIDNO:9、11、13、17、19中任何所示的核苷酸序列，和其等位变体或物种变体；b)核酸分子，其编码权利要求l的多肽，并且与SEQIDNO:9、11、13、17或19中任何序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性；C)核酸，其在中等严格度或高严格度条件下，以其全长的至少70%与包含SEQIDNO:9、11、13、17或19中^序列所示的核苷,列的核酸分子杂交，其中，被编码的多肽含有K4结构域，并且含有来自内含子的至少一个密码子；d)核酸分子，其包含a)、b)或c)的简并密码子；以及e)核酸分子，其是HGF基因的剪接变体，其中，所述核酸分子包括不是内M5的内含子的4^P或部分。47.权利要求35-46中任意一项的核酸分子编码的多肽。48.栽体，其包含如权利要求35-46中任意一项的核酸分子。49.权利要求48的栽体，其是哺乳动物表达栽体。50.权利要求48的载体，其选自腺病毒栽体、腺伴随病毒栽体、EBV、SV40、巨细胞病毒栽体、痘苗病毒栽体、疱渗病毒栽体、反转录病毒栽体、慢病毒栽体或人工染色体。51.权利要求50的载体，其是游离的或整合进其所被引入的细胞的染色体。52.细胞，其包含如权利要求48-51中任意一项的栽体，53.治疗HGF介导的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用如权利要求35-46中任意一项的核酸分子。54.权利要求53的治疗方法，其中，所述核酸分子被引入栽体用于施用。55.权利要求54的治疗方法，其中，所述栽体是表达栽体。56.权利要求55的治疗方法，其中，所述栽体是游离型的。57.权利要求54-56的治疗方法，其中，所i^达栽体选自腺病毒栽体、腺伴随病毒栽体、EBV、SV40、巨细胞病毒栽体、痘苗病毒栽体、疱疹病毒栽体、反转录病毒栽体、慢病毒栽体或人工染色体。58.权利要求53-57中任意一项的治疗方法，其中，所述核酸体内或离体施用。59.权利要求5S的治疗方法，其中，离体治疗包括将核酸体外施用给细胞，接着将所迷细胞施用给受试者。60.权利要求59的治疗方法，其中，所述细胞来自合适的#^或者待治疗的受试者。61.权利要求53-60中任意一项的治疗方法，其中，所述受试者是人。62.药物组合物，其包含如权利要求35-46中任意一项的核酸分子或如权利要求48-51中任意一项的栽体.63.治疗HGF介导的疾病或病症的方法，所述方法包括施用如权利要求29-34和62中任意一项的药物组合物，64.权利要求63的方法，其中，所述药物组合物含有抑制血管发生、细胞增殖、细胞迁移、钟瘤细胞生长或肺瘤细胞转移的多肽。65.权利要求63或64的方法，其中，所述疾病或病症选自癌症、血管发生性疾病或疟疾。66.权利要求65的方法，其中，所述血管发生性疾病选自眼部疾病、子宫内膜异位症、关节炎或其它慢性炎性疾病。67.权利要求66的方法，其中，所述血管发生性疾病选自类风湿性关节炎、骨关节炎、4H屑病、Osler-Webber综合征、子宫内膜异位症、斯蒂尔病、心l^fe管发生、外周血管扩张、血友病性关节炎、年龄相关性黄斑变性、早产儿视网膜病、角膜移植排斥、系统性红斑狼瘙、动脉粥样硬化、新生血管性青光眼、脉络膜新血管形成、晶状体后纤维组织形成、骨粗短症、神经纤维瘤、血管瘤、听神经瘤、神经纤维瘤、沙眼、化脓性肉芽肿和糖尿病相关疾病，例如糖尿病增殖性视网膜病变和血管疾病、炎性肺部疾病、克罗恩氏病和^L屑病。68.权利要求66的方法，其中，所述癌症选自癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性肺瘤、辟状细胞癌、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌、肺的鳞状癌、JSIM癌、肝细胞癌、胃或胃部癌、胃肠癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈痛、卵巢癌、肝癌、膀耽癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾^Jtl癌、肾或肾脏癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝脏癌、肛癌、阴茎癌和头颈癌。69.缀合物，其包含HGF同种型。70.权利要求69的缀合物，其中，所述缀合物包含HGF同种型或其结构域或其功能性部分，以及来自不同的HGF同种型或来自另外的细il^面受体(CSR)同种型的第二部分；以及所述部分直接相连或通过接头相连。71.权利要求70的缀合物，其中，来自细胞表面受体同种型的所述第二部分是细/l^面受体同种型细胞外结构域的全部或部分。72.权利要求70或71的缀合物，其中，所述细JJfe^面受体同种型是受体酪氨酸激酶。73.权利要求70-72中任意一项的缀合物，其中，所述第二部分是赫斯达汀多肽的全部或部分。74.权利要求73的缀合物，其中，所述赫斯达汀多肽包含SEQIDNO:186-200中任意一条所示的M,列。75.嵌合多肽，其包含HGF同种型的全部或至少一个结构域，以及不同的HGF同种型的或另一细Jf^面受体同种型的全部或至少一个结构域。76.权利要求75的多肽，其中，所述细胞表面受体同种型是内含子融合蛋白。77.权利要求76的多肽，其包含HGF同种型的全部或至少一个结构域，以及细胞表面受体同种型的内含子编码部分。78.组合，其包含一种或多种HGF同种型；一种或多种其它细^*面受体同种型；和/或治疗性药物。79.权利要求78的组合，其中，所述同种型和/或药物处于分开的组合物中或者处于单一组合物中。80.权利要求78或79的组合，其中，所述细Jjfc^面受体同种型是VEGFR、FGFR、DDR、TNFR、PDGFR、MET、TIE、RAGE、EPH或HER的同种型。81.权利要求柳的组合，其中，所述细胞表面受体同种型是MET同种型。82.权利要求78-81中任意一项的组合，其中，所述同种型是内含子融合蛋白。83.权利要求81或82的组合，其中，所述MET同种型包含选自SEQIDNO:85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113和114中任何一种的M酸序列。84.治疗HGF介导的疾病的方法，所述方法包括施用权利要求78-83中任意一项的组合的组分，其中，每种组分分开、同时、间隔、在单一组合物中或以上述的組合来施用。85.抑制肿瘤^或肿瘤转移的方法，所述方法包括施用如权利要求29-34和62中任意一项的组合物。86.抑制血管发生的方法，所述方法包括施用如权利要求29-34和62中任意一项的组合物。87.融合蛋白或缀合物，其包含CD45多肽的片段，所述片段直接或通过接头与蛋白质相连，其中选用CD45的片段以添加糖类或糖基化位点。88.权利要求87的融合蛋白，其中，所述蛋白质是治疗性蛋白质。89.权利要求87或88的融合蛋白，其中，所述融^"白是细lfe4面受体(CSR)或配体同种型，或是细胞因子或CSR或配体或生长因子或激素或其在末端包括另外的JL^酸的形式。90.权利要求87-89中任意一项的融合蛋白，其中，所述CD45多肽包含足够数量的糖基化位点或糖类，由此使得所述蛋白质的血清半寿期增加1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多。91.权利要求87-90中任意一项的融合蛋白或缀合物，其中，所述连接是化学连接，其任选地包括化学接头。92.权利要求91的融合蛋白或級合物，其中，所述接头产生自异双功能接头和/或是光可切割接头。93.权利要求87-90中任意一项的融合蛋白或级合物，其是任选地包括多肽或肽或M酸接头的融合蛋白，94.权利要求93的融合蛋白或缀合物，其中，所述接头含有1-30、1-10、2-10或2-15个氣基酸残基。95.权利要求87-94中任意一项的融合蛋白或缀合物，其中，所述CD45多肽或其片段包含SEQIDNO:272、274、275、276、277、278、279、281、283、285、287、289、291、293和295及其片^L其变体中任何所示的"KJJ^列。96.权利要求87-95中任意一项的融合蛋白或缀合物，其中，所述蛋白质是配体或CSR同种型或其含有另外的氨基酸的形式。97.权利要求96的融合蛋白或級合物，其中，所述蛋白质包含SEQIDNO:3、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、35、37、39、40、42、44、46、47、49、50、52、54、56、58、59、60、61、62、63、64、65、67、69、71、73、75、77、78、80、82、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、114、116、118、120、122、124、126、127、128、130、132、134、136、138、140、142、144、145、146、147、148、150、152、154、156、158、160、161、162、163、164、165、166、167、169、171、172、173、174、175、176、177、179、181、183、185、186、187、188、189、l卯、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、246、247、248、249、250、251及其等位变体中任何所示的M^列。98.权利要求97的融合蛋白或缀合物，其中，所述蛋白质是HGF或其同种型。99.试剂盒，其包含权利要求78的组合，以及任选地，一份或多份针对所述组合的使用说明书及针对使用所述试剂盒的说明书。100.权利要求35-46中任意一项的核酸分子的用途，其用于配制用于治疗受试者的HGF介导的疾病的药物。101.权利要求35-46中任意一项的核酸分子的用途，其用于治疗受试者的HGF介导的疾病。102.权利要求29-34中任意一项的药物组合物的用途，其用于配制用于治疗受试者的HGF介导的疾病的药物。103.权利要求29-34中任意一项的药物组合物的用途，其用于治疗受试者的HGF介导的疾病。104.权利要求78-83中任意一项的组合的用途，其用于配制用于治疗受试者的HGF介导的疾病的药物。105.权利要求78-83中任意一项的组合的用途，其用于治疗受试者的HGF介导的疾病。106.权利要求100-105中任意一项的用途，其中，所述HGF介导的疾病是癌症和涉及不希望的细胞増殖的其它疾病以及涉及不希望的血管发生和炎性反应或应答的疾病。全文摘要本发明提供了配体的同种型，包括含有内含子编码部分的肝细胞生长因子(HGF)的同种型，以及含有HGF同种型的药物组合物。HGF配体同种型以及含有它们的组合物可用于治疗疾病，例如癌症和其它血管发生性疾病的方法中。文档编号A61K38/18GK101356189SQ200680050655公开日2009年1月28日申请日期2006年10月31日优先权日2005年11月10日发明者H·M·谢帕德,I·尼,P·金申请人:受体生物公司