专利名称：一种高效低毒的人参皂苷曲安缩松外用药剂的利记博彩app
技术领域：
糖皮质激素类外用药剂是临床治疗皮肤病的常用药物，但这些外用药均有较大的副作用。本发明涉及一组疗效高副作用少的含人参皂苷与曲安缩松组成的糖皮质激素外用药剂。
背景技术：
20世纪50年代以来，糖皮质激素局部外用治疗某些皮肤病取得了良好的效果。但自70年代以后，由于不适当地外用及滥用，局部副作用尤其是致皮肤萎缩逐渐增多。这给糖皮质激素的临床外用带来了困难。不适当使用糖皮质激素可导致一系列皮肤及系统性副作用。皮肤表现可有皮肤萎缩、萎缩纹、毛细血管扩张、色素沉着等。系统性副作用可有肌肉萎缩、骨质疏松、无菌性关节坏死、诱发精神症状、青光眼、白内障等。
人参是祖国医学治疗疾病常用药物，国内外均应用广泛，是目前国内外使用最广泛的一种草本植物，效果得到认可。迄今为止，已从人参中提取出约200种成分。其中最有效的成分就是人参皂甙。人参皂甙是人参根的主要有效成分，目前从药用植物人参中已分离并确定结构的人参皂甙约40余种。人参皂甙已被证实对于中枢神经、心血管系统、内分泌系统以及免疫系统均具有一定的药理作用。研究发现人参皂苷Rgl可与地塞米松竞争性地与糖皮质受体结合，发挥类似糖皮质激素的作用，从另一角度讲，人参皂甙既能够与糖皮质激素受体结合，那就有可能减少糖皮质激素与其受体的结合，从而减少副作用的发生。近年来还发现人参具有促进软骨细胞II型胶原合成的功能，研究也发现在适宜浓度下，人参皂甙Rbl可促进体外软骨细胞的DNA合成，维持正常软骨细胞合成II型胶原。胶原是皮肤与骨的主要成分，人参皂甙对于胶原细胞具有的调节与保护作用，可能是人参皂甙能够对抗糖皮质激素致皮肤萎缩的原因之一。
本课题组发现人参皂甙可有效防治糖皮质激素所诱致的大鼠骨质疏松。在寻找能增加糖皮质激素的疗效，减少其不良反应的药物组合物的研究中，，我们发现人参皂甙与糖皮质激素组成外用制剂局部外用于皮肤，既有协同抗炎效应，又不会导致皮肤萎缩，为我们开发糖皮质激素组成外用制剂提供了很好的选择。
发明内容
本发明发现在糖皮质激素外用制剂加入人参皂甙，与糖皮质激素组成复方后能增强糖皮质激素的抗炎作用，减轻其不良反应，可用于防治各种糖皮质激素外用制剂适应症。糖皮质激素外用制剂是临床上治疗皮肤病的重要药物，已知可用于防治皮肤疾病的糖皮质激素类药物有醋酸泼尼松，醋酸泼尼松龙，醋酸氢化可的松，醋酸可的松，甲泼尼松，曲安西龙，地塞米松，倍他米松，氟氢可的松，氯泼尼醇，地夫可特，氟米龙，曲安奈德，布丁奈德，莫米松，氯倍他索，氟氢松，丁氯倍他松，倍氯米松，氯氟轻松，阿氯米松，卤米松，甲羟松，去羟米松，氟氢缩松，二氟可龙；这些药物不少也已经配成外用的药膏如软膏剂、乳膏剂；霜剂；膜剂，凝胶剂。但糖皮质激素外用制剂长期大剂量使用可造成一系列严重的不良反应，如果在这些制剂中加入人参皂甙，可以减轻糖皮质激素的不良反应。
具体实施例方式本发明方案是设计了下述研究处方进行实验1.复方人参皂甙曲安缩松涂剂取70ml无水乙醇先把实验用量的曲安缩松溶解，充分溶解后，加入川芎嗪，充分溶解后，再加入30ml蒸馏水，即可。实验用量的曲安缩松是指每100毫升的溶液中含曲安缩松0.05～0.5克，人参皂甙用量为，每100毫升的溶液中含0.5～5克。
2.复方人参皂甙地塞米松乳剂取醋酸地塞米松0.25克，人参皂甙10克，乳膏基质(硬脂酸100克，液状石腊160克，白凡士林50克，单硬脂酸甘油酯50克，三乙醇胺2克，十二烷基硫酸钠2克，甘油125克，10％羟苯乙酯溶液10毫升)蒸馏水470毫升，按乳膏的生产工艺制备成1000克乳剂，供研究及临床应用。本复方醋酸地塞米松可在0.1～0.25克，人参皂甙5～50克之间调整。
根据研究或临床应用需要，上述涂剂中的曲安缩松，乳剂中的地塞米松，可采用醋酸氢化可的松，醋酸可的松，甲泼尼松，曲安缩松，氟氢可的松，莫米松，氯倍他索，氟氢松，倍氯米松，氯氟轻松来替代。
实施例一为了观察外用曲安缩松诱发皮肤萎缩的小鼠皮肤组织病理学特征、皮肤相关的生化指标以及免疫器官的变化；同时，观察复方人参皂甙曲安缩松涂剂对对糖皮质激素皮肤不良反应的防治作用，我们开展了下述实验1.实验方法1.1材料1.1.1实验动物及饲养条件初始体重20±2g的三月龄清洁级昆明种小鼠30只，雌雄各半(广东医学院实验动物中心提供)。饲养条件饲养室内温度保持24℃～28℃，湿度在50％～60％。分笼普通喂养。每笼10只，自由摄食摄水，专室饲养，专人负责，实验前及每周称体重一次。动物饲养3周。
1.1.2主要仪器SHH.W21.600三用电热恒温水浴箱 天津市华北实验仪器有限公司华凌电冰箱 BCD-205WE广东752型紫外分光光度计上海第三分析仪器厂内切式组织匀浆机 浙西机械厂
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(3)脱毛剂硫化钠购自广州化学试剂厂。配制方法称取硫化钠25g， 加水50ml，加温溶解，然后加入聚乙烯10m，充分混合即可。
(4)三氯化铁广东省台山市化工厂。配制方法三氯化铁29g，蒸馏水加至100ml。
(5)碱性品红上海化学试剂公司。
(6)间苯二酚上海山浦化工有限公司。
(7)Weigert溶液配制方法碱性品红2g， 间苯二酚4g，三氯化铁25ml，浓盐酸4ml，蒸馏水200ml。
(8)苏木素上海化学试剂公司。
(9)Weigert铁苏木素液配制方法A液苏木素1g；无水酒精100ml。
B液30％三氯化铁4ml，蒸馏水100ml，纯盐酸1ml。
A、B两液需分瓶盛放，临用前A液B液等量混合。
(10)Van Gieson染液配制方法A液1％酸性品红水溶液。
B液苦味酸饱和水溶液(约1.22％)。
A、B两液需分瓶盛放，临用前取A液1份B液9份混合后使用。
(11)1％盐酸酒精液配制方法70％酒精99ml，纯盐酸1ml，充分混合即可。
2.2方法2.2.1实验设计分组根据实验所需，分为空白对照组、曲安缩松模型组、1％人参皂甙曲安缩松涂剂组，2％人参皂甙曲安缩松涂剂组。每组10只小鼠。
2.2.2动物背部脱毛及涂药实验前，用脱毛剂在背部尾上1cm处始，向头颈方向沿背部正中线两侧对称脱毛面积约4cm2，成一矩形，并用清水冲洗小鼠背部，避免脱毛剂的残留。各组以对应的药物外涂于背部，每次涂0.01ml/cm2，每天两次，共三周，实验前及实验开始后每周称重一次。
2.2.3取材所有小鼠用药三周后，眼球取血处死。取背部正中皮肤，取一1cm×1cm大小皮肤迅速放入10％中性甲醛液中固定，拟作组织切片进行组织病理形态学观察及定量分析；另取余背部皮肤迅速冰冻保存，拟作皮肤组织匀浆测皮肤羟脯氨酸、SOD及MDA含量。取小鼠胸腺、脾，称湿重，观察其变化。
2.2.4皮肤生化指标的检测(1)10％皮肤组织匀浆的制备①取脱毛后的皮肤组织块0.5g左右，经冷生理盐水漂洗，除去皮下脂肪和其它结缔组织，滤纸拭干，称重，放入10ml的小烧杯中。
②用量筒取该组织块重量9倍的预冷的生理盐水，取2/3倒入装有组织块的烧杯中，用眼科小剪尽快剪碎组织块，然后倒入匀浆管中将剩余的1/3生理盐水冲洗残留在烧杯中的组织块，一起倒入匀浆管，用内切式组织匀浆机搅拌制成10％组织匀浆(匀浆时间10次/秒，间歇3秒，连续7～10次，在冰水中进行)。
③取少量组织匀浆直接涂片，在显微镜下观察细胞的破碎情况，若破碎不全，则反复冻溶三次，使其完全破碎，使胞内容物完全游离在液相中。
(2)皮肤组织羟脯氨酸、SOD及MDA含量测定参照南京建成生物工程公司试剂盒说明方法测定。羟脯氨酸，以微克/毫克蛋白(μg/mgprot)为单位；SOD，每毫克组织蛋白在1ml反应液中SOD抑制率达50％时所对应的SOD量为一个SOD活力单位(U)，以活力单位/毫克蛋白(U/mgprot)表示；MDA，以纳摩尔/毫克蛋白(nmol/mgprot)为单位。皮肤组织蛋白含量的测定，按照考马斯亮兰蛋白测定试剂盒说明书进行。
2.2.5组织切片染色及镜下观测内容(1)弹力纤维染色采用Weigert间苯二酚-碱性品红染色法操作方法①石蜡切片，脱蜡至水，蒸馏水洗。
②0.25％高锰酸钾氧化10分钟。
③0.5％草酸漂白为止。
④蒸馏水洗后95％酒精洗一次。
⑤直接浸入Weigert溶液20～60分钟。
⑥0.5％盐酸酒精分化，观察背景无色弹力纤维清楚为好。
⑦水洗，快洗后进二甲苯透明，中性树胶封固。
(结果弹力纤维呈黑蓝色。)(2)胶原纤维染色采用Van Gieson染色法操作方法①组织固定10％福尔马林液，常规脱水包埋。
②切片脱蜡至蒸馏水。
③用Weigert铁苏木素液染10～20分钟。
④流水稍冲洗。
⑤1％盐酸酒精迅速分化。
⑥流水冲洗后蒸馏水冲洗。
⑦用VanGieson液染3～5分钟。
⑧倾去染液，直接用95％酒精分化和脱水。
⑨无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
(结果胶原纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞呈黄色，细胞核呈蓝褐色。)(3)表皮细胞染色采用HE染色法染色。操作方法略。
(4)镜下观察皮肤表皮，真皮胶原纤维、弹力纤维变化情况主要观察皮肤表皮厚度，细胞层数，基底层细胞排列分布及形态；观察真皮层胶原纤维、弹力纤维的形态及数量。
(5)表皮厚度，弹力纤维面积的测量采用LEICA MPS30荧光-光学显微镜下摄影，应用相应计算机以KSS ImageAnalysis图像分析软件，在每组随机选择4-6个高倍镜视野，测量皮肤表皮厚度及真皮弹力纤维面积平均值。
2.3统计学分析运用SAS软件进行单因素分析，先采用SAS中的UNIVARIATE过程检验方差齐性，若方差相等采用方差分析，组间比较再采用SNK-q检验；若方差不齐则采用Kruskal-Wallis秩和检验，再用Nemenyi检验比较两组间差别。
3.实验结果(1)各组表皮形态学观察及计算机图像定量分析实验结果可见空白对照组小鼠表皮厚度较厚，由4-5层细胞组成，棘细胞散在分布，基底细胞呈立方形，排列整齐。曲安缩松模型组小鼠皮肤表皮厚度明显变薄，细胞层数减少，细胞大小不一。1％人参皂甙曲安缩松涂剂组、2％人参皂甙曲安缩松涂剂组表皮较曲安缩松组显著增厚，细胞层数增多，排列有序，胞间基质丰富，基底细胞胞体大，排列更加规整。
各用药组小鼠表皮厚度计算机图像定量分析见表3.1表3.1小鼠表皮厚度计算机图像分析系统定量分析结果
注(1)与曲安缩松模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.05；(2)变化比例1与正常对照组比较，变化比例2与曲安缩松模型组比较。
从表3.1可见，曲安缩松模型组小鼠表皮厚度较正常对照组减少了39.5％，差异有统计学意义(P＜0.05)。1％人参皂甙曲安缩松涂剂组、2％人参皂甙曲安缩松涂剂组表皮厚度分别比曲安缩松模型组增加了42.1％和56.5％，差异非常显著，有统计学意义(P＜0.05)。
(2)各组真皮弹力纤维形态学观察及计算机图像定量分析空白对照组小鼠弹力纤维细长，轻微弯曲，排列有序，缠绕在胶原束中间。曲安缩松模型组小鼠弹力纤维变短、减少，排列散乱。1％人参皂甙曲安缩松涂剂组、2％人参皂甙曲安缩松涂剂组真皮弹力纤维较曲安缩松组显著增多，弹力纤维形态细长。
各用药组小鼠真皮弹力纤维面积计算机图像定量分析见表3.2表3.2小鼠皮肤弹力纤维面积计算机图像分析系统定量分析结果
注(1)与曲安缩松模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.05；(2)变化比例1与正常对照组比较，变化比例2与曲安缩松模型组比较。
从表3.2可见，曲安缩松模型组小鼠弹力纤维面积较正常对照组减少了26.8％，差异有统计学的意义(P＜0.05)。1％人参皂甙曲安缩松涂剂组、2％人参皂甙曲安缩松涂剂组弹力纤维面积分别比曲安缩松模型组增加了22.6％和26.8％，差异有统计学意义(P＜0.05)。
(3)各组真皮胶原纤维形态学观察空白对照组小鼠真皮层胶原纤维束细长，胞体丰富，呈束状排列，走向与皮面平行，呈波纹状。曲安缩松模型组小鼠皮肤胶原层厚度变薄，胶原束部分断裂，走向较为平直，排列疏松且紊乱。1％人参皂甙曲安缩松涂剂组、2％人参皂甙曲安缩松涂剂组较曲安缩松组胶原纤维明显增厚，胶原束排列规整、更为致密。
(4)各用药组皮肤生化指标的检测①各用药组小鼠羟脯氨酸含量的检测见表3.3表3.3大鼠皮肤组织羟脯氨酸含量检测结果
注(1)与曲安缩松模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.05；(2)变化比例1与正常对照组比较，变化比例2与曲安缩松模型组比较。
从表3.3可见，曲安缩松模型组羟脯氨酸含量较正常对照组降低了31.1％，差异有统计学的意义(P＜0.05)。1％人参皂甙曲安缩松涂剂组和2％人参皂甙曲安缩松涂剂组羟脯氨酸含量分别比曲安缩松模型组增加了28.1％和33.8％，差异有统计学意义(P＜0.05)。
②各用药组小鼠SOD活力的检测见表3.4
表3.4小鼠皮肤组织中SOD活力
注(1)与曲安缩松模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.05；(2)变化比例1与正常对照组比较，变化比例2与曲安缩松模型组比较。
从表3.4可见，曲安缩松模型组SOD活力较正常对照组降低了30.3％，差异有统计学的意义(P＜0.05)。1％人参皂甙曲安缩松涂剂组和2％人参皂甙曲安缩松涂剂组SOD活力分别比曲安缩松模型组增加了28.5％和52.5％，差异有统计学意义(P＜0.05)。
(5)各组小鼠免疫器官胸腺重量的变化各组小鼠与正常对照组小鼠胸腺的重量变化如表3.6和3.7。
表3.6小鼠胸腺重量检测结果
注(1)与曲安缩松模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.05；(2)变化比例1与正常对照组比较，变化比例2与曲安缩松模型组比较。
小结从实验结果可知，1％人参皂甙曲安缩松涂剂组和2％人参皂甙曲安缩松涂剂组小鼠与曲安缩松模型组比较，皮肤表皮增厚，弹力纤维面积增加，皮肤羟脯氨酸含量升高。而且，体重改变趋势较小、免疫器官抑制相对缓解。提示了人参皂甙曲安缩松涂剂比单一曲安缩松涂剂作用更好，人参皂甙可预防曲安缩松导致的皮肤不良反应。
另一项研究证明，人参茎叶皂苷也具有人参皂苷同样的作用，用人参茎叶皂苷配制的含曲安缩松的外用制剂，也有增强疗效，降低不良反应的作用。
研究还证明，用醋酸泼尼松，醋酸泼尼松龙，醋酸氢化可的松，醋酸可的松， 甲泼尼松，曲安西龙，地塞米松，倍他米松，氟氢可的松，氯泼尼醇，地夫可特，氟米龙，曲安奈德，布丁奈德，莫米松，氯倍他索，氟氢松，丁氯倍他松，倍氯米松，氯氟轻松，阿氯米松，卤米松，甲羟松，去羟米松，氟氢缩松，二氟可龙制备外用制剂时，可以加人参皂苷或人参茎叶皂苷，以达到增加疗效，减轻不良反应的作用。
权利要求
1.一种疗效高副作用少的含糖皮质激素的外用药剂，其特征是该外用药剂同时含有曲安缩松和人参皂苷。
2.如权利要求1所述的一种疗效高副作用少的含糖皮质激素的外用药剂，其特征是该外用药剂中人参皂苷可以由人参茎叶皂苷替代。
3.如权利要求1所述的一种疗效高副作用少的含糖皮质激素的外用药剂，其特征是该外用药剂中曲安缩松可以用其他可供外用的糖皮质激素，如醋酸泼尼松，醋酸泼尼松龙，醋酸氢化可的松，醋酸可的松，甲泼尼松，曲安西龙，地塞米松，倍他米松，氟氢可的松，氯泼尼醇，地夫可特，氟米龙，曲安奈德，布丁奈德，莫米松，氯倍他索，氟氢松，丁氯倍他松，倍氯米松，氯氟轻松，阿氯米松，卤米松，甲羟松，去羟米松，氟氢缩松，二氟可龙替代。
4.如权利要求1所述的一种疗效高副作用少的含糖皮质激素的外用药剂，该药物组合物可制成供皮肤外用的涂剂或霜剂。
全文摘要
本发明公开了由糖皮质激素与人参皂苷组成的疗效高副作用少的糖皮质激素类供外用的药物组合物。糖皮质激素是防治皮肤病的重要药物，但糖皮质激素长期大剂量使用可造成一系列严重皮肤的不良反应，本发明发现人参皂苷与糖皮质激素曲安缩松组成复方后能增强曲安缩松的抗炎作用，减轻其不良反应，可用于防治各种相关的皮肤疾病。
文档编号A61K31/58GK1985837SQ20061015651
公开日2007年6月27日 申请日期2006年12月11日 优先权日2006年12月11日
发明者吴铁, 崔燎, 陈志东, 许宗严, 高敏坚, 高志祥 申请人:广东医学院