组合物，其提取物及它们的药物用途的利记博彩app

专利名称：组合物，其提取物及它们的药物用途的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及包括金银花，柴胡，青蒿，鱼腥草和甘草的组合物，其提取物，其制备方法，含所述提取物的药物组合物及上述组合物或其提取物的药物用途，尤其是在镇痛解热，由病毒尤其是流感病毒引起的感冒，抗炎及增强免疫功能方面的用途。
背景技术：
目前用于预防或治疗发烧，炎症，由病毒引起的感冒或增强免疫功能的药物大多数为化学合成药，这些药物在治疗中或多或少都会带来一些药物不良反应。因此，寻找并开发疗效明确且药物不良反应小的来自植物或动物的产品仍是十分需要的。

发明内容
本发明人经研究现已发现包括来自植物的金银花，柴胡，青蒿，鱼腥草和甘草的组合物或其提取物具有优良的解热镇痛、缓解或减轻或治疗由病毒尤其是流感病毒引起的感冒症状、抗炎及免疫调节作用且基本无药物不良反应。
因此，本发明涉及组合物，其包括来自植物的金银，柴胡，青蒿，鱼腥草和甘草。
本发明还涉及提取物，其特征在于该提取物是来自植物的金银花提取物与柴胡、青蒿、鱼腥草和甘草的提取物的混合物。
本发明还涉及提取物的制备方法，其包括a.用水和含水C1-4烷基醇提取金银花，得金银花浓缩物；b.用水和含水C1-4烷基醇提取柴胡、青蒿、鱼腥草和甘草的混合物，得上述四种物质的浓缩物；
c.合并a)与b)中提取物。
本发明还涉及药物组合物，其包括来自植物金银花，柴胡，青蒿，鱼腥草和甘草的提取物和药用载体。
本发明还涉及来自植物的金银花，柴胡，青蒿，鱼腥草和甘草的组合物或其提取物在制备用于预防或治疗发烧、由病毒引起的感冒，炎症或与免疫功能有关症状或疾病的药物中的用途。
根据本发明，本发明中所用的金银花为忍冬科植物忍冬Lonicerajaponica Thunb.、红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、山银花Loniceraconfusa DC.或毛花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehd.的干燥花蕾或带初开的花。
根据本发明，本发明中所用的柴胡为伞形科植物狭叶柴胡Bupleurumscorzonerifolium Willd.或柴胡Bupleurum chinese DC..的干燥根。
根据本发明，本发明中所用青蒿为菊科植物黄花蒿Artemisia annua L.的干燥地上部分。
根据本发明，本发明所用的鱼腥草为三白草科植物蕺菜Houttuyniacordata Thunb.的干燥地上部分。
根据本发明，本发明中所用甘草为豆科植物甘草Glycyrrhizauralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根茎。
根据本发明，本发明的提取物可以单独或与药物载体混合通过口服或非肠道途径给药。适于口服给药的剂型举例讲有片剂，胶囊，口服液或悬浮液等。适于非肠道给药的剂型举例讲有注射剂、喷雾剂如喷鼻剂。进一步讲，本发明药物组合物优选为喷鼻剂。
根据本发明讲，本发明中所述含水C1-4烷基醇优选为80％乙醇水溶液。根据本发明，本发明中所述药用载体为制药领域中已知的药用载体，举例讲，如国家药品注册中允许使用的药用载体或赋形剂或辅料，例如，增溶剂如吐温-80，防腐剂如尼泊金乙酯，抗氧化剂如亚硫酸氢钠；pH调节剂pH缓冲剂如枸橼酸钠，渗透压调节剂如氯化钠，保湿剂如甘油。
根据本发明，本发明提取物及含有它的喷鼻剂可按附

图1所示制备
图1为制备本发明提取物及含有它的喷鼻剂的路线。
根据本发明，本发明每ml喷雾剂中含有不少于3.0mg绿原酸。
具体实施例方式
下面的实施例及试验例用来进一步说明本发明，但其并不意味着对本发明的任何限制。
实施例1本发明组合物的组成成份量(克)金银花 300柴胡250青蒿200鱼腥草 200甘草50实施例2本发明提取物及含它的喷鼻剂的制备将金银花加10倍量水，85℃温浸二次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15(55±5℃)，加乙醇至含醇量为80％，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇至相对密度为1.15(55±5℃)的清膏(收膏率约47％)，备用；其余柴胡等四味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，同时收集挥发油(收油量约1.27ml，收油率约85％)，合并药液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15(55±5℃)的清膏，加乙醇至含醇量为60％，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇(60℃，0.68KPa)至相对密度为1.15(55±5℃)的清膏(收膏率约45％)，与金银花提取浸膏合并，得所述五种成份提取物。将所得提取物加入蒸馏水、8g氯化钠、1.25g亚硫酸氢钠1g尼泊金乙酯，混匀，加枸橼酸钠调pH值5.5～7.0，煮沸30分钟，放冷，备用；另取挥发油缓缓加6ml吐温-80使溶解，加20ml甘油充分搅拌，与上述药液混匀，加水至1000ml，分装，即得。
性状本品为棕红色液体，气微香，味苦微甜。
鉴别

(1)取本品3ml，通过大孔吸附树脂柱(5g，内径10～15mm)，用水30ml洗脱，收集洗脱液，用醋酸乙酯提取三次，每次10ml，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取绿原酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》1995版一部附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸丁酯—甲酸—水(7∶2.5∶2.5)的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品2ml，加水至5ml，用氯仿提取2次，每次5ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取青蒿对照药材0.5g，加水50ml煎煮0.5小时，滤过，滤液用氯仿提取2次，每次10ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加乙醇3ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》1995版一部附录VI B)试验，吸取上述二种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿—醋酸乙酯(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同的亮蓝色荧光斑点。
(3)取本品3ml，加水2ml，用水饱和的正丁醇提取三次，每次5ml，合并正丁醇提取液，用等量40％氨水洗涤一次，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取柴胡对照药材1g，加水80ml，煎煮1小时，滤过，滤液用水饱和的正丁醇提取三次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。另取柴胡皂甙A对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-正戊醇-甲醇-正丁醇-乙酸-水(6∶3.6∶2.2∶0.7∶0.4∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点。
(4)取本品20ml，加稀盐酸至沉淀完全，离心，取沉淀加氯仿20ml回流1小时，放冷，置分液漏斗中，静置，分取氯仿液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取甘草对照药材1g，加水70ml，煎煮1小时，滤过，滤液加盐酸1ml，氯仿15ml回流1小时，放冷，置分液漏斗，中静置，分取氯仿液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。另取甘草次酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》1995版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)—苯—醋酸乙酯—冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇液，100℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
(5)取本品110ml，照挥发油测定法(中国药典一部1995年版附录XD)，自提取器上端加甲苯1ml，提取挥发油，取甲苯液作为供试品溶液。另取甲基正壬酮对照品，加甲苯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法(中国药典1995版一部附录VIB)试验，以甲基硅橡胶(SE-54)为固定相，涂布浓度为10％，柱温170℃。分别吸取对照品溶液和供试品溶液适量，注入气相色谱仪。供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。
检查pH值 应为5.5～7.0。
相对密度 应不低于1.05。
喷射试验 取本品，依法检查(中国药典1995年版98增补本附录IZ)，每揿喷射量不得少于0.10g。
重金属 取本品1ml，依法检查(中国药典1995年版一部附录E第二法)，含重金属不得过百万分之二十。
砷盐 取本品1ml，依法检查(中国药典1995年版一部附录F第一法)，含砷盐不得过百万分之二。
其它 应符合中国药典1995年版98增补本附录IZ喷雾剂项下有关规定。
含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》1995版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰乙酸(18∶82)为流动相；检测波长330nm。理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品10mg，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备 精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，再精密吸取1ml，置5ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。
暂定本品每1ml含金银花以绿原酸(C16H18O9)计，不得少于3.0mg。
实施例3实施例2喷鼻剂的药效实验给药量的设定 按实验动物与人药量转换因子计算方法，以动物用量等效量的0.5、1和2倍量分别作为大、小鼠的低剂量、中剂量、高剂量。
实施例2喷鼻剂成人拟临床用法用量成人每天用药5次，每次每侧鼻孔连续喷二次，每次喷药量为0.1ml，则成人日喷量为2ml，相当于2g生药量。若成人以60kg计算，则成人日最大喷药量为0.033g/kg。
小鼠用量等效量＝0.033×35÷3＝0.385g/kg低剂量0.385×0.5＝0.193g/kg中剂量0.385×1＝0.385g/kg高剂量0.385×2＝0.77g/kg
大鼠用量等效量＝0.033×35÷6＝0.193g/kg低剂量0.193×0.5＝0.096g/kg中剂量0.193×1＝0.193g/kg高剂量0.193×2＝0.385g/kg空白对照组给等体积的生理盐水。
实验动物NIH小鼠，体重14-16g，雌雄各半。普通级Sprague-Dawley大鼠，体重120-150g，雌雄各半。
3.1实施例2喷鼻剂的抗呼吸道病毒作用实验材料1、病毒唑(Ribavirin)由湖北省医工所提供(批号980303)。
2、病毒种鼻病毒鼻病毒R14型由医科院病毒所分赠。原毒种为美国ATCC提供，在国家鉴定之KMB17双倍体细胞中传代，于33℃，二氧化碳培养箱培养。
流感病毒流感病毒FM1株由医科院医药生物技术研究所提供，于MDCK狗肾细胞传代，以病变及豚鼠红血球凝法来判断其滴度，于35℃，二氧化碳培养箱培养。
呼吸道合胞病毒毒种由广州市儿童医院病毒实验室提供，为RSV-N3株，于HEP-2细胞或Hela细胞上扩增，并进行测定。
腺病毒3型毒种由广州市儿童医院病毒实验室提供，并于Hela细胞上传代，滴定与检测。
疱疹病毒I型与II型毒种由广州市儿童医院病毒实验室提供，在BHK细胞上传代与检测。
副流感病毒3型毒种由广州市儿童医院病毒实验室提供，Hela细胞及KMB17细胞上用豚鼠红血球血吸附法检测。
3、细胞人肺KMB17原代细胞株第18代，系中国医学科学院昆明生物制品研究所分赠。
狗肾细胞株(MDCK)由广东省防疫站病毒室赠送。
地鼠肾细胞株(BHK)由广州市儿童医院病毒实验室提供。
Hep-2细胞和Hela细胞为本所病毒实验室保存细胞株。
4、免疫血清用鸡胚尿囊液传代的流感病毒FM1株免疫家兔，获得高效价的免疫血清(血凝抑制效价＞1∶1280)，置40℃保存，用前测定抗体效价。
5、标记抗体由华美公司的羊抗兔1gG-GLTC，置4℃保存，用时以1∶15稀释。
6、细胞培养液和维持液各为含10％、2％小牛血清、链霉素的DMEM(GlBCOBRL)公司产品。
实验方法与结果1、体外对病毒致细胞病变的抗病毒作用1.1方法 抗病毒试验在96孔微量板上进行，细胞数50万/0.1ml/孔，长成单层后，将实施例2喷鼻剂用维持液稀释成不同浓度，抛掉原培养液后将不同浓度实施例2喷鼻剂药液加入孔中，0.1ml/孔，以细胞不出现病变的最小稀释度为该药液对细胞无毒界限，通过毒性试验观察到热感清毒喷雾剂30mg/ml和病毒唑1mg/ml浓度对五种细胞生长无明显影响，同时在相应敏感细胞上测定攻击病毒之TCLD50，试验时设病毒对照，细胞对照，药物对照及三氮唑苷(病毒唑)对照，置37℃ CO2培养箱内，每天在倒置显微镜下观察病变并记录，当病毒对照孔细胞出现+++病变时，继续观察4天则终止，细胞出现病变的程度按以下6级标准记录-，细胞生长正常，无病变出现；±，细胞病变少于整个单层细胞的10％；+，细胞病变约占整个单层细胞的25％；++，细胞病变约占整个单层细胞的50％；+++，细胞病变约占整个单层细胞的75％；++++，细胞病变约占整个单层细胞的75％以上。
1.2结果 在实施例2喷鼻剂15mg/ml可对鼻病毒、呼吸道合胞病毒产生较好的抑制病变作用，10mg/ml和5mg/ml对流感病毒A型FM1和疱疹病3型不产生抑制作用。
表1实施例2喷鼻剂对病毒致细胞病变的抑制作用

-，表示抑菌；+，表示长菌；±，表示不确定。
2、体内对小鼠流感病毒性肺炎的影响2.1方法 NIH小鼠60只，体重14～16g，♀♂兼用，随机分成病毒对照，正常对照，阳性对照，实施例2喷鼻剂高、中、低共6组，于感染前一天开始喷鼻给药，每天一次，连续五天；空白对照组给予同容积生理盐水，阳性对照组病毒唑每天给药一次，每次0.07g/kg。动物在乙醚轻度麻醉下，每只小鼠鼻腔内接种0.05ml流感病毒鼠肺适应株FM115×LD50，感染后96小时解剖，称体重后取肺称重，逐个算出肺指数值(每100g体重中的肺重量和肺指数抑制率([病毒对照组平均肺指数-实验组平均肺指数]÷病毒对照组平均肺指数×100％)，与对照组比较，进行组间t检验。
2.2结果 实验结果表明实施例2喷鼻剂按0.770g/kg和0.385g/kg喷鼻，一天一次的剂量对小鼠流感病毒性肺炎有显著治疗作用，甚至较病毒唑0.07g/kg组更为显著。
表2实施例2喷鼻剂对小鼠流感病毒性肺炎的作用(n＝10)

注P值系与病毒对照组比较3、对小鼠体内流感病毒增殖的影响3.1方法 以荧光素标记的抗病毒血清作为示踪源，通过间接免疫荧光结合，观察感染鼠肺内特异的病毒抗原，判断药物对病毒的增殖作用。在乙醚轻度麻醉下以流感病毒FM11000×LD50感染小鼠，人工感染前一天开始喷鼻不同浓度的实施例2喷鼻剂，阳性对照药病毒唑0.07g/kg。在感染后48h，解剖取肺，固定，制成组织切片后，脱腊，先以FM1兔免疫血清(HAI 1∶1280)浸染后，冲洗后再加1∶15稀释的羊抗兔1gG荧光抗体(华美生物工程公司生产)，于荧光显微镜下计数各组细支气管内含特异性荧光颗粒，荧光阳性率高表明病毒颗粒增殖多，并进行统计学处理。
3.2结果 实验结果表明病毒对照组出现特异性荧光颗粒为202，而实施例2喷鼻剂0.770g/kg和0.385g/kg组荧光颗粒分别为38与80(P＜0.01)，量效关系明显，病毒唑(0.07g/kg)亦有一定抑制作用，但效果不如实施例2喷鼻剂明显。
表3实施例2喷鼻剂对流感病毒增殖的影响

3.2实施例2喷鼻剂的抗菌作用实验材料1、细菌菌株乙型链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌由广州中医药大学微生物教研室提供。
2、LB肉培养基为胰蛋白胨、酵母提取物(均为英国UNIPATH公司产品)、琼脂等组成。
3、阳性对照药注射用青霉素G钾，北京制药厂，批号980221实验方法与结果1、实施例2喷鼻剂的体外抗菌作用1.1方法 称取牛肉膏0.3g、氯化钠0.5g、蛋白胨1.0g，放入烧杯内，加少量蒸馏水加热熔化后再加热蒸馏水至100ml。然后20g/dl氢氧化钠溶液调节其pH值至7.2～7.6，用滤纸过滤。用三角烧瓶包装好，高温高压灭菌20分钟。取10支大试管依次编号，按无菌操作用移液管吸取牛肉膏汤液体培养基放入试管内，每管10ml。再用移液管吸取实施例2喷鼻剂(1g/ml)10ml放入第1管，反复摇匀；接着从第1管吸取10ml放入第2管，反复摇匀，同样吸取10ml放入第3管...药液依次被稀释为1∶2、1∶4、1∶8...1∶1024，药物浓度依次为0.5000、0.2500、0.1250......0.0010g/ml。再取无菌小试管编号，每种菌株用11支试管，1～10号管依次放入已被顺序稀释药液1ml，11号试管放入不含药物的牛肉膏汤液体培养基1ml作为对照管。
菌株的接种与培养将各实验菌种接种于牛肉膏汤液体培养基中在37℃孵箱内培养16～18小时，用牛肉膏汤液体培养基或生理盐水稀释至10-3浓度。每种菌株悬液再接种11支试管(含有不同浓度药物管10支和对照管1支)，每管0.1ml。于37℃孵箱内培养24小时，取出观察细菌生长情况。如药液管澄清，表示无细菌生长，则该管药物有抗菌作用；如为浑浊，表示细胞已生长，该管中药物无抗菌作用。以完全无菌生长的最低药物浓度作为药物对该菌株的MIC。
1.2结果 实验结果表明，实施例2喷鼻剂对多种细菌均有较强的抑菌作用，对不同的细菌其最小抑菌浓度不同，见表4。
表4实施例2喷鼻剂的抗菌作用(试管法)

2、对金黄色葡萄球菌感染致小鼠死亡的保护作用2.1方法 将健康NIH小鼠100只随机分成对照组、三个给药组和病毒唑组。每天给各动物喷鼻不同浓度的实施例2喷鼻剂，每天1次，连续五天。对照组给同体积蒸馏水，阳性对照组病毒唑0.07g/kg滴鼻，给药后第五天以LB肉培养基培养16小时的金黄色葡萄球菌用生理盐水稀释之菌液攻击，经比浊法测定约1×109个/ml，观察48小时内小鼠死亡数并计算保护率。
2.2结果 结果表明以约5×108/ml金葡肉汤培养物。0.5ml/只腹腔注射小鼠，48小时内死亡率在80-90％左右，实施例2喷鼻剂0.77g/kg可使死亡率降至10-15％，统计学处理具有显著性差异，0.193g/kg浓度可使死亡率降至45％左右。
表5实施例2喷鼻剂对金黄色葡萄球感染致小鼠死亡的保护作用

3.3实施例2喷鼻剂的抗炎作用实验材料1、二甲苯，广州化学试剂厂，批号9801082、琼脂粉广东省科学院微生物研究所产品，批号9803043、阿斯匹林广东省东莞石龙制药厂产品，批号980312实验方法与结果1、小鼠耳廓肿胀试验1.1方法 小鼠50只，雌雄兼用，随机均分成5组，实施例2喷鼻剂0.770g/kg、0.385g/kg和0.193g/kg三个剂量组，生理盐水对照组，阿斯匹林组0.2g/kg。每日喷鼻给药一次，连续5天。最后给药后30分钟，将二甲苯每耳25μl涂于右耳前后两面，15分钟后将动物处死，用6mm打孔器将小鼠双耳同部位打孔取材，分别精密称重。以两耳片重差值作为肿胀程度指标，比较药物组和对照组间的差异，并求出抑制率。
1.2结果 由表6可见，实施例2喷鼻剂0.770g/kg和0.385g/kg组与阿斯匹林组均有明显的抑制肿胀形成作用，而0.193g/kg浓度组无抑制肿胀作用。
表6实施例2喷鼻剂对小鼠左、右耳重的影响

与对照组比*p＜0.05，**p＜0.012、对大鼠足跖肿胀形成的抑制作用2.1方法 采用大鼠足跖肿胀试验，观察实施例2喷鼻剂的抗炎消肿作用。雄性SD大白鼠50只，随机均分成五组，实施例2喷鼻剂0.385g/kg、0.193g/kg和0.096g/kg三个剂量组、生理盐水对照组，阿斯匹林组0.2g/kg。于致炎前每日喷鼻给药一次，连续5天，对照组给予等体积的生理盐水。于最后一次给药后30分钟在大鼠足跖部皮下注射新鲜配制的1％琼脂0.050ml致炎，用足跖容积测定仪测量致炎前后大白鼠足跖关节以下的容积变化，计算并比较致炎后1h、3h、5h、24h各组的平均肿胀率。
2.2结果 实验结果显示，阿斯匹林与实施例2喷鼻剂0.385g/kg、0.193g/kg，均能明显减轻肿胀度。实施例2喷鼻剂各组与对照组比较均有非常显著性差异。
表7实施例2喷鼻剂对琼脂所致大鼠足跖肿胀的影响(X±SD)

与对照组比较*P＜0.05**P＜0.01
3.4实施例2喷鼻剂的解热作用实验材料1、安乃近注射液，2ml/支，0.25g/ml，江西制药厂，批号9805032、2，4-二硝基苯酚，北京化工厂，批号9802263、蛋白胨，上海东海制药厂，批号980323实验方法与结果1、对三联疫苗引起家兔发热的解热作用1.1方法 选用体重约2kg、体温在38.5～39.6℃的健康雄性家兔家兔40只，随机分成5组，在室温20℃环境下进行实验。耳缘静脉注射三联疫苗2ml/kg体重，造成高热病理模型，2h后测体温，以升高0.5℃以上者作为实验动物。3个试验组分别用实施例2喷鼻剂0.193g/kg、0.096g/kg和0.048g/kg喷鼻，空白组给生理盐水。阳性对照组给安乃近注射液0.20g/kg，静脉注射给药，注射后2h、4h、6h测肛温。
2.2结果 实施例2喷鼻剂三个剂量在给药后2h、4h对三联疫苗所致家兔发热均有明显的解热作用，与生理盐水组比，动物体温下降统计学分析有显著性差异。安乃近注射液0.20g/kg亦有明显的退热作用，表8所示。
表8实施例2喷鼻剂对三联疫苗引起家兔发热的解热作用

与生理盐水组比较*p＜0.052、对2，4-二硝基苯酚引的起大鼠发热的解热作用2.1方法 取体重150～200g大鼠，雄性。给药前用半导体体温计测定每只大鼠肛温2次，取其平均值为给药前体温(体温≥38.4℃者剔除)。给大鼠皮下注射2.0％2，4-二硝基苯酚溶液1.5ml/kg。注射后1小时，测定肛温，将体温升高≥1℃的大鼠随机分为5组，每组10只。3个试验组分别用实施例2喷鼻剂0.385g/kg、0.193g/kg和0.096g/kg，阳性对照组用安乃近注射液0.36g/kg，空白对照组用生理盐水，均静脉注射给药，注射后30、60、90和120min测肛温，计算体温下降度数。
2.2结果 实施例2喷鼻剂0.193g/kg、0.385g/kg和安近注射液0.36g/kg在给药后60、90和120min，0.096g/kg组在给药后90和120min时均有明显的解热作用(均p＜0.05，表9)。
表9实施例2喷鼻剂对2，4-二硝基苯酚引起大鼠发热的解热作用

与生理盐水组比较*p＜0.053.5实施例2喷鼻剂对免疫功能影响实验材料1、三硝基氯苯，上海试剂一厂，批号9805252、阿斯匹林，同前实验方法与结果1、对细胞免疫的影响1.1、实验方法 取体重20g左右的小鼠50只，标记，随机均分为空白对照组、给药高、中、低三个剂量组和阳性对照组。用1.25％三硝基氯苯丙酮液背部皮下注射0.02ml/只以致敏。致敏后第一天，开始分别对给药组按相应剂量分别喷鼻实施例2喷鼻剂0.385g/kg、0.193g/kg和0.096g/kg，阳性组灌胃0.005g/kg的阿斯匹林，对照组每天喷鼻等体积生理盐水，连续给药7天。给药次日用0.25％三硝基氯苯丙酮液皮下注射小鼠右足垫中间，0.02ml/只，对侧足注射相同容积的丙酮液作用对照，24小时后剪下二足称重。以左右重量的之差作为肿胀度。
1.2结果 实验结果证明，对照组肿胀值明显增加，而实施例2喷鼻剂0.385g/kg及阳性对照组的肿胀值显著减轻，与对照组比较有显著性差异；中剂量和低剂量组的作用与对照组比较则没有显著性差异。见表10。
表10实施例2喷鼻剂对小鼠细胞免疫功能的影响(n＝10，x±s)

与生理盐水组比较**p＜0.012、对体液免疫的影响2.1方法 实验分组及给药方式同上，连续给药5天，于给药第一天同时腹腔注射羊红细胞进行免疫。实验第6天从小鼠眼底静脉丛取血，分离血清，用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释浓率的血清分别置于微量血凝实验板内，每孔25μl，再加入制备好的0.5％羊红细胞悬液25μl/孔混匀，装入湿润的平盘内加盖，置于37℃恒温箱内，孵育3小时，观察凝集程度，分五级(0-4)，计算抗体积数，结果进行统计学处理。
2.2结果 实验结果证明，实施例2喷鼻剂高、中二个剂量组均可明显增加血清中羊红细胞凝集值，与对照组比较统计学分析有显著性差异。说明受试品对机体体液免疫系统有增强作用。结果见表11。
表11实施例2喷鼻剂对小鼠血清凝集素的影响(n＝10，x±s)

与生理盐水组比较*p＜0.05，**p＜0.013.对小鼠非特异性免疫功能的影响3.1方法 选取健康NIH小鼠50只，体重20±2g，雌雄各半，随机分成5组，每组10只。实验分组及给药为空白对照组，每天喷鼻等体积生理盐水，给药高、中、低剂量组分别喷鼻实施例2喷鼻剂0.385g/kg、0.193g/kg和0.096g/kg，连续给药5天，末次给药后30min，小鼠尾静脉注射10％印度墨汁0.05ml/10g体重，于第2和10min从小鼠眼眶取血20μl，溶于4ml蒸馏水中溶解红细胞，摇匀，于波长600nm处测光吸收度。计算廓清指数K。
廓清指数K＝(LogOD1-LogOD2)/(t2-t1)，式中OD1、OD2为不同时间所取血样的光密度；t2、t1为不同血样的时间。
3.2结果 实验结果发现，不同浓度的实施例2喷鼻剂均能不同程度地提高小鼠血清中碳廓清指数K值，表明实施例2喷鼻剂对网状内皮系统吞噬功能有明显增强作用。
表12实施例2喷鼻剂对小鼠碳粒廓清的影响(n＝10，x±s)

与生理盐水组比较*p＜0.05，**p＜0.013.6实施例2喷鼻剂的发汗试验实验方法选取18～22g健康小白鼠50只，随机分成5组。实验室调节环境温度在20℃左右，饲养一天后开始实验。实施例2喷鼻剂喷鼻按5.0g/kg、2.5g/kg和1.0g/kg三种不同剂量喷鼻给药，对照组以等量的生理盐水代替。阳性对照组灌胃安乃近0.2g/kg。给药后动物单个放置鼠笼内按下述评分标准给动物发汗程度打分。
0级皮毛干燥，无汗I级皮毛松，无汗II级皮毛松，腹部或胸颈有汗III级皮毛松，胸、腹部均有汗IV级皮毛松，下颌至腹部均有汗实验结果实施例2喷鼻剂5.0g/kg可促进动物发汗，与生理盐水组比较，统计学分析有显著性差异。
实施例2喷鼻剂的发汗作用(n＝10，x±s)

与生理盐水组比*p＜0.05，**p＜0.013.7实施例2喷鼻剂的镇痛作用实验方法取小白鼠50只，随机分成5组，每组10只空白对照组，阿斯匹林组，实施例2喷鼻剂高、中、低三个剂量组。每日喷鼻给药一次，于最后一次给药后30分钟腹腔注射0.3％醋酸，0.2ml/只，观察30分钟内各组动物由醋酸诱发的扭体数。
实验结果实验表明，小鼠腹腔注射醋酸后引起较持久的疼痛刺激。给药后各组均有不同程度减少小鼠的疼痛反应，实施例2喷鼻剂高剂量5.0g/kg和阿斯匹林组的镇痛作用显著，动物扭体数明显少于对照组。
实施例2喷鼻剂的镇痛作用(n＝10，x±s)

与生理盐水组比*p＜0.05，**p＜0.01
结论实施例2喷鼻剂对多种呼吸道病毒株致培养细胞病变均有明显抑制作用，对多种细菌菌株的生长有一定的抑制作用，有较好的抗炎、解热作用，有效地增加机体的免疫功能，提高抗病力；高剂量可促进发汗和抑制疼痛作用。
权利要求
1.组合物，其包括来自植物的金银花，柴胡，青蒿，鱼腥草和甘草。
2.提取物，其特征在于该提取物是来自植物的金银花提取物与柴胡、青蒿、鱼腥草和甘草提取物的混合物。
3.药物制剂，所述制剂包括权利要求2的提取物。
4.药物制剂，其中所述制剂为片剂、胶囊、口服液、悬浮液、注射液或喷雾剂。
5.权利要求3或4的制剂，其中所述制剂为喷鼻剂。
6.权利要求5的制剂，其中所述喷雾剂包括金银花提取物与柴胡、青蒿、鱼腥草和甘草提取物的混合物，吐温物，甘油，氯化钠，亚硫酸氢钠，尼泊金乙酯，枸橡酸钠和水。
7.权利要求2提取物的制备方法，其包括a.用水和含水C1-4烷基醇提取金银花，得金银花浓缩物；b.用水和含水C1-4烷基醇提取柴胡、青蒿、鱼腥草和甘草的混合物，得上述四种物质的浓缩物；c.合并a)与b)中提取物。
8.权利要求1的组合物或权利要求2的提取物在制备用于预防或治疗发烧、由病毒引起的感冒，炎症或与免疫功能有关症状或疾病的药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及包括金银花，柴胡，青蒿，鱼腥草和甘草的组合物，其提取物，其制备方法及上述组合物或其提取物的药物用途，尤其是在镇痛解热，由病毒尤其是流感病毒引起的感冒，抗炎及增强免疫功能方面的用途。
文档编号A61K9/10GK1919270SQ20051009282
公开日2007年2月28日 申请日期2005年8月22日 优先权日2005年8月22日
发明者杜力军, 钟睒睒 申请人:养生堂有限公司