专利名称：银杏复合物在增强认知功能及缓解精神疲劳中的用途的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及银杏复合物在增强认知功能缓解精神疲劳功能中的新用途。
背景技术：
R.T.Major(Science 157(1967)，第1270-1273页)于1967年首次提及分离自银杏(Ginkgo bioba)叶的酮化合物C15H18O8，并称之为白果内酯。已于1971年提出所述白果内酯的结构式(J.Amer.Chem.Soc.93(1971)，第3544-3546页)如下 银杏的主要活性成分为烷化酚，如银杏酚和3-(8-十五烷基)苯酚，以及苯酚羧酸如2-羟基-6-(8-十五烷基)苯甲酸、银杏内酯和白果内酯。白果内酯为倍半萜烯，而银杏内酯为六环二萜，二者是仅知的天然存在含叔丁基的化合物。所述物质可以分离自银杏树的叶和其他器官，例如白果内酯以低于0.01％的浓度见于银杏叶中。
所知提取物已经被用于治疗脑和外周动脉的血流紊乱。已知其中所含的银杏黄酮糖苷和类萜有调节血管和降低血液黏稠度的特性。在西方国家(如法国和德国)，银杏针对的主要适应症是脑供血不足。此外，银杏在中医中广泛用于多种适应症，其描述可见于传统的中药药剂学。
近年来，天然或合成磷脂与白果内酯的复合物及其制剂也已得到研究。例如，美国专利US 5,043,323公开了生物类黄酮与磷脂的复合化合物，包括与磷脂酰丝氨酸复合的银杏。
此外，美国专利US 5,202,313提示其治疗用途，即用如抗炎剂和治疗炎症性及创伤性神经炎过程相关的疾患的试剂。
此外，已知银杏提取物对认知功能有作用。例如V.D.Petkov等，PlantaMed.59(1993)，第106-114页中所公开的，人参(Panax ginseng)、银杏的标准化提取物及其混合物能够改善年轻和年老鼠类的习得行为。
根据WO 01/43753 A2的教导，认知测试表明，对人类施用人参根和银杏叶提取物的混合物能够有利影响其认知技能，如正常健康个体的记忆速度和质量。
此外，关于银杏提取物对认知成绩的影响已有一系列的研究。有人认为(Moss和Scholey 1996，Scholey等1999，Kennedy和Scholey 2000)，单纯增加向脑的代谢底物输送，就有助于完成某些高要求的认知任务。例如，该实验室曾经进行过一项研究(Kennedy和Scholey 2000)，研究了在“高要求”智力算术任务(从800至1000中的给定数字中口头连续减去7)、“较低要求”智力算术任务(数字3的连续减法)以及长期非文字记忆任务中，心率、血糖水平和成绩的关系。结果显示，不仅两项连续减法的任务都会导致心率显著高于单一计数任务下的心率，而且二者的成绩均与任务完成过程中血糖水平的下降幅度有关。最高要求的任务(连续减7)的成绩也不仅可以通过含糖饮料改善，还与静息时心率有关。
然而，本发明复合物的效果是出众并新型的。
发明概述本发明的发明者们无意中发现与磷脂酰丝氨酸复合的银杏提取物可以用于增强认知功能、缓解精神疲劳，包括以复合的形式施用含有银杏内酯的药物和/或食品添加剂，且其效果显著优于非复合提取物的作用水平。该银杏复合物可用于在健康人中增强认知功能、缓解精神疲劳，特别是用于儿童或年轻人。
本发明另一方面提供了在认知功能减退人群中防止记忆速度下降的可能性，以及对抗认知疲劳。
本发明还可在中年和/或老年人群中维持健康认知功能、延缓年龄相关的认知衰退，尤其是在健康中年人和/或健康老年人中。
本发明还提供了药物或食品添加剂的可能，用于治疗和预防与认知功能减退、精神疲劳增加相关的疾病，如痴呆(如阿尔茨海默病)。
因此，本发明的首要目的是提供增强认知功能、缓解精神疲劳的活性组合物的用途，即改善其相关因素，如改善记忆速度和记忆质量、提高正常健康个体活动的准确性和注意力、防止认知功能减退人群记忆速度和质量的下降，并对抗认知疲劳，同时还可影响情绪，特别是健康儿童、青年人、中年人和/或老年人的情绪。
本发明的另一目的是通过服用含有天然来源成分的制剂来提供活性组合物在改善认知技能和/或智力能力中的用途，其中制剂成分是依据规定方法生产而成，从而保留了成分的治疗特性。
本发明的另一目的在于提供包含天然来源组分的活性组合物的用途，其具有很少或没有副作用，因而可安全内服使用。
本发明的目的还在于提供活性组合物在治疗和预防与认知功能减退、精神疲劳增加相关的疾病中的用途，所述疾病如痴呆(如阿尔茨海默病)。
此外，本发明涉及药物或食品组合物，其包含与磷脂酰丝氨酸复合的银杏提取物、至少一种维生素、任选的一种或多种矿物质及微量元素，以及可药用或食用的载体。
最后，本发明涉及与某一磷脂酰丝氨酸复合的银杏提取物，所述磷脂酰丝氨酸含有确定比例的不同脂肪酸。
发明内容
本发明涉及与磷脂酰丝氨酸复合的银杏在生产用于增强认知功能、缓解精神疲劳的药物或食品添加剂中的用途。所用的“银杏(Ginkgo)”来源于银杏(Ginkgo biloba)植物，代表其提取物和/或其主要的活性物质。
术语“银杏磷脂酰丝氨酸复合物”或其简写“银杏-PS”，是指通过银杏提取物的活性成分与磷脂反应所得的复合物，所述磷脂中含有10-50％、优选20-40％、更优选20％的磷脂酰丝氨酸。
术语“提取”是指通过合适的溶剂如水、乙醇、其混合物、油或植物提取领域目前已知的其它任何合适的溶剂来提取植物或植物成分。如药理学上允许，这些提取物可直接使用；或除去所得溶液的溶剂后直接使用其残余物；或在进一步处理(例如溶解或重悬浮于药理学合适的溶剂中)后使用。
术语“主要活性物质”，是指在药理学中起主要作用的活性成分。优选制剂含有目的植物中占药理学作用至少约75％、更优选至少约90％的所有这些成分。这些活性成分可获自植物或化学合成。
此处所用的术语“可药用”的成分，是指适于在人类中使用而不发生中毒、刺激和过敏反应等非预期不良副作用的成分，也即具有合理的利益/风险比。
本领域已知天然或合成磷脂与白果内酯的复合物(如US 5,043,323和US 5,202,313)，及其制备和其作为抗炎剂和治疗炎症性及创伤性神经炎过程相关疾患的试剂的治疗性用途。白果内酯与磷脂形成新化合物，其表现不同于游离白果内酯的生物有效度，并适于掺入药物制剂。
类似US 5,043,323中实施例6所述者，可制备银杏来源的类黄酮和磷脂酰丝氨酸的复合物。
银杏提取物大豆磷脂酰丝氨酸复合物的制备室温下将1.87kg 20％的磷脂酰丝氨酸悬浮于17.5L乙酸乙酯中。加入银杏干提取物(0.65kg)并搅拌。悬浮液在回流搅拌中保持1小时。
将悬浮液于70-75℃下过滤，并于环境压力下浓缩母液直至得到软残留物。
40℃下干燥残留物48小时。产量2.23kg银杏提取物磷脂酰丝氨酸复合物。
因此，银杏磷脂复合物的形成使能够制备新的生物学活性组合物。实际上它们具有与原始组分截然不同的物理化学和分光光度特性，因而可以作为活性成分掺入药物制剂。银杏对磷脂具有强亲和力，生成的键显著改变了新分子的物理化学和分光光度特性。通过如核磁共振分析可以确定复合物的形成，该法能够鉴定反应的分子种类之间的相互作用以及反应涉及的分子部分。
具体而言，本发明的复合物含有草药成分，例如来源于银杏叶提取物的成分。银杏提取物中含有银杏黄酮糖苷和萜内酯。另一种可能性是该制剂中含有任选粉末化的干银杏叶或其他植物成分。术语“植物”应理解为植物本身以及含有活性成分的植物部分。例如前述的叶、茎、果实或根。优选干燥的植物或植物成分。它们可任选地被粉末化。
尽管已知银杏中存在的所有物质均具有药理学活性，它们的药理学作用范围尚未完全揭示；然而体外研究显示其中某些成分具有抗氧化作用并能抑制血小板的聚集，而另一些则影响细胞对氧的摄取，还有一些则可能具有免疫调节的功能。
在优选实施方案中，所用的银杏提取物含有银杏黄酮糖苷和萜内酯，优选含有至少约20％、优选约21.0％至约30％、特别优选约22.0％至约27.0％的银杏黄酮糖苷，以及约2-10％、优选约4.0-8.0％、特别优选约5.0-7.0％、最优选约6％的萜内酯。优选的药物和/或食品添加剂中包含银杏提取物，所述提取物中含有至少约24％银杏黄酮糖苷和约6％的萜内酯。具体而言，使用EP 0360556中公开的银杏提取物作为生产复合物的基础。
可以使用天然或合成的磷脂制备复合物。天然磷脂一般是从大豆或动物器官中提取而来，而合成磷脂则具有均一的酰基链，并且是根据现有技术所述的方法制备。
根据本发明，选择用于制备该复合物的磷脂为含有10-50％磷脂酰丝氨酸的磷脂。优选该磷脂含有20-40％、尤其优选约20％下式的磷脂酰丝氨酸 其中R和R1分别代表一个C6-20的酰基基团，优选选自棕榈酰、油酰、亚油酰、亚麻酰，特别是包含平均含有基于总酸中15-25％饱和脂肪酸、5-15％单不饱和脂肪酸以及60-80％多不饱和脂肪酸的酰基部分；且
R2表示丝氨酸残基。
银杏与磷脂酰丝氨酸在合适条件下反应，生成与单个成分物理化学特性完全不同的产物。
生成的复合物具有亲脂性特征并可溶于非极性和非质子溶剂；而复合物的单个成分一般不溶于其中。
生成的复合物与游离形式的银杏相比具有更大的活性并适于掺入最常见的药物制剂中。
可以通过在适当的溶剂中反应制备本发明所述的复合物，所述溶剂如热的环醚、芳香烃、卤素衍生物或甲醇-二氯甲烷混合物。因此优选银杏与用于制备复合物的磷脂间的比例为约0.5-1∶2-5，优选1∶3w/w。此后通过蒸发反应溶剂或用适当溶剂沉淀复合物的方法分离终产物。也可以冻干成分在二恶烷中反应所得的产物，而制备复合物。
根据本发明使用的复合物的产生提供了施用银杏、其主要活性物质或其提取物的有效模式。利用银杏提取物产生新结构的可能性代表了新用途事先所不能预测的显著优势，所述新结构保留了基本化合物的结构不变，但其比活性增加数倍。由于所用的比活性增强，有可能减少具有已知效果的剂量。
无意中发现根据本发明使用的复合物对于认知功能和精神疲劳具有直接影响。术语“认知性能”包括但不仅限于改善与此相关因素，如正常健康个体中记忆速度和记忆质量的提高、反应时间和工作记忆的改善、活动中准确性和注意力的增加；防止认知功能减退人群中记忆速度和质量下降；并对抗可影响情绪和身体健康的认知疲劳，特别是在健康儿童、青年人、中年人和/或老年人中。可以证明根据本发明施用的银杏磷脂酰丝氨酸复合物对认知功能和精神疲劳及其相关因素(如记忆质量、记忆速度，以及有关注意力和准确性的大部分活动)具有显著的影响和功效。主要内容可从试验部分阐述的研究中明确。
该复合物的施用剂量可为约20至约240mg/天，优选约60至约120mg/天，特别优选约80至约100mg/天，作为药物或作为食品添加剂每日单次或分次施用。
药物或食品添加剂的形式可为片剂、包衣片剂、颗粒、粉末剂、胶囊粉末剂、糖浆剂、溶液或悬液剂(例如以水、乙醇或其混合物为基质)、糖锭剂、凝胶剂、注射液或技术人员已知的其他任何合适方式。这些产品也可以如局部制剂施用，所用的剂量取决于应用所需(如治疗的病理情况的严重性)而不同。优选的药物和/或食品添加剂以适于口服的形式施用，如颗粒、片剂、胶囊、滴剂、糖浆剂或其他。
前文及下文所用的术语“食品添加剂”，包括可以在无第三方(如医生)药方时使用的组合物。其成分可在进餐时一同服用，或与之分开，可每日服用或只是偶尔服用。食品添加剂对于那些进食不足的人、利用或吸收食物中基本物质的能力降低的个体(尤其是老年人)最为重要。
根据本发明优选的实施方案，银杏磷脂酰丝氨酸复合物可以与合适的或药物接受量的添加剂一起使用。此类添加剂可为但不仅限于矿物质、维生素、甜味剂、香料、可药用载体、辅助和粘合剂、赋形剂及它们的混合物。
所用的矿物质可选自如钙、铜、镁、铁、锌、碘、硒、锰、氟化物、铬、钼、钠、钾、氯化物的盐及其混合物。不太优选的其它矿物质为砷、镍、硅、硼、镉、铅、锂、锡、钒和钴盐及其混合物。通常矿物质的量为营养学的相应含量。矿物盐可以来源于任何已知盐，如阳离子矿物质可来源于碳酸盐、氧化物、氢氧化物、氯化物、硫酸盐、磷酸盐、葡萄糖酸盐、乳酸盐、醋酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苹果酸盐、氨基酸盐等；而阴离子矿物质来源于钠盐、钾盐、钙盐、镁盐等。本领域技术人员熟悉婴儿或成人的优选范围，所述范围在一定程度上取决于年龄和生理状态。很显然矿物质的日摄入量因使用者而异，因此不会提及具体的剂量。根据本发明，最优选药物或食品添加剂中含有选自以下的矿物质，即钙、氟化物、磷、铜、钾、锰、镁、硒、锌和铁。
根据本发明可任选使用的维生素可以为(但不仅限于)水溶性维生素，如维生素C(如L-(+)-抗坏血酸、抗坏血酸钙、抗坏血酸钾、6-棕榈酰-L-抗坏血酸)、维生素B1(如盐酸硫胺、硝酸硫胺)、维生素B2(如核黄素、核黄素5’-磷酸钠)、维生素B6(如盐酸吡哆醇)、维生素B12(如氰钴胺素)、维生素H(如D-生物素)、叶酸、维生素PP(Niacin)(如烟酰胺、烟酸)、前维生素B5(如d及dl型泛酰醇、乙基泛酰醇和D-泛酸钙)；以及脂溶性维生素，例如维生素A(如棕榈酸维生A、醋酸维生素A、丙酸维生素A、所有反式视黄醇)、维生素D(如钙化醇、胆钙化醇、胆钙化醇-胆固醇)、维生素E(如α-生育酚、醋酸α-生育酚、d及dl型琥珀酸α-生育酚)、维生素K如维生素K1(如叶绿醌)和胡萝卜素(前维生素)(如番茄红素、玉米黄质、叶黄素、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、apocarotinal、γ-胡萝卜素和β-玉米黄质)及它们的衍生物和混合物。维生素可以营养学相关剂量存在，如前所述取决于年龄和生理状态。优选的维生素为维生素A、维生素B1、B2和B12、维生素C、维生素D2、烟酰胺、泛酸钙、芸香苷和维生素E。
药物或食品添加剂中的其它添加剂可基于技术人员的基本知识任选地存在，不详细讨论。
根据本发明，特别优选矿物质和/或维生素以添加剂的形式存在。此种银杏磷脂酰丝氨酸复合物与选择的多种维生素和/或矿物质的组合特别适用于在如老年人或病人中维持和/或恢复认知功能并促进身体健康。因此，可以修饰与多种维生素/矿物质组合的银杏复合物制剂，以使其特别适合面临或希望避免年龄相关性认知功能及身体健康减退的老年人的需求。银杏与磷脂酰丝氨酸以复合物的形式组合很有意义，试验部分已经证实其对认知功能具有巨大益处。尤其是对于老年人而言，添加如矿物质和/或维生素可以提高性能，所述矿物质和/或维生素的选择和剂量是依据其维持和恢复认知功能以及促进身体健康的能力而定。最优选的组合物基本上由以下组成·银杏提取物和磷脂酰丝氨酸的复合物·维生素A·维生素B1
·维生素B2·维生素B6·维生素B12·维生素C·维生素D2·维生素E·烟酰胺·泛酸钙·芸香苷·叶酸·氟·钙·磷·铜·钾·锰·镁·锌·铁·卵磷脂因此，本发明的复合物可用于提高健康青年人的认知功能、维持健康中年人和/或老年人的健康认知功能并延缓年龄相关的认知减退。然而，根据其他实施方案，该复合物可用于生产治疗和预防与认知功能减退和精神疲劳相关疾病的药物或食品添加剂。
本发明的另一个方面涉及与磷脂酰丝氨酸复合的银杏在生产药物或食品添加剂中的用途，所述药物或食品添加剂用于治疗和预防痴呆，如阿尔茨海默病。
优选药物或食品添加剂中额外含有药物接受量的至少一种添加剂，所述添加剂如前所述可选自维生素、矿物质、甜味剂、香料、可药用载体、辅助及粘合剂、赋形剂及其的混合物。
在优选的实施方案中，本发明的复合物也可以与其他活性化合物组合使用，即银杏复合物也可以在痴呆的组合治疗中发挥作用，如年龄相关性痴呆(如阿尔茨海默病)。此处的活性化合物可以为药物化合物或其他可用于治疗和预防所治疗疾病的活性物质，例如可以协助阿尔茨海默病的治疗和治愈的化合物。
所述本发明实施方案的一个实例可以是以本发明的复合磷脂酰丝氨酸的银杏作为痴呆治疗尤其是阿尔茨海默病的辅助疗法，与乙酰胆碱酯酶抑制剂组合使用。痴呆治疗中主要的乙酰胆碱酯酶抑制剂为多奈哌齐(可得自Pfizer的Aricept)、雷司替明(可得自Novartis的Exelon)和加兰他敏(可得自Johnson&Johnson的Reminyl)。因此，本发明的复合物可以与此类已知的乙酰胆碱酯酶抑制剂组合施用。此处的术语“组合施用”是指两种化合物(复合物和其他活性化合物)均在同时施用，或在紧密时间间隔内分开施用。
有关本发明复合物和另一活性化合物的组合治疗的另一个实施方案，是通过组合施用本发明的复合物和作为另一活性化合物复合葡萄籽提取物来组合治疗年龄相关性痴呆(如阿尔茨海默病)。已经发现组合使用本发明复合物和另一种活性化合物，在预防或治愈此类疾病、支持缓解症状和延长疾病进程上能获得更好的结果。
发明详述一项随机、双盲、平衡交换(balanced crossover)的预试验研究了若干种制剂对于认知技能的影响。该研究比较和评价了银杏磷脂酰胆碱复合物、银杏磷脂酰丝氨酸复合物、非复合银杏以及无作用安慰剂的作用和影响。
对于本领域技术人员而言显而易见的是，可以在不背离本发明精神的前提下对某一明显性质进行多种改变和修饰，而正如权利要求书所声明，所有这些改变和修饰均在本发明范围内。已经在所谓优选实施方案中展示了本发明复合物的用途，应当认识到可以在下文权利要求的精神和范围内进行改动，因此其用途并不仅限于等同物的定义。
附图简述
图1显示对关于注意力的单个任务的影响；图2显示对于记忆速度的影响；图3显示对于定时记忆任务的影响；图4显示对于记忆质量的影响；图5显示对图像识别准确性的影响；而图6显示在情绪“平静”上的影响。
方法认知评估试验对象本研究经Newcastle联合伦理委员会和North Tyneside HealthAuthority的批准，遵循Helsinki宣言进行，入选了19名女性和9名男性大学生志愿者(平均年龄21.4岁、标准差4.1岁)。每一志愿者在加入研究前均签署了知情同意书并完成了医学健康调查问卷。所有志愿者均报告其健康状况良好，不使用成瘾性药物。此外，除了有些女性使用避孕药外，他们不使用任何非处方或处方药物。该研究排除了规律吸烟者。所有参与者在早晨的第一次测试期前均禁酒12小时以上。
认知药物研究(CDR)计算机化评估序列已有数以百计的欧洲和北美药物试验使用了认知药物研究(CDR)计算机化评估序列，已知它对于短期的认知改善(如Moss等1998；Scholey等1999)以及由多种物质造成的认知损失(如Ebert等1998；O’Neill等1995)敏感。
此处采用改良的CDR系列。已经发现其对于由短期服用香蜂草(Melissa officinalis)(Kennedy等，2002b)、银杏(Kennedy等2000；2002a)和人参(Kennedy等2001a；2002a)以及短期和长期施用银杏/人参组合物(Kennedy等2001b；2002a；Wesnes等1997；Wesnes等2000)所致的认知功能改变敏感。现研究向系列内纳入了额外的快速视觉信息处理(RVIP)任务。从系统中选择计算机控制的任务，同时在每一测试段内显示随机抽取的测试的相似形式。通过带高分辨率VGA色彩监控的台式计算机显示测试，除了写词回忆测试外，所有的反应都由双键(YES/NO)反应盒记录。整个任务的选择占时约20分钟。
测试按如下顺序进行单词显示经频率和具体性匹配的15个词，以随机顺序显示于监控器上供参与者记忆。刺激持续1秒，与刺激间隔时间相同。
即刻单词回忆参与者在60秒内写下尽可能多的显示单词。该任务根据正确单词的数目计分，并将得分转换为百分比的形式。
图像显示以每3秒钟一幅的速度在监控器上显示一组20幅日常物品和场景的照片，刺激持续1秒，供参与者记忆。
简单反应时间要求参与者在每次监控器上显示单词“YES”时尽可能快地按下“YES”反应键。共50个刺激，刺激间隔为1至3.5秒随机不等。反应时间以毫秒计算。
数字警觉任务随机选择目的数字并持续显示于监控器屏幕的右侧。以每分钟80个的速度在监控器中央显示一系列数字，要求参与者在每次系列中的数字与目的数字相匹配时尽可能快的按下“YES”键。该任务时长1分钟，包括15个刺激-目的匹配。任务测量为准确率(％)、反应时间(ms)和错误反应的数目。
选择反应时间在监控器上显示单词“NO”或单词“YES”，要求参与者尽可能快地按下相应按键。共有50轮试验，其中刺激单词为相同几率随机选择，而刺激间隔时间为1至3.5妙随机不等。记录反应时间(ms)和准确率(％)。
空间工作记忆荧幕上显示一座房子的图像，其9个窗户中有4个亮着灯。要求参与者记住亮灯窗户的位置。在接下来的36张有一个窗户亮灯的房子图片中，参与者判断该亮灯窗户是否与原始图片中的亮灯窗户相匹配。参与者尽可能快的按下“YES”或“NO”应键而做出反应。平均反应时间以毫秒记，对原始和新(干扰)刺激的反应准确性以百分比记，利用该百分比得出“高于随机成绩％”得分(原始目的百分比+正确识别新目的百分比-100)。
数字工作记忆顺序显示5个数字供参与者记忆。随后为一组30个探测数字，参与者需判断其中每一个数字是否在原始序列中，并尽可能准而快地按下“YES”或“NO”反应键。使用不同的刺激和探测数字再重复两次。平均反应时间以毫秒记，对原始和新(干扰)刺激的反应准确性以百分比记，如上得出“高于随机成绩％”得分。
延迟的单词回忆再次令参与者在60秒内写下尽可能多的单词。该任务按正确单词的个数计分，并将得分转换为百分比。
延迟的单词识别原始单词加上15个干扰单词以随机顺序每次显示一个。对于每一个词，参与者通过尽可能准而快地按下“YES”或“NO”反应键，来表示该词是否在原始词列中。平均反应时间毫秒记，对原始和新(干扰)刺激的反应准确性以百分比记，如上得出“高于随机成绩％”得分。
延迟的图像识别原始图像加上20幅干扰图像以随机顺序每次显示一幅。对于每一图像，参与者通过尽可能准而快地按下“YES”或“NO”反应键，来表示该图是否在原始图像序列中。平均反应时间毫秒记，对原始和新(干扰)刺激的反应准确性以百分比记，如上得出“高于随机成绩％”得分。
初步认知结果测量通过由Wesnes等进行的因素分析(2000)，将上述测量分解为“记忆质量”测量和来自序列的5个认知结果因素。这些测量已被用于若干试验中，包括一系列评价草药对认知作用的研究(Kennedy等，2000；2001a；2001b；2002a；2002b；Wesnes等，1997；2000)。组内数据的原始因素分析见Wesnes等(2000)详述。
注意力“注意速度”因素通过综合3项注意力任务的反应时间-简单反应时间、选择反应时间和数字警觉任务而得(单位为3项任务合计的毫秒)。
“注意准确性”因素计算选择反应时间和数字警觉任务的综合准确性百分比而得(校正后一测试的错误反应)。两项任务准确性100％，则得分最高为100。
记忆“记忆速度”因素综合四项计算机记忆任务-数字工作记忆、空间记忆、延迟单词识别和延迟图像识别的反应时间而得(单位为四项任务合计的毫秒)。
“记忆质量”测量综合“二级记忆”和“工作记忆”因素得分(见下)而来。
“二级记忆”因素综合所有二级记忆测试的准确性百分比得分(必要时校正新刺激和原始刺激的比例)而得，即延迟单词识别、延迟图像识别、即刻单词回忆和延迟单词回忆(校正为后两项任务对错误和后加入者的识别总正确％)。四项任务完全准确，则该项指标得分最高为400分。
“工作记忆”因素综合两项工作记忆测试-空间工作记忆和数字工作记忆的准确性百分比得分而得。两项任务完全准确，则该项指标得分最高为200分。
连续3和7减法任务使用经过改良的连续减7测试的计算机版本。已有若干种初始口头连续减7测试(Hayman，1942)的形式，包括其作为简易智力状态检查的一个部分(Folstein等，1975)。该测试被用于评价低血糖时的认知损害(如Hale等，1982；Taylor和Rachman，1988)，也曾用于研究血糖水平升高和认知成绩之间的关系(Kennedy和Scholey，2000；Scholey等，2001；Scholey，2001)。本研究应用了连续减法的计算机版本(详见Scholey等，2001)，此处使用的是时长2分钟的测试。在连续减7任务中，标准指示屏告知参与者尽可能快和准确地从给定数字中连续减去7，并利用数字键盘输入各个答案。同时口头告知参与者即使发生错误，仍须继续从错误的新数字中减去7。800至999间的随机起始数字显示于计算机屏幕上，一旦输入第一个答案后该数字即消失。每个三位数均通过数字键盘输入，屏幕上的每一数位均显示为星号。按下回车键表示答案完成，同时清除屏幕上的三个星号。该项任务以完成减法的总次数和发生错误的次数计分。如果在出现错误答案后，接下来的答案对于新数字而言是正确的，这些答案仍将计分。
连续减3任务与连续减7一样，只是连续所减的数字为3。
主观情绪测量Bond-Lader视觉模拟量表(Bond和Lader 1974)，包括将16个100mm反义词固定的视觉模拟量表(如Alert-Drowsy、Lethargic-Energetic等)按照作者推荐的方式结合起来，以形成三种情绪因子警觉、平静和满足。
处理参与者们在每个研究日中会一次收到两粒外观上完全一样的胶囊。这些胶囊中分别含有无作用的安慰剂、60mg银杏提取物、180mg与磷脂酰胆碱复合的银杏提取物(等效于60mg银杏提取物，下文以“PC”指代)，或240mg与磷脂酰丝氨酸复合的银杏提取物(磷脂中含有20％磷脂酰丝氨酸。该复合物等效于60mg银杏提取物，下文以“PS”指代)。根据参与者在具体某天分配到的处理组不同，胶囊之间的组合对应于0mg(安慰剂)、120mg银杏、360mg与磷脂酰胆碱复合的银杏、或480mg与含有20％磷脂酰丝氨酸的磷脂复合的银杏。为保证双盲，由生产者提供相同的硬凝胶胶囊编码处理。中立第三方负责根据研究的Latin方预备处理。直至完成初步数据分析后再解密编码。所有处理在外观和气味上都完全一致。
方法每一参与者必须参与共计5个研究日的试验，每两个研究日间相隔7天以保证完全消除前一处理的影响。每天同一时间，在一套实验室中开始测试，参与者彼此之间视觉隔离。
在第一天的第一段，利用拉丁方设计将参与者们随机分配到处理方案中，所述设计平衡了四个实际研究日中处理间的顺序。
除了不进行任何处理(活性或安慰剂)外，第一天与后面的4天完全相同，以帮助参与者熟悉测试组和方法。该日4个测试段得到的数据不参加任何数据分析。每一实际研究日由4个相同的测试段组成。第1个为用药前测试段，以确定该日的基线成绩；在第2至5天中紧接第1测试段即给予该日处理。在接受该日处理后1小时、3小时和6小时时进行下一步的测试段。
每一测试段包括完成Bond-Lader视觉模拟量表和CDR测试组。
统计学使用Minitab数据包，以作为“相对于基线的改变”分析单个任务结果、4个基本因素和2个记忆亚因素的得分。
在进行预设的比较之前，实施ANOVA(一般线性模型)以确定每一测量相对于基线数据改变的主效应和交互作用效应，在所述ANOVA中设定模型的剂量、访问(visit)、剂量×访问和个体等项。以综合性ANOVA中的“剂量×时间×个体”的均方为误差项(Keppel 1991)，利用t检验，通过预设比较对各参数“相对于基线的改变”数据进行初步的统计学分析。在每一时间点(用药后1、2.5、4和6小时)，将安慰剂组数据与3个处理组(银杏、银杏+PC(磷脂酰胆碱)、银杏+PS(磷脂酰丝氨酸))的对应数据进行比较。为确保总I类错误的保护水平，仅报告那些与对原始ANOVA有显著主效应或交互效应的测量有关的预设比较。此外，所有检验均为双侧进行，比较在研究开始前已严格设计，仅限于每一时间点处理数减1，且仅计算与这些预设比较相关的概率。
结果认知评估基线得分在分析相对于基线数据的改变之前，对全部4种条件下(安慰剂、银杏、银杏+PC、银杏+PS)的每一结果(单项任务结果、认知因素得分和情绪量表得分)在平均用药前初始基线得分，进行单因子重复变量的ANOVA分析；对于那些能够产生显著结果的变量继续根据认知结果数据进行预设的比较。在预设的比较中，若干单项任务结果产生了显著的用药前基线差异。在服药日处理之前，银杏+PS条件下的参与者与安慰剂组相比，在数字警觉任务中的准确性显著降低[t(81)＝2.32，p＝0.022]，且明显更慢[t(81)＝2.75，p＝0.007]。同一组在单词识别任务中也明显更慢[t(81)＝2.11，p＝0.036]。其他任何测量的预设比较都没有出现显著差异。
单项任务结果测量CDR系列中的单项任务结果测量的效果和成绩数据如图1、3和5所示。对于初始ANOVA产生显著影响的单项任务结果的预设比较结果(未报告数据)，与下文它们影响的所有因素一起描述。所示为平均基线和相对于基线改变的得分(具有标准差)。任务按完成的顺序显示，图解表示对初始ANOVA和此后预设比较产生显著差异的测量(相对于安慰剂，*，p＝0.05；**，p＝0.01；***，p＝0.005；****，p＝0.005)。
认知因素结果测量处理对CDR系列结果中认知因素的初步结果的影响如图2和4所示。所示为平均基线和相对于基线改变的得分(具有标准差)。任务按完成的顺序显示，图解表示对初始ANOVA和此后预设比较产生显著差异的测量(相对于安慰剂，*，p＝0.05；**，p＝0.01；***，p＝0.005；****，p＝0.005)。
注意力速度因素(图1)尽管初步结果因素中没有显著差异，单项能力任务的结果(数字警觉反应时间)却在初始ANOVA和其后的预设比较中产生了显著性差异。用药后2.5小时，银杏组[t(243)＝2.45，p＝0.015]和银杏+PS组[t(243)＝2.25，p＝0.026]显著快于安慰剂组，而银杏+PS组在6小时点的成绩也更快[t(243)＝2.5，p＝0.013]。
注意力准确性因素(图1)尽管初步结果因素中没有显著差异，有2项能力任务的结果(数字警觉反应时间)在初始ANOVA和其后的预设比较中产生了显著性差异。银杏+PS条件下数字警觉任务成绩的准确性在用药后1小时[t(243)＝2.58，p＝0.011]和4小时[t(243)＝2.14，p＝0.034]均有显著提高。与之相反，所有3个用药组在选择反应时间任务中的准确性均有下降，这一效应可明显见于银杏组用药后2.5小时[t(243)＝2.46，p＝0.015]、4小时[t(243)＝2.66，p＝0.009]及6小时[t(243)＝2.56，p＝0.011]；银杏+PC组用药后4小时[t(243)＝2.86，p＝0.005]；以及银杏+PS用药后4小时[t(243)＝3.45，p＝0.001]和6小时[t(243)＝2.46，p＝0.015]。
记忆速度因素(图2和3)初步ANOVA表明处理对记忆速度因素有显著的主效应[F(3，405)＝15.76，p＜0.001]。预设的比较表明，银杏+PS处理后所有时间点的成绩都有提高(用药后1小时点[t(243)＝2.58，p＝0.011]、2.5小时点[t(243)＝3.19，p＝0.002]、4小时点[t(243)＝3，p＝0.003]及6小时点[t(243)＝4，p＜0.001])。与之相反，用药后4小时银杏+PC条件组的成绩显著变慢[t(243)＝3，p＜0.003]。
参考ANOVAS中影响该因素的单项结果表明，所有4项任务的成绩均有显著改变。预设的比较显示在接受银杏+PS处理后速度有所提高其中空间记忆任务在处理6小时后速度提高[t(243)＝2.23，p＜0.027]，2.5小时[t(243)＝1.8，p＝0.071]和4小时[t(243)＝1.92，p＝0.056]时即出现相同趋势；数字工作记忆任务在4小时[t(243)＝3.29，p＝0.001]和6小时[t(243)＝2.944，p＝0.004]速度提高；单词识别任务在用药后1小时[t(243)＝2.2，p＝0.028]、2.5小时[t(243)＝2.75，p＝0.006]和4小时[t(243)＝2.77，p＝0.006]速度提高，6小时有相同趋势[t(243)＝1.91，p＝0.057]；而图像识别任务在6小时[t(243)＝3.12，p＝0.002]速度提高，1小时[t(243)＝1.75，p＝0.082]和2.5小时[t(243)＝1.82，p＝0.071]有相同趋势。
与这些显著改善相反的是，其他两种处理条件下均出现偶尔的减退，其中银杏组在空间记忆任务的6小时点[t(243)＝2.56，p＝0.011]和图像识别任务的4小时点[t(243)＝2.25，p＝0.026]速度降低；而银杏+PC组则在数字工作记忆任务的4小时点[t(243)＝2.15，p＝0.033]和图像识别任务用药后4小时[t(243)＝3.8，p＜0.001]表现减慢。
记忆质量测量(图4和5)初步ANOVA表明处理对于记忆质量测量整体具有显著的主效应[F(3，405)＝3.33，p＝0.02]。预设的比较显示银杏+PS提高2.5小时点[t(243)＝2.35，p＝0.02]和4小时点[t(243)＝2.46，p＝0.015]的相对于基线改变的成绩，而用药1小时后已有改善的趋势[t(243)＝1.78，p＝0.077]。银杏+PC在2.5小时点的成绩也有提高[t(243)＝2.67，p＝0.008]。
参考影响该因素的单项结果表明，仅有1项任务结果的成绩显著提高，即在图像识别任务中银杏+PS处理在1小时点[t(243)＝2.39，p＝0.018]、2.5小时点[t(243)＝2.24，p＝0.027]和4小时点[t(243)＝2.43，p＝0.016]的成绩胜出安慰剂组。
二级记忆因素初步ANOVA提示，该因素不受处理的显著影响。
工作记忆因素初步ANOVA提示，该因素不受处理的显著影响。
连续减7和连续减3任务初步ANOVA提示，这些任务不受处理的显著影响。
情绪评价评估了3种情绪因素(警觉、满足、平静)的相对于基线改变的得分。图5说明了处理对Bond-Lader情绪量表中的情绪因素“平静”的作用。所示为平均基线和相对于基线改变的得分(具有标准差)，图解表示对初步ANOVA和随后预设的比较产生显著差异的因素(相对于安慰剂组，*，p＝0.05；**，p＝0.01；***，p＝0.005；****，p＝0.001；*****，p＝0.0005)。
Bond-Lader情绪量表(参阅图5)初步ANOVA提示处理对于视觉模拟量表中的“平静”因素仅有一种主效应[F(3，405)＝2.95，p＜0.032]。预设的比较显示，相对于安慰剂所有3种处理都会增强“平静”。这一效应可明显见于用药后银杏组的1小时点[t(243)＝3.05，p＝0.003]和4小时点[t(243)＝3.02，p＝0.003]；银杏+PC组的1小时点[t(243)＝2.87，p＝0.005]；以及银杏+PS组的1小时点[t(243)＝2.1，p＝0.036]和6小时点[t(243)＝1.99，p＝0.048]。
效果小结根据本发明使用的银杏磷脂酰丝氨酸复合物，在记忆质量、图像识别准确性、记忆速度、定时记忆任务和大部分任务相关的注意力方面与其他测试物(即非复合银杏或银杏磷脂酰胆碱复合物)相比，具有显著更高效的作用。
权利要求
1.与含10-50％磷脂酰丝氨酸的磷脂复合的银杏在制造药物或食品添加剂中的用途，所述药物或食品添加剂用于增强认知功能、缓解精神疲劳，和/或治疗及预防与认知功能减退和精神疲劳相关的疾病。
2.如权利要求1的用途，其中磷脂含有20至40％的磷脂酰丝氨酸。
3.如权利要求1或2的用途，其中磷脂含有20％的磷脂酰丝氨酸。
4.如权利要求1-3的用途，其中银杏来源于植物银杏、其提取物和/或一种或多种其主要活性成分。
5.如权利要求4的用途，其中主要活性物质之一为白果内酯。
6.如权利要求4的用途，其特征在于所用的银杏提取物中含有至少约20％银杏黄酮糖苷和约2至约10％萜内酯。
7.如权利要求1-6中任一项的用途，其中银杏与用于制备复合物的磷脂酰丝氨酸间的比例为约0.3∶1.5。
8.如前述权利要求1-7中任一项的用途，其中与磷脂的银杏具有亲脂性，可溶于非极性和非质子溶剂，而该复合物的单个成分不溶于其中。
9.如前述权利要求1-8中任一项的用途，其中与含10-50％磷脂酰丝氨酸的磷脂复合的银杏可经以下方法得到，其步骤包括(a)在提高的温度下(优选30至100℃)、合适的溶剂中使银杏提取物与含10-50％磷脂酰丝氨酸的磷脂发生反应，所述溶剂选自热的环醚、任选的卤化芳烃、甲醇-二氯甲烷混合物或脂族酯，并(b)蒸发溶剂，并(c)在30至50℃的温度下干燥步骤(b)所得的软残余物24-48小时。
10.如前述权利要求1-9中任一项的用途，其中药物或食品添加剂以片剂、颗粒、粉末剂、胶囊、糖浆剂、溶液剂、悬液剂、糖锭剂、凝胶剂、注射剂或滴剂的形式施用。
11.如权利要求1-10中任一项的用途，其中药物或食品添加剂制以为口服施用配制。
12.如前述权利要求1-11中任一项的用途，其中药物或食品添加剂内所含的银杏磷脂酰丝氨酸复合物的施用剂量为每日约20至约240mg，特别是每日约60至约120mg。
13.如前述权利要求1-12中任一项的用途，其中药物或食品添加剂中还含有药物接受量的至少一种添加剂，所述添加剂选自矿物质、维生素、甜味剂、香料、可药用载体、辅助和粘合剂、赋形剂及其混合物。
14.如权利要求13的用途，其中添加剂选自维生素、矿物质及其混合物，特别选自钙、氟化物、磷、铜、钾、锰、镁、硒、锌和铁、维生素A、维生素B1、B2和B12、维生素C、维生素D2、烟酰胺、泛酸钙、芸香苷和维生素E。
15.如前述权利要求1-14中任一项的用途，其中通过对抗正常健康人的认知疲劳或防止认知功能减退者的记忆速度下降，来提高记忆速度和记忆质量。
16.如前述权利要求1-14中任一项的用途，其中的疾病为痴呆。
17.如前述权利要求1-14中任一项的用途，其中的疾病为阿尔茨海默病。
18.如前述权利要求16或17中任一项的用途与药物化合物组合，所述药物化合物用于治疗和预防与认知功能减退和精神疲劳相关的待治疗疾病。
19.如权利要求18的用途，其中药物化合物选自乙酰胆碱脂酶抑制剂和复合葡萄籽提取物。
20.药物或食品组合物，其含有银杏与磷脂复合的银杏、至少一种维生素和可药用或食用的载体，其中磷脂含有10-50％的磷脂酰丝氨酸。
21.银杏提取物与磷脂酰丝氨酸的复合物，所述磷脂酰丝氨酸如下式其中 R和R1分别代表选自由棕榈酸、油酸、亚油酸、硬脂酸组成的脂肪酸的酰基部分，而R2为丝氨酸残基。
22.如权利要求21的复合物，所述复合物包含占总酸15-25％的饱和脂肪酸、5-15％的单不饱和脂肪酸和60-80％的多不饱和脂肪酸。
全文摘要
本发明涉及与磷脂酰丝氨酸复合的银杏在制造药物或食品添加剂中的用途，用于增强认知功能并缓解精神疲劳，即改善其相关因素，如提高记忆的速度和质量、增加正常健康个体活动的准确性和注意力、防止认知功能减退人群记忆速度和质量的下降，并对抗认知疲劳；同时还可影响情绪，特别是健康儿童、青年人、中年人和/或老年人的情绪。本发明还提供了银杏磷脂酰丝氨酸复合物在治疗和预防认知功能减退及精神疲劳相关的疾病中的用途，例如痴呆，如Alzheimer病。
文档编号A61K47/48GK1913907SQ200580003327
公开日2007年2月14日 申请日期2005年1月26日 优先权日2004年1月29日
发明者P·莫拉佐尼, O·彼得里尼, A·舍里, D·肯尼迪 申请人:因德纳有限公司