专利名称：一种脑肽气雾剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种脑肽气雾剂及其制备方法，属于医药制剂领域。
背景技术：
有关影响记忆的多肽的研究及应用在医学等领域用途广泛，但有关的报道较少。
中国发明专利93112493.X(记忆增强肽及其应用)公开了一种能促进学习和记忆功能的合成多肽，即记忆增强肽(MEP)。经过化学模拟设计，分子动力学推算和结合合成肽的活性动能测定，该合成肽可制成各种形式的药物和饮料食品，用于保健或治疗学习记忆障碍，例如促进大脑早期发育，加强成年学习记忆和治疗老年病痴呆症等。
中国发明专利00116876.2(一类记忆增强肽和它们的用途)在上述专利的基础上，继续对合成多肽的结构进行改造，进行药理试验，改进已有多肽存在的缺陷；该多肽可通过固相多肽合成法或液相多肽合成法制得，合成步骤如下 反应过夜。
反应过夜。
同上1，2处理。
该专利公开的新记忆增强肽结构简单、生产便利、药理作用更强，并能在临床上对未成年儿童智力发育、成年人智力障碍及健忘症、人的记忆功能改善起到促进作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种脑肽气雾剂。
本发明的另一目的是提供上述气雾剂的制备方法。
本发明所述的脑肽气雾剂中包含有溶于药用溶剂的有效量的记忆增强肽，该记忆增强肽的化学结构式为 其中，所述的X为Ala、Leu、Ile、Cys、Phe、Tyr或Val；所述的R1为PyroGlu或H；所述的R2为S-S-C(CH3)3或S-C(CH3)3。
本发明所述的脑肽注射剂中，记忆增强肽的用量按无水醋酸盐计。
所述的脑肽气雾剂，其成分重量份包括记忆增强肽1.5-4.5份水25000-75000份所述的脑肽气雾剂，其特征在于其成分重量份还可以包括记忆增强肽3份水50000份所述的脑肽气雾剂，它还可以是包括下列重量份的成分记忆增强肽1.5-4.5份水25000-75000份增溶剂1300-3800份抑菌剂10-30份。
所述的脑肽气雾剂，其成分重量份为记忆增强肽3份增溶剂甘油2500份抑菌剂对羟基苯甲酸乙酯20份水47500份。
本发明所述脑肽气雾剂的制备方法包括如下步骤(1)称取所述的抑菌剂，加入水，搅拌使溶解；(2)取所述记忆增强肽，加入水，搅拌使溶解；(3)取所述的增溶剂，加入(2)中所得溶液，并搅拌均匀；(4)将(1)中所得溶液与(3)中所得溶液混合，并加水稀释至所需浓度，然后搅拌均匀；
(5)将(4)中所得溶液用1mol/LHCl和1mol/LnaOH溶液调节pH至4.5-6.5；(6)将(5)中所得溶液分装于喷雾器中，每支5ml，即得。
本发明所述的脑肽气雾剂的制备方法进一步包括如下步骤(1)称取所述的抑菌剂对羟基苯甲酸乙酯20份，加入水30000份，加热使溶解；(2)取所述记忆增强肽3份，加入水10000，搅拌使溶解；(3)取所述的增溶剂甘油2500份，加入(2)中所得溶液，并搅拌均匀；(4)将(1)中所得溶液与(3)中所得溶液混合，并加水至溶液为50000份，然后搅拌均匀；(5)将(4)中所得溶液用1mol/LHCl和1mol/LnaOH溶液调节pH至4.5-6.5；(6)将(5)中所得溶液分装于喷雾器中，每支5ml，即得。
上述的脑肽气雾剂为水溶液，可添加氨基酸或糖类等营养物、稳定剂和防腐剂。一般不需缓冲液，脑肽本身酸碱度维持在pH为4.0-7.5之间。溶液对黏膜无刺激性。
本发明脑肽气雾剂可用于口鼻腔喷用。
本发明经大鼠皮下注射和鼻腔喷雾对比试验证明1、鼻腔喷雾吸收利用快。大鼠皮下注射和鼻腔喷雾时脑肽给入(0.1、0.5和2.0mg/Kg)的药时曲线规律十分相似，尾静脉注射(0.5mg/Kg)药-时曲线符合小分子易溶类药物的房室规律。药代动力学参数药物表现吸收相快，消除相慢的规律，皮下注射脑肽的血药浓度随给药剂量的增加而增多。给药剂量相同(0.5mg/kg)鼻腔喷雾和皮下注射药物在大鼠体内的代谢规律基上相似A164.08/172.36，ke0.0070/0.0058，ka2.748/2.240，T(peak)2.177/2.665，C(max)161.178/169.281，皮下注射比鼻腔喷雾时的血药浓度高出21.32％。本项研究确证了脑肽水溶液通过鼻腔喷雾给药，药物不仅能够被吸收，而吸收的速率、吸收量和吸收规律接近于皮下注射给药的结果，三种给药剂量(0.1、0.5和2.0mg/Kg)药后10min的血浆药物浓度均呈良好的线性关系。在0.5mg/kg时皮下给药的绝对生物利用度为75.8％。鼻腔喷雾给药的绝对生物利用度为78.7％。表明这两种途径给药均有很高的生物利用度，而且它们的生物利用度基本一致。
2、动物实验有效。脑肽口鼻腔给药，小鼠避暗实验中对氢溴酸东莨菪碱所引起的记忆获得障碍有改善作用。在脑肽滴鼻给药剂量为1.25μg/kg、2.5μg/kg时，对侧脑室注射Aβ(25-35)所致大鼠空间记忆障碍有改善作用。
同时，本发明脑肽气雾剂鼻腔喷雾临床疗效初步观察显示，对正常儿童、智力低下儿童、注意力障碍多动综合症的儿童等，在提高记忆和理解能力方面有效，无明显毒副反应，但对哮喘与过敏性鼻炎患者需慎用。
具体实施例方式
实施例1(1)称取所述的抑菌剂对羟基苯甲酸乙酯1g，加入无菌蒸馏水3000ml，加热使溶解；(2)取所述记忆增强肽0.15mg，加入无菌蒸馏水1000ml，搅拌使溶解；(3)取所述的增溶剂140ml，加入(2)中所得溶液，并搅拌均匀；(4)将(1)中所得溶液与(3)中所得溶液混合，并加无菌蒸馏水至溶液为5000ml，然后搅拌均匀；(5)将(4)中所得溶液用1mol/LHCl和1mol/LnaOH溶液调节pH至4.5-6.5；(6)将(5)中所得溶液分装于喷雾器中，每支5ml，即得1000瓶。
规格0.150mg(按无水无醋酸盐计)/5ml/瓶。
实施例2(1)称取所述的抑菌剂对羟基苯甲酸乙酯2g，加入无菌蒸馏水3000ml，加热使溶解；(2)取所述记忆增强肽0.300g，加入无菌蒸馏水1000ml，搅拌使溶解；(3)取所述的增溶剂甘油250ml，加入(2)中所得溶液，并搅拌均匀；(4)将(1)中所得溶液与(3)中所得溶液混合，并加入无菌蒸馏水至5000ml，然后搅拌均匀；(5)将(4)中所得溶液用1mol/LHCl和1mol/LnaOH溶液调节pH至4.5-6.5；(6)将(5)中所得溶液分装于喷雾器中，每瓶5ml，即得1000瓶。
规格0.300mg(按无水无醋酸盐计)/5ml/瓶。
实施例3(1)称取所述的抑菌剂对羟基苯甲酸乙酯4.5g，加入无菌蒸馏水3000ml，加热使溶解；(2)取所述记忆增强肽0.15mg，加入无菌蒸馏水1000ml，搅拌使溶解；(3)取所述的增溶剂360ml，加入(2)中所得溶液，并搅拌均匀；(4)将(1)中所得溶液与(3)中所得溶液混合，并加无菌蒸馏水至溶液为5000ml，然后搅拌均匀；
(5)将(4)中所得溶液用1mol/LHCl和1mol/LnaOH溶液调节pH至4.5-6.5；(6)将(5)中所得溶液分装于喷雾器中，每支5ml，即得1000瓶。
规格0.450mg(按无水无醋酸盐计)/5ml/瓶实施例4本例为应用实施例2制备的脑肽气雾剂进行的动物有效性试验。
吸收利用快大鼠皮下注射和鼻腔喷雾时脑肽给入(0.1、0.5和2.0mg/Kg)的药时曲线规律十分相似，尾静脉注射(0.5mg/Kg)药-时曲线符合小分子易溶类药物的房室规律。药代动力学参数药物表现吸收相快，消除相慢的规律，皮下注射脑肽的血药浓度随给药剂量的增加而增多。给药剂量相同(0.5mg/kg)鼻腔喷雾和皮下注射药物在大鼠体内的代谢规律基上相似A164.08/172.36，ke0.0070/0.0058，ka2.748/2.240，T(peak)2.177/2.665，C(max)161.178/169.281，皮下注射比鼻腔喷雾时的血药浓度高出21.32％。
本项研究确证了脑肽水溶液通过鼻腔喷雾给药，药物不仅能够被吸收，而吸收的速率、吸收量和吸收规律接近于皮下注射给药的结果，三种给药剂量(0.1、0.5和2.0mg/Kg)药后10min的血浆药物浓度均呈良好的线性关系。在0.5mg/kg时皮下给药的绝对生物利用度为75.8％。鼻腔喷雾给药的绝对生物利用度为78.7％。表明这两种途径给药均有很高的生物利用度，而且它们的生物利用度基本一致。
动物实验有效皮下注射脑肽皮下注射临床前药效研究依据新药药效指导原则要求记忆障碍动物模型，主要观察药物脑肽给药对氢溴酸东莨菪碱所致小鼠学习记忆障碍的影响、观察脑肽给药对东莨菪碱引起小鼠学习记忆障碍的影响、观察药物脑肽给药，对侧脑室注射凝聚态的Aβ(25-35)造成大鼠空间学习记忆障碍的影响。和给药对东莨菪碱引起小鼠学习记忆障碍的影响(水迷宫、避暗法)结果如下避暗法实验结果进行统计并比较各组正常小鼠进入暗箱的时间即潜伏期以及钻入暗室的次数即错误次数。
结果见下表1表1脑肽对氢溴酸东莨菪碱引起的记忆获得障碍的作用(避暗法)
N＝12与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01从上表结果可以看出各组与模型组相比，在小鼠避暗实验中，脑肽皮下注射给药，可以延长潜伏期，对入盲端的错误次数也有显著性差异。
正常小鼠，水迷宫法，结果见下表2、3表2脑肽对氢溴酸东莨菪碱引起的记忆获得障碍的作用(水迷宫)
N＝12*与模型组比较P＜0.05，**P＜0.01表3脑肽对氢溴酸东莨菪碱引起的记忆获得障碍的作用(水迷宫)
N＝12*与模型组比较P＜0.05从表2、3中可以看出在训练的第2天小剂量脑肽组与东莨菪碱模型组在潜伏期方面有显著差异。在训练的第3天正常对照组、脑肽皮下注射给药各组与东莨菪碱模型组相比在潜伏期及错误次数方面都有显著差异。
结论脑肽皮下注射给药，对小鼠避暗实验中氢溴酸东莨菪碱引起的记忆获得障碍有改善作用。在小鼠水迷宫实验中有对抗东莨菪碱所造成的记忆障碍的作用。
口鼻腔给药脑肽口鼻喷剂型的临床前药效研究依据新药药效指导原则的记忆障碍动物模型的要求，主要观察药物脑肽给药对氢溴酸东莨菪碱所致小鼠学习记忆障碍的影响、观察脑肽给药对东莨菪碱引起小鼠学习记忆障碍的影响、观察药物脑肽给药，对侧脑室注射凝聚态的Aβ(25-35)造成大鼠空间学习记忆障碍的影响。其结果如下
脑肽鼻喷给药对氢溴酸东莨菪碱所致小鼠学习记忆障碍的试验表明昆明种小鼠，体重20±2g，雄性，随机分6组，正常对照组，氢溴酸东莨菪碱模型组，脑复康对照组(500mg/kg)灌胃，脑肽(0.2μg/20g/5μl、0.1μg/20g/5μl和0.05μg/20g/5μl)经滴鼻给药，正常对照组和模型组点水，连续给药一周。最后一次给药4小时后腹腔注射氢溴酸东莨菪碱5mg/kg，再半小时后进行小鼠避暗训练。第二天测定记忆情况。
比较脑肽各组与模型组相比，在小鼠避暗法实验中，脑复康500mg/kg灌胃，脑肽10μg/kg、5μg/kg、2.5μg/kg鼻喷给药均能减少第一次错误潜伏期和错误次数，与模型组比较均有显著性差异。
结论脑肽口鼻腔给药，小鼠避暗实验中对氢溴酸东莨菪碱所引起的记忆获得障碍有改善作用。
用脑肽给药对东莨菪碱引起小鼠学习记忆障碍的试验表明在昆明种小鼠，体重20±2g，雄性，按随机分6组，正常对照组灌服水，东莨菪碱模型组灌服水，脑复康组(灌胃)，脑肽三剂量组鼻喷给药(10μg/kg、5μg/kg、2.5μg/kg)。动物给药7天后，给药第8天到第12天进行小鼠水迷宫训练。除正常对照组外的其余五组在每天在训练后立即腹腔注射东莨菪碱(5mg/kg)。从动物全程水迷宫游泳(第三天后)即训练的第3天起可以看出，中剂量脑肽(5μg/kg)给药组与东莨菪碱模型组在潜伏期相比有显著缩短，其它各组均未明显缩短潜伏期。在训练的第4、5天正常对照组、脑肽给药5μg/kg、2.5μg/kg剂量组与东莨菪碱模型组在缩短潜伏期方面都有显著差异。错误次数方面第4、5天可见脑肽给药5μg/kg组与模型组比较错误次数显著减少，对照组第4天与模型组比较可见显著减少错误次数和脑肽给药10μg/kg组第5天与模型组比较可显著减少错误次数。
结论脑肽口鼻腔给药，在小鼠水迷宫实验中有对抗东莨菪碱所造成的记忆障碍的作用。
脑肽滴鼻给药，对侧脑室注射凝聚态的Aβ(25-35)造成大鼠空间学习记忆障碍的试验表明在52只雄性大鼠，按随机分成五组，即手术对照组，Aβ模型组以及脑肽三剂量组(1.25μg/kg、2.5μg/kg、5μg/kg)滴鼻给药。术后第二天开始给药，脑肽按三剂量组，以0.05ml/200g体重的体积每天滴鼻，手术对照组和Aβ模型组每天滴以等体积的蒸馏水，连续给药11天后，头顶部用染发剂染成深黑色(约2cm2)进行Morris水迷宫训练。结果可见在脑肽滴鼻给药剂量为1.25μg/kg、2.5μg/kg时，对侧脑室注射Aβ(25-35)所致大鼠空间记忆障碍有改善作用。
实施例5本例为脑肽气雾剂临床疗效初步观察。
所用脑肽气雾剂为实施例2中所制。
喷雾剂临床疗效初步观察鼻腔喷鼻剂(以下简称鼻喷剂)是一种小分子氨基酸，动物实验证明其有很强的记忆增强作用，无毒性，为了进一步观察其临床疗效与副作用，1999年5月以来，我院儿科心理专科门诊对志愿接受鼻喷剂治疗的学习困难儿童、智力低下与注意力障碍多动综合症的儿童、并包括部分正常儿童，随机给予试用，今将有关资料报道如下对象与方法1 对象1999年5月以来儿科心理门诊中志愿接受英泰鼻喷剂治疗的学习困难儿童，智力低下、注意力障碍多动综合症的儿童，脑炎后遗症、脑外伤后遗，其它心理障碍与孤独症的儿童等，同时尚包括个别志愿接受治疗的正常儿童。
2 方法2.1入组者大部分做了韦氏智力测定与注意力测定，部分还做了CBCL的测定，同时了解了个人的学习情况。
2.2鼻喷剂(记忆增强肽MEP-421)为实施例2产品。
2.3鼻喷剂干粉安瓿，用时用7ml注射用水或生理盐水溶解，注入鼻喷器内即可使用，每日2次，早晚各1次，每次1-2喷，每喷的定量药液为0.1ml(含5ug)，用后喷头檫净并用塑料盖套上后放置冰箱中保存，用完后可继续到专科门诊随访并领取新药。
2.4门诊随访记录药效与副作用。
2.5疗效评估本组随机用药，未设对照，采用自身前后对照，少数做了韦氏智力测验对照，大部分以父母、老师与儿童本身诉说为主，用药前后记忆力与学习能力改进情况、背读记忆、理解能力与考试成绩等。重度MR与孤独症的患儿用药后自我控制的能力与正确交流情况有无改善等。
2.6本组初诊给药85例，30例未来复诊而失访，未用药者5例。2例因用药后促发哮喘发作，1例过敏性鼻炎用药后鼻衄而停药，1例怕副作用，1例喷鼻不习惯未用。有随访资料的50例。本组重点分析该50例治疗效果与副作用。
3 结果本组用鼻喷剂治疗获随访资料50例，其中男30例女20例。年龄分布6-9岁14例(28％)，10-12岁22例(44％)，13-15岁13例(26％)，15岁1例(2％)。
50例中作韦氏智力测定的42例，正常范围的24例(其中包括边缘状态的11例)，智力低下的占18例。作注意力电脑测试有多动综合症与类多动症的为30例。作CBCL父母量表心理行为测定的共17例，5例正常，12例有异常(包括3例孤独症在内)。
根据不同IQ与是否合并多动综合症或CBCL异常者，对英泰喷鼻剂的效果与效果出现的时间，见下表
△该5例中有3例为孤独症*5例无效的用药时间均在1-2周之内本组资料可见应用鼻喷剂90％以上儿童反映有效，不论智力正常儿童还是智力低下儿童，不论是伴有多动综合症的还是不伴有多动综合症的儿童均有不同程度的效果。
大部分儿童表现为记忆力增强、背书所读的遍数明显减少，老师与家教老师反映理解能力也有改进。特别对数学方面，原家教4、5遍还搞不清的问题，用药后思路明显清晰，教上1、2遍便懂，个别成了班上背记最佳“能手”。因此不少考试成绩也有明显提高。对重度智力低下与孤独症的孩子用药后则表现为安静、听话、不乱动；孤独症孩子则表现能听话，开始与人交流，来医院能叫人了。
从疗效出现的时间看早晚不一，半数以上在1-2周内即显示作用，38例(84％)在4周内起效，但个别的要在第10周、甚至更长时间12周以上方显作用。
无效的5例、用药时间仅1-2周之内，而该5例原智力均属正常的孩子，可能与未认真坚持有关。该5例中4例是注意力障碍的儿童，也可能对该类儿童症状改善较慢，不及利他林快，从而使家长失去了信心，未继续用药有关。
本组有CBCL异常的12例均未影响到鼻喷剂之疗效。
本组有7例作了前后智测对照，在用药一年左右复测韦氏IQ。1例原轻度MR患儿IQ略有提高，但显著性不够，未有统计学上的意义。另4例原IQ均＜40，1例提高到了42，3例仍为＜40，提高也不显著。但该7例临床上都有不等程度之进步。有的还很大。1例轻度MR伴严重注意力障碍综合症的患儿，在用药与自身努力下，IQ由63提高到66，但考上了职校并以良好的成绩毕业，分配了工作。
本组资料中也有11例用药后已见效，自动停药后一阶段又退步，再用药又再次提高了，从而已应用2年左右。
本组初诊85例，曾有2例哮喘病人1例过敏性鼻炎患儿，用药后促发了哮喘发作和鼻炎发生了鼻衄而停药的。但在50例资料中也尚有另1例哮喘与2例过敏性鼻炎儿童，用药有效而并未有不良反应。此外有1例有癫痫小发作者，用药后也无不良反应。总的讲本组50例中用药后并无明显毒副反应，局部无不适，用药方便儿童也能接受。
讨论鼻喷剂是中科院生化细胞研究所研制的鼻腔喷雾剂型的记忆增强肽(MEP)。MEP-421是一种由天然α氨基酸组成的单链多肽，在动物体内循环时很快分解成人体代谢所需的氨基酸。在大脑皮层内有明确的结合位点，与大脑内受体结合后引起神经突触可塑性改变，使信息传递增强，最终它还会诱导与记忆有关的脑组织有效地合成多种脑神经生长因子，尤其是提高胆碱能神经的突触联系，并由此维持和加强记忆神经通路。MEP-421经鼻喷后在鼻粘膜能很快吸收，并进而进入脑部，提高海马部位乙酰胆碱的浓度，起到记忆增强的作用等等。本组50例用药后也大部分有效，有效率达90％。
MEP-421在动物实验中证明有很强的增强动物记忆的作用。在毒理试验中用数百倍应用剂量与动物时也未发现明显毒副反应，因此是很安全之药。本组50例应用也未有任何毒副反应发生，但有哮喘及过敏性鼻炎患者也会有促使发病之可能，这可用部分哮喘患者之发病与乙酰胆碱发病学说来解释。因此本品对哮喘患者的应用时需谨慎。
结论英泰鼻腔喷雾剂对正常儿童、智力低下儿童、注意力障碍多动综合症的儿童等，在提高记忆和理解能力方面有效，无明显毒副反应，但对哮喘与过敏性鼻炎患者需慎用。
权利要求
1.一种脑肽气雾剂，其特征在于，所述的气雾剂包含有溶于药用溶剂的有效量的记忆增强肽。
2.根据权利要求1所述的脑肽气雾剂，其特征在于，所述的气雾剂包含有如下重量份组分记忆增强肽1.5-4.5份水25000-75000份记忆增强肽按无水醋酸盐计。
3.据权利要求2所述的脑肽气雾剂，其特征在于，所述的气雾剂包含有如下重量份组分记忆增强肽3份水50000份。
4.根据权利要求2所述的脑肽气雾剂，其特征在于，所述的气雾剂包含有如下重量份组分增溶剂1300-3800份抑菌剂10-30份。
5.根据权利要求4所述的脑肽气雾剂，其特征在于，所述的气雾剂包含有如下重量份组分记忆增强肽3份增溶剂甘油2500份抑菌剂对羟基苯甲酸乙酯20份水47500份。
6.权利要求1-5所述脑肽气雾剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤(1)称取所述的抑菌剂，加入水，加热使溶解；(2)取所述记忆增强肽，加入水，搅拌使溶解；(3)取所述的增溶剂，加入(2)中所得溶液，并搅拌均匀；(4)将(1)中所得溶液与(3)中所得溶液混合，并加水稀释至所需浓度，然后搅拌均匀；(5)将(4)中所得溶液用1mol/LHCl和1mol/LnaOH溶液调节pH至4.5-6.5；(6)将(5)中所得溶液分装于喷雾器中，每支5ml，即得。
7.根据权利要求6所述的脑肽气雾剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤(1)称取所述的抑菌剂对羟基苯甲酸乙酯2500份，加入水30000份，加热使溶解；(2)取所述记忆增强肽3份，加入水10000份，搅拌使溶解；(3)取所述的增溶剂甘油2500份，加入(2)中所得溶液，并搅拌均匀；(4)将(1)中所得溶液与(3)中所得溶液混合，并加水至溶液为50000份，然后搅拌均匀；(5)将(4)中所得溶液用1mol/LHCl和1mol/LnaOH溶液调节pH至4.5-6.5；(6)将(5)中所得溶液分装于喷雾器中，每支5ml，即得。
全文摘要
本发明涉及一种脑肽气雾剂及其制备方法，属于药物制剂领域。该制剂包含有可溶于药用溶剂的有效量的记忆增强肽。制剂包括记忆增强肽1.5－4.5份、水25000－75000份，制备时步骤为(1)称取所述的抑菌剂，加入水，搅拌使溶解；(2)取所述记忆增强肽，加入水，搅拌使溶解；(3)取所述的增溶剂，加入(2)中所得溶液，并搅拌均匀；(4)将(1)中所得溶液与(3)中所得溶液混合，并加水稀释至所需浓度，然后搅拌均匀；(5)将(4)中所得溶液用1mol/LHCl和1mol/LnaOH溶液调节pH至4.5－6.5；(6)将(5)中所得溶液分装于喷雾器中，每支5ml，即得。本发明鼻腔喷雾吸收利用快、动物实验有效，临床疗效初步观察显示，对正常儿童、智力低下儿童、注意力障碍多动综合症的儿童等，在提高记忆和理解能力方面有效，无明显毒副反应。
文档编号A61K38/08GK101091697SQ20061008641
公开日2007年12月26日 申请日期2006年6月19日 优先权日2006年6月19日
发明者杜雨苍 申请人:上海中科英泰生物技术有限公司