专利名称：A环多氧化取代的五环三萜类衍生物及其制备方法和用途的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及有机化学和药物化学领域，具体而言，本发明涉及A环多氧化取代的五环三萜类衍生物及其制备方法和用途。本发明将该系列化合物对六种肿瘤细胞株如人前列腺癌细胞(PC-3)，鼻咽癌细胞(CNE)，口腔上皮癌细胞(KB)，人肺癌细胞(A549)，人肝癌细胞(BEL-7404)，人子宫颈癌细胞(Hela)进行了肿瘤细胞生长抑制活性筛选。该类化合物被发现具有一定的抑制肿瘤细胞生长活性，可预期作为抗肿瘤药物用途。本发明还发现该类化合物对α-葡萄糖苷酶有着较强的抑制作用，可以预期作为防治糖尿病和治疗病毒类疾病用药。
背景技术：
肿瘤疾病的发病率和致死率不断上升。然而治疗肿瘤疾病的特效药尤其是目前抗肿瘤临床所用细胞毒性药物的选择性不高所导致的对正常细胞的恶性杀伤，限制了该类药物的普遍适用性。因此，寻找和发现新的选择性高的细胞毒性抗肿瘤药物是世界范围内的研究热点。我们也致力于抗肿瘤药物的研究。五环三萜酸类及三萜类化合物因其特殊的细胞毒性引起广泛的兴趣(Chi-I Chang等，Journal ofNatural Products，(天然产物杂志)，2004年67卷，91-93页)，有希望从中发现能够成为新的抗肿瘤药物的先导化合物。因此本发明的目的在于对这类化合物进行合成和结构改造，以期寻找对肿瘤细胞株生长产生更强抑制作用的A环多氧化取代的五环三萜类衍生物。根据中国的常发肿瘤疾病谱及肿瘤细胞的敏感性，我们选择了人前列腺癌细胞(PC-3)，鼻咽癌细胞(CNE)，口腔上皮癌细胞(KB)，人肺癌细胞(A549)，人肝癌细胞(BEL-7404)，人子宫颈癌细胞(Hela)六株肿瘤细胞作为体外细胞毒活性药理评价的指标。
α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)抑制剂是筛选抗II型糖尿病药物的有效酶模型。成功的例子是国外按照该酶抑制剂活性筛选出的药物阿卡波糖。同时，有报道指出，α-葡萄糖苷酶抑制剂与抗病毒活性尤其是HIV病毒有一定的关联度。所以对此酶及该酶的抑制剂之研究方兴未艾。为探明本发明中制备的A环多氧化取代的五环三萜类衍生物对该酶的抑制作用，我们以阿卡波糖为阳性对照，以α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)抑制剂为筛选模型进行筛选，以期寻找出该类新化合物防治糖尿病和治疗病毒类疾病活性的新用途。
发明内容
本发明的一个目的是提供了具有式(1)所示的A环多氧化取代的五环三萜类的化合物及其可药用盐或溶剂化物；
式(1) 其中R1～R3可以相同或不同，分别选自氢，含1～8个碳原子的烷氧基，含1～8个碳原子的酰氧基，含1～8个碳原子的磺酰氧基，卤素，氨基，硝基，氰基，羟基，羰基；2，3位之间可以是碳碳单键或者双键；2，3位之间还可以是环氧基。R4选自COOH，-Me，-CH2OH，-COOR5，-CONH2，-CONHR5，-CON(R5)2，其中R5是含1～8个羰原子的烷基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的苯烷基；其中“取代或未取代”是指基团可以未被取代或者被取代，用作取代的取代基选自卤素，氨基，硝基，巯基，氰基，羟基，含1～8个碳的烷氧基，含1～8个碳的酰氧基，苯基，芳基；除非另有说明，本发明中的烷基是指1～8个碳原子的烷基。
本发明的另一个目的是提供一种式(1)所示的A环多氧化取代的五环三萜类衍生物的制备方法。
本发明的另一个目的是提供了式(1)化合物用于防治口腔上皮癌、前列腺癌、鼻咽癌、肺癌、肝癌、子宫颈癌及其相关肿瘤疾病的用途。
本发明的再一个目的是提供了一种含有式(1)化合物的用于防治口腔上皮癌、前列腺癌、鼻咽癌、肺癌、肝癌、子宫颈癌及其相关肿瘤疾病的药物组合物。
本发明的又一目的是提供了式(1)化合物用于防治糖尿病相关疾病以及与α-葡萄糖苷酶相关的病毒性疾病的用途。
本发明的另一目的是提供了一种含有式(1)化合物的用于防治糖尿病相关疾病以及与α-葡萄糖苷酶相关的病毒性疾病的药物组合物。
本发明提供了一种具有式(1)所示的A环多氧化取代的五环三萜类衍生物及其可药用盐或溶剂化物
式(1) 其中R1～R3可以相同或不同，分别选自氢，含1～8个碳原子的烷氧基，含1～8个碳原子的酰氧基，含1～8个碳原子的磺酰氧基，卤素，氨基，硝基，氰基，羟基，羰基；2，3位之间可以是碳碳单键或者双键；2，3位之间还可以是环氧基。R4选自COOH，-Me，-CH2OH，-COOR5，-CONH2，-CONHR5，-CON(R5)2，其中R5是含1～8个碳原子的烷基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的苯烷基；其中“取代或未取代”是指基团可以未被取代或者被取代，用作取代的取代基选自卤素，氨基，硝基，巯基，氰基，羟基，含1～8个碳的烷氧基，含1～8个碳的酰氧基，苯基，芳基；除非另有说明，本发明中的烷基是指1～8个碳原子的烷基。
本发明的式(1)化合物中，当R1，R2为氢原子，2，3位之间为双键时，是一类优选的式(I)化合物
式(I) 其中R3，R4与式(1)化合物的定义相同。优选R3选自氢，含1～8个碳原子的酰氧基，含1～8个碳原子的磺酰氧基，卤素，氨基，硝基，氰基，羟基，羰基；R4选自-COOH，-Me，-CH2OH，-COOR5，-CONH2，-CONHR5，-CON(R5)2，其中R5是含1～8个碳原子的烷基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的苯烷基。
本发明更优选的式(I)化合物是 11-羰基-熊果烷-28-酸-2，12-二烯(Ia)； 11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-2，12-二烯(Ib)； 1，11-二羰基-熊果烷-28-酸-2，12-二烯(Ic)； 1，11-二羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-2，12-二烯(Id)； 1α乙酰氧基-11-羰基-熊果烷-28-酸-2，12-二烯(Ie)； 1α-乙酰氧基-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-2，12-二烯(If)； 1α-羟基-11-羰基-熊果烷-28-酸-2，12-二烯(Ig)； 1α-羟基-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-2，12-二烯(Ih)。
上述式(I)化合物的制备过程具体举例说明如下 熊果酸与甲基磺酰氯在二氯甲烷作溶剂、三乙胺作缚酸剂、0℃下反应得到3β-甲基磺酰氧基-熊果烷-28-酸-12-烯，再被三氧化铬氧化得到3β-甲基磺酰氧基-11-羰基-熊果烷-28-酸-12-烯，在碳酸锂的作用下，175℃下反应得到化合物Ia。熊果酸与重氮甲烷反应得到3β-羟基-熊果烷-28-羧酸甲酯-12-烯，再按照上述步骤得到化合物Ib。化合物Ic、Id分别由化合物Ia、Ib与三氧化铬在醋酸和醋酸酐作溶剂中反应得到。(如合成路线1所示) 化合物Ie、If分别由化合物Ia、Ib与二氧化硒反应得到。化合物Ie、If再在碱性条件下水解分别得到化合物Ig、Ih。(如合成路线2所示) 合成路线如下 合成路线1
合成路线2
为了更好地理解本发明的实质，下面分别用制备实施例的形式说明化合物制备的过程，实施例给出了代表性化合物的部分物理和化学及波谱学数据。必须说明，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
实施例1化合物Ig的制备 冰盐浴下，熊果酸(1.0mmol)溶解在10毫升二氯甲烷中，加入6毫升三乙胺，0℃下滴加甲基磺酰氯(16.3mmol)。室温搅拌4小时。过滤，滤液以1摩尔/升盐酸溶液5毫升洗涤，水洗至中性，无水硫酸镁干燥。减压脱溶得到3β-甲基磺酰氧基-熊果烷-28-酸-12-烯。用10毫升醋酸(含0.5毫升醋酸酐)溶解，加入三氧化铬(4.0mmol)，室温搅拌过夜。反应液中加入10毫升水和10毫升二氯甲烷，分层后，水层以二氯甲烷10毫升萃取。合并有机层，以饱和的碳酸氢钠溶液10毫升洗涤，再水洗至中性，无水硫酸镁干燥。减压脱溶得到3β-甲基磺酰氧基-11-羰基-熊果烷-28-酸-12-烯。用10毫升的N，N-二甲基乙酰胺溶解，加入碳酸锂(2.0mmol)，加热回流。过滤，滤液加10毫升水和10毫升乙醚。分层后，水层以10毫升乙醚萃取，合并有机层，以1摩尔/升的盐酸溶液10毫升洗涤，再水洗至中性。无水硫酸镁干燥。硅胶柱层析(洗脱液石油醚/乙酸乙酯；4/1)得到化合物Ia，白色固体，产率37.5％。
化合物Ia(1.0mmol)和二氧化硒(2.0mmol)在10毫升醋酸中加热回流2小时。过滤，滤液中加入10毫升水和10毫升二氯甲烷。分层后，水层以二氯甲烷10毫升萃取，合并有机层，饱和碳酸氢钠溶腋10毫升洗涤，再水冼至中性。无水硫酸镁干燥。硅胶柱层析(洗脱液石油醚/乙酸乙酯3/1)得到化合物Ie，褐色固体，产率17.2％。
化合物Ie(1.0mml)溶解在10毫升乙醇中，加入氢氧化钾(8.0mmol)的1毫升水溶液，加热回流2小时。脱溶，除去大部分溶剂。加入10毫升水和10毫升乙酸乙酯。分层后，水层以乙酸乙酯10毫升萃取，合并有机层，以1摩尔/升的盐酸溶液10亳升洗涤，水洗至中性，无水硫酸镁干燥。硅胶柱层析(洗脱液石油醚/乙酸乙酯2/1)得到化合物Ig，白色固体，产率20.4％。
根据实施例1的方法制备以下所示实施例2～实施例9化合物 实施例211-羰基-熊果烷-28-酸-2，12-二烯(Ia)的制备，C30H44O3，MSESI m/e 452(M+)；Rf[(石油醚/乙酸乙酯3/1)+1％HCOOH]0.60；1HNMR(400MHz)δ0.87(d，3H，J＝6.0Hz)，0.97(d，3H，J＝6.4Hz)，5.36(dd，1H，J＝2.0，10.0Hz，H-3)，5.43(dd，1H，J＝5.6，10.0Hz，H-2)，5.62(s，1H，H-12)。
实施例311-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-2，12-二烯(Ib)的制备，C31H48O3，MSESI m/e 466(M+)；Rf(石油醚/乙酸乙酯3/1)0.82；1HMR(400MHz)δ0.87(d，3H，J＝6.4Hz)，0.97(d，3H，J＝7.2Hz)，3.62(s，3H，OMe)，5.37(d，1H，J＝10.4Hz，H-3)，5.43(dd，1H，J＝6.0，10.4Hz，H-2)，5.66(s，1H，H-12)。
实施例41，11-二羰基-熊果烷-28-酸-2，12-二烯(Ic)的制备，C30H42O4，MSESI m/e 466(M+)；Rf(石油醚/氯仿/甲醇4/4/0.6)0.37；1HNMR(400MHz)δ0.92(d，3H，J＝6.4Hz)，0.97(d，3H，J＝6.4Hz)，5.69(s，1H，H-12)，5.80(d，1H，J＝10.4Hz，H-2)，6.24(d，1H，J＝10.4Hz，H-3)。
实施例51，11-二羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-2，12-二烯(Id)的制备，C31H44O4，MSESI m/e 480(M+)；Rf(石油醚/氯仿/甲醇4/4/0.6)0.83；1HNMR(400MHz)δ0.93(d，3H，J＝8.0Hz)，0.98(d，3H，J＝6.4Hz)，3.60(s，3H，OMe)，5.70(s，1H，H-12)，5.80(d，1H，J＝10.4Hz，H-2)，6.27(d，1H，J＝10.4Hz，H-3)。
实施例61α-乙酰氧基-11-羰基-熊果烷-28-酸-2，12-二烯(Ie)的制备，C32H46O5，MSESI m/e 510(M+)；Rf[(石油醚/乙酸乙酯3/1)+1％HCOOH]0.49；1HNMR(400MHz)δ0.85(d，3H，J＝6.4Hz)，0.96(d，3H，J＝5.6Hz)，1.92(s，3H，COMe)，5.60(m，2H，H-1，H-3)，5.76(m，2H，H-2，H-12)。
实施例71α-乙酰氧基-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-2，12-二烯(If)的制备，C33H48O5，MSESI m/e 524(M+)；Rf(石油醚/乙酸乙酯3/1)0.69；1HNMR(400MHz)δ0.85(d，1H，J＝6.4Hz)，0.97(d，1H，J＝7.2Hz)，1.92(s，3H，COMe)，3.61(s，3H，OMe)，5.61(m，2H，H-1，H-3)，5.76(m，2H，H-2，H-12)。
实施例81α-羟基-11-羰基-熊果烷-28-酸-2，12-二烯(Ig)的制备，C30H44O54，MSESIm/e468(M+)；Rf[(石油醚/乙酸乙酯3/1)+1％HCOOH]0.30；1HNMR(400MHz)δ0.89(d，3H，J＝6.0Hz)，0.98(d，3H，J＝5.6Hz)，4.70(d，1H，J＝5.6Hz，H-1)，5.54(d，1H，J＝10.0Hz，H-3)，5.69(s，1H，H-12)，5.72(dd，1H，J＝5.6，10.0Hz，H-2)。
实施例91α-羟基-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-2，12-二烯(Ih)的制备，C31H46054，MSESIm/e482(M+)；Rf(石油醚/乙酸乙酯3/1)0.51；1HNMR(400MHz)δ0.86(d，3H，J＝5.6Hz)，0.95(d，3H，J＝5.6Hz)，3.60(s，3H，OMe)，4.68(d，1H，J＝6.0Hz，H-1)，5.51(d，1H，J＝10.0Hz，H-3)，5.65(s，1H，H-12)，5.69(dd，1H，J＝6.0，10.0Hz，H-2)。
本发明的式(1)化合物中，当2，3位之间为单键时，是一类优选的式(II)化合物
式(II) 其中R1，R2，R3，R4与式(1)化合物的定义相同；其条件是1.当R1为α-羟基，R2为β-羟基，R3为氢时，R4不能为COOH；2.当R1为羟基、羰基、乙酰氧基，而R2，R3同时为氢时，R4不能为COOH、COOMe；3.当R1为羰基，R2为氰基，R3为氢时，R4不能为COOMe。
优选R1，R2，R3可以相同或者不同，分别选自氢，含1～8个碳原子的酰氧基，含1～8个碳原子的磺酰氧基，卤素，氨基，硝基，氰基，羟基，羰基，或者R1，R2之间可以形成环氧基；R4选自-COOH，-Me，-CH2OH，-COOR5，-CONH2，-CONHR5，-CON(R5)2，其中R5是含1～8个碳原子的烷基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的苯烷基。
本发明更优选的式(II)化合物是 2，3-环氧11-羰基-熊果烷-28-酸-12-烯(IIa)； 2，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯12-烯(IIb) 2β，3α-二羟基-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-12-烯(IIc)； 2α，3β-二羟基-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-12-烯(IId)； 1α-乙酰氧基-2，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-酸-12-烯(IIe)； 1α-乙酰氧基-2，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-12-烯(IIf)； 1α-羟基-2，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-酸-12-烯(IIg)； 1α-羟基-2，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-12-烯(IIh)；
该类化合物具体制备过程举例说明如下 化合物IIa、IIb和IIe～IIh分别由化合物Ia、Ib和IIe～Ih经间氯过氧苯甲酸氧化得到(如合成路线3所示)。化合物IIb在不同条件下酸性开环得到化合物IIc和化合物IId(如合成路线4所示)。当代合物IIb以四氢呋喃为溶剂，加入浓硫酸的水溶液，加热回流得到化合物IIc；当化合物IIb以氯仿为溶剂，加入浓盐酸，室温搅拌得到化合物IId。
合成路线如下 合成路线3
R3＝OAc，R4＝COOHIe R3＝OAc，R4＝COOH IIe R3＝OAc，R4＝COOMe IfR3＝OAc，R4＝COOMe IIf R3＝OH，R4＝COOH Ig R3＝OH，R4＝COOH IIg R3＝OH，R4＝COOMe Ih R3＝OH，R4＝COOMe IIh 合成路线4
实施例10化合物IIb和IIc的制备 在10毫升二氯甲烷中，加入化合物Ib(1.0mmol)与间氯过氧苯甲酸(1.1mmol)，室温搅拌12小时。加入10毫升水。水层以二氯甲烷10毫升萃取，合并有机层，以饱和碳酸氢钠溶液10毫升洗涤，再水洗至中性。无水硫酸镁干燥。硅胶柱层析(洗脱液石油醚/乙酸乙酯8/1)得到化合物IIb，白色固体，产率93.3％。
将化合物IIb溶解在10毫升乙醇中，加入1毫升水和5滴浓硫酸，加热回流1小时。脱去大部分溶剂，加入10毫升水和10毫升乙酸乙酯。水层以乙酸乙酯10毫升萃取，合并有机层，饱和碳酸氢钠溶液10毫升洗涤，再水洗至中性，无水硫酸镁干燥。硅胶柱层析(洗脱液石油醚/乙酸乙酯1/1)得到化合物IIc，白色固体，产率69.3％。
根据实施例10的方法制备以下所示实施例11～实施例18化合物 实施例112，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-酸-12-烯(IIa)的制备，C30H44O4，MSESI m/e 468(M+)；Rf(石油醚/乙酸乙酯3/1)0.45；1H NMR(400MHz)δ0.88(d，3H，J＝6.0Hz)，0.97(d，3H，J＝6.4Hz)，2.81(d，1H，J＝4.0Hz，H-3)，3.22(dd，1H，J＝4.0，6.8Hz，H-2)，5.62(s，1H，H-12)。
实施例122，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-12-烯(IIb)的制备，C31H46O4，MSESIm/e482(M+)；Rf(石油醚/乙酸乙酯3/1)0.71；1HNMR(400MHz)δ0.87(d，3H，J＝6.0Hz)，0.97(d，3H，J＝6.0Hz)，2.81(d，1H，J＝4.0Hz，H-3)，3.22(dd，1H，J＝4.0，6.4Hz，H-2)，3.61(s，3H，OMe)，5.65(s，1H，H-12)。
实施例132β，3α-二羟基-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-12-烯(IIc)的制备，C31H48O5，MSESI m/e 500(M+)；Rf(石油醚/乙酸乙酯3/1)0.05；1HNMR(400MHz)δ0.85(d，3H，J＝6.4Hz)，0.97(d，3H，J＝6.0Hz)，3.61(s，3H，OMe)，3.68(m，2H，H-2，H-3)，5.46(s，1H，H-12)。
实施例142α，3β-二羟基-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-12-烯(IId)的制备，C31H48O5，MSESI m/e 500(M+)；Rf(石油醚/乙酸乙酯3/1)0.54；1HNMR(400MHz)δ0.87(d，3H，J＝6.4Hz)，0.97(d，3H，J＝6.4Hz)，3.81(d，1H，J＝10.4Hz，H-3)，3.61(s，3H，OMe)，4.09(dd，1H，J＝8.0，10.4Hz，H-2)，5.66(s，1H，H-12)。
实施例151α-乙酰氧基-2，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-酸-12-烯(IIe)的制备，C32H46O5，MSESI m/e 510(M+)；Rf[(石油醚/乙酸乙酯3/1)+1％HCOOH0.49；1HNMR(400MHz)δ0.85(d，3H，J＝6.4Hz)，0.96(d，3H，J＝5.6Hz)，1.98(s，3H，COMe)，2.94(d，1H，J＝4.0Hz，H-3)，3.66(dd，1H，J＝4.0，6.0Hz，H-2)，5.64(s，1H，H-12)，5.68(d，1H，J＝6.0Hz，H-1)。
实施例161α-乙酰氧基-2，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-12-烯(IIf)制备，C33H48O5，MSESI m/e 524(M+)；Rf(石油醚/乙酸乙酯3/1)0.69；1HNMR(400MHz)δ0.85(d，3H，J＝6.4Hz)，0.96(d，3H，J＝6.4Hz)，1.98(s，3H，COMe)，2.91(d，1H，J＝3.6Hz，H-3)，3.61(s，3H，OMe)，3.62(dd，1H，J＝3.6，5.6Hz，H-2)，5.62(s，1H，H-12)，5.62(d，1H，J＝5.6Hz，H-1)。
实施例171α-羟基-2，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-酸-12-烯(IIg)的制备，C30H44O5，MSESI m/e 484(M+)；Rf[(石油醚/乙酸乙酯3/1)+1％HCOH]0.23；1HNMR(400MHz)δ0.88(d，3H，J＝6.0Hz)，0.97(d，3H，J＝6.0Hz)，3.05(d，1H，J＝3.6Hz，H-3)，3.54(dd，1H，J＝3.6，6.0Hz，H-2)，4.73(d，1H，J＝6.0Hz，H-1)，5.62(s，1H，H-12)。
实施例181α-羟基-2，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-12-烯(IIh)的制备，C31H46O5，MSESI m/e 498(M+)；Rf(石油醚/乙酸乙酯3/1)0.40；1HNMR(400MHz)δ0.87(d，3H，J＝6.4Hz)，0.96(d，3H，J＝6.0Hz)，3.06(d，1H，J＝3.6Hz，H-3)，3.55(dd，1H，J＝3.6，6.0Hz，H-2)，3.61(s，3H，OMe)，4.75(d，1H，J＝6.0Hz，H-1)，5.63(s，1H，H-12)。
式(1)化合物具有重要的生物活性，体外对六株肿瘤细胞包括人前列腺癌细胞(PC-3)，鼻咽细胞(CNE)，口腔上皮癌细胞株(KB)，人肺癌细胞(A549)，人肝癌细胞(BEL-7404)，人子宫颈癌细胞(Hela)的细胞毒活性试验表明此类A环多氧化取代的五环三萜类衍生物及其中间体系列化合物(具体见实施例)对肿瘤细胞生长具有抑制作用，有可能发展成为新的防治肿瘤药物。此外，此类A环多氧化取代的五环三萜类衍生物对α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)显示出明显抑制作用，有可能发展成为新的防治糖尿病和治疗病毒类疾病药物。
本发明的式(1)化合物或其可药用盐及其溶剂化物可以与药学上常用的辐料或载体结合，制备得到具有肿瘤细胞生长抑制活性从而可以用于防治肿瘤的药物组合物。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物，还可以采用现代制药界所公知的控释或缓释剂型或纳米制剂。
本发明的式(1)化合物或其可药用盐及其溶剂化物可以与现已上市的抗肿瘤药物如铂类药物顺铂(DDP)、喜树碱类药物伊立替康(Irinatecan、CPT-11)、长春花碱类药物失碳长春花碱(Vinorebine，NVB诺维本)、脱氧胞昔类药物吉西他滨(Gemcitabine，Gemzar，健择)、足叶乙甙(Etoposide)、紫杉醇(Paclitaxel)等联合使用，制备得到具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的降糖活性组合物，可用于治疗糖尿病尤其是非胰岛素依赖性糖尿病(II型糖尿病)；或者可以用于制备以α-葡萄糖苷酶抑制为机制的抗病毒类药物。该类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物，还可以采用现代制药界所公知的控释或缓释剂型或纳米制剂。。
本发明的式(1)化合物或其可药用盐及其溶剂化物可以与药学上常用的辐料或载体结合，制备得到具有α-葡萄糖苷酶抑制活性从而可以用于防治糖尿病或病毒性疾病的药物组合物。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物，还可以采用现代制药界所公知的控释或缓释剂型或纳米制剂。。
为了更好地理解本发明的实质，下面分别用该类A环多氧化取代的五环三萜类衍生物化合物对六种肿瘤细胞株生长的抑制作用的药理实验结果，以及对α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)的抑制作用实验结果，说明其在抗肿瘤药物研究领域中的新用途，以及其在防治糖尿病和治疗病毒类疾病活性的新用途。药理实施例给出了代表性化合物的部分活性数据。必须说明，本发明的药理实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
药理实施例1化合物IIb对KB细胞的细胞毒活性 KB(口腔上皮癌)细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。细胞以每孔5×103的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法。细胞经过24小时的孵育后，分别将新配的化合物VIa的二甲亚砜溶液以浓度梯度加入到各孔中，使孔中化合物IIb最终浓度分别为100μg/mL，33.3μg/mL，11.1μg/mL和3.7μg/mL。72小时后，加入10μLMTT(5mg/mL)的磷酸盐缓冲液，再继续在37℃培养4小时后，离心5分钟除去未转化的MTT，每孔中加入200μL二甲亚砜，以溶解还原的MTT晶体甲臜(formazan)，所形成的formazan用酶标仪在570nm波长下比色，细胞存活率由样品相对于对照品的比值计算。其中化合物IIb对KB细胞半抑制浓度(IC50)由剂量效应曲线得到。
化合物的IC50为4.88×10-5M；而阳性对照顺铂对KB细胞的IC50为1.07×10-5M。
实验结论KB细胞是测试化合物对肿瘤细胞的细胞毒性的有效工具和评价指标。本实验表明此类A环多氧化取代的五环三萜类衍生物及其中间体系列化合物，对KB细胞具有较强的细胞毒性，和顺铂在同一数量级，有可能发展成为新的具有抗口腔上皮癌及其他相关肿瘤作用的药物。
药理实施例2化合物IIc对PC-3细胞的细胞毒活性 PC-3(前列腺癌)细胞用F-12培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。细胞以每孔5×103的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如药理实施例1。其中化合物IIc对PC-3细胞半抑制浓度(IC50)由剂量效应曲线得到。
化合物IIc的IC50为7.88×10-5M；而阳性对照顺铂对PC-3细胞的IC50为2.36×10-5M。
实验结论本实验表明此类A环多氧化取代的五环三萜类衍生物及其中间体系列化合物对PC-3细胞具有较强的细胞毒性，和顺铂在同一数量级，有可能发展成为新的具有治疗前列腺癌及相关肿瘤作用的药物。
药理实施例3化合物IIc对CNE细胞的细胞毒活性 CNE(鼻咽癌)细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。以每孔5×103细胞的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如药理实施例1。其中化合物IIc对CNE细胞半抑制浓度(IC50)由剂量效应曲线得到。
化合物IIc的IC50为6.76×10-5M；而阳性对照顺铂对CNE细胞的IC50为1.21×10-5M。
实验结论本实验表明此类A环多氧化取代的五环三萜类衍生物及其中间体系列化合物对CNE细胞具有较强的细胞毒性，和顺铂在同一数量级，有可能发展成为新的具有抗鼻咽瘤及相关肿瘤作用的药物。
药理实施例4化合物IIc对A549细胞的细胞毒活性 A549(人肺癌)细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。细胞以每孔5×103的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MIT法，具体方法如药理实施例1。其中化合物IIc对A549细胞半抑制浓度(IC50)由剂量效应曲线得到。
化合物IIc的IC50为9.11×10-5M；而阳性对照顺铂对A549细胞的IC50为1.44×10-5M。
实验结论本实验表明此类A环多氧化取代的五环三萜类衍生物及其中间体系列化合物对A549细胞具有较强的细胞毒性，和顺铂在同一数量级，有可能发展成为新的具有抗肺癌及相关肿瘤作用的药物。
药理实施例5化合物IIb对BEL-7404细胞的细胞毒活性 BEL-7404(人肝癌)细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。细胞以每孔5×103的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如药理实施例1。其中化合物IIb对BEL-7404细胞半抑制浓度(IC50)由剂量效应曲线得到。
化合物IIb的IC50为2.72×10-5M；而阳性对照顺铂对BEL-7404细胞的IC50为2.58×10-5M。
实验结论本实验表明此类A环多氧化取代的五环三萜类衍生物及其中间体系列化合物对BEL-7404细胞具有较强的细胞毒性，和顺铂在同一数量级，有可能发展成为新的具有抗肝癌及相关肿瘤作用的药物。
药理实施例6化合物IIc对Hela细胞的细胞毒活性 Hela(人子宫颈癌)细胞用RPMI 1640培养基培养，培养基中含10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL的链霉素。细胞以每孔5×103的浓度加入到96孔板中，在37℃含5％CO2潮湿空气的培养箱中培养24小时。
细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如药理实施例1。其中化合物IIc对Hela细胞半抑制浓度(IC50)由剂量效应曲线得到。
化合物IIc的IC50为6.38×10-5M；而阳性对照顺铂对Hela细胞的IC50为9.78×10-6M。
实验结论本实验表明此类A环多氧化取代的五环三萜类衍生物及其中间体系列化合物对Hela细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗子宫颈癌及相关肿瘤作用的药物。
药理实施例7化合物Ic对α-葡萄糖苷酶的抑制作用 化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用测定采用ELISA法。样品孔中加入磷酸缓冲液(67mM，pH6.8，170μL)，还原型谷胱甘肽(1mg/mL，5μL)，α-D-glucosidase(0.2U/mL，25μL)，化合物Ic用二甲亚砜溶解，用磷酸缓冲液稀释，每孔25μL，使其终浓度为0.04mg/mL，0.004mg/mL，0.0004mg/mL，加入底物4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(23.2mM，25μL)，37℃，水浴反应15min后，加入碳酸钠(1M，50μL)终止反应，在405nm波长处比色测定。空白孔中用相同体积的Tris-HCl缓冲液代替底物。溶剂对照孔中加入与化合物等浓度的二甲亚砜。化合物抑制率由样品OD值对于空白和对照OD值计算。其中化合物Ic对α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度(IC50)由剂量效应曲线得到。
化合物Ic的IC501.55×10-5M；而阳性对照阿卡波糖acarbose对α-葡萄糖苷酶的IC50为1.96×10-4M。
实验结论本实验表明此类A环多氧化取代的五环三萜类衍生物及其中间体系列化合物对α-葡萄糖苷酶具有很强的抑制活性，有可能发展成为新的具有防治糖尿病的药物和治疗与α-葡萄糖苷酶相关联的病毒性疾病。
权利要求
1.一种式(1)所示的A环多氧化取代的五环三萜类化合物及其可药用盐或溶剂化物。
式(1)
其中R1～R3可以相同或不同，分别选自氢，含1～8个碳原子的烷氧基，含1～8个碳原子的酰氧基，含1～8个碳原子的磺酰氧基，卤素，氨基，硝基，氰基，羟基，羰基；2，3位之间可以是碳碳单键或者双键；2，3位之间还可以是环氧基。R4选自COOH，-Me，-CH2OH，-COOR5，-CONH2，-CONHR5，-CON(R5)2，其中R5是含1～8个碳原子的烷基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的苯烷基；其中“取代或未取代”是指基团可以未被取代或者被取代，用作取代的取代基选自卤素，氨基，硝基，巯基，氰基，羟基，含1～8个碳的烷氧基，含1～8个碳的酰氧基，苯基，芳基；除非另有说明，本发明中的烷基是指1～8个碳原子的烷基。
2.根据权利要求1的式(I)化合物及其可药用盐或溶剂化物，其特征是式(1)化合物中的R1，R2为氢原子，而2，3位之间为双键；
式(I)
其中R3，R4与式(1)化合物的定义相同；优选R3选自氢，含1～8个碳原子的酰氧基，含1～8个碳原子的磺酰氧基，卤素，氨基，硝基，氰基，羟基，羰基；R4选自-COOH，-Me，-CH2OH，-COOR5，-CONH2，-CONHR5，-CON(R5)2，其中R5是含1～8个碳原子的烷基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的苯烷基。
3.根据权利要求1的式(II)化合物及其可药用盐或溶剂化物，其特征是式(1)化合物中2，3位之间为单键
式(II)
其中R1，R2，R3，R4与式(1)化合物的定义相同；其条件1.当R1为α-羟基，R2为β-羟基，R3为氢时，R4不能为COOH；2.当R1为羟基、羰基、乙酰氧基，而R2，R3同时为氢时，R4不能为COOH、COOMe；3.当R1为羰基，R2为氰基，R3为氢时，R4不能为COOMe；
优选R1，R2，R3可以相同或者不同，分别选自氢，含1～8个碳原子的酰氧基，含1～8个碳原子的磺酰氧基，卤素，氨基，硝基，氰基，羟基，羰基，或者R1，R2之间可以形成环氧基；R4选自-COOH，-Me，-CH2OH，-COOR5，-CONH2，-CONHR5，-CON(R5)2，其中R5是含1～8个碳原子的烷基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的苯烷基。
4.根据权利要求2的式(I)化合物，它们是
11-羰基-熊果烷-28-酸-2，12-二烯(Ia)；
11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-2，12-二烯(Ib)；
1，11-二羰基-熊果烷-28-酸-2，12-二烯(Ic)；
1，11-二羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-2，12-二烯(Id)；
1α-乙酰氧基-11-羰基-熊果烷-28-酸-2，12-二烯(Ie)；
1α-乙酰氧基-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-2，12-二烯(If)；
1α-羟基-11-羰基-熊果烷-28-酸-2，12-二烯(Ig)；
1α-羟基-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-2，12-二烯(Ih)。
5.根据权利要求3的式(II)化合物，它们是
2，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-酸-12-烯(IIa)；
2，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-12-烯(IIb)
2β，3α-二羟基-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-12-烯(IIc)；
2α，3β-二羟基-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-12-烯(IId)；
1α-乙酰氧基-2，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-酸-12-烯(IIe)；
1α-乙酰氧基-2，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-12-烯(IIf)；
1α-羟基-2，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-酸-12-烯(IIg)；
1α-羟基-2，3-环氧-11-羰基-熊果烷-28-羧酸甲酯-12-烯(IIh)。
6.权利要求2和4中式(I)化合物的制备过程，包括将熊果酸及其衍生物作为起始物，经过3-位羟基保护，11-位亚甲基氧化，脱3-位保护基成双键以及1-位氧化；可以单独或者联合使用来制备不同的式(I)化合物。其中3-位羟基保护优选用成酯保护，更优选在有机胺存在下用酰氯反应成酯；11-位亚甲基氧化优选无机铬和有机铬氧化剂；脱3-位保护基时优选碱作用下的条件；1-位氧化优选无机硒或有机硒，或者无机铬和有机铬氧化剂，更优选二氧化硒/醋酸或三氧化铬/醋酐氧化反应条件
式(I)。
7.权利要求3和5中式(II)化合物的制备过程，包括将制备出的式(I)化合物作为起始物，经过用常规的化学方法或手性试剂环氧化或者环氧化后再开环制备而得，可以单独或者联合使用来制备不同的式(II)化合物。其中环氧化步骤优选用有机或无机过酸，更优选有机过酸；开环反应优选在手性或非手性的无机酸或有机酸作用下开环；优选非手性的无机酸
8.根据权利要求1～5所述之A环多氧化取代的五环三萜类的化合物及其可药用盐或其溶剂化物用于制备预防或治疗口腔上皮癌、前列腺癌、鼻咽癌、肺癌、肝癌、子宫颈癌及其相关中瘤疾病的药物用途；该类化合物防治糖尿病相关疾病以及与α-葡萄糖苷酶相关的病毒性疾病的用途。
9.根据权利要求8的用途所制备得到的防治口腔上皮癌、前列腺癌、鼻咽癌、肺癌、肝癌、子宫颈癌及其相关肿瘤疾病，防治糖尿病相关疾病以及与α-葡萄糖苷酶相关的病毒性疾病的药物或药物组合物；其含有作为活性或分的治疗有效量的权利要求1～5所述之化合物1或其可药用盐或溶剂化物或者它们的混合物和可药用辅料。
10.根据权利要求8～9的药物或药物组合物，其可以是片剂、胶囊剂、注射剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、贴片剂、皮下植埋剂、外用搽剂、口服液或软膏剂，还可以采用现代制药界所公知的控释或缓释剂型或纳米制剂。
全文摘要
本发明涉及一类A环多氧化取代的五环三萜类衍生物及其可药用盐或溶剂化物。本发明还涉及其制备方法及其药物组合物和医药用途。本发明的化合物具有体外抑制六种人体肿瘤细胞株如人前列腺癌细胞(PC-3)，鼻咽癌细胞(CNE)，口腔上皮癌细胞(KB)，人肺癌细胞(A549)，人肝癌细胞(BEL-7404)，人子宫颈癌细胞(Hela)的活性，且与阳性对照顺铂在同一数量级，可预期作为抗肿瘤药物用途。本发明的化合物还表现出对α-葡萄糖苷酶有着较强的抑制作用，抑制作用超过阳性对照阿卡波糖，可以预期作为防治糖尿病和治疗病毒类疾病用药。
文档编号A61P3/10GK101117349SQ200610104148
公开日2008年2月6日 申请日期2006年8月1日 优先权日2006年8月1日
发明者昱 赵, 冯菊红, 巫秀美, 骅 白, 约阿施·史托克希特 申请人:浙江海正天华新药研发有限公司