乳蛋白的皮肤病学应用的利记博彩app

专利名称：：乳蛋白的皮肤病学应用的利记博彩app乳蛋白的皮肤病学应用本发明涉及分级分离的乳蛋白在治疗痤疮中的应用。症^寻常痤疮为易于识别的皮肤病。它是最常见的皮肤病之一，其中在青少年中约达到100%的发病率。微小的非炎性痤疮损伤可能不会产生太大的烦恼，但在具有较刺眼的炎性结节性痤疮的人中，痛苦、社交窘迫和身体以及心理创伤可以改变生活。在寻常痤疮中观察到的最早期的用显微镜可见的损伤为微小粉刺。这种损伤的特征在于毛嚢皮脂腺单位(由毛嚢和皮脂腺组成)的导管的毛嚢堵塞。皮脂在毛嚢皮脂腺单位中产生并且有些可与更似角蛋白的物质一起被截留在角蛋白堵塞物下面，从而导致毛嚢扩大。在微小粉刺期，毛嚢上皮过度增殖(过度角化)、毛嚢堵塞以及皮脂腺机能亢进是显著的。微小粉刺为其它痤疮损伤的先兆当损伤增加时，它在临床上变得明显并且变成非发炎的封闭性或开放性粉刺(分别为白头或黑头)。在(微小)粉刺可能充满齊疱丙酸杆菌(户ro/7/o//6ac"r/咖sc/7es)时，它分泌趋化和促炎细胞壁和生物副产物。作为结果，炎性细胞围绕着毛嚢，贯穿毛嚢壁分散并且产生破坏毛囊壁的酶。作为回报，这将会导致较大的且通常为炎性的损伤，诸如丘渗、脓疱和结节性嚢肿损伤。其它因素，诸如遗传易感性、精神紧张和饮食也可以影响痤疮的发生和严重程度。当今局部和全身疗法形成了两种用于治疗痤疮的主要治疗策略。根据损伤严重程度的不同，应用单一或联合疗法。一般来说，局部和全身疗法的目的在于抑制过度角化和毛嚢堵塞，减少皮脂产生，减少细菌载量和炎症反应。局部疗法(以凝胶剂、霜剂和溶液制剂的形式)的主要策略包括局部用类视黄醇和局部用抗生素。全身或口服疗法主要用于具有中度至重度形式的炎性痤疮的个体。就男性和女性而言，这些疗法包括口服抗生素和口服类视黄醇。激素疗法，包括口服避孕药有时用于大多数类型的成年和青少年女性中的痤疳。然而，当使用上述疗法时，许多不良副作用明显可见，在使用类一见黄醇时的皮肤干燥、发红和刺激到使用抗生素时增加的抗生素抗性，以及到使用口服避孕药时的体重增加和血栓形成之间变动。后者显然也不适合于男性个体。现絲^US2004/0214750中披露了包含牛乳铁蛋白和植物衍生成分的局部用抗痤疮霜剂，它在给药10周后表现出痤疮的改善。此外，据报导这种局部用霜剂与在向日葵油中包含乳铁蛋白的口服产品的联合给药可导致皮肤病的显著改善。未披露乳铁蛋白的来源和性质，也未披露其剂量。该文件强调局部治疗的重要性，但未提示仅用于口服给药。W098/44940中描述了通过给予乳铁蛋白抑制白细胞介素1(3的活性的方法。提及了各种变应原诱发的疾病，诸如关节炎、哞喘、鼻窦炎、鼻炎和支气管炎，并且包括皮肤病，诸如皮炎、银屑病、紫外线i秀发的炎症、尿布渗和皱紋。"活性组分"的优选的口服剂量水平为50mg-500mg/kg体重/天，相当于约3-40g/成年人/天。就与皮肤相关的病症而言，仅考虑局部用制剂。实验表明乳铁蛋白对肿瘤坏死因子oc的合成具有抑制作用，据报导它支持抵抗变应原诱发的病症的活性，但无实验证据表明乳铁蛋白为对抗皮肤病，诸如痤齊的活性成分。JP-A7-300425中描述了用于预防致病菌(例如大肠杆菌和生龋齿真菌黏着的包含乳铁蛋白的饮料和其它组合物。该文献中还描述了用于预防皮肤炎症和小脓疱的洗剂。本发明的目的在于提供使用天然或天然类活性剂并且具有改善的有效性的治疗痤疮的手段和方法。叔,淑根据本发明发现了可以通过给予含有包含乳铁蛋白的乳清蛋白级分的口服组合物有效治疗痤疮。不需要并且实际上不希望额外的局部疗法。因此，本发明涉及治疗痤疮的方法，包括对患有痤療的人给予有效量的包含乳铁蛋白的乳清蛋白级分。用于本发明方法中的乳铁蛋白优选为天然牛乳铁蛋白。牛乳铁蛋白为80kDa的铁结合糖蛋白，它存在于通常接触正常菌群的外分泌分泌物中乳、眼泪、鼻弟、支气管粘液、胃肠液、子宫颈阴道粘液、精液和唾液。牛乳铁蛋白的通常来源为初乳、乳或乳清。特别有利的物质为富含乳铁蛋白的乳清蛋白级分，其包含50-98wt.。/。的乳铁蛋白，更优选60-95%的乳铁蛋白，剩余部分为其它乳清蛋白或肽类。也可以使用高于95%乃至高于98%的较高水平，但发现它不可产生附加的优点，且另一方面，会增加成本。在具体的实施方案中，所述级分中的乳铁蛋白含量为75-90wt.%，或者为90-98wt.%。在这方面，来源于乳的酪蛋白的蛋白质和肽类，如GMP(糖配糖巨肽)和脉蛋白胨也称作乳清蛋白。优选的是其它乳清蛋白为碱性的，即它们从酸性离子交换树脂中洗脱并且具有高于PH6，尤其是高于7的等电点。另外优选的是其它乳清蛋白具有10kD-60kD的分子量。优选乳清蛋白或乳清肽类包含选自下组的N-末端序列-Ile-Gln-Arg-Pro-Pro-Lys-Ile-Gln-Val-Tyr-Xaa-Pro-Val-Thr-[Asp或Arg]-Gl'"sn-Thr-Pro-Ile(Xaa为任意的氨基酸，特别是Gly、Ala、Arg、Met、Val、Phe或Thr)-Xab-Lys-G1u-Thr-Asn-Tyr-Pro-Asn-Lys-G1y(Xab为Ser、Gly或Asp)。注意到在上述序列中，各个氨基酸残基中的一种或两种可以被交换成另一种氨基酸残基，而且，N-末端可以带有一种或两种额外的氨基酸残基。优选乳清蛋白级分包含低于5wt.。/。的免疫球蛋白，尤其是低于2wt.%。此夕卜，优选的是该级分含乳过氧化物酶的量较低，即低于10wt.%，尤其是低于4wt.%。优选乳过氧化物酶与乳铁蛋白的重量比低于0.4，更具体地说，为0.01-0.2。乳清蛋白级分中的乳铁蛋白优选具有50-400ppm铁(Fe3+)，更优选75-300ppm且最优选100-200ppm的铁含量，以纯乳铁蛋白为基准。照此，乳清蛋白级分中的铁含量优选占乳清蛋白重量的40-350ppm，更优选60-250ppm，且最优选80-180ppm。乳4失蛋白优选为天然的，即基本上未变性的。可以通过使用亲和色语法、离子交换色谱法、超滤等及其组合对乳清蛋白进行分级分离而获得含乳铁蛋白的级分。所述的方法一般从乳制品开始，通常首先例如通过微量过滤或离心进行脱脂。该方法可以进一步包括加载于酸性离子交换树脂上，洗涤，洗脱碱性级分，浓缩，使碱性级分脱盐并且干燥(例如喷雾干燥)。乳制品的来源可以为人、母牛、山羊、绵羊、美洲驼、牦牛、水牛、马等。乳制品可以为乳、浓缩乳、脱乳糖乳、巴士灭菌乳、热杀菌乳；乳清、脱脂乳清、干酪乳清、酪蛋白乳清、乳酸乳清、浓缩乳清、脱乳糖乳清、超滤或纳滤乳清、WPC(乳清蛋白浓缩物)和其它包含大部分或所有非完整酪蛋白的乳蛋白的乳级分。离子交换树脂可以为强酸类型(磺酸类型)或弱酸类型(羧酸类型)。优选后者。优选的是大孔合成聚合物，例如基于聚曱基丙烯酸酯的聚合物。典型类型包括来自Mitsubishi(意大利)的SepabeadsFP-SP和来自Riihm&Haas(USA)的Amber1iteIRC50。尽管天然牛乳铁蛋白为用作活性剂的乳清蛋白级分的优选成分，但是其一部分(例如可达50%(重量)或50%(重量)以上)或全部可以被其它乳铁蛋白替代，诸如来自其它哺乳动物(人和其它灵长类、马、山羊、骆驼等)的乳铁蛋白，动物或植物中产生的重组乳铁蛋白(人、牛等)，截短的乳铁蛋白，乳铁蛋白衍生的肽类(乳高铁蛋白、lactoferrampin等)、如待审申请PCT/EP2004/001849中所述的酸处理的乳铁蛋白和WO0072874中提及的固定化乳铁蛋白。乳铁蛋白尤其可以为含乳铁蛋白的液体(乳清、乳、初乳)的组成成分或如EP869134Al中所述的包含乳铁蛋白和乳衍生生长因子的组合物。可以使用乳铁蛋白和其它乳清蛋白本身或将其与其它活性剂或支持成分合并。可以使用的附加成分的非限制性实例为哺乳动物^f汙生的生物活性蛋白(诸如乳过氧化物酶)、糖蛋白、酶、糖类、多糖类(例如果胶、羧曱基纤维素、角叉藻聚糖、肝素)、脂肪酸、肽类、氨基酸、生长因子、溶菌酶、富组蛋白、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白、酪蛋白、酪蛋白磷酸肽(CPP)、富含一种或多种特异性，例如(条件性)必需氨基酸的肽类或肽混合物，所述的氨基酸如谷氨酰胺、半胱氨酸、甘氨酸、精氨酸、色氨酸等；抗高血压肽类、类视黄醇、维生素和激素；非动物化合物，即植物、重组、化学或其它来源，抗生素、纤维、益生菌剂、益生元、类视黄醇、维生素、激素、细菌素、乳酸和草药。可以按照用于口服药物或营养组合物的常规方式配制包含乳铁蛋白的蛋白级分。如果所给予的组合物为营养组合物，那么它可以为食品补充剂、棒条、饮料、酸乳酪、糖果、口香糖等。这类食品包含糖类和非乳清蛋白，诸如酪蛋白中的至少一种，任选连同另外的食品成分，诸如脂肪、纤维、维生素、矿物和任选的添加剂，诸如矫味剂、增甜剂、稳定剂等。优选包含乳铁蛋白的乳清蛋白级分与糖类和/或非乳清蛋白的重量比为1:4-1:100，更优选为1:9-1:49。如果组合物为药物组合物，那么它可以为例如片剂、颗粒、粉末、糖浆剂、胶嚢、溶液、凝胶、锭剂等，其包含常用的赋形剂，诸如水、淀粉、淀粉衍生物(例如羟基乙酸淀粉钠)或淀粉级分、微晶纤维素或纤维素衍生物、果胶、其它多糖类、乳糖、其它糖类等。片剂，尤其是咀嚼片构成本发明的药物组合物的优选实施方案，因为据认为通过口腔粘膜而非胃肠道吸收是一个额外的优点。咀嚼片优选为软的并且优选具有至少750mg/单位的总重量。优选的是片剂中(还原)糖类的含量相对较低(例如低于25wt.%，尤其低于10wt.。/。的干片剂物质)，并且赋形剂选自例如非还原糖类、多糖类和糖醇类，其占组合物的至少50wt.%乃至至少70wt.%。还可以给固体剂型包肠溶衣。尽管其它全身给药途径可能是合适的，诸如直肠、鼻部或非肠道途经，但是优选的给药途径剂量水平取决于各种个体因素，诸如年龄、身体和营养情况、痤疮的严重程度，这些可以由技术人员或临床医师评估。典型剂量水平在10mg-2g包含乳铁蛋白的乳清蛋白级分/患者/天的范围，优选20mg-1.2g。为了进行有效治疗，优选的是至少40mg或优选至少60mg乃至至少80mg/天的剂量，例如40-800mg或可达600mg乳4失蛋白/患者/天。就体重而言，剂量水平一般为0.l-50mg乳铁蛋白/kg/天，优选0.25-25mg，更优选0.5-15mg/kg/天乃至乃至1-10mg/kg/天。可以以单剂量单位或优选在多个每日剂量范围内，例如2-4次/天给予每日剂量。因此，如果每天使用单剂量单位(例如片剂)，该剂量单位包含至少10mg，但优选至少4Qmg乳铁蛋白/单位。就每天两个剂量单位而言，该剂量单位包含至少10mg，但优选至少20mg并且甚至更优选至少30mg/单位。使用更频繁的每日剂量，乳铁蛋白/单位的量是类似的，使得每日总量优选为至少40mg，更优选至少80mg。治疗可以持续几天到几个月的一段时间，例如1周-6个月，或如果必要，可以持续更长的时间。在治疗期间可以使剂量水平保持恒定。或者并且有利的是，治疗可以以相对高的剂量开始，例如以上述水平至两倍于这些水平，持续例如1-6周的第一段时间，随后是相对低的剂量，例如上述水平的一半，持续例如4周-l年乃至更长时间的第二段时间。可以对患有或易患痤疮的任何受治疗者给予该治疗。就在不进行治疗的情况下趋向于迟早还会增加的严重性痤疮而言，还可以给予作为抑制痤疮进一步扩大的方式给予治疗。还可以在月经期内适当地给予抗痤齊治疗。本发明还涉及包含乳铁蛋白的组合物，其进一步包含以总蛋白质计2-25wt.%的碱性蛋白，它们具有如上所述的10-60kD分子量。本发明进一步涉及包含至少10mg乳铁蛋白或根据给药方式的不同高于上述提及的量(单或多个每日剂量)的口服剂量单位。该剂量单位可以为如上所述的药物组合物(例如片剂)或营养组合物。紹辦逸舍#乙获蛋冷^为、W辨务将切德奶酪乳清在60C热杀菌20秒并且使用反渗透法浓缩3-5倍。在30°C的最高温度和pH6.2下进行浓缩步骤。使浓缩乳清通过载有AmberliteIRC-50型酸性离子交换树脂的柱。以6-8个床体积/小时和低于20个床体积/循环进行上柱。在这些条件下，可达约2克的乳铁蛋白结合每升离子交换树脂。随后，用至少4个床体积的水洗涤树脂，接着使用低于0.5MNaCl的盐溶液洗涤。使用1MNaCl或1M以上NaCl洗脱所需级分。不一定在洗脱緩冲液中包含緩冲剂。使洗脱级分脱盐并且使用如本领域中所知的超滤/渗滤浓缩。接下来，微量过滤浓缩物并且喷雾干燥。通过运行PAGE凝胶电泳(2G%丙烯酰胺)和在PVFD膜上对凝胶进行蛋白质印迹法分析产物。随后切下主要的条带并且进行自动化顺序Edman降解法以便确定肽或蛋白质的前10个N-末端氨基酸。,滋辦i7;逸舍-施浙/哞获存的逸合浙W^浙将下列组分用于生产包含50mg乳铁蛋白的片剂。<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>片剂的制备将除硬脂酸镁外的所有组分混合10分钟。然后加入该硬脂酸盐并且持续混合3分钟。通过直接压制制得5/8大小的咀嚼片。《滋辦///;#乙清蛋^^为、#症4控浙#^的谬力研宏在本研究中登记在册的有44位青少年(23位男性和21位女性，其中平均年龄为15.3岁(13-19岁))。受治疗者服用4片包含含有乳铁蛋白的牛乳清蛋白级分的咀嚼片(按照实施例l制备的)，剂量为251mg乳清蛋白级分/天(200mg乳铁蛋白/天)，持续连续的12周，早晨服用2片且晚上服用2片。给受治疗者拍正侧面照片并且由皮肤病学家评价。在开始治疗前的第1周时以及在第2、4、8和12周时采集受治疗者数据。将本研究设计为12周，到第8周时评价照片并且在第12周时面试青少年。对前额、左颊、右颊、下颚和鼻子上的黑头(开放性粉刺)和非黑头(包括白头(封闭性粉刺)、丘渗、脓疱和结节嚢肿性损伤)的数量进行计数。每周对每位受治疗者的面部区域上的黑头和非黑头粉刺计总数。结果如下表1中所示。所有这些连续性差异是非常显著的(在所有病例中P<0.001)。在第12周面试时，80%的青少年报告有改善，即痤奄减少并且希望持续该疗法。90%以上的青少年研究人群将该疗法推荐给患有痤疮的其他人。此外，这些青少年还报告了额外的有益效果。他们感觉更健康并且较少或完全没有烦恼(与未服用乳铁蛋白的家庭成员或朋友相比)。<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>获自本研究青少年的数据表明口服给予的牛乳铁蛋白能够基本上减轻寻常痤疮。使用回归模型未发现随时间的改变受性别或年龄影响的证据。这意味着男性和女性遵循类似的纵向模式，13-19岁的整个年龄段的受治疗者都如此。未报告不良副作用。大部分研究人群宣布了摄取乳清蛋白级分的有益效果。他们注意到痤疮减轻，感觉更好和更健康并且决定持续摄取该片剂。总之，本研究的结果形成了确定摄取包含乳铁蛋白的天然牛乳衍生的生物活性乳清组合物作为用于预防和治疗寻常痤齊的新策略的地位的坚实基础。与目前全身和局部疗法(基于抗生素、类视黄醇和其它化合物)对比，补充乳铁蛋白/乳清组合物并不伴随副作用并且可以持久使用。,滋辦/K'#乙获蛋^^遽^#不^^秀承4'^#^^^使用下表中指定的用量(以mg/片计的用量)制备咀嚼片A和B(分别包含6.25和25mg乳铁蛋白/片)。如实施例I中所述制备该片剂。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由下列组分(以g计的用量)制备局部用霜剂c。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>混合第1相并且加热至75。C。然后将该混合物緩慢冷却，同时搅拌。在50。C下加入第2相。将所得混合物分装入试管中，每只试管中30g，包含14.2rag乳铁蛋白/g。四十位(40)受治疗者，年龄为12-19岁，女性和男性，满足下列标准-轻度到中度痤疮；-目前未服用治疗痤疮用的口服处方药或OTC药；-没有具有颜面皮肤表现的慢性病；-在本研究前1个月内未使用抗生素治疗过；-未妊娠、授乳或打算怀孕；-不具有已知的对牛奶或乳制品的过敏反应；将他们分成三组第1组(N-14;9位男性，5位女性；平均年龄为15.0岁；平均痤疮持续时间为3.9年)受治疗者接受包含乳铁蛋白的片剂A，其中推荐早晨服用2片和晚上服用2片，相当于25mg乳铁蛋白/天，持续6周。第2组(N-14;7位男性，7位女性；平均年龄为15.1岁；平均痤疮持续时间为3.8年)受治疗者接受包含乳铁蛋白的片剂B，其中推荐早晨服用2片和晚上服用2片，相当于IOOmg乳铁蛋白/天，持续6周。第3组(N-12;6位男性，6位女性；平均年龄为15.2岁；平均痤疮持续时间为3.6年)受治疗者接受包含乳铁蛋白的片剂A,其中推荐早晨服用2片和晚上服用2片，相当于25mg乳铁蛋白/天，同时局部施用乳铁蛋白霜剂C，每天局部施用2.45ml。在T-O时，对受治疗者的正侧面拍照片并且由独立的皮肤病学家评分以及对面部上的发炎和有疯点的区域进行观察。受治疗者接受片剂或片剂与霜剂(根据使用说明)和记录在本研究过程中其体验，包括灼烧和瘙痒感觉的调查表。此后的2、4和6周时，给受治疗者拍照并且再次观察并以及采集其完成的调查表。由于可能的季节性影响，所以可以仅评价相对结果。将结果概述在下表2和3中治^2^^症4^M^、^#、應4、V、潜和it^;种发炎^夢^谬一#一^##伊哞在值(^ff浴^f^,卒义^现,餘刺乂(^在值J<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>结果表明使用25mg乳铁蛋白/天口服治疗不会产生可察觉到的总体效果并且对封闭性粉刺产生中度有利的效果，未考虑到季节性影响。使用35mg乳铁蛋白/天额外局部治疗未改善此效果并且实际上可能产生反效果，尤其是在对开放性粉刺和瘙痒的效果方面。然而，以100mg乳铁蛋白/天口服治疗具有显著改善的效果，特别是对非炎性现象(开放性和封闭性粉刺)。权利要求1.包含乳铁蛋白的乳清蛋白级分在制备治疗痤疮的口服组合物中的应用。2.权利要求1的应用，其中所述的乳清蛋白级分包含50-98wt.%的乳铁蛋白。3.权利要求1或2的应用，其中所述的乳清蛋白级分进一步包含具有IOkD-60kD分子量的碱性蛋白或肽类。4.权利要求1-3中任意一项的应用，其中以40mg-2g乳铁蛋白/患者/天的剂量水平给予所述的乳清蛋白级分。5.权利要求4的应用，其中以60-800mg/患者/天的剂量水平给予所述的乳清蛋白级分。6.权利要求l-5中任意一项的应用，其中将所述的乳清蛋白级分作为片剂给予。7.权利要求1-5中任意一项的应用，其中将所述的乳清蛋白级分作为至少包含糖类和/或非乳清蛋白的食品或饮料给予。8.治疗痤疮的方法，包括对患有痤疮的人口服给予有效量的包含乳铁蛋白的乳清蛋白级分。9.包含至少1Qmg乳铁蛋白的口服剂量单位。10.权利要求9的口服剂量单位，包含至少20mg乳铁蛋白。11.权利要求9或10的口服剂量单位，其为片剂。12.权利要求11的口服剂量单位，其包含至少50wt.y。的非还原糖类、多糖类和/或糖醇类。13.权利要求9或10的口服剂量单位，其为营养组合物，该组合物至少包含糖类和/或非乳清蛋白并且包含含有50-98wtj乳铁蛋白的乳清蛋白级分，含乳铁蛋白的乳清蛋白级分与糖类和/或非乳清蛋白的重量比为1:4至1:100。全文摘要本发明提供了治疗痤疮的方法，包括对患有痤疮的人口服给予有效量的包含乳铁蛋白且优选另外包含特异性乳清蛋白的乳清蛋白级分。乳铁蛋白优选为天然牛乳铁蛋白且以10mg-2g乳铁蛋白/患者/天的水平给予乳清蛋白级分。文档编号A61K35/20GK101166535SQ200680014421公开日2008年4月23日申请日期2006年3月14日优先权日2005年3月15日发明者A·L·沃尔特,R·德瓦尔德申请人:坎皮纳荷兰控股有限责任公司