专利名称：植物细胞膜治疗肥胖症的用途的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及包含至少一种细胞膜或其部分的组合物的用途，其用 于降低脂解活性和/或延迟脂肪消化、抑制食欲、减轻体重和/或降低 血脂。本发明还涉及所述疏水性多肽在药物和食品组合物中的用途以 及用所述组合物治疗哺乳动物的方法。
背景技术：
过重和肥胖已经成为世界范围内越来越严重的问题。肥胖导致伴 随的严重疾病的增加，例如糖尿病、动脉硬化、高血压以及某些形式 的癌症。高脂肪饮食、单独食用或加入蔗糖是引起肥胖最重要的因素 之一，因为这些饮食容易促进暴食。因此对于减少肥胖来说，优化对 饮食脂肪的食欲的控制是非常重要的。通过将脂肪注入肠中发现减少
了食物的摄取，表明对脂肪的饱食感主要由肠驱动(Greenberg D.和 Smith, G. P. ， Psychosomatic medicine 58: 559-569, 1996)。在这 些条件下抑制食物摄取的原因是，通过肠粘膜和脂肪的接触在肠中释 放多种饱食肽(satiety peptide)。因为々欠食脂肪的产物-脂肪酸在 其产生后被立即吸收，所以降低脂肪消化率在理论上将优化对脂肪的 饱食感0
肠脂肪消化的关键酶是胰脂肪酶。使用脂肪酶抑制剂(赛尼可， Xenical )作为减肥药物已经得到良好的应用(Sj6strom L等人， Lancet 352: 167-172， 1998)。脂肪酶抑制剂不仅减少体重，还改善 胰岛素耐受性。因此，这类发现为肠内脂肪消化在脂肪饱食感和胰岛 素敏感性中的作用提供了强有力的证据。这种脂肪酶抑制剂的缺点是 它抑制所有类型的脂肪酶，并因为严重损坏脂肪消化导致产生脂肪痢。 因此开发以緩和的方式延迟脂肪消化并且不引起脂肪痢副作用的天然化合物是极端重要的。我们已经发现一种具有高营养价值的天然化合
物，它通过增加饱食激素(satiety hormone)并降低血清甘油三酸酯 水平来延迟脂肪消化、抑制食欲。
发明内容
本发明涉及组合物在降低脂解活性和/或延迟脂肪消化、抑制食 欲、减轻体重和/或降低血脂方面的用途。通过降低脂解活性，脂肪消 化将被延迟，并且食欲被抑制，并因此饱食感增强，防止例如肥胖。
本发明的第一方面涉及组合物的用途，所述组合物包含至少一种 细胞膜或部分，其用于降低脂解活性和/或延迟脂肪消化，抑制食欲、 体重和/或降低血脂。
根据本发明的笫二方面，其涉及所述组合物作为药物组合物的用途。 根据本发明的第三方面，其涉及所述组合物作为食物组合物的用途。 本发明的组合物可以用于调节食欲，例如用于治疗作为疾病或机 能紊乱的代谢综合症。
图1显示了通过来自叶子的生物膜对胰脂肪酶的抑制。来自于菠 菜(实心圆)；苜蓿(黑色方形)；拟南芥(三角形)；油菜(圓环) 和糖用甜菜(叉形)的叶绿体膜。
图2显示了生物膜对胰脂肪酶的抑制来自于马铃薯块茎(方形) 的线粒体，来自于鸡心(实心圆)的线粒体，来自于菠菜叶子(菱形) 的质膜，来自于蓝藻(5^/7ec力oc;^"iO (叉形)的质膜，来自于深红 红螺菌(飾d卿/r/7/咖rw6層)的载色体(三角形)。
图3显示了通过分离的膜蛋白对胰脂肪酶的抑制。集光叶绿素a/b 复合物、LHCII (三角形)、和LHCII的一个ct螺旋具有相同氨基酸序 列(即VIHCRWAMLGALGCVFPELL )的合成多肽(十字形)、转氢酶(菱 形)和细胞色素b6f复合物(方形)。
图4显示了在11天的高脂肪饮食中，在斯普拉-道来(氏)
(Sprague-Dawley)大鼠中用叶绿体膜(类嚢体)治疗的效果，用带 有(方形)或不带有(三角形)叶绿体膜的食物摄取。每日的食物摄 取采用每组(n=8)中的8只动物的均值士SEM。类嚢体治疗开始后的 体重增加、血清甘油三酸酯和血浆胆嚢收缩素的数据显示于表1。
发明详述 定义
在本应用和本发明的内容中，适用下面的定义
术语"细胞膜"意指修饰的或未修饰的天然或合成制备的动物、 植物或微生物来源的生物学细胞膜，其中细胞膜包含完整的细胞膜或 其级分以及其部分或部分细胞膜与完整细胞膜的混合物，例如所述细 胞膜的疏水性肽或疏水性蛋白。细胞膜的部分可以在0.1到0.5 Mm 之间，并且可以仅包含一种或多种跨膜肽。
术语"疏水性肽"意指一种具有至少85%的疏水性氨基酸残基的 多肽，所述疏水性氨基酸残基选自于丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮 氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、蛋氨酸、甘氨酸、半胱氨酸以及 少数带电荷残基的氨基酸例如精氨酸和谷氨酸。
术语"脂解活性"意指脂肪酶的脂肪水解率。
术语"跨膜肽"意指至少是形成蛋白的跨膜部分的氨基酸残基。 该肽有可能是一种跨膜蛋白中的一个或多个跨膜部分，例如包含15 到25个氨基酸残基的延伸(stretch)以及它的多个。
组合物
本发明涉及一种组合物的用途，所述组合物包含至少 一种细胞膜 或其部分，其用于降低脂解活性和/或延迟脂肪消化，抑制食欲、体重 和/或降低血脂。通过降低脂解活性，有可能延迟脂肪消化，抑制食欲、 体重和/或降低血脂。因此，有可能首次有效地调节哺乳动物例如人类 或其它动物的食欲。通过使调节脂解活性成为可能，在肠中脂肪酸的 緩慢形成将促进并且延长饱食感。
该组合物可以至少包含生物蛋白的跨膜部分，其中所述跨膜部分
包含疏水性氨基酸残基。因此该组合物包含生物膜或其部分，其中所 述生物膜至少包含所述疏水性肽。该组合物可以至少包含一种具有大
约15到大约25个氨基酸残基的细胞膜疏水性肽，例如，衍生自同一 蛋白质或不同蛋白质的例如2、 3、 4或5种疏水性肽，并且该组合物 可以包含生物细胞膜，例如存在于所有活细胞中并构成细胞群的大部 分。根据本发明的细胞膜级分的例子是从动物、植物、藻类、微生物 中获得的细胞膜级分，或其部分的细胞膜级分，所述细胞膜级分是合 成的或它们的混合物。在原核生物中，有单或双质膜，并且在光合细 菌中还有光合作用膜、类嚢体。在真核生物中，膜包含质膜、内质网、 高尔基体膜、核膜、溶酶体膜、线粒体膜，并且对于绿藻和植物还有 叶绿体膜(其包含两个外膜和光合作用膜)、类嚢体。生物膜由蛋白 质和脂质组成。所有的生物膜含有内在膜蛋白，所述内在膜蛋白具有 由疏水性氨基酸组成的一种或几种跨膜多肽链。多数脂质(例如磷脂 和半乳糖脂)形成了双层结构，内在膜蛋白/跨膜蛋白嵌入其中。此外， 外在蛋白结合在膜的表面。在植物、绿藻和光合细菌(例如蓝-绿细菌 和紫色细菌)中类嚢体负责光合作用。类嚢体膜由百分比大约为70/30 的蛋白质和脂质构成。在膜中有超过IOO种的不同蛋白；脂质级分主 要是半乳糖脂，其具有主要是属于w-3型的脂肪酸。此外类嚢体膜还 含有一些不同的色素叶绿素a、叶绿素b、叶绿醌、类胡萝卜素P-胡萝卜素，叶黄素(luteine)，紫黄质(violaxanthin )和新黄质 (neoxanthin)。这意味着类嚢体具有高营养价值的组分，并且具有 相同或基本上和类嚢体相同的组分的人工膜也是如此，即，叶绿体和 类嚢体可被用于食物添加剂中和发明中的食物产品中。生物膜的例子 是叶绿体或类嚢体膜，并且该膜可以获得苜蓿(clover )、油菜(rape )、 甜菜(sugar beet)、 蒲公英(dandelion)、拟南芥(爿ra6油，.5" Ma7/a/7a)、玉米、烟草、向日葵、莴苣(salad )、土荆芥(C力e/70/7od/咖)、 滨藜(J"/;7/e力、菠菜和草或其混合物。
相应地，如果组合物包含至少一种疏水性肽，所述肽可以具有16、 17、 18、 19、 20、 21、 22、 23或24个氨基酸残基的长度。肽的例子
显示于SEQ ID NO: 1、 SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3中或其混合物中， 并且所述肽可以可操作地彼此连接。氨基酸残基可以选自于丙氨酸、 缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸(phenylanaline)、 酪氨酸、蛋氨酸、甘氨酸、半胱氨酸以及少量带电荷残基的氨基酸例 如精氨酸和谷氨酸。氨基酸残基和肽可以是合成的或天然存在的，并 且氨基酸残基也是如此，即，它们可以是天然的或合成的，只要它们 是疏水性的或带有带电荷残基。膜级分可以是细胞膜级分，其被一种 或多种酶处理以提供较小片的细胞膜。本发明中所述的生物膜或其部 分可以具有0. 1 jam到大约5 jam,例如0. 1、 0. 2、 0. 3、 0. 4、 0. 5或 l.Ojam(size distribution)的大小分布。
此外，疏水性肽可以具有大约1到50个附加的氨基酸残基，并且 还可以通过酰胺化、酯化、酰化、乙酰化、聚乙二醇化或烷化进行修 饰。
地球上在所有的生物膜中在量(mass)方面而言，光合作用膜是 最丰富的。对于本发明的目的而言植物的绿色叶子构成了分离和制备 大量叶绿体膜的方便且丰富的来源。
可以通过多种不同的方法分离生物膜，例如在那些实施例中提到 的。最常用的是首先机械地碎裂细胞，其产生了具有不同大小和组成 的膜嚢(membrane vesicle)。通过低速离心去除大的细胞碎片，随 后通过差速离心或梯度离心收集上清中的膜嚢。或通过过滤去除大的 细胞碎片，并通过离心收集膜嚢。
还有可能设计不涉及离心的方法。其中首先通过过滤去除大的细 胞碎片。随后絮凝细胞膜，即通过不同操作进行沉淀，所述操作例如
1. 加入酸或碱，4吏pH达到可卩吏沉淀产生；
2. 加入带有大量或少量不同电荷基团的聚合物，其诱导沉淀；
3. 力口热嚢泡(vesicle )悬液，例如40—IO(TC。
4. 通过在水两相系统中分配，嚢泡被浓缩到体积小的相中，收集 嚢泡 (Albertsson P. A. Partition of cell Particles and macromolecules. Wiley, New York, 1986)。
5. 在液液两相系统的界面收集，例如在4中给出的相系统或水-油相系统。
6. 在导致乳浊液的水-油相系统的界面收集。
7. 吸附到固体材料上，例如磷酸钙、二氧化硅、多种离子交换树脂。
8. 冻融，由此形成的水结晶使嚢泡浓缩聚集，融化后絮凝。
可以通过标准化学方法合成疏水性肽，包含通过自动方法合成。 总之，根据标准固相Fmoc保护策略，和HATU N-[二甲基氨基 -1H-1， 2， 3-三唑[4， 5-B]吡啶-1-基甲基]-N-甲基甜菜碱六氟磷酸盐 -N-氧化物(N- [DIMETHYLAMIN0-1H-1. 2. 3. -TRIAZ0L0 [4， 5- B〗PYRIDIN-1 -YLMETHYLELE]-N-METHYLMETHANAMINIUM HEXAFLU0R0PH0SPHATE N-OXIDE)作为偶联试剂或其它偶联试剂例如H0At-l-羟基-7-偶氮苯并 三氮唑(HOAt-1-HYDR0XY-7-AZABENZ0TRIAZ0LE )来合成肽类似物。 用含有适当清除剂的三氟乙酸从固相树脂上切下肽，所述清除剂还脱 保护侧链功能基团。使用制备型反向色谱进一步纯化粗制品肽。可以 使用其它纯化方法，例如分配色i普、凝胶过滤、凝胶电泳或离子交换 色语。可以使用本领域已知的其它的合成技术，例如tBoc保护策略， 或使用不同的偶联试剂等来生产等价的肽。
或可以通过重组体生产的方法合成肽(见例如，美国专利 5,593,866 )。多种宿主系统适用于生产肽类似物，包含细菌，例如大 肠軒菌；酵母，例3口酉良酒酵母(Saccharomyces cerevisiae )或毕赤 酵母(pichia);昆虫，例如Sf9和哺乳动物细胞，例如CH0或C0S-7。 对于每种宿主都有许多可以使用的表达载体，并且本发明不局限于它 们中的任何一种，只要载体和宿主能生产抗微生物肽。在大肠杆菌中 克隆和表达的载体和操作可以在例如Sambrook等人(分子克隆实验 室手册，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spr ing Harbor N. Y. ， 1987)和 Ausubel 等人 (Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Co. ， 1995)的著作中找到。
本发明的组合物可以是任何形式，例如通过方便的方法例如下面
提到的一种方法获得的天然提取物，并被干燥、冷冻或冻干。
本发明的组合物可以被用于食物添加剂并可以和其它成分混合， 其它成分例如脂肪、奶油、人造黄油、油、奶油、奶、乳酪、法国布
里白乳酪(brie)、面粉、汁、软饮料、茶，可以在加入到食物产品 之前或在加入食物产品的过程中混合。
包含所述组合物的所述食物添加剂或食物组合物可以是固体、半 固体或以液体形式。进一步，它可以被冻干、喷雾干燥或低压冻干。 本发明的食物添加剂可以被用于任何类型的食物产品中，也可以单独 使用。食物产品的例子是脂肪、奶油、人造黄油、油、奶油、奶、乳 酪、法国布里白乳酪、面粉、软饮料、茶。其它例子是酸乳、冰洪淋、 蛋糕、面包和调味 品。
本发明的组合物还可以用作药物组分。该药物组合物包含发明的 组合物和作为药物可接受的緩沖液、赋形剂、载体或稀释剂。被治疗 的疾病的例子是代谢综合征，其是疾病或功能紊乱，例如高血压、动 脉硬化、痛风、l和2型糖尿病、癌症和血脂障碍。
"药物可接受的"的意思是不降低活性成分的生物活性的效果的 非毒性材料，即，抗微生物肽。这种药物可接受緩冲液、载体或赋形 剂是本"4页域,斤熟^口的(见Remington's Pharmaceutical Sciences, 第 18版，A. R Gennaro， Ed. ， Mack Publishing Company (1990) 和 handbook of Pharmaceutical Excipients， 第3版，A. Kibbe， Ed .， Pharmaceutical Press (2000))。
术语"緩冲剂"意指一种含有酸-碱混合物的水溶液，用于稳定 pH。緩冲液的例子是三(羟甲基)氨基曱烷(Trizma) 、 N，N-二(羟乙基) 甘氨酸(Bicine)、三(鞋甲基)曱基甘氨酸(Tr icine) 、 M0PS、 M0PS0、 M0BS、三羟曱基氨基曱烷(Tris )、幾乙基哌溱乙磺酸(Hepes )、 HEPBS、 MES、磷酸盐、碳酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、乙醇酸盐、乳酸盐、硼酸 盐、ACES、 ADA,酒石酸盐、AMP、 AMPD、 AMPS0、 BES、 CABS、 二曱砷 酸盐、CHES、 DIPS0、 EPPS、乙醇胺、甘氨酸、HEPPS0、咪唑、咪唑乳 酸、PIPES、 SSC、 SSPE、 P0PS0、 TAPS、 TABS、 TAPS0和TES。
术语"稀释剂，，意指一种水或非水溶液，用于稀释药物制品中的 肽。稀释剂可以是盐、水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇或油脂(例如红 花油、玉米油、花生油、棉子油或芝麻油)中的一种或多种。
术语"佐剂"意指加入到剂型中的任何化合物，用于增加肽的生 物效果。佐剂可以是带有不同阴离子的锌、铜、银盐的一种或多种， 所述阴离子例如但不限于不同酰基组成的氟离子、氯离子、溴离子、 碘离子、硫氰酸根离子、亚硫酸根、氢氧根、磷酸根、碳酸根、乳酸 根、乙醇酸根、柠檬酸根、硼酸根、酒石酸根和醋酸盐根。
赋形剂可以是碳水化合物、聚合物、脂质和无机物的一种或多种。 碳水化合物的例子包含乳糖、蔗糖、甘露醇和环糊精，其被加入到组 合物中，例如，用于便于冷冻干燥。聚合物的例子是淀粉、叶绿体醚、 叶绿体羧甲基叶绿体、羟丙基曱基叶绿体、羟乙基叶绿体、乙基羟乙 基叶绿体、褐藻酸盐、卡拉胶、透明质酸及其衍生物、聚丙烯酸、聚 磺酸盐、聚乙蹄乙二醇/聚乙烯氧化物、聚氧化乙烯/聚丙烯氧化物共 聚物、不同水解度的聚乙烯醇/聚乙烯乙酸酯和聚乙烯吡咯烷酮(所有
不同的分子量)，加入到组合物中，例如，用于粘度控制，用于实现 生物粘附，或用于从化学和蛋白水解降解中保护脂质。脂质的例子是 脂肪酸、磷脂、单、双和三甘油酯、神经酰胺、神经鞘脂和糖脂(所 有不同的酰基链长度和饱和度)，蛋卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化蛋和 大豆卵磷脂，其被加入到组合物中用于和聚合物相似的目的。矿物质 的例子是滑石、氧化镁、氧化锌和氧化钛，其被加入到组合物中来获 得益处，例如液体积蓄的减少或有益的色素特性。
本发明的组合物还可以以聚合物凝胶的形式，其中聚合物例如淀 粉、叶绿体醚、叶绿体羧曱基叶绿体、羟丙基曱基叶绿体、鞋乙基叶 绿体、乙基羟乙基叶绿体、褐藻酸、卡拉胶、透明质酸及其衍生物、 聚丙烯酸、聚磺酸盐、聚乙烯乙二醇/聚乙烯氧化物、聚氧化乙烯/聚 丙烯氧化物共聚物、不同水解度的聚乙烯醇/聚乙烯乙酸酯、和聚乙烯 吡咯烷酮，用于增稠含有肽的溶液。
药物组合物可以接受常规的药物操作，例如消毒和/或可以含有常
规的佐剂，例如防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、緩沖剂、充填剂 等等，例如，如本文中其它部分所公开的。
合适的制剂形式是，例如颗粒、粉末、片、包衣片、(微)胶囊、 糖浆、乳剂、微乳剂，定义为由水、油和表面活性剂、液晶相构成的 光学各向同性的热力学稳定系统，定义为具有远程秩序但是短程杂乱
特征的系统(例子包含层状、六角形和立方形相，连续的水或油)， 或它们分散型、凝胶、软骨、分散相、悬液、奶油、气溶胶、微滴或 可针剂形式的注射溶液和活性化合物的緩释制剂，在这种制剂的辅料 中，通常如上述使用稀释剂、佐剂或栽体。
药物组合物将以药物有效剂量给予患者。"药物有效剂量"的意 思是，与其给药条件有关的足够产生期望效果的一种剂量。确切剂量 依赖于化合物活性、给药方式、疾病性质和严重程度、可能需要不同 的剂量的病人的年龄和体重。给药能以个体剂量单位的形式进行单次 给药，或给药几个较小剂量单位并以特定的间隔多次给予细分剂量。
本发明关注人和其它哺乳动物，例如马、狗、猫、牛、猪、骆驼 等。因此那些方法能用于人类治疗和兽医应用。可以通过确立良好的 标志确定适于这种治疗的对象。
下面，作为发明的实施例，描述了从菠菜中分离叶绿体膜、类嚢 体以及它们在抑制胰脂肪酶活性和减少食物摄取方面的应用。下面的 实施例意图以任何方式、样子、或形式，或确切的或含蓄的举例说明 (但是不限定)本发明。
实施例1
膜制备和膜蛋白质
如Danielsson等人(Biochim Biophys Acta 1608, 53-61 (2004)) 所述的分离的类嚢体，其用于脂肪酶检测。对于制备食物，如下分离 类嚢体在搅拌器中匀浆叶子，并用4层尼龙网(20)am)过滤。在5000g 离心滤液10分钟，收集类嚢体。通过悬于水中进行清洗，并如上述再 离心。脂提取物4 ml类嚢体悬液(3.8 mg叶绿素/mL)和40 mL氯仿/甲醇混合，冰浴1小时。在400Og离心IO分钟后，第二次提取 沉淀，并如上述离心。在空气中干燥沉淀并在冰上用10 mL用于类嚢 体分离的緩冲溶液提取，以去除水溶性蛋白质。混合物在4000g离心 IO分钟，收集沉淀。将其命名为"膜蛋白级分"(图1)。通过将类 嚢体和300 Mg胰蛋白酶(Sigma III型)/mg叶绿素孵育来进行胰蛋白 酶处理，在20 mM磷酸盐緩沖液(pH 7.4)中，37°C 45分钟。加入lmM 苯甲基磺酰氟(PMSF)后，抑制胰蛋白酶，通过900 g离心IO分钟收集 类囊体。i口上述观'J定叶纟录素(Danielsson等人Biochem Biophys Acta 1608， 53-61 (2004))，并且蛋白质依照Bradford (Bradford, M. M.. Anal Biochem 72， 248-54 (1976))。依照Andersson, B. &Albertsson， P.-A. J. Chromatogr. 890， 131-141 (1981)所述制备捕获光能的叶 绿素复合体II (LHCII)。依照(Petit, P. X. ， Edman， P. ， Gardest函， P. & Ericson， I. Biochim Biophys Acta 890， 377-386 (1987))从 马铃薯块茎中制备线粒体。依照(Kjellbom， P. &Larsson， C. Physiol Plant 62， 501-509 (1984))从菠菜叶中制备质膜。依照(Norling， B.， Zak， E. ， Andersson, B. &Pakrasi， H. FEBSUtt 436， 189-92 (1998" 从蓝藻(5y刀ec力ow"")中制备膜，依照(Wang， H. ， Franke， C. C.， Nordlund， S. & Noren， A，丽S Microbiol Lett 253: 273-279 (2005" 从深红红螺菌(/ / o^^p/r"7咖r"6r咖)中制备载色体。在使用前， 仅依照(Wang， H. ， Franke， C. C. ， Nordlund, S. & Noren， A. FEMS Microbiol Lett 253: 273-279 (2005)),通过0.5 M NaCl， 25 mM Tris-HCl， pH 7. 8清洗后再用三羟甲基氨基甲烷(Tris )緩沖液清洗 两次来去除含杂质的水溶液蛋白。依照(Althage， M. et al. Biochim Biophys Acta 1659， 73-82 (2004))从大肠杆菌中制备转氢酶。依照 (Romanowska， E. & Albertsson， P.-A. Plant Cell Physiol 35， 557-568 (1994))从菠菜叶中制备细胞色素b6f。
实施例2
细胞膜的粗制剂(类嚢体)将新鲜的或冰冻的菠菜叶切成片。悬于水中，并通过机械绞碎器
破碎，直到多数细胞被破碎。随后用孔径20jum的尼龙网过滤浆汁。 滤液在2000 x g下离心5分钟。沉淀重悬于水中并在2000 x g下再次 离心5分钟。沉淀冻存或干燥保持。或向滤液中加入沉淀剂通过加 入酸到低pH例如pH 4-5来酸化滤液，这样膜发生沉淀。通过在pH 4-5 下重悬于水中清洗沉淀，并重新使之沉淀。收集沉淀。
实施例3
粗细胞膜级分的制备 '细胞悬于水中，通过绞碎器进一步机械破碎，直到多数细胞被打 破。过滤浆汁来去除未破碎的细胞和细胞壁大片段。滤液在10000 xg 下离心IO分钟。沉淀重悬并在10000 xg下再次离心10分钟。收集 沉淀并冷冻或干燥保存。
实施例4
仅使用过滤从菠菜中制备类嚢体
将新鲜的或水冻的菠菜叶切成片。将这些重悬于水中，并通过机 械绞碎器破碎，直到多数细胞被破碎。随后用孔径20ym的尼龙网过 滤浆汁。向滤液中加入乙酸，直到pH达到4. 7来诱导絮凝。当絮凝沉 积在容器的底部，通过倾析去除上清。随后将絮凝置于孔径20jam的 滤器上。絮凝的类嚢体停留于滤器上，并用pH4. 7的水清洗。收集清 洗后的类嚢体，在调节到期望pH后冷冻或干燥保存。
实施例5
脂肪酶活性的检测
依照 (Borgstr6m B. and Erlanson C. European J. of Biochemistry 37: 60-68， 1973)测定脂肪酶活性:含有pH 7. 0的lmM 三羟曱基氨基甲烷緩沖液、1 mM氯化钙、150 mM氯化钠、4 mM牛磺 脱氧胆酸钠、0.5 jag脂肪酶、1 jug辅脂肪酶的15 ml水溶液。
0. 5 ml三丁酸甘油酯和数量增加的膜被加入到这种混合物中，并 用pH稳定计测定释放出的脂肪酸。
生物膜对脂肪酶的活性的效果显示于图1-2。膜蛋白和合成的多 肽的效果进一步显示于图3。
实施例6
食物产品的制备和对食物摄取的效果 按下面的方法制备蛋糕(500g，按能量42%的脂肪)
成分 质量 明胶 20 g
叶绿体膜(类嚢体，含有1000 mg叶绿素)悬于30 g水中。
在食物加工机中混合淀粉和油(Bosch Universal)。加入其余的固 体成分，随后加入明胶溶液。充分混合后，最后添加带有或不带有叶 绿体膜(类嚢体)的水。在7(TC下在烤箱中焙烤蛋糕两天。
图4显示的实验按下面方法进行。
来自B&K， Sollent腿，Sweden的雌性斯普拉-道来(氏)大鼠(200 g)在控温室中饲养(22士 rC) ， 12小时光照(6: 00-18: 00)/ 12小时循 环，自由接触水，并用标准食物无限制喂养，直到进行高脂肪饮食实
(溶于200 ml水中并在水浴中加热到60-70°C)
酪蛋白 淀粉 玉米油 猪油
维生素混合物:
盐混合物
胆碱
蛋氨酸
纤维素
110 g 190 g 15 g 90 g
5 g 20 g
1 g 1.5 g
47.5 g
步骤验。所有使用动物的操作都得到了兰登地区动物道德委员会(Local Animal Ethics Committee Lund) ， Lund, Sweden的批准。 喂养流程
用于检测食物消耗率的大鼠在笼子中个别饲养，并在实验开始前 给予一周的高脂肪饮食。高脂肪饮食包含饮食，含有能量42. 1%脂肪、 23.9 %蛋白质和34.0 %碳水化合物，热量密度4.7千卡/克，如 (Lindquist et al. Regul. Pept. 1 30: 123-132 (2005)所述。制备 含有类嚢体的高脂肪饮食，以2mg叶绿素每克食物的浓度加入纯化的 类嚢体。每天测定食物摄取，并在喂养期开始和结束测定体重。为了 检测食物泄漏，细心监测笼子。
表1.在斯普拉-道来(氏)大鼠中在高脂肪饮食期间用类嚢体处 理11天的效果。见图4。_
对照 类囊体
体重增力口(g) 60.5 ± 3.55 4 9.9 ± 8.62*
血'清TG (ramol/X0 1.02 ± 0.13 0.62 ± 0.04*
H CCK (pmol/L)0.68 ± 0.08 0.B6 ± 0.12*
值为均值± SE，用*表示对照饮食和类囊体处理之间的显著水平 P < 0. 05，且用**表示对照饮食和类嚢体处理之间的显著水平P< 0. 01。 TG-甘油三酯，CCK-胆嚢收缩素
实施例7
食物乳剂
在用家用搅拌机完全处理之前允许在室温下融化蔬菜(300 g) 0. 5 小时。精细切割为片状的蔬菜加入到家用汁液离心机中获取蔬菜汁。
通过使用装备有不锈钢切刀的手持搅拌器匀浆蔬菜汁(60 g)和 甘油酸酯油(30g)，获得匀滑的美味的乳剂。在O. 5小时(储存在室 温下)和10小时(储存于冰箱中)后视觉检测用绿花椰菜(broccoli )和菠菜汁制备的乳剂中的游离油脂和/或水相。
蔬菜储存0.5小时后的外观储存10小时后的外观
菠菜无游离油相，无游离水相无游离油相，无游离水相
绿花椰菜无游离油相，无游离水相无游离油相，游离水相
检测结果总结于上表中，显示乳剂中的油滴非常稳定，没有发现
融合(无游离的油相)。
权利要求
1.包含至少一种细胞膜或其部分的组合物的用途，其用于降低脂解活性和/或延迟脂肪消化，抑制食欲、体重和/或降低血脂。
2. 权利要求1的用途，其中所述组合物包含至少细胞膜生物蛋白的 跨膜部分，其中所述跨膜部分包含疏水性氨基酸残基。
3. 前述任一权利要求的用途，其中所述组合物包含至少一种具有 从大约15到大约25个氨基酸残基的细胞膜疏水性肽。
4. 权利要求3的用途，其中组合物包含两种或更多种衍生自同一 蛋白或不同蛋白的疏水性肽。
5. 权利要求4的用途，其中所述细胞膜或其部分选自线粒体膜、 原生质膜、细菌膜和植物膜。
6. 权利要求5的用途，其中所述细胞膜或其部分获自动物、植物、 藻类、微生物或被合成或其混合物。
7. 权利要求6的用途，其中所述细胞膜或其部分获自叶绿体。
8. 权利要求7的用途，其中所述细胞膜或其部分是类嚢体膜。
9. 权利要求7-8的用途，其中所述细胞膜部分获自苜蓿、油菜、 糖用甜菜、蒲公英、拟南芥、玉米、烟草、向日葵、莴苣、土荆芥(Chenopodium)、滨藜(Atriplex)、菠菜和草或其混合物。
10. 权利要求9的用途，其中所述细胞膜获自菠菜。
11. 前述任一权利要求的用途，其中所述疏水性肽具有16、 17、 18、 19、 20、 21、 22、 23或24个氨基酸残基。
12. 前述任一权利要求的用途，其中所述疏水性肽是SEQ IDN0: 1、 SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3,或其混合物。
13. 前述任一权利要求的用途，其中所述细胞膜或其部分具有0. 1 Mm到大约5 jum的大小分布。
14. 前述任一权利要求的用途，其中所述疏水性肽具有大约1到大 约50个附加的氨基酸残基。
15. 前述任一权利要求的用途，其中所述疏水性肽通过酰胺化、酯化、酰化、乙酰化、聚乙二醇化或烷化进行修饰。
16. 前述任一权利要求的用途，其中所述组合物进一步包含药学可 接受的载体、稀释剂、赋形剂或緩沖剂。
17. 权利要求16的用途，其中所述药物组合物是颗粒、粉末、片、 包衣片、(微)胶嚢、糖浆或乳剂。
18. 权利要求1-15的用途，其中所述组合物是食物组合物。
19. 权利要求18的用途，其中所述组合物是固体、半固体或以液 体形式。
20. 前述任一权利要求的用途，其中所述组合物是冷冻干燥、喷雾 干燥或低压冻干的。
21. 权利要求18-20的用途，其中所述组合物是在人造黄油、油脂、 乳剂、奶、乳酪、法国布里白乳酪、面粉、汁、软饮料或茶产品中的成 分。
22. 前述任一权利要求的用途，其中所述组合物调节食欲。
23. 权利要求1-17的用途，用于治疗代谢综合症，所述代谢综合 症或是疾病或是机能紊乱。
24. 权利要求23的用途，用于治疗肥胖、高血压、动脉硬化、痛 风、2型糖尿病、癌症和血脂障碍。
25. —种用依照权利要求1-17任一项的组合物治疗患有代谢综合 症的哺乳动物的方法。
全文摘要
本发明涉及包含细胞膜或得自所述细胞膜的疏水性多肽的组合物的用途，其用于降低脂解活性、延迟脂肪消化、抑制食欲、减少体重和/或降低血脂。对脂肪的饱食感主要由肠驱动。通过肠粘膜和脂肪的接触，多种饱食肽被释放，因此抑制食欲和食物摄取。脂肪消化率的抑制能通过延长饱食肽的释放优化对脂肪的饱食感。能通过降低胰脂肪酶的脂解活性可以延迟脂肪的消化。实施例显示植物细胞膜的成分(类囊体)抑制胰脂肪酶的脂解活性。
文档编号A61K36/00GK101193649SQ200680020558
公开日2008年6月4日 申请日期2006年6月9日 优先权日2005年6月10日
发明者佩尔-奥克·阿尔贝特松, 夏洛特·阿尔贝特松埃兰松 申请人:佩尔-奥克·阿尔贝特松;夏洛特·阿尔贝特松埃兰松