专利名称：吸血虱的控制的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及一种控制寄生性吸血虱群的组合物和方法，尤其涉及对寄 生在人体、动物和鸟类身上的吸血虱的控制。寄生性吸血虱以宿主的血液、血清或淋巴液为食，并致使其感到剌激、 搔痒并患病。
一些种群还是严重疾病的载体， 一般而言任何吸血虱都是令人生厌的。例如，普通的人头上的虱子，人头虱(即Pediculus humanus capitis)和人阴虱都是吸血性皮外寄生物，它们会导致长虱子的人患上虱 病，蜂蛰似的剌激以及搔痒症。人身体上的虱子，人体虱(即P. humanus) 会导致刺激和搔痒症并且也是斑疹伤寒症一一种潜在致命性疾病的载 体。其它种类的外寄生性吸血虱也是疾病微生物的潜在载体，并会对家畜 造成威胁，尤其是对于密集型动物伺养群体、马厩和禽舍等。寄生性吸血虱是其寄生的动物和鸟类的致病甚至致死因素并导致家 畜产业的巨大经济损失。例如，根据Lapage (1962) * "吸血虱对宿主的主要影响源于它们所 引起的剌激。在寒冷的冬季宿主之间会更紧密地接触，因此在冬季时吸 血虱最多，并且在该季节食量减少，这也利于其蔓延。宿主变得坐立不 安且寝食难安，由于它们对受吸血虱刺激的身体部位进行撕咬和抓挠， 这样会伤害或损毁其羽毛、毛发或兽毛。由此所导致的健康状况的恶化会使它们对细菌或其它疾病更加敏感。 鸟类的蛋产量和奶牛的产奶量会下降。在哺乳动物宿主抓挠过程中，会
对在动物身上产生擦伤或伤口，而在羊身上则会导致羊毛的毁损，并且 吸血虱的排泄物也会对其造成污染。皮毛会变得粗糙和蓬松，并且如果 刺激严重的情况下，毛发会变得粗糙无光泽。牛犊的过度添舐会导致在胃中形成毛团。绵羊脚虱常见于其悬蹄周围并且严重感染会导致跛足。猪虱(Haemat叩inus suis)会通过从死猪传递 至健康猪的方式传播猪瘟。Lapage， Geoffrey. ( 1962) . Monnig，s Veterinary Helminthology and Entomology.第5版，balliere， Tindall和Cox 7&8 Henrietta Street, London.600pp。此处所采用的词"人虱"(h醒nlice)和"人虱"(human louse)指的是虱毛目的虱子，尤其是虱科的吸虱亚目的成员，其包括人体虱，阴虱 以及人头虱。头虱，尤其是人头虱(Pediculus humanus capitis),具有高速繁殖的 能力，雌性虱能产很多卵。在卫生标准不合格的地区，虱子感染最为严 重。然而，即便卫生标准较高，头虱仍旧会造成重要问题，特别是在小 孩玩耍群体、幼儿园以及寄宿学校中。
背景技术：
化学方法迄今为止现有技术中所采用的吸血虱控制方法已经被证明仅仅是部 分有效的。目前，这些方法包括在感染的人、动物或鸟类中使用各种各 样的制品，这些制品包括有毒的有机膦酸盐(马拉松、马拉硫磷)、拟除 虫菊酯、增效除虫菊酯、印楝和/或其它植物油，所有的这些制品都是具 有不同功效的化学杀虫剂。其中一些化学品还会对使用了该化学品的感 染者的家庭成员以及保管员、农夫和害虫控制工作人员造成严重的健康 危害，这些健康危害除了对使用该化学品的宿主形成直接的毒性作用外
还有诸如皮疹、刺激或瘙痒等。已经知道在小学生中人头虱(Pediculus humanus capitis)感染速度最快，他们的体重普遍小于50kg，因而很显然 应用这些毒性化学品不是优选地治疗方法。现有技术中控制人体吸血虱的方法包括给患者使用诸如马拉硫磷、氯 菊酯、由胡椒基丁醚(poperonyl butoxide)协同增效的除虫菊酯以及生 物丙烯菊酯等化学品。(Medicines Evaluation Committee Report(2003 )"A Review of the Regulation of Head Lice Treatments in Australia"澳大禾ll亚 药品管理局，堪培拉，澳大利亚)。在上述公开出版物中列出了这些治疗方法的缺陷和害处，并对其作如下描述采用马拉硫磷的治疗方法需要将受感染的成人或小孩长时间暴露在 杀虫剂中达几个小时之久，这已经被观察到严重的有害影响，也记录了缺乏功效的可能性，这源于虱群对马拉硫磷(Medicines Evaluation Committee Reporet (2003))的抗性。采用氯菊酯、协同增效的除虫菊酯以及生物丙烯菊酯的疗法来控制人 的头虱，这已经被证实副作用的发生率低，这主要是指搔痒症或皮疹， 但应该考虑到由于虱群对杀虫剂产生抗性使得这些化学品的疗效较低("Medicines Evaluation Committee Report (2003 )，，)。在澳大利亚，出售草药提取物和精油的混合物(例如在其中混合了或 者没有混合松果菌、purpura、鸭嘴花、Stemona sessifolia提取物的白千 层油，桉叶油、薰衣草油、迷迭香油、天竺葵油、百里香油、香茅油、 八角油、柠檬油、柠檬草油)等来减少人头虱感染，并且有超过20草药 混合物产品被澳大利亚药品管理委员会列入药品名单。然而，并没有充 分的证据表明这些用于控制头虱的草药混合物可接受的有效剂量(Medicines Evaluation Committee Report (2003))。而高浓度的上述油类 会引起皮肤刺激、刺痛或灼伤，并不能自行假定这些草药产品是安全的(Medicines Evaluation Committee Report (2003 ))。
上述治疗方法的缺陷和副作用是人所共知的，并由此引发了在全球范 围内寻找对患者更有效更安全的替代疗法。这些对头虱新疗法的寻找包 括1. 对头虱影响作用的体外研究头虱在跳蚤的兽医学疗法中经历2 小时，即将其暴露在吡虫啉和氟虫腈中2小时。这些研究结果表明， 即便在浓度为0.25%的氟虫腈中暴露2个小时头虱的死亡率也只有97%。该研究的作者认为疗效的欠缺可能是源于头虱对氟虫腈和六氯苯的交叉抗性，因为已经阐明头虱种群对六氯苯具有抗性。(Medicines Evaluation Committee Report (2003 ))。2. 在另一项研究中，28名7-12岁的女孩口服3.5mg/kg剂量的左旋 咪唑(驱虫药)， 一天一次持续十天。尽管延长了持续时间并增大 了化学品的剂量，所记录的有效率仅达67% 。 ( Medicines Evaluation Committee Report (2003 ))。3. 十名患者口服80mg的磺胺增效剂/400mg磺胺甲恶唑一天两次， 为了达到可接受的头虱控制疗效，至少需要服用3天。在另一项研 究中，以等同于摄入10mg磺胺增效剂/kg/天的速度口服磺胺增效剂 /磺胺甲恶唑10天，其与1%氯菊酯的常规治疗方法治疗7天作对 比，或者与采用上述两种控制头虱的治疗策略的联合疗法作对比。 在随后4周的检测中发现，磺胺增效剂/磺胺甲恶唑疗法有效率仅达 78%，氯菊酯疗法为72%，联合疗法则为92.5%。在该试验中记录 有严重的副作用，包括油磺胺增效剂/磺胺甲恶唑导致的恶心、呕吐 以及瘙痒过敏反应 (Medicines Evaluation Committee Report(2003))。4. 以相当于8mg磺胺增效剂/kg/天的速度口服磺胺增效剂/磺胺甲恶 唑12天，同时联合常规用量的1%六氯苯洗发液，以此与单独使 用六氯苯洗发液的疗效进行比较。在随后的两周中，六氯苯疗法的 %，而联合疗法的疗效率则为91.3%11禾[1 86.7%,复治的疗效分别为91.3%和97.8%。先撇开在这些试验性治疗中疗效的欠缺以及患者的副作用反应不说， 父母或护理的亲属也不见得会接受让他们的小孩口服显著剂量的化学杀虫剂长达12天的要求。现有技术中控制吸血虱的化学方法除了具有上述的局限性外，由于其 仅提供不完全的和短期的保护以及由于吸血虱演化出对这些化学品毒性 作用的抗性，使用这些化学杀虫剂总体而言是不牢靠的。控制吸血虱的其它方法包括采用电梳子通过电死的方式杀灭虱子。这 种方法一般被应用于人的头虱，人头虱的治疗中。即使是为了使该方法 具有中等的效果，梳理过程必须是经常性的并且是连续的，并且很显然 只有那些与梳子接触的虱子才能被除去或杀灭。微生物法澳大利亚专利AU-B-52488/86的公开文本已经披露了可以采用微生 物制品来控制绵羊虱，褐飞虱(Bovicola (Damalinia) ovis)。然而，绵 羊虱子与吸血虱是完全不同的生物体。在本文中，必须清楚地理解一点即常用词语"虱"("louse"和"lice，，) 不是惯常所指的意思，而仅仅是表达其所涉及的是寄生较大宿主的小型 体外寄生物。词语"虱"(lice)可以包括一系列不同的体外寄生性生物体， 例如昆虫类、甲壳类以及刺胞动物水母，其含义依赖于所讨论的情况。 在大多数情况下，常用词语"虱"(lice)通过体外寄生物所处的宿主或环 境来对其进行修饰。 一些例子如下词语"羽虱"一般是指诸如短角鸟虱(Menopon stramineus)之类的虱 毛目害虫。词语"鱼虱"一般是指诸如Argulus sp之类的甲壳类动物。 词语"海虱"一般是指诸如Linuche unquiculata之类的刺胞水母
(cnidarian jellyfish )。词语"家禽头虱"一般是指诸如鸡头虱(Cuclotogaster heterographa) 之类的咬虱(mallophagans)。词语"鲑虱"一般是指诸如疮痂鱼虱(Lepeophtheirus sanlmonis)之类 的等足目甲壳动物(isopod crustaceans)。词语"鸡虱"一般是指诸如草黄短角羽虱(Menacanthus stramineus)之 类的咬虱(mallophagans)。词语"作物虱"一般是指诸如蚜虫之类的同翅目害虫，例如大戟长管蚜。词语"鳕虱"一般是指诸如带尾眶棘鲈之类的桡足类甲壳动物 (copepod crustaceans)。词语"绵羊虱" 一 般是指诸如Bovicolaovis之类的咬虱 (mallophagans )。"吸血虱"，本申请的主题，是明显不同且独立的生物，并据此被分在 一个独立的亚目中即吸虱亚目，其以血为食。吸血虱被普遍认为是一种 与其它"虱"不同种类的独特生物种群，这反映在它们独立的科学分类中 (查看并引用，例如，由Vincent S， Smith所著的Entomologische Abhandlungen61: (2) 150—151)。此处所述的词语"吸血虱"("sucking lice"或"sucking louse")指的是 吸虱亚目成员，其包括但不限于虱科，该虱科包括人体虱以及人头虱.以 及人阴虱。本发明更特别的是涉及对虱病的控制、由人体吸血虱感染引发的疾病 以及由吸血虱所引发的动物或鸟类疾病。发明目的本发明的目的在于介绍了一种新方法，其克服了现有技术中的某些不
足，并且可以有效地控制体外寄生性害虫吸血虱群，尤其是那些引起人 刺激、搔痒以及虱病的吸血虱群。本发明的目的在于克服现有技术中吸血虱控制技术所存在的上述不 足和缺陷。本发明所描述的微生物制品对人类和其它脊椎动物有效且无毒，因而 它对用其进行治疗的人类患者、动物和鸟类以及施用者而言是安全的。 因为通过生物法也即微生物法来控制寄生性吸血虱，由此大大减小了在 寄生性吸血虱群产生抗性的风险。本发明所述方法对这种感染的防治和 治疗是有效的。通过下列描述可以明显地看出本发明的其它优点，其中 通过阐述性说明以及实施例对本发明的实施方式作了公开。发明内容定义词语"微生物制品"意指任何细胞的组合物以及细胞成分，所述细胞成 分包括蛋白、孢子、细胞膜、细胞膜结合蛋白、膜酶和/或代谢物，它是来自 一 种或多种细菌培养物的游离病原代谢物(free pathogenic metabolites),其有助于使寄生性吸血虱病原并死亡。词语"制剂"意指包括或含有上述微生物制品并具有或不具有赋形剂、 添加剂以及增效剂的最终产品，该产品具有或不具有液相或固相载体或 填料。根据本发明所述可知，采用由一种或多种细菌例如genus Bacillus所 构成的微生物制品来生产用于治疗和防治吸血虱感染的药物制剂，这被 作为本发明的实施例而不应当被视为以任何方式对本发明构成限制。例如，通过将药物施加到患者的头发和头皮上，或者将其施加在动物或鸟 类的毛皮或羽毛上从而控制宿主身上的吸血虱的方式，把所述药物用于 人头虱的控制。
优选地，虱属于虱毛目。优选地，该虱所属亚目为吸虱亚目或Rhynchophirina。 优选地，吸血虱的种为人头虱，耻阴虱，以及人体虱。 优选地，细菌培养物为苏云金芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌或森田芽孢杆 菌属的杆菌。优选地，所述药物为衍生自一种(或)多种杆菌属的微生物制品组成 的制剂。优选地，所述微生物制品包含一些或所有的下列物质活菌或死菌细胞、包括酶和蛋白的细菌代谢物、细胞膜结合或其它结合的虱病原物质， 或者作为游离整体的活菌孢子或死菌孢子。优选地，所述药物是包含有效剂量微生物制品的制剂，其包括，除了上述其它成分外，每克还含约2"08至2><1012活菌孢子或细胞。优选地，所述药物是包含具有有效剂量的微生物制品，该制品每克含 大约2xl(T个活菌孢子或细胞。本发明可以是各种各样的制剂，例如灭虱用的护发液或抗虱性洗液制 剂，包括用作活性成分的有效剂量的微生物制品，该微生物制品与上述 各种赋形剂一起用于生产洗液、护发液或洗发液。该制剂然后可以简单 地施加在头发或头皮上和/或通过梳理患虱病患者的受感染头发来杀灭 吸血虱。在经微生物治疗后，死亡的吸血虱以及其它们的卵(蛋)通过 传统的虱卵梳来除去。通过该方法可以治愈虱病，并且患者还可以免于 遭受现有技术疗法中对刺激性化学品伴随物所起的令人苦恼的有害反应 所带来的危害。在本发明另一优选实施方式中，描述了用于杀灭动物或鸟类吸血虱和/或其卵的方法，其包括由一种或多种细菌的微生物制品，例如杆菌属或 者其代谢物，其中该微生物制品具有杀灭吸血虱或其卵的有效剂量，该 微生物制品与液态或粉状载体一起按照一般方法施加到虱子感染的动物
或鸟类毛皮或羽毛上。本发明源于申请人的这一发现即特定细菌对吸血虱的杀虫作用。目前 对于杀灭吸血虱及其蛹的复合生化方式仅有部分是已知的。这些细菌的 代谢物掺入到虱子的食物中，这些代谢物也即活菌或死菌细胞、包括酶 和蛋白的细菌代谢物、细胞膜结合或其它结合的虱病原化合物、或者作 为游离整体的活菌或死菌孢子。所摄入的代谢物导致了虱子发生多种致 命的细胞病理以及代谢中止；随后的作用方式是所摄入的孢子在虱子身 上萌发病导致致命性肠炎或者穿透进入血淋巴中并导致发生致命的败血 病。泛而言之，根据本发明，通过采用有效剂量的杀虫微生物制品来治疗感染人体、动物或鸟类的方法对诸如吸虱亚目(=Siphunculata)亚目和喙虱亚目之类的相关寄生性吸血虱种群进行控制，所述微生物制品含有 或来自下面所述的杆菌属菌及其代谢物。本发明的另一实施方式为一种或多种前述执行方法和/或应用方法和 /或一种或多种来自苏云金芽孢杆菌和/或蜡状芽孢杆菌和/或森田芽孢杆 菌菌株的微生物制品的组合。在采用本发明来控制一种以上宿主种群身 上的一种以上种或阶段的寄生性吸血虱和/或寄生性吸血虱群(parasitic sucking lice)时，该组合是有益的。最佳作用效果的组合可以通过下述 生化分析方法来确定。尤其特殊的是，提供了防治或控制人体、动物或鸟类的寄生性吸血虱 感染的方法，包括在受感染宿主身上施加有效剂量微生物制品，该微生 物制品来自或包含合适的杆菌属种或者更加特殊的是苏云金芽孢杆菌、 蜡状芽孢杆菌或森田芽孢杆菌种。优选地，虱子属于虱毛目。优选地，该虱所属亚目为吸虱亚目或喙虱亚目。 优选地，该虱所属科为虱科。优选地，所述杆菌为苏云金、蜡状芽孢杆菌或森田芽孢杆菌种群。
下面通过举例方式并参考附图对本发明的使用作更加完整的描述，其中附图1为苏云金素腺嘌呤核苷酸的分子结构。
具体实施方式
背景技术——苏云金芽孢杆菌上述杆菌属种群总体上为需氧菌、革兰氏阳性芽产孢菌。通过在芽孢形成期间产生的一种或多种类芽孢、中性pH条件下不溶性晶体毒素把苏 云金芽孢杆菌从十分相近的蜡状芽孢杆菌中区分别开。在苏云金芽孢杆菌的多种菌株或血清型中，当害虫摄入了其芽孢晶体 毒素后该毒素会获得强碱性肠道pH以及溶解晶体毒素所必须的蛋白水 解酶并得到相容的受体位点，其会对那些害虫产生高度毒性。这些晶体 毒素被一些著者称为苏云金芽孢杆菌"3 ((5)内毒素"或"苏云金芽孢杆菌 毒素"。这些"苏云金芽孢杆菌毒素"只是苏云金芽孢杆菌芽孢形成期的自 杀性结果。它们并不会在蜡状芽孢杆菌中产生且不具杀虱能力。微生物制品的制备下列实施例具体描述了微生物制品的制备过程。可以理解下文所述的 特定材料和技术仅仅是示例性的，它可以根据具体环境进行改变，因而 本发明的下列所述内容是阐述性的，而非限制性的。所选的杆菌属菌株可以采用标准或者传统的发酵方法进行制备，例如 在摇瓶中以合适的液体培养基培养细胞。在发酵制备期间维持下列参数 不变，例如pH二7.2;pOf70-90X;温度二32.5。C。总体而言，上述杆菌种 群不需要复杂的营养，因而可以采用多种不同的传统细菌发酵培养基和 发酵参数。该微生物制品的制备可以通过下列两种途径之一进行 制备途径1.在杆菌细胞处于生长期并早于芽孢形成期时收集发酵肉汤或培养基(broth or culture)。收集周期取决于培养基中或发酵培养基上的杆菌菌 株以及所用参数。总体而言，在细胞数量达到"稳定期"或发酵处于稳定 阶段时进行收集——一般来说如果采用每毫升5x109细胞的种子接种量 为10%发酵罐体积的话，稳定期在接种后7-10小时。所收集的的物质包 括杆菌细胞，细胞膜以及发酵培养基的代谢产物和细菌代谢物，这两种 代谢物可以是游离的也可以是结合在细胞膜上的。可以通过一种或多种诸如离心分离、过滤、共沉淀或膜浓縮之类的标 准方法进行收集。所收集的物质构成了活性成分或微生物制品，该物质 呈浆状或蛋糕状，包括生长期的杆菌细胞和发酵培养基代谢产物等，然 后采用一般的赋形剂将该物质制成诸如液态、非液态或乳状浓縮物或洗 液、分散性悬浮物、洗发液之类的制剂。可选择地，通过在共沉淀后加入两倍体积丙酮并采用一种或多种诸如 真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥或风干收集物的传统方法对上述所收集 的细菌物质进行干燥。在将干燥后物质进行匀质化并形成细粉后，然后 采用一般的赋形剂将上述构成活性成分或微生物制品的物质制成诸如液 态、非液态或乳状浓縮物或洗液、分散性悬浮物、洗发液或可湿性粉剂 之类的制剂。可选择地，上述所收集的构成活性成分或微生物制品的干燥物可与诸 如细粉状滑石粉、膨润土、高岭土或硅藻土以及其它赋形剂或添加剂进 行彻底的混合、研磨或掺杂，以便制备应用于受感染宿主的头发、皮毛 或羽毛的粉尘状或粉末状制剂。制备方法2.
在发酵大约28至30小时之后，随后进入芽孢形成期，通过一种或多 种标准方法例如通过离心分离、受细菌培养物、过滤、共沉淀或膜浓縮 进行收集。所收集的物质包括长出孢子的杆菌细胞、细胞膜、孢子、蛋 白、酶以及发酵培养基的代谢产物和细菌代谢物，这两种代谢物可以是 游离的也可以是结合在细胞膜上的。可以通过一种或多种诸如离心分离、过滤、共沉淀或膜浓縮之类的标 准方法进行收集。所收集的物质构成了活性成分或微生物制品，该物质 呈浆状或蛋糕状，包括长出孢子的杆菌细胞、细胞膜、孢子、蛋白、酶 和发酵培养基代谢产物以及细菌代谢产物等，这两种代谢物可以是游离 的也可以是结合在细胞膜上的，然后采用一般的赋形剂将该物质制成诸 如液态、非液态或乳状浓縮物或洗液、分散性悬浮物、洗发液或可湿性 粉剂之类的制剂。可选择地，通过在共沉淀后加入两倍体积丙酮并采用一种或多种诸如 真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥或风干收集物的传统方法对上述所收集 的细菌物质进行干燥。在将干燥后物质进行匀质化并形成细粉后，然后 采用一般的赋形剂将上述构成活性成分或微生物制品的物质制成诸如液 态、非液态或乳状浓縮物或洗液、分散性悬浮物、洗发液或可湿性粉剂 之类的制剂。可选择地，上述所收集的构成活性成分或微生物制品的干燥物可与诸 如细粉状滑石粉、膨润土、高岭土或硅藻土以及其它赋形剂或添加剂进 行彻底地混合、研磨或掺杂，以便制备应用于受感染宿主的头发、皮毛 或羽毛的粉尘状或粉末状制剂。本发明的作用方式制备途径1在生长期，所选择的苏云金芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌以及森田芽孢杆 菌菌株产生复杂的代谢物，例如蛋白、蛋白酶以及核苷酸之类物质。其
中某些代谢物是膜结合的并且通过生化分析发现许多代谢物是吸血虱的 病原因子。在一些情况下，可能产生昆虫病原性腺嘌呤核苷酸苏云金素。 该核苷酸苏云金素是一种潜在的RNA聚合酶抑制剂，该酶是虱子的关键 酶，因此如果它存在则是微生物制品灭虱作用的贡献者。然而，同样如 本文所述，不含苏云金素的微生物制剂也可有效地杀灭吸血虱。如果这些吸血虱摄入该微生物制剂，游离的或细胞膜结合的代谢物和 细菌代谢物的杀虫作用加上如果发生苏云金芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌或 森田芽孢杆菌细胞穿透虱子消化道的情况，这会导致虱子因代谢中止、 肠炎或败血病而死亡。按照这种方式消灭吸血虱感染以便控制有吸血虱 所引起的疾病、搔痒和刺激。本发明作用方式制备途径2微生物制剂的成分包括孢子细胞、孢子、残留的生长期细胞、细胞膜、 蛋白和代谢物，例如蛋白水解酶和糖分解酶、核苷酸以及纤维素肽，这 些成分是用于控制吸血虱的潜在灭虱试剂。如果这些吸血虱摄入该微生物制剂，游离的或细胞膜结合的代谢物和 细菌代谢物的杀虫作用加上如果发生苏云金芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌或 森田芽孢杆菌细胞以及萌发的孢子穿透虱子消化道的情况，这会导致虱 子因代谢中止、肠炎或败血病而死亡。按照这种方式消灭吸血虱感染以 便控制有吸血虱所引起的疾病、搔痒和刺激。采用生物检测法选择合适的细菌合适的细菌是指那些具有抗吸血虱活性的细菌。针对抗吸血虱活性对 上述杆菌种群候选菌株所进行的选择通过采用下文所述的适当的生物检 测法来实现。本发明所采用的微生物菌株由生物检测法来确定。在一个或多个适当 的生物检测系统中，例如下列所述的实施例，把一系列不同浓度或者稀
释度的微生物制品和/或制剂施加到目标吸血虱中。适当的生物检测包括 用系列梯度稀释或梯度剂量的微生物制品或其所含成分或由候选菌株所 制备的制剂来处理或暴露若干害虫吸血虱。 一般而言，每次重复试验中 一次剂量用药相应地采用不少于60个吸血虱，所检测的剂量水平梯度不少于5个，并且每个剂量检测所重复的试验数最少为2次，优选为5次。相似数量吸血虱或吸血虱样品被保持在相同的检测条件中，但其不采 用微生物制品进行处理或暴露在其中。这些未经处理的吸血虱作为参考 以确保不会因为操作伤害或不合适的生物检测条件而导致非正常吸血虱死亡率。从吸血虱死亡率数据结果可见，按要求计算出经校正的LD50、LD99、 LC50、 LC99和/或LT50以及LT99。这些校正方法例如Abbott、s公式和死亡率计算方法都是普通的并且被广泛采用的，而且是熟悉生物检测的 人员所共知的。一般而言，对于给定的虱种，选择表现出最高潜力和/或最快速的吸 血虱死亡率的菌株作为用于实施本发明来控制某种虱种的微生物制品或 其成分或制剂，所述最高潜力也就是指最低的LD50、LD99、LC50、LC99， 所述最快速的吸血虱死亡率也就是指最低的LT50和LT99。对于每个目标吸血虱种，初始生物检测以及随后的生物分析都沿着 相似的lines进行，但是所用的合适的基质和宿主是不同的。例如，在这 些生物检测中，由候选菌株制成的药剂被施加至存活于诸如封装血液、 具有或不具有毛发的模拟皮肤、合适的皮毛或羽毛或宿主皮屑之类基质 的吸血虱中。视目标吸血虱种的情况往生物检查系统中加入血清以减少 由饥饿导致的死亡，否则这种死亡会对结果产生干扰。按照上述内容， 检测吸血虱死亡率、计算出经校正的LD50、 LD99、 LC50、 LC99禾卩/或 LT50以及LT99，并总体上选出用于实施本发明来控制宿主所携吸血虱种 的最佳潜在菌株。
如果合适，在人工食物以及模拟封闭血液、毛皮、羊毛或羽毛生物检 测中获得成功的性能之后，在人体、动物或鸟类宿主身上对微生物制品 进行生物检测。这总体上包括用待测试的微生物制品或制剂对吸血虱感 染人体、动物或鸟类进行生物检测。在用微生物制品或制剂处理之间和之后记录吸血虱的数量和密度。以校正的吸血虱死亡率LD50、 LD99、 LC50、 LC99和/或LT50以及LT99的顺序依次全程读取结果，或者在对 重复确认的感染进行防治期间也进行记录。通过这种方法并按照生物检 测结果，确定微生物制品的选择以及有效剂量。 本发明的使用方法用来影响治疗的使用方法可以根据待控制吸血虱的种类和发展阶段、 宿主类型以及吸血虱感染的位置、周围条件或环境以及所用微生物制品 的物理性质的不同而改变。为了对所需的较大范围的应用方法进行调整，微生物制品可以制成含 水或不含水的浓縮液、乳状液、洗液或液态洗发剂或制成经过或者不经 稀释以便于用作洗发液、喷雾、注射或浸渍液稀释的可湿性粉末或者制 成粉末或粉尘。例如，并按照下面的描述，当对人头虱进行控制时，该 微生物制品可被制成或洗发水的形式施加在毛发和头皮上或者制成喷雾 剂。为了其它应用，例如控制鸟类吸血虱，该微生物制品可以被结合入 惰性载体材料并被以粉末或粉尘的形式使用。为了进一步描述本发明，现参考本发明方法的特定实施例。在第一个实施方式中，用含有效浓度的微生物制品的液体所构成的洗 液、洗发液或喷雾制剂处理被人头吸血虱所感染的人的毛发和头皮，所 述微生物制品含有用一种或多种所选杆菌菌株，尤其是苏云金芽孢杆菌、 蜡状芽孢杆菌或森田芽孢杆菌，该液体制剂包含，或者完全或部分来自 于， 一种或多种单独的或者用添加剂和/或赋形剂增效的前述微生物制
例如，该微生物制品可与用作合适载体的洗液基质，该载体用于把微 生物制品应用到虱子感染人体上。该制剂基质的实施例会包含诸如甘油基硬脂酸或异硬脂酸山梨糖醇酯(sorbitol isostearate)之类的乳化剂、诸 如聚乙二醇醚、聚乙二醇酯或十六(烷)醇之类的载体以及诸如二十二烷基 三甲基氯化铵(behentrimonium chloride)之类的添加剂。可以采用诸如 醇醚硫酸铵(ammonium laureth sulphate)之类的温和清洁剂来清洁毛发 或头皮。诸如麦芽油或麦麸脂质(wheat bran lipids) (Biobranil )之类的 Benign lipids可以包含在最终的制剂中以改善受处理毛发的梳理质量。把 包含有效量微生物制品的作为结果的(resulting)洗液或洗发水施加到虱 子感染人体的毛发和头皮上，并通过梳理彻底遍布在头发上。 本发明实施方法把寄生性吸血虱暴露在微生物制品中的苏云金芽孢杆菌、蜡状芽孢杆 菌或森田芽孢杆菌杀虫个体(entities)和代谢物中，通过一种或多种本 发明的下列方法来实现上述过程。实施方法l一采用代谢物制品如上述方法施加到人体、动物或鸟类宿主的微生物制品或制剂包括同 样如上所述的有效量的活性膜结合的和游离的代谢物，以便在被寄生性 吸血虱摄入时杀灭它和/或使其无法繁殖。该杀虫性代谢物源自与所选的 苏云金芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌或森田芽孢杆菌菌株一起被收集的发酵 培养基。在一些实施方式中，存在于制剂中或者由存在于制剂中的孢子 生长而来的侵入性杆菌细胞会穿透吸血虱消化道和血腔，通过上述穿透 代谢物的杀虫作用可以得到增强(参见下述内容)。通过吸血虱的死亡以 及由此带来的吸血虱的消除从而控制了感染并治愈疾病，对人而言所述 疾病就是虱病。实施方法2—使用营养期(vegetative)细胞制品除了实施方法1中的成分外，该微生物制品或制剂含有活的营养期
(vegetative)细胞，所述细胞为选择得到的苏云金芽孢杆菌、蜡状芽孢 杆菌或森田芽孢杆菌菌株。按照上述方法施加到人体、动物或鸟类上之 后，在添加于所用制剂中的营养成分的帮助下或没有其帮助，这些活的 细胞在宿主中得以继续生存。这些活的细胞，其被施加至非常靠近吸血 虱吸血的位置，在该位置上产生杀虫代谢物即酶和其它上述代谢物。这些代谢物然后被分散或移入吸血位置上并在其中被摄取，从而杀灭 该吸血虱。在某些实施方法中，杆菌细胞会侵入吸血虱的消化道和血淋 巴，这可以增强代谢物的杀虫作用，从而引发致死性败血病。通过吸血 虱的死亡以及由此带来的吸血虱的消除从而控制了感染并治愈疾病，对 人而言所述疾病就是虱病。实施方法3—采用孢子制品除了实施方法1和2中的成分外，该微生物制品或制剂还含有一种或 多种所选苏云金芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌或森田芽孢杆菌菌的活的孢子。 这些孢子可以通过加热处理而得到"强化"以便保持特定比例，当被加湿 后在合适诱导剂的存在下其会快速地萌发。在被施加到受感染人体、动 物或鸟类之前，如果愿意可以往微生物制品或制剂中加入例如L-丙胺酸、 腺苷、葡萄糖或吡啶二钙等萌发诱导剂以便孢子可以快速萌发并在所治 疗的宿主身上产生营养期细胞。按照上述实施方法2那样，这些营养期细胞随即生长，产生杀虫代谢 物并由此杀灭寄生性吸血虱。在某些实施方法中，杆菌细胞或来自萌发 孢子的细胞会穿透进入吸血虱的血淋巴，这会引发致死性败血病，从而 该代谢物的杀虫作用得到了加强。通过吸血虱的死亡以及由此带来的吸 血虱的消除从而控制了感染并治愈疾病，对人而言所述疾病就是虱病。实施方法4—采用孢子和杀虫蛋白制品该微生物制品或制剂含有具备存活能力的孢子以及所选苏云金芽孢 杆菌、蜡状芽孢杆菌或森田芽孢杆菌菌株的膜结合和/或游离杀虫肽酶或 蛋白。这些成分具有杀虫作用， 一旦被吸血虱摄入后它就会造成巨大的 消化道损害从而导致吸血虱的死亡。这些孢子可以通过加热处理而得到 "强化"以便被加湿后其会在吸血虱消化道中快速地萌发，侵入血淋巴并 引发由败血病导致的吸血虱死亡并治愈疾病，对人而言所述疾病就是虱病。在该实施方式的实际实施例中，按照上述实施方法4用制剂化的洗发水对具有因持久头虱感染而导致急性虱病既往史的11岁男孩进行了两次治疗。两次治疗时间间隔为10天。第二次治疗的目的在于控制在第一次 治疗期间尚处于卵(nit)阶段的头虱。该小孩未发生副反应，并且小孩 的头虱感染被完全根除而他的虱病也被治愈了。尽管本文所示并对其作出描述的本发明实施方式被认为是最有实用 价值和优选的实施方式，但是可以认识到可以在本发明范围内作出一些 改变，这些改变不限于本文所描述的细节，但所本文所附权利要求的整 个保护范围是恰当的以便囊括任何所有等同实施方式，从而可以对方法 的细节、操作参数等内容作出不脱离本发明范围和界限的变型。
权利要求
1.一种芽孢杆菌属菌或由细胞与细胞成分构成的任何组合在制备治疗和防治患者感染吸血虱药物中的应用，所述细胞成分包括蛋白、孢子、细胞膜、膜结合蛋白、膜酶和/或代谢物，及其游离的病原性代谢物，所述药物被施用在哺乳动物或鸟类的毛发和羽毛上。
2. 如权利要求l所述的药物，其特征在于该虱属于虱毛目。
3. 如权利要求2所述的药物，其特征在于该虱所属亚目为吸虱亚目或 喙虱亚目。
4. 如权利要求3所述的药物，其特征在于该虱所属科为虱科。
5. 如权利要求4所述的药物，其特征在于杆菌为苏云金芽孢杆菌、蜡 状芽孢杆菌或森田芽孢杆菌。
6. 如权利要求5所述的药物，进一步的特征在于每克该药物含有大约 2X 108到2X 1010个活的孢子或细胞。
7. 如权利要求6所述的药物，进一步的特征在于该药物每克含有大约 2X 1010个活的孢子或细胞。
8. —种杀灭人虱和/或其卵的组合物，其包括芽孢杆菌属菌或细胞和细 胞成分的任何组合物，所述细胞成分包括蛋白、孢子、细胞膜、膜结合 蛋白、膜酶和/或代谢物、及其游离的病原代谢物，其中芽孢杆菌属菌或 其代谢物都以有效剂量存在以便杀灭人虱和/或它们的卵；以及用于常规 应用的载体。
9. 如权利要求8所述的合成物，其特征在于该虱属于虱毛目。
10. 如权利要求9所述的合成物，其特征在于该虱所属亚目为吸虱亚目 或喙虱亚目。
11. 如权利要求IO所述的合成物，其特征在于该虱所属科为虱科。
12. 如权利要求ll所述的合成物，其特征在于杆菌为苏云金芽孢杆菌、 蜡状芽孢杆菌或森田芽孢杆菌。
13. 如权利要求12所述的合成物，进一步的特征在于每克该药物含有大 约2xl()S到2xl0"个活的孢子或细胞。
14. 如权利要求13所述的合成物，进一步的特征在于每克该药物含有大 约2xl0"个活的孢子或细胞。
15. —种抗虱洗液，其包括有效剂量的芽孢杆菌属菌或其代谢物、护发 液和液态载体。
16. 如权利要求15所述的洗液，其特征在于该虱属于虱毛目。
17. 如权利要求16所述的洗液，其特征在于该虱所属亚目为吸虱亚目或 喙虱亚目。
18. 如权利要求IO所述的洗液，其特征在于该虱所属科为虱科。
19. 如权利要求ll所述的洗液，其特征在于杆菌为苏云金芽孢杆菌、蜡 状芽孢杆菌或森田芽孢杆菌。
20. 如权利要求19所述的洗液，进一步的特征在于每克该药物含有大约 2"08到2xl0"个活的孢子或细胞。
21. 如权利要求13所述的合成物，进一步的特征在于每克该药物含有大 约2"0"个活的孢子或细胞。
22. —种在治疗成熟和不成熟形式的吸血虱感染的方法，其包括(a) 按通常方式包括把芽孢杆菌属菌或细胞和细胞成分的任何组合物，所述 细胞成分包括蛋白、孢子、细胞膜、膜结合蛋白、膜酶和/或代谢物、及 其游离的病原代谢物施加到受侵害之处。
23. 如权利要求22所述的方法，其特征在于该虱属于虱毛目。
24. 如权利要求23所述的方法，其特征在于该虱所属亚目为吸虱亚目或 喙虱亚目。
25. 如权利要求24所述的方法，其特征在于该虱所属科为虱科。
26. 如权利要求25所述的方法，其特征在于杆菌为苏云金芽孢杆菌、蜡 状芽孢杆菌或森田芽孢杆菌。
27. 如权利要求26所述的方法，进一步的特征在于每克该药物含有大约 2xl08到2xl0"个活的孢子或细胞。
28. 如权利要求27所述的方法，进一步的特征在于每克该药物含有大约 2xlO'G个活的孢子或细胞。
29. —种抗虱性毛发护发液制剂，其特征在于包括用作活性成分的有效 剂量的芽孢杆菌属菌或其代谢物、护发液和水。
全文摘要
本发明描述了由一种或多种细菌所组成的微生物制品的用途，例如，用于生产治疗和防治吸血虱感染药物制剂的芽孢杆菌属菌，所述吸血虱来自虱毛目、吸虱亚目、喙虱亚目和/或虱科。该药物可施加在羽毛或毛发上从而控制吸血虱。
文档编号A61K35/66GK101151040SQ200680008250
公开日2008年3月26日 申请日期2006年3月7日 优先权日2005年3月14日
发明者戴维·约翰·库珀, 达德利·埃德温·平诺克 申请人:微生物产品私人有限公司